JP2010158171A - 効率的な核初期化方法 - Google Patents
効率的な核初期化方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2010158171A JP2010158171A JP2008335129A JP2008335129A JP2010158171A JP 2010158171 A JP2010158171 A JP 2010158171A JP 2008335129 A JP2008335129 A JP 2008335129A JP 2008335129 A JP2008335129 A JP 2008335129A JP 2010158171 A JP2010158171 A JP 2010158171A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mirna
- cells
- mir
- family member
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0696—Artificially induced pluripotent stem cells, e.g. iPS
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/602—Sox-2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/603—Oct-3/4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
- C12N2501/604—Klf-4
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/65—MicroRNA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Hematology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Psychology (AREA)
- Cardiology (AREA)
Abstract
【解決手段】体細胞から人工多能性幹細胞を製造する方法であって、少なくとも1種のmiRNAの存在下で核初期化因子により該体細胞を核初期化する工程を含み、ここで、該miRNAが該miRNAの存在下において該miRNAの非存在下の場合よりも高い核初期化効率を与える性質を有するmiRNAであり、並びに、該核初期化因子が(a)Octファミリーメンバー、(b)Octファミリーメンバー及びKlfファミリーメンバー、(c)Octファミリーメンバー及びNanog、或いは(d)Octファミリーメンバー、Klfファミリーメンバー及びMycファミリーメンバー、を少なくとも含むが、Soxファミリーメンバーを含まないことを特徴とする、方法。
【選択図】図6
Description
本発明の方法は、人工多能性幹細胞の製造方法であり、miRNAの存在下で核初期化因子により核初期化する工程を含み、該miRNAが該miRNAの存在下において該miRNAの非存在下の場合よりも高い核初期化効率を与える性質を有するmiRNAであることを特徴としている。
(a) Octファミリーメンバー及びSoxファミリーメンバーからなる2種の初期化因子をコードするDNAの組み合わせ;
(b) Octファミリーメンバー、Klfファミリーメンバー、及びSoxファミリーメンバーからなる3種の初期化因子をコードするDNAの組み合わせ;
(c) Octファミリーメンバー、Soxファミリーメンバー、Linファミリーメンバー、及びNanogからなる4種の初期化因子をコードするDNAの組み合わせ;
(d) Octファミリーメンバー、Klfファミリーメンバー、Soxファミリーメンバー及びMycファミリーメンバーからなる4種の初期化因子をコードするDNAの組み合わせ;
(e) Octファミリーメンバーからなる1種の初期化因子をコードするDNA;
(f) Octファミリーメンバー及びKlfファミリーメンバーからなる2種の初期化因子をコードするDNAの組合せ;
(g)Octファミリーメンバー及びNanogからなる2種の初期化因子をコードするDNAの組合せ;
(h) Octファミリーメンバー、Klfファミリーメンバー及びMycファミリーメンバーからなる3種の初期化因子をコードするDNAの組合せ;
などを挙げることができるが、これらに限定されることはない。
(1)Oct3/4からなる1種の初期化因子をコードするDNA;
(2)Oct3/4及びKlf4からなる2種の初期化因子をコードするDNAの組み合わせ;
(3)Oct3/4及びNanogからなる2種の初期化因子をコードするDNAの組み合わせ;
(4)Oct3/4、Klf4及びc-Mycからなる3種の初期化因子をコードするDNAの組み合わせ;
などである。
実施例1:マウス胎児線維芽細胞の核初期化による人工多能性幹細胞の調製
マウス由来Oct3/4、Sox2、及びKlf4の3種の遺伝子、コントロール用のDsRed、及び18種類のmiRNAのそれぞれをコードするpMXsレトロウイルスベクターをPLAT-E細胞にFugene6 (Roche)を用いてトランスフェクトした。翌日、Nanog遺伝子のプロモーター領域の下流にEGFPとpuromycinの耐性遺伝子をコードした配列をつないだトランスジェニックマウス由来の胎児線維芽細胞(Nanog GFP MEF、WO2007/69666)を6 well plateに1×105個ずつまいた。翌日、この細胞にOct3/4、Sox2、及びKlf4、並びに18種類のmiRNAから選ばれる各1種類のmiRNAを発現するレトロウイルスを3因子の発現ウイルスの混合液1 ml+miRNA発現ウイルス液1 mlの割合で感染させ核初期化により人工多能性幹細胞の調製を行った。
マウス由来Oct3/4、Sox2、及びKlf4の3種の遺伝子、DsRed(コントロール)、mmu-miR-295のそれぞれをコードするpMXsレトロウイルスベクターをPLAT-E細胞にFugene6 (Roche)を用いてトランスフェクトした。翌日、Nanog遺伝子のプロモーター領域の下流にEGFPとpuromycinの耐性遺伝子をコードした配列をつないだトランスジェニックマウス尻尾の線維芽細胞(Nanog GFP tail tip fibroblasts)を6ウエルプレートに1×105個ずつまいた。翌日、この細胞にOct3/4、Sox2、及びKlf4の3遺伝子とDsRedあるいはmmu-miR-295を発現するレトロウイルスを(1:1:1:1)の割合で感染させ核初期化により人工多能性幹細胞の調製を行った。
ヒト由来OCT3/4、SOX2、及びKLF4の3種の遺伝子に加え、コントロール用のDsRedと23種類のmiRNA又はmiRNAクラスターをコードするpMXsレトロウイルスベクターをPLAT-E細胞にFugene6 (Roche)を用いてトランスフェクトした。翌日、マウスレトロウイルスのレセプターであるSlc7a1を発現させたヒト成人皮膚線維芽細胞(adult human dermal fibroblasts;aHDF-Slc7a1)を6cmディッシュに3×105個ずつまいた。翌日、この細胞にOCT3/4、SOX2、及びKLF4の3種の遺伝子と各種miRNAを発現するレトロウイルスを1:1:1:1の割合で感染させ核初期化による人工多能性幹細胞の生成を試みた。
3x105 aHDF-Slc7a1 細胞を、60mmゼラチンをコートしたディッシュ上で平板培養し、さらに種々のmiRNAの各々の存在下で、DsRed、4遺伝子(OCT3/4, SOX2, c-MYC, KLF4)又は3遺伝子 (OCT3/4, SOX2, KLF4)を発現するレトロウイルスで感染させた。感染6日後に、5x105個の aHDF-Slc7a1 細胞をマイトマイシン-C処理STO細胞上にまきなおした。感染40日後に、ヒトES細胞様の形態を示すコロニーの数を数えた。これと同じ実験を3回繰り返した。
図4Bは、顕微鏡下で観察されたiPS細胞のES細胞様コロニーの形態を示す。
5x104個のFbNg TTF (Fbx15-βgeo/Nanog-IRES-Puror レポーターマウス由来のTTF) 細胞を、ゼラチンをコーティングした6ウエルプレート上で平板培養し、さらに3遺伝子(Oct3/4, Sox2, Klf4)+DsRed (Myc(-)3f+DsRed)、mmu-miR-295/295* (Myc(-)3f+mmu-miR-295/295*)又はc-Myc (4 遺伝子)を発現するレトロウイルス感染により導入した。感染4日後に、すべての細胞(Myc(-)3f + DsRed; Myc(-)3f + mmu-miR-295/295*)又は20倍希釈した細胞(4遺伝子)を、ピューロマイシン及びハイグロマイシン耐性MSTO (PH-MSTO)細胞上にまきなおした。7, 14, 21, 28日目に、ピューロマイシンによる選択を開始した。
1x105個のNanog MEF(Nanog-IRES-Purorレポーターマウス由来のMEF)細胞を、ゼラチンをコーティングした6ウエルプレート上で平板培養し、さらに3遺伝子 (Oct3/4, c-MycWT(野生型), Klf4)及びmmu-miR-290-295クラスター, 290-5p/290-3p (mmu-miR-290), 291a-5p/291a-3p (mmu-miR-291a), 292-5p/292-3p (mmu-miR-292), 293/293* (mmu-miR-293), 294/294*(mmu-miR-294)又は295/295* (mmu-miR-295) miRNA (1:1)を発現するレトロウイルスを感染させることで導入した。感染4日後に、細胞の半分をピューロマイシン及びハイグロマイシン-C耐性MSTO (PH-MSTO) 細胞上にまきなおした。感染後14日目からピューロマイシンによる選択を開始した。
1x105個のFb-Ng MEF(Fbx15-βgeo/Nanog-IRES-Purorレポーターマウス由来のMEF)細胞を、ゼラチンをコーティングした6ウエルプレート上で平板培養し、さらに3遺伝子 (Oct3/4, c-MycWT(野生型), Klf4) + miR-295/295*又はhsa-miR-302-367クラスターmiRNAを発現するレトロウイルスを感染させることにより導入した。感染4日後に、細胞を、6ウエル又は 10cmディッシュ中のピューロマイシン及びハイグロマイシン-C処理STO 細胞(PH-MSTO)上にまきなおした。感染後7日目からピューロマイシンによる選択を開始した。
3x105個のaHDF-Slc7a1 細胞を、60mmゼラチンコーティングしたディッシュ上で平板培養し、 4 遺伝子(OCT3/4, SOX2, c-MYC, KLF4 (OSMK))、miRNA(OMK:mock又はmiRNAs=2.5:1.5)の存在下あるいは非存在下で3 遺伝子(OCT3/4, c-MYC, KLF4;SOX(-)3遺伝子 (OMK))、又はmiRNAの存在下あるいは非存在下で2遺伝子(OCT3/4 + KLF4 (OK) )のそれぞれの組み合わせの遺伝子がレトロウイルスにより導入された。また、対照としてDsRedが導入された。導入6日後に、5x105aHDF-Slc7a1細胞を、マイトマイシン-C処理STO 細胞 (MSTO細胞)上にまきなおし、感染後40日目にES細胞様コロニー数を計測した。図8においては、観察されたコロニーの形態、及びOK+miRNA導入により得られたiPS細胞がアルカリフォスファターゼ陽性を示し、未分化状態であることが確認された解析結果を示す。
OCT3/4,KLF4,c-MYC(SOX(-)3F)及びhsa-miR-302-367クラスター導入により得られたヒトiPS細胞(61N2)をSCIDマウスの背側の側腹部へ皮下接種した。接種後9週目に腫瘍を採取、固定後、パラフィン包埋し、薄切切片をヘマトキシリン・エオジン染色した。組織学的観察により、神経管(外胚葉)、心筋細胞様構造(中胚葉)、腸管様上皮組織(内胚葉)、軟骨(中胚葉)を含む様々な組織がテラトーマに含まれていることが示され、iPS細胞(61N2)が三胚葉に分化しうる多能性を示すことが確認された(図9)。
aHDF-Slc7a1を6ウエルプレートに1ウエルあたり1x105個ずつまいた。翌日、この細胞に、以下のいずれかの組み合わせの遺伝子をレトロウイルスにより導入した。
1. GFP遺伝子(ネガティブコントロール)
2. OCT3/4遺伝子、SOX2遺伝子、c-MYC遺伝子、KLF4遺伝子(1:1:1:1)
3. OCT3/4遺伝子、SOX2遺伝子、KLF4遺伝子(1:1:1)
4.OCT3/4遺伝子、KLF4遺伝子、mock遺伝子(pMSx空ベクター)(1:1:1)
5.OCT3/4遺伝子、KLF4遺伝子、hsa-miR-302-367クラスター(1:1:1)
6. OCT3/4遺伝子、mock遺伝子(1:1)
7. OCT3/4遺伝子、hsa-miR-302-367クラスター(1:1)
8. KLF4遺伝子、mock遺伝子(1:1)
9. KLF4遺伝子、hsa-miR-302-367クラスター(1:1)
10. hsa-miR-302-367クラスター
Claims (13)
- 体細胞から人工多能性幹細胞を製造する方法であって、少なくとも1種のmiRNAの存在下で核初期化因子により該体細胞を核初期化する工程を含み、ここで、該miRNAが該miRNAの存在下において該miRNAの非存在下の場合よりも高い核初期化効率を与える性質を有するmiRNAであり、並びに、該核初期化因子が(a)Octファミリーメンバー、(b)Octファミリーメンバー及びKlfファミリーメンバー、(c)Octファミリーメンバー及びNanog、或いは(d)Octファミリーメンバー、Klfファミリーメンバー及びMycファミリーメンバー、を少なくとも含むが、Soxファミリーメンバーを含まないことを特徴とする、前記方法。
- 体細胞から人工多能性幹細胞を誘導する際に核初期化の効率を高める方法であって、少なくとも1種のmiRNAの存在下で核初期化因子により該体細胞を核初期化し、これによって、生成する人工多能性幹細胞の細胞数が該miRNAの非存在下の場合よりも増大することを含み、ここで、該miRNAが該miRNAの存在下において該miRNAの非存在下の場合よりも高い核初期化効率を与える性質を有するmiRNAであり、並びに、該核初期化因子が(a)Octファミリーメンバー、(b)Octファミリーメンバー及びKlfファミリーメンバー、(c)Octファミリーメンバー及びNanog、或いは(d)Octファミリーメンバー、Klfファミリーメンバー及びMycファミリーメンバー、を少なくとも含むが、Soxファミリーメンバーを含まないことを特徴とする、前記方法。
- miRNAが胚性幹細胞において体細胞よりも高度に発現しているmiRNAである請求項1又は2に記載の方法。
- OctファミリーメンバーがOct3/4であり、KlfファミリーメンバーがKlf4であり、Mycファミリーメンバーがc-Mycであり、又はSoxファミリーメンバーがSox2である請求項1又は2に記載の方法。
- 核初期化因子が(a)Oct3/4、(b)Oct3/4及びKlf4、(c)Oct3/4及びNanog、或いは(d)Oct3/4、Klf4及びc-Mycである請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 核初期化因子をコードするDNAを含むベクター及び/又は少なくとも1種のmiRNAを体細胞中に導入することを含む請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。
- 核初期化因子をコードするDNAを含むベクター及び/又は少なくとも1種のmiRNAもしくはその前駆体RNAをコードするDNAを含むベクターを体細胞中に導入することを含む請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- miRNAが下記の群:hsa-miR-372、hsa-miR-373又はhsa-miR-373/373*、hsa-miR-371-373クラスター、hsa-miR-302b又はhsa-miR-302b/302b*、hsa-miR-302-367クラスター、hsa-miR-520c又はhsa-miR-520c-5p/520c-3p、mmu-miR-291a又はmmu-miR-291a-5p/291a-3p、mmu-miR-294又はmmu-miR-294/294*、及びmmu-miR-295又はmmu-miR-295/295*からなる群から選ばれる1又は2以上のRNA(記号はmiRBaseデータベースの登録名を示す)に含まれる1又は2以上のmiRNAである請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- miRNAが配列表の配列番号1〜5、10〜12及び14から選択される1又は2以上のRNA配列に含まれる1又は2以上のmiRNAである請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。
- miRNAが18〜25塩基からなる請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。
- 体細胞がヒトの体細胞である請求項10に記載の方法。
- 請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法によって体細胞から誘導された人工多能性幹細胞。
- 請求項12に記載の人工多能性幹細胞の分化によって誘導された体細胞。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008335129A JP5626619B2 (ja) | 2008-12-08 | 2008-12-26 | 効率的な核初期化方法 |
US12/379,564 US9683232B2 (en) | 2007-12-10 | 2009-02-25 | Efficient method for nuclear reprogramming |
EP09252749.8A EP2202309B1 (en) | 2008-12-08 | 2009-12-08 | Efficient method for nuclear reprogramming |
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2008312745 | 2008-12-08 | ||
JP2008312745 | 2008-12-08 | ||
JP2008335129A JP5626619B2 (ja) | 2008-12-08 | 2008-12-26 | 効率的な核初期化方法 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2010158171A true JP2010158171A (ja) | 2010-07-22 |
JP2010158171A5 JP2010158171A5 (ja) | 2012-02-16 |
JP5626619B2 JP5626619B2 (ja) | 2014-11-19 |
Family
ID=42046366
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2008335129A Active JP5626619B2 (ja) | 2007-12-10 | 2008-12-26 | 効率的な核初期化方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
EP (1) | EP2202309B1 (ja) |
JP (1) | JP5626619B2 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2011037270A1 (en) * | 2009-09-24 | 2011-03-31 | Kyoto University | Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells |
JPWO2009075119A1 (ja) * | 2007-12-10 | 2011-04-28 | 国立大学法人京都大学 | 効率的な核初期化方法 |
JP2012120486A (ja) * | 2010-12-08 | 2012-06-28 | Kinki Univ | 免疫不全動物を用いた細胞の製法 |
JP2015522257A (ja) * | 2012-06-13 | 2015-08-06 | ステムジェント, インコーポレイテッドStemgent, Inc. | 多能性幹細胞を調製する方法 |
JP5840119B2 (ja) * | 2010-02-18 | 2016-01-06 | 国立大学法人大阪大学 | 誘導多能性幹細胞の製造方法 |
WO2016010119A1 (ja) * | 2014-07-16 | 2016-01-21 | 国立大学法人京都大学 | 分化細胞の抽出方法 |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
ES2933478T3 (es) | 2005-08-03 | 2023-02-09 | Astellas Inst For Regenerative Medicine | Métodos mejorados de reprogramación de células somáticas animales |
US8709805B2 (en) | 2009-08-07 | 2014-04-29 | Kyoto University | Canine iPS cells and method of producing same |
WO2012073253A1 (en) * | 2010-09-30 | 2012-06-07 | Lakshmanane Boominathan | Therapeutic uses of mirnas/compounds that activate tumor suppressor genes/mirnas |
US10865383B2 (en) | 2011-07-12 | 2020-12-15 | Lineage Cell Therapeutics, Inc. | Methods and formulations for orthopedic cell therapy |
ITRM20110685A1 (it) | 2011-12-23 | 2013-06-24 | Internat Ct For Genetic En Gineering And | Microrna per la rigenerazione cardiaca attraverso l induzione della proliferazione dei miociti cardiaci |
WO2014037574A1 (en) * | 2012-09-10 | 2014-03-13 | Sanofi | Methods for reprogramming a somatic cell |
EP3384038A4 (en) | 2015-11-23 | 2019-12-04 | The Regents of The University of Colorado, A Body Corporate | METHODS AND COMPOSITIONS FOR CELL REPROGRAMMING |
CN106939299B (zh) * | 2017-02-04 | 2022-11-15 | 滨州医学院 | microRNA重编程体细胞为神经干细胞的制备方法及应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004024940A2 (en) * | 2002-09-16 | 2004-03-25 | University Of Southern California | Rna-mediated gene modulation |
WO2007069666A1 (ja) * | 2005-12-13 | 2007-06-21 | Kyoto University | 核初期化因子 |
JP2007518402A (ja) * | 2003-12-15 | 2007-07-12 | ソン キム,ケ | ヒトES細胞より分離された新規miRNA |
WO2008124133A1 (en) * | 2007-04-07 | 2008-10-16 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Reprogramming of somatic cells |
US20080293143A1 (en) * | 2003-05-15 | 2008-11-27 | Shi-Lung Lin | Generation of human embryonc stem-like cells using intronic RNA |
-
2008
- 2008-12-26 JP JP2008335129A patent/JP5626619B2/ja active Active
-
2009
- 2009-12-08 EP EP09252749.8A patent/EP2202309B1/en active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2004024940A2 (en) * | 2002-09-16 | 2004-03-25 | University Of Southern California | Rna-mediated gene modulation |
US20080293143A1 (en) * | 2003-05-15 | 2008-11-27 | Shi-Lung Lin | Generation of human embryonc stem-like cells using intronic RNA |
JP2007518402A (ja) * | 2003-12-15 | 2007-07-12 | ソン キム,ケ | ヒトES細胞より分離された新規miRNA |
WO2007069666A1 (ja) * | 2005-12-13 | 2007-06-21 | Kyoto University | 核初期化因子 |
WO2008124133A1 (en) * | 2007-04-07 | 2008-10-16 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Reprogramming of somatic cells |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
BMB2007(第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会合同大会)講演要旨集, JPN6012051173, 25 November 2007 (2007-11-25), pages 504, ISSN: 0002880211 * |
STEM CELLS, vol. 26, JPN6013015416, 2008, pages 1998 - 2005, ISSN: 0002670233 * |
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPWO2009075119A1 (ja) * | 2007-12-10 | 2011-04-28 | 国立大学法人京都大学 | 効率的な核初期化方法 |
JP5558097B2 (ja) * | 2007-12-10 | 2014-07-23 | 国立大学法人京都大学 | 効率的な核初期化方法 |
US8791248B2 (en) | 2007-12-10 | 2014-07-29 | Kyoto University | Nuclear reprogramming factor comprising miRNA and a protein factor |
WO2011037270A1 (en) * | 2009-09-24 | 2011-03-31 | Kyoto University | Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells |
US8993329B2 (en) | 2009-09-24 | 2015-03-31 | Kyoto University | Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells |
JP5840119B2 (ja) * | 2010-02-18 | 2016-01-06 | 国立大学法人大阪大学 | 誘導多能性幹細胞の製造方法 |
JP2012120486A (ja) * | 2010-12-08 | 2012-06-28 | Kinki Univ | 免疫不全動物を用いた細胞の製法 |
JP2015522257A (ja) * | 2012-06-13 | 2015-08-06 | ステムジェント, インコーポレイテッドStemgent, Inc. | 多能性幹細胞を調製する方法 |
WO2016010119A1 (ja) * | 2014-07-16 | 2016-01-21 | 国立大学法人京都大学 | 分化細胞の抽出方法 |
US10604770B2 (en) | 2014-07-16 | 2020-03-31 | Kyoto University | Method for extracting differentiated cells |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2202309A1 (en) | 2010-06-30 |
EP2202309B1 (en) | 2014-04-16 |
JP5626619B2 (ja) | 2014-11-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5626619B2 (ja) | 効率的な核初期化方法 | |
US9683232B2 (en) | Efficient method for nuclear reprogramming | |
US20230282445A1 (en) | Method of nuclear reprogramming | |
US8791248B2 (en) | Nuclear reprogramming factor comprising miRNA and a protein factor | |
JP5467223B2 (ja) | 誘導多能性幹細胞およびその製造方法 | |
US20110250692A1 (en) | Method for producing induced pluripotent stem cells | |
CN104630136A (zh) | 一种制备诱导多能性干细胞的方法以及该方法中所使用的组合物及其应用 | |
WO2014065435A1 (en) | Method of efficiently establishing induced pluripotent stem cells | |
CA2658463A1 (en) | Efficient method for nuclear reprogramming |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20111226 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20111226 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20131105 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140106 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140819 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140918 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5626619 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |