JP2008519841A5

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Publication number: JP2008519841A5
Application number: JP2007541306A
Authority: JP
Filing date: 2005-11-10
Publication date: 2009-10-01
Anticipated expiration: 2025-11-10

Description

用語「超可変領域」は、本明細書中で用いる際には、抗体の抗原結合に関与するアミノ酸残基を意味する。超可変領域は、一般に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（例えば、ＶＬ中のおよその残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）、並びにＶＨ中のおよそ１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（１１３）；Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)）からのアミノ酸残基および／または「超可変ループ」（例えば、ＶＬ中の残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｕ）、並びにＶＨ中の２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（１−１２）および９６〜１０１（Ｈ３）；Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）からのこれら残基を含む。

多価抗体
多価抗体は、抗体が結合する抗原を発現する細胞により、２価の抗体よりも迅速に内部移行する（および／または異化する）ことができる。本発明の抗体は、３つまたは４つ以上の抗原結合部位を有する（ＩｇＭクラス以外である）多価の抗体（例えば４価の抗体）であってもよく、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現により、容易に産生され得る。多価の抗体は、二量体化領域および３つまたは４つ以上の抗原結合部位を含むことができる。好ましい二量体化領域は、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはこれからなる）。この筋書きにおいて、抗体は、Ｆｃ領域および、Ｆｃ領域に対する３つまたは４つ以上の抗原結合部位アミノ末端を含む。本明細書中で好ましい多価抗体は、３個〜約８個、しかし好ましくは４個の、抗原結合部位を含む（またはこれからなる）。多価抗体は、少なくとも１つのポリペプチド鎖（および好ましくは２つのポリペプチド鎖）を含み、ここで、１つまたは２つ以上のポリペプチド鎖は、２つまたは３つ以上の可変領域を含む。例えば、１つまたは２つ以上のポリペプチド鎖は、ＶＤｌ（Ｘ１）ｎ−ＶＤ２−（Ｘ２）ｎ−Ｆｃを含むことができ、ここで、ＶＤ１は、最初の可変領域であり、ＶＤ２は、２番目の可変領域であり、Ｆｃは、Ｆｃ領域の１つのポリペプチド鎖であり、Ｘ１およびＸ２は、アミノ酸またはポリペプチドを表し、ｎは、０または１である。例えば、１つまたは２つ以上のポリペプチド鎖は、以下のものを含むことができる：ＶＨ−ＣＨＩ−柔軟リンカー−ＶＨ−ＣＨＩ−Ｆｃ領域鎖；またはＶＨ−ＣＨＩ−ＶＨ−ＣＨＩ−Ｆｃ領域鎖。本明細書中の多価抗体は、好ましくは、さらに、少なくとも２つ（および好ましくは４つ）の軽鎖可変領域ポリペプチドを含む。本明細書中の多価抗体は、例えば、約２個〜約８個の軽鎖可変領域ポリペプチドを含むことができる。本明細書中で意図する軽鎖可変領域ポリペプチドは、軽鎖可変領域を含み、随意にさらにＣＬ領域を含む。

Ovr110.A10.1、Ovr110.A31.1、Ovr110.A57.1、Ovr110.A87.1、Ovr110.C3.2、Ovr110.C5.1、Ovr110.C5.3、Ovr110.C6.3、Ovr110.C9.1、Ovr110.C11.1およびOvr110.C12.1の試験結果を、表７に示す。ここに見られるように、ＭＡｂＺａｐのみでは高い背景値がもたらされ、Ｏｖｒ１１０−ＣＨＯ細胞の増殖を０〜４１．４％阻害した。これはＰｒｏ１０４−ＣＨＯ細胞およびＭＡｂＺａｐのみを有する陰性対照ウェルでは生じず、これらの場合には、０〜１０％の増殖阻害であった（データ示されず）。しかし、Ｏｖｒ１１０ＭＡｂのみの場合のいずれも、Ｏｖｒ１１０−ＣＨＯ細胞の３．８％を超える増殖阻害を生じなかった。一方、ＭＡｂＺａｐサポリン結合体を添加すると、試験した全てのＯｖｒ１１０ＭＡｂは、ＭＡｂＺａｐのみの場合よりも１０％以上の増殖阻害を生じた。特にOvr110.A57.1は、ＭＡｂＺａｐと共に０．０８、０．４および２．０ｕｇ／ｍＬ濃度において、ＭＡｂＺａｐのみの場合より１５．４〜２１．１％高いＯｖｒ１１０−ＣＨＯ細胞増殖阻害をもたらし、培地のみのウェルと比べて５７．７〜６３．４％高い増殖阻害をもたらした。結論として、Ｏｖｒ１１０発現ＣＨＯ細胞の増殖阻害は、治療目的のために、in vivoで容易に達成可能なＭＡｂ濃度において得られた。これらのin vitroのデータは、上記Ｏｖｒ１１０ＭＡｂが、in vivoにおいて薬剤または同位体を腫瘍細胞に標的化するのに適していることを示唆する。

ウェスタンブロット
図８Ａは、細胞系におけるｍＡｂA57.1を用いたＯｖｒ１１０タンパク質のウェスタンブロット検出であり、ｍＲＮＡ発現とタンパク質発現の相関を示す。図８Ｂのウェスタンブロットは、細胞系およびヒト卵巣腫瘍組織試料中においてはＯｖｒ１１０タンパク質の検出を示すが、正常隣接組織（ＮＡＴ）においては検出を示さない。図８Cのウェスタンブロットは、細胞系およびヒト乳房腫瘍組織試料中においてはＯｖｒ１１０タンパク質の検出を示すが、正常隣接組織（ＮＡＴ）においては検出を示さない。さらに、図９は、Ｏｖｒ１１０タンパク質が主要器官の抽出物には検出されないことを示すウェスタンブロットであり、Ｏｖｒ１１０に指向された治療戦略は、主要なまたは重要な器官の機能に干渉しないであろうことを示唆する。

Claims

哺乳類細胞上のＯｖｒ１１０に結合する、単離されたＯｖｒ１１０抗体。
哺乳類細胞上のＯｖｒ１１０に結合すると内部移行する、請求項１に記載の抗体。
モノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗体。
キメラ、ヒト化またはヒト抗体、またはそれらの抗体断片である、請求項１に記載の抗体。
抗体が、配列番号２７、３２、３４および３５からなる群から選択されるＯｖｒ１１０ペプチドに結合する、請求項１に記載の抗体。
Ｏｖｒ１１０ペプチドが翻訳後修飾を含む、請求項５に記載の抗体。
抗体が、配列番号４４〜４７からなるエピトープから選択されるエピトープに結合する、請求項１に記載の抗体。
アメリカンタイプカルチャーコレクション受託番号PTA-5180、PTA-5855、PTA-5856、PTA-5884、PTA-6266、PTA-7128およびPTA-7129からなる群から選択されるハイブリドーマにより産生される、請求項３に記載の抗体。
抗体が、アメリカンタイプカルチャーコレクション受託番号PTA-5180、PTA-5855、PTA-5856、PTA-5884、PTA-6266、PTA-7128およびPTA-7129からなる群から選択されるハイブリドーマにより産生されるモノクローナル抗体により結合されるエピトープと同一のエピトープへの結合に対して競合する、請求項３に記載の抗体。
増殖阻害剤または細胞毒性剤に結合している、請求項３に記載の抗体。
細胞毒性剤が、毒素、抗生物質、放射性同位体および核酸分解酵素からなる群から選択される、請求項１０に記載の抗体。
哺乳類細胞が、癌細胞である、請求項１に記載の抗体。
in vivoでＯｖｒ１１０発現癌細胞の増殖を阻害する、抗Ｏｖｒ１１０モノクローナル抗体。
キメラまたはヒト化またはヒト抗体である、請求項１３に記載の抗体。
ＡＴＣＣ受託番号PTA-5180、PTA-5855、PTA-5856、PTA-5884、PTA-6266、PTA-7128およびPTA-7129からなる群から選択されるハイブリドーマにより産生される抗Ｏｖｒ１１０抗体のヒト化形態である、請求項１３に記載の抗体。
癌細胞が、卵巣癌、膵臓癌、肺癌および乳癌からなる群から選択される癌からのものである、請求項１３に記載の抗体。
請求項３に記載の抗体を産生する、細胞。
細胞が、アメリカンタイプカルチャーコレクション受託番号PTA-5180、PTA-5855、PTA-5856、PTA-5884、PTA-6266、PTA-7128およびPTA-7129の下で寄託されるハイブリドーマ細胞からなる群から選択される、請求項１７に記載の細胞。
請求項３または１３に記載の抗体、および担体を含む、組成物。
抗体が、細胞毒性剤に結合している、請求項１９に記載の組成物。
Ｏｖｒ１１０発現癌細胞を死滅させるための組成物であって、請求項１または２に記載の抗体を含み、該癌細胞を、該抗体と接触させ、これにより該癌細胞を死滅させることを特徴とする、前記組成物。
癌細胞が、卵巣癌細胞、膵臓癌細胞、肺癌細胞および乳癌細胞からなる群から選択される、請求項２１に記載の組成物。
卵巣癌または乳癌が、卵巣漿液性腺癌または乳房浸潤性乳管癌である、請求項２２に記載の組成物。
癌細胞が、転移性の卵巣癌、膵臓癌、肺癌または乳癌からのものである、請求項２２に記載の組成物。
哺乳類におけるＯｖｒ１１０発現癌を寛解するための組成物であって、請求項１３に記載の抗体を含み、該抗体の治療的に有効な量を、該哺乳類に投与することを特徴とする、前記組成物。
癌が、卵巣癌、膵臓癌、肺癌および乳癌からなる群から選択される、請求項２５に記載の組成物。
卵巣癌または乳癌が、卵巣漿液性腺癌または乳房浸潤性乳管癌である、請求項２６に記載の組成物。
抗体を、少なくとも１種の化学療法剤と組み合わせて投与する、請求項２５に記載の組成物。
化学療法剤が、パクリタキセルまたはその誘導体である、請求項２８に記載の組成物。
容器およびその中に含まれた組成物を含む製造品であって、該組成物が、請求項３に記載の抗体を含む、前記製造品。
卵巣癌、膵臓癌、肺癌または乳癌を検出または処置するために使用可能であることを示す添付文書をさらに含む、請求項３０に記載の製造品。
Ｏｖｒ１１０過剰発現を、その検出を必要としている対象において検出する方法であって、
（ａ）対象の試料を、請求項３に記載のＯｖｒ１１０抗体と、Ｏｖｒ１１０抗体の、前記試料中のＯｖｒ１１０への特異的な結合に適する条件の下で混ぜ合わせること、
（ｂ）前記試料中のＯｖｒ１１０のレベルを決定すること、
（ｃ）ステップｂにおいて決定したＯｖｒ１１０のレベルを、対照中のＯｖｒ１１０のレベルと比較すること、を含み、ここで、対照と比較した、対象からの前記試料中のＯｖｒ１１０のレベルの増大が、対象におけるＯｖｒ１１０過剰発現を示す、前記方法。
対象の試料が、体液、細胞、癌細胞、血液、血漿、血清、尿、唾液、痰、涙、腹水、腹腔洗浄液、リンパ液、胆汁、精液、膿汁、羊水、房水、耳垢、乳糜、糜粥、腸液、月経、乳、粘液、胸膜液、汗、膣の潤滑液、嘔吐物、脳脊髄液および滑液からなる群から選択される、請求項３２に記載の方法。
対象が、卵巣漿液性腺癌であり、乳房浸潤性乳管癌またはそれらの転移癌である、請求項３２に記載の方法。
対照が、Ｏｖｒ１１０を過剰発現する癌を有さない対象からの血清試料である、請求項３３に記載の方法。
請求項３に記載の抗体により結合されたエピトープに結合する抗体のスクリーニング方法であって、
（ａ）Ｏｖｒ１１０含有試料を、試験抗体および請求項３に記載の抗体と混ぜ合わせて、混合物を形成すること、
（ｂ）前記混合物中のＯｖｒ１１０に結合したＯｖｒ１１０抗体のレベルを決定すること、および
（ｃ）ステップ（ａ）の混合物中で結合したＯｖｒ１１０抗体のレベルを、対照混合物と比較すること、
を含み、ここで、対照と比較した、前記混合物中のＯｖｒ１１０に結合するＯｖｒ１１０抗体のレベルが、請求項３に記載の抗Ｏｖｒ１１０抗体により結合されたエピトープへの試験抗体の結合の指標である、前記スクリーニング方法。
請求項５に記載の抗体を含む組成物であって、負のシグナリング免疫細胞Ｏｖｒ１１０受容体のシグナリングを、Ｏｖｒ１１０を該抗体に結合させることにより調節し、これにより、抑制された免疫機能を低減させることを特徴とする、前記組成物。
哺乳類におけるＯｖｒ１１０発現自己免疫疾患を寛解させるための組成物であって、請求項５に記載の抗体を含み、該抗体の治療的有効量を、該哺乳類に投与することを特徴とする、前記組成物。
自己免疫疾患が、多発性硬化症、重症筋無力症、自己免疫性神経障害例えばギランバレー、自己免疫性ブドウ膜炎、クローン病、潰瘍性大腸炎、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫性肝炎、自己免疫性溶血性貧血、悪性貧血、自己免疫性血小板減少症、側頭動脈炎、抗リン脂質症候群、血管炎例えばヴェーゲナー肉芽腫症、ベーチェット病、乾癬、疱疹状皮膚炎、尋常性天疱瘡、白斑、Ｉ型もしくは免疫介在性糖尿病、グレーブス病、橋本甲状腺炎、自己免疫性卵巣炎および精巣炎、副腎の自己免疫疾患、関節リューマチ、全身性紅斑性狼瘡、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、脊椎関節症例えば強直性脊椎炎、およびシェーグレン症候群からなる群から選択される、請求項３８に記載の組成物。