JP2010513220A - アレルギー抑制剤の組成物及びキットならびにその使用方法 - Google Patents
アレルギー抑制剤の組成物及びキットならびにその使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010513220A JP2010513220A JP2008547645A JP2008547645A JP2010513220A JP 2010513220 A JP2010513220 A JP 2010513220A JP 2008547645 A JP2008547645 A JP 2008547645A JP 2008547645 A JP2008547645 A JP 2008547645A JP 2010513220 A JP2010513220 A JP 2010513220A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- allergen protein
- allergen
- group
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 81
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 title claims abstract description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 84
- 230000007815 allergy Effects 0.000 title description 30
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 title description 29
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 395
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 373
- 239000013566 allergen Substances 0.000 claims abstract description 288
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 113
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 105
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 74
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 42
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 42
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 28
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 63
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 27
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 claims description 23
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 claims description 17
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims description 14
- 241000218645 Cedrus Species 0.000 claims description 13
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 13
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims description 12
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 claims description 12
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 claims description 11
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000000428 dust Substances 0.000 claims description 11
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims description 10
- 241001415345 Netta Species 0.000 claims description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 claims description 3
- 241000123966 Blomia tropicalis Species 0.000 claims description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 2
- 241001553178 Arachis glabrata Species 0.000 claims 4
- 101100067254 Fusarium sp. (strain FN080326) fsa1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 claims 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 176
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 174
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 138
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 137
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 137
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 128
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 123
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 91
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 83
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 49
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 49
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 49
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 39
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 36
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 32
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 29
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 29
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 27
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 25
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 25
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 23
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 21
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 19
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 19
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 19
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 19
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 19
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 18
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 18
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 17
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 17
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 17
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 16
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 16
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 15
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 15
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 14
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 14
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 14
- 230000004044 response Effects 0.000 description 14
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 14
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 14
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 14
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 13
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 13
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 13
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 13
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 13
- 206010012434 Dermatitis allergic Diseases 0.000 description 12
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 206010045240 Type I hypersensitivity Diseases 0.000 description 12
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 12
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 12
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 12
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 12
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 12
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 12
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 11
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 11
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 10
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 10
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 10
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 10
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 10
- 231100000430 skin reaction Toxicity 0.000 description 10
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 10
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 9
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 9
- 241000258242 Siphonaptera Species 0.000 description 9
- CFRPSFYHXJZSBI-DHZHZOJOSA-N (E)-nitenpyram Chemical compound [O-][N+](=O)/C=C(\NC)N(CC)CC1=CC=C(Cl)N=C1 CFRPSFYHXJZSBI-DHZHZOJOSA-N 0.000 description 8
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 229940079888 nitenpyram Drugs 0.000 description 8
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 8
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 8
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 7
- 208000001718 Immediate Hypersensitivity Diseases 0.000 description 7
- 208000010216 atopic IgE responsiveness Diseases 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 7
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 6
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 6
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 6
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 6
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 241000258924 Ctenocephalides felis Species 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 101000713602 Homo sapiens T-box transcription factor TBX21 Proteins 0.000 description 5
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 5
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 5
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 5
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 5
- 101100013967 Mus musculus Gata3 gene Proteins 0.000 description 5
- 206010040914 Skin reaction Diseases 0.000 description 5
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 5
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 5
- 239000002085 irritant Substances 0.000 description 5
- 231100000021 irritant Toxicity 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 5
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 5
- 230000035483 skin reaction Effects 0.000 description 5
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 4
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 4
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 4
- 240000005109 Cryptomeria japonica Species 0.000 description 4
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 4
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 4
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 4
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 4
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 4
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 4
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 4
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 4
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 4
- 208000008267 Peanut Hypersensitivity Diseases 0.000 description 4
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 4
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 4
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 4
- 201000010853 peanut allergy Diseases 0.000 description 4
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 4
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 4
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 3
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 3
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 3
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 206010015150 Erythema Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 3
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 3
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 3
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 3
- 102100036840 T-box transcription factor TBX21 Human genes 0.000 description 3
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 3
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 3
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 3
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 3
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 3
- 231100000321 erythema Toxicity 0.000 description 3
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 3
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 3
- 230000008676 import Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 2
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 2
- 241000270728 Alligator Species 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 241000824799 Canis lupus dingo Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 208000006004 Flea Infestations Diseases 0.000 description 2
- 101150066002 GFP gene Proteins 0.000 description 2
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 2
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 2
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 2
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- 101710117039 Salivary antigen 1 Proteins 0.000 description 2
- 101710111316 Salivary lipocalin Proteins 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 2
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 2
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 2
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000010212 intracellular staining Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 101150041247 p1 gene Proteins 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 239000013573 pollen allergen Substances 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000009711 regulatory function Effects 0.000 description 2
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 206010040882 skin lesion Diseases 0.000 description 2
- 231100000444 skin lesion Toxicity 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- 101710194912 18 kDa protein Proteins 0.000 description 1
- 101150028074 2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150096316 5 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 101710145634 Antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000713826 Avian leukosis virus Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- 241000490513 Ctenocephalides canis Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 101710124086 Envelope protein UL45 Proteins 0.000 description 1
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- -1 IL -13 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- 206010070834 Sensitisation Diseases 0.000 description 1
- 206010040943 Skin Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000037453 T cell priming Effects 0.000 description 1
- 210000000447 Th1 cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004241 Th2 cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 238000010817 Wright-Giemsa staining Methods 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000012387 aerosolization Methods 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 208000002352 blister Diseases 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000013216 cat model Methods 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000011284 combination treatment Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 230000002650 habitual effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 1
- 230000008975 immunomodulatory function Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 229940125721 immunosuppressive agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000031261 interleukin-10 production Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 239000002687 nonaqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000006069 physical mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011808 rodent model Methods 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 210000001991 scapula Anatomy 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000008313 sensitization Effects 0.000 description 1
- 238000012882 sequential analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/35—Allergens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0003—Invertebrate antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/04—Antipruritics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
- A61P27/14—Decongestants or antiallergics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Otolaryngology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
本発明は、アレルゲンに対するアレルギー反応を防止及び抑制するために有用である組成物及びキット、ならびに、そのような組成物及びキットを使用する方法に関する。本発明は、ノミアレルギー皮膚炎、ネコ及びイヌの毛又は鱗屑、チリダニ(dust mite)、ピーナッツ、スギ花粉、ならびに、ネッタイタマニクダニ(Blomia tropicalis)のアレルゲンに対するアレルギー反応を防止及び抑制するための組成物、キット及び方法を提供する。
様々なアレルゲンに対するアレルギー反応は、特に、アレルギー反応が重篤な反応及び/又はアレルゲン誘導の即時型過敏症(AIH)を誘導する場合には、著しい健康問題である。
本発明は、アレルゲンタンパク質に対するアレルギー反応を防止及び抑制するための組成物に関する。本発明の組成物は、
a)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む真核細胞発現ベクター;及び
b)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチド
を含む。
a)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む真核細胞発現ベクターを含む第1の容器;及び
b)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドを含む第2の容器
を含む。
a)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む真核細胞発現ベクター;及び
b)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチド
を個体に投与する工程(1つ又は複数)を含む。
本発明は、アレルギー反応及びアレルゲン誘導の即時型過敏症を防止及び抑制する組成物、キット及び方法を提供する。本発明は、ノミアレルギー皮膚炎を防止及び抑制する組成物、キット及び方法、ネコアレルギーを防止及び抑制する組成物、キット及び方法、イヌアレルギーを防止及び抑制する組成物、キット及び方法、ダニアレルギーを防止及び抑制する組成物、キット及び方法、ピーナッツアレルギーを防止及び抑制する組成物、キット及び方法、スギアレルギーを防止及び抑制する組成物、キット及び方法、ならびに、ネッタイタマニクダニアレルギーを防止及び抑制する組成物、キット及び方法を提供する。
記載しているノミの唾液アレルゲンペプチド(FSA)は、配列番号2に記載しているようなアミノ酸残基を有する。
本発明者らは、Epitlotソフトウエアを使用して、FSAのMHCクラスIIエピトープ、ならびに、化学合成されたペプチドのpep66及びpep100のアミノ酸配列を確認した。新たに合成された遺伝子及びタンパク質産物の配列を下記に示す:
ペプチド66〜80:QEKEKCMKFCKKVCK(配列番号22)(これはpep66と呼ばれる);
ペプチド100〜114:GPDWKVSKECKDPNN(配列番号23)(これはpep100と呼ばれる)。
FAD66:CAAGAGAAAG AAAAATGTAT GAAATTTTGC AAAAAAGTTT GCAAA(配列番号24)、
FAD100:GGTCCTGATT GGAAAGTAAG CAAAGAATGC AAAGATCCCA ATAAC(配列番号25)。
発現ベクターpGFP(Clontech、Mountain View、CA、U.S.A)をテンプレートとして購入した。本発明者らは、FSAヌクレオチド配列を緑色蛍光タンパク質(GFP)遺伝子により標識するためにFSAヌクレオチド配列のポリメラーゼ連鎖反応(PCR)増幅を行った。プライマー伸張を、P66Fプライマー及びPRプライマー、ならびに、P100Fプライマー及びPRプライマーの使用によって完了した。クローニング方法で使用されたプライマーについての配列は下記の通りである:
P66F:5’−AAGCTTGCCA TGCAAGAGAA AGAAAAATGT ATGAAATTTT GCAAAAAAGT TTGCAAAGGTACC GCCATGG TGAGCAAGGG CGAGGA−3’(配列番号26)
(前記配列における増幅産物の5’末端から13番目の部位〜57番目の部位の塩基群がFAD66である;増幅産物の5’末端から58番目の部位〜63番目の部位の塩基群がKpnI認識部位である;増幅産物の5’末端から1番目〜6番目の塩基ヌクレオチドがHindIII認識部位である);
PR:5’−TTA GGTACCTTAC TTGTAC AGCTCGTCCAT−3’(配列番号27)
(前記配列における増幅産物の5’末端から4番目の部位〜9番目の部位の塩基群がKpnI認識部位である)、
P100F:5’−AAGCTTGCCA TG GGTCCTGA TTGGAAAGTA AGCAAAGAAT GCAAAGATCC CAATAACGGT ACC GCCATGGTGAGCAAGGGCGAGGA−3’(配列番号28)
(前記配列における増幅産物の5’末端から13番目の部位〜57番目の部位の塩基群がFAD66である;増幅産物の5’末端から58番目の部位〜63番目の部位の塩基群がKpnI認識部位である;前記配列における増幅産物の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIII認識部位である)、
PR:5’−TTA GGTACCTTAC TTGTAC AGCTCGTCCAT−3’(配列番号27)
(増幅産物の5’末端から4番目の部位〜9番目の部位の塩基群がKpnI認識部位である)。
PCR産物及び真核生物発現ベクターpcDNA3(Invitrogen Corp.、Carlsbad、CA、U.S.A.)を、BamHI及びHindIIIを使用して消化した。T4DNAリガーゼを使用して増幅産物をプラスミドに連結し、その後、大腸菌Top10に形質転換した。大腸菌をインキュベーターで成長させた後、プラスミドDNAを抽出し、KpnIを使用して制限消化を行って、陽性クローンを得た。陽性クローンは、FAD66遺伝子及びGFP遺伝子を含有するプラスミドpcDF66−GFP、ならびに、FAD100遺伝子及びGFP遺伝子を含有するプラスミドpcDF100−GFPを含んでいた。pcDF66−GFP及びpcDF100−GFPをKpnI消化のために使用した後、低融点アガロースゲルでの電気泳動を使用して、大きいフラグメントを回収した。その後、自己結合を行う。最後に、産物を大腸菌Top10に形質転換し、プラスミドを抽出し、制限エンドヌクレアーゼKpnIによる消化アッセイを使用して、陽性クローンを得る。得られたクローンはFAD66発現ベクターのpcDF66及びFAD100発現ベクターのpcDF100を含んでいた。
Kunming白マウス、BALB/cマウス及びC57BL/6マウスが、FSAタンパク質と、FSAタンパク質をコードするヌクレオチド配列とを含むベクター、又は、そのタンパク質により免疫化される実験では、免疫化がノミアレルギー皮膚炎のための効果的な治療であることが証明される。免疫化のための有用なベクターは、FSAタンパク質をコードするヌクレオチド配列をさらに含む真核細胞発現ベクター(例えば、pcDF66又はpcDF100)と、FSAの合成ペプチド(pep66又はpep100)又はFSAタンパク質(ノミの唾液アレルゲンタンパク質)のいずれかとを含むことができる。免疫化効果は、FSAペプチド又はFSAタンパク質のいずれかをコードするヌクレオチド配列を含んでいた真核細胞発現ベクターを単に含む免疫化ベクターの免疫化効果よりも優れている。抑制研究では、異なるエピトープをコードするDNA配列が異なる効果を有することが証明される。例えば、FAD100の方が、ノミアレルギー皮膚炎を抑制することにおいて強い治療効果を有すると考えられる。個々のマウス系統における結果は類似していた。このことは、免疫化の免疫抑制活性がMHCの遺伝的背景に制限されないことを示している。従って、本発明者らは、FSAタンパク質をコードするヌクレオチド配列をさらに含む真核細胞発現ベクターと、FSAタンパク質又はFSAペプチドのいずれかとを含むFAD抑制剤の使用により、ノミアレルギー皮膚炎を効果的に抑制することが可能であると、上記の結果から直接に推論することができる。
360匹のメスのKunming白マウスを等しい数の合計で12の群に分けた。第1群の各マウスを、100マイクログラムのpcDF66を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第2群の各マウスを、100マイクログラムのpep66を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第3群の各マウスを、50マイクログラムのpcDF66及び50マイクログラムのpep66を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第4群の各マウスを、100マイクログラムのpcDF100を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第5群の各マウスを、100マイクログラムのpep100を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第6群の各マウスを、50マイクログラムのpcDF100及び50マイクログラムのpep100を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第7群の各マウスを、50マイクログラムのpcDF66及び50マイクログラムのpep100を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第8群の各マウスを、50マイクログラムのpcDF100及び50マイクログラムのpep66を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第9群の各マウスを、100マイクログラムの不活性化されたノミ抗原(Greer Lab Company(North Carolina、合衆国)から購入)を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第10群の各マウスを、50マイクログラムの不活性化されたノミ抗原(Greer Lab Company(North Carolina、合衆国)から購入)及び50マイクログラムのpcDF66を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第11群の各マウスを、50マイクログラムの不活性化されたノミ抗原(Greer Lab Company(North Carolina、合衆国)から購入)及び50マイクログラムのpcDF100を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。第12群の各マウスを、対照として役立たせるために、100マイクログラムのpcDNA3を含有する100マイクロリットルの0.9%NaCl水溶液により免疫化した。最初の免疫化の後14日目に、ブースター免疫を同じ投薬量で行った。ブースター免疫の後7日目に、皮膚試験を、下記の方法を使用して行った。
Kunming白マウスにより上記で得られた結果をさらに確認するために、マウスの2つの純系(BALB/c及びC57B/6)を、FADの免疫抑制がMHC制限であったかどうかを判定するために試験した。実験方法は、Kunming白マウスで行われた方法と同じであった。t検定の結果から、pcDF100及びpep100による免疫化(第6群)は、pcDF100による単独免疫法(第4群)又はpep100による単独免疫法(第5群)と比較したとき、顕著な相違を有していなかったこと(P<0.05)が示される。ノミ抗原及びpcDF100による複合免疫法(第11群)から得られた結果は、ノミ抗原の免疫化(第9群)又はpcDF100の免疫化(第4群)によって得られた結果と比較したとき、非常に著しい相違(P<0.01)を明らかにした。ノミ抗原及びpcDF66による免疫化(第10群)、ノミ抗原による免疫化単独(第9群)又はpcDF66による免疫化単独(第1群)の免疫化の間には著しい相違がなかった。pcDF100及びpep66による免疫化(第8群)、pcDF100による免疫化単独(第4群)又はpep66による免疫化単独(第2群)の間には著しい相違がなかった。
360匹のBALB/cマウス及び360匹のC57B/6マウスをそれぞれ、群あたり30匹の12の群に分けた。免疫化を、実施例2に記載している方法に従って行った。ブースター免疫後7日目に、脾臓のT細胞を単離し、T細胞の増殖活性を調べた。具体的な方法は下記の通りであった。無菌条件下、脾細胞をマウスから採取し、単一細胞懸濁物液を形成するために使用した。溶血溶液を使用して、赤血球を除き、その後、赤血球を、PBS液を使用して3回洗浄した。細胞を遠心分離し、細胞数を計数した。細胞密度を1x106細胞/mlに調節し、それぞれの動物から得られたそれぞれの細胞懸濁物を4つの実験群に分割し、96ウエル培養プレートにまいた。1つの群には、100μlのCon−A(有糸分裂促進因子)を5μg/mlの最終濃度に加えた。特異的な抗原(ノミ抗原)を、刺激因子として働かせるために、第2の群に5μg/mlの最終濃度に加えた。陰性対照群については刺激因子を何ら加えず、100μlのBSAを、別の非関連の抗原として働かせるために、2μg/mlの最終濃度に加えた。CO2培養器において37℃で48時間インキュベーションした後、100μlのMTSを5mg/mlの最終濃度でそれぞれのウエルに加えた。4時間のインキュベーションの後、酵素標識(labelaer)を使用して、492nmにおけるOD値を読み取り、刺激指数(SI=試験後OD÷非刺激OD)を計算した。BALB/cマウスについてのT細胞増殖の結果は、ノミ唾液のFSAペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む真核細胞発現ベクター、及び、前記FSAペプチドにより、FADの顕著な抗原特異的な免疫抑制が生じることを示した。例えば、免疫化は、1つだけの成分を含むベクターによる免疫化と比較したとき、pcDF100及びpep100を含むベクター(第6群)、ならびに、ノミ抗原及びpcDF100を含むベクター(第11群)からはより効果的であった。加えて、明らかな免疫抑制は、対応する単独免疫群と比較したとき、pcDF66及びpep66を含む免疫化ベクターによる群(第3群)、ノミ抗原及びpcDF66を含む免疫化ベクターによる群(第10群)によっては証明されなかった。pcDF100及びpep100による複合免疫群を含むベクター、ならびに、ノミ抗原及びpcDF100による複合免疫群を含むベクターを使用する結果は、皮膚試験によって示された免疫抑制効果と一致している。極めて著しい相違(P<0.01)が、対応する単独免疫群において見られる免疫抑制効果と比較したとき、pcDF100及びpep66を含む免疫化ベクター(第8群)の免疫抑制効果において認められた。
360匹のKunming白マウス、360匹のBALB/cマウス及び360匹のC57B/6マウスを用い、被験体系統のそれぞれの組を、30匹のマウスからなる12の群に分けた。免疫化を、実施例2に記載している方法に従って行った。ブースター免疫後7日目に、脾臓を切除し、総RNA(TRIZOL、Dingguo Biological Company)を単離した。cDNAのための逆転写を、Dalianbao Biological CompanyのRNA RT−PCR操作ハンドブックに従って行った。簡潔に述べると、1μgの精製された総RNAを250μLの遠心分離チューブに入れた。その後、下記の試薬を順に加えた。4μlのMgCl2、2μlの10x緩衝液溶液、8.5μlのDEPC水、2μlのdNTP混合物、0.5μlのRNase抑制剤、0.5μlのM−MLV逆転写酵素(Promega)、0.5μlのオリゴ(dT)12プライマー。応答条件は、42℃で30分間、99℃で5分間及び5℃で5分間であった。遺伝子ファミリーのヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ(HPRT)を供給源の内部発現標準物として使用した。様々な群のcDNA濃度を調節して、すべてのサンプル濃度を一定にした。その後、2μlのcDNAを使用して、3つのサイトカイン遺伝子(IFN−γ、IL−4及びIL−10)の発現レベルを評価するPCR増幅を行った。反応に必要とされるプライマー及びPCR反応条件は、表1に示す通りである。(遺伝子ファミリーHPRTは、インビボでは一定した発現を有するので、対照の供給源の内部発現標準物のためのテンプレートとして使用される)。
360匹のBALB/cマウス及び360匹のC57B/6マウスの2つの群をそれぞれ、それぞれが30匹の12の群に分け、免疫化を実施例2に記載しているように行った。血液を、免疫化前、及び、ブースター免疫の後14日目に眼窩から静脈内採取した。血液を遠心分離によって分離し、IgEレベルを、ELISAを使用して評価した。ELISAプレートで使用された被覆抗原は、Greer Laboratory(Lenoir、North Carolina、合衆国)から購入したノミ抗原であった。ELISAプレートにおける第1の成分は分離血清であり、結合のために使用された第2の成分は、西洋ワサビペルオキシダーゼ抗酸化酵素により標識されたヒツジ抗マウスIgE抗体であった。抗体を抗原に結合させた後で基質を系に加え、酵素標識を使用して、492nmにおけるOD値を読み取った。免疫化後のKunming白マウス、BALB/cマウス、C57B/6マウスにおけるIgE産生は大まかには3つすべてのマウス群について一致している。ノミ抗原による単独免疫群(第9群)を除いて、各群についてのIgEレベルは比較的低かった。ノミ抗原による単独免疫群(第9群)による免疫化の後に産生されたIgEレベルはすべてのマウス組にわたって最も高いレベルであった。IgEレベルが、ノミ抗原による単独免疫群(第9群)と比較した場合、ノミ抗原及びpcDF66により免疫化された群(第10群)、ならびに、ノミ抗原及びpcDF100により免疫化された群(第11群)では大きく低下した。このことは、FSAペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む真核細胞発現ベクター、及び、前記FSAタンパク質により、IgEレベルが免疫化後に低下することを示している。
1.下記の配列をFe1 dI.1プライマーとして使用した。プライマーを人工的に合成した:
(a)Fe1 dI.1 P1 5’プライマー:AAGCTTGGATGTTAGACGC(配列番号37)
(b)Fe1 dI.1 P2 3’プライマー:GGTACCTTAACACAGAGGAC(配列番号38)
Fe1 dI.1のcDNAを、Fe1 dI.1 P1及びFe1 dI.1 P2を使用してFe1 dI.1遺伝子をPCR増幅するためのテンプレートとして使用した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Fe1 dI.1 P1 5’−AAGCTTGGATGTTAGACGC−3’(配列番号37)
(この配列におけるプライマーの5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;9番目の部位〜11番目の部位が元の開始コードである);
(b)Fe1 dI.1 P2 5’−GGTACCTTAACACAGAGGAC−3’(配列番号38)
(この配列におけるプライマーの5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;7番目の部位〜9番目の部位が元の終止コードである)。
正常なサル腎臓細胞(CV1細胞、Shanghai Cell Instituteから購入)を、10%のウシ胎児血清を含有するDMEMにおいて5%CO2及び37℃の条件の下で培養した。2.5x105細胞/mlを2mLの体積で35mm培養皿にピペットで入れた。トランスフェクションを、標準的な方法を使用して行った。簡潔に述べると、プラスミドの精製を、Guidebook for Molecular Cloning Experimentation(第3版、中国語翻訳)(Huang Peitang他による翻訳、Science Publishing Company、2002年9月発行)の方法に従って行った。陽イオンリポソーム培地(LipofectamineTM2000、Invitrogen)を使用して、培養されたCV1細胞を製造者の説明書(Invitrogen、CA、USA)に従ってトランスフェクションした。24時間のトランスフェクションの後、細胞を採取し、RNA抽出試薬((TRIZOL、Dingguo Biological Company)を使用して、総細胞RNAを単離した。混入を防止するために、総抽出RNAを別々に数個のEPチューブに入れた。マイクロピペットを使用して、総細胞cDNAを拡大するために使用される2ulの抽出された総RNA及びRT−PCR試薬を注意深く吸引した。試料を加えた後、逆転写を42℃で30分間〜60分間行い、変性を99℃で5分間行った。反応チューブを、使用のための抽出に先立って、5℃で5分間傍らに置いた。単離したcDNAを遺伝子増幅のためのテンプレートとして使用して、PCRを、Fe1dI.1P1及びFe1dI.1P2をプライマーとして使用して行った。PCR産物を低融点アガロースゲル分析に供して、Fe1dI.1の陽性バンドを検出した。結果は、Fe1dI.1が真核細胞において発現することを明らかにする。
(a)Fe1 dI.2 P1 5’プライマー:AAGCTTGGATGAAGGGGGCTC(配列番号39)
(b)Fe1 dI.2 P2 3’プライマー:GGTACCTTAACACAGAGGAC(配列番号40)
Fe1 dI.2のcDNAを、Fe1 dI.2 P1プライマー及びFe1 dI.2 P2プライマーを使用するPCR増幅のためのテンプレートとして使用して、Fe1 dI.2遺伝子の複製を作製した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Fe1 dI.2 P1 5’−AAGCTTGGATGAAGGGGGCTC−3’(配列番号39)
(プライマーの5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;プライマーの末端から9番目の部位〜11番目の部位が元の開始コードである);
(b)Fe1 dI.2 P2 5’−GGTACCTTAACACAGAGGAC−3’(配列番号40)
(プライマーの5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;プライマーの末端から7番目の部位〜9番目の部位が元の終止コードである)。
pFe1dI.2発現ベクターを、実施例6の第3節において以前に記載している消化プロトコル、形質転換プロトコル、単離プロトコル及び連結プロトコルに供した。単離したPCR産物を低融点アガロースゲル試験に供して、Fe1dI.2の陽性バンドを確認した。結果は、Fe1dI.2が真核細胞において発現することを証明する。
(1.Can f1プライマーの合成)
下記の配列をCan f1プライマーとして使用した。プライマーを人工的に合成した:
Can f1 P1 5’プライマー:AAGCTTATGAAGACCCTGCTCCTCAC(配列番号41)
Can f1 P2 3’プライマー:GGTACCCTACTGTCCTCCTGGAGAGC(配列番号42)
Can f1のcDNAを、Can f1 P1プライマー及びCan f1 P2プライマーを使用してPCR増幅を行うためのテンプレートとして使用して、Can f1遺伝子の複製を作製した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Can f1 P1 5’−AAGCTTATGAAGACCCTGCTCCTCAC−3’(配列番号41)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;プライマー配列の末端から7番目の部位〜9番目の部位が元の開始コードである);
(b)Can f1 P2 5’−GGTACCCTACTGTCCTCCTGGAGAGC−3’(配列番号42)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;配列の%’末端から7番目の部位〜9番目の部位が元の終止コードである)。
pCanf1発現ベクターを、実施例6の第3節において以前に記載しているようなトランスフェクションプロトコル、総RNA単離プロトコル及びRT−PCRプロトコルに供した。単離したPCR産物を低融点アガロースゲル試験に供して、pCanf1の陽性バンドを確認した。結果は、pCanf1が真核細胞において発現することを証明する。
下記の配列をCan f2プライマーとして使用した。プライマーを人工的に合成した:
Can f2 P1 5’プライマー:AAGCTTATGCAGCTCCTACTGCTG(配列番号43)
Can f2 P2 3’プライマー:GGTACCCTAGTCTCTGGAACCC(配列番号44)
Can f2のCDNAcDNAを、Can f2 P1プライマー及びCan f2 P2プライマーを使用してPCR増幅を行うためのテンプレートとして使用して、Can f2遺伝子の複製を作製した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Can f2 P1 5’−AAGCTTATGCAGCTCCTACTGCTG−3’(配列番号43)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;7番目の部位〜9番目の部位が元の開始コードである);
(b)Can f2 P2 5’−GGTACCCTAGTCTCTGGAACCC−3’(配列番号44)
(このプライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;7番目の部位〜9番目の部位が元の終止コードである)。
pCanf2発現ベクターを、実施例6の第3節において以前に記載しているようなトランスフェクションプロトコル、総RNA単離プロトコル及びRT−PCRプロトコルに供した。単離したPCR産物を低融点アガロースゲル試験に供して、pCanf2の陽性バンドを確認した。結果は、pCanf2が真核細胞において発現することを証明する。
(1.Der p1プライマーの合成)
下記の配列をDer p1プライマーとして使用した。プライマーを人工的に合成した:
Der p1 P1 5’プライマー:AAGCTTAACATGAAAATTGTTTTGG(配列番号45)
Der p1 P2 3’プライマー:GGTACCGTTTAGAGAATGACAACAT(配列番号46)
Der p1のcDNAを、Der p1 P1プライマー及びDer p1 P2プライマーを使用してPCR増幅を行うためのテンプレートとして使用して、Der p1遺伝子の複製を作製した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Der p1 P1 5’−AAGCTTAACATGAAAATTGGTTTTGG−3’(配列番号45)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;10番目の部位〜12番目の部位が元の開始コードである);
(b)Der p1 P2 5’−GGTACCGTTTAGAGAATGACAACAT−3’(配列番号46)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;9番目の部位〜11番目の部位が元の終止コードである)。
pDerp1発現ベクターを、実施例6の第3節において以前に記載しているようなトランスフェクションプロトコル、総RNA単離プロトコル及びRT−PCRプロトコルに供した。単離したPCR産物を低融点アガロースゲル試験に供して、pDerp1の陽性バンドを確認した。結果は、pDerp1が真核細胞において発現することを証明する。
(1.Ara hIIプライマーの合成)
下記の配列をAra hIIプライマーとして使用した。プライマーを人工的に合成した:
Ara hII P1 5’プライマー:AAGCTTCTCATGCAGAAGAT(配列番号47)
Ara hII P2 3’プライマー:GGTACCTTAGTATCTGTCTC(配列番号48)
Ara hIIのcDNAを、Ara hII P1プライマー及びAra hII P2プライマーを使用してPCR増幅を行うためのテンプレートとして使用して、Ara hII遺伝子の複製を作製した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Ara hII P1 5’−AAGCTTCTCATGCAGAAGAT−3’(配列番号47)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;10番目の部位〜12番目の部位が元の開始コードである)、
Ara hII P2 5’−GGTACCTTAGTATCTGTCTC−3’(配列番号48)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;プライマー配列の5’末端から7番目の部位〜9番目の部位が元の終止コードである)。
pArahII発現ベクターを、実施例6の第3節において以前に記載しているようなトランスフェクションプロトコル、総RNA単離プロトコル及びRT−PCRプロトコルに供した。単離したPCR産物を低融点アガロースゲル試験に供して、pArahIIの陽性バンドを確認した。結果は、pArahIIが真核細胞において発現することを証明する。
(1.Ara h5プライマーの合成)
下記の配列をAra h5プライマーとして使用した。プライマーを人工的に合成した:
Ara h5 P1 5’プライマー:AAGCTTATGTCGTGGCAAAC(配列番号49)
Ara h5 P2 3’プライマー:GGTACCTAAAGACCCGTATC(配列番号50)
Ara h5のcDNAを、Ara h5 P1プライマー及びAra h5 P2プライマーを使用してPCR増幅を行うためのテンプレートとして使用して、Ara h5遺伝子の複製を作製した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Ara h5 P1 5’−AAGCTTATGTCGTGGCAAAC−3’(配列番号49)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;7番目の部位〜9番目の部位が元の開始コードである);
(b)Ara h5 P2 5’−GGTACCTAAAGACCCGTATC−3’(配列番号50)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;プライマー配列の5’末端から7番目の部位〜9番目の部位が元の終止コードである)。
pArah5発現ベクターを、実施例6の第3節において以前に記載しているようなトランスフェクションプロトコル、総RNA単離プロトコル及びRT−PCRプロトコルに供した。単離したPCR産物を低融点アガロースゲル試験に供して、pArah5の陽性バンドを確認した。結果は、pArah5が真核細胞において発現することを証明する。
(1.Cry j1.1プライマーの合成)
下記の配列をCry j1.1プライマーとして使用した。プライマーを人工的に合成した:
Cry j1.1 P1 5’プライマー:AAGCTTATGGATTCCCCTTGCTTAT(配列番号51)
Cry j1.1 P2 3’プライマー:GGTACCATCAACAACGTTTAGAG(配列番号52)
Cry j1.1のcDNAを、Cry j1.1 P1プライマー及びCry j1.1 P2プライマーを使用してPCR増幅を行うためのテンプレートとして使用して、Cry j1.1遺伝子の複製を作製した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Cry j1.1 P1 5’−AAGCTTATGGATTCCCCTTGCTTAT−3’(配列番号51)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;7番目の部位〜9番目の部位が元の開始コードである);
(b)Cry j1.1 P2 5’−GGTACCATCAACAACGTTTAGAG−3’(配列番号52)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;プライマー配列の5’末端から7番目の部位〜9番目の部位が元の終止コードである)。
pCryj1.1発現ベクターを、実施例6の第3節において以前に記載しているようなトランスフェクションプロトコル、総RNA単離プロトコル及びRT−PCRプロトコルに供した。単離したPCR産物を低融点アガロースゲル試験に供して、pCryj1.1の陽性バンドを確認した。結果は、Cry j1.1が真核細胞において発現し得ることを証明する。
(1.Cry j1.2プライマーの合成)
下記の配列をCry j1.2プライマーとして使用した。プライマーを人工的に合成した:
Cry j1.2 P1 5’プライマー:AAGCTTATGGATTCCCCTTGCTTAG(配列番号53)
Cry j1.2 P2 3’プライマー:GGTACCTCAACAACGTTTAGAGAGAG(配列番号54)
Cry j1.2のcDNAを、Cry j1.2 P1プライマー及びCry j1.2 P2プライマーを使用してPCR増幅を行うためのテンプレートとして使用して、Cry j1.1遺伝子の複製を作製した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Cry j1.2 P1 5’−AAGCTTATGGATTCCCCTTGCTTAG−3’(配列番号53)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;プライマー配列の5’末端から7番目の部位〜9番目の部位が元の開始コードである);
(b)Cry j1.2 P2 5’−GGTACCTCAACAACGTTTAGAGAGAG−3’(配列番号54)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;プライマー配列の5’末端から7番目の部位〜9番目の部位が元の終止コードである)。
pCryj1.2発現ベクターを、実施例6の第3節において以前に記載しているトランスフェクションプロトコル、総RNA単離プロトコル及びRT−PCRプロトコルに供した。単離したPCR産物を低融点アガロースゲル試験に供して、pCryj1.2の陽性バンドを確認した。結果は、Cry j1.2が真核細胞において発現し得ることを証明する。
(1.Blo t5プライマーの合成)
下記の配列をBlo t5プライマーとして使用した。プライマーを人工的に合成した:
Blo t5 P1 5’プライマー:AAGCTTACAATGAAGTTCGC(配列番号55)
Blo t5 P2 3’プライマー:GGTACCAATTTTTATTGGGT(配列番号56)
Blo t5のcDNAを、Blo t5 P1プライマー及びBlo t5 P2プライマーを使用してPCR増幅を行うためのテンプレートとして使用して、Blo t5遺伝子の複製を作製した。これらのプライマーは下記にさらに記載している:
(a)Blo t5 P1 5’−AAGCTTACAATGAAGTTCGC−3’(配列番号55)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がHindIIIの認識部位である;プライマー配列の5’末端から10番目の部位〜12番目の部位が元の開始コードである);
(b)Blo t5 P2 5’−GGTACCAATTTTTATTGGGT−3’(配列番号56)
(プライマー配列の5’末端から1番目の部位〜6番目の部位の塩基群がKpnIの認識部位である;プライマー配列の5’末端から12番目の部位〜14番目の部位が元の終止コードである)。
pBlot5発現ベクターを、実施例6の第3節において以前に記載しているようなトランスフェクションプロトコル、総RNA単離プロトコル及びRT−PCRプロトコルに供した。単離したPCR産物を低融点アガロースゲル試験に供して、pBlot5の陽性バンドを確認した。結果は、pBlot5が真核細胞において発現し得ることを証明する。
ノミ抽出物全体は即時的な皮内アレルギー反応をマウスにおいて誘導し、従って、このシステムは、AIHの改善を目指す免疫治療方法を評価するために使用することができる。ノミ抗原により誘導されるAIHのこの齧歯類モデルを使用した場合、ノミの唾液の特異的な抗原(FSA1)をコードするDNAワクチン及びタンパク質ワクチンの同時免疫化により、抗原により誘導される膨疹形成(wheel formation)、高まったT細胞増殖、チャレンジ部位へのリンパ球及びマスト細胞の浸潤を含めて、実験的AIHが改善される。AIHの改善が、CD4+/CD25-/FoxP3+表現型(Trの特徴)を示す、ノミ抗原特異的なT細胞の特定の集団の誘導に直接的に関係づけられた。これらのTrはまた、抗原刺激後、IL−10、INF−γ及び転写因子T−betを発現する。これらのTrは、DNAワクチン及びタンパク質ワクチンの同時免疫化によって誘導されるMHC−II+/CD40lowのDC集団によって作動させられる。これらの研究により、AIHの制御における重要な細胞プレーヤーが特定される。これらの細胞調節及びそれらの誘導を利用することにより、アレルギー性障害及び関連障害のための治療を開発するための新規な方向が提供される。
組織学的分析。最後の免疫化の後14日目に、マウスからの皮膚サンプルをマウスのすべての群より採取し、4%パラホルムアルデヒドにおいて固定処理し、パラフィンブロックに包埋した。4ミクロン〜5ミクロンの切片を切断し、シラン被覆された(sylan-coated)ガラス製スライドに載せ、その後、キシレン中で再水和し、アルコール溶液の濃度を低下させながら洗浄した。内因性のペルオキシダーゼ活性を3%過酸化水素によって室温で10分間ブロッキング処理し、抗原の回復を、スライドを0.01Mクエン酸塩緩衝液(pH6.0)において煮沸することによって達成した。最後に、スライドをヘマトキシリン及びエオシン(H&E)により、又は、マスト細胞についてはトルイジンブルーにより染色し、組織変化について光学顕微鏡で分析した。
Gate3については、5’−GGAGGCATCCAGACCCGAAAC−3’(フォワード)(配列番号57)及び5’−ACCATGGCGGTGACC−ATGC−3’(リバース)(配列番号58);ならびに、
T−betについては、5’−TGAAGCCCACACTCCTACCC−3’(フォワード)(配列番号59)及び5’−GCGGCATTTTCTCAGTTGGG−3’(リバース)(配列番号60)。
ノミ唾液アレルゲン(FSA1)が、ネコ及びイヌにおいて認められるアレルギー皮膚炎についての原因の1つとして特定されており、また、関係があるとされている。即時的な皮内のノミ抗原反応性を評価するための皮膚反応又は皮内試験(IDT)の程度は、皮内へのノミアレルギーチャレンジによって達成することができる。予想されたように、マウスにノミ抗原を投与することにより、皮内チャレンジ後のナイーブの対照動物と比較したとき、C57マウスにおいて、著しい皮膚反応が誘導され(図1a)、マスト細胞の活性化が誘導され、同時発生的なIgE産生が誘導され(図1b)、強いCD4+T細胞増殖応答が誘導された(図1c)。このデータから、AIHに対する新規な治療ストラテジーを評価するためのノミ抗原アレルギーモデルの有用性が証明される。
(ネコFADモデルにおけるワクチンによる同時免疫化によるFADアレルゲンに対する防止方法及び/又は治療的方法の試験)
(ネコモデルの確立及び同時免疫化の試験)
ノミの唾液には15種類を越えるアレルゲンが存在する。それらの中で、18kDaのタンパク質であるノミ唾液抗原1(FSA1)が、FADを引き起こし得る主たるアレルゲンであることが判明している。この遺伝子はクローン化され、大腸菌システムにおいて発現している。加えて、pVAX−FSA1真核生物発現用構築物もまた調製されている。
(動物及び寄生虫)
10匹の無菌ネコをNorth China Pharmaceutical Group(Shijiazhuang、Hebei)から購入し、実験の期間中、Center for Disease Control and Prevention of China(CDC)における動物施設に収容した。すべてのネコが1歳を超えていた。より若い動物は本実験においてノミアレルゲンに対して耐え得ることがあるので、これは重要な要因である。ネコを品種及び性別により無作為にグループ分けした。無菌のノミ(sterile fleas)がCDCによって提供された。
6匹のFADネコを3つの群に分けた。それらの2匹を、i.p.での400μgのFSA1、及び、両側の側腹部における皮下での400μgのpVAX−FSA1プラスミドにより同時免疫化した。2匹を、i.p.での400μgのFSA1、及び、皮下での400μgのpVAXベクターにより同時免疫化した。最後の2匹は免疫化せず、陽性対照群として使用した。4匹の非FADネコを2つの群に分けた。2匹を、i.p.での400μgのFSA1、及び、両側の側腹部における皮下での400μgのpVAX−FSA1プラスミドにより同時免疫化し、残りの2匹を、i.p.での400μgのFSA1、及び、皮下での400μgのpVAXベクターにより同時免疫化した。ニテンピラムによる2匹の対照ネコを異なる群に入れた。これらのネコを、3回、すなわち、0日目、9日目及び16日目に免疫化した。その後、ネコを上記のように6サイクルにわたってチャレンジした。2回目の免疫化の期間中に、本発明者らは陽性ネコを次の治療のための感受性状態で保つことを欲したので、チャレンジのサイクルを同時に行った。免疫化プログラムは表2の通りであった。
方法:
ネコを、それぞれの外寄生を中断した後の2日目に皮膚学的評価によってスコア化した。評価には、紅斑、丘疹、痂皮、鱗屑、脱毛、爪痕が含まれた。それぞれのネコの身体を、どの部分が最も重篤な臨床的結果を有し得るかを評価するために3つの部分に分けた。以前の報告された報告に従って、3つの部分は、(1)背中(背側表面の頭部から尾まで)、(2)両側の側腹部(肩甲骨から尾まで)、(3)胸部及び裏側(咽頭から尾側正中(caudomedial thigh)の大腿まで)からなった。
方法:
2mlでの凝固防止末梢血を、実験群からは0日目、2日目、16日目、30日目、44日目、58日目、62日目に採取し、対照群からは0日目、14日目、28日目、42日目、56日目、60日目に採取した。同じサンプルを免疫化後に採取した。1滴の血液を清浄なガラス製スライドの上に塗沫標本とした。塗沫標本を乾燥した後、細胞をWright-Giemsa染色により15分間染色した。脱イオン水でのリンスの後、塗沫標本をKimwipeペーパーにより穏やかに乾燥し、それぞれ10秒間の処理による96%及び100%のエタノールによって脱水した。その後、スライドをキシレンにより30分間処理した。
総RNAを、それぞれの群から3回目の免疫化の後7日目に末梢血から単離した単核細胞から抽出したことを除いて、上記と同じ方法を使用した。
分散分析(ANOVA)を、それぞれのサイクルから得られた皮膚スコア、様々な病変部のスコア、及び、種々の部位におけるスコアを含む相違を3つの群の間で検出するために使用した。皮膚試験及びIgEレベルの相違もまたANOVAによって決定した。他の相違の統計学的分析を、スチューデントのt検定を使用して行った。これらの分析では、データを対数プロットに変換した。p<0.05であれば、著しい相違があることが示される。
ネコの観察及び皮膚スコア
病変部を、そのタイプ、場所、サイズ及び数に従ってスコア化した。
異なる群より得られた末梢血における細胞の各タイプの数の比較では、好酸球の数が、実験群において、対照群における数よりも大きいことが示された。血液塗沫標本をそれぞれの外寄生サイクルについて行ったが、細胞の各タイプの割合が3回目のサイクルの後では一定になった。58日目からの結果が表3において示すように、著しい変化が3つの群の間で好酸球の数において生じた。好酸球の増大は、以前に報告されたようにアレルギー疾患に関係づけられるので、これらの結果は、実験群におけるネコがノミの外寄生に対してより感受性であったことを示している。明らかな相違が2つの対照群の間では認められず、ニテンピラムは、ネコの末梢血において細胞数に干渉しないと考えられる。
最初に、正常な皮膚と、病変部を有する皮膚との間における相違を分析した。皮膚の生検物を58日目にすべての群より選んだ。しかしながら、1匹のネコから得られた皮膚生検物はまた、ある程度の相違を示すことがある(特に、病変部を有する皮膚)。それは、ノミが外寄生したネコが、FADを有するように誘導されたかどうかを示すためには十分ではなかった。この理由から、それぞれの群からの皮膚生検物をノミ抽出物によるIDTの後に採取した。なぜならば、ノミによるIDTは抗原特異的な復活した免疫応答を提供するからである。
膨疹又はブレブの直径をIDT注射後15分で測定した。それぞれのネコがIDTに対する異なったレベルの感受性を有したので、それぞれの個々の動物からの結果を記録した。図6はすべての群における皮膚反応を示す。アレルギー反応は、IDT値が閾値の平均(生理的食塩水とヒスタミンの和を2で割る)を超えている場合、生じていると見なし、又は、IDT値が閾値の平均を下回っている場合、生じていないと見なした。結果を表4に示す。皮膚スコアが5.0以上であるネコを、FADについて陽性であるとして特定した。
FADのネコを、図18及び表2において実験デザインBに記載しているように、FSA1+pVAX−FSA1、又は、ベクター+FSA1により同時免疫化した。免疫化の前後で、ネコを様々なノミ抗原又は対照抗原によりIDTによって調べた。IDTの読み取りを、図7及び表5に要約するように、最後の免疫化の後7日目に記録した。
FADネコの病変部に対する同時免疫化の治療効果を判定するために、病変部を最初の免疫化の後53日間にわたって記録し、図8に示した。同時免疫化群における病変部スコアが5.5から2に劇的に低下した(図8、線上の四角点)。一方、FSA1及びpVAXベクターにより免疫化された群に対する効果は、より小さい程度ではあったが、低下した(図8、線上の三角点)。結果から、同時免疫化が、ネコにおける確立されたFADに対する治療効果を有したことが示唆された。
どのタイプの病変部が同時免疫化により減少したかを相関させるために、すべての群におけるそれぞれのタイプの病変部に対するスコアを分析した。結果を図9A〜図9Fに示す。丘疹のスコアのみが4.0から0.5に低下し、FSA1+pVAX−FSA1の同時免疫化と一致していた(図9B、線上の四角点)。実験群における他のタイプの病変部は変化しないままであった。
(FADネコに対する同時免疫化の治療効果)
相関を分析した後、データは、治療群における両側の側腹部のスコアがFSA1+pVAX−FSA1の同時免疫化の後では1.5から0に低下し(図10B)、しかし、他の場所では、図10A〜図10Cに示すように、効果がなかったことを示した。FSA1及びpVAXベクターにより免疫化された治療群は応答が消えにくかった(図10B、三角点)。FSA1及びpVAXベクターにより免疫化されたFADネコの皮膚スコアは最後の免疫化の7日後で1.5から0.5に低下した。対照的に、FSA1+pVAX−FSA1による同時免疫化における皮膚スコアはその最初の免疫化の後に直ちに低下し、期間中、低いレベルのままであった(図10B、四角点)。
これらのデータから、ノミの外寄生によるネコにおけるFADモデルの成功した誘導が証明される。FADネコにおける生理学的パラメーター又は病原的パラメーターが特徴づけられており、このことは、免疫治療的又は予防的なアプローチの治療を評価するためのモデルとして使用することができる。
プラスミドpVAX−K−FSA1は、Kozak配列に連結されたFSA1コード配列をプラスミド骨格pVAX(Invitrogen)に含む。K−FSA1挿入物の配列は配列番号61である。ヌクレオチド1〜9がKozak配列に対応する。FSA1+欠失された8アミノ酸のオープンリーディングフレームがヌクレオチド10から始まる。プラスミドpVAX−K−FSA1のマップを図11に示す。
Claims (18)
- アレルゲンタンパク質に対するアレルギー反応を防止及び抑制するための組成物であって、
a)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む真核細胞発現ベクター;及び
b)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチド
を含み、
前記アレルゲンタンパク質が、ノミのアレルゲンタンパク質、ネコのアレルゲンタンパク質、イヌのアレルゲンタンパク質、チリダニのアレルゲンタンパク質、ピーナッツのアレルゲンタンパク質、スギのアレルゲンタンパク質及びネッタイタマニクダニのアレルゲンタンパク質からなる群より選択される、組成物。 - アレルゲンタンパク質に対するアレルギー反応を防止及び抑制するためのキットであって、
a)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む真核細胞発現ベクターを含む第1の容器;及び
b)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドを含む第2の容器
を含み、
前記アレルゲンタンパク質が、ノミのアレルゲンタンパク質、ネコのアレルゲンタンパク質、イヌのアレルゲンタンパク質、チリダニのアレルゲンタンパク質、ピーナッツのアレルゲンタンパク質、スギのアレルゲンタンパク質及びネッタイタマニクダニのアレルゲンタンパク質からなる群より選択される、キット。 - 前記アレルゲンタンパク質が、FSA1タンパク質及びそのアレルゲンフラグメントからなる群より選択されるノミのアレルゲンタンパク質である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 前記アレルゲンタンパク質がノミのアレルゲンタンパク質であり、ノミのアレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む前記真核細胞発現ベクターがpcDF66又はpcDF100である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 前記アレルゲンタンパク質が、Fel dIタンパク質及びそのアレルゲンフラグメントからなる群より選択されるネコのアレルゲンタンパク質である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 前記アレルゲンタンパク質が、Can f1タンパク質、Can f2タンパク質、及び、そのアレルゲンフラグメントからなる群より選択されるイヌのアレルゲンタンパク質である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 前記アレルゲンタンパク質が、Der p1タンパク質、Der F1タンパク質、及び、そのアレルゲンフラグメントからなる群より選択されるチリダニのアレルゲンタンパク質である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 前記アレルゲンタンパク質が、Ara H11、Ara H5、及び、そのアレルゲンフラグメントからなる群より選択されるピーナッツのアレルゲンタンパク質である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 前記アレルゲンタンパク質が、Cry j1.1タンパク質、Cty j1.2タンパク質、及び、そのアレルゲンフラグメントからなる群より選択されるスギのアレルゲンタンパク質である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 前記アレルゲンタンパク質が、Blo t5タンパク質、及び、そのアレルゲンフラグメントからなる群より選択されるネッタイタマニクダニのアレルゲンタンパク質である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 前記真核細胞発現ベクターが、アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を、RSVプロモーター、CMVプロモーター及びSV40プロモーターからなる群より選択されるプロモーターに作動可能に連結されて含む、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 真核細胞発現ベクターの重量量の、アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドの重量量に対する比率が1:5〜5:1の間である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 真核細胞発現ベクターの重量量の、アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドの重量量に対する比率が1:1である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 真核細胞発現ベクターの、アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドに対するモル比が1:100,000〜20:100,000の間である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- 真核細胞発現ベクターの、アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドに対するモル比が15:100,000である、請求項1に記載の組成物又は請求項2に記載のキット。
- アレルゲンタンパク質に対するアレルギー反応を個体において防止及び抑制する方法であって、
a)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む真核細胞発現ベクター;及び
b)アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチド
を個体に投与する工程を含み、
前記アレルゲンタンパク質が、ノミのアレルゲンタンパク質、ネコのアレルゲンタンパク質、イヌのアレルゲンタンパク質、チリダニ(dust mite)のアレルゲンタンパク質、ピーナッツのアレルゲンタンパク質、スギのアレルゲンタンパク質及びネッタイタマニクダニ(Blomia tropicalis)のアレルゲンタンパク質からなる群より選択される、方法。 - 前記個体が、ヒト、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウマ、イヌ及びネコの種からなる群より選択される種である、請求項16に記載の方法。
- 前記個体が、前記真核細胞発現ベクターと、アレルゲンタンパク質、又は、前記アレルゲンタンパク質の抗原エピトープを含むポリペプチドとを投与する前に、アレルゲンタンパク質に対するアレルギー反応を有する、請求項16に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CNB200510132381XA CN100374152C (zh) | 2005-12-23 | 2005-12-23 | 一种过敏性反应抑制剂 |
PCT/US2006/049161 WO2007076084A2 (en) | 2005-12-23 | 2006-12-22 | Allergy inhibitor compositions and kits and methods of using the same |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013180428A Division JP2014028820A (ja) | 2013-08-30 | 2013-08-30 | アレルギー抑制剤の組成物及びキットならびにその使用方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010513220A true JP2010513220A (ja) | 2010-04-30 |
Family
ID=36935235
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008547645A Withdrawn JP2010513220A (ja) | 2005-12-23 | 2006-12-22 | アレルギー抑制剤の組成物及びキットならびにその使用方法 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US8349333B2 (ja) |
EP (1) | EP1963513B1 (ja) |
JP (1) | JP2010513220A (ja) |
KR (1) | KR20080078850A (ja) |
CN (2) | CN100374152C (ja) |
AU (1) | AU2006330880B2 (ja) |
BR (1) | BRPI0620459A2 (ja) |
CA (1) | CA2631467C (ja) |
NZ (1) | NZ596043A (ja) |
WO (1) | WO2007076084A2 (ja) |
ZA (1) | ZA200805296B (ja) |
Families Citing this family (14)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN100374152C (zh) | 2005-12-23 | 2008-03-12 | 中国农业大学 | 一种过敏性反应抑制剂 |
EP2436691B1 (en) * | 2008-03-25 | 2017-08-02 | Bial Industrial Farmaceutica, S.A. | Hypoallergenic hybrid proteins of major group 1 and 2 mite allergens for use in the treatment of allergies |
CN103200959A (zh) * | 2010-09-27 | 2013-07-10 | 中国农业大学 | 预防和治疗自身免疫性疾病的联合抗原和dna疫苗 |
KR101221649B1 (ko) * | 2010-11-01 | 2013-01-14 | 광주과학기술원 | 알러지 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물, 그의 스크리닝 방법 |
CN102183619B (zh) * | 2011-01-20 | 2013-09-18 | 北京城市排水集团有限责任公司 | 大型蚤类对水质物质急性毒性测定试剂盒及其制作和用法 |
CN103421106A (zh) * | 2012-05-17 | 2013-12-04 | 复旦大学 | 重组热带剥爪螨变应原Blo t 5蛋白及其制备方法与用途 |
KR102212253B1 (ko) * | 2013-03-15 | 2021-02-04 | 세멘티스 리미티드 | 면역 조절 |
JP2014028820A (ja) * | 2013-08-30 | 2014-02-13 | China Agricultural Univ | アレルギー抑制剤の組成物及びキットならびにその使用方法 |
WO2016025551A1 (en) | 2014-08-12 | 2016-02-18 | The Regents Of The University Of California | Trehalose hydrogels for stabilization and delivery of proteins |
CN107205639B (zh) * | 2014-12-30 | 2021-01-22 | 亚采克·施特平耐思专业知识和研究有限公司 | 接触式热光结构及其在皮肤过敏反应中用于组胺引起的高热皮下反应程度的非侵入性成像的用途、记录装置和过敏反应诊断方法 |
JP2015145381A (ja) * | 2015-03-09 | 2015-08-13 | チャイナ アグリカルチュラル ユニバーシティ | アレルギー抑制剤の組成物及びキットならびにその使用方法 |
EP3347046B1 (en) * | 2015-09-08 | 2022-10-19 | Universität Zürich | Compositions against cat allergy |
US10947320B2 (en) | 2015-12-18 | 2021-03-16 | University Of Notre Dame Du Lac | Covalent heterobivalent antibody inhibitors and ligands |
CN106916842B (zh) * | 2017-03-24 | 2020-10-30 | 华南农业大学 | 一种猫桎首蚤跳蚤唾液过敏原fsa1的表达方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003047618A2 (en) * | 2001-12-05 | 2003-06-12 | Circassia Limited | Immunotherapeutic methods and systems |
WO2005079833A1 (fr) * | 2004-02-20 | 2005-09-01 | China Agricultural University | Inhibiteur de la reponse immune des lymphocytes t |
WO2006063592A1 (en) * | 2004-12-14 | 2006-06-22 | Alk Abelló A/S | Pharmaceutical composition comprising a bacterial cell displaying a heterologous proteinaceous compound |
CN1824291A (zh) * | 2005-12-23 | 2006-08-30 | 中国农业大学 | 一种过敏性反应抑制剂 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5512283A (en) | 1990-07-06 | 1996-04-30 | Allergene, Inc. | Methods for the selective suppression of an immune response to dust mite der Pi |
US5804566A (en) | 1993-08-26 | 1998-09-08 | The Regents Of The University Of California | Methods and devices for immunizing a host through administration of naked polynucleotides with encode allergenic peptides |
US5840695A (en) * | 1994-10-07 | 1998-11-24 | Heska Corporation | Ectoparasite saliva proteins and apparatus to collect such proteins |
EP0923940B1 (en) * | 1996-03-10 | 2008-09-03 | Meiji Dairies Corporation | Peptide-based immunotherapeutic agent for allergic diseases |
US5804201A (en) | 1996-03-11 | 1998-09-08 | The Rockefeller University | Immunomodulatory peptides of vespid antigen 5 |
CN1202125C (zh) * | 1998-11-12 | 2005-05-18 | 卫生部上海生物制品研究所 | 肽免疫原、用其制成的治疗变态反应的疫苗及其制备方法 |
JP2002047176A (ja) | 2000-08-04 | 2002-02-12 | Idemitsu Technofine Co Ltd | IgE産生抑制剤 |
JP2004026733A (ja) | 2002-06-26 | 2004-01-29 | New Food Creation Gijutsu Kenkyu Kumiai | 免疫調整剤およびそれを用いた食品 |
AU2003256240A1 (en) * | 2002-08-29 | 2004-03-19 | National University Of Singapore | Recombinant nucleic acid useful for inducing protective immune response against allergens |
-
2005
- 2005-12-23 CN CNB200510132381XA patent/CN100374152C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-12-22 CA CA2631467A patent/CA2631467C/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-12-22 EP EP06848810.5A patent/EP1963513B1/en active Active
- 2006-12-22 AU AU2006330880A patent/AU2006330880B2/en not_active Ceased
- 2006-12-22 BR BRPI0620459-7A patent/BRPI0620459A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2006-12-22 NZ NZ596043A patent/NZ596043A/xx not_active IP Right Cessation
- 2006-12-22 WO PCT/US2006/049161 patent/WO2007076084A2/en active Application Filing
- 2006-12-22 US US11/644,435 patent/US8349333B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2006-12-22 KR KR1020087015295A patent/KR20080078850A/ko not_active Application Discontinuation
- 2006-12-22 CN CNA2006800488521A patent/CN101443034A/zh active Pending
- 2006-12-22 JP JP2008547645A patent/JP2010513220A/ja not_active Withdrawn
-
2008
- 2008-06-18 ZA ZA2008/05296A patent/ZA200805296B/en unknown
-
2012
- 2012-12-20 US US13/721,449 patent/US8795675B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2014
- 2014-06-27 US US14/318,330 patent/US9962437B2/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003047618A2 (en) * | 2001-12-05 | 2003-06-12 | Circassia Limited | Immunotherapeutic methods and systems |
WO2005079833A1 (fr) * | 2004-02-20 | 2005-09-01 | China Agricultural University | Inhibiteur de la reponse immune des lymphocytes t |
WO2006063592A1 (en) * | 2004-12-14 | 2006-06-22 | Alk Abelló A/S | Pharmaceutical composition comprising a bacterial cell displaying a heterologous proteinaceous compound |
CN1824291A (zh) * | 2005-12-23 | 2006-08-30 | 中国农业大学 | 一种过敏性反应抑制剂 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ZA200805296B (en) | 2011-02-23 |
US8795675B2 (en) | 2014-08-05 |
US20150086593A1 (en) | 2015-03-26 |
AU2006330880B2 (en) | 2012-12-06 |
CN101443034A (zh) | 2009-05-27 |
BRPI0620459A2 (pt) | 2011-11-08 |
EP1963513A2 (en) | 2008-09-03 |
EP1963513B1 (en) | 2014-12-03 |
NZ596043A (en) | 2013-05-31 |
US20170112918A9 (en) | 2017-04-27 |
US9962437B2 (en) | 2018-05-08 |
KR20080078850A (ko) | 2008-08-28 |
CA2631467C (en) | 2016-11-22 |
US20130230551A1 (en) | 2013-09-05 |
EP1963513A4 (en) | 2010-07-14 |
CN100374152C (zh) | 2008-03-12 |
CN1824291A (zh) | 2006-08-30 |
US8349333B2 (en) | 2013-01-08 |
US20070166335A1 (en) | 2007-07-19 |
WO2007076084A2 (en) | 2007-07-05 |
CA2631467A1 (en) | 2007-07-05 |
AU2006330880A1 (en) | 2007-07-05 |
WO2007076084A3 (en) | 2008-12-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9962437B2 (en) | Allergy inhibitor compositions and kits and methods of using the same | |
Akdis et al. | Therapeutic manipulation of immune tolerance in allergic disease | |
Klinman et al. | DNA vaccines: safety and efficacy issues | |
CN101605559B (zh) | 使用遗传修饰的乳杆菌通过抗原的粘膜递送治疗免疫疾病 | |
AU748565B2 (en) | Adjuvant therapy | |
US20050074462A1 (en) | Supression of allergic reactions by transdermal administration of allergens conjugated to cholera toxin or fragments thereof | |
EP2621522A2 (en) | Combined antigen and dna vaccine for preventing and treating autoimmune diseases | |
JP5524823B2 (ja) | 自己免疫疾患を予防および/または治療するワクチン | |
CN103998055B (zh) | 预防和治疗自身免疫性疾病的联合促进剂、抗原和dna疫苗 | |
CN111936160A (zh) | 通过施用抗原特异性配制品治疗免疫性疾病 | |
JP2015145381A (ja) | アレルギー抑制剤の組成物及びキットならびにその使用方法 | |
JP2017137322A (ja) | アレルギー抑制剤の組成物及びキットならびにその使用方法 | |
CA3216643A1 (en) | Allergy therapies | |
JP2014028820A (ja) | アレルギー抑制剤の組成物及びキットならびにその使用方法 | |
MX2008008329A (en) | Allergy inhibitor compositions and kits and methods of using the same | |
Tarzi et al. | Peptide immunotherapy for allergic disease | |
RU2809548C2 (ru) | Иммуногенный продукт, содержащий il-4 и/или il-13 для лечения нарушений, ассоциированных с аберрантной экспрессией или активностью il-4 и/или il-13 | |
Mohapatra et al. | Experimental forms of allergen immunotherapy with modified allergens and adjuvants | |
Thunberg | Novel treatment strategies and regulation of IgE-mediated allergic disease. | |
Williams et al. | BSI 2010 | |
Knopf et al. | Interleukin-12 as an Adjuvant for an |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120313 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20120612 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20120619 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120913 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20130430 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20150413 |