JP2008179587A - 血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制剤 - Google Patents
血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制剤 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】グルコサミン塩を有効成分とする血管内皮細胞における接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制剤。
【選択図】なし
Description
(1)グルコサミン塩を有効成分とする血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制剤、
(2)グルコサミン塩を有効成分とする血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制組成物、
(3)グルコサミン塩を有効成分とする血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制による動脈硬化の予防及び/又は治療用医薬組成物、
(4)グルコサミン塩を有効成分とする血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制による動脈硬化の予防及び/又は治療のための食品用添加物、
に関するものである。
本発明におけるグルコサミン塩としては薬理学的に許容されるものであれば特に制限はなく、無機酸塩、有機酸塩いずれも使用できるが一般的には硫酸塩もしくは塩酸塩等の無機塩が使用され、本発明においては塩酸塩が好ましい。有機酸塩としては例えば酢酸塩、クエン酸塩、リンゴ酸塩等が挙げられる。
従って、本発明における接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制剤は、接着分子の発現抑制作用及び単球遊走因子の産生抑制作用を発揮する限り、グルコサミン塩単独、賦形剤などを混合して製剤化したもの、また食品または嗜好品などと混合したもの何れをも含むものである。
これらの食品中におけるグルコサミン塩の含量は特に限定されないが通常食品全体に対して0.05%以上、好ましくは0.1% 以上、更に好ましくは0.3%以上、場合により0.5%以上であり、上限は特に無いが味覚等の点から通常10%以下、好ましくは5%以下、更に好ましくは4% 以下である。
上記のように本発明においては食品に配合して用いることもできることから、血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制による動脈硬化の予防及び/又は治療のための食品用添加物としても有用である。
本発明において、血管内皮細胞における接着分子例えばICAM-1の発現抑制及び単球遊走因子例えばMCP-1の産生抑制のためのグルコサミン塩の投与量は該薬効を発揮する量であれば特に制限はない。通常成人当たり1日0.3g以上、より好ましくは0.5g以上、更に好ましくは1g以上で、上限は毒性もほとんどないので特に制限はないが、通常20g以下、好ましくは10g以下、更に好ましくは5g以下程度である。
次に、本発明を実施例により、具体的に説明する。
(1)試験に用いた細胞、培地および刺激剤
ヒト臍帯静脈血管内皮細胞であるHUVEC(商品コード:CC−2517A;三光純薬株式会社)を用いて、2%ウシ胎児血清を含むブレットキットEGM−2培地(商品コード:CC−3162;三光純薬株式会社)で培養した。なお使用したHUVEC細胞は、初代培養から2−6代目の細胞を用いた。
また、上記血管内皮細胞の刺激剤としては、動脈硬化巣で発現しているLL−37を使用した。ヒトLL−37はアミノ酸37個からなるペプチドであり、今回は化学合成したものを用いた。
(2)培養方法およびMCP-1の産生量の定量
プラスチックプレート(面積2cm2)に5×104個のHUVECを播いて16時間培養して60%の密度にする。これを、更に、グルコサミン塩酸塩(GlcN)0.1mMおよび1mMの存在下、またはグルコサミン塩酸塩(GlcN)の非存在下で1時間培養した後、LL−37(濃度4μM)を加えて20時間培養し、上清を回収した。得られた培養上清を、マウス抗ヒトMCP−1抗体(DuoSet ELISA Development kit;R&D Systems社製)を表面に吸着させたプレートに加え、2時間静置した。その後、ツイーン(Tween)20を0.05%含有したリン酸緩衝液でプレートを3回洗浄し、そこにビオチン標識したヤギ抗ヒトMCP−1抗体を加えて2時間反応させた。次いで、ツイーン(Tween) 20を0.05%含有したリン酸緩衝液でプレートを3回洗浄し、ストレプトアビジンで標識した西洋わさびペルオキシダーゼ(horseradish peroxidase;HRP)と20分反応させた後に、反応基質(過酸化水素水:テトラメチルベンジジン=1:1)と反応させ、30分後に硫酸(1M)で反応を停止し、450nmにおける吸光度を測定することによってMCP−1を定量した その結果を表1に示す。
(3)試験結果
下記の表1から明らかな通り、LL-37の添加のみでグルコサミン塩酸塩の無添加の場合(LL-37のみ)では、何も添加しない無添加(Resting)に比して、LL-37の刺激によりMCP-1の産生量が急増しているが、グルコサミン塩酸塩添加群(LL-37+0.1mM GlcNおよびLL-37+1mM GlcN)では、LL-37刺激によりMCP-1の産生量が急増していたMCP-1の産生量が、グルコサミン塩酸塩の濃度依存的に、かつ、有意差検定において有意に、抑制された。
MCP-1産生
MCP-1 産生量 (pg/ml)
無添加(Resting) 466.358±102.873
LL-37のみ 1742.865±144.285
LL-37+0.1mM GlcN 1487.019±275.451
LL-37 +1mM GlcN 1190.913±299.976*
* : p<0.05 (LL-37単独群との比較)
(1)試験に用いた細胞、培地および刺激剤
実施例1において記載したものを使用した。
(2)培養方法およびICAM-1タンパクの発現量の定量
プラスチックプレート(面積9.5cm2)に5×105個のHUVECを播いて16時間培養して60%の密度にする。これを、更に、グルコサミン塩酸塩(GlcN)0.1mMおよび1mMの存在下、またはグルコサミン塩酸塩(GlcN)の非存在下で1時間培養した後、LL−37(濃度4μM)を加えて20時間培養した。そしてその細胞を溶解液[1% Triton X-100, 0.5% Nonidet P-40, 10mM Tris-塩酸, pH7.4 150mM 塩化ナトリウム, 1mM エチレンジアミン四酢酸, 1mMエチレングリコールビス(2-アミノエチルエーテル)四酢酸, 1/25v/v タンパク分解酵素阻害剤(商品名:CompleteTM;Roche社製), 1mM ジイソプロピルフルオロリン酸]で溶解し、BCAタンパク定量キット(Pierce社製)を用いてタンパク定量した。さらに、10μgの細胞溶解物を10%SDS-ポリアクリルアミドゲルで電気泳動し、タンパク質をメンブレンフィルターに転写した。そして該メンブレンフィルターをウサギ抗ヒトICAM-1抗体(商品コード:H-108;Santa Cruz Biotechnology社製)と2時間反応させた後、HRPと結合した抗ウサギ抗体と1時間反応させた。その後、HRPの反応基質(商品名:SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate; Pierce社製)と反応させ、ルミノイメージアナライザー(LAS-3000;富士写真フイルム社製)を用いてICAM-1の定量を行った。その結果を表2に示す。
(3)測定結果
下記の表2から明らかな通り、LL-37の添加のみ(グルコサミン塩酸塩の無添加)の場合(下表2のLL-37のみ)では、何も添加しない場合(下表2の無添加(Resting))に比して、LL-37の刺激によりICAM-1タンパクの発現量が急増している。
一方、グルコサミン塩酸塩添加群(下表2のLL-37+0.1mM GlcNおよびLL-37+1mM GlcN)では、LL-37刺激により急増したICAM-1タンパクの発現量が、グルコサミン塩酸塩の濃度依存的に、かつ、有意差検定において有意に、抑制された。
ICAM-1 タンパク質 発現
相対ICAM-1産生量
無添加(Resting) 0.425±0.114
LL-37のみ 1±0
LL-37 + 0.1mM GlcN 0.815±0.216
LL-37 + 1mM GlcN 0.510±0.084*
* : p<0.05 (LL-37単独群との比較)
Claims (4)
- グルコサミン塩を有効成分とする血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制剤。
- グルコサミン塩を有効成分とする血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制組成物。
- グルコサミン塩を有効成分とする血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制による動脈硬化の予防及び/又は治療用医薬組成物。
- グルコサミン塩を有効成分とする血管内皮細胞接着分子の発現抑制及び単球遊走因子の産生抑制による動脈硬化の予防及び/又は治療のための食品用添加物。
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CN113476461A (zh) * | 2021-08-23 | 2021-10-08 | 苏州大学 | 一种提高抑炎型巨噬细胞趋化的药物及其应用 |
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JP2003137789A (ja) * | 2001-11-02 | 2003-05-14 | Yaizu Suisankagaku Industry Co Ltd | 一酸化窒素消去剤 |
JP2004083432A (ja) * | 2002-08-23 | 2004-03-18 | Rohto Pharmaceut Co Ltd | エラスターゼ阻害剤 |
JP2007330250A (ja) * | 2006-06-19 | 2007-12-27 | Elson Kk | 抗老化用飲食品 |
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2007
- 2007-01-26 JP JP2007016004A patent/JP5060136B2/ja active Active
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