JP2008278830A - 腹膜透析下での腹膜障害モデル動物及びその利用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】腹膜表面に組織障害を有する非ヒト動物を準備する準備工程と、この非ヒト動物の腹腔内に補体活性化因子を投与する投与工程とを備える、腹膜透析下での腹膜障害モデル動物の作製方法。前記準備工程は、非ヒト動物の腹膜表面を擦過することを含む工程としてもよい。前記投与工程は、非ヒト動物の腹腔に補体活性化因子とともに腹膜透析用液または同等の浸透圧液を投与する工程としてもよく、投与工程を複数回実施してもよい。さらに前記投与工程は、補体活性化因子として真菌由来の細胞膜成分、特にザイモザン、を投与する工程であってもよい。
【選択図】図1
Description
本発明のモデル動物作製方法は、腹膜表面に組織障害を有する非ヒト動物を準備する準備工程と、前記非ヒト動物の腹腔内に補体活性化因子を投与する投与工程と、を備えることができる。
本作製方法で準備する非ヒト動物は、特に限定しないでヒト以外の霊長類、非霊長哺乳類等を使用できる。具体的には、ヒト以外の霊長類としては類人猿、新世界ザル及び旧世界ザルが挙げられる。非霊長哺乳類としては、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、ニワトリのほか、ウサギ、ラット、マウス、ハムスター、ギニアピッグ等のげっ歯類が挙げられる。なかでも、ウサギ、ラット、マウス等のげっ歯類は、実験動物として入手及び取り扱い等において都合がよい。特に、ラットやマウスが好ましい。
次に、この非ヒト動物の腹腔内に補体活性化物質を投与する。腹膜表面に組織障害を形成した非ヒト動物の腹腔に補体活性化物資を投与することで、腹膜表面にて補体系が活性化される結果、ヒトにおける腹膜炎、特に、沈静後にも継続的に進行する腹膜炎様の障害状態を形成することができる。
液と同様に調製することができる。なお、各溶質を溶解して調製された腹膜透析 液は、軟質プラスチック製バッグあるいはガラス製容器などに封入した後、高圧蒸気滅菌や熱水滅菌を行うことが好ましい。
本発明の腹膜透析下での腹膜障害モデル動物は、既述したように、持続性進行性腹膜炎様の障害を有するという特徴を有している。この特徴は、以下の所見によっても説明することができる。なお、以下の特徴は、持続性進行性腹膜炎様障害の一側面であり、全てを常に備えている必要はない。
腹膜中の炎症細胞の集積度が正常腹膜に比して高いこと、腹膜肥厚の進展、腹膜中のフィブリン析出の継続及び新生毛細脈管の形成が挙げられる。これらは、いずれも、上記方法で作製したモデル動物においては補体活性化物質投与停止後であっても観察される。
壁側腹膜におけるプラークの形成及びプラークの拡大(補体活性化物質投与停止後における)及び新生毛細血管の形成が挙げられる。
腹膜下組織における補体の沈着傾向が挙げられる。ここで沈着傾向とは、正常のモデル動物に比して腹膜組織下により多くの補体系成分が分布することを意味している。また、腹膜表面に組織障害を形成したモデル動物に高浸透圧液のみを投与したモデル動物に比して腹膜組織下により多くの補体系成分が分布していることを意味している。腹膜組織下とは、腹膜表層から浸潤細胞層までに至る層を意味している。補体系成分の沈着傾向は、補体活性化物質の投与中及び投与停止も一定期間継続される。腹膜組織下において沈着傾向がある補体系成分としては、C3及びC5b−9のいずれか又は双方が挙げられる。補体系成分は、例えば、血液、得られた組織の免疫染色や腹腔内洗浄液等により検出することができる。
腹膜表層における補体制御因子量の低減が観察される。例えば、低減する補体制御因子としては、C55が挙げられる。また、腹膜表層とその直下の浸潤細胞層における補体制御因子CD59量の増大が挙げられる。補体制御因子は、例えば、得られた組織を免疫染色したり、可溶化した組織を用いてウエスタンブロット解析や発現しているmRNAにより検出することができる。
本発明のスクリーニング方法は、本発明のモデル動物に被験成分を投与する投与工程と、前記被験成分を投与した非ヒトモデル動物における腹膜障害を評価する評価工程と、
を備えることができる。本スクリーニング方法によれば、ヒトにおける腹膜透析下で発症する腹膜炎、腹膜炎後の腹膜硬化症及び被嚢性腹膜硬化症の予防又は治療用の薬剤をスクリーニングすることができる。
FormのsC5b−9)とすることができる。補体価はMayer法による免疫比濁法等の公知の方法で測定することができる。また、特定の補体やsC5b−9については、免疫比濁法、ELISA等の酵素免疫法やネフェロメトリー法等により測定することができるほか、mRNAを抽出してRT−PCRにより測定することもできる。さらにまた、採取した腹膜透析液(又は排液)中のFDP(フィブリン及びフィブリノーゲン分解物)、フィブリノーゲン、炎症性サイトカインも同様に利用できる。FDP及びフィブリノーゲンは、抗フィブリノーゲン抗体を用いてラテックス凝集法等の公知の方法で測定することができる。炎症性サイトカインは、ELISAや抽出mRNAを用いるRT−PCR等のPCR法により測定することができる。
本発明の腹膜劣化抑制剤又は腹膜透析下における腹膜障害の予防若しくは治療用剤は、、補体活性化を抑制する化合物を有効成分とすることができる。本発明の腹膜劣化抑制剤又は腹膜障害の予防若しくは治療用剤によれば、腹膜透析等における腹膜劣化を抑制でき、また、感染等による腹膜炎、腹膜硬化症並びに被嚢性腹膜硬化症を予防又は治療することができる。補体活性化を抑制する化合物としては、既述の上記化合物の他、上記スクリーニング方法で補体活性化抑制作用に基づいて腹膜障害の抑制が肯定された化合物を用いることができる。また、本剤においては、有効成分である補体活性化抑制化合物は、1種又は2種以上の複数の化合物を組み合わせて使用してもよい。
本発明の腹膜透析液は、補体活性化を抑制する化合物を含有することができる。腹膜透析液に含まれる当該有効成分の量は、特に限定されないが、投与濃度としては、1μg/ml以上10mg/ml以下が好ましい。より好ましくは、0.1mg/ml以上2mg/ml以下である。腹膜透析液としては、既述の高浸透圧液のうちで腹膜透析液の形態で使用することができる。
本発明の腹膜透析療法は、腹膜透析に伴って補体活性化を抑制する化合物を投与する工程を備えることができる。補体活性化抑制化合物は、腹膜透析液とともにあるいは別個に投与することができる。投与方法については、既に記載した範囲で適宜選択すればよい。
本発明の診断方法は、被験個体から採取した腹膜液、腹膜透析液及び腹膜透析排液の補体価及び/又は補体系成分を測定する工程を備えることができる。この診断方法によれば、これらの項目を測定することで、腹膜内における補体活性化傾向を検出することができる。補体活性化傾向を肯定できる場合には、腹膜劣化、腹膜炎後における予後の悪化傾向(持続性進行性腹膜炎の存在)、腹膜硬化症及び被嚢性腹膜硬化症への進行段階を診断することができる。測定対象となる補体及び補体活性化産物は、必要に応じて選択されるが、既に説明した補体系成分を対象とすることができる。また、これらについての測定方法も既に説明した方法の他公知の方法を適宜選択することができる。
本実施例におけるプロトコールを図1に示す。まず、SDラットを吸入麻酔下で、傍左正中切開を行い開腹し、60秒間15mlのPP製チューブで右壁側腹膜を擦過した。その後速やかに閉腹した。その際の最後の糸を掛ける時に、グループ1には4.25w/v%酸性腹膜透析液(以下、PD液)のみ2mlを、グループ2には4.25w/v%%酸性PD液2mlザイモザンを懸濁して、初日(図1におけるDay0に相当する。)の腹腔内投与を行った。擦過処理の術者による差の要素を防ぐため、同一の術者によって行われ、術者に盲目的に群の振り分けは行われた。
第一にDay1、3及び5にラットを屠殺し、開腹して、肉眼的に評価した。さらに、その後、免疫組織化学的解析のために凍結切片と、病理学的評価を行うために、10%ホルマリン液での固定切片とをそれぞれ作製した。免疫組織化学的解析としては、浸潤細胞数、および補体系(C3、C5b−9等補体の活性化物質の沈着、および膜補体制御因子の分布)について評価を行った。病理学的評価としては、腹膜表層および下層の肥厚の評価(光学顕微鏡下で厚さの測定を任意の5点で行い、その平均値を、各個体の代表値とした。)を含めた病理的検討を行った。
[肉眼的評価]
肉眼的評価結果を図2に示す。図2に示すように、ザイモザンを投与したグループ2では明らかにプラーク形成が壁側腹膜表面に認められた。これに対して、グループ1では、Day18までの間を通じて、明らかなプラーク形成が認められなかった。グループ1とグループ2のプラーク形成の差は、Day3及びDay5において徐々に顕著になるとともに、Day18では、一層顕著であった。Day18では、グループ2の壁側腹膜に、プラークの拡大と共に新生毛細血管が確認することができた。また、グループ2のDay36では、肉眼的に腹膜下に走行する血管が腹膜の肥厚のため確認し難くなった。
免疫組織化学的解析結果を図3〜図5に示す。図3は、補体の沈着傾向の評価結果であり、図4は、正常ラットにおける膜補体制御因子の分布を示す図であり、図5は、補体制御因子C55及びC59の分布の評価結果を示す図である。
腹膜の厚さの評価結果を図6に示す。グループ1及び2の間で比較検討すると、図6に示すように、ザイモザンを投与しないグループ1では、Day3をピークにその後は減少していった。これに対し、ザイモザンを投与したグループ2では、Day5以降、少なくともDay18までは、腹膜の肥厚は増悪することが観察された。この肥厚性変化はDay36においても増悪が認められた。
補体活性化抑制のために、使用したのはラットに存在するC3レベルでの補体の活性化を制御している膜補体制御因子Crry(ヒトのCD46とCD55の機能を併せ持った分子)をヒト免疫グロブリンのFc部分に融合したリコンビナント蛋白(Crry−Ig)を使用した。半減期が、単なるリコンビナント蛋白より長くなる。このリコンビナントタンパク質は、Hepburn, N. J., A. S. Williams, et al. (2006). "Generation and
functional characterisation of rat Crry-Fc fusion proteins." Mol. Immunol.
43: 188、Masashi mizuno et al., The Journal of
Immunology,1999 162:5477-5482、Masashi Mizuno et al.,
Int Arch Allegy Immunol 2002.;127:55-62及びHarris CL., Williams AS., Linton SM.,
Morgan BP.: Coupling complement regulators to immunoglobulin domains generates
effective anti-complement reagents with extended half-life in vivo. Clin. Exp.
Immunol. 129:198-207, 2002に開示されており、引用により本明細書にその内容が取り込まれるものとする。
[肉眼的評価]
Day5における肉眼的評価結果を図8に示す。図8に示すように、ザイモザンを投与したグループ3では明らかにプラーク形成が壁側腹膜表面に認められた。これに対して、膜補体制御因子リコンビナントタンパク質を併せて投与したグループ4では、明らかにプラークが少なかった。
Day5における免疫組織化学的解析結果を図9に示す。図9に示すように、補体の組織への沈着については、グループ4ではほとんど認められず、局所での抗補体治療の効果が認められた。
Day5における病理学的評価結果を図8及び図10に示す。図8及び図10に示すように、腹膜の肥厚は補体抑制群であるグループ4では、非抑制群であるグループ3に比べて明らかに軽減していた。すなわち、グループ4における腹膜肥厚は、実施例1のグループ1とほぼ同程度に抑制されていた。
Claims (18)
- 腹膜透析下での腹膜障害モデル動物の作製方法であって、
腹膜表面に組織障害を有する非ヒト動物を準備する準備工程と、
前記非ヒト動物の腹腔内に補体活性化因子を投与する投与工程と、
を備える、作製方法。 - 前記投与工程は、前記非ヒト動物の腹腔に前記補体活性化因子とともに腹膜透析用液又は同等の浸透圧液を投与する工程である、請求項1に記載の作製方法。
- 前記投与工程を複数回実施する、請求項1又は2に記載の作製方法。
- 前記投与工程は、補体活性化因子として真菌由来の細胞膜成分を投与する工程である、請求項1〜3のいずれかに記載の作製方法。
- 前記真菌由来の細胞膜成分はザイモザンである、請求項4に記載の作製方法。
- 前記投与工程後に、前記非ヒト動物の腹腔に腹膜透析液又は同等の浸透圧液を投与する工程を備える、請求項1〜5のいずれかに記載の作製方法。
- 前記準備工程は、前記非ヒト動物の腹膜表面を擦過することを含む工程である、請求項1〜6のいずれかに記載の作製方法。
- 前記モデル動物は腹膜炎後の腹膜硬化症のモデル動物である、請求項1〜7のいずれかに記載の作製方法。
- 前記準備工程は、前記非ヒト動物としてげっ歯類を用いる工程である、請求項1〜6のいずれかに記載の作製方法。
- 請求項1〜9のいずれかによって得られる、腹膜透析下での腹膜障害非ヒトモデル動物。
- 腹膜透析下での腹膜障害非ヒトモデル動物であって、
腹膜下組織に補体系成分の沈着傾向を有する、非ヒトモデル動物。 - 前記補体系成分はC3及び/又はC5b−9を含む、請求項11に記載の非ヒトモデル動物。
- 腹膜下組織における補体制御因子量の低減が観察される、請求項11又は12に記載のモデル動物。
- 腹膜透析下における腹膜障害の予防又は治療用剤のスクリーニング方法であって、
請求項10〜13のいずれかに記載の非ヒトモデル動物に被験成分を投与する投与工程と、
前記被験成分を投与した非ヒトモデル動物における腹膜障害を評価する評価工程と、
を備える、スクリーニング方法。 - 前記被験成分は、補体活性化を抑制する可能性のある化合物である、請求項14に記載のスクリーニング方法。
- 腹膜透析下における腹膜障害の予防又は治療用剤であって、
補体活性化を抑制する化合物を有効成分とする、予防又は治療用剤。 - 腹膜炎後に投与される、請求項16に記載の予防又は治療用剤。
- 腹膜透析液であって、
補体活性化を抑制する腹膜劣化抑制剤を含有する、腹膜透析液。
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Non-Patent Citations (3)
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JPN6012062320; 日本腎臓学会誌 Vol.49, No.3, 20070425, 241 * |
JPN6012062322; 日本透析医学会雑誌 Vol.39 No.Supplement 1, 20060518, 720 * |
JPN6012062325; Colorectal Dis. Vol.3, No.5, 200109, 338-344 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2634041C1 (ru) * | 2016-05-23 | 2017-10-23 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Красноярский государственный медицинский университет им. В.Ф. Войно-Ясенецкого" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО КрасГМУ им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого Минздрава России) | Способ моделирования разлитого гнойного перитонита у крыс линии Wistar |
JP2020503498A (ja) * | 2016-10-27 | 2020-01-30 | アレクシオン ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | 補体関連障害におけるC5b−9沈着に関するアッセイ |
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RU2723745C1 (ru) * | 2019-11-21 | 2020-06-17 | федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ставропольский государственный аграрный университет" | Способ моделирования интраперитонеального стафилококкового инфекционного процесса |
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