JP2008531030A - 逆子孫マッピング方法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図2
Description
[作用(コスト/時間 フレーム)]
*:非常に制限、**:制限、***:平均、****:大きい、*****:非常に大きい
[結果(ヘテロ接合体に関するQTL効果の評価以外を対象)]
−−:非常に乏しい、−:乏しい、=:並、+:適度、++:良好、+++:非常に良好
[結果(ヘテロ接合体に関するQTL効果の評価のみを対象)]
−:不可能、=:可能、+:良好
BCx:戻し交配のx周期後の戻し交配集団
RIL:組み換え近交系統
HIF:ヘテロ接合性近交母集団
DH:倍加半数体系統
SDR:第2分裂復元派生系統
倍加半数体およびSDR−0植物は、2つのホモ接合性(純性)キュウリ系統の間の交配から生じるF1から再生された。全ての個体DHおよびSDR−0植物は、AFLP手段によって、遺伝子表現型で分析された。
倍加半数体およびSDR−0植物の生成は、欧州特許0374755号に基づいて行われた。
DH−0およびSDR−0植物についてのAFLP分析は、ボス・ピー他(Vos P et al. (1995) Nucleic acids Research 23(21): 4407-4414)で説明されるように行われた。
データは、AFLPマーカーの相互優性評点が可能なQuantar・Pro(Keygene, Wageningen, The
Netherlands)で処理および分析された。
分離を見込める特性を以下に示す。
・頂部分割
・葉のサイズ
・成長速度
・ノードあたりの果実数
・ノード間長さ
・花のサイズ
・果実のサイズ
・果実の色
図10は、SDR−0およびDH−0植物についてのAFLP分析結果を示す。全ての個々の線は、各SDR−0植物の単一のDH−0植物を表している。全てのコラムは、連鎖群を表してる。DH系統とヘテロ接合性セグメント(薄灰色領域)を有する系統とを明確に区別して分類することができる。したがって、上記形質のSDR−1世代における分離は、ヘテロ接合性セグメントに関連している。
SDR−1世代における分離に関与する座の精細マッピングは、ペレマン・ジェイ他(Peleman J et al. (2005) Genetics 171: 1341-1352)に基づいて行われる。
Claims (18)
- 生物、特に植物の形質をマッピングする逆子孫マッピング方法であって、
a)それぞれが第2分裂復元によりもたらされる非還元細胞の集団、特に非還元胞子の集団の一部から生じるSDR−0生物、特に植物の集団を提供するステップと、
b)前記各SDR−0生物のSDR−1子孫集団を生成するステップと、
c)前記各SDR−1子孫の中で分離形質を特定するために前記SDR−1子孫集団を表現型化するステップと、
d)分離子孫がSDR−1子孫集団に存在している場合に、その対応するSDR−0生物を遺伝子型化するとともに、前記SDR−1子孫集団で確認される前記分離形質の発生に関連しているヘテロ接合性染色体領域を特定ために、前記SDR−0生物の遺伝子型と他のSDR−0生物の遺伝子型とを比較するステップと
を含むことを特徴とする逆子孫マッピング方法。 - それぞれが前記SDR−0集団の植物を生じる前記非還元細胞の集団は、サイズ、質量またはDNA含量に基づいて細胞、特に胞子の集団を分類するとともに、前記非還元細胞の集団の要素として増大したサイズ、質量またはDNA含量を有する細胞、特に胞子を選択することによって得られる請求項1に記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記細胞は、フローサイトメータ、遠心分離機、または手動微動操作装置によって分類される請求項2に記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記SDR−1子孫集団の表現型化は、目視観測手段によって、または、イオン、転写物、タンパク質、代謝物質、あるいは各SDR−1生物のそれらの組み合わせの内容および/または構成を分析することによって行われる請求項1ないし3のいずれかに記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記表現型化は、イオノミクス、トランスクリプトミクス、プロテオミクス、メタボロミクス、あるいはそれらの組み合わせた手段によって行われる請求項4に記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記SDR−0生物の遺伝子型化は、核酸ポリモフィズムを明らかにする方法手段によって行われる請求項1ないし5のいずれかに記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記核酸ポリモフィズムを明らかにする方法は、AFLP(増幅断片長多型)、RFLP(制限断片長多型)、SNP(一塩基多型)、SFP(単独形態多型)、SSR(単純反復配列)、RAPD(ランダム増幅多型DNA)から選択される請求項6に記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記SDR−1子孫集団の生成は、変動条件、特に変動環境条件の下で行われる請求項1ないし7のいずれかに記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記変動環境条件は、実験室条件および現場条件から選択され、かつ、前記両タイプの条件は、気象条件に対して変更される請求項8に記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記非還元SDR−0細胞の集団は、平均以上の第2分裂復元を示すために選択された生物から生成される請求項1ないし9のいずれかに記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記非還元SDR−0細胞の集団は、平均以上の第2分裂復元を示すために遺伝子組み換えされた生物から生成される請求項1ないし9のいずれかに記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記遺伝子組み換えは、一時的なものである請求項11に記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記遺伝子組み換えは、遺伝要素のゲノムへの安定した取り込みにより、前記生物における第2分裂復元事象の数を増加させている請求項11に記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記非還元SDR−0細胞の集団は、平均以上の第2分裂復元を示すために環境ストレスにさらされた生物から生成される請求項1ないし9のいずれかに記載の逆子孫マッピング方法。
- 前記環境ストレスは、熱応力、NO2、亜酸化窒素N2O、またはそれらの組み合わせから選択される請求項14に記載の逆子孫マッピング方法。
- a)それぞれが第2分裂復元によりもたらされる非還元細胞の集団、特に非還元胞子の集団の一部から生じるSDR−0生物、特に植物の集団を提供するステップと、
b)これらのSDR−0生物の各SDR−1子孫集団を生成するステップと
によって得られるマッピング集団の使用し、
1種における1以上の形質をマッピングする逆子孫マッピング方法。 - SDR細胞に関する細胞、特に胞子または配偶子の集団を富化する逆子孫マッピング方法であって、
サイズ、質量またはDNA含量に基づいて、前記細胞、特に胞子または配偶子の集団を分類し、かつ、非還元細胞、特に胞子または配偶子として増大した質量またはDNA含量を有する前記細胞、特に胞子または配偶子を選択することを特徴とする逆子孫マッピング方法。 - 前記集団の分類は、蛍光活性化細胞選別装置によって行われる請求項17に記載の逆子孫マッピング方法。
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