JP2006525015A - 懸濁した動物細胞の灌流培養による生物学的物質の製造方法 - Google Patents
懸濁した動物細胞の灌流培養による生物学的物質の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006525015A JP2006525015A JP2006507879A JP2006507879A JP2006525015A JP 2006525015 A JP2006525015 A JP 2006525015A JP 2006507879 A JP2006507879 A JP 2006507879A JP 2006507879 A JP2006507879 A JP 2006507879A JP 2006525015 A JP2006525015 A JP 2006525015A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell culture
- biological material
- cells
- fatty acid
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 11
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 title claims abstract description 10
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 8
- 239000012620 biological material Substances 0.000 title claims description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 29
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 25
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 13
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 claims description 9
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 9
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 9
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 9
- -1 sorbitan fatty acid ester Chemical class 0.000 claims description 8
- 150000004665 fatty acids Chemical group 0.000 claims description 7
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000816 ethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 claims description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 claims description 2
- 239000007859 condensation product Substances 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 claims 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 abstract description 11
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 5
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 5
- 108010008165 Etanercept Proteins 0.000 description 3
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 3
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 3
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 3
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010005716 Interferon beta-1a Proteins 0.000 description 2
- 108010005714 Interferon beta-1b Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 2
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940073621 enbrel Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N insulin (human) Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H]2C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3C=CC(O)=CC=3)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=3NC=NC=3)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC1=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)=O)CSSC[C@@H](C(N2)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)CC)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)C1=CN=CN1 PBGKTOXHQIOBKM-FHFVDXKLSA-N 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 2
- GYSCBCSGKXNZRH-UHFFFAOYSA-N 1-benzothiophene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2SC(C(=O)N)=CC2=C1 GYSCBCSGKXNZRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 0 CNC(COC(**)*1)C1*=O Chemical compound CNC(COC(**)*1)C1*=O 0.000 description 1
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 description 1
- 102000012289 Corticotropin-Releasing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010022152 Corticotropin-Releasing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 239000000055 Corticotropin-Releasing Hormone Substances 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N Cu+ Chemical compound [Cu+] VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N Decanoic acid Natural products CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010074604 Epoetin Alfa Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010017544 Glucosylceramidase Proteins 0.000 description 1
- 102000004547 Glucosylceramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 101000976075 Homo sapiens Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000013266 Human Regular Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108010090613 Human Regular Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102100040018 Interferon alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010079944 Interferon-alpha2b Proteins 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 229940124942 Recombivax HB Drugs 0.000 description 1
- 108700033496 Recombivax HB Proteins 0.000 description 1
- 229940124859 Rotavirus vaccine Drugs 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108010039185 Tenecteplase Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 229940124937 Vaqta Drugs 0.000 description 1
- 229960000446 abciximab Drugs 0.000 description 1
- 229940099983 activase Drugs 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000603 anti-haemophilic effect Effects 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940003504 avonex Drugs 0.000 description 1
- 229960004669 basiliximab Drugs 0.000 description 1
- 229940031422 benefix Drugs 0.000 description 1
- 229940021459 betaseron Drugs 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 229940049197 cerezyme Drugs 0.000 description 1
- 229940105774 coagulation factor ix Drugs 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 229960002806 daclizumab Drugs 0.000 description 1
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 229940089118 epogen Drugs 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 229960000403 etanercept Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 229960004177 filgrastim Drugs 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 108010006578 follitropin alfa Proteins 0.000 description 1
- 229940063135 genotropin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 229940057854 gonal f Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 1
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 1
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000057593 human F8 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940103471 humulin Drugs 0.000 description 1
- 108010039650 imiglucerase Proteins 0.000 description 1
- 229940038490 inactivated hepatitis a vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940090438 infergen Drugs 0.000 description 1
- 229960000598 infliximab Drugs 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 108010006088 interferon alfa-n1 Proteins 0.000 description 1
- 108010010648 interferon alfacon-1 Proteins 0.000 description 1
- 229960004461 interferon beta-1a Drugs 0.000 description 1
- 229960003161 interferon beta-1b Drugs 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229940047434 kogenate Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029345 neupogen Drugs 0.000 description 1
- 229940063137 norditropin Drugs 0.000 description 1
- 229940112216 novoseven Drugs 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229960003127 rabies vaccine Drugs 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010013773 recombinant FVIIa Proteins 0.000 description 1
- 108010025139 recombinant factor VIII SQ Proteins 0.000 description 1
- 229940116176 remicade Drugs 0.000 description 1
- 229940107685 reopro Drugs 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 108700031632 somatrem Proteins 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 229940036185 synagis Drugs 0.000 description 1
- 239000003784 tall oil Substances 0.000 description 1
- 229960000216 tenecteplase Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000187 tissue plasminogen activator Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 229960000575 trastuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011100 viral filtration Methods 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/50—Soluble polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
- C12N2510/02—Cells for production
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本発明は、無血清細胞培養用培地に懸濁した動物細胞を灌流培養することにより生物学的物質を製造する方法に関し、この場合、生物学的物質は細胞から濾過により分離され、細胞培養用培地に少なくとも０．００１ｗ／ｗ％の非イオン性界面活性剤が存在することを特徴とする。細胞培養用培地に非イオン性界面活性剤が存在すると、フィルターパフォーマンスが向上することが見出されている。
Description
本発明は、無血清細胞培養用培地に懸濁した動物細胞を灌流培養することにより生物学的物質を製造する方法に関し、この場合、生物学的物質は細胞から濾過により分離される。
そのような方法は、当技術分野では知られており、例えば、灌流培養についての総説がＴｏｋａｓｈｉｋｉら、１９９３年、Ｃｙｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、第１３巻、１４９から１５９頁に記載されている。生物学的物質は細胞から濾過により分離される灌流培養では、濾過は、（１）細胞がフィルターによって保持され、一方、（２）生物学的物質を含む液体がフィルターを通過するようにすることが好ましい。フィルターがこれら２つの作業をいかに良く行うかを示す指標は、細胞培養中の平均総細胞濃度とフィルターを通過する総体積との積（フィルターパフォーマンス）である。フィルターパフォーマンスは、生物学的物質の収量に比例する。
ところが、生物学的物質が細胞から濾過により分離される灌流培養の短所は、プロセス中にフィルターの目詰まりが生じることである。フィルターの目詰まりはフィルターを通過することができる総体積を制限し、結果としてフィルターパフォーマンスを制限し、したがって生物学的物質の収量をも制限する。
本発明の目的は、無血清細胞培養用培地に懸濁した動物細胞を灌流培養することにより生物学的物質を製造する方法であって、生物学的物質を細胞から濾過により分離され、かつフィルターの目詰まりが減少される（即ち、フィルターパフォーマンスが増進される）方法を提供することである。
この目的は、細胞培養用培地中に少なくとも０．００１ｗ／ｗ％の量の非イオン性界面活性剤が存在する本発明によって達成される。
哺乳動物細胞用の無血清培地に非イオン性界面活性剤の使用は、米国特許第５３７２９４３号公報より知られているが、米国特許第５３７２９４３号公報では、その使用の目的は、細胞培養用培地中で生物的に利用可能な形態の必須脂質を提供することである。本出願者は、驚くべきことに、哺乳動物細胞用の無血清培地に非イオン性界面活性剤を使用すると、フィルターの目詰まりも減少させることを見出した。
無血清培地に使用される非イオン性界面活性剤の量の上限は、原則として、さほど重要ではない。しかし、この上限は、例えば、非イオン性界面活性剤の毒性レベルおよび／または可溶性によって制限されることがある。上限は、さらにプロセス条件に依存することがあり、当業者であれば容易に決定することができる。通常、細胞培養用培地に存在する非イオン性界面活性剤の量の上限は１ｗ／ｗ％である。
本発明の方法では、非イオン性界面活性剤は、脂肪酸エステル、例えば、脂肪酸のグリセロールエステルもしくはジグリセロールエステル、または式１で表されるポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステルが好ましい。
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、または脂肪酸残基（ｒｅｓｔｇｒｏｕｐ）、即ち脂肪酸とアルコールとの縮合物の残り部分を表し、但し、Ｒ１からＲ４の少なくとも１つは脂肪酸残基であり、ここで、Ａはエチレン基またはプロピレン基を表し、ｎ、ｏ、ｐおよびｑはそれぞれ独立に０から１００の値を表し、この場合、ｎ、ｏ、ｐおよびｑの合計が５０から３００であることが好ましい。
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、または脂肪酸残基（ｒｅｓｔｇｒｏｕｐ）、即ち脂肪酸とアルコールとの縮合物の残り部分を表し、但し、Ｒ１からＲ４の少なくとも１つは脂肪酸残基であり、ここで、Ａはエチレン基またはプロピレン基を表し、ｎ、ｏ、ｐおよびｑはそれぞれ独立に０から１００の値を表し、この場合、ｎ、ｏ、ｐおよびｑの合計が５０から３００であることが好ましい。
脂肪酸残基は、１０から２０の炭素原子を含むことが好ましい。脂肪酸の例として、デカン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、トール油脂肪酸などが含まれる。
市販される式１の化合物の例として、Ｔｗｅｅｎ（商標）化合物、例えば、Ｔｗｅｅｎ（商標）−８０、Ｔｗｅｅｎ（商標）−２１、Ｔｗｅｅｎ（商標）−４０、Ｔｗｅｅｎ（商標）−６０、Ｔｗｅｅｎ（商標）−２０、Ｔｗｅｅｎ（商標）−６１、Ｔｗｅｅｎ（商標）−６５、Ｔｗｅｅｎ（商標）−８１、Ｔｗｅｅｎ（商標）−８５が含まれる。勿論、本発明の方法では、様々な非イオン性界面活性剤の組合せを使用することも可能である。
これらの脂肪酸エステルが少量存在していても、生物学的物質を医療用途で使用する際に障害が生じないため、本発明の方法では特に好都合である。
細胞培養用培地中の非イオン性界面活性剤の量は、好ましくは少なくとも０．００５ｗ／ｗ％、より好ましくは少なくとも０．０１ｗ／ｗ％、最も好ましくは少なくとも０．０２ｗ／ｗ％である。
本発明の方法で使用することのできる動物細胞は、例えば哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞、ハイブリドーマ、ＢＨＫ（仔ハムスター腎臓）細胞、骨髄腫細胞、ならびにヒト細胞、例えばＨＥＫ−２９３細胞およびヒトリンパ芽球様細胞である。
濾過は、原則として細胞の保持に適する全てのフィルターで行われることができる。そのようなフィルターの例としてスタティックフィルター、例えば、中空糸フィルターまたはタンジェンシャルフローフィルター、あるいは回転フィルター、例えばスピンフィルターがある。生物学的物質が生物薬剤学的生成物である場合、外部フィルターを使用するとＧＭＰ（ｇｏｏｄ ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ ｐｒａｃｔｉｃｅ）基準により生物薬剤学的生成物の製造プロセスの承認にさらなるバリデーションが必要であるため、好ましくは内部フィルターが用いられる。適切な内部フィルターの例は、内部スピンフィルターである。
フィルターの最も適切なメッシュサイズは、保持される細胞の細胞直径に依存し、当業者であれば容易に決定することができる。メッシュにおけるポアサイズが懸濁した細胞の直径に近く、確実に細胞が高度に保持される一方で、細胞残屑がフィルターを通過することができるように、メッシュサイズを選択することが好ましい。メッシュサイズが、５００×３０００から５０×３００の間であることが好ましい。
本発明は、原則として、動物細胞の培養に適するあらゆるタイプの細胞培養用培地を用いて使用されることができる。細胞培養用培地および細胞培養条件を選択するためのガイドラインはよく知られており、例えば、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．、動物細胞の培養（基本テクニックのマニュアル）（Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｃｅｌｌｓ（ａ ｍａｎｕａｌ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ））の第８、９章、第４版、２０００年、Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ、およびＤｏｙｌｅ，Ａ．，Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ｊ．Ｂ．，Ｎｅｗｅｌｌ，Ｄ．Ｇ．細胞と組織の培養：実験手順（Ｃｅｌｌ ＆ Ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ）、１９９３年、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓで提供される。
血清由来成分を含む培地は、ウィルスに汚染されることが多く、プリオン感染の危険性があり、生物薬剤学的生成物の後処理プロセス（即ち、細胞培養用培地から生物薬剤学的生成物のさらなる精製）に大きな障害となる可能性があるため、生物薬剤学的生成物を製造する上では、無血清培地は血清由来成分を含む培地よりも好ましい。哺乳動物由来の化合物も感染の危険性があるため、細胞培養用培地は血清を含まないだけでなく、哺乳動物由来成分も含まないことが好ましい。細胞培養用培地は哺乳動物由来成分を含まないだけでなく、動物由来成分も含まないのがより好ましい。
細胞培養用培地のｐＨ、温度、溶解酸素濃度および浸透圧は、原則として重要ではなく、選択する細胞のタイプに依存する。好ましくは、ｐＨ、温度、溶解酸素濃度および浸透圧は、細胞の増殖および生産性に最適となるように選択される。当業者であれば、灌流培養の最適ｐＨ、温度、溶解酸素濃度および浸透圧をどのようにして見つけるかを知っている。通常、最適ｐＨは６．６から７．６の間であり、最適温度は３０から３９℃の間であり、最適浸透圧は２６０から４００ｍＯｓｍの間であり、細胞培養用培地中の溶解酸素濃度は空気飽和の５から９５％の間である。
灌流培養による動物細胞により適切に産生することができる生物学的物質は、原則として動物細胞で産生することのできる全ての生物学的物質、例えば治療用および診断用タンパク質、例えば、モノクローナル抗体、成長因子および酵素、例えば遺伝子治療に使用することのできるＤＮＡ、ワクチン、ホルモンなどである。本発明による方法は、医療用途を有する生物学的物質である生物薬剤学的生成物の産生に使用されることが好ましい。生物薬剤学的生成物の例は以下の通りである（生物薬剤学的生成物に対応する商標名の例をカッコ内に示す）：テネクテプラーゼ（ＴＮ Ｋａｓｅ（商標））、（リコンビナント）抗血友病因子（ＲｅＦａｃｔｏ（商標））、リンパ芽球様インターフェロンα−ｎ１（Ｗｅｌｌｆｅｒｏｎ（商標））、（リコンビナント）凝固因子（ＮｏｖｏＳｅｖｅｎ（商標））、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ（商標））、トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標））、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標））、バシリキシマブ（Ｓｉｍｕｌｅｃｔ（商標））、ダクリズマブ（Ｚｅｎａｐａｚ（商標））、（リコンビナント）凝固因子ＩＸ（Ｂｅｎｅｆｉｘ（商標））、エリスロポエチンアルファ（Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標））、Ｇ−ＣＳＦ（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標）Ｆｉｌｇｒａｓｔｉｍ）、インターフェロンアルファ−２ｂ（Ｉｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標））、リコンビナントインスリン（Ｈｕｍｕｌｉｎ（登録商標））、インターフェロンベータ１ａ（Ａｖｏｎｅｘ（登録商標））、ＶＩＩＩ因子（ＫｏＧＥＮａｔｅ（登録商標））、グルコセレブロシダーゼ（Ｃｅｒｅｚｙｍｅ（商標））、インターフェロンベータ１ｂ（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標））、ＴＮＦアルファレセプター（Ｅｎｂｒｅｌ（登録商標））、濾胞刺激ホルモン（Ｇｏｎａｌ−Ｆ（登録商標））、アブシキマブ（Ｓｙｎａｇｉｓ（登録商標）、ＲｅｏＰｒｏ（登録商標））、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、組織プラスミノーゲン活性化因子（Ａｃｔｉｖａｓｅ（登録商標）、Ａｃｔｉｌｙａｓｅ（登録商標））、ヒト成長ホルモン（Ｐｒｏｔｒｏｐｉｎ（登録商標）、Ｎｏｒｄｉｔｒｏｐｉｎ（登録商標）、ＧｅｎｏＴｒｏｐｉｎ（商標））。医療用途に適する可能性があるＤＮＡの例として、遺伝子治療用プラスミドＤＮＡがある。遺伝子治療用ＤＮＡのいくつかは、医療用途の適用について臨床試験で現在試験中である。ワクチンの例として、生の経口用４価ロタウィルスワクチン（ＲｏｔａＳｈｉｅｌｄ（商標））、狂犬病ワクチン（ＲａｎＡｖｅｒｔ（商標））、Ｂ型肝炎ワクチン（ＲＥＣＯＭＢＩＶＡＸ ＨＢ（登録商標）、Ｅｎｇｅｒｉｘ（登録商標））、および不活化Ａ型肝炎ワクチン（ＶＡＱＴＡ（商標））がある。
フィルターを通過した生物学的物質を、いわゆる後処理プロセスでさらに精製することができる。後処理プロセスは、通常、いくつかの精製ステップを様々な組合せおよび順番で含む。後処理プロセスの精製ステップの例として、分離ステップ（例えば、アフィニティークロマトグラフィーおよび／またはイオン交換クロマトグラフィーによる）、生物学的物質を濃縮するステップ（例えば、限外濾過またはダイアフィルトレーションによる）、緩衝液を交換するステップおよび／またはウィルスを取り除くもしくは不活性化するステップ（例えば、ウィルス濾過、ｐＨシフト、または有機溶媒／界面活性処理による）がある。
本発明は、以下の実施例により説明されるが、これらに限定されない。
（実施例１）
ＰＦＵ−８３ハイブリドーマ細胞は、コルチコトロピン放出因子に対するラットＩｇＧを産生する、ラット／マウスヘテロハイブリドーマ細胞である（Ｊ．Ｗ．Ａ．Ｍ．ｖａｎ Ｏｅｒｓら、１９８９年、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１２４巻、１２３９から１２４６頁）。ＰＦＵ−８３ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物由来成分を含まない最小培地で３７℃で培養した。使用した哺乳動物由来成分を含まない最小培地は、アスコルビン酸（５ｍｇ／ｌ）、リコンビナントヒトインスリン（５ｍｇ／ｌ）、グルタチオン（１ｍｇ／ｌ）、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（商標）Ｆ６８（５００ｍｇ／ｌ）、Ｎａ２ＳｅＯ３（１５μｇ／ｌ）の形のセレニウム、重炭酸ナトリウム（３ｇ／ｌ）、エタノールアミン（７μｌ／ｌ）を含む３：１ＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓＦ１２培地に、グルタミン（最終濃度５８４．５ｍｇ／ｌ）、ピルビン酸ナトリウム（最終濃度１１０ｍｇ／ｌ）、およびトランスフェリン（５ｍｇ／ｌ）を補充し、浸透圧を３２０ｍＯｓｍとした。ｐＨを７．０にし、溶解酸素濃度を空気飽和の３０％にした。培養は、様々な濃度のＴｗｅｅｎ（商標）−８０（０、１５ｍｇ／ｌ、および５０ｍｇ／ｌ、即ち約０、０．０１５ｗ／ｗ％、および０．０５０ｗ／ｗ％に対応する）の存在下、３２５×２３００のメッシュサイズのスピンフィルターを用いて、有効体積４ｌで作動する７ｌアプリコン（Ａｐｐｌｉｋｏｎ）発酵槽で行われた。４から５日後に約５×１０６の生存細胞濃度に達した。
ＰＦＵ−８３ハイブリドーマ細胞は、コルチコトロピン放出因子に対するラットＩｇＧを産生する、ラット／マウスヘテロハイブリドーマ細胞である（Ｊ．Ｗ．Ａ．Ｍ．ｖａｎ Ｏｅｒｓら、１９８９年、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、１２４巻、１２３９から１２４６頁）。ＰＦＵ−８３ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物由来成分を含まない最小培地で３７℃で培養した。使用した哺乳動物由来成分を含まない最小培地は、アスコルビン酸（５ｍｇ／ｌ）、リコンビナントヒトインスリン（５ｍｇ／ｌ）、グルタチオン（１ｍｇ／ｌ）、プルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）（商標）Ｆ６８（５００ｍｇ／ｌ）、Ｎａ２ＳｅＯ３（１５μｇ／ｌ）の形のセレニウム、重炭酸ナトリウム（３ｇ／ｌ）、エタノールアミン（７μｌ／ｌ）を含む３：１ＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓＦ１２培地に、グルタミン（最終濃度５８４．５ｍｇ／ｌ）、ピルビン酸ナトリウム（最終濃度１１０ｍｇ／ｌ）、およびトランスフェリン（５ｍｇ／ｌ）を補充し、浸透圧を３２０ｍＯｓｍとした。ｐＨを７．０にし、溶解酸素濃度を空気飽和の３０％にした。培養は、様々な濃度のＴｗｅｅｎ（商標）−８０（０、１５ｍｇ／ｌ、および５０ｍｇ／ｌ、即ち約０、０．０１５ｗ／ｗ％、および０．０５０ｗ／ｗ％に対応する）の存在下、３２５×２３００のメッシュサイズのスピンフィルターを用いて、有効体積４ｌで作動する７ｌアプリコン（Ａｐｐｌｉｋｏｎ）発酵槽で行われた。４から５日後に約５×１０６の生存細胞濃度に達した。
全ての異なる操作で、細胞保持は１００％であった。フィルターが完全に目詰まりするまでの時間（スピンフィルターが溢れる点）を測定して、スピンフィルターパフォーマンスを計算した。スピンフィルターパフォーマンスは、スピンフィルターを通過した産生物の総体積と発酵槽中の平均総細胞濃度との積で規定される。発酵槽中の細胞濃度は、発酵槽の操作中に採取した細胞培養サンプル中の生細胞および死細胞の総数を、フックス−ローゼンタール（Ｆｕｃｈｓ−Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ）血球計算盤を用い、死細胞の染色にトリパンブルー排除試験を用いて光学顕微鏡下で計数して決定した。この実験の結果を下の表１に示す。表１より、Ｔｗｅｅｎ（商標）−８０を添加すると、目詰まりするまでの時間が増大し、スピンフィルターパフォーマンスが向上することがわかる。
Claims (10)
- 無血清細胞培養用培地に懸濁した動物細胞を灌流培養することにより生物学的物質を製造する方法であって、生物学的物質は細胞から濾過により分離され、少なくとも０．００１ｗ／ｗ％の式１で表されるポリオキシアルキレンソルビタン脂肪酸エステルが、
（式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は、それぞれ独立に、水素、または脂肪酸残基、即ち脂肪酸とアルコールとの縮合物の残り部分を表し、但し、Ｒ１からＲ４の少なくとも１つは脂肪酸残基であり、ここで、Ａはエチレン基またはプロピレン基を表し、ｎ、ｏ、ｐおよびｑはそれぞれ独立に０から１００の値を表す）
細胞培養用培地中に存在することを特徴とする方法。 - 式１において、ｎ、ｏ、ｐおよびｑの合計が５０から３００であることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
- 少なくとも０．０１ｗ／ｗ％の式１の化合物が細胞培養用培地中に存在することを特徴とする、請求項１または請求項２に記載の方法。
- 動物細胞が哺乳動物細胞であることを特徴とする、請求項１から３のいずれか１項に記載の方法。
- 式１の化合物がＴｗｅｅｎ（商標）化合物であることを特徴とする、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
- 濾過が内部フィルターを用いて行われることを特徴とする、請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
- 内部フィルターがスピンフィルターであることを特徴とする、請求項６に記載の方法。
- 生物学的物質が生物薬剤学的生成物であることを特徴とする、請求項１から７のいずれか１項に記載の方法。
- 無血清細胞培養用培地が、哺乳動物由来成分を含まない培地でもあることを特徴とする、請求項８に記載の方法。
- 生物学的物質が後処理プロセスによりさらに精製されることを特徴とする、請求項１から９のいずれか１項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP03101205 | 2003-05-01 | ||
| PCT/NL2004/000300 WO2004097006A1 (en) | 2003-05-01 | 2004-05-03 | Process for the production of biological substances by perfusion culturing of suspended animal cells |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2006525015A true JP2006525015A (ja) | 2006-11-09 |
Family
ID=33395963
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2006507879A Withdrawn JP2006525015A (ja) | 2003-05-01 | 2004-05-03 | 懸濁した動物細胞の灌流培養による生物学的物質の製造方法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20070065907A1 (ja) |
| EP (1) | EP1620549B1 (ja) |
| JP (1) | JP2006525015A (ja) |
| KR (1) | KR20060015568A (ja) |
| CN (1) | CN100432217C (ja) |
| AT (1) | ATE371014T1 (ja) |
| AU (1) | AU2004235017B2 (ja) |
| CA (1) | CA2523792A1 (ja) |
| DE (1) | DE602004008451T2 (ja) |
| DK (1) | DK1620549T3 (ja) |
| ES (1) | ES2290705T3 (ja) |
| WO (1) | WO2004097006A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016187360A (ja) * | 2010-10-05 | 2016-11-04 | ノヴォ・ノルディスク・ヘルス・ケア・アーゲー | タンパク質を生産するための方法 |
Families Citing this family (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ITRM20060020A1 (it) * | 2006-01-18 | 2007-07-19 | Andrea Masotti | Metodo per la coltura di cellule |
| MX340242B (es) | 2006-07-14 | 2016-07-01 | Dpx Holdings Bv | Proceso mejorado para el cultivo de celulas. |
| WO2012149197A2 (en) | 2011-04-27 | 2012-11-01 | Abbott Laboratories | Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins |
| US9067990B2 (en) | 2013-03-14 | 2015-06-30 | Abbvie, Inc. | Protein purification using displacement chromatography |
| WO2013158279A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Abbvie Inc. | Protein purification methods to reduce acidic species |
| US9181572B2 (en) | 2012-04-20 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Methods to modulate lysine variant distribution |
| US9249182B2 (en) | 2012-05-24 | 2016-02-02 | Abbvie, Inc. | Purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography |
| US9512214B2 (en) | 2012-09-02 | 2016-12-06 | Abbvie, Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
| WO2014035475A1 (en) | 2012-09-02 | 2014-03-06 | Abbvie Inc. | Methods to control protein heterogeneity |
| EP2830651A4 (en) | 2013-03-12 | 2015-09-02 | Abbvie Inc | HUMAN ANTIBODIES THAT BIND TNF-ALPHA AND PREPARATION METHODS |
| US9017687B1 (en) | 2013-10-18 | 2015-04-28 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography |
| US9499614B2 (en) | 2013-03-14 | 2016-11-22 | Abbvie Inc. | Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosaccharides |
| US20140271633A1 (en) * | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Abbvie Inc. | Mammalian cell culture performance through surfactant supplementation of feed media |
| US9598667B2 (en) | 2013-10-04 | 2017-03-21 | Abbvie Inc. | Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins |
| US9085618B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-07-21 | Abbvie, Inc. | Low acidic species compositions and methods for producing and using the same |
| US9181337B2 (en) | 2013-10-18 | 2015-11-10 | Abbvie, Inc. | Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same |
| WO2015073884A2 (en) | 2013-11-15 | 2015-05-21 | Abbvie, Inc. | Glycoengineered binding protein compositions |
| CN114317392A (zh) * | 2021-12-27 | 2022-04-12 | 无锡药明生物技术股份有限公司 | 优化细胞培养的方法 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5372943A (en) * | 1987-07-24 | 1994-12-13 | Cetus Corporation | Lipid microemulsions for culture media |
| US5378612A (en) * | 1990-05-11 | 1995-01-03 | Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute | Culture medium for production of recombinant protein |
| ATE550429T1 (de) * | 1996-11-20 | 2012-04-15 | Crucell Holland Bv | Adenovirus-zusammensetzungen erhältlich durch ein verbessertes produktions- und reinigungsverfahren |
-
2004
- 2004-05-03 EP EP04730939A patent/EP1620549B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-03 US US10/554,293 patent/US20070065907A1/en not_active Abandoned
- 2004-05-03 AT AT04730939T patent/ATE371014T1/de not_active IP Right Cessation
- 2004-05-03 DK DK04730939T patent/DK1620549T3/da active
- 2004-05-03 JP JP2006507879A patent/JP2006525015A/ja not_active Withdrawn
- 2004-05-03 DE DE602004008451T patent/DE602004008451T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2004-05-03 WO PCT/NL2004/000300 patent/WO2004097006A1/en active IP Right Grant
- 2004-05-03 CA CA002523792A patent/CA2523792A1/en not_active Abandoned
- 2004-05-03 ES ES04730939T patent/ES2290705T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2004-05-03 CN CNB2004800117912A patent/CN100432217C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2004-05-03 AU AU2004235017A patent/AU2004235017B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2004-05-03 KR KR1020057020674A patent/KR20060015568A/ko not_active Application Discontinuation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016187360A (ja) * | 2010-10-05 | 2016-11-04 | ノヴォ・ノルディスク・ヘルス・ケア・アーゲー | タンパク質を生産するための方法 |
| US10138290B2 (en) | 2010-10-05 | 2018-11-27 | Novo Nordisk Healthcare Ag | Process for protein production |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1620549B1 (en) | 2007-08-22 |
| ES2290705T3 (es) | 2008-02-16 |
| WO2004097006A1 (en) | 2004-11-11 |
| AU2004235017A1 (en) | 2004-11-11 |
| ATE371014T1 (de) | 2007-09-15 |
| CA2523792A1 (en) | 2004-11-11 |
| AU2004235017B2 (en) | 2009-06-04 |
| US20070065907A1 (en) | 2007-03-22 |
| DE602004008451T2 (de) | 2008-05-15 |
| CN100432217C (zh) | 2008-11-12 |
| DK1620549T3 (da) | 2007-11-05 |
| CN1780905A (zh) | 2006-05-31 |
| KR20060015568A (ko) | 2006-02-17 |
| DE602004008451D1 (de) | 2007-10-04 |
| EP1620549A1 (en) | 2006-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2006525015A (ja) | 懸濁した動物細胞の灌流培養による生物学的物質の製造方法 | |
| JP5719947B2 (ja) | 灌流培養方法の、細胞培養物中の細胞の凝集度合いを減少させるための使用 | |
| RU2694327C2 (ru) | Способ культивирования в системе посевных ферментеров (варианты) | |
| US9670520B2 (en) | Process for the culturing of cells | |
| JP2020054388A (ja) | 生物薬剤フェドバッチ生産能力及び生産物品質を改善するための灌流シード培養の使用 | |
| US6924124B1 (en) | Feeding strategies for cell culture | |
| CN107660232A (zh) | 用于通过使用哺乳动物细胞高效生产靶材料的细胞培养基、使用所述细胞培养基的细胞培养方法，以及生产靶材料的方法 | |
| CN111406105A (zh) | 具有连续收获而无细胞排出的强化灌流细胞培养方法 | |
| TWI777364B (zh) | 連續收穫由培養的細胞生產的生物物質的設備和方法 | |
| JP3020300B2 (ja) | 動物細胞培養用組成物、培養方法および生理活性物質の製造法 | |
| JPH0870859A (ja) | 動物細胞培養用の無血清培地、および生理活性ペプチドまたは蛋白質の製造法 | |
| RU2786997C2 (ru) | Процессы культивирования в системе посевных ферментеров и способы их применения | |
| JP2002142759A (ja) | 細胞培養用培地 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070424 |
|
| A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20090820 |