JP2007509084A - ベンガミド誘導体、それらの製造方法、および癌処置のためのそれらの使用 - Google Patents

ベンガミド誘導体、それらの製造方法、および癌処置のためのそれらの使用 Download PDF

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Abstract

本発明は、発酵の間、微生物Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）によって形成されるベンガミド誘導体、癌を処置するためのそれらの使用、ベンガミド誘導体を含む医薬、式（Ｖ）のベンガミドの製造方法、さらに微生物Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）に関する。
【化１】

Description

癌は、大半が致命的であり、そして内因性細胞の制御不可能な増殖により引き起こされるヒトおよび動物の疾患である。癌は、悪性腫瘍（マリグノーマ（ｍａｌｉｇｎｏｍａｓ））および新生物（腫瘍または癌腫）の形成、または白血球の悪性変性および成熟障害（白血病、血液癌）を表す用語である。癌細胞または腫瘍細胞は、内因性細胞の変質の結果として生じる。癌細胞の悪性度は、その増殖の自律性（すなわち、細胞が無抑制様式で、器官の構造に適合することなく増殖し、また浸潤性様式で細胞が増殖し、それによって組織を破壊する能力である）で表れる。腫瘍細胞が血液またはリンパ液を介して拡散された後の、腫瘍から離れた場所での播種の形成（転移）は、悪性の確かな兆候である。癌は、ヒトの最も多い死因の１つであり、従って、悪性変性を治療または処置するための方法および手段に対する要望は大きい。
腫瘍の可能であれば完全な外科的除去以外では、悪性腫瘍を処置する可能性としては、Ｘ線、α線、β線、およびγ線を使用する放射線治療、免疫療法、および化学療法が挙げられる。現在、免疫療法は限られた範囲でのみ使用され得る。腫瘍の化学療法は、通常は局所的な外科処置または放射線治療の後、残存する腫瘍および腫瘍細胞を処置するための細胞毒（細胞増殖抑制剤）の投与を意味すると理解されている。これらの物質は、特に細胞分裂における特定のプロセスを妨げ、これは、分裂細胞を高い割合で含む組織（例えば、急速に増殖する腫瘍組織）がより高感度で反応することを意味する。使用される細胞増殖抑制剤は、例えば以下のようなアルキル化化合物である；シクロフォスファミド、代謝拮抗物質（例えばメトトレキサート）、アルカロイド（例えばビンクリスチン）、および抗生物質（例えばダウノマイシンまたはアドリアマイシン）。しかし、強い副作用のために、これらの全ての薬剤は著しい不利益を被り、病気に冒された患者の死を遅れさせるだけであって防ぎはしない。さらに、変質（癌）細胞は、使用される薬剤に対して耐性を生じ；その時点で使用されている医薬はもはやいかなる細胞増殖抑制効果をも有さなくなるが、これらの医薬は副作用の結果として未だ有毒であり続ける。さらに、組み合わせてまたは連続して細胞増殖抑制剤を使用することにより達成される有効性は、単一の細胞増殖抑制剤を使用する（単療法）ことにより達成される有効性を上回り、そしてその結果、実質的な副作用は多剤化学療法（ｐｏｌｙｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ）に関しては累積的でない可能性がある、ということが見出されている。これらの全ての理由から、新規化学療法剤が早急に必要とされており、従って、世界中で模索されているところである。
ベンガミドの第一の例は、ベンガミドＡおよびベンガミドＢであり、これらは、ドデカノイル置換カプロラクタム環であり、そして、海綿Ｊａｓｐｉｓ ｃｆ．Ｃｏｒｉａｃｅａ（Ｃｏｐｐａｔｉｉｄａｅ族Ｃｈｏｒｉｓｔｉｄａ Ｂ Ａｓｔｒｏｐｈｏｒｉｄａ目）から単離され（Ａｄａｍｃｚｅｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８６，５１，４４９７−４４９８）、真核細胞、線虫および細菌に対して生物毒性であると報告された。
ベンガミドＥ：
Figure 2007509084
 および、そのＮ−メチル化誘導体であるベンガミドＦは、抗腫瘍活性を有すると立証されているベンガミド誘導体の例である。ベンガミドＥは、Ｇ１／Ｓ制限点で、および細胞周期のＧ２／Ｍ期において細胞分裂を停止させることにより細胞増殖を阻害する。ベンガミドＢ誘導体は、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５胸部癌細胞の増殖を阻害する（Ｋｉｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００１，４４，３６９２−３６９９）。
公知のベンガミド誘導体に共通の特徴は、それらの誘導体はＪａｓｐｉｓ ｓｐ．属またはＰａｃｈａｓｔｒｉｓｓａ ｓｐ．属の海綿から単離されるということである（Ｔｈａｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００１，６６，１７３３−１７４１）。
現在、微生物Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１株（ＤＳＭ １５８９８）が、低濃度で細胞増殖を阻害し、その結果として癌疾患の処置および／または予防に使用されることに適している新規ベンガミド誘導体を形成し得るということが、見出されている。
本発明は、式（Ｉ）：
Figure 2007509084
 の化合物または式（Ｉ）の化合物の生理学的に許容される塩に関し、ここで、
Ｒ1がＨまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、
Ｒ2がＨまたはＯＨであり、そして
Ｒ3がＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである。
互いに独立して、好ましくは、Ｒ1がＨまたはメチルであり、そして好ましくは、Ｒ3がＨである。
本発明は、好ましくは、式（Ｉ）の化合物に関し、ここで、
Ｒ1がＨまたはメチルであり、
Ｒ2がＨまたはＯＨであり、そして
Ｒ3がＨである。
（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルは、６個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキル基（例えば、メチル（Ｍｅ）、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｔｅｒｔ−ブチル、またはｎ−ヘキシル、好ましくは、メチル）である。
さらに、本発明は、式（Ｉ）の化合物に関し、ここで式（II）：
Figure 2007509084
の化合物、
式（III）：
Figure 2007509084
 の化合物、
および式（IV）：
Figure 2007509084
 の化合物によって特徴づけられる。
従って、本発明は、本発明に従う式（Ｉ）の化合物の明白な化学等価物の全てに関する。これらの等価物は、わずかな化学的差異のみを示し、そして同様の薬理的効果を有するか、または中程度の条件下、本発明に従って化合物に変換される化合物である。前記等価物はまた、例えば、式（Ｉ）の化合物の塩、還元生成物、酸化生成物、エステル、エーテル、アセタール、またはアミド、ならびに等価物（これは、当業者によって標準的な方法を使用して製造され得る）、これに加えて、全ての光学対掌体、およびジアステレオマー、ならびに全ての立体異性体形態が挙げられる。
本発明はまた、式（Ｖ）：
Figure 2007509084
 の化合物または式（Ｖ）の化合物の生理学的に許容される塩を製造する方法に関し、
ここで、
Ｒ1がＨまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、
Ｒ2がＨまたはＯＨであり、
Ｒ3がＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
Ｒ4がメチルまたはエチルであり、
該方法は、
１．Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１株（ＤＳＭ １５８９８）、またはその改変体および／または変異体の１つを、１つまたはそれ以上の式（Ｖ）の化合物が培養培地中で生産されるまで、培養培地中の適切な条件下で発酵させる工程、
２．式（Ｖ）の化合物が、培養培地から単離される工程、および
３．式（Ｖ）の化合物が、必要に応じて、生理学的に許容される塩に誘導および／または変換される工程、
を包含する。
本発明は、好ましくは、Ｒ4がエチルである式（Ｖ）の化合物の製造方法に関する。このような方法による生成物は、上記のような式（Ｉ）の化合物に対応する。
本発明は、特に、好ましくは、互いに独立してＲ1がＨまたはメチルであり、Ｒ3がＨであり、そしてＲ4がエチルである式（Ｖ）の化合物の製造方法に関する。
さらに、本発明は、式（II）の化合物、式（III）の化合物、および式（IV）の化合物、ならびにベンガミド誘導体ＥおよびＦの製造方法に関する。
特に示されない限り、式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物中のキラル中心は、Ｒ立体配置またはＳ立体配置に存在し得る。本発明は、光学的に純粋な化合物および立体異性体混合物（例えば、エナンチオマー混合物およびジアステレオマー混合物）の両方に関する。
式（Ｉ）および（Ｖ）の化合物の生理学的に許容される塩は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１７編，１４１８頁（１９８５））に記載されるように、それらの有機塩およびそれらの無機塩の両方であると理解される。それらの物理的安定性および化学的安定性、ならびにそれらの溶解性の理由で、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、およびアンモニウム塩は、とりわけ、酸性基に好ましい；塩酸、硫酸、またはリン酸、カルボン酸、またはスルホン酸（例えば、酢酸、クエン酸、安息香酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、およびｐ−トルエンスルホン酸）の塩は、とりわけ、塩基性基に好ましい。
培養培地は、少なくとも１種の通常の炭素供給源および窒素供給源、ならびに通常の無機塩を含む、栄養溶液または固体培地である。ヒドロキシリジンが培養培地に添加される場合、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１株（ＤＳＭ１５８９８）は、ヒドロキシリジンを消化する結果として、Ｒ2がＯＨである式（Ｖ）の化合物を生産する。
従って、本発明の主題の一部は、上記のような式（Ｖ）の化合物の製造方法であり、ここでＲ2がＯＨであり、そして工程１の培養培地がヒドロキシリジンを含む。
本発明に従う方法は、実験室規模（ミリリットルスケール〜リットルスケール）での発酵、および工業規模（立方メートルスケール）での発酵に使用され得る。
発酵のための適切な炭素供給源は、同化炭化水素（ａｓｓｉｍｉｌａｂｌｅ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ）および糖アルコール（例えば、グルコース、ラクトース、スクロース、またはＤ−マンニトール）、ならびに炭化水素含有天然物（例えば、麦芽エキスまたは酵母エキス）である。窒素含有栄養物の例としては、以下が挙げられる：アミノ酸；ペプチドおよびタンパク質、またそれらの分解産物（例えば、カゼイン、ペプトン、またはトリプトン）；肉エキス；酵母エキス；グルテン；粉末の種（例えば、トウモロコシ、小麦、マメ、大豆、または綿の木由来）；アルコール生産に由来する蒸留残留物；肉粉；酵母エキス；アンモニウム塩；硝酸塩。窒素供給源は、合成的または生合成的に得られた１つまたはそれ以上のペプチドが好ましい。無機塩の例としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、鉄、亜鉛、コバルト、およびマンガンの塩化物、炭酸塩、硫酸塩、またはリン酸塩である。微量成分の例としては、コバルトおよびマンガンである。
本発明に従うベンガミドを形成するための適切な条件は、以下のようである：本発明に従うベンガミドは、好ましくは、０.０５〜５％、好ましくは、０.１〜２.５％の酵母エキス；０.２〜５.０％、好ましくは０.１〜２％のカゼイン；０.０２〜１.０％、好ましくは、０.０５〜０.５％のＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ；０.０２〜１.５％、好ましくは、０.０５〜０.７％のＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、および０.００００１％〜０.００１％のシアノコバラミンを含む培養培地中で形成される。所定のパーセンテージ値は、各場合において、栄養溶液の全重量に基づいている。
微生物は、好気的に培養され、すなわち、必要に応じて、空気または酸素を通しながら、例えば、振とうフラスコもしくは発酵槽中で振とうまたは撹拌しながら液内培養されるか、または固体培地上で培養される。微生物は、約１８〜３５℃、好ましくは約２０〜３２℃、特に、２７〜３０℃の範囲の温度で培養され得る。ｐＨ範囲は、４と１０、好ましくは６.５と７.５の間であるべきである。微生物は、一般的に、２〜１０日間の間、好ましくは７２〜１６８時間、これらの条件下で培養される。微生物は、いくつかの工程で有利に培養される、すなわち、１回またはそれ以上の回数の予備培養物が液体栄養培地中で最初に調製され、次いでこれらの予備培養物は、例えば、１：１０〜１：１００の容積の比で実際の生産培地（すなわち、本培養）に植菌される。予備培養物は、例えば、栄養溶液中に株を栄養細胞または子実体の形態で植菌し、そして約２０〜１２０時間、好ましくは４８〜９６時間培養されることによって得られる。栄養細胞および／または子実体は、例えば、約１〜１５日間、好ましくは４〜１０日間、固体栄養基質または液体栄養基質（例えば酵母寒天）上で、株を培養することによって得られ得る。
式（Ｖ）のベンガミド誘導体は、公知の方法を使用して、そして天然物質の化学的性質、物理的性質、および生物学的性質を考慮して、培養培地から単離されるか、または精製される。ＨＰＬＣを使用して、培養培地中、または別々の単離工程におけるそれぞれのベンガミド誘導体の濃度を評価し、形成された物質の量は較正溶液と便宜上比較した。
単離について、培養ブロス、または固体培地と一緒の培養物は、凍結乾燥され、この後、ベンガミド誘導体は、有機溶媒（例えば、メタノールまたは２−プロパノール）を使用して凍結乾燥物から抽出される。有機溶媒相は、本発明に従う天然物質を含む；必要に応じて、これは真空中で濃縮され、そしてさらなる精製に供される。
本発明に従う１つまたはそれ以上の化合物のさらなる精製は、適切な物質上で、好ましくは、例えば、モレキュラーシーブ、シリカゲル、酸化アルミニウム、イオン交換物質、もしくは吸着樹脂、または逆相（ＲＰ）のクロマトグラフィーによってもたらされる。このクロマトグラフィーを使用して、ベンガミド誘導体を分離する。ベンガミド誘導体は、緩衝化水溶液または水溶液と有機溶液との混合物を使用して、クロマトグラフィーに供される。
水溶液と有機溶液との混合物は、５〜９５％溶媒、好ましくは５〜４０％溶媒の濃度での全ての水混和性有機溶媒、好ましくは、メタノール、２−プロパノール、もしくはアセトニトリルであるか、または有機溶媒と混和性である全ての緩衝化水溶液であることが理解される。使用される緩衝化物は、上記されるのと同じものである。
ベンガミド誘導体は、それらの異なる極性に基づいて、逆相クロマトグラフィー（例えば、ＭＣＩ（登録商標）（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎから入手した吸着樹脂）またはＡｍｂｅｒｌｉｔｅ ＸＡＤ（登録商標）（ＴＯＳＯＨＡＡＳ））、または他の疎水性物質（例えば、ＲＰ８相またはＲＰ１８相）によって分離される。さらに、分離は、順相クロマトグラフィー（例えば、シリカゲル、酸化アルミニウムなど）によってもたらされ得る。
ベンガミド誘導体は、緩衝化水溶液、塩基性水溶液、もしくは酸性水溶液、またはアルコールもしくは水混和性有機溶媒と水溶液の混合物を使用してクロマトグラフィーに供される。有機溶媒としてアセトニトリルおよびメタノールを使用することが好ましい。
緩衝化水溶液、塩基性水溶液、または酸性水溶液は、例えば、水、０.５Ｍまでの濃度で、リン酸緩衝液、酢酸アンモニウム、およびクエン酸緩衝液、ならびに、好ましくは、１％の濃度までで、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、アンモニア、およびトリエチルアミン、または当業者に公知の全ての市販される酸および塩基であることが理解される。緩衝化水溶液の場合において、０.１％の酢酸アンモニウムであることが特に好ましい。
クロマトグラフィーを、１００％の水で始まり、そして１００％の溶媒で終わる勾配を使用して行った；好ましくは、クロマトグラフィーは５〜９５％のアセトニトリルの線形勾配を用いて行われた。
あるいは、ゲルクロマトグラフィーまたは疎水性相のクロマトグラフィーを行うこともまた可能である。ゲルクロマトグラフィーは、ポリアクリルアミドゲルまたはコポリマーゲル（例えば、ＢｉｏｇｅｌＰ ２（登録商標）（Ｂｉｏｒａｄ）またはＦｒａｃｔｏｇｅｌ ＴＳＫ ＨＷ ４０（登録商標）（Ｍｅｒｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ））で行われる。上記のクロマトグラフィー工程の順序は、入れ替えられ得る。
ベンガミドがジアステレオマーとして存在する場合、これらは公知の方法を使用して、例えば、キラルカラムを使用する分離によって、分離され得る。
アシル基（いずれの場合において、Ｒ4が−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである）を与えるような式（Ｉ）および／または（Ｖ）（いずれの場合において、Ｒ3がＨである）の化合物の側鎖におけるＯＨ基の誘導体化は、それ自体が公知である方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第４編，１９９２）を使用して、例えば、酸無水物との反応によって、もたらされる。例えば、Ａｄａｍｃｚｅｓｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９８９，１１１，６４７−６５４は、Ｒ3が−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ3である式（Ｉ）および／または（Ｖ）の化合物を与えるための酢酸無水物との反応を記載する。
式（Ｉ）または（Ｖ）（いずれの場合において、Ｒ1がＨである）の化合物のカプロラクタム環におけるＮＨ基のアルキル化は、それ自体が公知である方法（Ｊ．Ｍａｒｃｈ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，第４編，１９９２）を使用して、例えば、対応するＮメチル化誘導体を調製するために、Ｍｅ2ＣＯ3またはＭｅ2ＳＯ4との反応によって、または塩基の存在下、（Ｃ1Ｃ6）−アルキルブロミドとの反応によって同様にもたらされる。
微生物Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１株の単離物は、Ｄｅｕｔｓｃｈｅｎ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒｅｎ［Ｇｅｒｍａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ ａｎｄ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ］ＧｍｂＨ（ＤＳＭＺ），Ｍａｓｃｈｅｒｏｄｅｒ Ｗｅｇ １Ｂ，３８１２４ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙに寄託された（ブタペスト条約の規則に従って２００３年９月１１日に以下の番号：ＤＳＭ１５８９８を当てられた）。
ＤＳＭ１５８９８株の栄養細胞は、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓの特徴である棒状形態を有する。固体栄養物質について、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）は、円形の粘菌胞子を含む橙黄色の子実体を形成する。
Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１株（ＤＳＭ１５８９８）の代わりに、本発明に従う１つまたはそれ以上の化合物を合成するその変異体および／または改変体を使用することもまたは可能である。
変異体は、ゲノム中の１つまたはそれ以上の遺伝子が遺伝子を用いて改変されている微生物であり、この遺伝子は機能性および遺伝性を残す本発明に従う化合物を生産する生物の能力に関与する。
このような変異体は、それ自体が公知である様式で、物理的手段（例えば、紫外線またはＸ線と同様に、放射線）または化学的突然変異誘発物質（例えば、メタンスルホン酸エチル（ＥＭＳ）；２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（ＭＯＢ）、またはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ））を使用して、またはＢｒｏｃｋ ｅｔ ａｌ．の「Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ」，Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ，２３８−２４７頁（１９８４）によって記載されるように生産され得る。
改変体は、微生物の表現型である。微生物は、それらの環境に適応する能力を有し、従って、よく発達した生理的可撓性を示す。微生物の全ての細胞は、表現型適応（ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ａｄａｐｔａｔｉｏｎ）に関与し、変化の性質は遺伝学的に条件付けされず、そして変更される条件下で可逆である （Ｈ．Ｓｔｏｌｐ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｃｏｌｏｇｙ：ｏｒｇａｎｉｓｍ，ｈａｂｉｔａｔｓ，ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＧＢ，１８０頁，１９８８）。
本発明に従う１つまたはそれ以上の化合物を合成する変異体および／または改変体についてのスクリーニングは、以下のスキームに従って行われる：
−発酵培地を凍結乾燥する
−有機溶媒を用いて凍結乾燥物を抽出する
−固体相を使用して培養濾液から化合物を抽出する
−ＨＰＬＣまたはＴＬＣによって分析するか、または生物学的活性を試験することによって分析する。
記載される発酵条件は、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ １５８９８）、ならびにそれらの変異体および／または改変体に適応される。
本発明はまた、上記のような式（Ｖ）の化合物、特に、式（IV）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩を調製するための、微生物Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）、または変異体および／または改変体の使用に関する。
ＡＴＰの細胞内濃度の決定に基づく試験は、細胞増殖の阻害を検出するために利用される。Ｈｅｐ−Ｇ２およびＣｏｌｏ２０５のような公知の腫瘍細胞株を使用することが可能である。この試験において、代謝活性細胞のＡＴＰ含有量は、ルシフェラーゼ反応において、生存細胞の数の尺度として役立つ。
式（II）〜（VI）の化合物は、０.３〜４０μＭの単回用量の試験に使用され、そして用量依存性は、ＴＣ５０値として与えられ、各場合において、（IIA）および（IIB）は、式（II）の化合物のジアステレオマーを示す：
Figure 2007509084
従って、本発明はまた、特に、癌疾患の処置および／または予防のためのヒトまたは動物の医薬の調合薬として、式（Ｉ）の化合物、またはそれらの生理学的に許容される塩の使用に関する。本発明は、好ましくは、胸部癌、腸癌、胃癌、肝臓癌、脳腫瘍、卵巣腫瘍、食道癌、腎臓癌、および筋細胞癌腫、特に、頭部および頚筋の癌腫を処置するための、式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩の使用に関する。
さらに、本発明は、少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩の含有物を有する医薬に関し、式（Ｉ）の化合物はそのようなものとして投与されるか、または好ましくは、通常の、１つまたはそれ以上の薬理学的に適切なキャリア物質または補助物質との混合物中に存在することが可能である。
本発明に従う化合物は、２と９との間、特に、５と７との間のｐＨ範囲の固体状態および溶液中で安定であり、その結果、通常の生薬に取り込まれ得る。
本発明に従う医薬は経口的または非経口的に投与され得るが、直腸使用もまたおおむね可能である。適切な固体生薬または液体生薬の形態の例としては、以下が挙げられる：顆粒、粉末、錠剤、糖衣錠、（マイクロ）カプセル、坐薬、シロップ、エマルション、懸濁液、エアロゾル、ドロップ、またはアンプル形態中の注射溶液、ならびに、活性化合物の持続的放出を与える製剤（その製剤用途に関連して、生理学的に適応可能なキャリア物質または補助物質で通常作製され、生理学的に適応可能なキャリア物質または補助物質としては、以下が挙げられる：崩壊剤、バインダー、コーティング剤、膨張剤、流動促進剤、潤滑剤、香味物質、甘味料もしくは可溶化剤（例えば、炭酸マグネシウム、二酸化チタン、ラクトース、マンニトールおよび他の糖）、タルク、乳タンパク質、ゼラチン、デンプン、ビタミン、セルロースおよびその誘導体、動物油または植物油、ポリエチレングリコールおよび溶媒（例えば、滅菌水、アルコール、グリセロールおよび多価アルコール））。
必要に応じて、経口投与のための投薬単位は、放出を遅延するため、また相対的に長期にわたって放出を延長するために、例えば、適切なポリマー、ワックスなどで粒子形態の活性化合物をコーティングするかまたはこれらに包埋することによって、マイクロカプセルの中に入れ得る。
投薬単位の薬学的調製物を製造し、そして投与することが好ましく、活性成分として各単位は、所定の用量の式（Ｉ）のベンガミド誘導体の１つまたはそれ以上の化合物を含む。錠剤、カプセル、および坐薬のような固体投薬単位の場合、この用量は、一日あたり、約５００ｍｇまでであるが、好ましくは、約０.１〜２００ｍｇであり得、アンプル形態の注射溶液の場合において、約２００ｍｇまでであり、好ましくは、約０.５から１００ｍｇであり得る。
投与されるべき日用量は、哺乳類被験体の体重、年齢、性別、および状態に依存する。しかし、より高い日用量またはより低い日用量がまた、場合によって適切であり得る。日用量は、単回投薬単位の形態でまたはいくつかの少量の投薬単位で１回のみの投与によって、および所定の間隔で分割した用量の複数投与によって投与され得る。
本発明に従う医薬は、本発明に従う式（Ｉ）の１つまたはそれ以上の化合物を、必要に応じて、１つまたはそれ以上の通常のキャリア物質または補助物質と共に投与に適切な形態にすることによって製造される。
以下の実施例は、より詳細に本発明を説明することを意図し、決してその範囲を制限しない。
他に示さない限り、パーセンテージ値とは質量をいい、そして液体の場合において混合比とは、容積をいう。
〔実施例〕
実施例１：−１３５℃でのＭｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）の保存
寒天プレート（１％新鮮なパン酵母、１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０.００００５％シアノコバラミン、１.５％寒天、ｐＨ７.２）に、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１株（ＤＳＭ１５８９８）を植菌し、そして３０℃にて約７日間インキュベートする。この表面培養物中の細胞を滅菌スパチュラを使用して、寒天表面からかきとり、カシトン培地（１％ カシトン（Ｄｉｆｃｏ）、０.１５％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、ｐＨ７.０）（０.５ｍｌ）に再懸濁し、そして−１３５℃で保存する。
実施例２：三角フラスコ中でのＭｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）の予備培養物の調製
滅菌した３００ｍｌの三角フラスコ中の栄養溶液（１％ 新鮮なパン酵母、１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０.００００５％シアノコバラミン、ｐＨ７.２）（１００ｍｌ）に、Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１株（ＤＳＭ１５８９８）を植菌し、そして培養物を４日間、３０℃にて回転振とう機上１８０ｒｐｍでインキュベートする。次いで、この予備培養物（５ｍｌ）を本培養物を調製するために使用する。
実施例３：Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）の液体本培養物の調製
以下の栄養溶液（０.５％酵母抽出物、０.５％カシトン、０.１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ、０.２％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、０.００００５％シアノコバラミン、ｐＨ７.４）（１００ｍｌ）を含む滅菌した３００ｍｌの三角フラスコに、予備培養物（５ｍｌ）（実施例２を参照のこと）または新鮮な寒天プレート（１％新鮮なパン酵母、１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０.００００５％シアノコバラミン、ｐＨ７.２、＋１.５％寒天）上で増殖させた培養物を植菌し、そして３０℃にて、振とう機上１８０ｒｐｍでインキュベートする。本発明に従うベンガミドの最大生産は、７２〜９６時間後に達する。実施例２に記載されるように、同じ栄養溶液由来の７２〜９６時間齢の液体培養物（植菌量約５〜１０％）は、１０〜２００Ｌの発酵槽に植菌するのに十分である。
実施例４：ベンガミド誘導体（IV）を生産するためのヒドロキシリジンを入れながらのＭｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）の液体本培養物の調製
以下の栄養溶液（０.５％酵母抽出物、０.５％カシトン、０.１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ、０.２％ ＭｇＳＯ4×７Ｈ2Ｏ、０.００００５％シアノコバラミン、また１ｍＭヒドロキシリジンｐＨ７.４）（１００ｍｌ）を含む滅菌した３００ｍｌ三角フラスコに、実施例２からの予備培養物（５ｍｌ）または新鮮な寒天プレート（１％新鮮なパン酵母、１％ ＣａＣｌ2×２Ｈ2Ｏ、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０.００００５％シアノコバラミン、ｐＨ７.２＋１.５％寒天）上で増殖させた培養物を植菌し、そして３０℃にて振とう機上で１８０ｒｐｍでインキュベートする。ベンガミド誘導体（IV）の最大生産は、７２〜９６時間後に達する。分析のためにＨＰＬＣ−ＭＳを使用した。実施例２に記載されるような同様の栄養溶液由来の７２〜９６時間齢の液体培養物（植菌量約５〜１０％）は、１０〜２００Ｌの発酵槽に植菌するのに十分である。
実施例５：発酵槽中のベンガミド誘導体の調製
１０Ｌおよび３０Ｌの発酵槽を以下の条件下で作動させた。
植菌： 約５％ 約９％
発酵槽： ３０Ｌ １０Ｌ
栄養培地： 実施例２を参照 実施例２を参照
インキュベーション温度： ３０℃ ３０℃
撹拌速度： １１２ｒｐｍ １５０ｒｐｍ
通気： ８Ｌ／分 ４Ｌ／分
ｐＨ制御： ｐＨ７.８〜ｐＨ７.５ ｐＨ８.１〜ｐＨ７.５
ｐＯ2制御： なし なし
それぞれ１０％ＫＯＨまたは１０％ Ｈ2ＳＯ4を使用してｐＨを常に制御した。繰り返しＣｌｅｒｏｌ ＦＢＡ ２６５（Ｃｏｇｎｉｓ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ）を添加することによって、泡形成を抑制し得る。最大生産は約７２〜９６時間後に達する。
実施例６：Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）の振とう培養物からの、ベンガミド誘導体（II）および（III）、ならびにベンガミドＥおよびＦの単離
Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）発酵の終了後、実施例３からの培養ブロス（３０Ｌ培養ブロス）をバイオマスと共に凍結乾燥させ、そして凍結乾燥物をメタノール（２×５Ｌ）で抽出した。メタノール抽出物を、真空下、１.２Ｌまで減少させ、次いで約１.５リットルのＣＨＰ−２０Ｐ物質（ＭＣＩ（登録商標）ゲル、７５〜１５０μ、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で充填された調製カラムにロードした。カラムを９５％メタノールで溶出した。カラム流出画分（１２０ｍｌ／分）を回収し、そして真空下、１.５Ｌの容量まで減量させる。
実施例７：ＲＰ−１８クロマトグラフィーによる、ベンガミド誘導体（II）および（III）、またベンガミドＥおよびＦの予備分離
実施例６に記載されるように得られた溶液（１.５Ｌ）を、Ｌｕｎａ（登録商標）１０μＣ１８（２）プレカラム（寸法：２１.２ｍｍ×６０ｍｍ）が取り付けられたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μＣ１８（２）カラム（サイズ：５０ｍｍ×２５０ｍｍ）にロードし、そして６０分間にわたって、水中５％〜９５％アセトニトリルの勾配を使用して、溶出した（０.１％酢酸アンモニウム、酢酸でｐＨ４.６に調整）。流速は１５０ｍｌ／分であり、そして画分サイズは２００ｍｌであった。ベンガミドは画分５〜９、１０〜１１、および１２〜１４に存在した。
実施例８：ベンガミド誘導体（II）および（III）、またベンガミドＥおよびＦの精製
実施例７からの個々の画分を凍結乾燥させ、そしてＸＴｅｒｒａ（登録商標）Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍ（Ｗａｔｅｒｓ、寸法：１９×１０ｍｍ）プレカラムが取り付けられたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μｍＣ１８（２）カラム（寸法：２１ｍｍ×２５０ｍｍ）のＨＰＬＣによってもう一度精製した。カラムを水中５％〜４０％アセトニトリルの勾配を使用して、４０分間にわたって溶出した（０.１％酢酸アンモニウムを追加し、トリエチルアミンでｐＨ８.８に調整）。カラム流出画分（５０ｍｌ／分）は、画分（各場合において７.５ｍｌ画分）中に回収した。実施例７からの画分５〜９は、式（III）の化合物を含み、そしてクロマトグラフィー後、凍結乾燥させ、ベンガミドＥ（８６ｍｇ）を得た（純度＞９５％）。クロマトグラフィー後、実施例７からの画分１０〜１１は、ベンガミド（II）（１４５ｍｇ）（純度＞９５％、７０／３０ジアステレオマー混合物）およびベンガミドＦ（５ｍｇ）（純度＞９５％）を得た。実施例７からの画分１２〜１４について、ベンガミド（III）（３５ｍｇ）（純度＞９５％）が、７５：２５の比でジアステレオマー混合物として得られた。ジアステレオマーは、各場合において、対応するＣ−１６エピマーである。
実施例９：Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）の振とう培養物からのヒドロキシベンガミド（IV）の単離
Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）発酵の終了後、実施例５からの培養ブロス（１０Ｌの培養ブロス）をバイオマスと共に凍結乾燥させ、そして凍結乾燥物をメタノール（２×３Ｌ）で抽出した。メタノール抽出物を真空下で４００ｍｌまで減量させ、次いでＣＨＰ−２０Ｐ（０.６リットル）（ＭＣＩ（登録商標）ゲル、７５−１５０μ、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）材料で充填された調製カラムにロードした。カラムを水中５％〜９５％メタノールで溶出した。カラム流出画分（１００ｍｌ／分）を６０分間にわたって画分に回収した（１画分あたり０.５分）。所望の誘導体を含む画分（画分４５〜１０９）をプールし、そして７００ｍｌの容量まで真空下で減量させた。
実施例１０：ＲＰ−１８クロマトグラフィーによるヒドロキシベンガミド（IV）の精製
次いで、実施例９からの溶液を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μＣ１８（２）プレカラム（寸法：２１.２ｍｍ×６０ｍｍ）が取り付けられたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μＣ１８（２）カラム（サイズ：５０ｍｍ×２５０ｍｍ）にロードし、そして６０分間にわたって水中５％〜４０％アセトニトリルの勾配を使用して溶出した（０.１％酢酸アンモニウム、トリエチルアミンでｐＨ８.８に調整）。流速は１５０ｍｌ／分であり、そして画分サイズは２２５ｍｌであった。画分２２に所望のベンガミド誘導体が含まれていた。
実施例１１：ヒドロキシベンガミド（IV）の精製
実施例１０からの画分２２を凍結乾燥させ、そしてＷａｔｅｒｓ ＸＴｅｒｒａ（登録商標）Ｐｒｅｐ ＭＳ Ｃ１８ １０μｍプレカラム（寸法：１９×１０ｍｍ）が取り付けられたＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ（登録商標）１０μｍＣ１８（２）カラム（寸法：２１ｍｍ×２５０ｍｍ）のＨＰＬＣによってもう一度精製した。カラムを６０分間にわたって水中５％〜９５％アセトニトリルの勾配を用いて溶出した（０.１％酢酸アンモ
ニウムを追加し、酢酸でｐＨ４.６に調整）。カラム流出画分（５０ｍｌ／分）を画分（各場合において７.５ｍｌの画分）に回収した。ベンガミド含有画分（画分２６〜２８）を合わせ、脱塩し、そして凍結乾燥させた。これに関連して、ベンガミド（IV）（７ｍｇ）を７５：２５の比のジアステレオマー混合物として得た。
実施例１２：式（II）の化合物の特徴付け
実験式： Ｃ18Ｈ32Ｎ2Ｏ6
分子量： ３７２.４７
ジアステレオマー混合物： ７５：２５
Figure 2007509084
実施例１３：式（III）の化合物の特徴付け
実験式： Ｃ19Ｈ34Ｎ2Ｏ6
分子量： ３８６.４９
ジアステレオマー混合物： ７５／２５
Figure 2007509084
実施例１４：式（IV）の化合物の特徴付け
実験式： Ｃ18Ｈ32Ｎ2Ｏ7
分子量： ３８８.４６
ジアステレオマー混合物：７５／２５
Figure 2007509084
実施例１５：ベンガミドＥの特徴付け
実験式： Ｃ17Ｈ30Ｎ2Ｏ6
分子量： ３５８.４４
Figure 2007509084
実施例１６：ベンガミドＦの特徴付け
実験式： Ｃ18Ｈ32Ｎ2Ｏ6
分子量： ３７２.４７
Figure 2007509084
実施例１７：化合物（II）のジアステレオマーの分離
実施例８からの式（II）の化合物のジアステレオマー混合物を、キラルカラムで分離した（ＡＤ／Ｈ、Ｄａｉｃｅｌ、２０×２００ｍｍ、０.５ｍｌ流量、移動相：アセトニトリル：メタノール４：１＋０.１％ＮＨ4Ａｃ）。光学純度を分析用ＡＤ／Ｈカラム（Ｄａｉｃｅｌ）でチェックした（４.６×２５０ｍｍ、３０℃、移動相：アセトニトリル：メタノール ４：１＋０.１％ ＮＨ4Ａｃ、０.７５ｍｌ流量、Ｒｔピーク１：９.９分、Ｒｔピーク２：１０.９分）。
Figure 2007509084
実施例１８：種々の腫瘍細胞株で行われた細胞増殖測定
腫瘍細胞株Ｈｅｐ−Ｇ２（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＨＢ−８０６５）およびＣＯＬＯ ２０５（ＡＴＣＣ Ｎｏ．ＣＣＬ−２２２）を、細胞増殖を測定するために使用した。細胞株はそれぞれ１０００細胞／ウェル［Ｈｅｐ−Ｇ２］および３５００細胞／ウェル［Ｃｏｌｏ２０５］の割合で、細胞培養培地に植菌し、そして４時間３７℃にて、そして５％ＣＯ2でインキュベートした。
Ｈｅｐ−Ｇ２についての培地：ダルベッコ改変エーグル培地／Ｈａｍ’ｓ Ｆ１２ミックス（Ｇｉｂｃｏ）；ＮＥＡＡ（１０％；非必須アミノ酸、Ｇｉｂｃｏ）、ピルビン酸ナトリウム（１％、Ｇｉｂｃｏ）、Ｌ−グルタミン（１％、Ｇｉｂｃｏ）、ウシ胎仔血清（５％；ＰＡＡ）］。
ＣＯＬＯ２０５についての培地：ＲＰＭＩ １６４０（Ｇｉｂｃｏ）、Ｌ−グルタミン（１％、Ｇｉｂｃｏ）、ＨＥＰＥＳ（１％、Ｇｉｂｃｏ）、ウシ胎仔血清（１０％、ＰＡＡ）。
４時間後、ＤＭＳＯ／細胞培養培地に溶解した化合物（II）、（III）および（IV）、ならびにベンガミドＥおよびＦを種々の希釈で添加し、そしてこの混合物を７２時間３７℃にて、５％ ＣＯ2でインキュベートした。ＡＴＰ細胞内含有物を試験薬ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して決定した。
細胞増殖試験の結果を、表１に報告する。

Claims (16)

  1. 式（Ｉ）：
    Figure 2007509084
     ［式中、
    Ｒ1はＨまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、
    Ｒ2はＨまたはＯＨであり、そして
    Ｒ3はＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルである］
    の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩。
  2. Ｒ1がＨまたはメチルである、請求項１に記載の化合物。
  3. Ｒ3がＨである、請求項１または２に記載の化合物。
  4. Ｒ1がＨまたはメチルであり、Ｒ2がＨまたはＯＨであり、そしてＲ3がＨである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
  5. 式（II）：
    Figure 2007509084
     の化合物によって特徴付けられる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
  6. 式（III）：
    Figure 2007509084
     の化合物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
  7. 式（IV）：
    Figure 2007509084
     の化合物である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
  8. 医薬を製造するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩の使用。
  9. 癌疾患の処置および／または予防用医薬を製造するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩の使用。
  10. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の少なくとも１つの式（Ｉ）の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩の含有物を有する医薬。
  11. １．Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１株（ＤＳＭ １５８９８）、またはその改変体および／または変異体の１つを、１つまたはそれ以上の式（Ｖ）の化合物が培養培地中で生産されるまで、培養培地中で適切な条件下で発酵させる工程、
    ２．式（Ｖ）の化合物を、培養培地から単離する工程、および
    ３．式（Ｖ）の化合物を、必要に応じて、生理学的に許容される塩に誘導および／または変換する工程、
    を包含する、
    式（Ｖ）：
    Figure 2007509084
     ［式中、
    Ｒ1がＨまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、
    Ｒ2がＨまたはＯＨであり、
    Ｒ3がＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
    Ｒ4がメチルまたはエチルである］
    の化合物または式（Ｖ）の化合物の生理学的に許容される塩の製造方法。
  12. Ｒ4がエチルである、請求項１１に記載の方法。
  13. 互いに独立して、Ｒ1がＨまたはメチルであり、Ｒ3がＨであり、そしてＲ4がエチルである、請求項１１または１２に記載の方法。
  14. Ｒ2がＯＨであり、そして培養培地がヒドロキシリジンを含む、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
  15. 微生物Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）。
  16. 式（Ｖ）：
    Figure 2007509084
     ［式中、
    Ｒ1がＨまたは（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり
    Ｒ2がＨまたはＯＨであり、
    Ｒ3がＨまたは−Ｃ（＝Ｏ）−（Ｃ1−Ｃ6）−アルキルであり、そして
    Ｒ4がメチルまたはエチルである］
    の化合物またはそれらの生理学的に許容される塩を製造するための、微生物Ｍｙｘｏｃｏｃｃｕｓ ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ ＳＴ２００６１１（ＤＳＭ１５８９８）、またはそれらの変異体および／もしくは改変体の使用。
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