JP2008501330A - エタノールの製造方法 - Google Patents
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Abstract
【選択図】なし
Description
−酵素の最適温度における高濃度、通常は10%乾燥質量以上での酵素前加水分解。酵素の組成は特に前加水分解のために設計されてもよく、又は、前加水分解の間において主要な加水分解段階の場合と同じであってもよい。
−第二の同時の発酵菌に適した温度における酵素の主要な加水分解とヘキソース糖の発酵。
−ヘキソース糖の大部分を発酵させた後の、濃縮され任意に無害化されたヘミセルロース画分の添加。この手順はまた、無害化されていないヘミセルロース濾液の使用を許容する。
a)濃度が高められたセルロースを含む固体のリグノセルロース画分と、可溶化したヘミセルロースを主に含む液体画分とへ、原材料を変換すること、
b)繊維質のリグノセルロース材料を高濃度でセルロース酵素を用いて加水分解し、増加した流動性を有する変性リグノセルロース材料を与えること(このことは、例えば、混和性やポンプ送液性を改善する)、
c)変性リグノセルロース材料を同時に、セルラーゼを用いて引き続いて加水分解するとともに、発酵混合物中でエタノール発酵させること、
d)発酵を継続して利用可能な炭水化物の本質的な部分をエタノールへ変換すること、
e)可溶化したヘミセルロースを含む液体画分を発酵混合物へ添加して発酵を継続すること、
f)発酵混合物からエタノールを回収すること
を備えている。
1 前処理
2 濾過及び洗浄
3 前加水分解
4 加水分解及びヘキソース発酵
5 濃縮
6 無害化
7 加水分解及びヘミセルロース発酵
8 蒸留
これらの段階を以下に説明する。
ヘミセルロースをリグノセルロースの繊維質の基質から解放する目的で、蒸気爆発などの前処理方法を用いて、原材料を前処理する。一つの技術として、蒸気爆発は、例えばサッドラーら(1993)によりさらに詳細に説明されており、前処理のための装置と方法は、パームクビストら(1996)によって説明されている。(Saddler, J, Ramos, L and Breuil, C (1993) Steam pre-treatment of lignocellulosic residues. In: Bioconversion of Forest and Agricultural plant Residues. Saddler, J.N. (ed.) CAB International, Wallingford, UK, Chapter 3, 73-92; Palmqvist, E, Hahn-Hagerdal, B, Galbe, M, Larsson, M, Stenberg, K, Szengyel, Z, Tengborg, C and Zacchi, G. 1996 Design and operation of a bench-scale process development unit for the production of ethanol from lignocellulosics. BioresourceTechnology 58:171-179)
原材料は、木材(針葉樹材、広葉樹材、又はこれらの混合物)などのリグノセルロース材料、多年生植物又は一年生植物などの農産物由来のリグノセルロース材料からなる。
つぎの段階において、スラリーは濾過、洗浄にかけられる。ヘミセルロースのかなりの部分(全原料の約3質量%から30質量%)は液相(水相)に溶解しているので、上に述べたようにして得られた繊維質の材料は、原材料と比較して、セルロースの濃度が増加している。その目的は、原材料中に存在するヘミセルロースのかなりの部分、少なくとも40質量%、特に少なくとも50質量%を分離することと、それらを主として単量体又はオリゴマーの形で液相へ取り入れることである。通常、液体分画中のヘミセルロース/糖類の量は、繊維質の材料よりも、少なくとも2倍多く、好ましくは2.5から15倍多い(質量換算)。
加水分解の段階bは、30−90℃、又は40−90℃の温度で、0.5−24時間、通常は約1から12時間行われる。濃度は高く、一般に5から40%乾燥質量、好ましくは10−25%乾燥質量、又は10−40%乾燥質量である。加水分解は、弱酸性、好ましくはpHが2から6の範囲内で行われる。
同時加水分解発酵の段階(段階c)は、好ましくは、30から70℃の範囲の温度で行われる(段階bの加水分解は、好ましくは段階cの加水分解と発酵よりも高い温度で行われる)。加水分解は、6から96時間の反応時間で、この温度で活性な第二の酵素を用いて行われる。
サッカロミセスセレビシェ(Saccharomyces cerevisiae)、VTT株B−03339などの遺伝子組み換え生物(GMO)を含む
ピキア・スチピチス(Pichia stipitus)
キャンディダ・シェハーテ(Candida shehatae)
ハンゼヌラ・ポリモルファ(Hansenula polymorpha)
パキソレン・タンノフィラス(Pachysolen tannophilus)
ブレッタノミセス・ナールデネンシス(Brettanomyces naardenensis)
ピキア・セゴビエンシス(Pichia segobiensis)
ピキア・グイレルモンディ(P. guillermondii)
ピキア・ナガニシ(P. naganishii)
キャンディダ・テナス(Candida tenuis)
キャンディダ・アルビカンス(C. albicans)
キャンディダ・トロピカリス(C. tropicalis)
キャンディダ・マルトサ(C. maltosa)
キャンディダ・トレシ(C. torresii)
メツキニコウィア・ビクスピダタ(Metschnikowia bicuspidata)
メツキニコウィア・ゾベリ(Metschnikowia zobellii)
スポロパキデルミア・クエルクーム(Sporopachydermia quercuum)
ウィンゲア・ロベルトシ(Wingea robertsii)
細菌
ザイモモナス・モビリス(Zymomonas mobilis)
エスケリキア・コリ(E. coli)(GMO−カンタ/カントジャ(kanta/kantoja))
クレブシエラ・オキシトカ(Klebsiella oxytoca)(GMO−カンタ(kanta))
菌類
フザリウム・オキシスポルム(Fusarium oxysporum)
キャンディダ・グイレルモンディ(Candida guillermondii)
キャンディダ・ミレリ(C. millerii)
キャンディダ・トロピカリス(C. tropicalis)
キャンディダ・パラプシロシス(C. parapsilosis)
ペトロミセス・アルベルテンシス(Petromyces albertensis)
デバロミセス・ハンセニ(Debaromyces hansenii)
セルロモナス・セルランス(Cellulomonas cellulans)
コリネバクテリウム属(Corynebacteriumusp.)
セラチア・マルセッセンス(Serratia marcescens)
特に、発酵菌は、主要なリグノセルロース由来の糖からエタノールを生成する能力のある酵母である。
濾過段階から得られた液体画分の濃度は、その液体を発酵混合物へ添加する前に高められる。したがって、ヘミセルロース画分の濃度を5−60%の乾燥質量濃度まで増加させるのが好ましい。
前処理の条件に依存するが、液体画分は、発酵を阻害する可能性のある基質からヘミセルロース画分を解放するための無害化操作が施されてもよい。阻害物は、例えば、揮散、蒸発、イオン排除、樹脂又は活性炭処理法によって除去可能である。
段階cの間に発酵に利用可能な炭水化物の基質の本質的な部分がエタノールへ発酵してしまったときに、液体画分が添加される。加水分解中に生成した、好ましくは、少なくとも50質量%、特に少なくとも55質量%又は少なくとも60質量%の利用可能な単糖、特にヘキソースとペントースは、液体画分が添加される前に発酵してエタノールになる。濃縮されたヘミセルロース画分は、つぎに、10分から48時間、好ましくは約15分から24時間の期間中に添加され、その期間の後、発酵は、さらに6から72時間、好ましくは8から48時間、温度30−70℃、pH4から6において継続される。
エタノール蒸留と脱水は、従来又は新規の技術で行われる。
上記の酵素加水分解段階は、セルラーゼ酵素の混合物を用いて実施可能である。混合物は、特に、主要な3つの種類の酵素、すなわち、セロビオヒドロラーゼ(CBH)、エンドグルカナーゼ(EG)、ベータ−グルコシダーゼからなる。さらに、混合物は、ヘミセルラーゼなど、ほかの加水分解酵素を含んでいてもよい。酵素の混合物の組成は、炭水化物、特にセルロースを効率よく単糖へ加水分解するために最適化さている。このために、セロビオヒドロラーゼはセルロースの結晶質部分に作用し、エンドグルカナーゼは主にセルロースの非晶質部分に作用することが必要とされ、ベータ−グルコシダーゼは、セロビオースが最終生成物阻害によってCBH酵素の作用を阻害するため、加水分解混合物からセロビオースを除去することが必要とされる。加水分解の機構は良く知られており、さらに詳細は、例えばティーリ(1997)によって説明されている。現在の市販用のセルラーゼ酵素の調製品は、主に菌類(例えば、トリコデルマ(Trichoderma)、アスペルギルス(Aspergillus))に由来している。混合物の特性は、生物技術的方法を用いて特定の条件に適合するように改善又は構成が可能である。混合物は、遺伝子工学の方法を用いて、ほかの生命体に由来する新規のセルラーゼ蛋白質を含むように変更されてもよく、又は現在のセルラーゼ蛋白質の特性は蛋白質工学によって改善されてもよい。
以下の限定されない実施例は、本発明をさらに説明するものである。
針葉樹材を蒸気で前処理し、2つの画分、主にセルロースを含む固体画分と、主にヘミセルロース糖と阻害化合物を含む可溶画分に分けた。固体画分を濾過、洗浄し、懸濁させて乾燥体14.4%を有する繊維懸濁液を形成させた。市販の酵素調製品(セルクラスト(Celluclast)1、5L FG、20FPU/g乾燥質量、及びノボザイム(Novozym)188、ベータ−グルコシダーゼ用量200nkat/g乾燥質量)を用いて、50℃で2から20時間、繊維を前加水分解した。
針葉樹材を蒸気で前処理し、2つの画分、主にセルロースを含む固体画分と、主にヘミセルロース糖を含む可溶画分に分けた。固体画分を濾過、洗浄し、懸濁させて乾燥体14.5%を有する繊維懸濁液を形成させた。市販の酵素調製品を用いて、50℃で繊維を前加水分解した。加水分解の条件は、13.3%固体乾燥質量、酢酸緩衝液中、pH5であり、使用した酵素調製品は、セルクラスト(Celluclast)1、5L FG、20FPU/g乾燥質量、及びベータ−グルコシダーゼ用量200nkat/g乾燥質量のノボザイム(Novozym)188であった。20時間後、前加水分解されたものを30℃に下げ、接種前に栄養素に懸濁させた酵母(VTT−B−03339株)を、水に対して10体積%(前加水分解されたものの)で接種した。対照となる処理を、酵素の添加後すぐに処理の初期において酵母を接種したことを除いて、同様の条件で行った。
針葉樹材を蒸気で前処理し、2つの画分、主にセルロースを含む固体画分と、主にヘミセルロース糖を含む可溶画分に分けた。固体画分を濾過、洗浄し、懸濁させて乾燥体18%を有する繊維懸濁液を形成させた。市販の酵素調製品を用いて、50℃で繊維を前加水分解した。加水分解の条件は、16.2%固体乾燥質量、酢酸緩衝液中、pH5であり、使用した酵素調製品は、セルクラスト(Celluclast)1、5L FG、20FPU/g乾燥質量、及びベータ−グルコシダーゼ用量200nkat/g乾燥質量のノボザイム(Novozym)188であった。前加水分解後、繊維画分中の約20%のセルロースがグルコースへ加水分解されていた。
a)加水分解の開始時に(加水分解において結果として13.3%固体乾燥重量となった)
b)酵母と同時に発酵の開始時に
c)発酵が開始した後の結果として2回の添加によって
のいずれかにおいて添加した。
ヘミセルロース濾液を蒸気で前処理されたトウヒの繊維から分離し、60−65℃で真空蒸発によって4.8倍に濃縮した。濃縮の前後において、HPLCによって濾液の単糖といくつかの阻害化合物である酢酸、フルフラール、5−ヒドロキシメチルフルフラール(5−HMF)を分析した。
工程の全体について、高い固体乾燥質量濃度(前加水分解段階において13質量%)条件で、終わりの方のSSF段階の間に濃縮されたヘミセルロース画分(27%糖濃度)を添加して、試験を行った。実験用発酵槽中でpHと温度を制御しスラリーを効率的に混合しながら、実験を行った。13%の濃度で前加水分解段階と同時に50℃において実験を開始し(実施例2で説明したように酵素を添加)、24時間継続した。前加水分解後、繊維画分中の60%のセルロースがグルコースに加水分解した。
Claims (27)
- 繊維質のリグノセルロース原材料からのエタノールの製造方法であって、
a)濃度が高められたセルロースを含む固体のリグノセルロース画分と、可溶化したヘミセルロースを主に含む液体画分とへ、原材料を変換すること、
b)繊維質のリグノセルロース材料を高濃度でセルロース酵素を用いて加水分解し、増加した流動性を有する変性リグノセルロース材料を与えること、
c)変性リグノセルロース材料を同時に、セルラーゼを用いて引き続いて加水分解するとともに、発酵混合物中でエタノール発酵させること、
d)発酵を継続して利用可能な炭水化物の本質的な部分をエタノールへ変換すること、
e)可溶化したヘミセルロースを含む液体画分を発酵混合物へ添加して発酵を継続すること、
f)発酵混合物からエタノールを回収すること
を備えたことを特徴とするエタノールの製造方法。 - 段階aで原材料が蒸気爆発を受けることを特徴とする請求項1記載のエタノールの製造方法。
- 段階bの加水分解は、40−90℃の温度で0.5から24時間行われることを特徴とする請求項1又は2記載のエタノールの製造方法。
- 段階bの加水分解は、10−25%乾燥質量の濃度で行われることを特徴とする請求項3記載のエタノールの製造方法。
- 段階bの加水分解は、pHが2から6の範囲内で行われることを特徴とする請求項3又は4記載のエタノールの製造方法。
- 段階bの加水分解は、第一のセルラーゼ調製とともに行われ、段階cの加水分解は、第二のセルロース調製とともに行われ、前記第一と第二のセルラーゼは異なっていることを特徴とする請求項3から5のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 段階bで用いられる酵素は、広域型のセルラーゼを有し、30から90℃の範囲の温度で活性であることを特徴とする請求項1から6のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 酵素は、セロビオヒドロラーゼ活性、エンドグルカナーゼ活性、ベータ−グルコシダーゼ活性、ヘミセルラーゼ活性からなる群から選択される少なくとも2つの活性を有していることを特徴とする請求項7記載のエタノールの製造方法。
- 段階bの加水分解は、段階cの加水分解と発酵よりも高い温度で行われることを特徴とする請求項1から8のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 段階cは、30から70℃の範囲の温度で行われることを特徴とする請求項1から9のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 段階cで用いられる酵素は、広域型のセルラーゼを有し、30から90℃の温度で活性であることを特徴とする請求項1から10のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 酵素は、セロビオヒドロラーゼ活性、エンドグルカナーゼ活性、ベータ−グルコシダーゼ活性、ヘミセルラーゼ活性からなる群から選択される少なくとも2つの活性を有していることを特徴とする請求項11記載のエタノールの製造方法。
- 段階cで用いられる酵素は、段階cからeにおいて存在するリグノセルロース材料を加水分解する能力を有することを特徴とする請求項11又は12項記載のエタノールの製造方法。
- 発酵段階は、主要なリグノセルロース由来の糖であるヘキソースとペントースを発酵する能力を有する発酵菌の存在下で行われることを特徴とする請求項1から13のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 発酵菌は、30−70℃の温度で主要なリグノセルロース由来の糖からエタノールを生成する能力を有することを特徴とする請求項14記載のエタノールの製造方法。
- 発酵菌は、主要なリグノセルロース由来の糖からエタノールを生成する能力のある酵母であることを特徴とする請求項14又は15記載のエタノールの製造方法。
- 発酵は、30から70℃の温度で行われ、加水分解は、6から96時間の反応時間で、この温度で活性な第二の酵素を用いて継続されることを特徴とする請求項1から16のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 可溶化したヘミセルロースを含む液体画分は、少なくとも50質量%の利用可能なヘキソースとペントースが発酵してエタノールになったときに、発酵混合物へ添加されることを特徴とする請求項1から17のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 液体画分の濃度は、段階aの後と段階dの前に高められることを特徴とする請求項18記載のエタノールの製造方法。
- ヘミセルロース画分は、5−60%の乾燥質量濃度で添加されることを特徴とする請求項19記載のエタノールの製造方法。
- 液体画分は、発酵を阻害する可能性のある基質からヘミセルロース画分を解放するための無害化操作が施されることを特徴とする請求項1から20のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 阻害物は、揮散、蒸発、イオン排除、樹脂又は活性炭処理法によって除去されることを特徴とする請求項21記載のエタノールの製造方法。
- 濃縮されたヘミセルロース画分は、10分から48時間の期間中に添加され、その期間の後、発酵は、さらに6から72時間、温度30−70℃、pH4から6において継続されることを特徴とする請求項18から22のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- 第一及び第二の酵素は、同じ系統であり、段階bからeに含まれる全体の工程でリグノセルロース材料の効率的な加水分解のために設計されたものであることを特徴とする請求項1から23のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- リグノセルロース原材料は、針葉樹材、広葉樹材、専用の作物、農業廃棄物、古紙、林業からの副産物が起源であることを特徴とする請求項1から24のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
- −繊維質のリグノセルロース材料を10から40%乾燥重量の濃度でセルラーゼ酵素を用いて加水分解し、約20から80%の炭水化物を加水分解し、ヘキソースとペントースを含む変性リグノセルロース材料を与え、前記材料は増加した流動性を有すること、
−変性リグノセルロース材料を同時に、セルラーゼを用いて引き続いて加水分解するとともに、発酵混合物中でヘキソースとペントースについてエタノール発酵させること、
−少なくとも50質量%の利用可能なヘキソースとペントースが発酵してエタノールになったときに、可溶化したヘミセルロースを含む液体画分を発酵混合物へ添加し、発酵を継続すること、
−発酵混合物からエタノールを回収すること
を備えたことを特徴とする請求項1から25のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。 - 繊維質のリグノセルロース材料は、炭水化物を含むことを特徴とする請求項1から26のいずれか1項記載のエタノールの製造方法。
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