JP2010202632A

JP2010202632A - 鳥インフルエンザウイルス不活化剤、鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法及び鳥インフルエンザウイルス不活化スプレー剤

Info

Publication number: JP2010202632A
Application number: JP2009104828A
Authority: JP
Inventors: Kazuyuki Miyake; 和之三宅
Original assignee: DREAM DO Co Ltd
Current assignee: DREAM DO Co Ltd
Priority date: 2009-02-06
Filing date: 2009-04-23
Publication date: 2010-09-16

Abstract

【課題】ＧＳＥの鳥インフルエンザウイルスに対する不活化効果を明らかにする。
【解決手段】グレープフルーツ種子抽出液（以下、ＧＳＥと略す。）を水に溶かし、フィチン酸を加えた上で、醸造用アルコールを加えてなるウイルス不活化剤であって、鳥インフルエンザウイルスに対して不活化効果を有する。ＧＳＥが０．０８W/W ％、フィチン酸が０．０５W/W ％、醸造用アルコールが５８．８W/W ％、残りが水とする。ペーハー（ｐＨ）が５．８ないし６．４となるように調整される。本発明に係るウイルス不活化剤の製造方法は、ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えて乳化し、９５度の醸造用アルコールを加えてなる。
【選択図】図３

Description

本発明は、鳥インフルエンザウイルスに噴霧して用いる鳥インフルエンザウイルス不活化剤に関するものである。

グレープフルーツ種子抽出液（ｇｒａｐｅｆｒｕｉｔｓｅｅｄｅｘｔｒａｃｔ：ＧＳＥ）は、天然の食品添加物であり、１９７６年に殺菌効果が確かめられて以来、大腸菌Ｏ１５７、サルモネラ、腸炎ビブリオ、黄色ブドウ球菌など、多くのグラム陽性菌、グラム陰性菌、カビ属に対する不活化効果が明らかにされてきた。

しかしながら、ウイルスに対する効果は十分に明かされてはいなかった。

特許文献１には、鳥インフルエンザウイルス不活化剤が開示されている。溶媒にヨウ素とシクロデキストリンとが溶解した、鳥インフルエンザウイルス不活化剤である。

特許文献２には、ネコカリシウイルス不活化剤が開示されている。ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えた上で、醸造用アルコールを加えてなるものである。

特開２００６−３２８０３９号公報特許第４１２６０６８号公報

本発明の目的は、ＧＳＥの鳥インフルエンザウイルスに対する不活化効果を明らかにし、鳥インフルエンザウイルスの不活化に適切な鳥インフルエンザウイルス不活化剤を提供することにある。

上記課題を解決すべく、本発明に係る鳥インフルエンザウイルス不活化剤は、スプレーボトルに収納して、食品の製造ライン全般、調理器具、洗浄後の手や指、生ゴミ、家禽舎、飼料、家禽の排泄物に噴霧して用いる鳥インフルエンザウイルス不活化剤であって、グレープフルーツ種子抽出液（ＧＳＥ）を水に溶かし、フィチン酸を加えた上で、醸造用アルコールを加えて、ＧＳＥが０．０７ないし０．０９W/W ％、フィチン酸が０．０４ないし０．０６W/W ％、醸造用アルコールが５８ないし５９．９W/W ％、残りが水となるように調整され、鳥インフルエンザウイルスを噴霧後１０秒以内に不活化するものである。

請求項２に記載の発明は、請求項１に記載の鳥インフルエンザウイルス不活化剤であって、ＧＳＥが０．０８W/W ％、フィチン酸が０．０５W/W ％、醸造用アルコールが５８．８W/W ％、残りが水となるように調整されたものである。

請求項３に記載の発明は、請求項１又は２のいずれか一に記載の鳥インフルエンザウイルス不活化剤であって、ペーハー（ｐＨ）が５．８ないし６．４であるものである。

請求項４に記載の発明は、鳥インフルエンザウイルスを噴霧後１０秒以内に不活化する鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法であって、ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えて乳化し、９５度の醸造用アルコールを加えて、ＧＳＥが０．０７ないし０．０９W/W ％、フィチン酸が０．０４ないし０．０６W/W ％、醸造用アルコールが５８ないし５９．９W/W ％、残りが水となるように調整することを特徴とするものである。

請求項５に記載の発明は、請求項４に記載の鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法であって、ＧＳＥが０．０８W/W ％、フィチン酸が０．０５W/W ％、醸造用アルコールが５８．８W/W ％、残りが水となるように調整することを特徴とするものである。

請求項６に記載の発明は、請求項４又は５のいずれか一に記載の鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法であって、ペーハー（ｐＨ）が５．８ないし６．４であるように調整することを特徴とするものである。

請求項７に記載の発明は、ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えた上で、醸造用アルコールを加えて、ＧＳＥが０．０７ないし０．０９W/W ％、フィチン酸が０．０４ないし０．０６W/W ％、醸造用アルコールが５８ないし５９．９W/W ％、残りが水として調整され、鳥インフルエンザウイルスを噴霧後１０秒以内に不活化する鳥インフルエンザウイルス不活化剤をスプレーボトルに収納してなる鳥インフルエンザウイルス不活化スプレー剤である。

請求項８に記載の発明は、ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えた上で、醸造用アルコールを加えて、ＧＳＥが０．０８W/W ％、フィチン酸が０．０５W/W ％、醸造用アルコールが５８．８W/W ％、残りが水として調整され、鳥インフルエンザウイルスを噴霧後１０秒以内に不活化する鳥インフルエンザウイルス不活化剤をスプレーボトルに収納してなる鳥インフルエンザウイルス不活化スプレー剤である。

鳥インフルエンザウイルスについて不活化効果がある。すなわち、１０秒という短い時間で鳥インフルエンザウイルスをこわし、ウイルスのない状態を長く保つ抗菌効果を有する。

実験に用いたウイルスはＨ５Ｎ３であるが、Ｈ５Ｎ３と同じＡ型インフルエンザウイルスであり、ＨＡのサブタイプもＨ５と同じであるＨ５Ｎ１も性状の似たウイルスであるので、Ｈ５Ｎ１に対しても不活化効果があるものと思われる。

試験報告書第１ページ。試験報告書第２ページ。試験報告書第３ページ。追加試験報告（作用時間の検討）第１ページ追加試験報告（作用時間の検討）第２ページ

本発明の発明者が属する株式会社ドゥリーム・ドゥは、除菌剤として、「スーパードリームＦ１」という商品を開発した。以下、スーパードリームＦ１（「スーパードリームＦ１」は、株式会社ドゥリーム・ドゥの商標）を必要に応じて「ＳＤ−Ｆ１」と記載する。この「ＳＤ−Ｆ１」の大腸菌などに対する効果は当初から知られていたが、このたび、鳥インフルエンザウイルスに対する効果を調べるべく、広島大学大学院医歯薬学総合研究科ウイルス学研究室（坂口剛正教授）に試験を依頼した。そして、鳥インフルエンザウイルスに対する不活化効果の報告を得た。本発明は、その新しい知見によるものである。

まず、ＳＤ−Ｆ１であるが、ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えた上で、醸造用アルコールを加えてなる除菌液である。ＧＳＥが０．０７ないし０．０９W/W ％、フィチン酸が０．０４ないし０．０６W/W ％、醸造用アルコールが５８ないし５９．９W/W ％、残りが水である。特に、ＧＳＥが０．０８W/W ％、フィチン酸が０．０５W/W ％、醸造用アルコールが５８．８W/W ％、残りが水とするように調整する。また、ペーハー（ｐＨ）が５．８ないし６．２となるように調整されることが望ましい。ＳＤ−Ｆ１の製造方法は、ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えて乳化し、９５度の醸造用アルコールを加えてなる。ＧＳＥが０．０７ないし０．０９W/W ％、フィチン酸が０．０４ないし０．０６W/W ％、醸造用アルコールが５８ないし５９．９W/W ％、残りが水であるように調整する。特に、ＧＳＥが０．０８W/W ％、フィチン酸が０．０５W/W ％、醸造用アルコールが５８．８W/W ％、残りが水であるように調整することが望ましい。さらに、ペーハー（ｐＨ）が５．８ないし６．４であるように調整する。なお、本明細書において、W/W ％は、重量パーセントを意味する。

このＳＤ−Ｆ１の鳥インフルエンザウイルスに対する不活化効果を知るために、Ｈ５Ｎ１株を直接調べるのが望ましいが、実験が大変難しいという事情があるため、その代替ウイルスであるＨ５Ｎ３株を用いた。同じＡ型インフルエンザウイルスであること、ＨＡのサブタイプもＨ５で同じであることから性状がかなり似ており、Ｈ５Ｎ３での不活化が実証されれば、Ｈ５Ｎ１への効果も同様に期待できるからである。

鳥インフルエンザウイルスは、鳥由来インフルエンザウイルスA/swan/Shimane/499/83(H5N3)を用いた。ウイルスの増殖および感染価の測定にはＭＤＣＫ（＋）細胞（Noma et al., Arch Virol 143:1893-1909, 1998)を用いた。被検材料はＳＤ−Ｆ１（0.08% GSE、58.8% 醸造用アルコール、0.05% フィチン酸）および58.8% 醸造用アルコールを用い、対照としてリン酸緩衝生理食塩水(Dulbecco's phosphate-buffered saline (ＰＢＳ))を用いた。

ウイルス原液（感染鶏卵しょう尿液）をあらかじめＰＢＳで５倍に稀釈した。稀釈ウイルス液と被検材料を等量ずつ（各３５μＬ）混和して、室温で１０分間反応させたのち、２０μg/mlトリプシン添加ＤＭＥＭ(Dulbecco's modified Eagle's minimum essential medium)で１０倍段階稀釈して反応を止め、さらに同液で１０倍段階稀釈列を調整した。稀釈したウイルス液を９６穴プレートの単層ＭＤＣＫ（＋）細胞に接種し(100μL/well)、培養した。４日後以降（約６日間）にウイルスによる細胞変性（ＣＰＥ）が十分に広がったところで固定・染色し、Behrens-Kaerber 法を用いて５０％感染量（単位：50％ tissue culture infectious dose [TCID₅₀])を算出し、ウイルス感染価を計算した。本試験は２回行って平均値を求めた。

表１は、ＳＤ−Ｆ１、エタノール、ＰＢＳそれぞれについて残存感染価を算出した値と、パーセンテージを記載したものである。値は実験２回の平均値である。表１をグラフにしたものを表２に示す。図１から図３までは広島大学大学院医歯薬学総合研究科ウイルス学研究室坂口剛正教授の３枚に亘る報告書である。第１ページにおける電話番号、メールアドレスは、問い合わせ殺到などの迷惑がかかるおそれがあるためにマスキングして載せてある。

［結果と考察］ＳＤ−Ｆ１は3.3×10⁶TCID₅₀の鳥インフルエンザウイルスH5N3を10分以内に完全に不活化した。99.99パーセント以上、不活化し、この方法では残存ウイルスを検出できなかった（残存ウイルスは0.01％未満であり、この方法における検出限度以下であった。
一方、58.8%エタノールのみでは10分間で99.5%不活化した。
ＳＤ−Ｆ１は鳥インフルエンザウイルスの感染防止に有用であることが示唆された。

本発明に係る鳥インフルエンザウイルス不活化剤は、例えば、１トンごとに製造できる。そして、製造直後に、使いやすい容量のスプレーボトル（液体を霧状にして噴霧する霧吹きがついたボトル）に収納してさまざまな鳥インフルエンザウイルス不活化を必要とする場面で用いることができる。

上の実施形態において述べた試験結果を見るに、ＳＤ−Ｆ１の不活化効果が１０分以内に得られることがわかったが、そのことの意味は、１０分よりももっと短い時間で不活化がなされていることを示すものである。そこで、本発明の発明者は、改めて１０秒、３０秒、６０秒でどうなのかを調べる追加試験を実施することを決め、上述の試験を実施した教授に依頼した。

表３は、ＳＤ−Ｆ１については作用時間１０秒、３０秒、６０秒、ＰＢＳについては作用時間６０秒として、それぞれについて残存感染価を算出した値と、パーセンテージを記載したものである。エタノールについては、前の試験で１０分間作用させたときの値以上の結果が望めないので、この試験では省略した。

図４、図５はこの作用時間の検討についての試験報告書である。前回と同様に電話番号及びメールアドレスはマスキングして載せてある。

［結果と考察］ＳＤ−Ｆ１は2.8×10⁶TCID₅₀の鳥インフルエンザウイルスH5N3を10秒以内に完全に不活化した。99.99パーセント以上、不活化し、この方法では残存ウイルスを検出できなかった（残存ウイルスは0.01％未満であり、この方法における検出限度以下であった。10秒、30秒、60秒のいずれにおいても同様の残存感染価（検出限度以下）であった。このことから、ＳＤ−Ｆ１が１０秒以内の作用時間で鳥インフルエンザウイルスを不活化することが証明された。

本発明の鳥インフルエンザウイルス不活化剤を使いやすい容量のスプレーボトルに収納して、さまざまな場面で用いることができる。たとえば、製造ライン全般、フードプロセッサー等の機械器具、包丁・まな板等の調理器具、洗浄後の手や指、生ゴミ、家禽舎、飼料、家禽の排泄物への噴霧に用いることが可能である。

ＳＤ−Ｆ１株式会社ドゥリーム・ドゥの開発した除菌液
TCID₅₀ 感染価を示す単位

Claims

スプレーボトルに収納して、食品の製造ライン全般、調理器具、洗浄後の手や指、生ゴミ、家禽舎、飼料、家禽の排泄物に噴霧して用いる鳥インフルエンザウイルス不活化剤であって、
グレープフルーツ種子抽出液（以下、ＧＳＥと略す。）を水に溶かし、フィチン酸を加えた上で、醸造用アルコールを加えて、ＧＳＥが０．０７ないし０．０９W/W ％、フィチン酸が０．０４ないし０．０６W/W ％、醸造用アルコールが５８ないし５９．９W/W ％、残りが水となるように調整され、鳥インフルエンザウイルスを噴霧後１０秒以内に不活化する鳥インフルエンザウイルス不活化剤。
請求項１に記載の鳥インフルエンザウイルス不活化剤であって、ＧＳＥが０．０８W/W ％、フィチン酸が０．０５W/W ％、醸造用アルコールが５８．８W/W ％、残りが水となるように調整された鳥インフルエンザウイルス不活化剤。
請求項１又は２のいずれか一に記載の鳥インフルエンザウイルス不活化剤であって、ペーハー（ｐＨ）が５．８ないし６．４である鳥インフルエンザウイルス不活化剤。
鳥インフルエンザウイルスを噴霧後１０秒以内に不活化する鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法であって、
ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えて乳化し、９５度の醸造用アルコールを加えて、ＧＳＥが０．０７ないし０．０９W/W ％、フィチン酸が０．０４ないし０．０６W/W ％、醸造用アルコールが５８ないし５９．９W/W ％、残りが水となるように調整することを特徴とする鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法。
請求項４に記載の鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法であって、ＧＳＥが０．０８W/W ％、フィチン酸が０．０５W/W ％、醸造用アルコールが５８．８W/W ％、残りが水となるように調整することを特徴とする鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法。
請求項４又は５のいずれか一に記載の鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法であって、
ペーハー（ｐＨ）が５．８ないし６．４であるように調整することを特徴とする鳥インフルエンザウイルス不活化剤の製造方法。
ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えた上で、醸造用アルコールを加えて、ＧＳＥが０．０７ないし０．０９W/W ％、フィチン酸が０．０４ないし０．０６W/W ％、醸造用アルコールが５８ないし５９．９W/W ％、残りが水として調整され、鳥インフルエンザウイルスを噴霧後１０秒以内に不活化する鳥インフルエンザウイルス不活化剤をスプレーボトルに収納してなる鳥インフルエンザウイルス不活化スプレー剤。
ＧＳＥを水に溶かし、フィチン酸を加えた上で、醸造用アルコールを加えて、ＧＳＥが０．０８W/W ％、フィチン酸が０．０５W/W ％、醸造用アルコールが５８．８W/W ％、残りが水として調整され、鳥インフルエンザウイルスを噴霧後１０秒以内に不活化する鳥インフルエンザウイルス不活化剤をスプレーボトルに収納してなる鳥インフルエンザウイルス不活化スプレー剤。