JP2010503729A - コルジセピンを含有する肥満治療および予防用薬学組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
コルジセプスミリタリス冬虫夏草は、キョンドン市場(ソウル市、韓国)から購入したものを乾燥させて使用した。前記乾燥させたコルジセプスミリタリス冬虫夏草を粉砕機で粉砕して粉末化した後、10mL/gの80%エタノールを加えて80℃で3時間3回還流冷却熱湯抽出を行い、減圧濃縮装置で濃縮してエタノール粗抽出物を製造した。
NMRスペクトルを示す。
1−1.細胞培養および脂肪細胞分化の誘導
線維芽細胞(3T3−L1細胞、CL−173)をATCC(American Type Culture Collection)から購入してフロストアンドレーンのプロトコルに基づいて培養および分化を誘導した(Frost and Lane,1985)。
BCS:Bovine calf serum
FBS:Fetal Bovine serum
DEX:Dexamethasone、IBMX:1-methyl-3-isobutylxanthine。
前記1−1で得られた細胞をPBS(pH7.4)で2回洗浄し、10%ホルマリンによって室温で1時間固定した後、蒸留水で3回洗浄した。前記細胞を濾過した0.5%オイルレッドOを用いて10分間染色した後、再び蒸留水で3回洗浄した。染色された細胞をオリンパス顕微鏡(CKX−41、東京、日本)で観察し、オイルレッドOで染色された細胞の密度を、プロパノールで溶出して分光器(DU−70、Beckman、Fullerton、CA)によって518nmで吸光度を測定することにより算出した。
本発明に係るコルジセピンが3T3−L1細胞のトリアシルグリセロール(TG)の合成に及ぼす効果を確認するために、それぞれのグループで培養した細胞をEDTA(0.416mg/mK)が含まれたトリス−HClバッファ(pH7.5)で脱着した後、超音波粉砕器で細胞を粉砕した。BCAタンパク質定量キット(BCA protein assay kit)に表記された使用説明書に基づいて標準液の検量線を作り、細胞から得た脱着物をキット試薬に一定量希釈した後、37℃で30分間加温し、しかる後に、10分以内に562nmで吸光度を測定してタンパク質を定量した。タンパク質の定量後、BCS中性脂肪測定用キット(BCS Triacylglycerol kit)の使用説明書に基づいて、細胞から得た脱着物をキット酵素溶液に希釈させた後、37℃で10分間加温し、60分以内に試薬ブランクを対照として波長550nmで吸光度を測定し、計算式に従って細胞内タンパク質当たりトリアシルグリセロールの量(μg/mgタンパク質)を測定した。
コルジセピンが3T3−L1の脂肪細胞への分化およびトリアシルグリセロールの合成を抑制する活性に対するアデノシンの効果を調べるために、コルジセピン同族体の一つであるアルデノシンをコルジセピンと同一のモル濃度(32μM)で分化開始のための分化用サブマージド培地に添加した。
脂肪細胞分化過程が、脂肪組織生成(adipogenesis)および脂肪生成(lipogenesis)に関与する必須因子であるC/EBPα、PPARγおよび抗−レプチンタンパク質などの因子によって調節されるので、前記因子に対するコルジセピンの効果を調べるために、ウエスタンブロット分析を行った。
Claims (5)
- コルジセピンを有効成分として含有する肥満治療および予防用薬学組成物。
- 前記コルジセピンは、コルジセプスミリタリス(Cordyceps militaris)冬虫夏草から分離精製したことを特徴とする請求項1に記載の肥満治療および予防用薬学組成物。
- 前記組成物は、経口または非経口的に投与されることを特徴とする請求項1に記載の肥満治療および予防用薬学組成物。
- 前記コルジセピンは、容量依存的に線維芽細胞の脂肪細胞への分化およびトリアシルグリセロールの合成を阻害することを特徴とする請求項1に記載の肥満治療および予防用薬学組成物。
- 前記コルジセピンは、PPARγおよびC/EBPα−媒介脂肪組織生成過程によって線維芽細胞の脂肪細胞への分化を抑えることにより抗肥満効果を示すことを特徴とする、請求項1または4に記載の肥満治療および予防用薬学組成物。
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