JP2007533655A

JP2007533655A - 慢性骨髄性白血病（ｃｍｌ）の治療のための４−アニリノ−３−キノリンカルボニトリル

Info

Publication number: JP2007533655A
Application number: JP2006539641A
Authority: JP
Inventors: フランク・チャールズ・ボシェル; ジェニファー・ミシェル・ゴラス; キム・ティモシー・アーント
Original assignee: Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 2003-11-06
Filing date: 2004-11-03
Publication date: 2007-11-22
Also published as: BRPI0416289A; CA2543163A1; AU2004289243A1; CR8350A; US20100029677A1; US7417148B2; US20050101780A1; WO2005046693A1; ZA200603596B; KR20060118461A; NO20062255L; SG146681A1; MXPA06004744A; EP1680119A1; RU2006113691A; AU2004289243B2; CN1874776A; ECSP066548A; US7919625B2; IL175424A0

Abstract

式（Ｉ）：

［式中：ｎは、１−３の整数であり；Ｘは、Ｎ、ＣＨであり、但し、ＸがＮのとき、ｎは２または３であり；Ｒは、１〜３個の炭素原子からなるアルキルであり；Ｒ^１は、２，４−ジＣｌおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌ；３，４，５−トリ−ＯＭｅ；２−Ｃｌおよび５−ＯＭｅ；２−Ｍｅおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジ−Ｍｅ；２，４−ジＭｅ−５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌおよび５−ＯＥｔであり；Ｒ^２は、１〜２個の炭素原子からなるアルキルである］
で示される化合物およびその医薬上許容される塩は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の治療に有用である。

Description

発明の詳細な説明

発明の背景
Ｂｃｒ−Ａｂｌの構造性チロシンキナーゼ活性は、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）細胞の増殖および生存を促進する。Ｂｃｒ−Ａｂｌチロシンキナーゼ活性またはＣＭＬ細胞中でＢｃｒ−Ａｂｌによって活性化されるシグナル伝達タンパク質の阻害は、増殖を妨げ、アポトーシス細胞死を引き起こす。選択的Ａｂｌキナーゼ阻害剤、ＳＴＩ−５７１（Ｇｌｅｅｖｅｃとして市販されている）は、培養ＣＭＬ細胞に対して毒性であり、ヌードマウスにおいてＣＭＬ腫瘍の退縮を引き起こし、現在、ＣＭＬ患者を治療するために使用されている。

造血幹細胞におけるＢｃｒ−Ａｂｌの発現は、癌化（transformation）を促進し、白血病誘発において初期に作用する。ＳＴＩ−５７１を用いる該キナーゼの阻害は、該疾患の慢性期においてＣＭＬを効果的に制御するが、より進行した患者では、しばしば、ＳＴＩ−５７１療法において病気が進行する。これらの観察は、ＳＴＩ−５７１によって影響されない付加的な分子変化が進行した疾患において役割を果たすことを示唆する。ＳＴＩ−５７１耐性のイン・ビトロモデルおよび耐性患者由来の臨床試料は、他のキナーゼの過剰発現または別個のシグナル伝達経路の活性化がＢｃｒ−Ａｂｌ独立性と関係することを明らかにした。Ｂｃｒ−Ａｂｌのチロシンキナーゼ活性の阻害は、ＳＴＩ−５７１の臨床的効力によって明らかにされるように、ＣＭＬを標的とするための効果的な策略である。Ｓｒｃファミリーキナーゼを包含する他の分子は、Ｂｃｒ−Ａｂｌから下流のシグナル伝達において役割を果たし、それ自体、ＳＴＩ−５７１−耐性疾患の治療のための潜在的な治療標的である。ＬｙｎおよびＨｃｋを包含するＳｒｃファミリーキナーゼは、Ｂｃｒ−Ａｂｌから下流のシグナル伝達に関係している。

選択的Ａｂｌキナーゼ阻害剤ＳＴＩ−５７１は、効果的であり、慢性期ＣＭＬの大抵の患者によってよく許容されているが、該疾患の移行期および急性転化期の患者は、あまり反応しない傾向にある。結果として、後期疾患において効果的な別の薬剤に対する要望がある。

発明の簡単な概要
本発明によると、構造式Ｉ：

［式中：
ｎは、１−３の整数であり；
Ｘは、Ｎ、ＣＨであり、但し、ＸがＮのとき、ｎは２または３であり；
Ｒは、１〜３個の炭素原子からなるアルキルであり；
Ｒ^１は、２，４−ジＣｌおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌ；３，４，５−トリ−ＯＭｅ；２−Ｃｌおよび５−ＯＭｅ；２−Ｍｅおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジ−Ｍｅ；２，４−ジＭｅ−５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌおよび５−ＯＥｔであり；
Ｒ^２は、１〜２個の炭素原子からなるアルキルである］
で示される化合物およびその医薬上許容される塩が提供される。

本発明の化合物は、ＣＭＬを治療、予防または阻害するために使用されうる。好ましい具体例において、化合物は、医薬組成物の一部として使用される。

本発明の特定の化合物は：
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−メチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［３−（４−エチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［２−（４−エチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［（１−エチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−６−メトキシキノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−エチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−プロピル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−４−［（３，４，５−トリメトキシフェニル）アミノ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２−クロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
６−メトキシ−４−［（５−メトキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジメチルフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
６−メトキシ−４−［（５−メトキシ−２，４−ジメチルフェニル）アミノ］−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−エトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
およびその医薬上許容される塩を包含する。

下記の実験的詳細は、本発明の理解の助けとして示され、特許請求の範囲において示される本発明を何ら制限するものではなく、そのように解釈されるべきではない。

発明の詳細な記載
本発明によると、構造式Ｉ：

本発明の化合物は、ＣＭＬを治療、予防または阻害するために使用されうる。好ましい具体例において、該化合物は、医薬組成物の一部として使用される。

医薬上許容される塩は、酢酸、乳酸、カルボン酸、クエン酸、桂皮酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、シュウ酸、プロピオン酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、グリコール酸、ピルビン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、サリチル酸、安息香酸、および同様な既知の許容される酸などの有機および無機酸から誘導されるものである。

「アルキル」なる語は、飽和脂肪族基をいい、直鎖アルキル基、分枝鎖アルキル基、シクロアルキル（脂環式）基、アルキル置換シクロアルキル基、およびシクロアルキル置換アルキル基を包含する。好ましい具体例において、直鎖または分枝鎖アルキルは、その骨格に３個以下の炭素原子を有する。

該化合物は、経口的に、病巣内、腹膜内、筋内、または静脈内注射によって；点滴によって；リポソーム媒介性送達によって；局所的、鼻、肛門、膣、舌下、尿管、経皮、髄腔内、目、または耳からの送達によって提供されうる。本発明の化合物の提供において一貫性を得るために、本発明の化合物は単位投与形態であることが好ましい。適当な単位投与形態は、錠剤、カプセルおよびサッシェまたはバイアル中の粉末を包含する。かかる単位投与形態は、０．１〜３００ｍｇ、好ましくは、２〜１００ｍｇの本発明の化合物を含有しうる。別の具体例において、単位投与形態は、５０〜１５０ｍｇの本発明の化合物を含有する。本発明の化合物は、経口投与することができる。かかる化合物は、１日に１〜６回投与してもよく、より普通には、１日に１〜４回投与されうる。有効量は、当業者に既知であり、それはまた、化合物の形態に依存するであろう。当業者は、慣用的に、経験的な活性試験を実施して、バイオアッセイにおける該化合物の生物活性を決定することができ、かくして、投与すべき投与量を決定することができる。

本発明の化合物は、通常の賦形剤、例えば、増量剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、フレーバー剤、着色添加剤、または担体と共に処方してもよい。担体は、例えば、希釈剤、エーロゾル、局所担体、水性溶液、非水性溶液または固体担体であってもよい。担体は、ポリマーまたは練り歯磨きであってもよい。本発明における担体は、標準的な医薬上許容される担体のいずれも、例えば、リン酸緩衝化セーライン溶液、酢酸緩衝化セーライン溶液、水、エマルジョン、例えば、油／水型エマルジョンまたはトリグリセリドエマルジョン、種々の型の湿潤剤、錠剤、被覆錠剤およびカプセルを包含する。

経口または局所的に提供される場合、かかる化合物は、異なる担体中における送達によって対象に提供されるであろう。典型的には、かかる担体は、賦形剤、例えば、デンプン、ミルク、糖、ある種の粘土、ゼラチン、ステアリン酸、タルク、植物性油脂、ゴムまたはグリコール類を含有する。特定の担体は、所望の送達方法に基づいて選択される必要があり、例えば、リン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）は、静脈内または全身性送達に使用でき、植物性油脂、クリーム、膏薬（salves）、軟膏（ointments）またはゲルは、局所的送達に使用されうる。

本発明の化合物は、新生物の治療または予防において有用な適当な希釈剤、保存料、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体と共に送達されうる。かかる組成物は、液状または凍結乾燥または乾燥処方であり、種々のバッファー内容物（例えば、トリス−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）の希釈剤、ｐＨおよびイオン強度、表面への吸着を防ぐための添加剤、例えば、アルブミンまたはゼラチン、界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ２０、ＴＷＥＥＮ８０、ＰＬＵＲＯＮＩＣＦ６８、胆汁酸塩）、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリコール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重硫酸ナトリウム）、保存料（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン）、増量（bulking）物質または等張性調節剤（例えば、ラクトース、マンニトール）、ポリマーの共有結合、例えば、ポリエチレングリコール、金属イオンとの錯化、またはハイドロゲルもしくはリポソームの粒状調製物中または該粒状調製物上への該化合物の取り込み、ミクロエマルジョン、ミセル、単層または多層ベシクル、赤血球ゴースト、またはスフェロブラストを包含する。かかる組成は、化合物または組成物の物理的状態、溶解性、安定性、イン・ビボでの放出速度、およびイン・ビボでのクリアランスに影響を及ぼすであろう。組成の選択は、新生物を治療または予防することのできる化合物の物理的および化学的特性に依存するであろう。
本発明の化合物は、長期にわたって化合物の持続性放出を可能にするカプセルを介して局所的に送達してもよい。放出制御または持続性放出組成物は、脂肪親和性デポー（例えば、脂肪酸、ワックス、油）中の処方を包含する。

本発明は、さらに、ＣＭＬを治療、予防または阻害するための活性な治療物質としての使用のための本発明の化合物を提供する。

本発明は、さらに、ヒトにおいてＣＭＬを治療する方法であって、有効量の本発明の化合物または医薬組成物を感染個体に投与することを特徴とする方法を提供する。患者に提供される投与量は、投与されているもの、投与目的、投与方法などによって変化するであろう。「治療上有効量」なる語は、ＣＭＬの症状を治療または改善するのに十分な量である。

本発明の化合物は、単独またはＣＭＬを治療するために使用される他の化合物と共に送達されうる。かかる化合物は、限定するものではないが、ＧＬＥＥＶＥＣ、ヒドロキシ尿素、ＩＦＮ−α’、細胞毒性薬、１７−（アリルアミノ）−１７−デメトキシゲルダナマイシンまたはその誘導体、またはウォートマンニン（wortmannin）を包含する。

本発明の化合物は、（ａ）市販の出発材料、（ｂ）文献に記載される手法のとおりに調製できる既知の出発材料、または（ｃ）本明細書中のスキームおよび実験的手法において記載される新規な中間体から調製された。本発明に包含される化合物は、米国特許第６，００２，００８号および第６，７８０，９９６号（かかる手法は、出典明示により、本明細書の一部とされる）において開示された合成経路にしたがって調製することができる。

反応は、使用される試薬および材料に適当で、かつ、成し遂げられる変換に適当な溶媒中で実施される。該分子上に存在する種々の官能基が指定される化学的変換と矛盾があってはならないことは、有機合成の分野における当業者によって理解される。特記しない場合、合成段階の順序、保護基の選択および脱保護条件は、当業者に容易に明らかであろう。さらに、いくつかの場合、出発材料上の置換基は、ある種の反応条件と不適合性であってもよい。所定の置換基に適切な制限は、当業者に明らかであろう。反応は、適宜、不活性雰囲気下で行った。

式Ｉの化合物の調製は、文献［Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉ，Ｄ．Ｈ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４４，３９６５（２００１）、Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉ，Ｄ．Ｈ．ら、ＪＭｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４４，８２２（２００１）、Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉ，Ｄ．Ｈ．ら、Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１３，３７９７（２００３）、Ｂｏｓｃｈｅｌｌｉ，Ｄ．Ｈ．ら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７，１５９９（２００４）、およびＹｅ，Ｆ．ら、２２１ｔｈＮａｔｉｏｎａｌＭｅｅｔｉｎｇｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ，Ｓａｎｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ（Ａｐｒｉｌ，２００１）］において報告されている。

本発明は、本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない下記の特定の実施例と共に、十分に記載されるであろう。

材料および方法：
Ｓｒｃキナーゼアッセイ、均質溶液に基づくアッセイ（Ｌａｎｃｅフォーマット）

キナーゼバッファー：
５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５
１０ｍＭＭｇＣｌ_２
２０μｇ／ｍｌＢＳＡ
０．００１％Ｂｒｉｊ−３５
（便宜上、２Ｘキナーゼバッファーを調製する：
１００ｍＭＨｅｐｅｓ，２０ｍＭＭｇＣｌ２，新鮮な４０μｇ／ｍｌＢＳＡおよび０．００２％Ｂｒｉｊを加える）

クエンチバッファー（反応混合物に対して１：１で直接添加するためのもの）
５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５
６０ｍＭＥＤＴＡ
２０μｇ／ｍｌＢＳＡ

Ｌａｎｃｅ検出バッファーおよびプレートブロッカー：
５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５
２０μｇ／ｍｌＢＳＡ

使用直前に、１００μｌ／ウェルにつき、ＥＵ−抗体ＰＴ６６（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）（１ｎＭ）およびＡＰＣ−ストレプトアビジン（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）（４μｇ／ｍｌ）を加える（最終２００μｌにつき、１００μｌ〜５０μｌｒｘｎ／５０μｌクエンチを加える）。５ＸＡＴＰ＝水中５００μＭ

１．９６ウェルプレートを２００μｌのＰＢＳでリンスする。９６ウェル黒色プレートを２０μｇ／ｍｌのＢＳＡを含有する２００μｌの５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５と共に１０分間、プレインキュベートする（ｌａｎｃｅ検出バッファー）。
２．キナーゼ反応を９６ウェルプレート中における全量５０μｌキナーゼバッファー中で行う。ビオチン化基質ペプチドを最終濃度２μＭで用い、５０μｌ反応につき５ｎｇのＰａｎｖｅｒａ由来のｓｒｃを用いる。反応は、１０μｌの５ＸＡＴＰ（最終濃度１Ｘ＝１００μＭ）によって開始し、３７℃で５０分間行う。（ｒｘｎにつき：２５μｌ２ｘキナーゼバッファー，１０μｌ水，５μｌ希釈化合物−１０％ＤＭＳＯ／１０ｍＭＨｅｐｅｓ。）
３．キナーゼ反応を止めるために、５０μｌのクエンチバッファーを加え、３０秒間振盪する。
４．ＥＵ抗体およびＡＰＣ−ストレプトアビジンを含有する１００μｌのＬａｎｃｅ検出バッファーを加える。使用直前に、１００μｌ／ウェルにつき、ＥＵ−抗体ＰＴ６６（１ｎＭ）およびＡＰＣ−ストレプトアビジン（４μｇ／ｍｌ）を加える（最終２００μｌにつき、１００μｌ〜５０μｌｒｘｎ／５０μｌクエンチを加える。）
暗所において、室温で１時間インキュベートする。ＷａｌｌａｃＶｉｃｔｏｒにおいて標準Ｌａｎｃｅプロトコールを用いて、プレートを解読する。

Ｓｒｃキナーゼアッセイ
Ｓｒｃ（ＵｐｓｔａｔｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，ＬａｋｅＰｌａｃｉｄ，ＮＹから購入した部分精製酵素調製物）チロシンキナーゼ活性の阻害剤をＥＬＩＳＡフォーマットにおいて分析する。ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍチロシンキナーゼアッセイキット（ＲｏｃｈｅＤｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）をＴｙｒ１５を含有するｃｄｃ２基質ペプチドと共に、アッセイに用いる。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）−結合型抗−ホスホチロシンを用いて、呈色反応によってリン酸化ペプチドを検出する。

反応条件：アッセイ時に新たに調製された各化合物の５つのマイクロリットルアリコートを、１０ｍＭＨＥＰＥＳｐＨ７．５，１０％ＤＭＳＯ中溶液として反応ウェルに加える。Ｓｒｃ、バッファーおよびペプチド／ウシ血清アルブミン混合物を含有する反応混合物の３５μＬを該化合物ウェルに加え、３０℃で１０分間インキュベートする（反応バッファー：５０ｍＭトリスＨＣｌｐＨ７．５，１０ｍＭＭｇＣｌ_２，０．１ｍＭＥＧＴＡ，０．５ｍＭＮａ_３ＶＯ_４）。該反応は、１０μＬのＡＴＰ（５００μＭ）の添加によって開始し、３０℃で１時間インキュベートし、２０μＬの０．５ＭＥＤＴＡの添加によって停止する。次いで、リン酸化ペプチドを含有する反応混合物をストレプトアビジンで被覆したマイクロタイタープレートに移し、２０分間結合させる。非結合ペプチドおよび反応混合物をデカントし、プレートをＰＢＳで６回洗浄する。キットに供給されるＨＲＰ−結合型ホスホチロシン抗体をプレートと共に１時間インキュベートし、次いで、デカントする。プレートを再び、ＰＢＳで６回洗浄する。基質を加え、４０５ｎｍで吸光度を測定する。

別法では、は、Ｄｅｌｆｉａフォーマット（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）を用い、ＨＲＰ−結合型ホスホチロシン抗体の代わりにユーロピウム−結合型ホスホチロシン抗体を用い、ＰｉｅｒｃｅＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋをウシ血清アルブミンの代わりに用い、キナーゼ反応および抗体結合の後に、６回の洗浄を行ったことを除いて、本質的に記載のとおりに行った。ユーロピウム蛍光を用いて、反応の程度をモニターした。

活性は、式：（１−Ａｂｓ／Ａｂｓ（ｍａｘ））ｘ１００＝％阻害によって算出された％阻害として決定される。ここに、複数の濃度の試験薬剤を用い、ＩＣ_５０（５０％阻害を与える濃度）を決定することができる。表２に示すように、本発明の化合物は、イン・ビトロでｓｒｃキナーゼを阻害する。

均質溶液に基づくＡｂｌキナーゼアッセイ：
Ａｂｌキナーゼ活性は、均質アッセイフォーマット（Ｌａｎｃｅ）において測定され、ここに、キナーゼによってリン酸化されたペプチドに結合した供与体−受容体複合体のルミネセンスが溶液中で測定される。

ビオチン化基質ペプチド：ビオチン−ＮＨ−ＫＥＥＥＡＩＹＡＡＰＦＡＫＫＫ−ＣＯＯＨ（Ｓｙｎｐｅｐ）
キナーゼバッファー：５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５；１０ｍＭＭｇＣｌ_２；２０μｇ／ｍｌＢＳＡ；０．００１％Ｂｒｉｊ−３５；便宜上、２ｘ濃縮物として調製される：１００ｍＭＨｅｐｅｓ，２０ｍＭＭｇＣｌ_２，新鮮な４０μｇ／ｍｌＢＳＡおよび０．００２％Ｂｒｉｊ−３５を加える。
等しい割合で反応混合物に加えられるべきクエンチバッファー：５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５；６０ｍＭＥＤＴＡ；２０μｇ／ｍｌＢＳＡ
Ｌａｎｃｅ検出バッファーおよびプレートブロッカー：５０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７．５；２０μｇ／ｍｌＢＳＡ
検出混合物：等しい割合でｒｘｎ混合物／クエンチ混合物中に加えられるべきＬａｎｃｅバッファー中における抗体−ＡＰＣ試薬。Ｅｕ−抗体ＰＴ６６（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＡＤ００６８；Ｌａｎｃｅ検出バッファー中１ｎＭ最終濃度）およびストレプトアビジンＳｕｒｅｌｉｇｈｔ−ＡＰＣ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ，ＣＲ１３０−１００；Ｌａｎｃｅ検出バッファー中４μｇ／ｍＬ最終濃度）を含有する１００μＬ／ウェルのＬａｎｃｅ検出バッファーを加える。

５ＸＡＴＰ＝水中５００μＭ

方法：
１．９６ウェルプレートを２００μｌのＰＢＳでリンスする。９６ウェル黒色プレート（ＴｈｅｒｍｏＬａｂＳｙｓｔｅｍｓＭｉｃｒｏＦｌｕｏｒ２黒色Ｕ底ミクロタイタープレート；＃７２０５）を２００μＬのＬａｎｃｅ検出バッファーと共に１０分間インキュベートする。
２．キナーゼ反応は、９６ウェルプレートの各ウェル中、全量５０μＬキナーゼバッファー／反応からなる。基質ペプチドは、最終濃度２μＭで存在し、Ｐａｎｖｅｒａ由来のｃ−Ａｂｌ（ｃ−ＡｂｌＰ３０４９）を５０μＬ反応あたり２．５ｎｇで含ませる（ｒｘｎあたり：２５μＬ２ｘキナーゼバッファー，１０μＬ水，５μＬ希釈化合物−１０％ＤＭＳＯ／１０ｍＭＨｅｐｅｓ，ｐＨ７．５）。反応は、１０μＬ５ＸＡＴＰ（最終濃度１Ｘ＝１００μＭ）の添加によって開始し、２７℃で３０分間持続する。
３．５０μＬのクエンチバッファーを加えて、キナーゼ反応を止める。
４．１００μＬの検出混合物を加える。
５．暗所において、室温で３０分間インキュベートする。ＷａｌｌａｃＶｉｃｔｏｒにおいて、６６５ｎｍでルミネセンスを測定する。

分析結果：
％阻害＝（Ｃｐｍ（試料）−Ｂｋｇ）／（Ｃｐｍ（対照）−Ｂｋｇ））Ｘ１００

Ｅｘｃｅｌ（Ｍｏｄｅｌ６３）用のＬＳＷデータ分析プラグインを用いて、ＩＣ５０値（ｙ＝Ｂｍａｘ／（１＋（ｘ／ＩＣ５０））双曲阻害曲線，Ｂｍａｘ〜０（ＩＣ５０）を計算する。

これらの形質転換Ｒａｔ２繊維芽細胞は、ｓｒｃ依存性懸濁液成長の測定のために用いられる。
１日目に、超低クラスタープレート（ＣｏｒｎｉｎｇＣｏｓｔａｒ，Ａｃｔｏｎ，ＭＡ）に、１ウェル当たり１０，０００細胞を播種する。別法では、超低クラスタープレート（Ｃｏｓｔａｒ３４７４）をＳｉｇｍａｃｏｔｅ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で処理し、７０％エタノールでリンスし、フード中で乾燥させ、５０００細胞を播種する。２日目に、１０μＭ〜０．００９μＭの連続２倍希釈で化合物を加え、５日目に、ＭＴＳ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を加える（１００μＬのＭＴＳ／培地混合物＋１００μＬのすでに細胞上にある培地。４９０ｎｍで吸光度を測定する）。結果を次のように分析して、増殖に関するＩＣ_５０（μＭ単位）を得る：
％阻害＝（Ａｂｓ４９０ｎｍ試料−ブランク）／（Ａｂｓ４９０ｎｍ化合物なし対照−ブランク）ｘ１００％

別法では、相対細胞数をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ^ＴＭ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）法によって決定した。全手順は、細胞数が１０００細胞／ウェルに減らされ、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ試薬をＭＴＳ試薬の代わりに加えて、ルミネセンスを読み取ったことを除き、同一であった。

足場非依存性Ｓｒｃ−形質転換繊維芽細胞増殖アッセイ
Ｒａｔ２繊維芽細胞を、次のとおりヒトｃ−Ｓｒｃ遺伝子の触媒ドメインを有するＣＭＶプロモーター制御性ｖ−Ｓｒｃ／ＨＵｃ−Ｓｒｃ融合遺伝子を含有するプラスミドで安定に形質転換する：
クローニングおよびプラスミド構築物：ｐＳｒｃＨｉｓ由来のＰｒａｇｕｅＣｖ−Ｓｒｃ遺伝子（ＷｅｎｄｌｅｒａｎｄＢｏｓｃｈｅｌｌｉ，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ４：２３１−２３６；１９８９）をＮｃｏＩおよびＢａｍＨＩで切り出し、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼで処理し、Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼでの処理によって平滑末端化したｐＴＲＥ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＲＩ部位にクローン化した。ｖ−Ｓｒｃのカルボキシル末端約２５０アミノ酸をコードしているＢｇＩ２−Ｘｂａｌフラグメントを、ｖ−Ｓｒｃ：：ｈｕｃ−Ｓｒｃ融合フラグメントを含有するＢｇＩ２−Ｘｂａｌフラグメント（下記）で置換することによって、ＰＲＣｖ−Ｓｒｃ：：ｈｕｃ−Ｓｒｃ融合を作成した。ヒトｃ−Ｓｒｃの部分的クローンは、胸部ｃＤＮＡライブラリー（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ）から、オリゴヌクレオチド対５’−ＣＧＣＣＴＧＧＣＣＡＡＣＧＴＣＴＧＣＣＣＣＡＣＧＴＣＣＡＡＧＣＣＧＣＡＧＡＣＴＣＡＧＧＧＣＣＴＧ−３’（配列番号１）および５’−ＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＡＧＣＡＧＧＧＡＧＣＡＧＣＴＧＧＧＣＣＴＧＣＡＧＧＴＡＣＴＣＧＡＡＧＧＴＧＧＧＣ−３’（配列番号２）を用いて増幅し、ｐＣＲＳｃｒｉｐｔ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）中にクローン化した。該クローン中のヒトｃ−Ｓｒｃの触媒ドメインは、これらのオリゴヌクレオチドで増幅された（ｖ−ｓｒｃヌクレオチド７３４をヒトｃ−Ｓｒｃヌクレオチド７４２に、ヒトｃ−Ｓｒｃヌクレオチド１５５１をｖ−ｓｒｃヌクレオチド１５４３に、ｖ−Ｓｒｃおよびヒトｃ−ＳｒｃＯＲＦｓにおいて融合させる）。２つのｖ−Ｓｒｃ配列をＰＣＲによって増幅した（１９８塩基対ｖ−ｓｒｃ５’フラグメント：５’−ＧＴＧＣＣＴＡＴＴＧＣＣＴＣＴＣＣＧＴＴＴＣＴＧＡＣ−３’（配列番号：３）（プライマー１）ないし５’−ＡＣＧＴＧＧＧＧＣＡＧＡＣＧＴＴＧＧＣＣＡＧＧＣＧ−３’）（配列番号４））（２５２塩基対３’ｖ−ｓｒｃフラグメント：５’−ＣＡＧＣＴＧＣＴＣＣＣＴＧＣＴＴＧＴＧＴＧＴＴＧＧ−３’（配列番号５）（ｖ−ｓｒｃＯＲＦにおける残基１５４３−１５６７ｖ−ｓｒｃ）ないし５’−ＡＴＧＡＡＴＴＣＴＣＴＡＧＡＧＧＡＡＧＡＣＧＣＣＡＴＣＡＴＡＴＴＣＣＡＡＧＣＡＧ−３’（配列番号６）（ＸｂａｌおよびＥｃｏＲＩ制限部位を加えられたｖ−ｓｒｃＡＴＧ由来の残基１７６９−１７９４（プライマー４））。プライマー１および４を用いて、ｖ−Ｓｒｃ：ヒトｃ−Ｓｒｃ融合フラグメントならびにラウス肉腫ウイルス由来のＰｒａｇｕｅＣｖ−Ｓｒｃ遺伝子および３’非翻訳領域から増幅させた５’および３’フラグメントの３−フラグメントＰＣＲ増幅および融合を行った。該反応は、フレーム内ｖ−Ｓｒｃ：：ヒトｃ−Ｓｒｃ遺伝子融合を生じる（アミノ末端側でｖ−Ｓｒｃのアミノ酸残基Ｖ２４４とヒトｃ−ＳｒｃのＣ２４８、およびヒトｃ−ＳｒｃのＡ５１７とｖ−ＳｒｃのＱ５１５）。該遺伝子融合フラグメントは、ｖ−Ｓｒｃカルボキシ末端尾部に隣接するヒトｃ−Ｓｒｃ触媒ドメインに融合したｖ−ＳｒｃＳＨ_２ドメインのカルボキシ末端側１／３およびＳＨ_２−触媒ドメインリンカーをコードする。該融合フラグメントの５’末端近くの天然ＢｇＩ２部位および該フラグメントの３’末端に遺伝子組み換えしたＸｂａｌ部位を用いて、上記の全長ｖ−Ｓｒｃ：：ヒトｃ−Ｓｒｃ融合遺伝子の作成ためのフラグメントを切り出した。該構築物の無欠性は、ＤＮＡ配列決定によって確認された。同様の方法を用いて、これらの研究において有用な他の発現プラスミド、例えば、ｐＩＲＥＳ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）中に該遺伝子をクローン化した。

Ａｂｌキナーゼアッセイ
細菌に発現させたＡｂｌキナーゼをＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓから得た。キナーゼアッセイは、ＤＥＬＦＩＡ固相ユーロピウムに基づく検出アッセイフォーマット（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）において行った。ペプチドはＤｏｒｓｅｙら（４６）に記載のとおりであった。ビオチン化ペプチド（２μＭ）をストレプトアビジンで被覆した微量滴定プレート（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＣＣ１１−２０５）に、リン酸緩衝化セーライン（ＰＢＳ）中における１μｇ／ｍｌオボアルブミン中において１．５時間結合させた。該プレートをＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ８０で１時間洗浄し、次いで、ＰＢＳで洗浄した。キナーゼ反応を３０℃で１時間インキュベートした。Ａｂｌキナーゼ（１０単位，ＮＥＢＰ６０５０Ｌ）を５０ｍＭトリス−ＨＣｌ，ｐＨ７．５、１０ｍＭＭｇＣｌ_２、８０μＭＥＧＴＡ、１００μＭＡＴＰ、０．５ｍＭＮａ_３ＶＯ_４、１％ＤＭＳＯ、１ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７）および２００μｇ／ｍｌオボアルブミンと混合した。最終濃度５０ｍＭのＥＤＴＡで反応を止めた。製造者（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）によって提案されるＤＥＬＦＩＡ洗浄プロトコールを、洗浄時間を延長することによって修飾して、バックグラウンドを減少させた。反応は、Ｅｕ−標識ホスホチロシン抗体（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＡＤ００４０）およびＤＥＬＦＩＡ増強溶液（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ１２４４−１０５）を用いて、製造者の説明書にしたがってモニターした。

Ａｂｌ−依存性細胞の化合物の抗−増殖活性
Ａ．ｖ−Ａｂｌ−依存性増殖の阻害。Ａｂｌ−ネズミ白血病ウイルスに感染させたＲａｔ２細胞を増殖させ、Ｓｒｃ細胞アッセイのために記載したように処理した。全測定は、細胞型を除き同一であった。Ｃｅｌｌ−ＴｉｔｅｒＧｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、相対細胞数をモニターした。この場合、試薬は、製造者によって推奨されるとおりに用い、ルミネセンスは、ＷａｌｌａｃＶｉｃｔｏｒプレートリーダー上で測定した。
Ｂ．ＣＭＬ細胞増殖の阻害。ＫＵ８１２およびＫ５６２細胞を、１０％胎仔ウシ血清および５０μｇ／ｍｌゲンタマイシンを含有するグルタミンを補足したＲＰＭＩ１６４０培地中で増殖させた。０日目に細胞を、１ウェル当たり１０００−２０００細胞で播種した。１日目に、化合物を、最終ＤＭＳＯ濃度が０．１％以下になるように加えた。４日目に、Ｃｅｌｌ−ＴｉｔｅｒＧｌｏを製造者の説明書にしたがって加え、ルミネセンスをＷａｌｌａｃＶｉｃｔｏｒプレートリーダー上で測定した。

これらの実験の結果を下記の表１、２および３に示す。

実施例１
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−メチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル
ｍｐ１１６−１２０℃；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５３０．２，５３２．２（Ｍ＋１）；
実施例２
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［３−（４−エチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
ｍｐ１０２−１０４℃；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５４４．３，５４６．４（Ｍ＋１）；
実施例３
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル
ｍｐ１６５−１６７℃；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５１６．０，５１８．２（Ｍ＋１）；

実施例４
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［２−（４−エチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル
ｍｐ１０１−１０５℃；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５３０．４，５３２．４（Ｍ＋１）；
実施例５
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル
ｍｐ２００−２０２℃，ＭＳ５０１．３（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ_２５Ｈ_２６Ｃｌ_２Ｎ_４Ｏ_３−０．８Ｈ_２Ｏの分析，計算値：Ｃ，５８．２１；Ｈ，５．３９；Ｎ，１０．８６，実測値：Ｃ，５８．１９；Ｈ，５．２３；Ｎ，１０．６７；
実施例６
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル
ｍｐ１９０−１９１℃，ＭＳ５１５．１９（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ_２６Ｈ_２８Ｃｌ_２Ｎ_４Ｏ_３−１．０Ｈ_２Ｏの分析，計算値：Ｃ，５８．５３；Ｈ，５．６７；Ｎ，１０．５０，実測値：Ｃ，５８．６５；Ｈ，５．５７；Ｎ，１０．３４

実施例７
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ＭＰ１４４−１４５℃；質量分析５２９．２（ＥＳ＋）；
実施例８
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［（１−エチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−６−メトキシキノリン−３−カルボニトリル
ＭＰ１９２−１９５℃；質量分析５１５．２（ＥＳ＋）；
実施例９
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ１３７−１３８℃，ＭＳ５４２．０（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ_２７Ｈ_３１Ｃｌ_２Ｎ_５Ｏ_３−０．６Ｈ_２Ｏの分析，計算値：Ｃ，５８．４０；Ｈ，５．８４；Ｎ，１２．６１，実測値：Ｃ，５８．３１；Ｈ，５．７１；Ｎ，１２．４３；
実施例１０
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ１８２−１８６℃，ＭＳ５１３．０（Ｍ−Ｈ）−，Ｃ_２６Ｈ_２８Ｃｌ_２Ｎ_４Ｏ_３−１．４Ｈ_２Ｏの分析計算値：Ｃ，５７．７６；Ｈ，５．７４；Ｎ，１０．３６，実測値：Ｃ，５７．６５；Ｈ，５．４３；Ｎ，１０．１５；

実施例１１
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−エチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ１２７−１３０℃，ＭＳ５５８．３（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ_２８Ｈ_３３Ｃｌ_２Ｎ_５Ｏ_３−１．５Ｈ_２Ｏの分析，計算値：Ｃ，５７．４４；Ｈ，６．２０；Ｎ，１１．９６，実測値：Ｃ，５７．４４；Ｈ，６．２４；Ｎ，１１．７９；
実施例１２
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ１４８−１５１℃，ＭＳ５４３．２（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ_２８Ｈ_３２Ｃｌ_２Ｎ_４Ｏ_３−１．８Ｈ_２Ｏの分析，計算値：Ｃ，５８．３９；Ｈ，６．２３；Ｎ，９．７３，実測値：Ｃ，５８．４０；Ｈ，６．１６；Ｎ，９．６４；
実施例１３
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ１４１−１４３℃，ＭＳ５３０．２（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ_２６Ｈ_２９Ｃｌ_２Ｎ_５Ｏ_３の分析，計算値：Ｃ，５８．８７；Ｈ，５．５１；Ｎ，１３．２０，実測値：Ｃ，５８．４８；Ｈ，５．４５；Ｎ，１２．９５；
実施例１４
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ１７４−１７６℃，ＭＳ５２９．１（Ｍ＋Ｈ）＋，Ｃ_２７Ｈ_３０Ｃｌ_２Ｎ_４Ｏ_３の分析，計算値：Ｃ，６１．２５；Ｈ，５．７１；Ｎ，１０．５８，実測値：Ｃ，６１．４０；Ｈ，５．８４；Ｎ，１０．３５；

実施例１５
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−プロピル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル
ｍｐ９７−１０１℃；ＭＳ（ＥＳ）ｍ／ｚ５５８．２，５６０．２（Ｍ＋１）；
実施例１６
４−［（２，４−ジクロロフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル
ｍｐ２２４−２２５℃，ＭＳ４６９．０（ＥＳ−）；
実施例１７
６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−４−［（３，４，５−トリメトキシフェニル）アミノ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ＞２４５℃；ＨＲＭＳ（Ｍ＋Ｈ）＋計算値４９３．２４４５５，実測値４９３．２４３１１；
実施例１８
４−［（２−クロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ１０６−１０８℃，ＭＳ４６７．２（ＥＳ＋）；

実施例１９
６−メトキシ−４−［（５−メトキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ＞２５０℃，ＭＳ４４５．２（ＥＳ−）；
実施例２０
４−［（２，４−ジメチルフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ１９０−１９１℃，ＭＳ４２９．２（ＥＳ−）；
実施例２１
６−メトキシ−４−［（５−メトキシ−２，４−ジメチルフェニル）アミノ］−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル
ｍｐ１６０−１６２℃，ＭＳ４６１．３（ＥＳ＋）；
実施例２２
４−［（２，４−ジクロロ−５−エトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル

本来、Ｓｒｃ阻害剤として同定される式Ｉの化合物（「化合物」）は、ここに、培養ＣＭＬ細胞に対する強力な抗増殖およびプロアポトーシス剤であることが示される。培養ＣＭＬ細胞に対する該化合物のアポトーシス活性は、ＣＭＬ異種移植片に対するイン・ビボでのその活性によって反映される。Ｋ５６２腫瘍は、ヌードマウスにおいて、該化合物を１日１回経口投与したとき、退縮する。該化合物のＡｂｌ−阻害活性は、おそらく、主に、ＣＭＬ細胞に対する該化合物の抗増殖活性に寄与する。Ｂｃｒ−Ａｂｌのチロシンリン酸化は、該化合物の濃度１００ｎｍ以上で除去され、それは、単独で、Ｂｃｒ−Ａｂｌ−依存性骨髄細胞の増殖および生存を阻害するのに十分であろう。

Ｋ５６２異種移植片を有するヌードマウスを１１、２２、３６および４３日目に調べた。データは、１群あたりの動物数に対する検出可能腫瘍を欠く動物の比率として示す。マトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）中に埋め込まれたＫ５６２腫瘍をヌードマウスにおいて、腫瘍が２００−３００ｍｍ^３に達するまで増殖させた。実施例１の化合物を０．４％メトセル／０．５％Ｔｗｅｅｎ中、７５ｍｇ／ｋｇで１日１回、５日間、経口投与した（８匹マウス／群）。

Claims

治療上有効量の式：

［式中：
ｎは、１−３の整数であり；
Ｘは、Ｎ、ＣＨであり、但し、ＸがＮのとき、ｎは２または３であり；
Ｒは、１〜３個の炭素原子からなるアルキルであり；
Ｒ^１は、２，４−ジＣｌおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌ；３，４，５−トリ−ＯＭｅ；２−Ｃｌおよび５−ＯＭｅ；２−Ｍｅおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジ−Ｍｅ；２，４−ジＭｅ−５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌおよび５−ＯＥｔであり；
Ｒ^２は、１〜２個の炭素原子からなるアルキルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩を提供することを特徴とする、ＣＭＬを予防または阻害する方法。
化合物が式：

［式中：
ｎは、２−３の整数であり；
ＸはＮ、ＣＨであり、但し、ＸがＮのとき、ｎは２または３であり；
Ｒは、１〜３個の炭素原子からなるアルキルであり；
Ｒ^１は、２，４−ジＣｌおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌ；３，４，５−トリ−ＯＭｅ；２−Ｃｌおよび５−ＯＭｅ；２−Ｍｅおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジ−Ｍｅ；２，４−ジＭｅ−５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌおよび５−ＯＥｔであり；
Ｒ^２は、１〜２個の炭素原子からなるアルキルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩である請求項１記載の方法。
化合物が式：

［式中、
ＸはＮ、ＣＨであり；
ｎは３であり；
Ｒ^２およびＲはメチルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩である請求項１記載の方法。
Ｒ^２がメチルである請求項１記載の方法。
ＸがＮである請求項１記載の方法。
ＸがＣＨである請求項１記載の方法。
化合物が４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−メチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリルである請求項１記載の方法。
化合物が：
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［３−（４−エチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［２−（４−エチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［（１−エチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−６−メトキシキノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−エチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；または
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−プロピル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル；またはその医薬上許容される塩である請求項１記載の方法。
化合物が：
４−［（２，４−ジクロロフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−４−［（３，４，５−トリメトキシフェニル）アミノ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２−クロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
６−メトキシ−４−［（５−メトキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジメチルフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
６−メトキシ−４−［（５−メトキシ−２，４−ジメチルフェニル）アミノ］−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；または
４−［（２，４−ジクロロ−５−エトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリルである請求項１記載の方法。
化合物がＳｒｃ阻害剤またはＡｂｌキナーゼ阻害剤である請求項１記載の方法。
ＣＭＬ阻害量の構造式Ｉ

［式中：
ｎは、０−３の整数であり；
Ｘは、Ｎ、ＣＨであり；
Ｒは、１〜３個の炭素原子からなるアルキルであり；
Ｒ^１は、パラ、オルトまたはメタ位の２，４−ジＣｌおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌ；３，４，５−トリ−ＯＭｅ；２−Ｃｌおよび５−ＯＭｅ；２−Ｍｅおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジ−Ｍｅ；２，４−ジＭｅ−５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌおよび５−ＯＥｔであり；
Ｒ^２は、１〜３個の炭素原子からなるアルキルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩を含む医薬組成物。
ＣＭＬ阻害量の構造式Ｉ

［式中：
ｎは、２−３の整数であり；
Ｘは、Ｎ、ＣＨであり、但し、ＸがＮのとき、ｎは２または３であり；
Ｒは、１〜３個の炭素原子からなるアルキルであり；
Ｒ^１は、２，４−ジＣｌおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌ；３，４，５−トリ−ＯＭｅ；２−Ｃｌおよび５−ＯＭｅ；２−Ｍｅおよび５−ＯＭｅ；２，４−ジ−Ｍｅ；２，４−ジＭｅ−５−ＯＭｅ；２，４−ジＣｌおよび５−ＯＥｔであり；
Ｒ^２は、１〜２個の炭素原子からなるアルキルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩を含む医薬組成物。
ＣＭＬ阻害量の構造式Ｉ

［式中：
Ｘは、Ｎ、ＣＨであり；
ｎは、３であり；
Ｒ^２およびＲは、メチルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩を含む医薬組成物。
Ｒ^２がメチルである請求項１１記載の医薬組成物。
ＸがＮである請求項１１記載の医薬組成物。
ＸがＣＨである請求項１１記載の医薬組成物。
化合物が４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−メチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリルである請求項１１記載の医薬組成物。
化合物が：
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［３−（４−エチル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［２−（４−エチル−１−ピペラジニル）エトキシ］−６−メトキシ−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−７−［（１−エチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−６−メトキシキノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−メチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（４−エチルピペラジン−１−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［３−（１−メチルピペリジン−４−イル）プロポキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（４−メチル−１−ピペラジニル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−エトキシ−７−［２−（１−メチルピペリジン−４−イル）エトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；または
４−［（２，４−ジクロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［３−（４−プロピル−１−ピペラジニル）プロポキシ］−３−キノリンカルボニトリル；またはその医薬上許容される塩である請求項１１記載の医薬組成物。
化合物が：
４−［（２，４−ジクロロフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−３−キノリンカルボニトリル；
６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］−４−［（３，４，５−トリメトキシフェニル）アミノ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２−クロロ−５−メトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
６−メトキシ−４−［（５−メトキシ−２−メチルフェニル）アミノ］−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
４−［（２，４−ジメチルフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；
６−メトキシ−４−［（５−メトキシ−２，４−ジメチルフェニル）アミノ］−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリル；または
４−［（２，４−ジクロロ−５−エトキシフェニル）アミノ］−６−メトキシ−７−［（１−メチルピペリジン−４−イル）メトキシ］キノリン−３−カルボニトリルである請求項１１記載の医薬組成物。
化合物がＳｒｃ阻害剤またはＡｂｌキナーゼ阻害剤である請求項１１記載の医薬組成物。
化合物が単独で送達されるか、またはＣＭＬを治療するための他の化合物と組み合わせて送達される請求項１記載の方法。
組み合わせる化合物がＧＬＥＥＶＥＣである請求項２０記載の方法。