JP2009079064A - 平滑筋増殖抑制組成物、動脈硬化症予防及び治療組成物及び血管再建術後の再狭窄予防及び治療組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】脂肪組織特異的分泌因子apM1及び薬学的に許容されるその塩から選ばれる少なくとも1種の薬学的有効量を、製剤学的に許容される担体と共に含有する平滑筋増殖
抑制組成物、動脈硬化症予防及び治療組成物及び血管再建術後の再狭窄予防及び治療組成物を提供する。
【選択図】なし
Description
を有効成分とする平滑筋増殖抑制組成物、動脈硬化症予防及び治療組成物及び血管再建術後の再狭窄予防及び治療組成物に関する。
ノ酸のコラーゲン様モチーフ(G-X-Y)をもち、補体系のC1qやコラーゲンX、VIIとホモロジーを有していた。しかしながら、該遺伝子及びその発現物apM1の生理機能は、未知であった。
Biochem. Biophys. Res. Commun., 221, 286-289 (1996)
学的有効量を、製剤学的に許容される担体と共に含有する平滑筋増殖抑制組成物が提供される。
の薬学的有効量を、製剤学的に許容される担体と共に含有する動脈硬化症予防及び治療組成物が提供される。
の薬学的有効量を、製剤学的に許容される担体と共に含有する血管再建術後の再狭窄の予防及び治療組成物が提供される。
ルギー反応と関連する気管支喘息等の予防及び治療にも適応可能である。
中のapM1量を該apM1に対する特異抗体を用いて測定、定量することにより実施される。
組成物の調製、該apM1に対する抗体の製造、及び該apM1の測定につき、順次説明する。
イン」(平成14年7月、特許庁編)及び当該分野における慣用記号に従うものとする。
、該形質転換体を培養することにより行われる。
のを使用できる。これは更に必要により複製起点を有していてもよい。該発現ベクターの例としては、例えばSV40の初期プロモーターを保有するpSV2dhfr(Mol. Cell. Biol., 1, 854(1981))等を例示できる。
ルガーノ)塩基配列、更に蛋白合成開始に必要な開始コドン(例えばATG)を付与した発現プラスミドを利用するのが好ましい。上記宿主としての大腸菌としては、エシエリヒア・コリ(Escherichia coli)K12株等がよく用いられ、ベクターとしては一般にpBR322及びその
改良ベクターがよく用いられるが、これらに限定されず公知の各種の菌株及びベクターも利用できる。プロモーターとしては、例えばトリプトファン(trp)プロモーター、lppプロモーター、lacプロモーター、PL/PRプロモーター等を使用できる。
法は、一般的方法に従うことができる。
外乃至細胞膜上に目的とする組換え蛋白が発現、生産、蓄積乃至分泌される。該培養に用いられる培地としては、採用した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択利用でき、その培養も宿主細胞の生育に適した条件下で実施できる。
日株式会社東京化学同人発行;Biochemistry, 25(25), 8274(1986); Eur. J. Biochem., 163, 313 (1987)等参照)により分離、精製できる。より具体的には、例えば通常の再構成処理、蛋白沈澱剤による処理(塩析法)、遠心分離、浸透圧ショック法、超音波破砕、限外濾過、分子篩クロマトグラフィー(ゲル濾過)、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)等の各種液体クロマトグラフィー、透析法、これらの組合せ等により分離、精製できる。
アミノ酸数個からなるフラグメントを予め合成し、次いで各フラグメントをカップリング反応させるフラグメント・コンデンセーション法とを包含する。
シサクシンアミド、N-ヒドロキシ-5-ノルボルネン-2,3-ジカルボキシイミド等)法、ウッ
ドワード法等が包含される。
ン、テトラヒドロフラン(THF)、酢酸エチル等及びこれらの混合溶媒等を挙げることがで
きる。
シベンジルエステル、p-ニトロベンジルエステル等のアラルキルエステル等として保護することができる。
ずしもかかる保護を行う必要はない。
ニルオキシカルボニル基、アダマンチルオキシカルボニル基等の適当な保護基により保護することができる。
リウム、フッ化水素、臭化水素、塩化水素、トリフルオロ酢酸、酢酸、蟻酸、メタンスル
ホン酸等を用いる方法等に従って実施することができる。
ドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム等が挙げられる。
、好ましくは約0.0001〜0.01mgの範囲から選ばれるのが適当である。ヒト血清アルブミンの添加量は、有効成分1μg当り約0.0001mg以上、好ましくは約0.001〜0.1mgの範囲から選ばれるのが適当である。アミノ酸は、有効成分1μg当り約0.001〜10mgの範囲から選ばれ
るのが適当である。また、セルロース誘導体の添加量は、有効成分1μg当り約0.00001mg
以上、好ましくは約0.001〜0.1mgの範囲から選ばれるのが適当である。
カリウム、糖類、グリセリン等を例示できる。またキレート剤としては、エデト酸ナトリウム、クエン酸等を例示できる。
塩基、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤;グリセリン、デンプン等の保湿剤;デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤;精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を使用できる。
、エマルジョン、懸濁液、シロップ、エリキシル等を包含する。該液剤には更に湿潤剤、乳剤、懸濁剤等の助剤を含ませることができ、これらは常法に従い調製される。
、日本生化学会編(1986)等参照)。
成し、これよりapM1を認識する所望抗体を産生するクローンを選択し、該クローンの培養により製造できる。
きる。
ウス程度となるように投与することにより行われる。免疫抗原としては、上記最終投与の約3日後に摘出した脾臓細胞を使用するのが好ましい。
〕、p3-U1 〔Current Topics in Microbiology and Immunology, 81, 1-7(1978)〕、NS-1
〔Eur. J. Immunol., 6, 511-519 (1976)〕、MPC-11 〔Cell, 8, 405-415 (1976)〕、SP2/0 〔Nature, 276, 269-270 (1978)〕、FO 〔J. Immunol. Meth., 35, 1-21 (1980)〕、×63.6.5.3. 〔J. Immunol., 123, 1548-1550 (1979)〕、S194 〔J. Exp. Med., 148, 313-323 (1978)〕等や、ラットにおけるR210 〔Nature, 277, 131-133 (1979)〕等の骨髄腫細胞等を使用できる。
具体的には、上記融合反応は、通常の融合促進剤、例えばポリエチレングリコール(PEG)
、センダイウイルス(HVJ)等の存在下に、通常の培地中で実施できる。培地には更に融合
効率を高めるためにジメチルスルホキシド等の補助剤を必要に応じて添加することもできる。
形質細胞腫細胞の増殖に通常使用される各種のもの、例えばRPMI-1640培地、MEM培地、その他のこの種細胞培養に一般に利用されるものを例示できる。通常之等培地は牛胎児血清(FCS)等の血清補液を抜いておくのがよい。
〜60w/v%の濃度で加えて混ぜ合せることにより行われる。以後、適当な培地を逐次添加
して遠心し、上清を除去する操作を繰返すことにより所望のハイブリドーマが形成される
。
ブリドーマ法とモノクローナル抗体」、株式会社R&Dプラニング発行、第30-53頁、昭和57年3月5日〕に従い実施でき、この検索には前記免疫抗原が利用できる。
相化し、更に非特異吸着を防ぐためにブロッキングを行う(固相化反応)。次に、上記モノクローナル抗体固相化プレートにヒトapM1標準液又は検体を加えて反応させる(第1反応)
。プレートを洗浄後、抗ヒトapM1抗体(第2抗体)を加えて反応させる(第2反応)。プレートを洗浄し、HRP標識抗ウサギIgG抗体(第3抗体)を加えて反応させる(第3反応)。プレートを洗浄後、基質を加えて酵素反応を行い(第4反応)、活性を波長492nmにおける吸光度として読みとる。
光度)が認められる。上記標準液の吸光度をプロットして標準曲線(検量線)を作製し、検
体の吸光度を該検量線と対比させれば、検体中のapM1を簡便に読みとることができ、かくして、検体が動脈硬化症に罹患しているか否かの診断が行い得る。
又は血漿)が好ましく、之等は被検者より採取、採血後、常法に従い調製できる。
抗apM1抗体)を必須成分として、これとapM1に対するポリクローナル抗体又はモノクロー
ナル抗体のそれぞれとの組合わせ、或いは上記モノクローナル抗体どうしの組合わせを含有するのが好ましい。
(1) apM1の大腸菌での発現
1) apM1 PCR
apM1遺伝子の塩基配列及び該遺伝子配列でコードされるアミノ酸配列は、ジーンバンク(gene bank)にアクセッション番号D45371として登録されている。そのコーディング領域(CDS)は、配列番号27〜761番目に示されている。その推定アミノ酸配列は配列番号1に示す
とおりである。該配列において、1-14番目はシグナルペプチドであり、15-244番目が成熟型apM1である。
より増幅した。apM1遺伝子の塩基配列を含むプラスミドの制限酵素地図を、図1に示す。
末端にNdeIサイトを、3'末端にBamHIサイトを増設するように設計し、自動DNA合成機により製造した。このPCRプライマーの配列は、配列番号3(forward)及び4(reverse)に示す通
りである。
2) apM1遺伝子のサブクローニング
上記1)で得られたPCR産物をpT7 Blue T-Vector(ノバゲン(Novagen)社製)にサブクロー
ニングし、その塩基配列(pT7-apM1)に変異がないことを確認した。
3) 発現ベクターの構築
発現ベクターpET3c(ノバゲン社製)をNdeI及びBamHIで消化し、約4600bpの断片得た。また、上記1)で得たpT7-apM1をNdeI及びBamHIで消化し、約700bpの断片を得た。これらの断片をライゲーションし、得られた発現ベクターをpET3c-apM1とした。
4) 大腸菌での発現
宿主大腸菌であるBL21(DE3)pLysSを、上記3)で得たpET3c-apM1でトランスフォームし、2xT.Y.Amp. (トリプトン16g、酵母抽出物10g及びNaCl 5g)で培養した。菌体が対数増殖期に入ったところでIPTG(イソプロピル β-D-チオガラクトピラノシド)を添加し、組換えapM1の生産を誘導した。IPTGによる誘導前後の大腸菌及びIPTG誘導後のインクルージョンボディー(大腸菌の不溶性画分)をサンプリングし、SDS-PAGE及びウエスタンブロッティングによりapM1の発現を確認した。
5) 結果及び考察
上記に従い大腸菌で発現した発現物は、apM1のアミノ酸配列において、シグナル配列を除いた15番Glyから244番Asnまでの230アミノ酸で、N端に開始コドン由来のMetが付加されている。そのアミノ酸配列は、配列番号2に示されるとおりである。
を行ったところ、両方の抗体ともにその約30kDのバンドと反応しており、宿主大腸菌とは全く反応は認められなかった。
された配列と同じであり、マイナー成分としてN端のMetがはずれているものも確認された。
(2) 組換えapM1の大腸菌からの精製
組換えapM1の大腸菌からの精製は、以下の5つのステップにて行った。
1) 大腸菌の培養
発現ベクターpET3c-apM1でトランスフォームした大腸菌BL21(DE3)pLysS(ノバゲン社製)を2xT.Y.Amp.Cm.(トリプトン16g、酵母抽出物10g、クロラムフェニコール25μg/mL及びNaCl 5g)で前培養(37℃、振盪培養)し、翌日、その培養液を100倍量の2xT.Y.Amp.で希釈し
て更に培養した。2〜3時間培養して培養液のOD550が0.3〜0.5になったところで、最終濃
度0.4mMのIPTGを添加し、組換えapM1の生産を誘導した。IPTG添加後約3〜5時間で培養液
を遠心分離(5000rpm、20分、4℃)し、得られた大腸菌の沈殿を凍結保存した。
2) 大腸菌からのインクルージョンボディーの調製
大腸菌の沈殿を50mM Tris-HCl (pH8.0)に懸濁し、リゾチームで37℃、1時間処理した後、最終濃度0.2%のトリトンX-100(TritonX-100, 片山化学社製)を添加した。その溶液を
超音波処理(BRANSON SONIFIER, output control 5, 30sec.)し、遠心分離(12000rpm、30
分、4℃)して沈殿を回収した。その沈殿を0.2% TritonX-100を添加した50mM Tris-HCl(pH8.0)25mLに懸濁し、超音波処理(同上条件)を行った。
3) インクルージョンボディーのリフォールディング
インクルージョンボディーを少量の7M塩酸グアニジン、100mM Tris-HCl (pH8.0)、1% 2MEに可溶化した。その溶液を200倍量の2M Urea、20mM Tris-HCl(pH8.0)に滴下して希釈
し、4℃で3晩放置した。
4) リフォールディング溶液の濃縮
リフォールディングした溶液を遠心分離(9000rpm、30分間、4℃)し、得られた上清をアミコンYM-10メンブランを用いた限外濾過で約100倍に濃縮した。その濃縮液を20mM Tris-HCl (pH8.0)にて透析し、0.45μmのフィルターで濾過した。
5) DEAE-5PWによる陰イオン交換HPLC
上記4)で得られたサンプルをDEAE-5PW(東ソー社製)による陰イオン交換高速液体クロマトグラフィー(HPLC)により分離、精製した。開始バッファーは20mM Tris-HCl(pH7.2)で、溶出は1M NaClのグラジェント(0→1M NaCl/60mL)で行い、280nmの吸収でモニターした。
フラクションは1mLずつ行い、各フラクションをSDS-PAGEして分析した。
6) 結果および考察
組換えapM1は、大腸菌にインクルージョンボディーとして発現していたので、精製に際してはインクルージョンボディーの可溶化及びリフォールディングを行った。その結果、組換えapM1は可溶化され、陰イオン交換カラムで分離された。そのピークのフラクション(フラクションNo.30-37)をSDS-PAGEで分析したところ、約30kDのバンドが観察された。このとき、バックグラウンドに薄くスメアなバンドが確認されたが、蛋白質の殆どは組換えapM1であると考えられたので、この約30kDのバンド(組換えapM1)を、引き続くウサギ及びマウスの免疫のための抗原として用いた。
(3) apM1に対するポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の作製
1) ポリクローナル抗体の作製
組換えapM1 100μg/bodyを等量のコンプリートアジュバントと混合して5匹のウサギに2週間おきに8回免疫して、抗apM1ポリクローナル抗体(認識番号;OCT9101〜OCT9105)を得た。
2) モノクローナル抗体の作製
組換えapM1 20μg/bodyを等量のコンプリートアジュバントと混合してマウスに2週間おきに3回免疫し、細胞融合の3日前にアジュバントなしで最終免疫した。マウス脾臓リンパ球とミエローマ細胞の細胞融合はPEG法にて行い、HAT培地でハイブリドーマを選択した。
の内の一つのハイブリドーマ(受託者が付した識別のための表示:KOCO9108)は、1998年6
月8日(原寄託日)に、日本国茨城県つくば市東1-1-1 中央第6に住所を有する独立行政法
人 産業技術総合研究所 特許生物寄託センターに受託されており、1998年10月7日に原
寄託よりブダペスト条約に基づく寄託への移管請求が受領された。その受託番号はFERM B
P-6542である。
3) 抗体の精製
得られたウサギ抗血清(ポリクローナル抗体)及びマウス腹水(モノクローナル抗体)は、プロテインAカラムで精製した。
4) apM1の動物細胞での発現
apM1のcDNAをEcoRIで切り出し、発現ベクターpCIneo(プロメガ社製)のEcoRIサイトに挿入した。このpCIneo-apM1をGIBCO BRL社のLlipofectAMINEを用いてCOS-1細胞(ATCC CRL1650)にトランスフェクションし、72時間後の培養上清及び細胞を回収した。
5) apM1のウエスタンブロッティング
最初に、脂肪組織抽出液、COS-1細胞、COS-1細胞培養上清、健常人血漿、組換えapM1を、2ME(+)でSDS-PAGEし、ニトロセルロースメンブランにトランスファーした。
と反応させた後、ECL(アマシャム社製ウエスタンブロッティング検出試薬)を用いて検出
を行った。
が確認できたが、pCIneo/COS-1細胞及びpCIneo/COS-1細胞培養上清では確認できなかった。
を確認できた。
1) apM1のウエスタンブロッティング
健常人血漿をPBSで10倍に希釈し、その5μlを2ME(+)、(-)でSDS-PAGEしてニトロセルロースフィルターにトランスファーした。そのフィルターをブロッキングした後に1000倍希釈した抗apM1ポリクローナル抗体(OCT9101〜9105)或いは5μg/mLに調製した抗apM1モノクローナル抗体(ANOC9101〜9111)と反応させ、ついでHRP標識抗ウサギIgG抗体又はHRP標識
抗マウスIgG抗体と反応させて、ECLにより検出した。
は、ANOC9104及びANOC9108が適当であると考えられた。
2) apM1 ELISAの作製
apM1モノクローナル抗体(ANOC9108)をイムノプレートにコーティングし、各ウエルをブロッキングした後、apM1のスタンダード及びサンプルを添加してインキュベートした。プレートの各ウエルを洗浄し、希釈したapM1ポリクローナル抗体(OCT9104)を添加してイン
キュベートした。プレートの各ウエルを洗浄し、希釈したHRP標識抗ウサギIgG抗体を添加してインキュベートした。プレートの各ウエルを洗浄し、OPDを用いてウエルを発色させ
、492nmの吸収を測定した。スタンダードのapM1には、大腸菌に発現した組換えapM1を精
製し、BSAを標準としたプロテインアッセイで蛋白質量を定量したものを用いた。
3) 正常人血漿のゲル濾過及びウエスタンブロッティング
上記のapM1 ELISAで正常人血漿を測定したところ、ウエスタンブロッティングの結果から考えられる濃度が得られなかった。そこで、正常人血漿をSuperose12(ファルマシア社
製)を用いてゲル濾過し、各フラクションをSDS-PAGEして、ANOC9104を用いたウエスタン
ブロッティングで分析した。また、分子量マーカーを同一条件でゲル濾過し、apM1の溶出した位置と比較検討した。
とから、血中のapM1は他の血漿成分と会合して290kD以上の大きな分子を形成し、そのた
めに抗体の認識部位がマスクされているものと考えられた。そこで、SDSを含むバッファ
ーで血清を処理すれば抗体が反応できるようになるのではと考え、次の検討を行った。
4) 血漿サンプルの処理
血漿をSDSを含むバッファーで煮沸処理し、それらの処理条件(煮沸時間、SDSバッファ
ーとの混合比)について検討した。煮沸時間については、SDSバッファーで10倍に希釈した正常人血漿を10秒、30秒、1分、3分、5分、10分間それぞれ煮沸し、血漿原液から最終5000倍に希釈してapM1を測定した。SDSバッファーとの混合比については、正常人血漿を2倍
、3倍、5倍、10倍、20倍量のSDSバッファーにそれぞれ希釈したものを5分間煮沸し、最終10000倍に希釈してapM1を測定した。
釈して5分間煮沸処理するのが適当であると考えられた。
5) 血漿サンプルの希釈
apM1 ELISAの検出範囲が70pg/mL〜20ng/mLであり、apM1の血中濃度がμgオーダーであ
ることから、血清(血漿)は希釈して測定する必要があるので、適正な希釈倍率を求めるためにSDS処理した血漿を段階希釈してapM1を測定した。即ち、正常人血漿をSDS処理し、それを最終200倍から10万倍まで段階希釈してapM1の測定を行った。
度等からして最終5000倍程度で測定することが適当であることが判った。
6) 採血条件の検討
正常人の血液を血清、ヘパリン、EDTAの各採血条件で採血し、apM1を測定して採血条件の違いによるapM1の測定値について検討した。即ち、正常人10名についてそれぞれ採血し、血清(血漿)をSDS処理して最終5000倍に希釈してapM1の測定を行った。
7) サンプルの保存条件の検討
apM1測定検体の保存条件の検討を、血漿およびSDS処理後のサンプルについて行った。
血漿の保存条件としては、4℃、室温、37℃で1日、2日、3日、6日間放置したものを、ま
た、血漿の凍結融解による影響については、1回、2回、4回、8回の凍結融解を繰り返したものをそれぞれSDS処理し、最終5000倍に希釈してapM1の測定を行った。SDS処理後のサンプルについては、血漿をSDSバッファーで10倍に希釈して5分間煮沸処理し、その溶液を10倍に希釈したものについて同様の実験を行った。
8) 日内変動、日差変動の検討
正常人の血清(血漿)中apM1の測定における日内変動および日差変動について検討した。日内変動については、同一の検体を8重に測定してCV値を求めた。また、日差変動につい
ては、同一の検体を日を変えて4回繰り返し測定しCV値を求めた。
あった。
9) 特異性の検討
ブタ、ウシ、ウマ、ヤギ、ラット、マウスの血清についてapM1 ELISAを行い、測定系の特異性について検討した。それぞれの動物の血清をSDSバッファーで処理し、最終100倍から8100倍まで段階希釈してapM1の測定を行った。
ては殆ど確認されなかった。
ヒト動脈平滑筋細胞(クローンテック社製)を、プラスチック製プレートに1×104/cm2の濃度で播種し、10%FBS(ギブコ社製)、100IU/mLペニシリン及び100μg/mLストレプトマイシンを添加したDMEM(ギブコ社製)中で一夜放置し、37℃で5%CO2及び95%空気中で培養した。
、R&Dシステムズ社製)を用いて24時間処理した。次いで、[メチル3H]-チミジンを1μCi/ウエルで5時間添加した。処理細胞をトリプシン処理し、ガラス繊維フィルター上に自動
細胞収穫機を用いて取り出し、その後、[メチル3H]-チミジン取り込み量を直接β-カウンターにて測定した。
とが明らかである。即ち、apM1の添加によれば、コントロールのDNA合成を有意(p<0.001)に抑制しており、またHB−EGF添加により促進されるDNA合成の場合においても、これを有意(p<0.001)に抑制することが明らかとなった。
冠動脈造影により75%以上狭窄があると認められた患者(CAD(+)と表示する)男性24名及び女性10名及び75%までの狭窄しかない患者(CAD(-)と表示)男性66名及び女性39名につき、それらの各血液を採取し、血漿中のapM1レベルを、実施例2に記載した本発明方法に従
い測定した。
す。
の大小に関わりなく低く、このことから、apM1が高度の冠動脈狭窄の存在の診断に有効であることが判った。
96ウエルプレートに播種したヒト大動脈血管内皮細胞(HAEC: Human Arotic Vascular Endothelial Cells, クロネティクス社より購入)を、血管内皮細胞培地中で培養(5%CO2下、37℃)した。ベクトンディッキンソン社製「バイオコート」を用い、コンフリューエン
ト(confluent)になるまで培養し、その後培地をTCM199(tissue culture medium:大阪大学微生物研究、ナカライテスク社)+0.5%FCS(ウシ胎児血清:日本生物材料社製)+3%BSA(ウシ血清アルブミン:シグマ社製)に変更した。
時間培養し、その後、ヒト組換えTNF-α(R&D社製、Tumor Necrosis Factor-α:10U/mL)を添加し、6時間培養した(apM1添加の実験群)。
法(Takami,S., et al., Circuation, 97(8), 721-728(1998))に従って検討した。尚、ICAM-1抗体としては、DAKO社の6.5B5を用いた。
、各実験群及び対照群における同接着分子蛋白発現量の相対値を示す。
症過程を規定する接着分子(VCAM-1、ELAM、ICAM-1など)の発現をapM1が抑制したという事実は、該apM1が動脈硬化の発症に抑制的に作用することを意味するものであり、このことから、apM1は動脈硬化症の予防剤として有効であることが明らかとなった。
Claims (5)
- 脂肪組織特異的分泌因子apM1及び薬学的に許容されるその塩から選ばれる少なくとも1種の薬学的有効量を、製剤学的に許容される担体と共に含有する、接着分子発現抑制組成物。
- 接着分子が、VCAM−1、ICAM−1、及びELAM−1から成る群から選択される少なくとも1種である、請求項1に記載の接着分子発現抑制組成物。
- 動脈硬化症(但し、肥満関連アテローム動脈硬化症を除く)の予防及び治療剤として使用される、請求項1又は2に記載の接着分子抑制組成物。
- 接着分子が、VCAM−1であり、気管支喘息の予防及び治療に使用される請求項1に記載の接着分子発現抑制組成物。
- 接着分子がICAM−1及び/又はELAM−1であり、抗炎症剤又は慢性関節リウマチ治療剤として使用される、請求項1に記載の接着分子発現抑制組成物。
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---|---|---|---|---|
FR2767135B1 (fr) | 1997-08-06 | 2002-07-12 | Genset Sa | Recepteur complexe lsr, activite, clonage, et application au diagnostic, a la prevention et/ou au traitement de d'obesite et des risques ou complications associes |
EP1127120B1 (en) | 1998-11-04 | 2008-05-28 | Serono Genetics Institute S.A. | Genomic and complete cdna sequences of human adipocyte-specific apm1 and biallelic markers thereof |
ES2323445T3 (es) | 1999-02-10 | 2009-07-16 | Serono Genetics Institute S.A. | Marcadores polimorficos del gen lsr. |
HUP0105284A3 (en) | 1999-02-19 | 2003-12-29 | Zymogenetics Inc Seattle | Inhibitors for use in hemostasis and immune function |
US6544946B1 (en) | 1999-02-19 | 2003-04-08 | Zymogenetics, Inc. | Inhibitors for use in hemostasis and immune function |
JP4689787B2 (ja) * | 1999-04-12 | 2011-05-25 | 住友化学株式会社 | 腹腔内脂肪組織量の分析方法 |
WO2001032868A1 (en) * | 1999-11-04 | 2001-05-10 | Genset | Apm1 biallelic markers and uses thereof |
US7338787B2 (en) | 2000-01-14 | 2008-03-04 | Serono Genetics Institute S.A. | Nucleic acids encoding OBG3 globular head and uses thereof |
US6579852B2 (en) | 2000-01-14 | 2003-06-17 | Genset S.A. | OBG3 globular head and uses thereof for decreasing body mass |
US20020058617A1 (en) | 2000-01-14 | 2002-05-16 | Joachim Fruebis | OBG3 globular head and uses thereof for decreasing body mass |
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JP4698914B2 (ja) * | 2000-01-14 | 2011-06-08 | セローノ ジェネティクス インスティテュート ソシエテ アノニム | Obg3およびこれを使用してボディーマスを減少させるための方法 |
US6566332B2 (en) | 2000-01-14 | 2003-05-20 | Genset S.A. | OBG3 globular head and uses thereof for decreasing body mass |
JP2003535104A (ja) * | 2000-05-31 | 2003-11-25 | ジェンセット | 筋量および筋分化の増加を促進させるためのacrp30球状ヘッドの使用方法 |
EP1372726A4 (en) * | 2001-03-14 | 2004-04-21 | Oklahoma Med Res Found | METHOD FOR REDUCING FAT BY ADMINISTRATING ADIPONECTIN |
WO2003009862A1 (en) * | 2001-07-20 | 2003-02-06 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of modumet for use in the treatment of metabolic disorders |
WO2003009864A1 (en) * | 2001-07-23 | 2003-02-06 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of disomet for the treatment of metabolic disorders |
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WO2003009863A1 (en) * | 2001-07-26 | 2003-02-06 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of cofoxin for use in the treatment of metabolic disorders |
WO2003011325A1 (en) * | 2001-07-27 | 2003-02-13 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of moceptin for the treatment of metabolic disorders |
WO2003011323A1 (en) * | 2001-07-30 | 2003-02-13 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of contabix for use in the treatment of metabolic disorders |
WO2003011321A1 (en) * | 2001-07-31 | 2003-02-13 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of cobesin for the treatment of metabolic disorders |
US20050054565A1 (en) * | 2001-07-31 | 2005-03-10 | John Lucas | Agonists and antagonists of moxifin for the treatment of metabolic disorders |
EP1418935A1 (en) * | 2001-08-01 | 2004-05-19 | Genset S.A. | Genobix agonists and antagonists for use in the treatment of metabolic disorders |
WO2003011318A1 (en) * | 2001-08-01 | 2003-02-13 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of famoset for use in the treatment of metabolic disorders |
WO2003011322A1 (en) * | 2001-08-02 | 2003-02-13 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of genoxin for use in the treatment of metabolic disorders |
EP1418934A1 (en) * | 2001-08-02 | 2004-05-19 | Genset S.A. | Xobesin agonists and antagonists for the treatment of metabolic disorders |
WO2003011320A1 (en) * | 2001-08-02 | 2003-02-13 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of obesingen for the treatment of metabolic disorders |
WO2003013580A1 (en) * | 2001-08-03 | 2003-02-20 | Genset S.A. | Tr xidatin agonists and antagonists treatment of metabolic disorders |
WO2003013581A1 (en) * | 2001-08-03 | 2003-02-20 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of genceptin for the treatment of metabolic disorders |
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WO2003013585A1 (en) * | 2001-08-08 | 2003-02-20 | Genset S.A. | Mifaxin agonists and antagonists for use in the treatment of metabolic |
WO2003013584A1 (en) * | 2001-08-09 | 2003-02-20 | Genset S.A. | Xafinix agonists and antagonists for use in the treatment of metabolic disorders |
WO2003013604A2 (en) * | 2001-08-09 | 2003-02-20 | Genset S.A. | Migenix agonists and antagonists for use in the treatment of metabolic disorders |
WO2003013583A1 (en) * | 2001-08-10 | 2003-02-20 | Genset S.A. | Faxigen agonists and antagonists in the treatment of metabolic disorders |
EP1426764B1 (en) * | 2001-08-17 | 2011-03-30 | Fujirebio, Inc. | Method of diagnosing or monitoring saccharometabolic error |
WO2003026695A1 (en) * | 2001-09-21 | 2003-04-03 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of cylixin for the treatment of metabolic disorders |
WO2003041738A1 (en) * | 2001-11-15 | 2003-05-22 | Genset S.A. | Treatment of metabolic disorders with xitar agonists and antagonists |
WO2003041730A1 (en) * | 2001-11-16 | 2003-05-22 | Genset S.A. | Ditacin agonists and antagonists for use in the treatment of metabolic disorders |
WO2003045421A1 (en) * | 2001-11-28 | 2003-06-05 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of ryzn for the treatment of metabolic disorders |
AU2002339691A1 (en) | 2001-11-29 | 2003-06-10 | Genset | Agonists and antagonists of prolixin for the treatment of metabolic disorders |
AU2002339683A1 (en) * | 2001-12-05 | 2003-06-17 | Genset S.A. | Agonist and antagonists of redax for the treatment of metabolic disorders |
WO2003047615A1 (en) * | 2001-12-05 | 2003-06-12 | Genset S.A. | Dexar agonists and antagonists for use in the treatment of metabolic disorders |
WO2003049757A1 (en) * | 2001-12-12 | 2003-06-19 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of glucomin for the treatment of metabolic disorders |
WO2003049756A1 (en) * | 2001-12-13 | 2003-06-19 | Genset S.A. | Glucomin agonists and antagonists for use in the treatment of metabolic disorders |
AU2002339685A1 (en) * | 2001-12-13 | 2003-06-23 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of oxifan for the treatment of metabolic disorders |
WO2003049758A1 (en) * | 2001-12-13 | 2003-06-19 | Genset S.A. | Emergen agonists and antagonists for use in the treatment of metabolic disorders |
AU2002339688A1 (en) * | 2001-12-14 | 2003-06-30 | Genset S.A. | Glucoset agonists and antagonists for use in the treatment of metabolic disorders |
AU2002339680A1 (en) * | 2001-12-26 | 2003-07-15 | Genset S.A. | Agonists and antagonists of bromix for the treatment of metabolic disorders |
NZ534699A (en) * | 2002-01-18 | 2008-12-24 | Protemix Corp Ltd | Glycoisoforms of adiponectin and uses thereof |
DE60329000D1 (de) * | 2002-05-24 | 2009-10-08 | Japan Science & Tech Agency | C-terminale globulardomäne von adiponectin zur behandlung von arteriosklerose |
WO2004086040A1 (ja) | 2003-03-24 | 2004-10-07 | Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc. | アディポネクチン分析用ラテックス試薬及びアディポネクチン分析方法 |
GB0312122D0 (en) * | 2003-05-27 | 2003-07-02 | Pharmagene Lab Ltd | Therapeutic method |
WO2005103720A1 (en) * | 2004-03-29 | 2005-11-03 | Medstar Research Institute, Inc. | Methods of diagnosing cardiovascular disease |
DE102004042530B4 (de) * | 2004-09-02 | 2006-10-19 | Mosaiques Diagnostics And Therapeutics Ag | Verfahren zur Diagnose von Arteriosklerose |
US20060128610A1 (en) * | 2004-12-10 | 2006-06-15 | Protemix Corporation Limited | Methods of treatment |
US7678886B2 (en) * | 2005-01-07 | 2010-03-16 | Xencor, Inc. | Pharmaceutical compositions of adiponectin variants and methods of storage |
US7592423B2 (en) * | 2005-01-07 | 2009-09-22 | Xencor, Inc. | Globular adiponectin variants |
US7749956B2 (en) * | 2005-01-07 | 2010-07-06 | Xencor, Inc. | Method of treatment using adiponectin variants |
WO2006074432A2 (en) * | 2005-01-07 | 2006-07-13 | Xencor | Adiponectin variants |
US20070054359A1 (en) * | 2005-07-11 | 2007-03-08 | Jonathan Zalevsky | Rational Chemical Modification of Adiponectin Variants |
US8636995B2 (en) * | 2006-08-31 | 2014-01-28 | Cardiac Pacemakers, Inc. | Methods and devices to regulate stem cell homing |
US8372399B2 (en) * | 2006-08-31 | 2013-02-12 | Cardiac Pacemakers, Inc. | Bispecific antibodies and agents to enhance stem cell homing |
US20080058922A1 (en) * | 2006-08-31 | 2008-03-06 | Cardiac Pacemakers, Inc. | Methods and devices employing vap-1 inhibitors |
EP2164960A2 (en) | 2007-05-25 | 2010-03-24 | North Carolina State University | Viral nanoparticle cell-targeted delivery platform |
US8017573B2 (en) * | 2007-11-30 | 2011-09-13 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Adiponectin receptor fragments and methods of use |
US8241697B2 (en) | 2007-12-20 | 2012-08-14 | Abbott Point Of Care Inc. | Formation of immobilized biological layers for sensing |
US8268604B2 (en) * | 2007-12-20 | 2012-09-18 | Abbott Point Of Care Inc. | Compositions for forming immobilized biological layers for sensing |
EP2088156A1 (en) * | 2008-02-08 | 2009-08-12 | Institut Pasteur | Use of adiponectin for the diagnosis and/or treatment of presbycusis |
TW201014598A (en) * | 2008-08-27 | 2010-04-16 | Otsuka Pharma Co Ltd | Agent for treating pulmonary disease |
US8865648B2 (en) | 2009-04-23 | 2014-10-21 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Monomeric and dimeric forms of adiponectin receptor fragments and methods of use |
EP3211094A3 (en) * | 2009-09-03 | 2017-11-01 | F. Hoffmann-La Roche AG | Methods for treating, diagnosing, and monitoring rheumatoid arthritis |
KR101868620B1 (ko) | 2015-08-12 | 2018-07-23 | 중앙대학교 산학협력단 | Fgf12를 이용한 혈관 평활근세포 증식성 질환의 진단, 예방 또는 치료용 조성물 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4253815B2 (ja) * | 1997-10-29 | 2009-04-15 | 大塚製薬株式会社 | 平滑筋増殖抑制組成物、動脈硬化症予防及び治療組成物及び血管再建術後の再狭窄予防及び治療組成物 |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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