JP2007016014A - 花粉荷を有効成分とする骨量増進組成物 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】クローバー、ダイコン、シスタス、ナタネ、茶、ソバ等の花粉荷又は花粉荷処理物、特に水又はエタノールにより抽出した花粉荷抽出物を有効成分とする骨量増進組成物、より詳しくは、骨形成促進組成物、骨吸収抑制組成物、骨疾患の予防・治療薬、又は花粉荷又は花粉荷処理物、特に水又はエタノールにより抽出した花粉荷抽出物を配合・添加した骨疾患の予防・治療用機能性食品若しくは食品素材或いは骨疾患の予防・治療用機能性飼料若しくは飼料素材とする。
【選択図】なし
Description
花粉荷(スペイン産 シスタス)20gに99.5%エタノール30mlを加え乳鉢で練り込み、別の容器に移して室温で、60分間振とう混和した。次に、回転数3,000rpm(800×g)、10分間遠心分離機で遠心分離した後、上澄み液をΦ0.45μmのフィルターでろ過し、多検体濃縮装置(シグマ社)を用いて、気流下で濃縮した。得られた固形分から535mg/mlの花粉荷抽出物を作製した。収率は、13.6%であった。
花粉荷の素材として中国産の菜種10g、中国産のそば10g、台湾産のお茶10g、スペイン産のシスタス10gを用いた。各花粉荷10gにイオン交換水(以下、水)を40ml加え、乳鉢にて練り込み、次に50mlのコーニングチューブに移し、室温で30分間振とうした。その後、該チューブを1,500rpm、10分間遠心分離機で遠心分離し、上澄み液をさらに同条件で合計2回遠心分離した。上澄み液を1.5mlのエッペンドルフチューブに移し、13,000rpm(10,000×g)、20分間遠心分離機で遠心分離した。ろ液がやや懸濁していたお茶エキスとシスタスエキスについては吸引ろ過(ろ紙:アドバンテック131)を行った。各種のエキスをΦ0.45μmのフィルターでろ過し、凍結乾燥を行った。得られた粉末を秤量し、それぞれ約580mg/mlのサンプルを作製した。
ラット(ウイスター系雄性;4週齢)は日本SLC(株)(浜松)から購入し、固形飼料(炭水化物57.4%、カルシウム1.1%、リン1.1%及び亜鉛0.012%を含む)と精製蒸留水を自由に摂取させ、25℃の室温で飼育した。この飼育したラットをジエチルエーテルで麻酔し、心臓穿刺により採血後、大腿骨を無菌的に採取し、冷0.25Mショ糖溶液で骨髄を洗浄除去後、骨幹部(皮質部)と骨幹端部(海綿骨)組織に分け、細片した。これらの骨組織片を、ダルベッコ変法イーグル培養液(ペニシリン−ストレプトマイシン含有)中に、実施例1で調製したシスタス由来花粉荷水抽出物とシスタス由来花粉荷エタノール抽出物(10、100、1000μg/ml培養液)をそれぞれ含有した培養液を加えた培養用ディッシュ(35mm)の中で、37℃で48時間、5%CO2−95%airの条件で、インキュベーター中で培養した。また、ダルベッコ変法イーグル培地及びペニシリン−ストレプトマイシン混合溶液(5000unit/ml−5000μg/ml)はGibco Laboratories(Grand Island,NY,USA)から入手し、他の試薬はシグマ社(USA)及び和光純薬工業から購入した。試薬は精製蒸留水を用いて調製したものである。なお、花粉荷の水及びエタノール抽出物を添加することなく、培養液のみで培養した場合を対照とした。
組織片を0.25Mショ糖溶液で洗浄後、16時間、110℃で乾燥し、重量を測定した。その後、これらの組織片に濃硝酸溶液(3ml)を加えて120℃で16時間分解した。カルシウム量はカルシウム測定用キットを用いて測定し、骨組織中カルシウム量は、骨組織(乾燥)1g当たりのmg量として表示した。結果を表1に示す。得られた結果は、平均値±標準誤差として表示し、Student’s t-testにより対照群に対する有意差を検定し、危険率5%以下の場合に有意差ありとした。
4週齢のラット(オス、体重85.90g)に実施例1で調製したシスタス由来花粉荷水抽出物を精製蒸留水に溶解して、1.0mg/ml及び5.0mg/mlの液を調整した。ラット体重100g当り各1mlを、胃ゾンデを用いて、1日1回7日間経口投与し、最終投与の24時間目に解剖した。大腿骨を摘出し、骨幹部と骨幹端部組織にわけた。該骨幹部と骨幹端部を以下のアルカリ性ホスファターゼ活性の測定とDNA量の定量の方法にしたがって、また、カルシウム量の測定は、実施例2に記載の方法にしたがってそれぞれ測定した。精製蒸留水を同様の条件で経口投与した場合を対照とした。結果を表2に示す。
骨の石灰化の促進に関する最も重要な酵素であるアルカリ性ホスファターゼの発現量を調べた。インキュベーター中で培養した後、組織片を0.25Mのショ糖液で洗浄し、6.5mMのバルビタール緩衝液(pH7.4)3ml中で破砕し、超音波処理した。この液を遠心分離して上清を酵素液としてWalter及びSchuttの方法(in Method of Enzymatic Analysis, Vol1-2,p856, Academic Press, New York, 1965)に従って測定した。すなわち、p−ニトロフェニール燐酸を基質として、ジエタノールアミン緩衝液(pH9.8)2mlに酵素液0.05mlを添加し、37℃で30分間インキュベーションし、0.05NのNaOHを10ml添加した後、分光光度計を用いて吸光度(405nm)を測定し、骨に対する治療剤及び骨に対する作用の知られている化合物の骨アルカリ性ホスファターゼ活性を調べた。
骨組織中の細胞数の指標として、DNA量を定量した。インキュベーター中で培養した後、組織片を0.25Mの蔗糖溶液で洗浄し、湿重量を測定した。その後、0.1NのNaOH4ml中で粉砕して、4℃で24時間浸透させた。この液を遠心分離し、上清を試料としてCeriottiらの方法(J.Biol.Chem., 241: 34-77, 1951)に従って定量した。即ち、試料2mlに濃塩酸1ml及び0.04%のインドール溶液1mlを添加し沸騰水中で100℃に加熱後、急冷して、クロロホルム4mlで抽出し、クロロホルム層を採取して、分光光度計(490nm)を用いて骨中のDNA量を測定した。
花粉荷エキス末 1.00kg
還元麦芽糖 1.00kg
乳糖 0.58kg
セルロース 0.30kg
ステアリン酸マグネシウム 0.06kg
リン酸カルシウム 0.06kg
上記を順次配合し、打錠機を用いてΦ9mmのタブレット10,000錠分の錠剤を加工した。
ブドウ糖果糖液糖 18.00kg
精製ハチミツ 3.50kg
花粉荷エキス末 0.80kg
クエン酸 0.65kg
アスパラギン酸ナトリウム 35.00g
ニコチン酸アミド 25.00g
ビタミンC 10.00g
パントテン酸カルシウム 5.00g
ビタミンB1 3.00g
ビタミンB2 3.00g
香料 0.125kg
上記を順次混合し、よく撹拌し、100mlのドリンク剤1,000本を加工した。
還元麦芽糖 1.35kg
花粉荷エキス末 0.80kg
乳糖 0.20kg
ガラクトオリゴ糖 0.20kg
セルロース 0.15kg
カゼインホスホペプチド 0.10kg
ショ糖脂肪酸エステル 0.10kg
ミルクカルシウム 0.10kg
上記を順次混合し、打錠機を用いてΦ9mmのタブレット10,000錠分の錠剤を加工した。
還元麦芽糖水飴 1018g
ガラクトオリゴ糖 300g
花粉荷エキス 250g
コラーゲン 100g
リンゴ繊維 90g
粉末ヨーグルト 80g
香料 70g
カゼインホスホペプチド 30g
ミルクカルシウム 30g
ビタミンC 10g
リンゴ酸 10g
粉末蜂蜜 10g
ビタミンB2 2g
上記を順次混合し、撹拌造粒し、2gスティック、1,000本分の顆粒を加工した。
Claims (14)
- 花粉荷又は花粉荷処理物を有効成分として含有することを特徴とする骨量増進組成物。
- 花粉荷処理物が、花粉荷の水又はエタノール抽出物であることを特徴とする請求項1記載の骨量増進組成物。
- 花粉荷又は花粉荷処理物を有効成分として含有することを特徴とする骨形成促進組成物。
- 花粉荷処理物が、花粉荷の水又はエタノール抽出物であることを特徴とする請求項3記載の骨形成促進組成物。
- 花粉荷又は花粉荷処理物を有効成分として含有することを特徴とする骨吸収抑制組成物。
- 花粉荷処理物が、花粉荷の水又はエタノール抽出物であることを特徴とする請求項5記載の骨吸収抑制組成物。
- 花粉荷又は花粉荷処理物を有効成分として含有することを特徴とする骨疾患の予防・治療薬。
- 花粉荷処理物が、花粉荷の水又はエタノール抽出物であることを特徴とする請求項7記載の骨疾患の予防・治療薬。
- 骨疾患が骨粗鬆症であることを特徴とする請求項7又は8記載の骨疾患の予防・治療薬。
- 花粉荷又は花粉荷処理物を有効成分として含有することを特徴とする骨疾患の予防・治療用機能性食品又は食品素材。
- 花粉荷処理物が、花粉荷の水又はエタノール抽出物であることを特徴とする請求項10記載の骨疾患の予防・治療用機能性食品又は食品素材。
- 骨疾患が骨粗鬆症であることを特徴とする請求項10又は11記載の骨疾患の予防・治療用機能性食品又は食品素材。
- 花粉荷又は花粉荷処理物が配合されていることを特徴とする骨疾患の予防・治療用機能性飼料又は飼料素材。
- 花粉荷処理物が、花粉荷の水又はエタノール抽出物であることを特徴とする請求項13記載の骨疾患の予防・治療用機能性飼料又は飼料素材。
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