JP2006213670A - ヘルパーｔ細胞型産生サイトカイン調節剤 - Google Patents

Abstract

【課題】 近年、免疫研究が進むにつれて、Ｔｈ１とＴｈ２のバランスが病気の発症や進展に重要な働きを持つと推測されている。最近では、生活環境からＴｈ２の亢進する傾向が強く、例えば、癌、免疫不全、喘息、皮膚炎、アレルギー疾患、腎炎、感染症等が、そのＴｈ２の機能亢進が関与し発症すると考えられている。本発明は、副作用などの問題が無く、ヘルパーＴ細胞型産生サイトカイン調節することのできる安全性の高い新規なヘルパーＴ細胞型産生サイトカイン調節剤を提供することを目的とする。
【解決手段】 ガラクトマンナンを含有することにより上記課題を解決する。
【選択図】 なし

Description

本発明は、ヘルパーＴ細胞（以下、Ｔｈと略す）型産生サイトカイン調節剤に関するものであり、さらに詳しくは、ＩＦＮ−γ産生増強及び／又はＩＬ−４の産生抑制により、Ｔｈ２の産生亢進に起因する疾患を治療又は予防することができるガラクトマンナンを有効成分とするＴｈ産生サイトカイン調節剤に関するものである。

Ｔｈは、機能的にI型ヘルパーＴ細胞（以下、Ｔｈ１と略す）とＩＩ型ヘルパーＴ細胞（以下、Ｔｈ２と略す）に分けられる。Ｔｈ１は、ＩＦＮ-γ、ＩＬ−２等のサイトカインを産出し細菌やウイルスなどの異物を攻撃、破壊して感染を防御し、さらにマクロファージも活性化する。一方、Ｔｈ２は、ＩＬ−４、ＩＬ−５等などのサイトカインを産出し、カビやダニなどに反応しＢ細胞にＩｇＥ抗体を作らせる液性免疫に関与することが知られている。なお、Ｔｈ１の分泌するサイトカインはＴｈ２細胞を抑制し、逆にＴｈ２細胞の分泌するサイトカインはＴｈ１細胞を抑制しており、この２つは免疫全体のバランスを保つために互いに関係している。
近年、免疫研究が進むにつれて、Ｔｈ１とＴｈ２のバランスが病気の発症や進展に重要な働きを持つと推測されている。最近では、生活環境からＴｈ２の亢進する傾向が強く、例えば、癌、免疫不全、喘息、皮膚炎、アレルギー疾患、腎炎、感染症等が、そのＴｈ２の機能亢進が関与し発症すると考えられている（非特許文献１参照）。
このような疾患を治療あるいは予防するためにはＴｈ２の活性化の制御、ひいては、Ｔｈ産生サイトカインの調節が非常に重要であると考えられる。
その方法には抗ヒスタミン薬や、ステロイド剤、抗アレルギー剤などが用いられているが、患者の負担や薬の過剰投与による腸内細菌叢の破壊による下痢などの副作用などの問題があり、予防及び治療のいずれの面においても、未だ完全な方法が開発されていないのが現状である。

ＳｐｒｉｎｇｅｒＳｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．２１（３）， １９９９および最新医学「自己免疫疾患の臨床１９９８」，３２， １９９８

本発明は、副作用などの問題が無く、Ｔｈ産生サイトカインの量を調節することのできる安全性の高い新規なＴｈ産生サイトカイン調節剤を提供することを目的としてなされたものである。

本発明者らは、副作用や摂取困難などの問題がないＴｈ産生サイトカイン調節剤、より好ましくは、Ｔｈ産生サイトカインのＩＦＮ−γ産生増強及び／又はＩＬ−４の産生抑制により、Ｔｈ２の産生亢進に起因する疾患を治療又は予防することができるガラクトマンナンを有効成分とするＴｈ産生サイトカイン調節剤を開発すべく鋭意研究を重ねた結果、ガラクトマンナンを有効成分とするものは、Ｔｈ産生サイトカインをより効果的に調節することを新規に見いだし、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、ガラクトマンナンを有効成分として含有することを特徴とするＴｈ産生サイトカイン調節剤を提供するものである。

本発明のＴｈ産生サイトカイン調節剤は、Ｔｈ産生サイトカイン調節を効果的に調節することができる。

本発明における前記ガラクトマンナンとしては、ガラクトマンナンを主成分とするグァーガム、ローカストビーンガム、タラガム、カシアガム、セスバニアガム、フェニグリーク、ガラクトマンナン分解物等の天然粘質物があげられる。粘度の面から特に好ましくはガラクトマンナン分解物である。ガラクトマンナン分解物は、前記のガラクトマンナンを加水分解し低分子化することにより得られるものである。加水分解の方法としては、酵素分解法、酸分解法等、特に限定するものではないが、分解物の分子量が揃い易い点から酵素分解法が好ましい。酵素分解法に用いられる酵素は、マンノース直鎖を加水分解する酵素であれば市販のものでも天然由来のものでも特に限定されるものではないが、アスペルギルス属菌やリゾープス属菌等に由来するβ−マンナナーゼが好ましい。

本発明に使用されるガラクトマンナンは、５,０００〜３００,０００の平均分子量を持つことが望ましい。平均分子量５,０００以上であれば本発明のＴｈ産生サイトカイン調節効果を有するが、一方、平均分子量が３００,０００を超えると、粘度が高く食品に加工する場合に不都合が生じる場合が多いため、ガラクトマンナンの平均分子量は、５,０００〜５０,０００である事が望ましい。特に好ましくは８,０００〜２０,０００である。また、好適例としては、分子量２，０００以上に７０％以上存在するものが好ましい。

平均分子量の測定方法は、特に限定するものではないが、ポリエチレングリコール（分子量；２,０００、２０,０００、２００,０００）をマーカーに高速液体クロマトグラフ法（カラム；ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｄｉｏｌ−１２０（株）ワイエムシィ）を用いて、分子量分布を測定する方法等を用いることにより求めることができる。

ガラクトマンナンは、種々の工業製品に好ましい物性を付与することが知られているが、このものがＴｈ産生サイトカイン調節効果を有することは従来知られていなかった。しかし、本発明者らの研究によると、上述のようなガラクトマンナンを食品組成物として摂取をつづけるとき、Ｔｈ産生サイトカインの調節効果が認められることが見出された。

本発明では、ガラクトマンナンと配合する食品材料は特に限定されるものではなく、他の糖類、食物繊維、脂質、アミノ酸、蛋白質、さらにこれらに必要に応じて、乳酸菌、ビタミン、ミネラルのようなその他の機能性を有する物質を添加してＴｈ産生サイトカイン調節剤とすることができる。このようなガラクトマンナンの摂取方法としては、例えば、飲料、クッキー、スナック菓子、乳製品などの種々の食品とすることができるほか、例えば適当な増量剤、賦形剤などを用いて錠剤状、液状、シロップ状、顆粒状などの医薬品や健康食品の形態にすることもできる。ガラクトマンナンは、種々な食品に添加することが可能であることから容易に摂取することが可能であり、効果的にＴｈ産生サイトカインを調節することができる。本発明におけるガラクトマンナンのＴｈ産生サイトカインの産生調節効果を試験例に基づいて詳しく説明する。

以下、調製例及び試験例をあげて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例に何ら制約されるものではない。

（調製例１）
水９００ｇに０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ４．５に調整し、これにアスペルギルス属由来のβ−マンナナーゼ（阪急バイオインダストリー製）０．２ｇとグァーガム粉末（Ｌｕｃｉｄ製）１００ｇを添加混合して４０〜４５℃で２１時間酵素を作用させた。反応後９０℃、１５分間加熱して酵素を失活させた。濾過分離（吸引濾過）して、不溶物を除去して得られた透明な溶液を減圧濃縮（エバポレーター；Ｙａｍａｔｏ製）した後（固形分２０％）、噴霧乾燥（大川原化工機（株））し、本発明品のＴｈ産生サイトカイン調節剤であるガラクトマンナン分解物（平均分子量 約３０，０００）６５ｇが得られた。

（調製例２）
水９００ｇに０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ３．０に調整し、これにアスペルギルス属由来のβ−マンナナーゼ（阪急バイオインダストリー製）０．１５ｇとグァーガム粉末（Ｌｕｃｉｄ製）１００ｇを添加混合して４０〜４５℃で２３時間酵素を作用させた。反応後９０℃、１５分間加熱して酵素を失活させた。濾過分離（吸引濾過）して、不溶物を除去して得られた透明な溶液を減圧濃縮（エバポレーター；Ｙａｍａｔｏ製）した後（固形分２０％）、噴霧乾燥（大川原化工機（株））し、本発明品のＴｈ産生サイトカイン調節剤であるガラクトマンナン分解物（平均分子量 約２０，０００）６８ｇが得られた。

（調製例３）
水９００ｇに０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ４．０に調整した。これにバチルス属由来のβ−マンナナーゼ（阪急バイオインダストリー製）０．２５ｇとグァーガム粉末（Ｌｕｃｉｄ製）１００ｇを添加混合して５０〜５５℃で１８時間酵素を作用させた。反応後９０℃、１５分間加熱して酵素を失活させた。濾過分離（吸引濾過）して、不溶物を除去して得られた透明な溶液を減圧濃縮（エバポレーター；Ｙａｍａｔｏ製）した後（固形分２０％）、噴霧乾燥（大川原化工機（株））し、本発明品のＴｈ産生サイトカイン調節剤であるガラクトマンナン分解物（平均分子量 約８，０００）６５ｇが得られた。

（調製例４）
水９００ｇに０．１Ｎ塩酸を加えてｐＨ４．０に調整した。これにバチルス属由来のβ−マンナナーゼ（阪急バイオインダストリー製）０．２５ｇとグァーガム粉末（Ｌｕｃｉｄ製）１００ｇを添加混合して５０〜５５℃で２０時間酵素を作用させた。反応後９０℃、１５分間加熱して酵素を失活させた。濾過分離（吸引濾過）して、不溶物を除去して得られた透明な溶液を減圧濃縮（エバポレーター；Ｙａｍａｔｏ製）した後（固形分２０％）、噴霧乾燥（大川原化工機（株））し、本発明品のＴｈ産生サイトカイン調節剤であるガラクトマンナン分解物（平均分子量 約７，０００）７０ｇが得られた。

（実地例１）
７週齢の雄雌ＢＡＬＢ／ｃマウス（日本クレア社）に５０μｇ／ｍｌのＯＶＡ溶液（０．４ｍｌ）を腹腔投与し（第一次免疫）、１４日後に２次免疫を行い、翌日脾臓細胞と上皮リンパ球の採取を行った。なお、蒸留水を自由飲水して免疫応答を施した群を対照群（ｎ＝５）とし、ガラクトマンナン投与群（ｎ＝５）については、第一次免疫の一週間前から１％ガラクトマンナン溶液を自由飲水により摂取を開始し、臓器採取の日まで投与続けた。なお、ガラクトマンナンには実施例１〜４とガラクトマンナン未分解物を用いた。

採取した細胞は、１０％ＦＢＳ含有ＲＰＭＩ１６４０培地を加え、５×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍｌになるように調製した後、２４ｗeｌｌプレートに２ｍｌ／ｗeｌｌで藩種した。４．２ｍｇ／ｍｌＯＶＡを５０μｌずつ添加し、３７℃、５℃ ＣＯ_２インキュベーター条件で３日間後に培養上清を遠心分離し、上清中の各種サイトカイン量（ＩＦＮ-γ、ＩＬ-4）をＥＬＩＳＡ法により測定した。

ガラクトマンナン摂取群では、ＯＶＡ感作後の脾臓細胞におけるＩＦＮ-γ産生量が対照群に比較していずれも有意に増加した（表１）。

ガラクトマンナン摂取群では、ＯＶＡ感作後の脾臓細胞におけるＩＬ-4産生量が対照群に比較していずれも有意に抑制した（表２）。

以上の結果より、ＩＦＮ−γ産生増強とＩＬ−４の産生抑制が確認された。

（調製例５）
調製例１のガラクトマンナン分解物粉末５ｇに粉糖９３．５ｇ、アラビアガム１．０ｇ、ステアリン酸マグネシウム０．５ｇ、香料適量の割合で混練して乾燥した後打錠し、Ｔｈ産生サイトカイン調節に有用な錠菓の製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。

（調製例６）
調製例１のガラクトマンナン分解物粉末５ｇにローファットミルク９５．０ｇを加えＴｈ産生サイトカイン調節に有用な乳飲料の製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。

（調製例７）
調製例２のガラクトマンナン分解物粉末３．０ｇにピーチピューレ４０．０ｇ、果糖ブドウ糖液糖１０．０ｇ、クエン酸０．１ｇ、ビタミンＣ０．０３ｇ、フレーバー適量、水４６．８ｇを加えＴｈ産生サイトカイン調節に有用な清涼飲料水の製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。

（調製例８）
調製例２のガラクトマンナン分解物粉末５．０ｇに強力粉５１．０ｇ、砂糖１５．０ｇ、食塩７．０ｇ、イースト８．０ｇ、イースト１．０ｇ、バター１０．０ｇ、水３０．０ｇの配合でパン焼き機を利用してＴｈ産生サイトカイン調節に有用な食パンの製品１１０ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。

（調製例９）
調製例３のガラクトマンナン分解物粉末４．０ｇにグラニュー糖３０．０ｇ、水あめ３５．０ｇ、ペクチン１．０ｇ、１／５アップル果汁２．０ｇ、水２８．０ｇで混合し８５℃まで加熱した後、５０℃まで冷却しＴｈ産生サイトカイン調節に有用なゼリーの製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。

（調製例１０）
調製例３のガラクトマンナン分解物粉末４．０ｇにグラニュー糖３０．０ｇ、水あめ３５．０ｇ、ペクチン１．０ｇ、１／５アップル果汁２．０ｇ、水２８．０ｇで混合し８５℃まで加熱した後、５０℃まで冷却しＴｈ産生サイトカイン調節に有用なゼリーの製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。

（調製例１１）
調製例４のガラクトマンナン分解物粉末２．０ｇとアラビノガラクタン粉末２．０ｇにグラニュー糖３０．０ｇ、水あめ３５．０ｇ、ペクチン１．０ｇ、１／５アップル果汁２．０ｇ、水２８．０ｇで混合し８５℃まで加熱した後、５０℃まで冷却しＴｈ産生サイトカイン調節に有用なゼリーの製品１００ｇを得た。なお、味と物性面でガラクトマンナン分解物無添加品と違いは認められなかった。

本発明のＴｈ産生サイトカイン調節剤は、Ｔｈ産生サイトカイン調節剤に関するものであり、さらに詳しくは、ＩＦＮ−γ産生増強及び／又はＩＬ−４の産生抑制により、Ｔｈ２の産生亢進に起因する疾患を治療又は予防することができる

Claims (2)

1. ガラクトマンナンを含有することを特徴とするヘルパーＴ細胞型産生サイトカイン調節剤。
2. ヘルパーＴ細胞型産生サイトカイン調節がＩＦＮ−γ産生増強及び／又はＩＬ−４の産生抑制であることを特徴とする請求項１記載のヘルパーＴ細胞型産生サイトカイン調節剤。