JP2009514523A - 耐病性キュウリ - Google Patents
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Abstract
【解決手段】キュウリウドンコ病耐性と同時にキュウリクロステロウイルス耐性を有するキュウリ。かかる植物の好ましい実施形態では、クロステロウイルス耐性(QTL−1)に関与する1つ以上のゲノム領域、並びにウドンコ病耐性(pm−h及び/又はpm−l)に関与する1つ以上のゲノム領域が単一の染色体上に存在する。かかる植物のより好ましい実施形態では、pm−h及びpm−lの両方が存在し、かつQTL−1がpm−h及びpm−lの間に位置する。
【選択図】なし
Description
− 配列番号1の単一ヌクレオチド多形マーカー 39T→G、
− 配列番号2の単一ヌクレオチド多形マーカー 29G→A、
− 配列番号3の単一ヌクレオチド多形マーカー 193C→T、
− 配列番号4の位置221における挿入突然変異5’−AATTT−3’、並びに−マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251、E23/M38−M001、E23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200からなる群から選択される少なくとも1つのマーカーに連結している。
a)キュウリからゲノムDNAのサンプルを得るステップと(当該サンプルは充分な長さのゲノムDNA断片を含んでなる)、
b)少なくとも1つの第1のQTL、又はそれに関連するQTL−1、pm−l及びpm−hからなる群から選抜される分子マーカーを含んでなる断片を選抜するための精製反応を実施するステップと、
c)前記選抜された核酸断片の増幅反応を実施するステップであって、少なくとも1つの第2のQTL、又はそれに関連するQTL−1、pm−l及びpm−hからなる群から選抜される分子マーカーを含んでなる断片を検出するステップと、
d)ステップc)の反応生成物中の、予測された長さ又は予測された核酸配列を有する増幅されたDNA断片を検出するステップ。
a)キュウリクロステロウイルス耐性を付与する染色体領域を含む第1のキュウリを選抜するステップであって、前記選抜が、前記植物のゲノムにおいて、マーカーE16/M50−244、E16/M50−188及びE11/M48−251により表される、キュウリクロステロウイルス耐性を付与するQTLに連結している少なくとも1つのマーカーの存在を検出することにより行われるステップと、
b)キュウリウドンコ病耐性を付与する少なくとも1つの染色体領域を含む第2のキュウリを選抜するステップであって、前記選抜が、前記植物のゲノムにおいて、
− 配列番号1の単一ヌクレオチド多形マーカー 39T→G、
− 配列番号2の単一ヌクレオチド多形マーカー 29G→A、並びに
− マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251及びE23/M38−M001により表される、第1のキュウリウドンコ病耐性を付与するQTLと連結している、少なくとも1つのマーカーの存在を検出することによって行われるステップか、又は、前記選抜が、前記植物のゲノムにおいて、
− 配列番号3の単一ヌクレオチド多形マーカー 193C→T、
− 配列番号4の位置221の挿入突然変異5’−AATTT−3’、並びに
− マーカーE23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200により表される、第2のキュウリウドンコ病耐性を付与するQTLと連結している、少なくとも1つのマーカーの存在を検出することによって行われるステップによって行われるステップと、
c)ステップa)及びステップb)から得られた前記植物を交配してF1種子を得るステップと、
d)F1種子をF1植物に成長させ、交配又は自家交配することによって前記F1植物から更なる子孫を生じさせるステップと、
e)前記更なる子孫植物から、ステップa)において定義したキュウリクロステロウイルス耐性を付与するQTLに連結している少なくとも1つのマーカーと、ステップb)において定義したキュウリウドンコ病耐性を付与するQTLに連結している少なくとも1つのマーカーを含んでなる植物を選抜するステップ。
f)前記第1若しくは第2のキュウリウドンコ病耐性を付与するQTLs(すなわち前記第2のキュウリに存在しないQTL)のうちのもう1つを有する第3のキュウリを選抜するステップと、
g)ステップe)で得られたF1植物と、前記第3のキュウリとを交配させて、更なる子孫植物を得るステップと、
h)当該子孫植物から、ステップa)で定義されるキュウリクロステロウイルス耐性を付与するQTLと、ステップb)で定義されるキュウリウドンコ病耐性を付与する両方のQTLsを含む植物を選抜するステップ。
−前記植物のゲノム中において、
配列番号1のSNPマーカー 39T→G、
配列番号2のSNPマーカー 29G→A、並びに
マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251及びE23/M38−M001で表される第1のキュウリウドンコ病耐性付与QTLに連結する少なくとも1つのマーカーの存在を検出するステップと、
−前記植物のゲノム中において、
配列番号3のSNPマーカー 193C→T、
配列番号4の位置221における挿入突然変異 5’−AATTT−3’、並びに
マーカーE23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200で表される第2のキュウリウドンコ病耐性付与QTLに連結する少なくとも1つのマーカーの存在を検出するステップ。
a)本発明の方法を実施して、キュウリクロステロウイルス及びキュウリウドンコ病に対する耐性を示す第1のキュウリを選抜するステップと、
b)前記植物を同系育種して、前記QTLsのホモ接合植物株を得るステップと、
c)ステップa)及びステップb)から得た前記植物を交配してF1種子を得るステップと、
d)前記F1種子をF1植物に成長させるステップ。
本明細書で使用される「キュウリ」という用語には、一般にCucumberと呼ばれるプラント、アメリカガーキン、Cassabanana、Cuke、Gherkin、Hothouseキュウリ、Lemonキュウリ、Manderaキュウリ、Picklingキュウリ、Serpentキュウリ、Slicingキュウリ、Snakeキュウリ及び西インド諸島のガーキンなどが包含されるがこれらに限定されないキュウリ植物又はその一部を意味する。
(a)同一の核酸塩基が両方の配列において、存在する位置の数を勘定してマッチする位置の数を算出し、
(b)比較のウインドウの位置の総数で、上記のマッチする位置の数を除算し、
(c)結果に100を乗算して配列相同性パーセンテージとして示すことにより行われる。比較配列の最適配列は、周知のアルゴリズムを用いたコンピュータ化された実施態様で行ってもよく、又は視覚による検査によって、実施してもよい。直ちに利用できる配列比較及び並列配列アルゴリズムとしては、Basic Local Alignment Search Tool(BLAST)(Altschul et al.,1990、 Altschul et al,1997)、ClustalWプログラム(両方ともインターネットで利用可能)が挙げられる。他の適切なプログラムとしては、GAP、BestFit、PlotSimilarity及びFASTA(ウィスコンシンGenetics Software Package (Genetics Computer Group (GCG),Madison,WI,USA) (Devereux et al,1984))が挙げられるが、これらに限定されない。
分子マーカーを用いて、核酸配列の相違を視覚化してもよい。この視覚化は、制限酵素(RFLP)による切断後のDNA−DNAハイブリダイゼーション法、及び/又はポリメラーゼ連鎖反応を使用する方法(例えばSTS、マイクロサテライト、AFLP)において可能である。2つの親の遺伝子型の全ての違いは、これらの親の遺伝子型の交配に基づくマッピング集団(例えばBC1、F2、図2を参照)において分離している。異なるマーカーの分離を比較し、組換え頻度を算出してもよい。通常、異なる染色体上の分子マーカーの組換え頻度は50%である。同じ染色体に存在する分子マーカー間の組換え頻度は、マーカー間の距離に依存する。低い組換え頻度は、染色体上におけるマーカー間の低い遺伝的距離に対応する。全ての組換え頻度を比較することにより、染色体上の分子マーカーで最も論理的なオーダーが得られる。この最も論理的なオーダーは、連鎖地図(パターソン、1996)で表すことができる。耐病性の強化(例えば病原体による感染後の疾患を得ることの低下する発生率、及び/又は病原体との接触後の病変成長率の低下)と関連する連鎖地図上の隣接するマーカー群は、その疾患耐性に関連するQTLの位置をピンポイントで示すものである。
本発明の別の態様では、少なくともQTL−1を含んでなる核酸(好ましくはDNA)配列、並びにpm−l及びpm−h又はその耐性付与部分のうちの1つ(好ましくは両方)を、本発明の二重耐性キュウリの育種に用いてもよい。本発明のこの態様では、本明細書で定義されるQTLs又はその耐性付与部分の使用により、二重耐性キュウリを作製し、当該使用においては、適切な宿主植物への前記QTLを含む核酸配列の導入を含んでなる。前述のように、前記核酸配列は、適切なクロステロウイルス及び/又はウドンコ病耐性ドナー植物に由来してもよい。QTL−1として本願明細書に同定されるクロステロウイルス耐性遺伝子座の適切な供給源として、キュウリランドレース Khira(PI250147)(パキスタン産)が挙げられる。それらの商業的な供給源、並びにその他の多くのPM耐性キュウリ園芸品種は、例えばhttp://cuke.hort.ncsu.edu/cucurbit/cuke/cukemain.html.に列挙されている。PM耐性植物は、例えばT.C.Wehner,cucumber gene curator for the Cucurbit Genetics Cooperative(CGC),Department of Horticultural Science,North Carolina State University,Ealeigh,NC27695−7609 U.S.A.から得られてもよい。本願明細書に記載する両方のpm遺伝子座の供給源としては、NPI(PI 200815を有する交雑Natsufushinari(PI 279465)から調製)が挙げられる。それらは例えば、Centre for Genetic Resources,the Netherlands(CGN),Wageningen,The Netherlandsから得てもよい。ECP/GR Cucurbits Database hosted by the Center for the Conservation and Breeding of Agrodiversity(COMAV) in Valencia,Spain、又はGermplasm Resources Information Network(GRIN) hosted by the USDA’s National Germplasm Resources Laboratory,Beltsville,Marylandなどの幾つかの植物データベースを用いて、登録株の検索を行ってもよい。本発明によるこれらの材料の同定方法において記載したように、クロステロウイルス又はウドンコ病耐性を示す他のキュウリを耐性ドナー植物として利用してもよい。
クロステロウイルス及びウドンコ病耐性キュウリを作製するための別の実施形態では、プロトプラスト融合を用いて、ドナー植物から宿主植物への核酸導入を行ってもよい。プロトプラスト融合とは、2つ以上のプロトプラスト(細胞壁を酵素処理によって除去した細胞)間の誘発若しくは自然的な結合(例えば体細胞ハイブリダイゼーション)により、単一の二核若しくは多核細胞を作製する技術のことを指す。融合細胞(性質により交配できない植物種から得てもよい)を組織培養して、望ましい特徴の組合せを示すハイブリッド植物を形成できる。より詳しくは、第1のプロトプラストを、クロステロウイルス又はウドンコ病感染に対する耐性を示すにキュウリ又は他の植物系列から得てもよい。第2のプロトプラストは、例えば、病害抵抗性、虫害抵抗性、有益な果物特徴など(これらに限定されない)を有する第2のキュウリ又は他の植物変異体(好ましくは商業的に有益な特徴を有するキュウリ系列)から調製してもよい。次にプロトプラストを、従来公知のプロトプラスト融合法を用いて融合させる。
(a)1つ以上の所望の特徴を含む他のキュウリと、近交系キュウリ親を交配して、F1子孫植物を作製するステップであって、当該所望の特徴が、クロステロウイルス耐性及びウドンコ病耐性からなる群から選択されるステップと、
(b)好ましくは本明細書で定義される分子マーカーを使用して、所望の特徴を有する前記F1子孫植物を選抜するステップと、
(c)前記近交系キュウリ親株と、前記選択された子孫との戻し交配して戻し交配植物を得るステップと、
(d)戻し交配子孫植物を、所望の特徴及び前記近交系キュウリ親株の形態的、生理的な特徴に関して選択するステップであって、前記選抜が、ゲノムDNAを単離し、上記DNAを、QTL−1、pm−l及び/又はpm−hの少なくとも1つの分子マーカー(好ましくは本願明細書に記載のもの)の存在に関して試験するステップと、
(e)ステップ(c)及び(d)を2回以上反復し、第3世代若しくはそれ以上の戻し交配子孫植物を作製するステップと、
(f)選抜した戻し交配子孫を任意に近交し、ホモ接合の植物を同定するステップと、
(g)最低1つの前記戻し交配子孫又は近交系植物と、他の近交系のキュウリ親株(好ましくはpm−hypo耐性、すなわちホモ接合のpm−h)とを交配し、ハイブリッドキュウリ変異体(同じ環境で成長させたとき、ハイブリッドキュウリ変異体の所望の特徴、並びに形態的及び生理的特徴の全てを有する)を得るステップを含んでなる。
植物育種の目的は、単一の変異体又はハイブリッド中で様々な望ましい特徴を組み合わせることである。商品作物の場合、これらの特徴としては、病気及び昆虫に対する耐性、熱及びかんばつに対する体制、成熟期間の短縮、収率の上昇及び農産物としての優れた品質などが挙げられる。植物特徴(例えば発芽及び成長、成長率、成熟及び草高の均一性など)が重要となることもある。
(1)第一の育種交配のために、様々な生殖質プールから植物を選抜するステップと、
(2)繁殖交配から選抜された植物を数世代にわたり近交し、個々に繁殖した、非常に均一な一連の近交系を作製するステップと、
(3)ハイブリッド子孫(F1)の作製に無関係な近交系と、選抜された近交系とを交配させるステップ。同系交配を充分行った後、連続したハイブリッド世代は単に、育種された近交系の種子を増加させる目的でのみ用いる。好ましくは、近交系は、その遺伝子座の約95%以上でホモ接合性対立遺伝子を含まなければならない。
クロステロウイルス及びウドンコ病耐性キュウリを準備するステップと、
前記クロステロウイルス及びウドンコ病耐性植物を他のキュウリと交配するステップと、
前記交配から得られる種子を収集するステップを含んでなる。更にそれを栽培し、クロステロウイルス及びウドンコ病耐性キュウリを作製する。
本発明のクロステロウイルス及びウドンコ病耐性キュウリを準備するステップと、
前記クロステロウイルス及びウドンコ病耐性植物とキュウリとを交配するステップと、
前記交配から生じる種子を回収し、前記種を植物体に成長させるステップと、
本願明細書に記載のいずれかの方法で、クロステロウイルス及びウドンコ病耐性植物を選抜するステップと、
充分な世代数にわたり、選択された植物を自家授粉して繁殖させ、クロステロウイルス及びウドンコ病耐性を付与する対立遺伝子が安定した植物を得るステップと、
そのように得られた植物を、望ましい表現型を有するキュウリと十分な世代数にわたり戻し交配して、クロステロウイルス及びウドンコ病耐性、並びに望ましい表現型を有するキュウリを得るステップと、
最後の戻し交配から生じる植物から作製される種子を回収するステップ。上記の種子を栽培し、クロステロウイルス及びウドンコ病耐性を有するキュウリを作製する。
Claims (23)
- キュウリクロステロウイルス及びキュウリウドンコ病に対する耐性を示す植物であって、前記植物がキュウリであり、前記植物が単一の染色体上に、クロステロウイルス耐性を付与する少なくとも1つの染色体領域と、ウドンコ病耐性を付与する少なくとも1つの染色体領域を含んでなり、クロステロウイルス耐性を付与する少なくとも1つの前記領域が、E16/M50−244、E16/M50−188及びE11/M48−251からなる群から選抜される少なくとも1つのマーカーと連結し、ウドンコ病耐性を付与する少なくとも1つの前記領域が、
− 配列番号1の単一ヌクレオチド多形マーカー 39T→G、
− 配列番号2の単一ヌクレオチド多形マーカー 29G→A、
− 配列番号3の単一ヌクレオチド多形マーカー 193C→T、
− 配列番号4の位置221における挿入突然変異5’−AATTT−3’、並びに−マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251、E23/M38−M001、E23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200からなる群から選択される少なくとも1つのマーカーに連結している植物。 - 請求項1記載の植物であって、前記植物が、ウドンコ病耐性を付与する少なくとも2つの染色体領域を含んでなり、
前記少なくとも2つの領域のうちの第1が、
− 配列番号1の単一ヌクレオチド多形マーカー 39T→G、
− 配列番号2の単一ヌクレオチド多形マーカー 29G→A、並びに
− マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251及びE23/M38−M001からなる群から選択される少なくとも1つのマーカーと連結し、
前記少なくとも2つの領域のうちの第2が、
− 配列番号3の単一ヌクレオチド多形マーカー 193C→T、
− 配列番号4の位置221の挿入突然変異5’−AATTT−3’、並びに
マーカーE23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200からなる群から選択される少なくとも1つのマーカーに連結している植物。 - 請求項2記載の植物であって、クロステロウイルス耐性を付与する少なくとも1つの前記領域が、請求項2記載のウドンコ病耐性を付与する少なくとも2つの前記領域の間に位置する植物。
- 請求項1から3のいずれか1項記載のキュウリの部分。
- 請求項4記載の部分であって、花粉、胚珠、葉、胚、根、根端、葯、花、果実、茎、芽、枝、根茎、種子、プロトプラスト及びカルスから選択される、前記部分。
- 農産物として望ましい特徴を有する第2のキュウリ又は他の種類の植物(好ましくはキュウリ株)と、請求項1から3のいずれか1項記載のキュウリを交配させることにより得られるF1種子であって、前記種子が、マーカーE16/M50−244、E16/M50−188及びE11/M48−251からなる群から選抜されるクロステロウイルス耐性に関連する少なくとも1つのマーカーと、ウドンコ病耐性に関する、
− 配列番号1の単一ヌクレオチド多形マーカー 39T→G、
− 配列番号2の単一ヌクレオチド多形マーカー 29G→A、
− 配列番号3の単一ヌクレオチド多形マーカー 193C→T、
− 配列番号4の位置221における挿入突然変異5’−AATTT−3’、並びに
− マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251、E23/M38−M001、E23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200からなる群から選択される少なくとも1つのマーカーとを含んでなる種子。 - 請求項6記載の種子であって、前記第2のキュウリがクロステロウイルスに感受性であり、少なくとも1つの前記ウドンコ病耐性マーカーがホモ接合的に存在する種子。
- 前記第2のキュウリが近交系の植物である、請求項6又は7記載の種子。
- 請求項4から8のいずれか1項記載の種子を成長させることにより得られるハイブリッド植物。
- 請求項9記載のハイブリッド植物の部分。
- 請求項10記載の部分であって、前記部分が花粉、胚珠、葉、胚、根、根端、葯、花、果実、茎、芽、枝、根茎、種子、プロトプラスト及びカルスから選抜される部分。
- キュウリクロステロウイルス及びキュウリウドンコ病に対して抵抗性の植物の選抜方法であって、前記植物がキュウリであり、前記方法がマーカー検出アッセイを実施することを含んでなり、前記アッセイが、
a)前記植物のゲノムにおいて、マーカーE16/M50−244、E16/M50−188及びE11/M48−251からなる群から選抜されるクロステロウイルス耐性に関連する少なくとも1つのマーカーの存在を検出するステップと、
b)前記植物のゲノムにおいて、
− 配列番号1の単一ヌクレオチド多形マーカー 39T→G、
− 配列番号2の単一ヌクレオチド多形マーカー 29G→A、
− 配列番号3の単一ヌクレオチド多形マーカー 193C→T、
− 配列番号4の位置221における挿入突然変異5’−AATTT−3’、並びに
− マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251、E23/M38−M001、E23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200からなる群から選択される、ウドンコ病耐性に関連する少なくとも1つのマーカーの存在を検出するステップを含んでなる方法。 - 請求項12記載の方法であって、
−前記植物のゲノム中において、
配列番号1のSNPマーカー 39T→G、
配列番号2のSNPマーカー 29G→A、並びに
マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251及びE23/M38−M001で表される第1のキュウリウドンコ病耐性付与QTLに連結する少なくとも1つのマーカーの存在を検出するステップと、
−前記植物のゲノム中において、
配列番号3のSNPマーカー 193C→T、
配列番号4の位置221における挿入突然変異 5’−AATTT−3’、並びに
マーカーE23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200で表される第2のキュウリウドンコ病耐性付与QTLに連結する少なくとも1つのマーカーの存在を検出するステップを含んでなる方法。 - 請求項12又は13記載の方法であって、前記方法が、
a)前記植物からゲノムDNAのサンプルを得るステップと、
b)前記植物のゲノムDNAのサンプルにおいて、クロステロウイルス耐性に関連する少なくとも1つの前記マーカーと、ウドンコ病耐性に連結する少なくとも1つの前記マーカーを検出するステップを含んでなる方法。 - 請求項14記載の方法であって、前記ステップb)が、前記マーカーを定義する少なくとも1つのプライマーセット、又は前記マーカーを定義する核酸配列と実質的に相補的である少なくとも1つの核酸プローブの使用を含んでなり、前記核酸プローブが1つ以上の前記マーカーを定義する核酸配列と、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で特異的にハイブリダイズする塩基配列を有する方法。
- 請求項12から15のいずれか1項記載の方法であって、前記マーカーが、例えば交配試験において、カップリングしないマーカーの場合と比較しマーカー同士の分離が減少することにより、同一の染色体上において存在し、カップリング段階であることが示される方法。
- 請求項12から16のいずれか1項記載の方法により選抜される植物。
- キュウリクロステロウイルス及びキュウリウドンコ病に対する耐性を示すキュウリの作製方法であって、
a)キュウリクロステロウイルス耐性を付与する染色体領域を含む第1のキュウリを選抜するステップであって、前記選抜が、前記植物のゲノムにおいて、マーカーE16/M50−244、E16/M50−188及びE11/M48−251により表される、キュウリクロステロウイルス耐性を付与するQTLに連結している少なくとも1つのマーカーの存在を検出することにより行われるステップと、
b)キュウリウドンコ病耐性を付与する少なくとも1つの染色体領域を含む第2のキュウリを選抜するステップであって、前記選抜が、前記植物のゲノムにおいて、
− 配列番号1の単一ヌクレオチド多形マーカー 39T→G、
− 配列番号2の単一ヌクレオチド多形マーカー 29G→A、並びに
− マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251及びE23/M38−M001により表される、第1のキュウリウドンコ病耐性を付与するQTLと連結している、少なくとも1つのマーカーの存在を検出することによって行われるステップか、
又は、前記選抜が、前記植物のゲノムにおいて、
− 配列番号3の単一ヌクレオチド多形マーカー 193C→T、
− 配列番号4の位置221の挿入突然変異5’−AATTT−3’、並びに
− マーカーE23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200により表される、第2のキュウリウドンコ病耐性を付与するQTLと連結している、少なくとも1つのマーカーの存在を検出することによって行われるステップによって行われるステップと、
c)ステップa)及びステップb)から得られた前記植物を交配してF1種子を得るステップと、
d)F1種子をF1植物に成長させ、交配又は自家交配することによって前記F1植物から更なる子孫を生じさせるステップと、
e)前記更なる子孫植物から、ステップa)において定義したキュウリクロステロウイルス耐性を付与するQTLに連結している少なくとも1つのマーカーと、ステップb)において定義したキュウリウドンコ病耐性を付与するQTLに連結している少なくとも1つのマーカーを含んでなる植物を選抜するステップを含んでなる方法。 - 請求項18記載の方法であって、ステップb)の第2のキュウリを選抜するステップが、前記第1若しくは第2のキュウリウドンコ病耐性を付与するQTLsのうちの1つのみを有する第2のキュウリを選抜することを含んでなり、
更に、
f)前記第1若しくは第2のキュウリウドンコ病耐性を付与するQTLs(すなわち前記第2のキュウリに存在しないQTL)のうちのもう1つを有する第3のキュウリを選抜するステップと、
g)ステップe)で得られたF1植物と、前記第3のキュウリとを交配させて、更なる子孫植物を得るステップと、
h)当該子孫植物から、ステップa)で定義されるキュウリクロステロウイルス耐性を付与するQTLと、ステップb)で定義されるキュウリウドンコ病耐性を付与する両方のQTLsを含む植物を選抜するステップを含んでなる方法。 - 請求項17から19のいずれか1項記載の方法であって、ステップb)、e)、f)又はh)で定義されるキュウリウドンコ病耐性を付与する染色体領域を含むキュウリを選抜するステップが、
−前記植物のゲノム中において、
配列番号1のSNPマーカー 39T→G、
配列番号2のSNPマーカー 29G→A、並びに
マーカーE16/M50−F−194、E11/M48−F−251及びE23/M38−M001で表される第1のキュウリウドンコ病耐性付与QTLに連結する少なくとも1つのマーカーの存在を検出するステップと、
−前記植物のゲノム中において、
配列番号3のSNPマーカー 193C→T、
配列番号4の位置221における挿入突然変異 5’−AATTT−3’、並びに
マーカーE23/M40−M003、E24/M46−M002、E24/M46−M003、E12/M91−M003、E26/M43−M003、E14/M59−F−134及びE14/M59−F−200で表される第2のキュウリウドンコ病耐性付与QTLに連結する少なくとも1つのマーカーの存在を検出するステップを含んでなる方法。 - 請求項17から20のいずれか1項記載の方法であって、ステップa)、b)、e)、f)又はh)のうちの少なくとも1つは、前記植物から得たゲノムDNAのサンプルを提供するステップと、前記ゲノムDNAのサンプル中から前記少なくとも1つのマーカーを検出するステップを含んでなる方法。
- キュウリクロステロウイルス及びキュウリウドンコ病に対する耐性を示すキュウリを作製する方法であって、
a)請求項12から16のいずれか1項記載の方法を実施して、キュウリクロステロウイルス及びキュウリウドンコ病に対する耐性を示す第1のキュウリを選抜するステップと、
b)前記植物を同系育種して、前記QTLsのホモ接合植物株を得るステップと、
c)ステップa)及びステップb)から得た前記植物を交配してF1種子を得るステップと、
d)前記F1種子をF1植物に成長させるステップを含んでなる方法。 - 請求項18から22のいずれか1項記載の方法で得られる植物又はその部分。
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