JP2010019818A - バイオセンサー用チップ - Google Patents
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Abstract
【解決手段】基板上に、金属膜と、この金属膜上に配置したアルキル鎖からなる自己組織化膜とを備えたバイオセンサー用チップであって、自己組織化膜上に、リガンドと、水酸基、カルボキシル基、アルコキシ基、メチル基、水素原子からなる群より選ばれる少なくとも1つの官能基とを有し、金属膜上に配置した全アルキル鎖数に対するリガンドが結合しているアルキル鎖数の比を0.40〜0.99とする。
【選択図】図1
Description
前記金属膜上に配置した全アルキル鎖数に対するリガンドが結合しているアルキル鎖数の比は0.45〜0.85であることがより好ましい。
前記金属イオンに生理活性物質が固定されていることが好ましい。
前記リガンドはニトリロトリ酢酸誘導体であることが好ましい。
X-Ra-Y (1)
X-Rb-Z (2)
(ここで、Xは金属膜と結合可能な基を、Ra、Rbは2価の有機連結基を、Yは水酸基、カルボキシル基、アルコキシ基、メチル基、水素原子からなる群より選ばれる官能基を、Zはリガンドを表す。)
前記金属膜は、金、銀、銅、白金、パラジウムおよびアルミニウムからなる群より選ばれる少なくとも1つの金属からなることが好ましい。
本発明のバイオセンサー用チップにおける基板は、表面プラズモン共鳴バイオセンサー用を考えた場合、一般的にはBK7等の光学ガラス、あるいは合成樹脂、具体的にはポリメチルメタクリレート、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネート、シクロオレフィンポリマーなどのレーザー光に対して透明な材料からなるものが使用できる。このような基板は、好ましくは、偏光に対して異方性を示さずかつ加工性の優れた材料が望ましい。
自己組織化膜とは、外からの細かい制御を加えていない状態で、膜材料そのものがもつ機構によって形成される一定の秩序をもつ組織をもった単分子膜やLB膜などの超薄膜のことを言う。この自己組織化により、非平衡な状況で長距離にわたって秩序がある構造やパターンが形成される。
X-Ra-Y (1)
X-Rb-Z (2)
(Xは−SH、−SS、−SeH、−SeSe、−COSH 基などの金属膜と結合可能な基を、Ra、Rbは2価の有機連結基を、Yは水酸基、カルボキシル基、アルコキシ基、メチル基、水素原子からなる群より選ばれる官能基を、Zはリガンドを表す。)
Zはニトリロトリ酢酸、イミノジ酢酸、又はそれらの誘導体であることが好ましい。Yは水酸基、カルボキシル基、アルコキシ基、メチル基、水素原子からなる群より選ばれる官能基であるが、Yがメチル基あるいは水素原子の場合には、Raのアルキル鎖の末端を意味する。Yがアルコキシ基の場合、炭素数1〜2のメトキシ基、エトキシ基であることがより好ましい。ここでそれらの誘導体とは、構造中に対応する部分構造を有する化合物を示す。
リガンドとなる化合物としては、各種キレート剤を用いることができ、ニトリロトリ酢酸(NTA(N-(5-Amino-1-carboxypentyl)iminodiacetic acid))、イミノジ酢酸、フェナンスロリン、テルピリジン、ビピリジン、トリエチレンテトラアミン、ビ(エチレントリアミン)、トリス(カルボキシメチル)エチレンジアミン、ジエチレントリアミンペンタ酢酸、ポリピラゾリルホウ酸、1,4,7−トリアゾシクロノナン、ジメチルグリオキシム、ジフェニルグリオキシム等の多座配位子およびその誘導体を好ましくあげることができる。この中でも、ニトリロトリ酢酸又はその誘導体であることが好ましい。ニトリロトリ酢酸は3座配位子であり、このリガンドが水酸基、カルボキシル基、アルコキシ基、メチル基、水素原子からなる群より選ばれる少なくとも1つの官能基に結合することにより、分子レベルで近接した3つのカルボキシル基へと変換されることになる。
金属イオンは、不飽和金属錯体を形成する金属イオンであればよく、得られる金属錯体の安定性の観点からは遷移金属イオンが好ましく、具体的には、Ni(II)、Ni(III)、Ni(IV)、Cu(I)、Cu(II)、Co(II)、Co(III)、Fe(II)、Fe(III)、のいずれかのイオンであり、リガンドの種類に応じて適宜選択することができるが、結合量の制御が容易であり、かつ強固な結合性を有しているという観点からはとりわけCu(II)が好ましい。金属イオンがCu(II)の場合、リガンド密度は1.0×1011以上であることが好ましい。なお、金属イオンは、価数によって結合力が異なるが、Co(II)、Fe(II)の場合は、特開平6-157600 号の[0037]、[0038]に記載されている酸化還元方法で、金属イオンの酸化数を変化させ、結合力を変えることが可能である。
生理活性物質は、例えば免疫蛋白質、酵素、微生物、核酸、低分子有機化合物、非免疫蛋白質、免疫グロブリン結合性蛋白質、糖結合性蛋白質、糖を認識する糖鎖、脂肪酸もしくは脂肪酸エステル、あるいは配位子結合能を有するポリペプチドもしくはオリゴペプチドなどが挙げられる。これらの生理活性物質は、金属イオンへの配位結合により基板上に固定されるものであり、金属イオンに対して配位可能な官能基を有する、即ち、金属配位能を有するものであればよい。このような金属配位能は、強い配位力を持つ配位子を共有結合することによって容易に付与することができる。
生理活性物質の固定化は、生理活性物質を含む溶液を塗布後、乾燥することによって行う。本発明において、「塗布」とは、浸漬する方法も含む。生理活性物質が含窒素複素環基を有する場合、生理活性物質の含窒素複素環が金属イオンに配位結合し、錯体を形成することによって固定化される。
本発明のバイオセンサー用チップは、生体分子間の相互作用を電気的信号等の信号に変換して、対象となる物質を測定・検出するセンサー、より詳細には、検出対象とする化学物質を認識するレセプター部位と、そこに発生する物理的変化又は化学的変化を電気信号に変換するトランスデューサー部位とから構成されバイオセンサー、表面プラズモン共鳴(SPR)測定技術、水晶発振子マイクロバランス(QCM)測定技術、金のコロイド粒子から超微粒子までの機能化表面を使用した測定技術等に用いることができる。
以下に本発明のバイオセンサー用チップについての実施例を示す。
(バイオセンサーチップの作製)
センサーチップ上に金膜のみが形成されているBiacore社センサーチップAuを12分間、UVオゾン処理を行った後、10mlの超純水に5μmol のC2-NTA(3,3'-dithiobis[N-(5-amino-5-carboxypentyl) propionamide-N,N’-diacetic acid] dihydrochloride(同人化学製))と5μmol の6-Hydroxy-1-hexanethiol(Aldrich社製)とを溶解させた溶液と金膜を40℃で16時間反応させ、エタノールで1回、超純水で1回洗浄しバイオセンサーチップを作製した。
上記で作製したバイオセンサーチップをBiacore社製の表面プラズモン共鳴装置であるBiacore3000にセットし、SPR用HEPES緩衝液(20mM HEPES-HCl, 150mM NaCl, pH7.2)を10μl/minの流速で安定させ、100μmol/lのCuCl2水溶液を10μl添加し、その後にHBS-Nバッファー20μlで洗浄し、次ぎに100nmol/lのHis10- GFP水溶液を10μl添加してタンパクが固定化できることを確認した。続いて100μmol/lのイミダゾール水溶液10μlで洗浄し、バイオセンサー用チップを再生した。
実施例1で使用した6-Hydroxy-1-hexanethiolを1-hexanethiol(Aldrich社製)に変えた以外は実施例1と同様にしてバイオセンサーチップを作製した。
実施例1で使用したC2-NTAを3μmol、6-Hydroxy-1-hexanethiolを6-Hydroxy-1pentanethiolに変え、これを7μmol 使用した以外は実施例1と同様にしてバイオセンサーチップを作製した。
実施例1で使用した6-Hydroxy-1-hexanethiolを6-Hydroxy-1-hexanethiolと1-hexanethiolの5/5混合物に変えた以外は実施例1と同様にしてバイオセンサーチップを作製した。
実施例1で使用した6-Hydroxy-1-hexanethiolを6-methoxy-1-hexanethiol(Aldrich社製)に変えた以外は実施例1と同様にしてバイオセンサーチップを作製した。
実施例1で使用したC2-NTAを7μmol、6-Hydroxy-1-hexanethiolを3μmolに変えて使用した以外は実施例1と同様にしてバイオセンサーチップを作製した。
実施例1において6-Hydroxy-1-hexanethiolを使用しなかった以外は実施例1と同様にしてバイオセンサーチップを作製した。
上記で作製したチップの安定性を評価するため、センサーチップ表面に10μl/minの流速で10mmol/LのCuCl2溶液を50μl添加した後、100μmol/lのイミダゾール水溶液10μlで洗浄し、洗浄前後の変化をBiacore社製の表面プラズモン共鳴装置であるBiacore3000により測定した。
Claims (12)
- 基板上に、金属膜と、該金属膜上に配置したアルキル鎖からなる自己組織化膜とを備えたバイオセンサー用チップであって、
前記自己組織化膜上に、
リガンドと、
水酸基、カルボキシル基、アルコキシ基、メチル基、水素原子からなる群より選ばれる少なくとも1つの官能基とを有し、
前記金属膜上に配置した全アルキル鎖数に対する前記リガンドが結合しているアルキル鎖数の比が0.40〜0.99であることを特徴とするバイオセンサー用チップ。 - 前記金属膜上に配置した全アルキル鎖数に対するリガンドが結合しているアルキル鎖数の比が0.45〜0.85であることを特徴とする請求項1記載のバイオセンサー用チップ。
- 前記リガンドに金属イオンが固定されていることを特徴とする請求項1または2記載のバイオセンサー用チップ。
- 前記金属イオンに生理活性物質が固定されていることを特徴とする請求項3記載のバイオセンサー用チップ。
- 前記リガンドがニトリロトリ酢酸誘導体であることを特徴とする請求項1〜4いずれか1項記載のバイオセンサー用チップ。
- 前記自己組織化膜を形成するアルキル鎖が、−SH、−SS−、−SeH、−SeSe、−COSHからなる群から選ばれる少なくとも1つの官能基によって前記金属膜と結合していることを特徴とする請求項1〜5いずれか1項記載のバイオセンサー用チップ。
- 前記自己組織化膜が、下記一般式(1)で表される化合物および下記一般式(2)で表される化合物を含む混合物により形成されていることを特徴とする請求項1〜6いずれか1項記載のバイオセンサー用チップ。
X-Ra-Y (1)
X-Rb-Z (2)
(ここで、Xは金属膜と結合可能な基を、Ra、Rbは2価の有機連結基を、Yは水酸基、カルボキシル基、アルコキシ基、メチル基、水素原子からなる群より選ばれる官能基を、Zはリガンドを表す。) - 前記Raのアルキル鎖長が炭素数2〜8であることを特徴とする請求項7記載のバイオセンサー用チップ。
- 前記Rbのアルキル鎖長が炭素数4〜8であることを特徴とする請求項7または8記載のバイオセンサー用チップ。
- 前記Raと前記Rbとの炭素数の差が2〜6であることを特徴とする請求項9記載のバイオセンサー用チップ。
- 前記金属イオンがCu(II)イオンであることを特徴とする請求項3〜10いずれか1項記載のバイオセンサー用チップ。
- 前記金属膜が、金、銀、銅、白金、パラジウムおよびアルミニウムからなる群より選ばれる少なくとも1つの金属からなることを特徴とする請求項1〜11いずれか1項記載のバイオセンサー用チップ。
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JP2003075448A (ja) * | 2001-09-03 | 2003-03-12 | Fuji Photo Film Co Ltd | バイオセンサー用表面 |
JP2004150828A (ja) * | 2002-10-28 | 2004-05-27 | Toyobo Co Ltd | 蛋白質もしくはペプチドのKinetics解析方法および解析用基板 |
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2008
- 2008-07-24 JP JP2008190479A patent/JP2010019818A/ja active Pending
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