JP2006238821A - 機能性ペプチド含有ダイズ形質転換体およびその利用 - Google Patents
機能性ペプチド含有ダイズ形質転換体およびその利用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2006238821A JP2006238821A JP2005060624A JP2005060624A JP2006238821A JP 2006238821 A JP2006238821 A JP 2006238821A JP 2005060624 A JP2005060624 A JP 2005060624A JP 2005060624 A JP2005060624 A JP 2005060624A JP 2006238821 A JP2006238821 A JP 2006238821A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- soybean
- 4rplkpw
- transformed
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 title claims abstract description 62
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 54
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 title claims abstract description 45
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 108700037728 Glycine max beta-conglycinin Proteins 0.000 claims description 13
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 claims description 10
- 230000031787 nutrient reservoir activity Effects 0.000 claims description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 12
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 abstract description 9
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 7
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 abstract description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 abstract description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 15
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 14
- 230000004531 blood pressure lowering effect Effects 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 10
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 8
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 7
- GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N Chick antidermatitis factor Natural products OCC(C)(C)C(O)C(=O)NCCC(O)=O GHOKWGTUZJEAQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 6
- 229930003571 Vitamin B5 Natural products 0.000 description 6
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 6
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 235000009492 vitamin B5 Nutrition 0.000 description 6
- 239000011675 vitamin B5 Substances 0.000 description 6
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 5
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 108010051105 ovokinin Proteins 0.000 description 4
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 108010055927 Arg-Pro-Leu-Lys-Pro-Trp Proteins 0.000 description 3
- 101710094135 Beta-conglycinin alpha' subunit Proteins 0.000 description 3
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 235000013527 bean curd Nutrition 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N Hygromycin-B Natural products OC1C(NC)CC(N)C(O)C1OC1C2OC3(C(C(O)C(O)C(C(N)CO)O3)O)OC2C(O)C(CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 2
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 2
- 108010083391 glycinin Proteins 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N hygromycin B Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC)C[C@@H](N)[C@H](O)[C@H]1O[C@H]1[C@H]2O[C@@]3([C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(N)CO)O3)O)O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 GRRNUXAQVGOGFE-NZSRVPFOSA-N 0.000 description 2
- 229940097277 hygromycin b Drugs 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710102211 11S globulin Proteins 0.000 description 1
- HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 2,4-Dichlorophenoxyaceticacid Chemical compound OC(=O)C(Cl)OC1=CC=C(Cl)C=C1 HXKWSTRRCHTUEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 101000767750 Carya illinoinensis Vicilin Car i 2.0101 Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 101000767759 Corylus avellana Vicilin Cor a 11.0101 Proteins 0.000 description 1
- 101710190853 Cruciferin Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 101000622316 Juglans regia Vicilin Jug r 2.0101 Proteins 0.000 description 1
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 101000767757 Pinus koraiensis Vicilin Pin k 2.0101 Proteins 0.000 description 1
- 101000767758 Pistacia vera Vicilin Pis v 3.0101 Proteins 0.000 description 1
- 108010016634 Seed Storage Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- TVVPDFMYNPCKNX-UHFFFAOYSA-L calcium N'-(3-aminopropyl)butane-1,4-diamine dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2].NCCCCNCCCN TVVPDFMYNPCKNX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M coomassie brilliant blue Chemical compound [Na+].C1=CC(OCC)=CC=C1NC1=CC=C(C(=C2C=CC(C=C2)=[N+](CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=2C=CC(=CC=2)N(CC)CC=2C=C(C=CC=2)S([O-])(=O)=O)C=C1 NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000000916 dilatatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 108010037952 ovalbumin (359-364) Proteins 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 235000021067 refined food Nutrition 0.000 description 1
- 102200076454 rs104894848 Human genes 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 230000035040 seed growth Effects 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000011699 spontaneously hypertensive rat Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/185—Vegetable proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8242—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits
- C12N15/8257—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with non-agronomic quality (output) traits, e.g. for industrial processing; Value added, non-agronomic traits for the production of primary gene products, e.g. pharmaceutical products, interferon
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
【課題】生理活性ペプチドの有用性を増すために、生理活性ペプチドが蓄積されたダイズ植物を開発することが本発明の課題である。
【解決手段】本発明において、生理活性ペプチドを産生するように改変されたダイズ蛋白質の遺伝子をダイズに導入することにより、生理活性ペプチドが蓄積された形質転換ダイズ植物が提供された。より具体的には降圧ペプチドであるRPLKPWが蓄積された形質転換ダイズ植物が提供された。本発明により得られた形質転換ダイズ植物は高機能化されており、通常の食物として摂食するだけで、導入されたペプチドの有用な生理作用を得ることができるという利点を有する。
【選択図】なし
【解決手段】本発明において、生理活性ペプチドを産生するように改変されたダイズ蛋白質の遺伝子をダイズに導入することにより、生理活性ペプチドが蓄積された形質転換ダイズ植物が提供された。より具体的には降圧ペプチドであるRPLKPWが蓄積された形質転換ダイズ植物が提供された。本発明により得られた形質転換ダイズ植物は高機能化されており、通常の食物として摂食するだけで、導入されたペプチドの有用な生理作用を得ることができるという利点を有する。
【選択図】なし
Description
本発明は、生理活性ペプチド、特に血圧降下ペプチドが蓄積することを特徴とする形質転換ダイズ植物とその利用に関する。
食物として利用されている動植物の蛋白質中には種々の有用な生理活性ペプチドが存在する。しかし、一般的には食物中の生理活性ペプチドの活性は低いので、そのペプチドが十分な機能を発揮するためにはその食物を大量に摂取する必要がある。また経口摂取によって効果を示すには、そのペプチドが機能を保持したまま消化酵素によって切り出される必要があり、更には消化酵素によって生理活性ペプチドが吸収前に分解されてしまうという問題もある。このような問題から食物中に存在する有用なペプチドが見出されても、そのペプチドを安価かつ簡便な方法で実際に利用することは困難であった。
ところで、オボキニンはRADHPF(Arg-Ala-Asp-His-Pro-Phe)からなる卵白アルブミン由来のペプチドであり、動脈拡張作用と血圧降下作用を有する。このオボキニンは食物由来の血圧降下ペプチドであるために、そのアミノ酸を置換することによって更に強力な血圧降下ペプチドを得ることができないか、検討が行なわれてきた。そして本発明者らはオボキニンを基にしてより血圧降下作用が強いペプチドの設計を図ったところ、RPLKPWからなるペプチドはオボキニンの100倍という強力な降圧作用を示すことを見出した。しかしRPLKPW(Arg-Pro-Leu-Lys-Pro-Trp)を含む食品が存在しなかったので、その積極的な利用は行なわれていなかった。
そこでRPLKPWを利用し易い食物中で発現させるためにダイズの貯蔵蛋白質を用いることを本発明者らは考えた。ダイズの約40%は蛋白質であってとりわけ蛋白質含量が多く、そのうちの大部分は種子貯蔵蛋白質である。加えてダイズは蛋白質組成が比較的に単純であるから、生理活性ペプチドを生産させるのに最適である。
ダイズの主要な貯蔵蛋白質は、11Sグロブリンであるグリシニンと7Sグロブリンであるβ-コングリシニンであり、その立体構造が解明されている。なかでもβ-コングリシニンでは液胞への選別輸送に必須である選別輸送シグナルも明らかにされていることから、β-コングリシニンを基にして高機能化蛋白質を設計すれば、構造形成も円滑に進み、種子の生育や発芽への影響を最小限に抑えながら、栄養価も高い高機能化蛋白質を大量に蓄積させることができる可能性がある。
ところでβ-コングリシニンは3量体を形成しており、それを構成するサブユニットはα、α’とβの3つである。β-コングリシニンのα’サブユニットはN末端側には可変領域があり、その領域内にRPLKPWの類縁配列を複数個有するので、本発明者らは改変を行なう対象としてβ-コングリシニンのα’サブユニットを選んだ。なおβ-コングリシニンにおいて可変領域を欠損したβサブユニットでも安定に存在しえること、α’サブユニットの可変領域でアミノ酸置換を行なっても高次構造を形成しうることが知られている。これらの知見からβ-コングリシニンのα’サブユニットの可変領域内で改変を行なっても宿主であるダイズに対する悪影響は少ないと考えられる。
そのうちβ-コングリシニンのα’サブユニットの可変領域に、このペプチド配列と類似した配列が4箇所存在するので、本発明者らはこれらの配列の3-4残基を置換することにより4箇所にRPLKPWを挿入した。このように改変されたα’サブユニットが4RPLKPW-α’である。オリジナルのα’サブユニットのアミノ酸配列と、4箇所にRPLKPW配列を含む改変α’サブユニット(4RPLKPW-α’)のアミノ酸配列を図1に示す。図1において置換されたアミノ酸部位をアスタリスク示す。消化され易い形でRPLKPWペプチドを4箇所に挿入するために、可変領域の20アミノ酸が置換されている。
なお本発明者らはRPLKPWをダイズで発現させる前に、改変したβ-コングリシニンα’サブユニット(4RPLKPW-α’)を大腸菌の系を用いて発現させるのに成功した。大腸菌の発現系で調製された4RPLKPW-α’は高血圧自然発症ラットへの経口投与により2.5mg/kgで血圧降下作用を示した(Ohnishi et al., Peptides, 25, 37-43 (2004))。しかしダイズなどの実際の食糧となる植物でRPLKPWを蓄積することに成功した例は未だない。
Ohnishi et al., Peptides, 25, 37-43 (2004)
Ohnishi et al., Peptides, 25, 37-43 (2004)
そこで、生理活性ペプチド、特にRPLKPWがダイズなどの食糧となる植物中で蓄積している形質転換植物を開発することが本発明の課題である。大腸菌で生産されたRPLKPWと異なり、ダイズの中に蓄積されたRPLKPWはそのまま食用に用いることが可能であり、摂取にあたっての利便性が高く心理的な抵抗感も低いと考えられる。
そこで本発明者らは生理活性ペプチドを産生するように改変されたダイズ蛋白質の遺伝子をダイズに導入し、生理活性ペプチドが蓄積されたダイズを開発することに成功した。よって本発明はダイズの貯蔵蛋白質の遺伝子に生理活性ペプチドをコードする遺伝子が導入され、よって該生理活性ペプチドが該ダイズにおいて蓄積することを特徴とする形質転換ダイズ植物を提供するものである。また本発明は、血圧降下ペプチド、とりわけRPLKPWを蓄積することを特徴とする形質転換ダイズ植物を提供するものである。
本発明において、ダイズの貯蔵蛋白質の遺伝子を生理活性ペプチドを産生するように改変することにより、生理活性ペプチドが蓄積された形質転換ダイズ植物が提供された。本発明により得られた形質転換ダイズ植物は高機能化されており、通常の食物として摂食するだけで、導入されたペプチドの有用な生理作用を得ることができるという利点を有する。
下記の実施例において詳しく述べるように、本発明者らは、4RPLKPW-α’遺伝子の上流に種子特異的に機能するβ-コングリシニンα’サブユニットのプロモーターを連結し、それをハイグロマイシン耐性と緑色蛍光蛋白質(GFP)遺伝子の間に挿入することにより、ダイズに4RPLKPW-α’遺伝子を導入するために用いるコンストラクトを構築した。そのようなコンストラクトを導入することにより、ハイグロマイシンに対する耐性およびGFPの蛍光を指標として形質転換体の選抜を行なうことができ、選抜された個体が目的遺伝子を発現している比率を高くすることができる。
そのようにして作製したコンストラクトを、遺伝子銃またはウィスカ法によってダイズ未熟子葉より誘導した不定胚に導入した。遺伝子銃、ウィスカ法により遺伝子導入処理を行なった不定胚について、ハイグロマイシン耐性により選抜を行なった後に、増殖、再分化、成熟、乾燥の後、発芽させて植物体を得た。得られた形質転換体から得られた種子について抗RPLKPW抗体を用いてウエスタン解析を行なったところ、4RPLKPW-α’の蓄積が確認された。そして4RPLKPW-α’遺伝子を導入したダイズ蛋白質を高血圧症ラット給餌したところ、4RPLKPW-α’換算で2.5mg/kgで経口投与することにより血圧降下作用が確認された。
なおこの用量をヒトに換算すると、血圧降下作用を得るためには、体重60kgのヒトの場合には4RPLKPW-α’を150mg摂取する必要がある。下記の実施例において得られた形質転換ダイズ中の4RPLKPW-α’の蓄積量は総蛋白質の0.6%であること、乾燥ダイズ100g中には40g程度の蛋白質が含まれていることを併せて考えると、乾燥ダイズ100gから240mgの4RPLKPW-α’を摂取できると考えられる。このダイズの量をダイズの加工食品である豆腐の量に換算すると、豆腐一丁を作るのに平均85gの乾燥ダイズが必要であるので、血圧降下作用を得るのに必要な摂取量は約3/4丁の豆腐に相当する。
このように、本発明者らは降圧ペプチドであるRPLKPWを発現させたダイズの開発に成功したが、本発明の範囲はそれに限定されるものではない。ダイズ蛋白質を改変するという技術を用いて、その他にも種々の低分子量の生理活性ペプチドを発現している形質転換ダイズを開発できる。よって他の低分子量生理活性ペプチドの遺伝子を導入して該生理活性ペプチドを発現させた形質転換ダイズ植物も本発明の範囲内であり、本発明は高機能化した形質転換ダイズ植物を広く包含するものである。
すなわち、ダイズ蛋白質であるβ-コングリシニンα’サブユニットのみならず、β-コングリシニンのαサブユニット、βサブユニット、グリシニン、更には他のダイズ蛋白質を改変することにより、種々の低分子量生理活性ペプチドを発現させることができる。よって本発明の根本的な技術思想は、ダイズ蛋白質の改変という手段により低分子量生理活性ペプチドをダイズにおいて発現させることにより、高機能化した形質転換ダイズ植物を開発したという点にある。
下記の実施例において本発明を更に詳しく説明するが、その記載は本発明の範囲を何ら限定するものではない。
(植物の形質転換のためのプラスミド構築)
以下のような手法で4RPLKPW-α’のためのプラスミドを構築した。α’プロモーターの3’末端側の一部およびα’のコード領域を含んでいる断片をPCRにより調製した。それにあたって、プロモーターとα’サブユニットのコード領域の両者を含んでいる鋳型としてのpBSα’と、プライマー1(5’-CCGGATCCTATCCTAGTACACCGTATTA-3’:下線はα’プロモーターの上流-39に導入されたBamHI部位を示す)とプライマー2(5’-ATGAATTCCTCGCTCACTATGAGCTATT-3’’:下線は終止コドンの50塩基下流に導入されたEcoRI部位を示す)を使用した。TOPO-TAクローニングキット(インビトロジェン、カルスバッド、カリフォルニア、USA)を用いて増幅された断片をpCR-TOPOベクター中にサブクローン化し、pCRα’codingを構築した。
以下のような手法で4RPLKPW-α’のためのプラスミドを構築した。α’プロモーターの3’末端側の一部およびα’のコード領域を含んでいる断片をPCRにより調製した。それにあたって、プロモーターとα’サブユニットのコード領域の両者を含んでいる鋳型としてのpBSα’と、プライマー1(5’-CCGGATCCTATCCTAGTACACCGTATTA-3’:下線はα’プロモーターの上流-39に導入されたBamHI部位を示す)とプライマー2(5’-ATGAATTCCTCGCTCACTATGAGCTATT-3’’:下線は終止コドンの50塩基下流に導入されたEcoRI部位を示す)を使用した。TOPO-TAクローニングキット(インビトロジェン、カルスバッド、カリフォルニア、USA)を用いて増幅された断片をpCR-TOPOベクター中にサブクローン化し、pCRα’codingを構築した。
BsmI部位(開始コドンの208塩基下流)とNotI部位(pCR-TOPOベクターから得られ、α’コード領域の下流に位置する)の間のDNA断片を、4つのRPLKPWを有する改変されたα’遺伝子をコードする発現プラスミド(pET4RPLKPW-α’、Ohnishi et al., Peptides, 25, 37-43 (2004))のBsmI部位とNotI部位(pET21dベクター由来)の間の断片に置き換え(この際、pET21dベクター由来のBamHI部位を予め除去しておいた)、pCR4rplkpw-α’を構築した。EcoRIによりpCR4rplkpw-α’を消化し、引き続いて平滑化し、更にBamHIで消化することにより、α’プロモーターの3’末端を含んでいる断片と4RPLKPW-α’のコード領域が生成した。
BamHI/SmaI部位においてこの断片をpBluescript SK(ストラタジーン、ラホヤ、カリフォルニア、USA)にサブクローン化し、pBS4rplkpw-α’を構築した。プライマー3(5’-ATGCGGCCGCTTCAAATTTGAATTTTAATGTG-3’:下線はα’プロモーターの-960上流に導入されたNotI部位を示す)、プライマー4(5’-TAGGATCCGGTTCTTGATGATGAAAACC-3’:下線はα’プロモーターの-39上流に導入されたBamHI部位を示す)、および鋳型としてのpBSα’を使用して、β-コングリシニンのα’サブユニットのプロモーター領域を含んでいる断片をPCRにより調製した。そのPCR断片をNotIとBamHIで消化した後に、pBS4rplkpw-α’のNotI部位とBamHI部位の間に挿入し、pBSPα’4rplkpw-α’を構築した。CaMV35S-sGFP(S65T)-Nos3’プラスミドから、ノパリン合成酵素(nos)ターミネーターをPstIとEcoRIによって切断し、pBSPα’4rplkpw-α’の対応部位に挿入してpBS4RPLKPW-α’を構築した。pBS4RPLKPW-α’のNotI-EcoRI断片を、NotI/EcoRI部位を有するpUHGベクター中へ挿入し、pUHG4RPLKPW-α’を構築した。全てのPCR産物の配列に間違いないかどうかをDNA配列解析により確認した。このようにして作製されたコンストラクトを図2に示す。
ダイズ(品種:Jack)植物を土壌中で、天然光の条件下と25℃に制御された温度の下で温室中において生育した。未成熟の子葉が4から5mmの長さになったときに、成長中の緑色の莢を採取した。莢の表面を70%のエタノールで2分間滅菌し、続いて水で洗浄した後に未成熟な種子を摘出し、胚軸を除去し、向軸面を上にして子葉をMSD培地上に置いた。その培地の組成はMS塩とビタミンB5からなり、更に3%のスクロースと2,4-ジクロロフェノキシ酢酸(2,4-D、40mg/ml)を添加し、pHを7.0に調整し、0.2%ゲルライト(和光、大阪、日本)によって固化している。不定胚を白色蛍光灯(23時間明条件、1時間暗条件、5から10μmolm-2s-1)の下、25℃で3から4週間誘導した。誘導した胚組織を、FNライトロ塩、MSマクロ塩およびビタミンB5からなり、アスパラギン(1g/L)、2,4-D(5mg/L)および1%スクロースを添加してpH5.8に調整したFNライト液体培地中で増殖した。
培養物を回転振盪器(110rpm/分)で維持し、100mlのフラスコ中で25mlの新鮮なFNライト液体培地中へ週に一度継代培養した。そしてMSD20培地を含んでいる20mmプレートに、増殖した胚組織(約0.8g)を置いた。なおMSD20培地はMS塩およびビタミンB5からなり、3%のスクロース、アスパラギン(1g/L)、および2,4-D(20mg/L)を添加してpH5.8に調整し、0.2%ゲルライトで固化したものである。
遺伝子銃法は、PDS-1000/Heシステム(バイオラッド、リッチモンド、カリフォルニア、USA)により行なった。遺伝子銃法のためのプラスミドDNAを、プラスミド・ミディキット(キアゲン、バレンシア、カリフォルニア、USA)により、pUHG4RPLKPW-α’を有している大腸菌DH5αから単離し、精製したDNAの一部分を直径0.6μmの金微粒子0.5mg上に、塩化カルシウム-スペルミジン法により沈殿させた。
pUHG4RPLKPW-α’を付着させた0.6μmの金微粒子を各プレートの胚組織へ2回撃ち込んだ。一回の撃ち込みのDNA量を0.8μgとし、加速圧1,100psiと6cmの標的距離で撃ち込んだ。各コンストラクトにつき全部で12プレートの処理をした。処理後の組織をFNライト培地で1週間培養し、その後にハイグロマイシンB(15mg/L)(ロッシュ・ダイアグノスティックス、マンハイム、ドイツ)を含んでいる新鮮なFNライト培地で3週間培養した(毎週培地を交換する)。ハイグロマイシン耐性の組織を新鮮な抗生物質を含んでいるFNライト培地の下で毎週選抜し、更に3週間維持し、その後45mg/LのハイグロマイシンBを含んでいるFNライト培地中で一週間選抜した。なお、ウィスカ法はチタンの針状結晶とであるウィスカ粒子と導入遺伝子を培養細胞と混合して超音波処理により細胞内に取り込ませる形質転換方法であるが、そのウィスカ法によっても遺伝子導入を行い、同様に抗生物質耐性を指標として選抜を行なった。なお遺伝子銃法については38回の導入を行い、29個の組換え再分化細胞を得、そのうち8個体から種子を収穫した。またウィスカ法で3回の処理を行い、18個の再分化個体を得てそのうちから6個体から種子を収穫した。
ハイグロマイシン耐性の胚組織をFNL0S3S3液体培地(FNライトマクロ塩、MSマクロ塩、およびビタミンB5からなり、アルギニン(1g/L)、3%スクロースおよび3%ソルビトールが添加されpH5.8に調整されている培地)へ移し、回転振盪器(100rpm)上で成熟させた。3から5週間後、過剰の液体を滅菌濾過フィルターによって不定胚から除去し、胚を乾燥したペトリ皿中に3日から5日間置き、MS塩、ビタミンB5および3%スクロースを含み、pH5.8に調整して0.2%ゲルライトで固化させたMS0培地へ移した。0.5×B5塩、0.5×ビタミンB5、2%スクロースおよび0.05%MES緩衝液からなり、pH5.8に調整され、0.2%ゲルライトで固化させた0.5×B5培地上で、発芽している幼植物を成長させた。根と芽が伸びた後に、土壌を含んでいるポットへ植物を移し、順化するまで高湿度に維持した。しだいに環境湿度に適応させ、自然光の温室中に置いた。
そのようにして作製した形質転換ダイズのT1世代の種子における4RPLKPW-α’の蓄積を、RPLKPWペプチドに対する抗血清を用いたウエスタンブロッティングで検出した(図3)。図3Aは20μgの種子蛋白質をSDS-PAGEで分離し、クマシーブリリアントブルーで染色した結果である。また図3Bは、種子蛋白質をRPLKPWに対する抗血清で免疫ブロット解析を行なった結果である。矢印はα’サブユニットに相当するバンドである。図3AのSDS-PAGEにおいて、形質転換種子では、α’サブユニットに相当する位置に特異的なバンドが検出された。
更にpUHG4RPLKPW-α’で形質転換したT2世代の形質転換植物体を用いてサザン解析を行なった(図4)。全DNAをEcoRIで消化し、アガロース電気泳動によって分離した。図4において、λHindIIIはλDNAをHindIIIで消化してλDNAに対して特異的なプローブとハイブリダイズした分子量推定用の標準サンプルの結果を示す。コントロールは形質転換を行なわなかった植物体の結果を示す。レーン1とレーン2は、遺伝子銃法(A)とウィスカ法(B)で形質転換した形質転換植物の結果を示す。分離されたDNA断片をナイロン膜に移し、4RPLKPW-αの特異的領域を含んでいるプローブと結合させた。コントロールでは殆どバンドは検出されなかったが、遺伝子銃法、ウィスカ法で形質転換した植物体ではそれぞれ数本のバンドが検出された。
T3世代の種子について4RPLKPW-αの定量を行なった(図5)。レーンには10μgの蛋白質を注入した。分離した蛋白質をPVDF膜上に移し、RPLKPWペプチドに対する抗血清でハイブリダイズした。図5の左側のレーンは、ウィスカ法で得られた組み換え体の種子について4RPLKPW-α’の蓄積を免疫ブロット解析で調べたデータである。そして右側のレーンは、Jackの種子蛋白質10μgに対して、大腸菌の発現系で調製した組換え型4RPLKPW-α’をそれぞれ10,30,50,70,90ng添加したものである。添加された組換え型4RPLKPW-α’の量はそれぞれ注入した蛋白質の0.1%、0.1%、0.3%、0.5%、0.7%、0.9%に対応する。各マーカー蛋白質の分子量(kDa)を左側に示す。なおコントロールは形質転換していない種子である。この結果から、ウィスカ法で得られた形質転換植物において、4RPLKPW-α’の蓄積レベルは種子中の蛋白質の約0.6%であると評価された。
4RPLKPW-α’導入ダイズと形質転換していないダイズ(品種:Jack)の種子を脱脂し、蛋白質を塩溶液により抽出し、85%飽和硫酸アンモニウムで沈殿した画分を回収した。ミリQ水に対して透析を行なった後、pH7に調整した際の可溶性画分を凍結乾燥した。高血圧ラット(SHR)に、4RPLKPW-α’導入ダイズ由来の蛋白質とコントロールダイズ由来の蛋白質を2.5mg/kgに相当する用量で強制的に経口投与し、テイルカフ法により血圧の経時変化を測定した(図6)。図6に見られるように、コントロール群では血圧降下作用は全く見られなかったが、4RPLKPW-α’導入ダイズ由来の蛋白質を投与した群では、投与して8時間後をピークとして30mmHg程度の有意な血圧降下作用が認められた。なおこの血圧降下作用は持続的であり、24時間の時点でもまだ続いており、32時間後に弱まり、48時間後にようやく消失した。つまり2日間にも渡る血圧降下作用が得られた。
なお大腸菌に発現させた4RPLKPW-α’の降圧効果を検討したOhnishiらの報告(Ohnishi et al., Peptides, 25, 37-43 (2004))では、最大の血圧降下作用は投与後4時間程度で得られ、その血圧降下作用は30mmHg程度である。よってダイズにおいて発現させた4RPLKPW-α’は、大腸菌から得られた4RPLKPW-α’と比較して血圧降下作用がより強く、作用時間もより長かった。ダイズ蛋白質中の4RPLKPW-α’が消化により切り出されるのに時間がかかるために、4RPLKPW-α’導入ダイズ由来の蛋白質を投与した際には血圧降下作用が長時間になると考えられる。
本発明者により、生理活性ペプチドが産生されるように改変されたダイズ蛋白質の遺伝子をダイズに導入することにより、生理活性ペプチドが蓄積された形質転換ダイズが開発された。そして、血圧降下ペプチドであるRPLKPWが蓄積した形質転換ダイズ由来の蛋白質を経口摂取すると、高血圧ラットにおいて血圧降下作用が得られることが実証された。RPLKPWのみならず、種々の生理活性ペプチドが蓄積された形質転換ダイズを、同様の手法で開発することが可能であり、本発明は高機能化した形質転換ダイズを得るための新たな可能性を与えるものである。
Claims (6)
- ダイズの貯蔵蛋白質の遺伝子に生理活性ペプチドをコードする遺伝子が導入され、よって該生理活性ペプチドが該ダイズにおいて蓄積することを特徴とする形質転換ダイズ植物。
- 前記貯蔵蛋白質がβ-コングリシニンのα’サブユニットであることを特徴とする請求項1記載の方法。
- 前記生理活性ペプチドがRPLKPWからなるペプチドであることを特徴とする請求項1または請求項2記載の形質転換ダイズ植物。
- 血圧降下ペプチドを蓄積することを特徴とする形質転換ダイズ植物。
- 前記血圧降下ペプチドがRPLKPWからなるペプチドであることを特徴とする請求項4記載の形質転換ダイズ植物。
- β-コングリシニンのα’サブユニットを改変することによりRPLKPWからなるペプチドが蓄積することを特徴とする請求項4または請求項5記載の形質転換ダイズ植物。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005060624A JP2006238821A (ja) | 2005-03-04 | 2005-03-04 | 機能性ペプチド含有ダイズ形質転換体およびその利用 |
PCT/JP2006/304114 WO2006093277A1 (ja) | 2005-03-04 | 2006-03-03 | 機能性ペプチド含有ダイズ形質転換体およびその利用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005060624A JP2006238821A (ja) | 2005-03-04 | 2005-03-04 | 機能性ペプチド含有ダイズ形質転換体およびその利用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006238821A true JP2006238821A (ja) | 2006-09-14 |
Family
ID=36941307
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005060624A Pending JP2006238821A (ja) | 2005-03-04 | 2005-03-04 | 機能性ペプチド含有ダイズ形質転換体およびその利用 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2006238821A (ja) |
WO (1) | WO2006093277A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010061899A1 (ja) | 2008-11-28 | 2010-06-03 | 北興化学工業株式会社 | ワクチンを蓄積する形質転換ダイズ植物およびその利用 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8912145B2 (en) | 2008-11-28 | 2014-12-16 | Hokko Chemical Industry Co., Ltd. | Vaccine composition for prophylaxis and/or therapy of Alzheimer's disease |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004321079A (ja) * | 2003-04-24 | 2004-11-18 | National Institute Of Agrobiological Sciences | アレルゲン特異的t細胞抗原決定基を植物へ集積させる方法、および該抗原決定基を集積させた植物 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP3716298B2 (ja) * | 2000-09-04 | 2005-11-16 | 国立大学法人京都大学 | 新規な降圧ペプチド |
-
2005
- 2005-03-04 JP JP2005060624A patent/JP2006238821A/ja active Pending
-
2006
- 2006-03-03 WO PCT/JP2006/304114 patent/WO2006093277A1/ja active Search and Examination
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2004321079A (ja) * | 2003-04-24 | 2004-11-18 | National Institute Of Agrobiological Sciences | アレルゲン特異的t細胞抗原決定基を植物へ集積させる方法、および該抗原決定基を集積させた植物 |
Non-Patent Citations (10)
Title |
---|
JPN6010037775, Peptide, 2004, vol. 25, 37−43 * |
JPN6010037777, Curr. Med. Chem., 2003, vol. 1, 197−202 * |
JPN6010037778, Peptide Sci., 2003, vol. 2002, 123−126 * |
JPN6010037780, 大豆たん白質研究, 2002, vol. 5, 26−30 * |
JPN6010037781, FEBS Lett., 2001, vol. 497, 50−54 * |
JPN6010037783, 日本農芸化学会2004年度大会 大会講演要旨集, 2004, 247 (Abstract 3A26p17) * |
JPN6010037784, Bio/Technol., 1989, vol. 7, 929−932 * |
JPN6010037786, FEBS Lett., 200502, vol. 579, 1085−1088 * |
JPN6010037788, Mol. Breed., 2000, vol. 6, 47−53 * |
JPN6010037790, Plant Sci., 2001, vol. 161, 323−335 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010061899A1 (ja) | 2008-11-28 | 2010-06-03 | 北興化学工業株式会社 | ワクチンを蓄積する形質転換ダイズ植物およびその利用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2006093277A1 (ja) | 2006-09-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
KR20130113967A (ko) | 단백질체 유도 폴리펩티드 서열 | |
DE60221051T2 (de) | Herstellung von peptiden und proteinen durch anhäufung in vom endoplasmatischen reticulum abgeleiteten proteinkörpern | |
WO2015070778A1 (zh) | 控制害虫的方法 | |
WO2015070781A1 (zh) | 控制害虫的方法 | |
JPWO2004056993A1 (ja) | 種子中のタンパク質含量が低減した植物ならびにその作出法および利用法 | |
WO2016101612A1 (zh) | 控制害虫的方法 | |
CN107098974A (zh) | 一种融合蛋白及其应用 | |
KR101825943B1 (ko) | 멜리틴 항생펩타이드를 생산하는 형질전환 누에 | |
DE69836075T2 (de) | Verfahren zur spaltung von fusionproteinen | |
JP4512816B2 (ja) | アレルゲン特異的t細胞抗原決定基を植物へ集積させる方法、および該抗原決定基を集積させた植物 | |
JP5709097B2 (ja) | ワクチンを蓄積する形質転換ダイズ植物およびその利用 | |
ES2336861T3 (es) | Produccion de il-10 en biorreactor de planta de cultivo no alimenticia. | |
JP2006238821A (ja) | 機能性ペプチド含有ダイズ形質転換体およびその利用 | |
JP5497353B2 (ja) | 外来タンパク質の分泌方法 | |
Cheung et al. | Glucose lowering effect of transgenic human insulin-like growth factor-I from rice: in vitro and in vivo studies | |
DE112006000559T5 (de) | Verfahren zur Expression und Anreicherung eines Peptids in einer Pflanze | |
CN1044385C (zh) | 性状转变的抗稻属叶条纹病病毒性稻属及其制造方法 | |
CN106434745A (zh) | 一种利用烟草高效表达il‑37各亚型成熟蛋白的方法 | |
CN105254764A (zh) | ACVR1-Fc融合蛋白及其制法和用途 | |
JP5499408B2 (ja) | 新規選択マーカー遺伝子およびその利用 | |
JP2009095244A (ja) | ダニ抗原米 | |
JP2002541768A (ja) | 蛋白質の共発現 | |
CN101675167B (zh) | 在转基因单子叶植物中产生重组胰岛素样生长因子-ⅰ(igf-ⅰ)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(igfbp-3) | |
JPH10323137A (ja) | ラクトフェリン機能を食用植物に付与する方法、及びラクトフェリン機能を有する食用植物 | |
JP2011055807A (ja) | 種子貯蔵タンパク質高含有形質転換ダイズ植物 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20060622 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070621 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100706 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20101102 |