JP2009509544A5 - - Google Patents
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Claims (96)
- PolIII/PolII融合プロモーターを含む核酸構築物であって、
RNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結された、PolIIプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記構築物由来の発現の特異的調節を提供する、核酸構築物。 - 前記シス活性調節領域が細胞特異的調節を提供する、請求項1に記載の構築物。
- 前記シス活性調節領域が組織特異的調節を提供する、請求項1に記載の構築物。
- 前記シス活性調節領域が細胞周期特異的調節を提供する、請求項1に記載の構築物。
- 前記シス活性調節領域がインビボで腫瘍特異的調節を提供する、請求項1に記載の構築物。
- 前記シス活性調節領域がインビボで放射線誘導発現を提供する、請求項1に記載の構築物。
- 前記シス活性調節領域がインビボでエストロゲン誘導発現を提供する、請求項1に記載の構築物。
- 前記構築物が、前記融合プロモーターに作動可能に連結されたshRNAをコードする配列をさらに含む、請求項1に記載の構築物。
- 前記構築物が、前記融合プロモーターに作動可能に連結されたsiRNAの2つの鎖をコードする配列をさらに含む、請求項1に記載の構築物。
- 前記基本プロモーター領域がPolIIIプロモーターに由来する、請求項1に記載の構築物。
- 前記PolIII基本プロモーターがU6基本プロモーターである、請求項10に記載の構築物。
- 前記PolIII基本プロモーターがH1基本プロモーターである、請求項10に記載の構築物。
- 前記PolIII基本プロモーターがtRNA基本プロモーターである、請求項10に記載の構築物。
- 前記PolIII基本プロモーターが変異PolII基本プロモーターであり、前記変異PolII基本プロモーターが、PolIIの代わりにPolIIIに優先的に結合する、請求項10に記載の構築物。
- 前記PolIIシス活性調節領域が、CMV初期中間調節領域を含む、請求項1に記載の構築物。
- 前記PolIIシス活性調節領域が、完全なPolII調節領域から基本プロモーターを欠いたものを含む、請求項1に記載の構築物。
- 疾患関連遺伝子のmRNAをターゲティングするRNAi作用因子をコードする配列をさらに含む、請求項1に記載の構築物。
- PolIII/PolII融合プロモーターを含むベクターであって、
RNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にするベクター。 - 前記融合プロモーターに作動可能に連結されたRNAi作用因子をコードする領域をさらに含む、請求項18に記載のベクター。
- 前記RNAi作用因子がsiRNAである、請求項19に記載のベクター。
- 前記RNAi作用因子がshRNAである、請求項19に記載のベクター。
- 前記ベクターがプラスミドである、請求項18に記載のベクター。
- 前記ベクターがウイルスベースのベクターである、請求項18に記載のベクター。
- 前記ベクターが複製欠損性を示す、請求項18に記載のベクター。
- 前記ベクターが複製能力を示す、請求項18に記載のベクター。
- コード配列に作動可能に連結されたPolIII/PolII融合プロモーターを含む細胞であって、前記融合プロモーターが、
RNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする細胞。 - 前記コード配列がRNAi作用因子をコードする、請求項26に記載の細胞。
- 前記RNAi作用因子がsiRNAである、請求項27に記載の細胞。
- 前記RNAi作用因子がshRNAである、請求項27に記載の細胞。
- 前記融合プロモーターおよび前記RNAi作用因子が1つのベクター中に存在する、請求項27に記載の細胞。
- 前記ベクターがプラスミドである、請求項30に記載の細胞。
- 前記ベクターがウイルスベクターである、請求項30に記載の細胞。
- 前記細胞が細胞培養物中に存在する、請求項26に記載の細胞。
- 前記細胞が動物細胞である、請求項33に記載の細胞。
- 前記動物細胞がヒト細胞である、請求項33に記載の細胞。
- 前記細胞が昆虫細胞である、請求項33に記載の細胞。
- 前記細胞が植物細胞である、請求項33に記載の細胞。
- 前記細胞が動物中に存在する、請求項26に記載の細胞。
- 前記動物がヒトである、請求項38に記載の細胞。
- 前記動物がウシである、請求項38に記載の細胞。
- 前記動物がブタである、請求項38に記載の細胞。
- 前記動物がヒツジである、請求項38に記載の細胞。
- 前記動物がネコである、請求項38に記載の細胞。
- 前記動物がイヌである、請求項38に記載の細胞。
- 前記動物がトリである、請求項38に記載の細胞。
- 前記細胞が植物中に存在する、請求項38に記載の細胞。
- 前記細胞が真菌中に存在する、請求項38に記載の細胞。
- コード配列に作動可能に連結されたPolIII/PolII融合プロモーターを含む遺伝子構築物を含む複数の細胞を含む非ヒトトランスジェニック生物であって、前記PolIII/PolII融合プロモーターが、
RNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする非ヒトトランスジェニック生物。 - 前記コード配列がRNAi作用因子をコードする、請求項48に記載の生物。
- 前記生物が動物である、請求項48に記載の生物。
- 前記生物が植物である、請求項48に記載の生物。
- 請求項1〜請求項17のいずれか1項に記載の核酸構築物、および
使用説明書
を含むキット。 - 前記核酸構築物が単回使用形態で包装されている、請求項52に記載のキット。
- 前記核酸構築物がベクター中に存在する、請求項52に記載のキット。
- 前記核酸構築物が、前記PolIII/PolII融合プロモーターに作動可能に連結されたコード配列をさらに含む、請求項52に記載のキット。
- 請求項1〜請求項17のいずれか1項に記載の核酸構築物であって、前記核酸構築物が、前記融合プロモーターに作動可能に連結されたshRNAまたはsiRNA配列をさらに含む核酸構築物、および
薬学的に許容可能な担体または賦形剤
を含む薬学的組成物。 - 前記組成物を注射用組成物として処方する、請求項56に記載の薬学的組成物。
- 前記組成物を局所投与のために処方する、請求項56に記載の薬学的組成物。
- 前記組成物をリポソーム組成物として処方する、請求項56に記載の薬学的組成物。
- 前記組成物がウイルスベクターを含む、請求項56に記載の薬学的組成物。
- 遺伝子構築物の作製方法であって、
RNAi作用因子をコードする核酸配列をPolIII/PolII融合プロモーターに作動可能に連結させる工程であって、前記プロモーターが、前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域に作動可能に連結されたPolIII基本プロモーターを含む工程
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする、方法。 - 前記融合プロモーターが、RNAi作用因子をコードする前記核酸の細胞特異的発現を提供する、請求項61に記載の方法。
- 前記RNAi作用因子がshRNAである、請求項61に記載の方法。
- 前記RNAi作用因子がsiRNAである、請求項61に記載の方法。
- RNA作用因子コード配列に作動可能に連結されたPolIII/PolII融合プロモーターを含む遺伝子構築物を含む、細胞中にRNAi作用因子を発現する組成物であって、前記PolIII/PolII融合プロモーターが、
RNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域、および
前記基本プロモーター領域に作動可能に連結された、PolIIプロモーター由来のシス活性調節領域
を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を提供する組成物。 - 前記RNAi作用因子がshRNAである、請求項65に記載の組成物。
- 前記RNAi作用因子がsiRNAである、請求項65に記載の組成物。
- 遺伝子構築物を含むベクターを含む、細胞中の標的遺伝子の発現を阻害するための組成物であって、
前記構築物が、前記標的遺伝子にターゲティングされるRNAi作用因子をコードする核酸配列に作動可能に連結されたPolIII/PolII融合プロモーターを含み、前記融合プロモーターが、
RNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域、および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を提供する組成物。 - 前記細胞が生物中に存在する、請求項68に記載の組成物。
- 前記構築物が組織特異的調節エレメントを含み、前記標的遺伝子を前記組織特異的調節エレメントに対応する組織の細胞中で優先的に阻害する、請求項68に記載の組成物。
- 前記構築物が腫瘍特異的調節エレメントを含み、前記標的遺伝子を前記組織特異的調節エレメントに対応する腫瘍の細胞中で優先的に阻害する、請求項68に記載の組成物。
- 前記阻害を放射線に応答して誘導する、請求項68に記載の組成物。
- 前記阻害を、有効量の非ペプチドおよび非ヌクレオチド化学種の存在に応答して誘導する、請求項68に記載の組成物。
- 前記化学種がエストロゲンである、請求項73に記載の組成物。
- 遺伝子機能を分析する方法であって、
細胞中の遺伝子発現を阻害する工程であって、前記阻害がRNAi作用因子をコードする核酸配列に作動可能に連結されたPolIII/PolII融合プロモーターを含む遺伝子構築物由来のRNAi作用因子の発現に起因し、前記融合プロモーターがRNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする工程、および
前記阻害後に前記細胞における生物学的変化を決定する工程であって、前記生物学的変化が前記遺伝子の機能を示す工程
を含む方法。 - 前記決定が、少なくとも1つの生物学的特徴を前記細胞の発現が阻害されないコントロール細胞と比較する工程を含む、請求項75に記載の方法。
- 前記細胞を、前記遺伝子構築物を含むベクターでトランスフェクトする工程をさらに含む、請求項75に記載の方法。
- 前記ベクターがウイルスベクターである、請求項77に記載の方法。
- 前記ベクターがプラスミドである、請求項77に記載の方法。
- 標的を治療標的として実証する方法であって、
細胞中の推定治療標的遺伝子の発現を阻害する工程であって、前記阻害がRNAi作用因子をコードする核酸配列に作動可能に連結されたPolIII/PolII融合プロモーターを含む遺伝子構築物由来のRNAi作用因子の発現に起因し、前記融合プロモーターがRNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする工程、および
前記阻害後の前記細胞における生物学的変化が治療効果と対応するかどうかを決定する工程であって、前記生物学的変化の前記治療効果との対応は前記遺伝子が治療標的遺伝子であることを示す工程
を含む方法。 - 小分子試験化合物の生物学的効果の正のコントロールを得る方法であって、
第1細胞を試験化合物と接触させる工程と、
RNAi作用因子をコードする配列に作動可能に連結された、発現の特異的調節を提供するPolIII/PolII融合プロモーターを含む遺伝子構築物由来のRNAi作用因子の発現を使用して比較細胞中の標的遺伝子を阻害する工程であって、前記融合プロモーターがRNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を可能にする工程、および
前記第1細胞中の前記試験化合物の効果を、前記比較細胞中の前記標的遺伝子の阻害効果と比較する工程
を含む方法。 - 前記試験化合物を、前記標的遺伝子に対して活性であるように予め選択する、請求項81に記載の方法。
- 前記比較工程は、前記試験化合物が前記阻害効果に付加的な効果を有するかどうかを決定する工程を含む、請求項81に記載の方法。
- 標的遺伝子の阻害が有益な効果を提供する疾患または病態を治療するための組成物であって、
RNAi作用因子をコードする核酸配列に作動可能に連結された、発現を特異的に調節するPolIII/PolII融合プロモーターを含む遺伝子構築物を含む薬理学的有効量のベクター
を含み、前記融合プロモーターが、RNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域、および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を提供する、組成物。 - 前記ベクターがプラスミドである、請求項84に記載の組成物。
- 前記ベクターがウイルスベクターである、請求項84に記載の組成物。
- 前記被験体がヒトである、請求項84に記載の組成物。
- 前記被験体が非ヒト動物である、請求項84に記載の組成物。
- 前記被験体が植物である、請求項84に記載の組成物。
- 前記RNAi作用因子がshRNAである、請求項84に記載の組成物。
- 前記RNAi作用因子がsiRNAである、請求項84に記載の組成物。
- 標的遺伝子の阻害によって有益な効果を提供する疾患または病態の治療薬の調製における、RNAi作用因子をコードする配列に作動可能に連結された、発現の特異的調節を提供するPolIII/PolII融合プロモーターを含む遺伝子構築物を含むベクターの使用であって、前記融合プロモーターが、RNAポリメラーゼIII結合基本プロモーター領域、および前記基本プロモーター領域に作動可能に連結されたPolIIプロモーター由来のシス活性調節領域を含み、前記シス活性調節領域が前記融合プロモーター由来の発現の特異的調節を提供する使用。
- 前記ベクターがウイルスベクターである、請求項92に記載の使用。
- 前記ベクターがプラスミドである、請求項92に記載の使用。
- 前記RNAi作用因子がshRNAである、請求項92に記載の使用。
- 前記RNAi作用因子がsiRNAである、請求項92に記載の使用。
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