JP2006034171A - ビスフェノールa分解細菌およびその用途 - Google Patents
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Abstract
【手段】 本発明は、ビスフェノールAを分解する能力を有し、Nocardioides属に属するビスフェノールA分解細菌を提供する。その代表株は、Nocardioides sp. JBB-41株(FERM AP-20004)である。本発明によるビスフェノールAの分解処理方法は、上記ビスフェノールA分解細菌を、ビスフェノールAを除去すべき試料に接触させる工程を含む方法である。
【選択図】なし
Description
本発明によるビスフェノールAの分解処理方法は、上記のビスフェノールA分解細菌を、ビスフェノールAを除去すべき試料に接触させる工程を含む。
また本発明は、上記ビスフェノールA分解細菌又はその培養物を含有するビスフェノールA分解剤を提供する。
本発明のビスフェノールA分解細菌は、次のようにして単離される。先ず、活性汚泥、土壌などの分離源をビスフェノールAを主な炭素源として含有する培地で培養する。そして培養後のビスフェノールA濃度を測定し、分解活性が認められた培養体は同じ培養液に数回植え継ぐことにより、分解微生物を集積化する。そしてこの集積培養体を栄養寒天培地などに混釈し培養することによりコロニーを形成させる。形成したコロニーを釣り上げ、液体培地により培養し、培養後の各菌体をビスフェノールAを含む反応液に加える。反応後のビスフェノールA濃度を測定することによりビスフェノールA分解細菌を選択する。すなわち、ビスフェノールA濃度の所望の低下が見られる反応液からビスフェノールA分解細菌を分離する。
各代表株の微生物学的性状は表1の通りである。
さらに本発明によれば、上記のビスフェノールA分解細菌をビスフェノールAに作用させることを特徴とする分解処理方法が提供される。すなわち、本法は、微生物を用いた環境浄化処理プロセスにおいて、本発明のビスフェノールA分解細菌、その培養物、または同細菌をあらかじめ担持した固定化担体などを、ビスフェノールAを除去すべき試料と好気的または嫌気的な条件下で接触させる工程を含む。
以下に実施例を挙げて本発明を説明する。
本発明の細菌の単離は以下のように行った。
集積培養体の作製
栃木県内の下水処理場より活性汚泥を採取し、冷蔵して輸送後直ちに集積培養の種汚泥として実験に供した。集積培養のための培地は、YNB(Yeast Nitrogen Base without amino acid)培地(Difco)とYNB培地に50mg/lの酵母エキスを加えたYNBYE培地の2種類の培地を基礎培地とし、ここに最終濃度100mg/lのビスフェノールAを炭素源として加えて使用した。滅菌した試験管に酢酸エチルに溶解したビスフェノールAを注入し、酢酸エチルを揮発除去した後にろ過滅菌した基礎培地と種汚泥(最終濃度100mg/l)を添加しシリコ栓をして28℃で振とう培養を行った。培養後のビスフェノールA濃度を測定し、減少が認められたものを分解とみなした。分解作用が確認された集積培養体は、新しい同じ組成の培地に1%を植え継ぎ、この操作を繰り返して安定した集積培養体を作製した。ビスフェノールAの濃度は、集積培養試験管に3ml×2の酢酸エチルで抽出し、GC/MSで測定した。
上記の方法で作製した集積培養体を滅菌水で希釈してNB培地(Difco)または、PGY培地(2g/lペプトン、0.5g/lグルコース、1.0g/l酵母エキス、pH7.0)に1.5%バクトアガー(Difco)を加えた寒天培地に混釈して、固化した寒天プレートを28℃で培養することでコロニーを形成させた。形成したコロニーを白金耳で釣り上げ、ビスフェノールA分解活性を以下の方法で測定した。
(1)1週間でほぼ完全に分解できるタイプ:JBB-41株
(2)1週間では分解できず、3週間で分解できるタイプ:JBN-2株、JBN-4株、JBN-11株、JBN-12株、JBB-15株、JBN-29株、JBN-30株、JBN-34株、JBN-35株
(3)1週間で60 %程度分解するが、その後は分解が進まないタイプ:JBN-33株
表2に各タイプを代表する単離株によるビスフェノールA濃度の変化を示す。
実施例1で単離された11株の分解微生物のうち、JBN-2株、JBN-29株、JBN-33株、JBB-41株について16S rRNA遺伝子の全長配列を決定した。JBB-41株の16S rRNA遺伝子の配列を配列番号1に示す。またそれら単離株について各16S rRNA遺伝子の全長配列に基づくBLASTサーチにより近縁種を検索した。表3に各単離株の近縁細菌と16S rRNAの相同性を示す。
表4及び表5に、JBB-41株の生化学的性質、各基質の発酵性の各結果を示す。
下水処理場の流入下水、生物処理水、脱水ろ液、さらにゴミ埋め立て地の浸出水を試料として、実施例1で単離された分解細菌を用いたビスフェノールAの処理を行った。実験はガラス製広口ビンに入れた2リットルの各廃水をマグネットスターラーで撹拌し、そこに5mg/lの濃度で各分解細菌を加えて、室温(25℃)で撹拌して反応させた。2時間反応後に採水し、ビスフェノールA濃度を測定した。なお、廃水中のビスフェノールAの測定は、下水試験法(追補暫定版、下水道協会 2002年)に従って固相抽出後、脱水濃縮して、誘導体化(トリメチルシリル化)し、GC/MSによって行った。
Claims (6)
- ビスフェノールAを分解する能力を有し、Nocardioides属に属するビスフェノールA分解細菌。
- Nocardioides sp. JBB-41株(FERM AP-20004)である、請求項1に記載のビスフェノールA分解細菌。
- 請求項1又は2に記載のビスフェノールA分解細菌を、ビスフェノールAを除去すべき試料に接触させる工程を含む、ビスフェノールAの分解処理方法
- 請求項1又は2に記載のビスフェノールA分解細菌又はその培養物をあらかじめ担体に担持させ、該担体を、ビスフェノールAを除去すべき廃水または廃棄物の処理槽に投入する工程を含む、請求項3に記載の分解処理方法。
- 請求項1又は2に記載のビスフェノールA分解細菌又はその培養物をあらかじめ担持させた担体をカラムに充填し、該カラムにビスフェノールAを除去すべき廃水を通水する工程を含む、請求項3に記載の分解処理方法。
- 請求項1又は2に記載のビスフェノールA分解細菌又はその培養物を含有するビスフェノールA分解剤。
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