JP2006117616A - 免疫賦活組成物及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

【課題】 従来のハナビラタケからのβ−グルカン抽出法に比べ、効率よく、安全且つ簡便なβ−グルカン抽出法を提供する。
【解決手段】 ハナビラタケを酵素剤で分解処理することによって得られる免疫賦活組成物であって、分子量が１０万〜１００万のβ−グルカンを含有することを特徴とする免疫賦活組成物及びハナビラタケの子実体又は菌糸体の乾燥粉末（粒径が０．１〜２０μｍ）に酵素剤を作用させて分解処理することを特徴とする免疫賦活組成物の製造方法。
【選択図】 なし

Description

本発明は、ハナビラタケの子実体や菌糸体などから得られる免疫賦活組成物及びこの免疫賦活組成物を得るための製造方法に関する。

ハナビラタケ（Sparasiss crispa）は唐松などの針葉樹にまれに生えるキノコで、幻のキノコと呼ばれている。子実体は有柄、柄は繰り返して枝を分ける。各枝は平たくなり、波型にうねりくねった花弁状、全体はハボタン状になる。白からクリーム色、一株の径は１０ｃｍ〜３０ｃｍに達する。花弁状の各片は厚さ1ミリほどで、柔軟だが歯切れがよい肉質である。食用のキノコで日本のほかにヨーロッパなどでも発見されている。

ハナビラタケは、免疫を活性化させるといわれているβ−グルカンを多く含むことが知られており、今までに乾燥重量１００ｇあたり４３．６ｇ含有する例が報告されている（例えば、特許文献１参照）。しかもその構造は、β−グルカンの中でも特に抗腫瘍効果（免疫賦活効果）が高いとされる６分岐β−(１→３)−グルカンである（例えば、非特許文献１参照）。この６分岐β−(１→３)−グルカンは、免疫賦活能力が高く、免疫細胞（ＮＫ細胞等）を活性化してガン細胞を攻撃し、ガンを殺滅させることが知られている。６分岐β−(１→３)−グルカンは、ハナビラタケに限らず、シイタケ、スエヒロタケ等のキノコ類でも知られ、シイタケから抽出したレンチナンやスエヒロタケから抽出したシゾフィランは、既に抗ガン剤として製薬化されている。尚、ハナビラタケからβ−グルカンを抽出する方法としては、既に熱水やアルカリ水などを用いる方法が開示されている（例えば、特許文献２参照）。
特開２００２−１２５４６０号公報 特開２０００−２１７５４３号公報 Biol Pharm Bull.2000 23(7):866-872

しかしながら、上述した抽出方法では、熱水抽出の場合は抽出効率が低く、アルカリ抽出の場合は安全性の問題に加えて中和操作が必要になるなど作業性が著しく悪いという問題点があった。

本発明は、ハナビラタケから安全に且つ簡便に、効率よくβ−グルカンを得ることができ、また得られたβ−グルカンが優れた免疫賦活効果を発揮することができる免疫賦活組成物の製造方法及びその免疫賦活組成物を提供することを目的とするものである。

本発明者らは、上記課題を達成するために鋭意検討した結果、酵素剤を利用することでハナビラタケの構成組織を分解して、ハナビラタケからのβ−グルカンの抽出効率を向上させ得ることを見出し、本発明に到達した。

すなわち、本発明は、ハナビラタケを酵素剤で分解処理することによって得られる免疫賦活組成物を要旨とするものである。

また、本発明は、分子量が１０万〜１００万のβ−グルカンを含有することを特徴とする免疫賦活組成物を要旨とするものである。

また、本発明は、ハナビラタケに酵素剤を作用させて分解処理することを特徴とする免疫賦活組成物の製造方法を要旨とするものであり、好ましくは、ハナビラタケが、ハナビラタケの子実体又は菌糸体の乾燥粉末であって、該粉末の粒径が０．１〜２０μｍである免疫賦活組成物の製造方法である。

さらに、本発明は、ハナビラタケに酵素剤を作用させて分解処理して、分子量が１０万〜１５０万のβ−グルカンを含有することを特徴とする免疫賦活組成物を得ることを特徴とする免疫賦活組成物の製造方法を要旨とするものである、好ましくは、ハナビラタケが、ハナビラタケの子実体又は菌糸体の乾燥粉末であって、該粉末の粒径が０．１〜２０μｍである免疫賦活組成物の製造方法である。

本発明に係る免疫賦活組成物及びその製造方法によれば、ハナビラタケの子実体、菌糸体のいずれかを酵素剤で分解処理することで、免疫賦活活性の主体であるβ−グルカンを効率よく、安全且つ簡便に得ることができる。また、このβ−グルカンは酵素処理により分子量が特定の範囲にまで低下している為、体内に取り込んだときの消化吸収が飛躍的に向上し、ガンその他の成人病に対して優れた免疫賦活効果を発揮する。

以下、本発明を詳細に説明する。

本発明において用いられるハナビラタケは、ハナビラタケの子実体であっても、菌糸体であってもよい。ハナビラタケの子実体は、天然のものでもよいし、あるいは人工栽培により得られたものであってもよい。人工栽培は、人工栽培用の菌床を作製することにより行うことができる。具体的には例えば以下のように行う。すなわち、カラマツ等針葉樹の乾燥オガコに小麦粉等の栄養分を１％〜３０％、好ましくは３％〜２０％、さらに好ましくは５％〜１０％混合する。これを通常８５０ｃｃのポリプロピレン製栽培ビンに入れ殺菌をしておく。このような培地に同様のオガクズ培地で培養した種菌を接種する。接種量は通常８ｇ〜１８ｇである。種菌を接種した後、一定の条件下、すなわち温度は１５℃〜３０℃、好ましくは１８℃〜２８℃、２０〜２５℃が最も好ましく、湿度は５０％〜８０％、好ましくは５５％〜７５％、６０％〜７０％が最も好ましい条件下で培養し、培地に菌糸を回らせる。その後、芽出し操作として、菌掻きなどを行う。その後、ビンのふたを取って、温度約１９℃、湿度約９０％の栽培室に移し、子実体を成育させる。通常、芽出し操作後約５６日間の生育工程により成長が終了するので、子実体の収穫を行う（詳細は、特開平１１−５６０９８号公報、特開２００２−３６９６２１号公報、特開２００２−１２５４６０号公報等を参照）。

一方、ハナビラタケの菌糸体は、固体培養または液体培養のいずれの方法でも得ることができる。本発明で用いられるハナビラタケの菌糸体を固体培養によって得る方法としては、上記の子実体の栽培方法の条件をそのまま踏襲できる。一方、ハナビラタケの菌糸体を液体培養によって得る方法としては、例えば、ブドウ糖２％、酵母エキス１％、リン酸２水素カリウム０．１％、ポリペプトン０．１％、大豆粉０．１％、ｐＨ４．５からなる液体培地を用いる方法がある。液体培養は一般的な好気性菌の培養方法に準ずればよく、例えば、振盪培養器を用いて５００ミリリットルの三角コルベンに２００ミリリットルの液体培地を入れ、２５℃、回転数１００回転／分で振盪培養した場合、３〜５週間で培養が完了する。元菌はハナビラタケから分離しスラント又は冷凍保存しておいた保存株をスラント等に継代しておこした後、液体培養に移す。通常、培養後の菌糸は無数の球状になり、液体部分は完全に澄んでいる。培養は必要な量に応じてスケールを変えることができ、大型タンクでも培養可能である。

培養収量後、菌糸体と培養液を分離し菌糸体を回収する。分離する方法としては、濾紙等によるロ過または遠心分離で行う。

本発明においては、上記のようにして得られたハナビラタケの子実体又は菌糸体を、そのまま次の酵素剤による分解処理に供してもよいし、まず乾燥した後、破砕機などを用いてハナビラタケの組織を機械的に粗く破砕したものを供してもよい。乾燥するには、熱風乾燥や凍結乾燥のような方法が挙げられる。また、ここで用いられる破砕機としては、ミキサーや石臼などが挙げられる。

さらに、粗破砕されたハナビラタケの粒子を粒径０．１〜２０μｍの乾燥粉末になるように微粉砕することが酵素反応を進行しやすくするうえで望ましい。微粉砕の方法としては、石臼破砕法、ジェットミル破砕法、超音波破砕法が挙げられるが、中でもジェットミル破砕法は生産性の観点より好ましい。ハナビラタケの粒径が２０μｍを超えると、その後の酵素反応を受けにくくなり、有効成分の抽出効率が低下する傾向がある。粒径が０．１μｍ未満であると、酵素反応時にハナビラタケの粒子が膨潤し反応容積が大きくなる点から好ましくない。

本発明においては、上記のようにして得られたハナビラタケに酵素剤を加えて分解処理を行う。本発明で用いられる酵素剤としては、ペクチナーゼ、セルラーゼ、へミセルラーゼなどである。これらの酵素としては、トリコデルマ・ビリデ、リゾプス属糸状菌等を培養することによって得られた酵素群や、一般に市販されている酵素剤（例えば、スミチームＭＣ、セルロシンＴ２）を利用することもできる。酵素剤は単独で使用することもできるが、複数の酵素を使用してもよい。

ハナビラタケに対する酵素剤の添加割合は、酵素の種類やハナビラタケの粒径などにより一概に限定できないが、処理すべきハナビラタケに対し、概ね０．1〜１０質量％、望ましくは５質量％前後である。また、酵素処理液のｐＨは、３．０〜８．５、望ましくはｐＨ６．０前後である。酵素処理の温度は２５〜６０℃、望ましくは約５０℃である。さらに、酵素処理時間は２０分〜１０時間、望ましくは２時間〜５時間程度である。

酵素剤による分解処理がある程度まで進行したら、処理液を加熱して酵素反応を止める。通常、８０〜１００℃で１０分〜１時間加熱して酵素を失活させる。その後、処理液中の残渣を濾別せずに処理液を凍結乾燥やフプレードライなどの乾燥手段を施して粉末などの乾燥物としてもよいし、残渣を濾別した濾液を濃縮してエキスとしてもよい。乾燥手段としては凍結乾燥が望ましいが、β−グルカン等の有効成分が比較的熱にも強いことからスプレードライによる乾燥も可能である。以上のような操作によりハナビラタケ由来のβ−グルカンを多量に含む本発明の免疫賦活組成物を得ることができる。

本発明の免疫賦活組成物は、主成分としてβ−グルカンを多量に含有するものであり、その乾燥物中の含有量としては、１．０〜３０質量％、好ましくは５．０〜３０質量％、さらに好ましくは１０〜３０質量％である。

また、β−グルカンの分子量は、１０万〜１００万であり、好ましくは１０万〜５０万である。通常、ハナビラタケから抽出されるβ−グルカンの分子量は１００万以上であることを考慮すると、本発明の免疫賦活組成物に含有されるβ−グルカンの分子量が酵素処理により低分子化されていることが明らかである。そのため、体内での消化吸収が一段と高まり、より免疫賦活効果を期待できることになる。

本発明におけるβ−グルカンの量は、（財）日本食品分析センター酵素法により測定した値である。すなわち、サンプル０．２５ｇを１００ｍＬ容の三角フラスコに取り、０．０８Mのリン酸緩衝液（ｐH６．０）２５ｍLを注いだ。次に耐熱性αアミラーゼ溶液（シグマ社、２．１万ユニット/ｍL）を０．０５ｍL添加し沸騰湯浴中で３０分間反応後水酸化ナトリウム水溶液を加えｐＨ７．５±０．１に調製した。次に５０ｍｇ/ｍLのプロテアーゼ（シグマ社、バシルス属由来、７−１５ユニット/ｍｇ）溶液を０．０５ｍL添加し６０℃湯浴中で３０分間反応させ冷却後塩酸を加え、ｐＨ４．３±０．１に調整した。更にアミログルコシダーゼ溶液（シグマ社、食物繊維トータルアッセイキット用）を０．０５ｍL添加し６０℃湯浴中で３０分間反応させた。冷却後９５％エタノール１４０ｍLと共に大きな容器に移し替え１時間放置した。生じた沈殿をロ集し、ロ集物に７２％硫酸５ｍLを加えた。４時間放置後、水７０ｍLを添加し、更に沸騰湯浴中で２時間加水分解させた。冷却後生じたグルコース量をグルコーステストワコー（和光純薬工業製）により測定し総β−グルカンの量とした。

本発明におけるβ−グルカンの分子量は、ＧＰＣ（カラム：UltrahydrogelGuard + 120 + 500（ウォーターズ社製)、溶媒：0.5Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ１１）、流速：０．５ｍＬ／分、検出：示差屈折計）により求めた（デキストラン換算）。

本発明の免疫賦活組成物に含有されるβ−グルカンは、本発明者らによる検討などにより６分岐β−（１→３）−グルカンであることが強く示唆されている。

また、本発明の免疫賦活組成物には、β−グルカンのほかに、低分子有効成分を含むものである。

本発明の免疫賦活組成物の形態としては、必要に応じて錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤等に製剤化すればよい。

ここで用いられる製剤担体としては、通常の薬剤に汎用される各種のもの、例えば充填剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤等の希釈剤ないし賦形剤等を例示できる。

錠剤の形態に成形するに際しては、担体として例えば、乳糖、白糖、還元麦芽糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤、水、エタノール、単シロツプ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セラツク、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤、白糖、ステアリン酸、カカオバター、水素添加油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩、ラウリル硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩等の滑沢剤等を使用できる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠、二重錠、多層錠等とすることができる。

丸剤の形態に成形するに際しては、担体として例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン等の結合剤、ラミナラン、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。カプセル剤は本発明の有効成分であるハナビラタケを上記で例示した各種の担体と混合し、硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填して調製される。更に上記各組成物には必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品を配合してもよい。

本発明の免疫賦活組成物は、経口投与するのが好ましい。投与方法は、各種組成物の製剤形態、患者の年齢、性別、患者の症状の程度、その他の条件に応じて決定される。例えば、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤及びカプセル剤は経口投与される。

本発明の免疫賦活組成物の投与量は、用法、患者の年齢、性別、疾患の程度、その他の条件により適宜選択できる。通常、β−グルカン(乾燥質量換算)を１〜５００ｍg／kg／日程度、好ましくは５〜１００mg／kg／日程度、さらに好ましくは１０〜５０mg／kg／日程度の範囲となる量を目安とするのがよい。これら本発明の組成物は１日に１回又は２〜４回程度に分けて投与することができる。

本発明の免疫賦活組成物により花粉症などのアレルギーや悪性腫瘍を有効に治療することができる。悪性腫瘍としては、食道癌、胃癌、肝臓癌、胆のう・胆管癌、膵臓癌、結腸癌、直腸癌、頭頚部癌、肺癌、乳癌、子宮頚癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、睾丸腫瘍、骨・軟部肉腫、皮膚癌、悪性リンパ腫、急性白血病、脳腫瘍等が挙げられる。

ナチュラルキラー細胞（以下、ＮＫ細胞という。）は、抗体の介在なしに直接癌細胞やウイルスに感染した細胞を攻撃することが知られているが、ハナビラタケのβ−グルカンは、ＮＫ細胞活性増強を1つの作用機序として、患者に重篤な副作用を伴うことなく、このＮＫ細胞の腫瘍細胞への細胞障害作用によって腫瘍増殖抑制効果を発現するものと考えられる。

以下、実施例により本発明をより具体的に説明する。なお、本実施例中、β−グルカンの量及び分子量は、上記した方法に従った。また、固形分抽出率は抽出物重量のハナビラタケ子実体若しくは菌糸体重量に対する比（重量％）で、β−グルカンの抽出率は抽出物中のβ−グルカン重量のハナビラタケ子実体若しくは菌糸体に含まれるβ−グルカン重量の比（重量％）として算出した。

実施例１〔ハナビラタケの免疫賦活組成物の調製〕
粉砕機破砕したハナビラタケ子実体（ユニチカ株式会社人工栽培品）粉末５．０ｇ（粒径６６ミクロン）を蒸留水１００ｍＬ中に懸濁し、スミチームＭＣ（新日本科学工業社製、ペクチナーゼ力価：４０００ユニット/ｇ）０．３ｇを添加し５０℃で保温した。４時間後１００℃に昇温しそのまま１時間保持することにより酵素を失活させた。その後遠心分離（８，０００ｒｐｍ）することにより免疫賦活組成物のエキスを得た。このエキスを凍結乾燥して２．８２ｇの粉末を得た（固形分抽出率５６．４％）。得られた粉末中の有効成分（β−グルカン）の含有量は、１０．３％であり、β−グルカンの子実体粉末総含有量に対する抽出率は１１．２％であった。得られたβ−グルカンの分子量は、５０万と算出された。

比較例１
粉砕機破砕したハナビラタケ子実体（ユニチカ株式会社人工栽培品）粉末５．０ｇ（粒径６６ミクロン）を蒸留水１００ｍＬ中に懸濁し、１２１℃で２時間加熱処理をした。その後遠心分離（８，０００ｒｐｍ）することにより免疫賦活組成物のエキスを得た。このエキスを凍結乾燥して１．８０ｇの粉末を得た（固形分抽出率３６．０％）。得られた粉末中の有効成分（β−グルカン）の含有量を測定したところ、９．５％であり、β−グルカンの子実体粉末総含有量に対する抽出率は６．６％にすぎなかった。β−グルカンの分子量は、１００万と算出された。

実施例２〔ハナビラタケの免疫賦活組成物の調製〕
粉砕機破砕したハナビラタケ子実体（ユニチカ株式会社人工栽培品）粉末を更に石臼で粒径１０ミクロンに破砕した微細粉末についても実施例１と同一の条件でスミチームＭＣによる処理を行い、免疫賦活組成物のエキスを得た。このエキスを凍結乾燥して３．２７ｇの粉末を得た（固形分抽出率６５．４％）。得られた粉末中の有効成分（β−グルカン）の含有量は２８．４％であり、β−グルカンの子実体微細粉末総含有量に対する抽出率は３２．７％と実施例１と較べ大きく向上していた。β−グルカンの分子量は、５０万と算出された。

実施例３
ブドウ糖２％、酵母エキス１％、リン酸２水素カリウム０．１％、ポリペプトン０．１％、大豆粉０．１％、ｐＨ４．５からなる液体培地５ミリリットルを入れた試験管にハナビラタケ菌糸体一白金耳を植菌し２５℃で１週間振盪培養した。次いで５００ミリリットルの三角コルベンに２００ミリリットルの液体培地を入れ、２５℃、回転数１００回転／分で３週間振盪培養した。尚、培養は５連で行った。培養液を遠心分離（８，０００ｒｐｍ）することにより１００ｇの菌糸体を得た。

上記した液体培養により得られたハナビラタケ菌糸体を凍結乾燥後粉砕機破砕した。ハナビラタケ菌糸体粉末５．０ｇ（粒径５０ミクロン）を蒸留水１００ｍＬ中に懸濁し、セルロシンＴ２（エイチビィアイ社製、セルラーゼ力価：６０００ユニット/ｇ）０．３ｇを添加し５０℃で保温した。４時間後１００℃に昇温しそのまま１時間保持することにより酵素を失活させた。その後遠心分離（８，０００ｒｐｍ）することにより免疫賦活組成物のエキスを得た。このエキスを凍結乾燥して３．４ｇの粉末を得た（固形分抽出率６８．０%）。得られた粉末中の有効成分（β−グルカン）の含有量は２．８％であり、β−グルカンの菌糸体粉末総含有量に対する抽出率は１１．８％であった。β−グルカンの分子量は、４８万と算出された。

比較例２
実施例３のハナビラタケ菌糸体の粉砕機破砕粉末５．０ｇを蒸留水１００ｍＬ中に懸濁し、１２１℃で２時間加熱処理をした。その後遠心分離（８，０００ｒｐｍ）することにより免疫賦活組成物のエキスを得た。このエキスを凍結乾燥して１．８５ｇの粉末を得た（固形分抽出率３７．０％）。得られた粉末中の有効成分（β−グルカン）の含有量を測定したところ、１．０％であり、β−グルカンの菌糸体粉末総含有量に対する抽出率は２．１％にすぎなかった。β−グルカンの分子量は１５０万と算出された。

実施例４〔ハナビラタケの免疫賦活組成物のNK活性〕
Ａ，Ｂ，Ｃ３名の血液からPBMC(末梢血単核細胞)画分を分離し、１０％ＦＣＳ加ＲＰＭＩ−１６４０培地で４×１０^６/mL濃度に調製した。PBMC浮遊液に２００μg/ｍＬの実施例1〜３の免疫賦活組成物及び比較例１〜２の組成物をそれぞれ終濃度100μg/ｍＬとなるように添加し一晩インキュベートした。インキュベートされたPBMCのK-562ヒト慢性骨髄性白血病細胞に対する傷害活性からNK細胞活性（％）を求めた。図１に各群のNK細胞活性促進効果（無添加時の値との差）を示した。実施例１と比較例１、実施例３と比較例２から、熱水抽出により得られた免疫賦活組成物よりは酵素剤分解処理によって得られたそれの方がNK細胞活性促進効果が高く、実施例１と実施例２を比較することにより粒径１０μｍのハナビラタケの子実体微粉末を酵素剤分解処理によって得られた免疫賦活組成物の方が粒径６６μｍのハナビラタケの子実体粉末を酵素剤分解処理によって得たそれよりもNK細胞活性促進効果が高いことが判明した。

実施例５〔ハナビラタケの免疫賦活組成物の抗腫瘍活性〕
ICRマウス（６週齢、メス）の左腋窩に注射針を用いてザルコーマ１８０を１×１０^６個移植した。移植７日後、実施例1〜３で得られた免疫賦活組成物及び比較例１〜２で得られた組成物（いずれもエキス）を胃ゾンデ法によりそれぞれ１．２ｍL/Kg/日強制投与した。尚、コントロール群には同量の水を投与した（各群１０匹）。投与１４日後の各群の腫瘍体積（長径×短径×短径×0.5）を図２にまとめた。実施例１と比較例１、実施例３と比較例２から、熱水抽出により得られた免疫賦活組成物よりは酵素剤分解処理によって得られたそれの方が抗腫瘍効果が高く、実施例１と実施例２を比較することにより粒径１０μｍのハナビラタケの子実体微粉末を酵素剤分解処理によって得られた免疫賦活組成物の方が粒径６６μｍのハナビラタケの子実体粉末を酵素剤分解処理によって得たそれよりも抗腫瘍効果が高いことが判明した。

実施例１〜３で得られた免疫賦活組成物及び比較例１〜２で得られた組成物について、NK細胞活性促進効果を示した図である。 実施例１〜３で得られた免疫賦活組成物及び比較例１〜２で得られた組成物について、担癌マウスに対する抗腫瘍活性を示した図である。

Claims (5)

1. ハナビラタケを酵素剤で分解処理することによって得られる免疫賦活組成物。
2. 分子量が１０万〜１００万のβ−グルカンを含有することを特徴とする免疫賦活組成物。
3. ハナビラタケに酵素剤を作用させて分解処理することを特徴とする免疫賦活組成物の製造方法。
4. ハナビラタケに酵素剤を作用させて分解処理して請求項２記載の免疫賦活組成物を得ることを特徴とする免疫賦活組成物の製造方法。
5. ハナビラタケが、ハナビラタケの子実体又は菌糸体の乾燥粉末であって、該粉末の粒径が０．１〜２０μｍである請求項３又は４に記載の免疫賦活組成物の製造方法。