JP2008000027A - アルツハイマー病モデル動物およびその用途 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】ヒト型Aβを産生し得るキメラAPP遺伝子を含むADモデル非ヒト哺乳動物であって、対応する野生型動物と比較して、8週齢におけるAβ42/Aβ40比が約7倍以上(ホモ接合体においては約140倍以上)であることを特徴とする動物またはその生体の一部、さらに、対応する野生型動物と比較して、APPの発現量に有意な差がないことをさらなる特徴とする、該動物またはその生体の一部。該動物またはその生体の一部を用いたアルツハイマー病予防・治療薬のスクリーニング方法。
【選択図】なし
Description
Nat. Genet., 1(5): 345-7 (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 96: 3053-8 (1999) Science, 274: 99-102 (1996) Nature, 373: 523-7 (1995) Nature, 395: 755-6 (1998) Nature, 383: 710-3 (1996) Neuron, 17: 181-90 (1996)
(1) APPを非生理的に高発現しているため、軸索輸送に影響を与える可能性がある。
(2) Aβの切断に伴い、神経保護作用やプロテアーゼ阻害作用を有する可溶性断片(sAPP)や転写制御に関与する細胞質断片(AICD)も過剰産生されるので、これらの影響(特にsAPPの神経保護作用が神経変性に対して抑制的に働く)が除外されず、厳密な意味でAD病理を的確に再現しているとは考えられない。
(3) プリオン蛋白(非特許文献3)、PDGF(非特許文献4)、Thy-1(非特許文献5)等のプロモーターが使用されているので、本来APPを発現しAβを産生する神経細胞以外の神経細胞からもAβが非生理的に産生される。
さらに、(狭義の)Tgマウスに共通の問題点として、導入遺伝子が染色体上にランダムに挿入されることによる影響や、世代間における遺伝子発現量の変化などがある。
本発明者らは、これらの知見に基いてさらに研究を重ねた結果、本発明を完成するに至った。
[1]ヒト型Aβを産生し得るキメラAPP遺伝子を含むADモデル非ヒト哺乳動物であって、対応する野生型動物と比較して、8週齢におけるAβ42/Aβ40比が約7倍以上であることを特徴とする動物またはその生体の一部;
[2]ヒト型Aβを産生し得るキメラAPP遺伝子を含むADモデル非ヒト哺乳動物であって、ホモ接合体での8週齢におけるAβ42/Aβ40比が、対応する野生型動物と比較して約140倍以上であることを特徴とする動物またはその生体の一部;
[3]対応する野生型動物と比較して、APPの発現量に有意な差がないことをさらなる特徴とする、上記[1]または[2]記載の動物またはその生体の一部;
[4]内在性APP遺伝子のAβコード配列がヒトAβをコードする配列で置換されたノックイン動物である、上記[3]記載の動物またはその生体の一部;
[5]キメラAPP遺伝子に、Aβ42の産生を促進し得る1以上の変異が導入されていることを特徴とする、上記[1]〜[4]のいずれかに記載の動物またはその生体の一部;
[6]変異がFADにおけるAPP遺伝子変異である、上記[5]記載の動物またはその生体の一部;
[7]変異がスウェーデン変異である、上記[6]記載の動物またはその生体の一部;
[8]ヒトAPP遺伝子の第716番目のIleを他のアミノ酸(例えば、Phe)に置換する変異が対応するマウスAPP遺伝子にさらに導入されていることを特徴とする、上記[6]または[7]記載の動物またはその生体の一部;
[9]非ヒト哺乳動物がマウスまたはラットである、上記[1]〜[8]のいずれかに記載の動物またはその生体の一部;
[10]非ヒト哺乳動物がマウスである、上記[9]記載の動物またはその生体の一部;
[11]キメラAPP遺伝子についてのホモ接合体である、上記[1]〜[10]のいずれかに記載の動物またはその生体の一部;
[12]キメラAPP遺伝子についてのヘテロ接合体である、上記[1]〜[10]のいずれかに記載の動物またはその生体の一部;
[13]上記[1]〜[12]のいずれかに記載の動物と、APP遺伝子以外の遺伝子改変を有する神経変性疾患モデル非ヒト哺乳動物との交配により得られる動物またはその生体の一部;
[14]上記[1]〜[13]のいずれかに記載の動物またはその生体の一部に被験物質を適用し、脳内へのAβの蓄積を検定することを特徴とする、Aβの蓄積を抑制する物質のスクリーニング方法;
[15]上記[1]〜[13]のいずれかに記載の動物またはその生体の一部に被験物質を適用し、脳内の神経原線維変化を検出することを特徴とする、神経原線維変化を抑制する物質のスクリーニング方法;
[16]上記[1]〜[13]のいずれかに記載の動物またはその生体の一部に被験物質を適用し、脳内の病変を検出することを特徴とする、該病変を抑制する物質のスクリーニング方法;
[17]脳内の病変が神経変性または炎症反応である、上記[16]記載の方法;
[18]AD予防・治療薬のスクリーニング用である、上記[14]〜[17]のいずれかに記載の方法;
[19]AD予防・治療薬の薬効評価用である、上記[14]〜[17]のいずれかに記載の方法;
[20]上記[1]〜[13]のいずれかに記載の動物またはその生体の一部に被験物質を適用し、Aβ蓄積部位における該被験物質の存在を検定することを特徴とする、Aβに対して親和性を有する物質のスクリーニング方法;および
[21]上記[1]〜[13]のいずれかに記載の動物またはその生体の一部から、ADの病態の発現の前後で採取した試料における遺伝子転写産物、遺伝子翻訳産物または代謝産物を網羅的に測定し、該病態の発現の前後で変動する物質を同定することを特徴とする、該病態のバイオマーカーのスクリーニング方法;
などを提供するものである。
しかしながら、本発明のADモデル動物は、好ましくは対応する野生型動物と比較してAPPの発現量に有意な差がないことを特徴とするので、内在性APP遺伝子のAβコード配列部分がヒトAβをコードする配列で置換されたノックイン(KI)動物であることが望ましい。したがって、好ましくは、本発明のTg動物は、ES細胞へ、目的DNAを適当なターゲッティングベクターを用いて導入し、相同組換えにより内在性APP遺伝子のAβコード配列をヒトAβをコードする配列で置換することにより作製される。
以下、本発明のADモデル動物に関し、KI動物を例にとって詳細に説明するが、(i)ヒト型Aβを産生し得るキメラAPP遺伝子を含み、且つ(ii)8週齢におけるAβ42/Aβ40比が、対応する野生型動物と比較して約7倍以上である限り、好ましくはさらに、(iii)対応する野生型動物と比較してAPPの発現量に有意な差がない限り、KI技術以外の手法で作製される動物もまた、本発明のADモデル動物に包含される。
本発明のTg動物(好ましくはKI動物)の生体の一部としては、脳、脳の各部位(例、嗅球、扁桃核、大脳基底球、海馬、視床、視床下部、大脳皮質、延髄、小脳等)の組織片および細胞などが好ましく例示される。
また、哺乳動物以外にもニワトリなどの鳥類が本発明で対象とする「非ヒト哺乳動物」と同様の目的に用いることができる。
具体的には、該キメラAPP遺伝子に導入され得る、Aβ42の産生を促進し得る変異としては、例えば、FADにおいて見出されているAPP遺伝子変異が挙げられる。そのような変異としては、スウェーデン変異(APPの670番目のLysおよび671番目のMetがそれぞれAsnおよびLeuで置換されている(図1);「K670N」および「M671L」と略記する場合がある)、ハーディー(Hardy)変異(APPの717番目のValがIle、PheもしくはGlyで置換されている)、あるいはAPPの692番目のAlaおよび693番目のGluがそれぞれGlyで置換される変異等が挙げられるが、それらに限定されない。あるいは、FADで見出される以外の、Aβ42の産生を促進し得る変異として、例えば、Aβの切り出しに影響を与えるβ-およびγ-セクレターゼ切断部位周辺のアミノ酸残基における変異が挙げられる。具体例として、上記非特許文献2において、インビトロでAβ42/Aβ40比を上昇させることが報告されている、ヒトAPPの714番目のThr、716番目のIle、717番目のVal(該変異はHardy変異としてFADでも見出されている)、720番目のLeuおよび722番目のMetのいずれかを他のアミノ酸、例えばPhe等で置換する変異などが挙げられるが、それらに限定されない。好ましくは、FADにおける変異としてスウェーデン変異が、その他の変異としてヒトAPPの716番目のIleを他のアミノ酸(例えばPhe(図1);「I716F」と略記する場合がある)に置換する変異が挙げられる。
また、第二次セレクションとして、例えば、G-バンディング法による染色体数の確認等により行うことができる。得られるES細胞の染色体数は正常数の100%が望ましいが、細胞株樹立の際の物理的操作等の関係上困難な場合は、ES細胞への遺伝子導入の後、正常細胞(例えば、マウスでは染色体数が2n=40である細胞)に再びクローニングすることが望ましい。
ES細胞は、適当な条件により、高密度に至るまで単層培養するか、または細胞集塊を形成するまで浮遊培養することにより、頭頂筋、内臓筋、心筋などの種々のタイプの細胞に分化させることが可能であり〔M. J. Evans及びM. H. Kaufman, ネイチャー(Nature)第292巻、154頁、1981年;G. R. Martin, プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシーズ・ユーエスエー(Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.)第78巻、7634頁、1981年;T. C. Doetschmanら, ジャーナル・オブ・エンブリオロジー・アンド・エクスペリメンタル・モルフォロジー、第87巻、27頁、1985年〕、ターゲッティングベクターを導入されたES細胞を分化させて得られるキメラAPP遺伝子発現非ヒト哺乳動物細胞は、インビトロにおけるヒトAβの細胞生物学的検討において有用である。
いずれの場合も、宿主胚は受精卵への遺伝子導入における採卵用雌として使用され得る非ヒト哺乳動物から同様にして採取することができるが、例えばマウスの場合、キメラマウス形成へのES細胞の寄与率を毛色(コートカラー)で判定し得るように、ES細胞の由来する系統とは毛色の異なる系統のマウスから宿主胚を採取することが好ましい。例えば、ES細胞が129系マウス(毛色:アグーチ)由来であれば、採卵用雌としてC57BL/6マウス(毛色:ブラック)やICRマウス(毛色:アルビノ)を用い、ES細胞がC57BL/6もしくはDBF1マウス(毛色:ブラック)由来やTT2細胞(C57BL/6とCBAとのF1(毛色:アグーチ)由来)であれば、採卵用雌としてICRマウスやBALB/cマウス(毛色:アルビノ)を用いることができる。
また、生殖系列キメラ形成能はES細胞と宿主胚との組み合わせに大きく依存するので、生殖系列キメラ形成能の高い組み合わせを選択することがより好ましい。例えばマウスの場合、129系統由来のES細胞に対してはC57BL/6系統由来の宿主胚等を用いることが好ましく、C57BL/6系統由来のES細胞に対してはBALB/c系統由来の宿主胚等が好ましい。
採卵用雌マウスは約4〜約6週齢程度が好ましく、交配用の雄マウスとしては約2〜約8ヶ月齢程度の同系統のものが好ましい。交配は自然交配によってもよいが、好ましくは性腺刺激ホルモン(卵胞刺激ホルモン、次いで黄体形成ホルモン)を投与して過剰排卵を誘起した後に行なわれる。
共培養法による場合は、8細胞期胚および桑実胚(例えばマウスの場合、交配後約2.5日)を採卵用雌の卵管および子宮から採取して(あるいは8細胞期以前の初期胚を卵管から採取した後、上述の胚培養用培地中で8細胞期または桑実胚期まで培養してもよい)酸性タイロード液中で透明帯を溶解した後、ミネラルオイルを重層した胚培養用培地の微小滴中にキメラAPP遺伝子を含むES細胞塊(細胞数約10〜約15個)を入れ、さらに上記8細胞期胚または桑実胚(好ましくは2個)を入れて一晩共培養する。得られた桑実胚または胚盤胞を上記と同様にして受胚用雌非ヒト哺乳動物の子宮内に移植する。
生殖系列キメラの選択は、まずES細胞の雌雄が予め判別されている場合はES細胞と同じ性別のキメラマウスを選択し(通常は雄性ES細胞が使用されるので、雄キメラマウスが選択される)、次いで毛色等の表現型からES細胞の寄与率が高いキメラマウス(例えば、50%以上)を選択する。例えば、129系マウス由来の雄性ES細胞であるD3細胞とC57BL/6マウス由来の宿主胚とのキメラ胚から得られるキメラマウスの場合、アグーチの毛色の占める割合の高い雄マウスを選択するのが好ましい。選択されたキメラ非ヒト哺乳動物が生殖系列キメラであるか否かの確認は、適当な系統の同種動物との交雑により得られるF1動物の表現型に基づいて行なうことができる。例えば、上記キメラマウスの場合、アグーチはブラックに対して優性であるので、雌C57BL/6マウスと交雑すると、選択された雄マウスが生殖系列キメラであれば得られるF1の毛色はアグーチとなる。
さらに、Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 第98巻, 第13090-13095頁, 2001年に記載されるように、雄非ヒト哺乳動物から採取した精原細胞をSTOフィーダー細胞と共培養する間にウイルスベクターに感染させた後、雄性不妊非ヒト哺乳動物の精細管に注入して雌非ヒト哺乳動物と交配させてることにより、効率よくキメラAPPへテロKI(+/-)産仔を得ることができる。
特に、本発明の特に好ましい態様である、Aβ(特にAβ42)の切り出しを促進する変異(好ましくはスウェーデン変異およびI716F変異)を有するキメラAPP遺伝子KI動物においては、ヘテロ接合体でも、8週齢におけるAβ42/Aβ40比が野生型動物に対して約7倍程度であり、ホモ接合体にいたっては、8週齢におけるAβ42/Aβ40比が野生型動物の約140倍以上にまで上昇する。ホモ接合体におけるこの数値は、70ないし80代のヒト健常者脳におけるAβ42/Aβ40比に匹敵する。Aβ分解酵素であるネプリライシン遺伝子やAβ産生酵素であるプレセニリン(PS)1遺伝子の異常による研究などから、脳内Aβ42量のわずかな上昇(例えば、1.5倍)がADの発症年齢を決定している可能性が示唆されることを考えれば、本発明のADモデル動物が従来にない優れた特性を有していることは明らかであろう。
「APP遺伝子以外の神経変性疾患に関与する遺伝子改変」としては、例えば、FADにおいて見出されているPS1およびPS2遺伝子における変異、アポリポ蛋白E(ApoE)におけるApoE4遺伝子多型、ネプリライシン遺伝子の欠損、タウ遺伝子における変異等の自然突然変異もしくは遺伝子多型、さらには、それらの遺伝子のTgもしくはKI、神経変性に保護的に作用する遺伝子のKO、ノックダウン(アンチセンスDNAや中和抗体をコードするDNAの導入により遺伝子発現が検出不可能もしくは無視し得る程度にまで低下したTg動物)もしくはドミナントネガティブ変異の導入などが含まれる。
あるいは、動物の行動解析などにより、学習・記憶能力の差違を投与群と非投与群との間で比較してもよい。被験物質投与群において、非投与群と比較して、有意な学習・記憶障害の改善が認められれば、該被験物質を学習・記憶障害改善薬として選択することができる。
該物質の投与量は、投与対象の年齢、体重、投与ルート、重篤度、薬物受容性などにより異なるが、例えば、成人1日あたり活性成分量として約0.0008〜約2.5mg/kg、好ましくは約0.008〜約0.025mg/kgの範囲であり、これを1回もしくは数回に分けて投与することができる。
ADの早期診断を目標として、核磁気共鳴画像撮影(MRI)やポジトロン放出断層撮影(PET)、断層シンチグラフィー(SPECT)のためのアミロイドに対して親和性を有する化合物の開発が進められている。例えば、アルカリコンゴーレッド等のような各種染料に123Iや99mTc等の放射性核種を組み合わせたアミロイド検出用のプローブが報告されているが、実用に足るまでには至っていない。
本発明のADモデル動物やそれ由来の組織・細胞(例えば、脳組織片もしくは神経細胞)は、アミロイド検出用プローブの候補物質の効果を評価するための有用なツールとなり得る。即ち、本発明のADモデル動物から採取した生体の一部(例えば、脳組織片もしくは神経細胞)に被験物質を添加し、アミロイドの免疫染色像と該被験物質の集積とを比較するか、あるいは本発明のADモデル動物に被験物質を投与し、MRI、PET、SPECTなどの手法により画像撮影を行い、得られた画像と、該動物の摘出脳から調製した切片に対する免疫組織化学染色像とを比較することにより、被験物質のアミロイド検出用プローブとしての有効性を評価することができる。
例えば、トランスクリプトーム解析においては、動物種に応じて市販されているDNAマイクロアレイを用いて遺伝子発現を網羅的に解析することができる。また、プロテオーム解析においては、二次元ゲル電気泳動法と飛行時間型質量分析(TOF-MS)を組み合わせた方法、メタボローム解析においては、NMRやキャピラリー電気泳動、LC-MSによる方法などがそれぞれ公知であり、それらを適宜組み合わせて実施することができる。
このようにして、ADのある病態の発現の前後で有意に発現が変動する物質が同定されれば、ADのバイオマーカーとして、ADの早期診断、特に発症前診断に利用することできる。尚、一旦、特定のバイオマーカーが同定されれば、その後のマーカー検出法(即ち、AD診断方法)は、各マーカーに適した方法により(例えば、マーカーが蛋白質やペプチドの場合は、それに特異的な抗体を用いたイムノアッセイにより、マーカーが遺伝子転写産物の場合は、該RNAと相補的なプローブもしくは該RNAの一部を増幅し得るプライマーを用いてノーザンブロット解析やRT-PCRを行うことにより)行うことが好ましい。
マウスAPP のゲノムDNAクローンは、Bacterial Artificial Chromosome(細菌人工染色体)ライブラリーから得た129/Svマウス株から単離した。ターゲティングベクターは、pBluescript II KS (+) ベクター (Stratagene社)を基に、以下のDNAフラグメントを用いて作製した:
1)イントロン14 Hind III サイト〜イントロン15の6.6kb APP遺伝子フラグメント(5’アームとして)
2)目的とする変異を導入したヒトAPP cDNA由来エクソン16〜18フラグメント
3)転写を終結させる250bp SV40初期mRNAポリアデニル化シグナルの3つのタンデムリピート(Maxwell et al.,1989, Biotechniques 7, p.276-280)
4)イントロン16〜イントロン17の4.6kb BamHI−SacIAPP 遺伝子フラグメント(3’アームとして)
5)2.0kb pgk−neo遺伝子カセット(ポジティブ選択用)
6)pMC1DT−ApA由来の1.2kb Xho IジフテリアトキシンA−フラグメント(ネガティブ選択用)(Yagi et al.,1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 87, p.9918-9922;Gomi et al.,1995, Neuron 17, p.29-41)。
上記フラグメントを 1)、2)、3)、5)、4)の順に連結し、pBluescript II KS(+)ベクターに挿入した。また、上記6)のフラグメントはpBluescript II KS (+)ベクターのXho I サイトに挿入した。
マウス胚盤胞株129/O1a由来のE14細胞をES細胞系として用いた(Hooper et al.,1987, Nature 326, p.292-295)。細胞培養とターゲティング実験は、既報に従って行った(Itohara et al.,1993, Cell 72, p.337-348)。要約すると、SacI処理によって作製した線状化ターゲティングベクター30μgを用い、Gene Pulser(0.4cm電極距離で800Vと3mF、Bio-Rad)によってES細胞にエレクトロポレーションを行った。150μg/mlのG418で選択したクローン由来ゲノムDNAをXbaI消化後、5'外部プローブによるサザンハイブリダイゼーション法によってスクリーニングを行った。次に、5'外部プローブにより変異の導入が確認されたクローンのゲノムDNAを Stu I消化後、3’外部プローブによるサザンハイブリダイゼーション法を行い同定した。
キメラマウスの作出は、Bradley らによる既報(1984, Nature 309, p.255-256)に記載された方法に準じて行った。交配後3.5日のC57BL/6J胚盤胞に、ES細胞をマイクロインジェクションした。注入後、胚を、偽妊娠ICRマウスの子宮に移した。得られたキメラマウスをC57BL/6Jマウスと更に交雑させ、ヘテロ接合マウスを作出した。
マウスの遺伝子型は、尾から調製したゲノムDNAのサザンブロット解析によって決定した。次いで、ヘテロ接合マウスをC57BL/6マウスと5〜6回戻し交配した。ホモ接合体を得るために、得られたヘテロ接合体同士を交雑させた。これにより、本発明のノックアウトマウスが得られた。
全てのマウスは、理研脳科学総合研究センターのリサーチリソースセンターによって維持され、全ての動物実験は、理研の動物実験ガイドラインに従って行った。
APP KIマウス(ヘテロ接合体APPWT/MTおよびホモ接合体APPMT/MT)および野生型マウス(APPWT/WT)(各3-4匹)を、ペントバルビタール麻酔下でマウス右心房からPBS還流を行い脱血後、マウスから脳を摘出した。摘出した脳を、トリス緩衝生理食塩水でホモジナイズし、超遠心分離後、得られた上清を可溶性画分とし、ペレットはグアニジン塩酸またはギ酸で可溶化して不溶性画分とした。各画分について、ヒトβアミロイド(1-40) および(1-42)ELISAキットワコー(和光純薬工業製)を用いて、サンドイッチELISA法によりAβ42およびAβ40含量を測定した。各画分の測定値の和を算出し、Aβ産生量とした。結果を図3に示す。野生型マウス脳では、通常Aβ42/Aβ40比は約0.2であるが、APP KIマウス脳では、8週齢のヘテロ接合体においてすら、Aβ42/Aβ40比は1.4で、野生型に比べて約7倍以上に上昇していた(図3C)。ホモ接合体においては、Aβ42/Aβ40比は野生型の約140倍以上もの上昇がみられた(図3C)。尚、総Aβ量は、ヘテロ接合体とホモ接合体との間で有意な差はなく、野生型マウスに比べて若干の減少が認められた(図3b)。
Claims (21)
- ヒト型Aβを産生し得るキメラアミロイド前駆体蛋白質遺伝子を含むアルツハイマー病モデル非ヒト哺乳動物であって、対応する野生型動物と比較して、8週齢におけるAβ42/Aβ40比が約7倍以上であることを特徴とする動物またはその生体の一部。
- ヒト型Aβを産生し得るキメラアミロイド前駆体蛋白質遺伝子を含むアルツハイマー病モデル非ヒト哺乳動物であって、ホモ接合体での8週齢におけるAβ42/Aβ40比が、対応する野生型動物と比較して約140倍以上であることを特徴とする動物またはその生体の一部。
- 対応する野生型動物と比較して、アミロイド前駆体蛋白質の発現量に有意な差がないことをさらなる特徴とする、請求項1または2記載の動物またはその生体の一部。
- 内在性アミロイド前駆体蛋白質遺伝子のAβコード配列がヒトAβをコードする配列で置換されたノックイン動物である、請求項3記載の動物またはその生体の一部。
- キメラアミロイド前駆体蛋白質遺伝子に、Aβ42の産生を促進し得る1以上の変異が導入されていることを特徴とする、請求項1〜4のいずれかに記載の動物またはその生体の一部。
- 変異が家族性アルツハイマー病におけるアミロイド前駆体蛋白質遺伝子変異である、請求項5記載の動物またはその生体の一部。
- 変異がスウェーデン変異である、請求項6記載の動物またはその生体の一部。
- ヒトアミロイド前駆体蛋白質遺伝子の第716番目のイソロイシン(Ile)を他のアミノ酸に置換する変異がさらに導入されていることを特徴とする、請求項6または7記載の動物またはその生体の一部。
- 非ヒト哺乳動物がマウスまたはラットである、請求項1〜8のいずれかに記載の動物またはその生体の一部。
- 非ヒト哺乳動物がマウスである、請求項9記載の動物またはその生体の一部。
- キメラアミロイド前駆体蛋白質遺伝子についてのホモ接合体である、請求項1〜10のいずれかに記載の動物またはその生体の一部。
- キメラアミロイド前駆体蛋白質遺伝子についてのヘテロ接合体である、請求項1〜10のいずれかに記載の動物またはその生体の一部。
- 請求項1〜12のいずれかに記載の動物と、アミロイド前駆体蛋白質遺伝子以外の遺伝子改変を有する神経変性疾患モデル非ヒト哺乳動物との交配により得られる動物またはその生体の一部。
- 請求項1〜13のいずれかに記載の動物またはその生体の一部に被験物質を適用し、脳内へのAβの蓄積を検定することを特徴とする、Aβの蓄積を抑制する物質のスクリーニング方法。
- 請求項1〜13のいずれかに記載の動物またはその生体の一部に被験物質を適用し、脳内の神経原線維変化を検出することを特徴とする、神経原線維変化を抑制する物質のスクリーニング方法。
- 請求項1〜13のいずれかに記載の動物またはその生体の一部に被験物質を適用し、脳内の病変を検出することを特徴とする、該病変を抑制する物質のスクリーニング方法。
- 脳内の病変が神経変性または炎症反応である、請求項16記載の方法。
- アルツハイマー病予防・治療薬のスクリーニング用である、請求項14〜17のいずれかに記載の方法。
- アルツハイマー病予防・治療薬の薬効評価用である、請求項14〜17のいずれかに記載の方法。
- 請求項1〜13のいずれかに記載の動物またはその生体の一部に被験物質を適用し、Aβ蓄積部位における該被験物質の存在を検定することを特徴とする、Aβに対して親和性を有する物質のスクリーニング方法。
- 請求項1〜13のいずれかに記載の動物またはその生体の一部から、アルツハイマー病の病態の発現の前後で採取した試料における遺伝子転写産物、遺伝子翻訳産物または代謝産物を網羅的に測定し、該病態の発現の前後で変動する物質を同定することを特徴とする、該病態のバイオマーカーのスクリーニング方法。
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