JP2010505916A5 - - Google Patents
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Claims (24)
- 細胞溶解物から組み換えDnaK調製物を精製する方法であって、
a)イオン交換クロマトグラフィー、
b)ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、
c)ゼラチンクロマトグラフィー
のステップを含む方法。 - 前記DnaKが、腐生細菌由来である請求項1に記載の方法。
- 前記DnaKが、大腸菌由来である請求項1に記載の方法。
- 前記イオン交換クロマトグラフィーが、陰イオン交換クロマトグラフィーである請求項1〜3のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーが、ヒドロキシアパタイトII型クロマトグラフィーである請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ゼラチンクロマトグラフィーが、ゼラチンセファロースで行われる請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 請求項1〜6のいずれか1項に記載の方法により得られる精製された組み換えDnaK調製物であって、
他のシャペロンタンパク質を加えなくともATPアーゼ活性を有し、
本質的にT細胞刺激性不純物を含まない
調製物。 - a)95重量%以上の純度、
b)タンパク質1mg当たり1ng以下の残存DNA混入、
c)5重量%未満の残存宿主細胞タンパク質(HCP)混入、
d)タンパク質1μg当たり0.5E.U.未満のエンドトキシン混入
を有する請求項7に記載の精製された組み換えDnaK調製物。 - 純度が98%以上である請求項7または請求項8に記載の組み換えDnaK調製物。
- ペプチド含有量がモル基準で1%未満である請求項7〜9のいずれか1項に記載の組み換えDnaK調製物。
- 前記残存DNA混入が、0.5ng/mg以下、および/またはHCPが0.1重量%未満である請求項7〜10のいずれか1項に記載の組み換えDnaK調製物。
- 前記残存DNA混入が、0.5ng/mg以下、および/またはHCPが0.0001重量%未満である請求項7〜10のいずれか1項に記載の組み換えDnaK調製物。
- 前記DnaKが加水分解されている請求項7〜12のいずれか1項に記載の組み換えDnaK調製物。
- 前記エンドトキシン混入が、タンパク質1μg当たり0.01E.U.未満である請求項7〜13のいずれか1項に記載の組み換えDnaK調製物。
- 前記DnaKが、本質的にヌクレオチドを含まないか、ADPとの複合体の形であるか、ATPとの複合体の形であるか、またはそれらの混合物である請求項7〜14のいずれか1項に記載の精製された組み換えDnaK調製物。
- 前記DnaKが、少なくとも98重量%の純度を有する請求項7〜15のいずれか1項に記載の精製された組み換えDnaK調製物。
- 組み換えDnaKと少なくともひとつのペプチドまたは少なくともひとつのタンパク質との間の複合体を形成する方法であって、
a)請求項7〜16のいずれか1項に記載の組み換えDnaK調製物とATPを、1:1〜1:10のHSP:ATPモル比で混合するステップ、
b)少なくとも1つのペプチド、または少なくとも1つのタンパク質を加えるステップ、
c)10℃〜60℃の温度でインキュベートするステップ
を含む方法。 - 前記インキュベートが、20℃〜45℃の温度で行われる請求項17に記載の方法。
- 請求項7〜16のいずれか1項に記載の組み換えDnaK調製物と、少なくとも1つのペプチドまたは少なくとも1つのタンパク質との混合物。
- 複合体の形である、請求項19に記載の混合物。
- 請求項7〜16のいずれか1項に記載の組換えDnaK調製物または請求項19もしくは請求項20に記載の混合物を含む組成物であって、該組成物がインビボおよび/またはインビトロ診断に使用される組成物。
- アレルギー、自己免疫疾患、移植片拒絶もしくは神経変性疾患の寛容、治療もしくは予防を誘発するための医薬組成物、または液性応答もしくは調節性T細胞応答を誘発する免疫賦活剤を製造する方法であって、請求項7〜16のいずれか1項に記載の精製された組み換えDnaK調製物または請求項19もしくは請求項20に記載の混合物を使用することを含む方法。
- 請求項7〜16のいずれか1項に記載の精製された組み換えDnaK調製物または請求項19に記載もしくは請求項20に記載の混合物を含む、医薬品。
- アレルギー、自己免疫疾患、移植片拒絶もしくは神経変性疾患の寛容、治療もしくは予防を誘発するため、または液性応答もしくは調節性T細胞応答を誘発する免疫賦活剤として使用される、請求項23に記載の医薬品。
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