JP2006524244A - タンパク質断片の相補性アッセイのための蛍光タンパク質断片 - Google Patents
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Abstract
Description
蛍光タンパク質断片の相補性アッセイの創製およびPCA用突然変異断片の発生
本発明者らは、A.ビクトリアGFPから開始し異なるスペクトル的性質を有する2つのPCAを創製しようとした。まず、哺乳動物におけるコドン最適化版のGFP(pCMS−EGFP、Clontech)からのPCRによってGFP断片を発生させた。GFP[1]はGFPのアミノ酸1から158に対応し、GFP[2]はGFPのアミノ酸159から239に対応する。次に、PCRによりGFPの断片1にEYFP特異的突然変異S65G、S72Aを、かつGFPの断片2に突然変異T203Yを導入し、それぞれ断片YFP[1]およびYFP[2]をもたらすことによってGFPの黄色変異体(YFP PCA)をコードする断片を創製した。
蛍光タンパク質における代替切断部位
代替切断部位から発生する蛍光タンパク質断片(本発明の主題である)がPCAで使用できることを実証するために、基本となる蛍光タンパク質PCAを黄色(YFP)蛍光タンパク質について創製した(図4参照)。全長タンパク質(Pdk2、14−3−3σ、ならびにNFκBヘテロ二量体の構成要素であるp50およびp65)をコードするcDNAを、相補性YFP断片であるYFP[1]およびYFP[2]のNまたはC末端の一方に融合させた。これらの断片は、図1aおよび図1bにGln157、Lys158またはAsp173と示す位置での全長タンパク質の切断に対応する。ここで、表示されたアミノ酸残基はYFP[1]と称されるN末端レポーター断片のC末端を表す。14−3−3/14−3−3二量体の形成を、各PCA断片対がタンパク質−タンパク質複合体の検出を可能にする能力を評価するために使用した。Pdk2−YFP[1]/Pdk2−YFP[2]をPCA陰性対照として使用した。HEK293E細胞に各構築体対100ngを一過性トランスフェクトし、その48時間後にMolecular Devices Gemini XSプレートリーダーを用いて総蛍光を評価した。各棒線は3回の測定の平均蛍光を表し、誤差の棒線は95%信頼限界を表す。モックトランスフェクトされた細胞(DNAおよび単一DNA構築体を含まない)を黄色で示す。様々な断片の方向および組合せを試験した。それは、複合体形成の最適な検出が方向に依存するおそれがあるからである。この実施例において、Lys158およびAsp173の切断部位はすべての可能性のある断片の組合せからの14−3−3/14−3−3複合体の検出を可能にした。Gln156切断部位はNCおよびCC方向の両方で14−3−3/14−3−3複合体の検出を可能にした。断片/遺伝子方向は以下のとおりであった:
NN=14−3−3−YFP[1]/14−3−3−YFP[2]、
NC=14−3−3−YFP[1]/YFP[2]−14−3−3、
CN=YFP[1]−14−3−3/14−3−3−YFP[2]、
CC=YFP[1]−14−3−3/YFP[2]−14−3−3)。
これらの結果は、本発明に組み込まれているタンパク質工学原理の有用性を実証し、様々な断片がPCAに有用であることを示した。本発明の主題である組成物にはPCAに有用な広範囲の突然変異を組み込まれた様々な断片対がある。
生物学応用のためにYFP PCAよりも明るいシグナルを有するスーパー強化YFP PCA(SEYFP−PCA)および強烈蛍光PCA(IFP PCA)を発生する突然変異断片
PCAのスペクトル的性質が突然変異断片を操作することによって影響されうることをさらに実証するために、本発明者らはまずPCRで操作してYFP[1]にSEYFPのF64LおよびM153T突然変異を導入し、新規な断片SEYFP[1]を創製した。実施例1に記載したようにサブクローニングを行った。プロテインキナーゼMEKおよびERKと相互作用させるために融合構築体を上に記載するように調製した。配列決定により確認された各レポーター断片における特異的突然変異を付記し、表2および3のようにwtGFPに対して示した。
スペクトル偏移PCA
緑色蛍光シグナルおよび黄色蛍光シグナルを発生するPCAの多数の例が上に記載され実証された。本明細書に記載された本発明は突然変異断片のアミノ酸配列に応じて多様なスペクトル的性質を発生するPCAを可能にする。この原理をさらに実証するために、シアン蛍光タンパク質の断片に基づくPCAを創製してタンパク質−タンパク質相互作用によって発生した青色蛍光を実証した(図9)。CFPの断片に対応する2つのオリゴヌクレオチドをBlue Heron Biotechnology(ボセル、ワシントン州)で合成した。結果として生じた断片をPCRで増幅して、pcDNA3に基づく発現ベクターにクローニングするために制限部位および10aaのフレキシブル・リンカーを付着させ(ECFPのaa1〜158とコードする)CFP[1]または(ECFPのaa159〜239をコードする)CFP[2]を含むベクターをもたらす。ここでCFPは表3にECFPとして示したアミノ酸配列を有する。タンパク質Pdk2および14−3−3aをそれぞれCFP[1]およびCFP[2]のN末端に融合させ、一方でNFκBヘテロ二量体のp50サブユニットおよびp65サブユニットをCFP断片のC末端に融合させた。構築体対14−3−3σ/14−3−3σ、p65/p50およびPdk2/Pdk2陰性対照をHEK293T細胞に一過性トランスフェクトし、48時間後に蛍光顕微鏡観察を行った。蛍光画像を、Chroma CFPフィルター(励起:426〜446nm、発光:460〜500nm、ダイクロイックミラー:455LP)を用いたSPニコン蛍光顕微鏡で獲得した。画像を図8に示すようにCoolSnap HQ CCDカメラで露出時間1〜5秒で獲得した。結果は、無傷蛍光タンパク質においてスペクトル偏移を引き起こす突然変異を操作してPCA用の断片に導入して、生物学応用への有用性を有する青色蛍光シグナルを発生するPCAを生じることができることを示す。
多色PCA
1組の蛍光タンパク質PCAを入手できることは、多様な生物学、バイオテクノロジー、創薬および診断応用のための多色PCAの構築を可能にする。そのような多色PCA本発明の別の態様である。
本発明の多数の実際的な応用には、生細胞、細胞溶解物、またはin vitro形式におけるハイコンテント・アッセイおよびハイスループット・アッセイがある。本発明の応用にはアゴニスト、アンタゴニストおよび阻害剤による生細胞での経路活性化および経路「スイッチング」の検出がある。ある細胞内区画から別の区画へのタンパク質の移行または輸送を追跡できる。もしもタンパク質Aが当初細胞膜にあるタンパク質Bに結合し黄色蛍光シグナルを発し、次に細胞核に移動してタンパク質Cに結合しシアン蛍光シグナルを発するならば、黄色対シアンの比を移行イベントの活性化の検出器として使用できる。さらに、診断およびナノテクノロジーにおいて蛍光タンパク質PCAの多数の応用がある。例えば、各突然変異F1断片を、異なる抗体との融合体として固相表面アレイに結合させることができ、これを試料中の特異的抗原の存在を検出するために使用できよう。多色PCAの応用には、生物戦物質の迅速多色診断がある。そのような多色PCAは本発明の主題である新規な突然変異断片によって可能となる。
米国特許第6294330号 Michnickら
米国特許第6428951号 Michnickら
米国特許第5804387号 Cormackら
米国特許第5625048号 Tsienら
米国特許第6054321号 Tsienら
米国特許第6027881号 Pavlakisら
米国特許第6469154号 Tsienら
米国特許第6066476号 Tsienら
米国特許第6172188号 Thastrupら
米国特許第6968738号 Andersonら
米国特許第6090919号 Cormackら
米国特許第6124128号 Tsienら
米国特許第6518021号 Thastrupら
Remy, I.、Pelletier, J.N.、Galarneau, A.およびMichnick, S.W.、2002(タンパク質断片相補戦略を用いたタンパク質相互作用およびライブラリー・スクリーニング)Protein-protein Interactions: A Molecular Cloning Manual、E.A. Golemis編、Cold Spring Harbor Laboratory Press、第25章、449〜475頁
Michnick, S.W.、Remy, I.、C.-Valois, F.X.、Vallee-Belisle, A.、Galarneau, A.およびPelletier, J.N.、2000(タンパク質断片相補戦略によるタンパク質−タンパク質相互作用の検出、第A部および第B部)(John N. Abelson、Scott D. EmrおよびJeremy Thorner編)Methods in Enzymology、328: 208〜230頁
J. N. PelletierおよびS. W. Michnick.、1997(タンパク質断片相補に基づくin vivoタンパク質−タンパク質相互作用の検出戦略)Protein Engineering、10(増刊): 89
I. Ghosh、A.D. HamiltonおよびL. Regan、2000、(逆平行ロイシン・ジッパー特異的タンパク質再集合:緑色蛍光タンパク質への応用)J. Am. Chem. Soc 122: 5658〜5659頁、2000
C.-D. Huら、2002(二分子蛍光相補を用いた生細胞におけるbZIPおよびRelファミリー・タンパク質間の相互作用の視覚化)Molecular Cell 9: 789〜798頁
Tsien, R.Y.、1998(緑色蛍光タンパク質)Annual Reviews of Biochemistry 67: 509〜544頁
Zhang J.、Campbell R.E.、Ting A.Y.およびTsien, R.T. (2000)(細胞生物学のための新しい蛍光プローブの創製)Nature Reviews 3: 906〜918頁
[aaはアミノ酸である]
GFP F1:wt GFP(配列番号2)のaa残基1−39
GFP F2:wt GFP(配列番号2)のaa残基40−238
YFP F1A:wt EYFP(配列番号4)のaa残基1−40
YFP F2A:wt EYFP(配列番号4)のaa残基41−239
YFP F1B:wt EYFP(配列番号4)のaa残基1−103
YFP F2B:wt EYFP(配列番号4)のaa残基104−239
YFP F1C:wt EYFP(配列番号4)のaa残基1−117
YFP F2C:wt EYFP(配列番号4)のaa残基118−239
YFP F1DX:wt EYFP(配列番号4)のaa残基1−158
YFP F2DX:wt EYFP(配列番号4)のaa残基159−239
YFP F1D:wt EYFP(配列番号4)のaa残基1−159
YFP F2D:wt EYFP(配列番号4)のaa残基160−239
YFP F1E:wt EYFP(配列番号4)のaa残基1−174
YFP F2E:wt EYFP(配列番号4)のaa残基175−239
YFP F1F:wt EYFP(配列番号4)のaa残基1−191
YFP F2F:wt EYFP(配列番号4)のaa残基192−239
EGFPFA:wt EGFP(配列番号3)のaa残基41−239
RFP F1A:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基1−39
RFP F2A:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基40−225
RFP F1B:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基1−101
RFP F2B:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基102−225
RFP F1C:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基1−115
RFP F2C:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基116−225
RFP F1D:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基1−153
RFP F2D:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基154−225
RFP F1E:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基1−169
RFP F2E:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基170−225
RFP F1F:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基1−184
RFP F2F:wt mRFP(配列番号15,16)のaa残基185−225
KFP F1A:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基1−36
KFP F2A:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基37−232
KFP F1B:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基1−98
KFP F2B:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基99−232
KFP F1C:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基1−153
KFP F2C:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基154−232
KFP F1D:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基1−112
KFP F2D:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基113−232
KFP F1E:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基1−169
KFP F2E:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基170−232
KFP F1F:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基1−186
KFP F2F:wt KFP1(配列番号17,18)のaa残基187−232
Claims (17)
- タンパク質の相補的断片を含む組成物であって、
前記断片が会合した(associated)場合に光学的に検出できるシグナルを発生することを特徴とする組成物。 - 前記断片が会合した場合に蛍光シグナルを発生することを特徴とする請求項1に記載の組成物。
- 前記断片が会合した場合に発光シグナルを発生することを特徴とする請求項1に記載の組成物。
- 前記断片が会合した場合に燐光シグナルを発生することを特徴とする請求項1に記載の組成物。
- 前記断片が蛍光タンパク質に由来することを特徴とする請求項1に記載の組成物。
- 前記断片が突然変異の蛍光タンパク質に由来することを特徴とする請求項5に記載の組成物。
- 前記相補的断片が野生型タンパク質の対応する断片と少なくとも1アミノ酸異なることを特徴とする請求項6に記載の組成物。
- 前記相補的断片が配列番号20から配列番号1067で構成される群から選択されることを特徴とする請求項6に記載の組成物。
- 前記配列番号20から配列番号1067が別個の分子にさらに融合していることを特徴とする請求項8に記載の組成物。
- 突然変異タンパク質の相補的断片を含む組成物であって、
前記断片が会合した場合に光学的に検出できるシグナルを発生し、
各断片が別個の分子に融合していることを特徴とする組成物。 - 前記断片が会合した場合に蛍光シグナル、発光シグナルまたは燐光シグナルを発生することを特徴とする請求項10に記載の組成物。
- 前記相補的断片が野生型タンパク質の対応する断片と少なくとも1アミノ酸異なることを特徴とする請求項10に記載の組成物。
- 光学的に検出できるタンパク質からの分離した断片の再集合を含む、分子相互作用の検出のためのタンパク質断片の相補性アッセイであって、
前記断片の再集合が各断片に融合している分子ドメインの相互作用によって作動され、
前記断片の再集合が他の分子プロセスから独立しており、
前記再集合が前記光学的に検出できるタンパク質の活性の再構成によって検出される、ことを特徴とするタンパク質断片の相補性アッセイ。 - 前記断片が会合した場合に蛍光シグナルを発生することを特徴とする請求項13に記載の相補性アッセイ。
- 前記断片が突然変異の蛍光タンパク質に由来することを特徴とする請求項13に記載の相補性アッセイ。
- (a)光学的に検出できる適切なタンパク質を選択する工程と、
(b)前記光学的に検出できるタンパク質がタンパク質機能を可逆的に喪失するように効果的に断片化する工程と、
(c)前記光学的に検出できるタンパク質の断片を別々に他の分子に融合または付着させる工程と、
(d)前記タンパク質の断片に融合または付着している分子の相互作用を通じて前記断片を再会合させる工程と、
(e)結果として生じる光学シグナルを検出する工程と、
を含むことを特徴とする生体分子相互作用を検出するための方法。 - 前記光学的に検出できるレポーター・タンパク質が突然変異の蛍光タンパク質であることを特徴とする請求項16に記載の方法。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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JP2009513141A (ja) * | 2005-10-27 | 2009-04-02 | トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシティ | タンパク質相補によるリアルタイムインビボ核酸検出 |
JP2009515510A (ja) * | 2005-10-27 | 2009-04-16 | トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシティ | 活性化分割ポリペプチドならびにその生成法および使用 |
Families Citing this family (29)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7062219B2 (en) * | 1997-01-31 | 2006-06-13 | Odyssey Thera Inc. | Protein fragment complementation assays for high-throughput and high-content screening |
US6897017B1 (en) * | 1997-01-31 | 2005-05-24 | Odyssey Thera Inc. | Vivo library-versus-library selection of optimized protein-protein interactions |
US20020064769A1 (en) * | 2000-10-05 | 2002-05-30 | Watson Michnick Stephen William | Dynamic visualization of expressed gene networks in living cells |
US20050221280A1 (en) * | 1998-02-02 | 2005-10-06 | Odyssey Thera, Inc. | Protein-protein interactions for pharmacological profiling |
JP3829252B2 (ja) * | 2001-06-08 | 2006-10-04 | 独立行政法人理化学研究所 | 蛍光蛋白質 |
WO2005001115A2 (en) * | 2003-05-30 | 2005-01-06 | Odyssey Thera, Inc. | Monitoring gene silencing and annotating gene function in living cells |
US20070224615A1 (en) * | 2003-07-09 | 2007-09-27 | Invitrogen Corporation | Methods for assaying protein-protein interactions |
US7488583B2 (en) * | 2003-09-25 | 2009-02-10 | Odyssey Thera, Inc. | Fragment complementation assays for G-protein-coupled receptors and their signaling pathways |
GB0327143D0 (en) * | 2003-11-21 | 2003-12-24 | Univ Belfast | Assay |
US20090221440A1 (en) * | 2004-07-12 | 2009-09-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions related to identifying protein-protein interactions |
US20060094059A1 (en) * | 2004-09-22 | 2006-05-04 | Odyssey Thera, Inc. | Methods for identifying new drug leads and new therapeutic uses for known drugs |
US20060094682A1 (en) | 2004-10-29 | 2006-05-04 | Odyssey Thera, Inc. | Kinase inhibitors for the treatment of diabetes and obesity |
CA2638888A1 (en) * | 2004-12-04 | 2006-06-15 | The Regents Of The University Of California | Protein subcellular localization assays using split fluorescent proteins |
CA2606876C (en) * | 2005-05-03 | 2018-07-10 | Georgia State University Research Foundation, Inc. | Fluorescent proteins and uses thereof |
EP1931787A4 (en) * | 2005-09-30 | 2010-10-20 | Univ Montana State | SYSTEM FOR DETECTING PROTEIN-PROTEIN INTERACTIONS |
WO2008018905A2 (en) * | 2006-01-17 | 2008-02-14 | Cellumen, Inc. | Method for predicting biological systems responses |
EP1847604A1 (en) | 2006-04-19 | 2007-10-24 | Millegen | Intracellular method for selecting a peptide or polypeptide which binds to a bait peptide or polypeptide |
US8114615B2 (en) | 2006-05-17 | 2012-02-14 | Cernostics, Inc. | Method for automated tissue analysis |
WO2008060483A2 (en) * | 2006-11-10 | 2008-05-22 | Cellumen, Inc. | Protein-protein interaction biosensors and methods of use thereof |
CA2704226A1 (en) * | 2007-11-01 | 2009-05-07 | The Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona | Cell-free methods for detecting protein-ligand interctions |
WO2009111073A2 (en) * | 2008-03-06 | 2009-09-11 | Odyssey Thera, Inc. | High-content and high throughput assays for identification of lipid-regulating pathways, and novel therapeutic agents for lipid disorders |
WO2011135040A1 (en) | 2010-04-30 | 2011-11-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Fluorescent antibody fusion protein, its production and use |
CN103179940B (zh) | 2010-08-24 | 2016-01-13 | 安全白有限公司 | 提供牙齿洁白外观的方法和材料 |
US10018631B2 (en) | 2011-03-17 | 2018-07-10 | Cernostics, Inc. | Systems and compositions for diagnosing Barrett's esophagus and methods of using the same |
CA2972960C (en) | 2014-01-14 | 2022-01-11 | Asedasciences Ag | Identification of functional cell states |
CA2851568A1 (en) | 2014-05-09 | 2015-11-09 | The Governors Of The University Of Alberta | Drug discovery and protein-protein interaction assay using flourescent protein exchange |
KR101751917B1 (ko) * | 2016-02-02 | 2017-06-28 | 기초과학연구원 | 가역적으로 활성화 가능한 항체 유사체 및 그의 용도 |
CN108267595A (zh) * | 2017-11-27 | 2018-07-10 | 南京天纵易康生物科技股份有限公司 | 一种基于双分子荧光互补技术的Myo检测试剂盒、制备及使用方法 |
WO2024015362A1 (en) * | 2022-07-11 | 2024-01-18 | Cornell University | Chemically stable fluorescent proteins for advanced microscopy |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2001087919A2 (en) * | 2000-05-12 | 2001-11-22 | Yale University | Methods of detecting interactions between proteins, peptides or libraries thereof using fusion proteins |
US6428951B1 (en) * | 1997-01-31 | 2002-08-06 | Odyssey Pharmaceuticals, Inc. | Protein fragment complementation assays for the detection of biological or drug interactions |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7062219B2 (en) * | 1997-01-31 | 2006-06-13 | Odyssey Thera Inc. | Protein fragment complementation assays for high-throughput and high-content screening |
US6294330B1 (en) * | 1997-01-31 | 2001-09-25 | Odyssey Pharmaceuticals Inc. | Protein fragment complementation assays for the detection of biological or drug interactions |
EP1509596A1 (en) * | 2002-04-19 | 2005-03-02 | BioImage A/S | Translocation dependent complementation for drug screening |
JP2006506950A (ja) * | 2002-04-19 | 2006-03-02 | バイオイメージ・アクティーゼルスカブ | 2つの緑色蛍光タンパク質断片およびタンパク質−タンパク質の相互作用を検出するための方法におけるこれらの使用 |
-
2003
- 2003-12-01 US US10/724,178 patent/US7166424B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
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-
2007
- 2007-01-23 US US11/656,543 patent/US8101364B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-03-09 AU AU2011201031A patent/AU2011201031A1/en not_active Abandoned
- 2011-04-18 JP JP2011092442A patent/JP2011182796A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6428951B1 (en) * | 1997-01-31 | 2002-08-06 | Odyssey Pharmaceuticals, Inc. | Protein fragment complementation assays for the detection of biological or drug interactions |
WO2001087919A2 (en) * | 2000-05-12 | 2001-11-22 | Yale University | Methods of detecting interactions between proteins, peptides or libraries thereof using fusion proteins |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
JPN6010027911; Molecular cell. 2002, Vol.9, No.4, p.789-798 * |
JPN6014001416; PNAS vol.98,no.2, 2001, p.462-467 |
JPN6014001417; PNAS vol.99,no.12, 2002, p.7877-7882 |
JPN6014001418; The Journal of Biological Chemistry Vol.275,No.34, 2000, pp.25879-25882 |
JPN6014001419; nature biotechnology Vol.21,No.2, 2003, p.191-194 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009513141A (ja) * | 2005-10-27 | 2009-04-02 | トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシティ | タンパク質相補によるリアルタイムインビボ核酸検出 |
JP2009515510A (ja) * | 2005-10-27 | 2009-04-16 | トラスティーズ オブ ボストン ユニバーシティ | 活性化分割ポリペプチドならびにその生成法および使用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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