JP2010500035A - アントラニル酸合成酵素の葉緑体標的発現による高トリプトファントウモロコシの生産 - Google Patents
アントラニル酸合成酵素の葉緑体標的発現による高トリプトファントウモロコシの生産 Download PDFInfo
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Abstract
Description
本発明は、一実施形態では、単量体アントラニル酸合成酵素に融合した葉緑体輸送ペプチド(CTP;色素体輸送ペプチド)をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。用語「色素体」は、原色素体、白色体、アミロプラスト、有色体、および葉緑体を含む一種の植物細胞小器官を意味する。本発明の文脈では、語句「輸送ペプチド」は、核コードタンパク質の輸送を色素体に導くポリペプチドを意味する。典型的には、CTPまたは輸送ペプチド配列はポリペプチドのN末端に位置している。
配列番号1:改変された切断部位(C/M)を有するAt−CTP2(C/M)(アラビドプシス・サリアナ5−(エノールピルビル)シキミ酸−3−リン酸合成酵素)をコードする核酸配列;
配列番号2:天然の切断部位(E/K)を有するAt−CTP2(E/K)をコードする核酸配列;
配列番号3:At−CTP2(E/K)+成熟アラビドプシスEPSPS合成酵素由来の10アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号4:At−CTP2(E/K)+成熟アラビドプシスEPSPS合成酵素由来の5アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号5:Zm−ASA1−CTP(ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α1サブユニット)をコードする核酸配列;
配列番号6:Zm−ASA1−CTP+成熟ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α1サブユニット由来の20アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号7:Zm−ASA2−CTP(ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α2サブユニット)をコードする核酸配列;
配列番号8:Zm−ASA2−CTP+成熟ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α2サブユニット由来の5アミノ酸;
配列番号9:Zm−ASA2−CTP+成熟ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α2サブユニット由来の18アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号10:Os−Wx−CTP(オリザサティバADPグルコースピロホスホリラーゼ)をコードする核酸配列;
配列番号11:Os−Wx−CTP+成熟オリザサティバADPグルコースピロホスホリラーゼ由来の5アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号12:Os−Wx−CTP+成熟オリザサティバADPグルコースピロホスホリラーゼ由来の20アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号13:Rg−AS短−CTP(ルタグラヴェオレンスアントラニル酸合成酵素αサブユニット;Met1からSer72)をコードする核酸配列;
配列番号14:Rg−AS長−CTP(ルタグラヴェオレンスアントラニル酸合成酵素αサブユニット;Met1からSer92)をコードする核酸配列;
配列番号15:Zm−DHDPS−CTP(ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素)をコードする核酸配列;
配列番号16:Zm−DHDPS−CTP+成熟ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素由来の9アミノ酸;
配列番号17:Zm−DHDPS−CTP+成熟ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素由来の20アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号18:Zm−DHDPS−CTP+成熟ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素由来の3アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号19:アラビドプシスサリアナルビスコ小サブユニット遺伝子葉緑体輸送ペプチド、CTP1をコードする核酸配列
配列番号20:改変された切断部位(C/M)を有するAt−CTP2(C/M)(アラビドプシス・サリアナ5−(エノールピルビル)シキミ酸−3−リン酸合成酵素);
配列番号21:天然の切断部位(E/K)を有するAt−CTP2(E/K);
配列番号22:At−CTP2(E/K)+成熟アラビドプシスEPSPS合成酵素由来の10アミノ酸;
配列番号23:At−CTP2(E/K)+成熟アラビドプシスEPSPS合成酵素由来の5アミノ酸;
配列番号24:Zm−ASA1−CTP(ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α1サブユニット);
配列番号25:Zm−ASA1−CTP+成熟ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α1サブユニット由来の20アミノ酸;
配列番号26:Zm−ASA2−CTP(ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α2サブユニット);
配列番号27:Zm−ASA2−CTP+成熟ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α2サブユニット由来の5アミノ酸;
配列番号28:Zm−ASA2−CTP+成熟ゼアマイズアントラニル酸合成酵素α2サブユニット由来の18アミノ酸;
配列番号29:Os−Wx−CTP(オリザサティバADPグルコースピロホスホリラーゼ);
配列番号30:Os−Wx−CTP+成熟オリザサティバADPグルコースピロホスホリラーゼ由来の5アミノ酸;
配列番号31:Os−Wx−CTP+成熟オリザサティバADPグルコースピロホスホリラーゼ由来の20アミノ酸;
配列番号32:Rg−AS短−CTP(ルタグラヴェオレンスアントラニル酸合成酵素αサブユニット;Met1からSer72);
配列番号33:Rg−AS長−CTP(ルタグラヴェオレンスアントラニル酸合成酵素αサブユニット;Met1からSer92);
配列番号34:Zm−DHDPS−CTP(ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素);
配列番号35:Zm−DHDPS−CTP+成熟ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素由来の9アミノ酸;
配列番号36:Zm−DHDPS−CTP+成熟ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素由来の20アミノ酸;
配列番号37:Zm−DHDPS−CTP+成熟ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素由来の3アミノ酸;
配列番号38:アラビドプシスサリアナルビスコ小サブユニット遺伝子、CTP1
配列番号39:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したAt−CTP2をコードする核酸配列;
配列番号40:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したZm−ASA2−CTPをコードする核酸配列;
配列番号41:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したOs−Wx−CTPをコードする核酸配列;
配列番号42:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したRs−AS短−CTPをコードする核酸配列;
配列番号43:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したZm−DHDPS−CTPをコードする核酸配列;
配列番号44:Zm−DHDPS−CTP+GFPに融合した成熟ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素由来の5アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号45:リゾビウム・メリロティ(Rhizobium meliloti)アントラニル酸合成酵素に融合した、天然の切断部位E/Kを有するAt−CTP2をコードする核酸配列;
配列番号46:At−CTP2+リゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素に融合した成熟アラビドプシス(Arabidopsis)EPSPS合成酵素由来の10アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号47:リゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素に融合したZm−ASA2−CTPをコードする核酸配列;
配列番号48:Zm−ASA2−CTP+リゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素に融合した成熟ゼアマイズアントラニル合成酵素α2サブユニット由来の18アミノ酸をコードする核酸配列;
配列番号49:Zm−ASA2−CTP+緑色蛍光タンパク質に融合したアグロバクテリウム・ツメファシエンス単量体アントラニル酸合成酵素に融合した成熟ゼアマイズアントラニル合成酵素α2サブユニット(Zm−ASA2遺伝子にコードされた最初の65アミノ酸)由来の18アミノ酸をコードする核酸配列
配列番号50:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したAt−CTP2;
配列番号51:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したZm−ASA2−CTP;
配列番号52:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したOs−Wx−CTP;
配列番号53:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したRs−AS短−CTP;
配列番号54:緑色蛍光タンパク質(GFP)に融合したZm−DHDPS−CTP;
配列番号55:Zm−DHDPS−CTP+GFPに融合した成熟ゼアマイズジヒドロジピコリン酸合成酵素由来の5アミノ酸;
配列番号56:リゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素に融合した、天然の切断部位E/Kを有するAt−CTP2;
配列番号57:At−CTP2+リゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素に融合した成熟アラビドプシスEPSPS合成酵素由来の10アミノ酸;
配列番号58:リゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素に融合したZm−ASA2−CTP;
配列番号59:Zm−ASA2−CTP+リゾビウム・メリロティ(Rhizobium meliloti)アントラニル酸合成酵素に融合した成熟ゼアマイズアントラニル合成酵素α2サブユニット由来の18アミノ酸;
配列番号60:Zm−ASA2−CTP+緑色蛍光タンパク質に融合したアグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)単量体アントラニル酸合成酵素に融合した成熟ゼアマイズアントラニル合成酵素α2サブユニット(Zm−ASA2遺伝子にコードされた最初の65アミノ酸)由来の18アミノ酸
配列番号199:アグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agrobacterium tumefaciens)野生型アントラニル酸合成酵素;
配列番号201:アグロバクテリウム・ツメファシエンスF298W突然変異対立遺伝子;
配列番号203:アグロバクテリウム・ツメファシエンスS51F突然変異対立遺伝子;
配列番号205:アグロバクテリウム・ツメファシエンスS51C突然変異対立遺伝子;
配列番号207:アグロバクテリウム・ツメファシエンスコドン最適化S51C突然変異対立遺伝子;
配列番号209:シノリゾビウム・メリロティ(Sinorhizobium meliloti)アントラニル酸合成酵素野生型;および
配列番号211:シノリゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素S51C突然変異対立遺伝子
を含むDNAが挙げられる。
配列番号200:アグロバクテリウム・ツメファシエンス野生型アントラニル酸合成酵素;
配列番号202:アグロバクテリウム・ツメファシエンスF298W突然変異体;
配列番号204:アグロバクテリウム・ツメファシエンスS51F突然変異体;
配列番号206:アグロバクテリウム・ツメファシエンスS51C突然変異体;
配列番号208:アグロバクテリウム・ツメファシエンスコドン最適化S51C突然変異体;
配列番号210:シノリゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素野生型;
配列番号212:シノリゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素S51C突然変異体
のうちのいずれか1つを含むアントラニル酸合成酵素をコードするあらゆる単離された核酸も企図している。
本発明において興味深いのは、植物宿主細胞において、CTPに融合された単量体ASをコードするポリヌクレオチド配列の転写および翻訳を指示する組換え発現ベクターにおけるポリヌクレオチド配列、またはポリヌクレオチドの使用である。
配列番号213:pMON68065、すなわちZm−ASA2−CTP+18::アグロAS(S51C)非最適化突然変異対立遺伝子のための発現ベクターをコードする核酸配列;
配列番号214:pMON68066、すなわちZm−ASA2−CTP+18::アグロAS(S51C)非天然最適化(nno)突然変異対立遺伝子のための発現ベクターをコードする核酸配列;
配列番号215:pMON69757、すなわちアグロAS(F298W)突然変異対立遺伝子を含有する構築物のための発現ベクターをコードする核酸配列;
配列番号216:pMON69770、すなわち代替3’UTRを有するアグロAS(S51C)非最適化突然変異対立遺伝子を含有する構築物のための発現ベクターをコードする核酸配列;
配列番号217:pMON69768、すなわちアグロAS(S51F)突然変異対立遺伝子を含有する構築物のための発現ベクターをコードする核酸配列;
配列番号218:pMON78850、すなわちリゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素野生型対立遺伝子を含有する構築物のための発現ベクターをコードする核酸配列;
配列番号219:pMON78851、すなわちリゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素S51C対立遺伝子を含有する構築物のための発現ベクターをコードする核酸配列
を有するDNAが挙げられる。
本発明の組換え発現ベクターを導入している植物細胞、組織、器官、または植物は、形質転換された、トランスフェクトされた、またはトランスジェニックであると見なされる。トランスジェニックもしくは形質転換された植物細胞または植物には、前記植物細胞または植物の子孫および交雑しており導入された核酸配列の存在から生じる改変表現型を示す親などのトランスジェニック植物を用いる育種計画から作製される子孫も含まれる。
本発明は、トランスジェニック植物の種子において遊離トリプトファンレベルを増加させる方法を提供する。一実施形態では、トリプトファンを増加させる方法は、単量体アントラニル酸合成酵素を植物細胞の葉緑体に標的しまたは局在化できるCTPに作動可能に連結された単量体アントラニル酸合成酵素をコードする核酸配列を、植物細胞に導入することを含む。本発明の単量体アントラニル酸合成酵素は、トリプトファンによるフィードバック抑制に非感受性の非制御形態の酵素である。
本実施例は、アグロバクテリウムアントラニル酸合成酵素対立遺伝子のアミノ末端に融合したCTP1葉緑体輸送ペプチドをコードする導入遺伝子のタンパク質産物は、トランスジェニックトウモロコシの胚色素体に効率的に標的されないことを実証する。
本実施例は、トウモロコシアントラニル酸合成酵素−緑色蛍光タンパク質(Zm−AS::GFP)融合物および実施例3で詳述される対照::GFP融合物を含有するプロトプラストトランスフェクションベクターの構築に組み込まれ、実施例4で説明される一過性発現アッセイシステムで評価された種々のCTP配列の設計を説明する。
本実施例は、トウモロコシアントラニル酸合成酵素::緑色蛍光タンパク質(Zm−AS::GFP)融合物および実施例4で説明される一過性プロトプラストおよび胚アッセイにおいて使用された対照::GFP融合物を含有するプロトプラストトランスフェクションベクターの構築を説明する。2つの一般的戦略を用いてこれらのベクターを構築した。
一次PCR
ミックス1:
1マイクロリットルCTP2 N1オリゴミックス
1マイクロリットル4dNTPミックス(Roche社製、10ミリモル各)
23マイクロリットル水
ミックス2
6マイクロリットル 25mM MgCl2
5マイクロリットルPCR緩衝液(w/out MgCl2)
0.75マイクロリットルExpand Hi−Fi酵素ミックス(Roche社製)
13.25マイクロリットル水
ミックス1およびミックス2は薄壁PCR管中で組み合わせ、PCR反応は以下のように実施した:
1)94℃/2分
2)94℃/30秒
3)45℃/30秒
4)72℃/30秒
5)さらに4回、工程2へ進む
6)72℃/2分
7)4℃/保持
二次PCR
ミックス3
1マイクロリットルの一次PCR反応物
1.5マイクロリットルN1−1オリゴ(10ピコモル/マイクロリットル)
1.5マイクロリットルN1−14オリゴ(10ピコモル/マイクロリットル)
1マイクロリットルdNTPミックス
20マイクロリットル水
ミックス4
6マイクロリットル 25mM MgCl2
5マイクロリットルPCR緩衝液(w/out MgCl2)
0.75マイクロリットルExpand Hi−Fi酵素ミックス(Roche社製)
13.25マイクロリットル水
ミックス1およびミックス2は薄壁PCR管中で組み合わせ、PCR反応は以下のように実施した:
ミックス3およびミックス4は薄壁PCR管中で組み合わせ、PCR反応は以下のように実施した:
1)94℃/2分
2)94℃/30秒
3)55℃/30秒
4)72℃/30秒
5)さらに24回、工程2へ進む
6)72℃/2分
7)4℃/保持
本実施例は、AS::GFP融合タンパク質の色素体標的における異なる葉緑体輸送ペプチド(CTP)の能力を予測するのに用いる2つの一過性発現アッセイシステムを説明する。これらのアッセイは、アントラニル酸合成酵素−緑色蛍光タンパク質(AS::GFP)融合物および実施例3に記載した融合物を含有するプロトプラストトランスフェクションベクターを利用する。
本実施例は、種々の葉緑体輸送タンパク質と組み合わせた、野生型(wt)および突然変異対立遺伝子のアグロバクテリウム・ツメファンシスおよびリゾビウム・メリロティアントラニル酸合成酵素(AS)双方をコードする核酸配列を含有する形質転換ベクターの構築を説明する。本実施例は、本明細書に記載する形質転換ベクターを用いるトウモロコシの形質転換のためのプロトコールも提供する。
上記の形質転換ベクターは、基本的に米国特許出願公開第2005/0005327号に記載のとおりにトウモロコシに形質転換した。この特許文献は参照によりその全体を本明細書に組み込んでいるものとする。略言すると、未熟胚を含有する穂は受粉のほぼ10日後に収穫し、使用まで4℃で冷蔵した(収穫後最長5日間)。形質転換のこの方法に好ましい胚のサイズは〜1.5〜2.0mmである。このサイズには通常、平均温度87°F、GE1000ワット高圧ナトリウムランプにより供給される補助照明付きで日照時間14時間の生育条件付きの温室内で受粉の10日後に到達する。
本実施例は、実施例5に記載するCTP−構築物で形質転換したトウモロコシ事象由来のカーネルにおける免疫局在性の研究および遊離トリプトファンレベルの定量化で使用される分析法を説明する。
本実施例は、実施例5に記載する発現ベクターで形質転換したトウモロコシ植物における遊離トリプトファンレベルの分析を説明する。
本実施例は、実施例5に記載されている発現ベクターを含有するミールおよび飼料生成物の製造のための方法を説明する。
これは、トランスジェニック植物細胞、またはそのようなトランスジェニック植物細胞由来の飼料もしくはミール生成物における、本明細書に記載するCTP::AS配列組合せのいずれでも含有する構築物に属する独自の配列の存在を検出するために使用してよい方法を説明する。
トランスジェニック植物細胞由来の、またはそのようなトランスジェニック植物細胞由来の飼料もしくはミール生成物由来のゲノムDNAは、製造元のプロトコールに従って、QIAGEN DNeasy(商標)植物ミニキット(カタログ番号69104、QIAGEN社)を用いて抽出できる。PCR反応混合物は、通常、約100mgの抽出ゲノムDNA、1X PCR反応緩衝液(Expand High Fidelity PCR system、カタログ番号1732641、Roche社、ナットレー、ニュージャージー)、0.2mM dNTP、5ピコモルの各プライマー、3.5ユニットのHigh Fidelity Taqポリメラーゼ酵素、および50μlの最終容量になるまでの水を含んでいてよい。例えば、配列番号228と配列番号229、または配列番号230と配列番号231のプライマー対を使えば、抽出DNAを増幅させて、pMON68066で形質転換した植物細胞のZm−ASA2+18−CTP::アグロAS構築物由来DNAに特徴的な単位複製配列を作製できる。反応混合物は、95℃での変性、60℃でのアニーリング、および72℃での伸長を35サイクル含んでいてよい種々の温度サイクルにかける。35サイクルのPCR後、約10μlの反応混合物を1.0%アガロースゲル上で分離する。2649塩基対フラグメント(プライマー対配列番号228と配列番号229での)または2735塩基対フラグメント(プライマー対配列番号230と配列番号231での)の存在は、植物細胞、飼料またはミール生成物が、AS対立遺伝子に融合したZm−ASA2+18−CTPを含むことを示している。本明細書に記載する他のCTP::AS配列組合せのいずれでも含有する構築物に属する独自の配列の検出に有用であると考えられる追加のPCRプライマー対を認識し設計するのは、十分に当業者の手段内である。
本明細書に記載されたものに補足する例示的手順または他の詳細を提供する範囲まで、以下の参考文献をここに出典明示して特に本明細書の一部とみなす
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Claims (23)
- 単量体アントラニル酸合成酵素に融合した葉緑体輸送ペプチドをコードするポリヌクレオチド分子を含む発現ベクターであって、
a)葉緑体輸送ペプチドは、配列番号21、配列番号22、配列番号28、配列番号32、配列番号33、もしくは配列番号36のポリペプチド配列を含み、または
b)葉緑体輸送ペプチドをコードするポリヌクレオチド分子は、配列番号2、配列番号3、配列番号9、配列番号13、配列番号14、もしくは配列番号17を含み、
前記葉緑体輸送ペプチドが、CTP1による前記アントラニル酸合成酵素の標的化と比較した場合、植物細胞の葉緑体への前記単量体アントラニル酸合成酵素の標的化の増強を供し、前記ポリヌクレオチド分子が、同一遺伝子型ではあるが前記ポリヌクレオチド分子を欠く植物細胞と比較した場合、前記ポリヌクレオチド分子を含むトランスジェニック植物細胞において少なくとも1個のアミノ酸のレベルの増強を供する発現ベクター。 - 前記単量体アントラニル酸合成酵素がトリプトファンに対してフィードバック非感受性である、請求項1記載の発現ベクター。
- 前記単量体アントラニル酸合成酵素が、配列番号200、配列番号202、配列番号204、配列番号206、配列番号208、配列番号210、および配列番号212を含む群から選択されるポリペプチド配列を含む、請求項2記載の発現ベクター。
- 配列番号213または配列番号214の核酸配列を含むと定義される、請求項1記載の発現ベクター。
- 単量体アントラニル酸合成酵素に融合した葉緑体輸送ペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドに作動可能に連結された、植物において機能的なプロモーターをさらに含む、請求項2記載の発現ベクター。
- 前記プロモーターが、構成的、誘導性、種子特異的、または組織選択的プロモーターである、請求項5記載の発現ベクター。
- 葉緑体輸送ペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが配列番号9を含み、単量体アントラニル酸合成酵素をコードする前記ポリヌクレオチドが配列番号207を含む、請求項5記載の発現ベクター。
- 請求項1記載の発現ベクターで形質転換されたトランスジェニック細胞。
- 植物細胞として定義される、請求項8記載のトランスジェニック細胞。
- 単子葉植物細胞として定義される、請求項9記載のトランスジェニック植物細胞。
- 双子葉植物細胞として定義される、請求項9記載のトランスジェニック植物細胞。
- 前記単量体アントラニル酸合成酵素が、配列番号200、配列番号202、配列番号204、配列番号206、配列番号208、配列番号210、および配列番号212よりなる群から選択されるポリペプチド配列を含む、請求項9記載のトランスジェニック植物細胞。
- 単量体アントラニル酸合成酵素に融合した葉緑体輸送ペプチドをコードする前記ポリヌクレオチド分子に作動可能に連結されたプロモーターをさらに含む、請求項9記載のトランスジェニック植物細胞。
- 前記プロモーターが、構成的、誘導性、種子特異的、および組織選択的プロモーターよりなる群から選択される請求項9記載のトランスジェニック植物細胞。
- 前記トランスジェニック植物細胞がトウモロコシ細胞である、請求項9記載のトランスジェニック植物細胞。
- 葉緑体輸送ペプチドをコードする前記ポリヌクレオチドが配列番号9を含み、単量体アントラニル酸合成酵素をコードする前記ポリヌクレオチドが配列番号207を含む、請求項9記載のトランスジェニック植物細胞。
- 単子葉植物の種子における遊離トリプトファンのレベルを増加させる方法であって、請求項1記載の発現ベクターを植物細胞で発現させることを含み、前記葉緑体輸送ペプチドが前記単量体アントラニル酸合成酵素を前記植物細胞の色素体に区分できることを特徴とする方法。
- 請求項1記載の発現ベクターで形質転換されたトランスジェニック植物。
- 種子が前記発現ベクターを含む、請求項18記載の植物の種子。
- 請求項19記載の種子をミール、タンパク質または油に加工することを含む、栄養的に増強されたトウモロコシ飼料生成物を製造する方法。
- 請求項20記載の方法により製造される飼料生成物。
- 配列番号21、配列番号22、配列番号28、配列番号32、配列番号33、配列番号36よりなる群から選択されるポリペプチド配列をコードするポリヌクレオチド分子を含有する、請求項21記載の飼料生成物。
- DNA増幅法において試験される場合、請求項1記載の発現ベクターに特徴的な単位複製配列を産生する核酸を含む、請求項21記載の飼料生成物。
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