JP2008224561A - 表面プラズモン増強蛍光センサ - Google Patents
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Abstract
【解決手段】励起光8を発する光源7と、励起光8を透過させる材料からなる誘電体ブロック22と、その一表面22aに形成された金属膜20と、試料保持部5と、励起光8を、誘電体ブロック22と金属膜20との界面に向けて入射させる入射光学系7と、前記界面から染み出すエバネッセント波に励起されて、試料1中に含まれる物質が発した波長λ2の蛍光F2を検出する測定用蛍光検出手段9とからなる蛍光センサにおいて、励起光8によって励起される位置に配された、前記物質とは異なる蛍光体32と、この蛍光体32が発した波長λ3の基準蛍光F3を検出する基準蛍光検出手段9と、該手段9が検出した基準蛍光強度に基づいて、測定用蛍光検出手段9が検出した蛍光強度を規格化する演算手段29とを設ける。
【選択図】図1
Description
所定波長λ1の励起光を発する光源と、
前記励起光を透過させる材料から形成された誘電体ブロックと、
この誘電体ブロックの一表面に形成された金属膜と、
この金属膜の近傍位置に試料を保持する試料保持部と、
前記励起光を、前記誘電体ブロックと金属膜との界面に向けて、全反射条件を満たすように誘電体ブロックを通して入射させる入射光学系と、
前記界面に前記励起光が入射したとき、該界面から染み出すエバネッセント波に励起されて、前記試料中に含まれる物質が発した波長λ2の蛍光を検出する測定用蛍光検出手段とを備えてなる表面プラズモン増強蛍光センサにおいて、
前記励起光によって励起される位置に配された、前記物質とは異なる蛍光体と、
前記蛍光体が発した波長λ3(λ3≠λ2)の基準蛍光を検出する基準蛍光検出手段と、
この基準蛍光検出手段が検出した基準蛍光の強度に基づいて、前記測定用蛍光検出手段が検出した蛍光強度を規格化する演算手段とを備えたことを特徴とするものである。
前記測定用蛍光検出手段および基準蛍光検出手段として共通の光検出手段が用いられた上で、
波長λ2の蛍光を通過させる一方波長λ3の基準蛍光は遮断する第1のフィルタと、
波長λ2の蛍光を遮断する一方波長λ3の基準蛍光は通過させる第2のフィルタと、
前記第1のフィルタおよび第2のフィルタのうちの一方のみを選択的に前記共通の光検出手段の前段に配置可能なフィルタ切替手段とが設けられていることが望ましい。
波長λ2の蛍光は前記測定用蛍光検出手段に向けて、波長λ3の基準蛍光は前記基準蛍光検出手段に向けて各々進行させる光学素子が設けられてもよい。
0.1M(モル)のNHSと0.4MのEDCとを等体積混合した溶液を30μl加え、30分間室温静置。なお、
NHS:N-hydrooxysuccinimide
EDC:1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide
である。
(2)1次抗体4の固定化
PBSバッファ(pH7.4)で5回洗浄後、1次抗体溶液(500μg/ml)を30μl加え、30〜60分間室温静置
(3)未反応の -COOH基をブロッキング
PBSバッフア(pH7.4)で5回洗浄後、1Mのエタノールアミン(pH8.5)を30μl加え、20分間室温静置。さらにPBSバッフア(pH7.4)で5回洗浄。
2 抗原
4 1次抗体
6 2次抗体
7 光源
8 励起光
9 光検出器
10 蛍光体
20 金属膜
22 誘電体ブロック
24 集光レンズ
26 第1フィルタ
27 第2フィルタ
28 アクチュエータ
29 演算回路
31、31a 不撓性膜
32 蛍光色素
40 蛍光体
41 光源の出力可変回路
50 回折格子
51 光検出器(測定用蛍光検出手段)
52 光検出器(基準蛍光検出手段)
53 集光レンズ
Claims (10)
- 所定波長λ1の励起光を発する光源と、
前記励起光を透過させる材料から形成された誘電体ブロックと、
この誘電体ブロックの一表面に形成された金属膜と、
この金属膜の近傍位置に試料を保持する試料保持部と、
前記励起光を、前記誘電体ブロックと金属膜との界面に向けて、全反射条件を満たすように誘電体ブロックを通して入射させる入射光学系と、
前記界面に前記励起光が入射したとき、該界面から染み出すエバネッセント波に励起されて、前記試料中に含まれる物質が発した波長λ2の蛍光を検出する測定用蛍光検出手段とを備えてなる表面プラズモン増強蛍光センサにおいて、
前記励起光によって励起される位置に配された、前記物質とは異なる蛍光体と、
前記蛍光体が発した波長λ3(λ3≠λ2)の基準蛍光を検出する基準蛍光検出手段と、
この基準蛍光検出手段が検出した基準蛍光の強度に基づいて、前記測定用蛍光検出手段が検出した蛍光強度を規格化する演算手段とを備えたことを特徴とする表面プラズモン増強蛍光センサ。 - 前記測定用蛍光検出手段および基準蛍光検出手段として共通の光検出手段が用いられた上で、
波長λ2の蛍光を通過させる一方波長λ3の基準蛍光は遮断する第1のフィルタと、
波長λ2の蛍光を遮断する一方波長λ3の基準蛍光は通過させる第2のフィルタと、
前記第1のフィルタおよび第2のフィルタのうちの一方のみを選択的に前記共通の光検出手段の前段に配置可能なフィルタ切替手段とが設けられたことを特徴とする請求項1記載の表面プラズモン増強蛍光センサ。 - 前記測定用蛍光検出手段および基準蛍光検出手段として互いに別個の光検出手段が用いられた上で、
波長λ2の蛍光は前記測定用蛍光検出手段に向けて、波長λ3の基準蛍光は前記基準蛍光検出手段に向けて各々進行させる光学素子が設けられたことを特徴とする請求項1記載の表面プラズモン増強蛍光センサ。 - 前記金属膜の表面に、試料中の特定物質と結合する物質が固定され、この物質に前記蛍光体が固定されていることを特徴とする請求項1から3いずれか1項記載の表面プラズモン増強蛍光センサ。
- 前記試料中の特定物質と結合する物質が、試料中の抗原と結合する抗体であることを特徴とする請求項4記載の表面プラズモン増強蛍光センサ。
- 前記誘電体ブロックの一部に前記蛍光体が固定されていることを特徴とする請求項1から3いずれか1項記載の表面プラズモン増強蛍光センサ。
- 前記金属膜の表面に膜が形成され、この膜に前記蛍光体が固定されていることを特徴とする請求項1から3いずれか1項記載の表面プラズモン増強蛍光センサ。
- 前記膜が、疎水性材料からなる不撓性膜であることを特徴とする請求項7記載の表面プラズモン増強蛍光センサ。
- 前記蛍光体が、前記試料中に混合されていることを特徴とする請求項1から3いずれか1項記載の表面プラズモン増強蛍光センサ。
- 前記蛍光体が多光子吸収によって発光した蛍光を基準蛍光として用いる構成を有することを特徴とする請求項1から9いずれか1項記載の表面プラズモン増強蛍光センサ。
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