JP2006519880A - アジュバント処理されたウシ用ワクチン - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、動物、特にウシにおけるイー・コリO157:H7定着を減少させるアジュバント処理されたワクチン、その製法、およびそのシェディング(shedding)を防止するために、その物を動物、特にウシに投与する方法に関する。
イー・コリO157:H7は毒性かつ一般的な食品媒介病原菌であり、このようなイー・コリO157:H7感染がヒトの健康に対する重大な関心の一の源である。イー・コリO157による感染に付随するヒトでの病気が1982年よりますます頻繁に報告されている。ヒトの病気とウシ製品を消費することとの間の疫学的関係が、合衆国、カナダおよび他の国々の飼育場または飼養場から集めた仔ウシまたは成体のウシの糞便からイー・コリO157:H7が単離されることで支持された。ヒト以外の動物からヒトに拡散する、ヒト感染の主たる原因は、汚染した牛肉または他の肉類製品を摂食することである。
本発明は、不活化または死滅の全体またはサブユニットのイー・コリO157:H7抗原からなる群より選択される免疫原的に活性な成分を、代謝性油および水酸化アルミニウムアジュバントと組み合わせて含む、ワクチン組成物を提供する。
代謝性油は、他の慣用的なワクチン賦形剤と一緒に、免疫原的に刺激する量にてワクチン組成物にて利用される。
本発明の特に好ましい実施形態は、少なくとも2つの投与単位の死滅または不活化イー・コリO157:H7を含むウシ用のワクチン組成物であって、その投与単位の各々が少なくとも1x109個のバクテリンと、約5ないし25容量/容量%のアジュバントとを含み、該アジュバントが少なくとも一つの代謝性油、および水酸化アルミニウムを含み、さらには該投与単位が医薬上許容される担体を含む、ところのワクチン組成物である。
さらには、本発明の目的および特徴は、本明細書に記載の詳細な記載および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
一般に、新規なワクチンを設計する際の問題は、生菌ワクチンが付与された標的宿主にて十分な安全性を欠く可能性があり、そして死菌または不活化菌ワクチンは十分に効果的な免疫原応答を刺激する能力を欠く可能性がある、というものである。通常、許容される効能を得るために、アジュバントまたは免疫原的に刺激する化合物が、ワクチン組成物にて死菌または不活化菌と組み合わせて使用される。しかしながら、標的となる宿主の安全性はアジュバントの添加により譲歩されることが多い。例えば、妊娠している動物は、アジュバントを含有する死菌または不活化菌ワクチンを投与した後で、何度も有意に高割合で流産していることが分かっている。加えて、食用の動物の場合、食品の消費のために販売されている動物の食肉の質に悪影響を与える、注射部位の反応を最少とすることが極めて望ましい。
安全かつ効果的なワクチン組成物は:不活化または死滅の全体またはサブユニットのイー・コリO157:H7またはその混合物からなる群より選択される免疫原的に活性な成分と、適当なアジュバントとを一緒に含む。かかるワクチンは、反芻動物の定着を効果的に防止し、それによりイー・コリO157:H7がヒトの食料供給にシェディングする可能性を軽減または排除するであろう。
本明細書にて用いる場合、「免疫原的に活性な」なる語は、免疫応答を刺激する、すなわち、抗体、特に体液性抗体の産生を刺激するか、または細胞媒介性応答を刺激する、能力を意味する。効果的で免疫性を付与する免疫原的に活性な成分の量は変更可能であり、免疫応答を惹起し、イー・コリO157:H7の定着に対して免疫学的保護を付与するのに十分な量である。投与単位当たりの免疫原的に活性な成分の量は、好ましくは少なくとも1x109個の細胞である。これらの量は不活化または死滅の全細胞またはサブユニットの抗原に適している。
本発明のイー・コリO157:H7ワクチン組成物は、その成分の一つとして最も好ましくは代謝性油を含有する適当なアジュバントを含有する。本明細書で使用する場合の「アジュバント」なる語は、ワクチンまたは免疫原に対する体内の応答を改善するいずれの成分をもいう。アジュバントは、典型的には、本発明のワクチン処方の約0.1ないし50%容量/容量、好ましくはワクチンの約1ないし50%、より好ましくは約1ないし20%、特に1ないし10%容量/容量からなる。約5ないし15%容量/容量の量がさらにより好ましい。
アジュバント組成物は、好ましくは、代謝性油に加えて、1またはそれ以上の湿潤剤または分散剤を、アジュバントの容量に対して約0.1ないし25%、より好ましくは約1ないし10%、さらにより好ましくは約1ないし3%の量にて含む。湿潤剤または分散剤としては非イオン性界面活性剤が特に好ましい。アジュバントの他の成分として、アジュバントの容量に付き約1容量%までの量のベンジルアルコール、ホルマリンおよびチメロサールなどの保存剤が挙げられる。
本発明の極めて好ましいワクチン組成物において、代謝性油は、好ましくは約10−20容量/容量%の量の、最も好ましくは約15容量/容量%の量の水酸化アルミニウムゲルと一緒に利用される。このSPオイルと水酸化アルミニウムゲルの組み合わせが、ワクチン処理された反芻動物にて全身性および局所性免疫作用の両方の作用が誘発されるという点で特に有用なワクチンを提供する。もう一つ別の意外な特徴は、このアジュバントの組み合わせが、あるケースにおいて、特定の抗原形態にてその安全性を有意に改善する点にある。
本発明のワクチン組成物に用いるのに適する医薬的に(または薬理学的に)許容される担体は、獣医薬組成物に適する慣用的な液体担体、好ましくは組織培地にて用いるのに適する平衡塩類溶液または他の水基剤溶液であってもよい。他の入手可能な担体も利用することができる。
上記した、担体を含む、本発明のワクチン組成物の成分は、利用可能な技法を用いて一緒にすることができる。
上記した、活性成分としてのイー・コリO157:H7の免疫原的に活性な成分に加えて、本発明のワクチン組成物はまた、他の活性成分、例えば、サルモネラ・ダブリスまたはサルモネラ・チフィムリウス等あるいはその組み合わせに拮抗して方向付けられる抗病原性成分を含有してもよい。一またはそれ以上のこれら細菌の量は、効能に関する文献から決定してもよく、あるいは利用可能な技法を用いて決定してもよい。
本発明の好ましい実施形態において、本発明のワクチン組成物を上記した投与単位形態に処方し、投与を容易にし、投与量の均一性を確実にしてもよい。エマルジョンの調製に適用できる技法などの、利用可能な技法を用いて処方を行ってもよい。
本発明のワクチン組成物は、非経口的に、例えば、筋肉内、皮下、腹腔内、皮内等、好ましくは皮下的に投与することができる。
*750mlのSPオイルは0.75mlの5%チメロサールを含有する(750mlx0.001=0.75ml)
6ml−0.75ml=5.25ml(必要とする添加量)
1. 不活化菌を少なくとも30分間、150−200rpmで混合し、十分な混合を確保する。
2. 3000mlの混合菌を採取し、10000rpmで30分間遠心分離に付す(残りの抗原のストックを4℃に維持する)。
3. ペレットを集め、該ペレットを0.01M PBSを用いて3000mlとして再度懸濁させ、十分に混合する。
4. 971.5mlの再度懸濁された細胞を採取し、2028.5mlの0.01M PBSを添加して総容量を3000mlとする。これがフラクションAである。
5. もう一度971.5mlの再度懸濁された細胞を採取し、2028.5mlの0.01M PBSを添加して総容量を3000mlとする。これがフラクションBである。
6.2250mlのAlOHゲルをフラクションAに加え、この組み合わせを1時間150−200rpmで混合する。
7. 750mlのSPオイルをフラクションBに加え、この組み合わせを1時間150−200rpmで混合する。
8. 上記のフラクションAとフラクションBを合わせ、その組み合わせを1時間150−200rpmで混合する。
9. 5.25mlの5%チメロサールを添加し、その容量を0.01M PBSを用いて14800mlとする。
10. ワクチンを少なくとも30分間150−200rpmで混合する。
11. pHをチェックし、必要ならばpHを7(+0.2)に調整する。
12. pHを調整した後、ワクチンを0.01M PBSを用いて15000mlとし、少なくともさらに30分間混合する。
13. ワクチンを充填してラベルを貼る。
アジュバント処理した、またはアジュバント処理していないイー・コリO157:H7ワクチンで予防接種した後のウシにおける血清学的応答の評価およびウシにおける試験ワクチンの安全性
商業的供給源から得た24頭の健康な雑種のウシをこの試験に用いる。その年齢は第一の予防接種時に6−12月齢の範囲にあり、雌雄の両方の動物を用いる。ウシは適用される動物保護規定に合致するハウジングに収容されているグループである。水と食べ物は自由に摂取することができる。試験責任者と相談した上で植物獣医師(plant veterinarian)が必要があるとしたすべての動物を処理した。試験の前および間の処理を記録する。抗生物質または場合によっては免疫抑制薬を必要とする動物を試験から除外する。
血清分析を統計的に解析し、抗体応答における違いを決定する。ELISA価を測定し、ワクチン応答を評価して結果を平均化する。
結果は以下のとおりである:
血清学:ELISA価
対照:群5
標準アジュバント:群6
本発明のSPオイル オイル/水酸化アルミニウムアジュバント:群7
0dpv2=第二の予防接種の日における注射部位の評価
1dpv2=第二の予防接種の1日経過後における注射部位の評価
2dpv2=第二の予防接種の2日経過後における注射部位の評価
3dpv2=第二の予防接種の3日経過後における注射部位の評価
4dpv2=第二の予防接種の4日経過後における注射部位の評価
5dpv2=第二の予防接種の5日経過後における注射部位の評価
6dpv2=第二の予防接種の6日経過後における注射部位の評価
7dpv2=第二の予防接種の7日経過後における注射部位の評価
10dpv2=第二の予防接種の10日経過後における注射部位の評価
11dpv2=第二の予防接種の11日経過後における注射部位の評価
フィールド実験
実施例1のワクチン組成物を2ヶ月にわたる実験の商業的フィードロットにて利用し、イー・コリO157:H7のフィードロットのウシにおける有病率を減少させる種々のインターベンションの有効性を評価して比較した。実施例1のイー・コリを一ヶ月の間隔で実験の間2回投与した。最後の予防接種から3日目に、USDA−FSISはワクチン接種したウシの食肉処理を許可した。該ワクチンは宿主の免疫系を刺激し、特にT細胞およびB細胞の両方が体液性抗体およびある種のCMI因子を惹起することを刺激した。
Claims (14)
- 不活化または死滅の全体またはサブユニットのイー・コリO157:H7あるいはその混合物からなる群より選択される免疫原的に活性な成分;代謝性油のアジュバント;および任意の医薬上許容される担体を含む、ワクチン組成物。
- 免疫原的に活性な成分が不活化または死滅の全体またはサブユニットのイー・コリO157:H7であるところの、請求項1記載の組成物。
- 免疫原的に活性な成分が不活化の全体のイー・コリO157:H7であるところの、請求項1または2記載の組成物。
- アジュバントがワクチン組成物の0.1ないし50容量/容量%からなるところの、請求項1または2記載の組成物。
- アジュバントが代謝性油および水酸化アルミニウムゲルを含むところの、上記した請求項のいずれかに記載の組成物。
- アジュバントが代謝性油の1ないし50容量/容量%からなるところの、請求項5記載の組成物。
- 代謝性油がスクアランであるところの、請求項5または6記載の組成物。
- アジュバントがさらに1またはそれ以上の湿潤剤および/または分散剤を含むところの、請求項5ないし7のいずれかに記載の組成物。
- 湿潤剤および/または分散剤がアジュバントの0.1ないし25容量/容量%からなるところの、請求項8記載の組成物。
- 湿潤剤および/または分散剤が非イオン性界面活性剤からなる群より選択されるところの、請求項9記載の組成物。
- 非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレン/ポリオキシプロピレンブロックコポリマーおよびポリオキシエチレンエステルからなる群より選択されるところの、請求項10記載の組成物。
- 免疫原的に活性な成分が単位用量当たり少なくとも1x109個の細胞を提供するのに十分な量にて存在するところの、請求項10記載の組成物。
- 動物を請求項1記載の組成物で処理することを含む、動物中のイー・コリO157のシェディングを減少させる方法。
- 動物をさらにラクトバシラス・アシドフィルスまたはネオマイシン薬用飼料補助品で処理することを含む、請求項13記載の方法。
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