JP2009539377A5

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Publication number: JP2009539377A5
Application number: JP2009514392A
Authority: JP
Filing date: 2007-06-08
Publication date: 2010-07-29

Claims

哺乳類の塩味感覚に関与するポリペプチドをコードする遺伝子を同定する方法であって、
（ｉ）味細胞内で発現されるが、舌細胞内で発現されない遺伝子、および／または舌細胞内よりも実質的に高いレベルで味細胞内で発現される遺伝子を含む、一連の遺伝子を同定するステップ、
（ｉｉ）（ｉ）で同定された該遺伝子のうち、これらの細胞（Ｔ１ＲまたはＴ２Ｒ、ＴＲＰＭ５、およびＰＫＤ２Ｌ１／ＰＫＤ１Ｌ３）のうま味、甘味、苦味、あるいは酸味受容体またはマーカーを発現する味細胞内で発現されない一連の遺伝子を同定するステップ、並びに
（ｉｉｉ）（ｉｉ）に従って同定された１つ以上の遺伝子を機能的に発現させ、及び該遺伝子のうちどれがナトリウム反応性イオンチャネルあるいはナトリウム反応性受容体またはトランスポーターとして機能するかを判断し、それにより、この遺伝子または遺伝子群を、塩味を調節する推定遺伝子として同定するステップと、
を含む、上記方法。
前記ステップ（ｉ）は、非味覚組織から味覚組織を切離および精製するために、レーザーキャプチャーマイクロダイセクション（ｌａｓｅｒｃａｐｔｕｒｅｍｉｃｒｏｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ：ＬＣＤ）の使用を含む、請求項１に記載の方法。
前記ステップ（ｉ）は、味細胞および舌細胞からの遺伝子のＲＮＡ増幅を含み、並びに前記増幅された遺伝子は、前記味覚および舌組織が得られる特定の哺乳類に特異的な遺伝子の試料を含有する遺伝子チップに対してスクリーニングされる、請求項１に記載の方法。
前記味覚組織は、ヒトまたは齧歯類源に由来する、請求項１に記載の方法。
前記遺伝子チップは、一連の注釈付けされた哺乳類遺伝子を含む、請求項１に記載の方法。
前記ステップ（ｉ）は、前記ヒトまたは哺乳類ゲノム内の各イオンチャネルのためのプライマーを用いるハイスループットＰＣＲを含む、請求項１に記載の方法。
前記ステップ（ｉｉ）が、味細胞内対舌細胞内での発現レベルを判断するために、ステップ（ｉ）で同定された前記遺伝子に対して特異的なアンチセンスＲＮＡプローブを用いるｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーションによって達成される、請求項１に記載の方法。
前記ステップ（ｉｉ）が、ステップ（ｉ）で同定された遺伝子または遺伝子群によりコードされたタンパク質に特異的な標識抗体を用いる免疫化学的検出の使用によって達成される、請求項１に記載の方法。
前記同定された遺伝子または遺伝子群は、ＴＲＰＭ５またはＰＫＤ２Ｌ１／ＰＫＤ１Ｌ３を発現しない細胞の特徴を示している、請求項１に記載の方法。
ＴＲＰＭ５またはＰＫＤ２Ｌ１／ＰＫＤ１Ｌ３を発現しない細胞を選択する方法であって、細胞が、請求項１に記載の方法に従って同定された遺伝子を発現するかどうかを判断するステップを含み、前記遺伝子を発現する細胞は、ＴＲＰＭ５またはＰＫＤ２Ｌ１／ＰＫＤ１Ｌ３を発現する可能性が低い、上記方法。
前記遺伝子は、表１〜３のいずれか１つに含有される遺伝子から選択される、請求項１０に記載の方法。
前記遺伝子は、ナトリウム反応性イオンチャネルとして機能し、さらに、チャネル集団のごく一部は開口し、及び静止ナトリウムを通過させる、請求項１に記載の方法。
哺乳類の塩味感覚に関与するポリペプチドをコードする遺伝子を同定する方法であって、
（ｉ）味細胞内で発現されるが、舌細胞内で発現されない遺伝子および／または舌細胞内よりも実質的に高いレベルで味細胞内で発現される遺伝子を含む一連の遺伝子を同定するステップ、
（ｉｉ）（ｉ）で同定された該遺伝子のうち、これらの細胞（Ｔ１ＲもしくはＴ２ＲまたはＴＲＰＭ５、またはＰＫＤ２Ｌ１／ＰＫＤ１Ｌ３）のうま味、甘味、苦味、または酸味受容体またはマーカーを発現する味細胞内で発現されない一連の遺伝子を同定するステップ、並びに
（ｉｉｉ）（ｉｉ）に従って同定された１つ以上の遺伝子を発現させる一次ニューロンにおいて、該遺伝子のうちどれがナトリウム反応性イオンチャネルまたはナトリウム反応性受容体もしくはトランスポーターとして機能するかを判断し、それにより、塩味を調節する推定遺伝子としてこの遺伝子または遺伝子群を同定するステップと、
を含む、上記方法。
前記遺伝子は、表１、２、もしくは３のうちの１つに記載された遺伝子、またはオルソログもしくは対立遺伝子変異体、あるいは前記遺伝子もしくはそのオルソログによってコードされたタンパク質と少なくとも９０％同一であるタンパク質をコードする変異体を含む、請求項１３に記載の方法。
ヒトの塩味を調節するための潜在的な生体内用途を有する化合物を同定するためのアッセイであって、
（ｉ）請求項１〜１４のいずれか１項に従って同定されたイオンチャネル、受容体、またはトランスポーターをコードする遺伝子、またはそれによりコードされるポリペプチドと少なくとも９０％の配列同一性を有するポリペプチドをコードする遺伝子を発現する細胞を、少なくとも１つの推定エンハンサー化合物と接触させるステップ、
（ｉｉ）該推定エンハンサーの存在および非存在下で、ナトリウムコンダクタンス、受容体活性またはナトリウム輸送をアッセイするステップ、並びに
（ｉｉｉ）ナトリウムコンダクタンス、該受容体の活性、またはナトリウム輸送を増加させるかどうかに基づいて、該化合物を潜在的な塩味エンハンサーとして同定するステップと、
を含む、上記アッセイ。
前記遺伝子は、イオンチャネルをコードする、請求項１５に記載の方法。
前記遺伝子は、ＧＰＣＲをコードする、請求項１５に記載の方法。
前記遺伝子は、ヒトまたは哺乳類遺伝子である、請求項１６または１７に記載の方法。
ヒト味覚テストにおいて前記化合物またはその誘導体の効果をテストするステップをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
推定塩味に影響を与える遺伝子は、両生類卵母細胞内又は哺乳類細胞内で発現される、請求項１５に記載の方法。
ヒト甘味、苦味またはうま味を調節するための潜在的な生体内用途を有する化合物を同定するためのアッセイであって、
（ｉ）ＴＲＰＭ５味細胞内に存在する、表１〜３に記載の遺伝子を発現する細胞を、少なくとも１つの推定エンハンサー化合物と接触させるステップ、
（ｉｉ）該推定エンハンサーの存在および非存在下で、ナトリウムコンダクタンス、受容体活性またはナトリウム輸送をアッセイするステップ、並びに
（ｉｉｉ）ナトリウムコンダクタンス、該受容体の活性またはナトリウム輸送を増加させるかどうかに基づいて、該化合物を甘味、苦味またはうま味に対する潜在的エンハンサーとして同定するステップと、
を含む、上記アッセイ。
表１、２、または３に含有される少なくとも１つの遺伝子、そのオルソログ、あるいは該遺伝子またはそのオルソログに少なくとも９０％の同一性であるタンパク質をコードする遺伝子の発現または発現しない場合に基づいて、所望される味細胞型または系譜を含む混合細胞集団または細胞懸濁液内に含有される少なくとも１つの所望される味細胞サブタイプまたは系譜を単離、精製、濃縮、および／または標識する細胞単離、精製、濃縮、または標識技術において、表１、表２または表３に含有される少なくとも１つの遺伝子またはそのオルソログ、あるいはそれらと少なくとも９０％の同一性のタンパク質をコードする変異体を使用する方法。