JP2010222319A - ミトコンドリア融合剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】本発明のミトコンドリア融合剤等は、Asp−Pro構造を持ちアミノ酸数が2〜3個のミトコンドリア融合ペプチドを有効成分として含有する。このペプチドは、Asp−Proのジペプチドであることが好ましい。
【選択図】図1
Description
〔実施例1及び2〕
Asp−Proのジペプチド(実施例1)、及びAsp−Proを基本骨格としてもつトリペプチドであるAsp−Pro−Cys(実施例2)を化学合成した。これらのペプチドのミトコンドリア融合活性を、特開2007−228855号公報に記載の方法に基づいて以下の手順で解析した。
10% Fetal bovine serum、グルコース、カナマイシン及びビオチンを含むDulbecco‘s Modified Eagle Mediumからなる基礎培地中で、未分化の3T3−L1前駆脂肪細胞(preadipocytes)をコンフルエントになるまで培養した。これを3T3−L1 preadipocytes(Day 0)としてミトコンドリアの形態観察に用いた。
3T3−L1 preadipocytes(Day 0)の上清を除去し、培養培地に移した。表1に示す被検物質をPBSに希釈して上記培養培地に添加し、48時間培養した。ミトコンドリアの形態変化のためにミトコンドリアをMitoTracker Green FM(Molecular Probes)により37℃、30分で染色した。蛍光顕微鏡(オリンパス社製、OLYMPUS IX70)の100倍の対物レンズを使用して、油浸でミトコンドリアの形態を観察した。図1に、Asp−Pro又はAsp−Pro−Cysを添加して培養した前駆脂肪細胞のミトコンドリアの顕微鏡写真を、PBSの存在下で培養したネガティブコントロールとともに示す。
(1) Granule type(1μm以下:score−1)
(2) Short tube type(1〜2μm:score+1)
(3) Medium tube type(2〜5μm:score+2)
(4) Long tube type(5μm以上:score+3)
(5) Highly tube type(5μm以上かつ高度にチューブ化:score+5)
3T3−L1 adipocytes(Day 16)の上清を除去し、分化維持培地に移して、さらにPBSに希釈した被検物質(表1)を添加して48時間培養した。ここで被検物質の濃度は0.1μg/mlとした。また、ネガティブコントロールとしてPBSを用いた。細胞内脂肪滴をOil−Red Oで染色し、脂肪滴量を算出し脂肪滴蓄積に対する影響を解析した。まず、脂肪細胞を顕微鏡(オリンパス社製、OLYMPUS IX70)の40倍の対物レンズで観察した。図2に、Asp−Pro又はAsp−Pro−Cysを添加して培養した脂肪細胞の顕微鏡写真を、ネガティブコントロールとともに示す。
(1) Small type(2μm以下:score 0)
(2) Medium type(2〜5μm:score +1)
(3) Large type(5μm以上:score +2)
4週齢のC57BL/JJcl株雄性マウス(日本クレア製)を用いて、Asp−Proからなるミトコンドリア融合剤の投与試験を行った。まず、1週間の馴化飼育を行い、その後、以下のように1群5匹に群分けした。
(1) SD群:普通食(商品名:CE−2、日本クレア株式会社製)と水とを与える
(2) SD+DP群:普通食とAsp−Proを混ぜた水とを与える
(3) HF群:高脂肪食(商品名:High Fat Diet 32 (HFD32)、日本クレア株式会社製)と水とを与える
(4) HF+DP群:高脂肪食とAsp−Proを混ぜた水とを与える
Claims (7)
- Asp−Proを含みアミノ酸数が2〜3個のミトコンドリア融合ペプチドを有効成分として含有するミトコンドリア融合剤。
- 前記ミトコンドリア融合ペプチドがAsp−Proを含むトリペプチドであることを特徴とする、請求項1に記載のミトコンドリア融合剤。
- 前記ミトコンドリア融合ペプチドがAsp−Proのジペプチドであることを特徴とする、請求項1に記載のミトコンドリア融合剤。
- Asp−Proを含みアミノ酸数が2〜3個のミトコンドリア融合ペプチドを有効成分として含有する抗肥満剤。
- Asp−Proを含みアミノ酸数が2〜3個のミトコンドリア融合ペプチドを有効成分として含有する内臓細胞蓄積抑制剤。
- Asp−Proを含みアミノ酸数が2〜3個のミトコンドリア融合ペプチドを含有し、ミトコンドリア融合活性を示す機能性食品。
- Asp−Proを含みアミノ酸数が2〜3個のミトコンドリア融合ペプチドを含有し、ミトコンドリア融合活性を示す飼料。
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