JP2005536180A - 自己免疫疾患の治療および移植拒絶の処置に使用する抗cd45rb抗体 - Google Patents
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Abstract
Description
Zhang et al.、Transplant Proc. 27:389 (1995) Lazarovits et al.、Nature、380:717 (1996) Basadonna et al.、PNAS 95:3821 (1998) Lazarovits et al.、Kidney Int. 55:1303 (1999)
XenoMouseマウスの免疫
XenoMouseマウス(XenoMouse(登録商標) XG2、Abgenix, Inc.、米カリフォルニア州Fremont)をさまざまなCD45RB抗原(表2参照)で順次に免疫することによって、CD45RBに対するモノクローナル抗体を得た。いくつかのケースでは、XenoMouseマウスを、表3に詳細に記載した5つのヒトCD45RBペプチドで免疫した。他のケースでは、XenoMouseマウスを、これらのペプチドとCEM細胞との混合物で免疫した。CEM細胞は、CD45RBを自然に発現するT細胞系である。あるいは、完全長CD45RBを発現するプラスミドをトランスフェクションしたHEK-293細胞を使用した。さらに、抗原独立のT細胞ヘルプをB細胞に提供するTCEを加えた。TCEは、抗原に接合したときに抗原特異的B細胞にMHCクラスII制限T細胞ヘルプを提供するT細胞エピトープである。T細胞ヘルプは、クローン展開、クラススイッチング、体細胞ハイパー突然変異および形質細胞への分化に必要なシグナルを抗原特異的B細胞に提供する。
ヒトCD45RBを特異的に認識した抗体のスクリーニング
2種類のスクリーニングを使用して、CD45RBを特異的に認識したプール上澄み中の抗体を識別した。
1.1 完全長CD45RBまたはCD45ROでCHO細胞を一過的にリポフェクションした。
1.2 48時間後、細胞をトリプシン処理し、テラサキ皿(Terasaki dish)に接種した(5000細胞/ウェル)。細胞を37℃で一晩培養した。
1.3 培地を除去し、B細胞培養上澄み10μLを用いて氷上で2時間、細胞を染色した。
1.4 モノクローナル6G3またはPC2を陽性対照として含めた。250ng/mLから1:2で滴定した。この検定には無関係なXG2組換え対照も含めた。
1.5 一次抗体インキュベーションの後、培地を除去し、細胞を1%パラホルムアルデヒドで固定した(10μL、20分)。
1.6 細胞をPBS 20μLで2回洗浄した。
1.7 二次抗体(ヤギ抗ヒトIgG Fc Alexa 488、2μg/mL)を氷上で1時間インキュベートした。
1.8 細胞をPBS 20μLで2回洗浄した。
1.9 蛍光顕微鏡法によって細胞を調べた。
1)Corning Costar Universal結合プレート(製品番号2503)を以下の濃度のCD45RBペプチドでコーティングする: 46量体2μg/ml、20量体0.87μg/mlおよび18量体0.78μg/ml。
2)数回はたいてコーティング溶液をプレートから除去し、一部の液体をウェルに残す。
3)36OnmのUVをプレートに4分照射する。
4)プレートをdH2Oで5回洗浄する。
5)プレートを2%Milk/PBS 250μ1でブロックし、室温で30分保持する。
6)プレートをdH2Oで5回洗浄する。
7)プレートに2%Milk/PBS 40μ1を追加し、次いでB細胞上澄み10μlをそれぞれのウェルに加え、室温で1時間保持する。
8)プレートをdH2Oで5回洗浄する。
9)それぞれのウェルに、Gt抗ヒト(Fc)-HRP(1μg/ml)を50μl加え、室温で1時間保持する。
10)プレートをdH2Oで5回洗浄する。
11)それぞれのウェルにTMB基質50μlを加える。
CD45RB特異的形質細胞の識別および分離
関心のウェルを識別した後、溶血プラーク検定を使用して特異的B細胞を識別し分離した。検定は、ビオチン化したペプチド抗原でコーティングしたヒツジ赤血球(SRBC)を使用して実施した。関心のウェルからのB細胞を解凍し培養した。次いで、ペプチドで被覆したSRBCを形質細胞と混合した。補体、ならびにヒト抗体を認識する抗血清を加えた。関心の細胞は、抗原特異的抗体を発現し分泌している形質細胞の周囲のSRBCが溶解した溶解ゾーンを示した。
4.84 ヒツジ赤血球(SRBC)のビオチン化
1.1 RPMI培地中で保存した25%SRBCストックを、管を数回振り混ぜることによって完全に再懸濁させる。
1.2 15mlファルコンチューブに25%ストック1.0mlを分取する。細胞を遠心機にかけ、上澄みを除去し、次いでSRBCを追加しまたは除去して、250μ1の圧縮細胞ペレットを得る。pH8.6のPBS 4.75mlに再懸濁させる。
1.3 別の50ml管にpH8.6のPBS 20mlを入れ、これにスルホNHSビオチン1.25mgを加える。ビオチンを完全に溶解させた後、SRBC 5mlを加え、室温で1時間回転させる。
1.3.1 ペプチドプラーク検定に関して、SRBCのビオチン化は1.3に記載したとおりだが、組換え体CD45RB-hisを使用したプラーク検定では、SRBC上のビオチンを2倍にした。したがって、ステップ1.3ではスルホNHSビオチンを5.0mg使用した。
1.4 SRBCを3000gで5分間遠心処理し、上澄みを除去する。pH 7.4のPBS 25m1を加えて洗浄する。
1.5 洗浄を3回繰り返し、ビオチン化SRBC(B-SRBC)ペレット250μlに免疫細胞培地4.75mlを加え、B-SRBCを静かに再懸濁させ(5%B-SRBCストック)、4℃で保存する。
2.1 新しいエッペンドルフ管(eppendorf tube)に5%B-SRBCストック1mlを分取する。
2.2 8000rpm (6800rcf)のパルススピンで微量遠心管中のB-SRBCをペレット化し、上澄みを除去し、このペレットをpH 7.4のPBS 1.0mlに再懸濁させ、遠心処理を繰り返す。
2.3 洗浄を2回繰り返し、次いでB-SRBCペレットをpH 7.4のPBS 1.0mlに再懸濁させ、最終濃度を5%(v/v)とする。
2.4 10mg/mlストレプトアビジンストック10μlを加え、混合し、室温で20分間回転させる。
2.4.1 ペプチドプラーク検定に関して、使用するストレプトアビジンの量は2.4に記載のとおりだが、組換えCD45RB-hisを使用したプラーク検定では、ビオチン化したSRBCに10倍のストレプトアビジンをロードした。したがってステップ2.4では10mg/mlスルホNHSビオチンを100μl使用した。
2.5 洗浄ステップ2.0および3.0を繰り返し、pH7.4のPBS 1mlにSA-SRBCを再懸濁させる(5%(v/v))。
3.1 ペプチドプラーク検定では、ビオチン化したペプチドをSRBC上に以下の濃度でコーティングした。
3.2 組換えCD45RB-hisプラーク検定に関しては、計量していないビオチン化CD45RB-HisでSA-SRBCをコーティングした。コーティングは、赤血球凝集のないポイントにB-CD45RB-hisを最大限にコーティングすることによって決定した。
3.3 混合し、室温で20分間回転させる。
3.4 SRBCのストレプトアビジンコーティングのステップ2.0および3.0と同様にSRBCを洗浄する。
3.5 CD45RB被覆SRBCをRPMI(+l0%FCS)に再懸濁させ、最終濃度を5%(v/v)とする。
4.1 PBS 40μlを含む新しい1.5mlエッペンドルフ管に5%SA-SRBC10μlを加える。
4.2 それぞれのSRBC試料に45μg/mlのMu抗CD45RB抗体(m6G3)を加える。
4.3 室温で25分間回転させる。
4.4 PBS 100μlで細胞を3回洗浄する。
4.5 PBS 50μlに細胞を再懸濁させ、Alexa 488に接合させたGt抗ヒトIgG Fc抗体に加える。
4.6 室温で25分間回転させる。
4.7 PBS 100μlで細胞を1回洗浄し、PBS 10μlに再懸濁させる。
4.8 清潔なガラス顕微鏡スライドに、染色された細胞10μlを滴下し、それぞれの試料にカバーガラスを被せ、蛍光の下で観察し、0〜4の任意のスケールで採点する。
5.1 さまざまな検定によって、関心の免疫グロブリンを分泌しているB細胞クローンを含むと以前に識別された単一のミクロ培養ウェルの内容物を採取する。
5.2 100〜1000μlのピペットマン(pipetman)を使用し、37C RPMI(+10%FCS)を加えることによって、ウェルの内容物を回収する。ピペットの内容物を2〜3回上下させて細胞を再懸濁させ、次いで新しい1.5mlエッペンドルフ管に移す(最終体積は約500〜700μ1)。
5.3 微量遠心管に入れて1500rpm(240rcf)で2分間、室温で遠心処理し、次いで管を180度回転させ、1500rpmで2分間再び遠心処理する。凝固した培地を取り出す。
5.4 10〜100μlのピペットマンを使用して内容物を静かに数回上下させることによって、免疫細胞をRPMI(10%FCS)100μlに再懸濁させる。
5.5 ステップ3.0と同様に遠心処理し、洗浄培地を捨て、無傷の細胞ペレットを残す。
5.6 ステップ5.4および5.3を繰り返す。
5.7 RPMI(FCS)60μlに細胞を再懸濁させ、洗浄した免疫細胞を使用するまで氷上で保存する。
6.1 一定量の凍結モルモット血清(補体の給源)(-70℃)を氷上で解凍する。RPMI(FCS)中で4倍ストックを作製する。
6.2 RPMI(FCS)中で増強血清(enhancing sera)の4倍ストック(1:900)を調製する。濃度は、それぞれのロットに対して経験的に決定しなければならない。
7.1 前もってガラススライドを用意する。2インチ×3インチのガラススライドにシリコーンのエッジを適用し、室温で一晩硬化させる。使用前に、SigmaCoat約5μlを用いてスライドのガラス面を均一に拭き、乾燥させ、次いで強く拭く。
7.2 細胞試料60μlに、CD45RB-His被覆SRBC(5%v/vストック)、4倍補体ストックおよび4倍増強血清ストックをそれぞれ60μl加える。混合物の総体積は240μlである。
7.3 ガラススライド上にこの混合物を滴下する。それぞれのスポットは約3〜5μlである。気泡が入らないようにする。
7.4 希釈していないパラフィン油をスポットの上に広げる。スポットが表面を突破しないよう十分な油があるようにする。
7.5 スライドを37℃で少なくとも45分間インキュベートする。プラークが見られない場合、さらに15分間インキュベートして再び調べる。
7.6 これらの単一細胞をできるだけ早く顕微操作する。
抗体の発現および精製
単形質細胞の分離の後、mRNAを抽出し、逆転写酵素PCR法を実施して、cDNAを得た。可変H鎖およびL鎖をコードしているcDNAをポリメラーゼ連鎖反応を使用して特異的に増幅した。可変H鎖領域をIgG2発現ベクター中にクローン化した。このベクターは、pcDNA3.1+/Hygro(Invitrogen、カナダ、オンタリオ州Burlington)のマルチクローニングサイトにヒトIgG2の定常ドメインをクローン化することによって生成した。可変L鎖領域をIgK発現ベクター中にクローン化した。このベクターは、pcDNA3.1+/Neo(Invitrogen、カナダ、オンタリオ州Burlington)のマルチクローニングサイトにヒトIgKの定常ドメインをクローン化することによって生成した。H鎖およびL鎖発現ベクターを次いで、70%融合性ヒト胚性腎臓293細胞の60mm皿に共リポフェクションし、トランスフェクション細胞に、元の形質細胞と全く同じ特異的を有する組換え抗体を24時間分泌させた。HEK293細胞から上澄み(3mL)を採取し、ヒトIgGを特異的に検出するサンドイッチELISAを用いて無傷の抗体の分泌を証明した。組換え抗体の特異性は、実施例2で説明した溶血プラーク検定の間に形質細胞を分離するのに使用する抗原へのELISAでの組換え抗体の結合によって評価した。
H鎖およびL鎖可変領域の配列決定
関心の抗体を発現しているB細胞クローンを識別、分離した(実施例4)後、シグナルペプチドを含むL鎖およびH鎖可変領域をPCR法を使用して増幅し、次いでその配列を決定した。
採集物2
この実施例では、XenoMouse K522-2の採集物について述べる。XemoMouse系統IgG2のこのマウス(XMG2)をアジュバントを用いずに以下の抗原で腹膜内(IP)またはBIPで免疫した:CEM T細胞、完全長CD45RBで一過的にトランスフェクションしたHEK-293細胞、または完全長CD45RBで一過的にトランスフェクションしたTSA細胞。免疫スケジュールは以下のとおりである。
1)CEM細胞、B/IP、18日
2)CD45RBを一過的に発現しているTSA、B/IP、1日
3)CD45RBを一過的に発現しているTSA、B/IP、14日
4)CD45RBを一過的に発現している293細胞、IP、56日
5)CD45RBを一過的に発現している293細胞、IP、102日
採集物4
この実施例では、XenoMouse K522-1の採集物について述べる。このXMG2マウスを、抗原であるCEM T細胞、完全長CD45RBで一過的にトランスフェクションしたHEK-293細胞、または完全長CD45RBで一過的にトランスフェクションしたTSA細胞で、BIPまたはIPによって免役した。アジュバントTiterMax classic(CytRx Corporation、米ジョージア州Norcross)を使用した。免疫スケジュールは以下のとおりである。
1)CEM細胞、B/IP、18日
2)CD45RBを一過的に発現しているTSA、B/IP、1日
3)CD45RBを一過的に発現しているTSA、B/IP、14日
4)TiterMax Classic中で乳化した親和性精製したCEM溶解産物、IP、45日
5)CD45RBを一過的に発現している293細胞、IP、56日
6)CD45RBを一過的に発現している293細胞、IP、114日
7)CD45RBを一過的に発現している293細胞、IP、135日
採集物6
この実施例では、XenoMouse L576-6の採集物について述べる。このXMG2マウスを、ヒトCD45RB特異的ペプチド、すなわち18量体、20.1、20.2、20.3および46量体で、BIPによって免疫した。完全フロイントアジュバント(CFA、Sigma、カナダ、オンタリオ州Oakville)および不完全フロイントアジュバント(IFA、Sigma、カナダ、オンタリオ州Oakville)を使用した。免疫スケジュールは以下のとおりである。
1)5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、CFA、1日
2)5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、14日
3)5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、29日
4)5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、43日
5)5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、57日
採集物7
この実施例では、XenoMouseマウスL577-2およびL577-14の採集物について述べる。これらのXMG2マウスを、CD45RB特異的ペプチド、すなわち18量体、20.1、20.2、20.3および46量体、ならびにCEM T細胞で、BIPによって免疫した。完全フロイントアジュバント(CFA)および不完全フロイントアジュバント(IFA)を使用した。免疫スケジュールは以下のとおりである。
1)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、CFA、1日
2)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、14日
3)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、27日
4)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、41日
5)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、56日
6)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、117日
7)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、131日
8)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、145日
9)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、158日
10)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、173日
採取日:177日
採集物8
この実施例では、XenoMouseマウスL577-6およびL577-8の採集物について述べる。これらのXMG2マウスを、CD45RB特異的ペプチド、すなわち18量体、20.1、20.2、20.3および46量体、ならびにCEM T細胞で、BIPによって免疫した。完全フロイントアジュバント(CFA)および不完全フロイントアジュバント(IFA)を使用した。免疫スケジュールは以下のとおりである。
1)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、CFA、1日
2)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、14日
3)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、29日
4)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、43日
5)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、57日
6)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、108日
7)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、122日
8)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、136日
9)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、149日
10)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、202日
採集物9
この実施例では、XenoMouseマウスL577-3およびL577-5の採集物について述べる。これらのXMG2マウスを、CD45RB特異的ペプチド、すなわち18量体、20.1、20.2、20.3および46量体、ならびにCEM T細胞で、BIPによって免疫した。完全フロイントアジュバント(CFA)および不完全フロイントアジュバント(IFA)を使用した。以下の免疫スケジュールを使用した。
1)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、CFA、1日
2)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、14日
3)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、27日
4)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、41日
5)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、55日
6)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、106日
7)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、120日
8)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、134日
9)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、147日
10)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、204日
採集物10
この実施例では、XenoMouseマウスL577-11およびL577-15の採集物について述べる。これらのXMG2マウスを、CD45RB特異的ペプチド、すなわち18量体、20.1、20.2、20.3および46量体、ならびにCEM T細胞で、BIPによって免疫した。完全フロイントアジュバント(CFA)および不完全フロイントアジュバント(IFA)を使用した。以下の免疫スケジュールを使用した。
1)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、CFA、1日
2)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、14日
3)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、27日
4)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、41日
5)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、55日
6)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、106日
7)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、120日
8)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、134日
9)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、147日
10)CEM T細胞(107細胞)および5ペプチド(各2μg)+T細胞エピトープ、IFA、218日
採集物11
この実施例では、XenoMouseマウスL574-1およびL574-14の採集物について述べる。これらのXMG2マウスを、CEM T細胞でBIPによって免疫した。完全フロイントアジュバント(CFA)および不完全フロイントアジュバント(IFA)を使用した。以下の免疫スケジュールを使用した。
1)CEM T細胞(107細胞)+T細胞エピトープ、CFA、1日
2)CEM T細胞(107細胞)+T細胞エピトープ、IFA、14日
3)CEM T細胞(107細胞)+T細胞エピトープ、IFA、28日
4)CEM T細胞(107細胞)+T細胞エピトープ、IFA、42日
5)CEM T細胞(107細胞)+T細胞エピトープ、IFA、56日
6)CEM T細胞(107細胞)+T細胞エピトープ、PBS、206日
採取日:210日
組換え抗体の特性評価
実施例1から13に記載したとおりに識別し生産した組換え抗CD45RB抗体を再分析して、それらの結合特異性を確認した。組換え抗体の特異性を表18にまとめた。マウスモノクローナル抗CD45RB抗体6G3の結合特異性も表18にまとめた。
T細胞に対する抗CD45RB抗体の結合のFACS分析
以前に、これらの抗体が、CD45RBペプチド、およびヒトCD45RBを一過的に発現している細胞に特異的に結合することを示した。しかし、どちらの場合も、CD45RB抗原は、構造ならびにグリコシル化において違いを示すかもしれない。したがって、ナイーブおよび活性化正常ヒトT細胞に対する抗体の結合を分析することは興味深い。さらに、ナイーブおよび活性化マカクT細胞に対する結合を分析することも興味深い。したがって、以下のように、ナイーブおよび活性化正常ヒトおよびマカクT細胞に抗体を結合させた。
1.0 フィコール勾配遠心法(400×g、30分)を使用して、末梢血単核細胞(PBMC)または活性化PBMCをRBCから分離した。
2.0 200,000個のPBMCを、96ウェルプレート中の特定の濃度の一次抗体100μlで7分間染色した。
3.0 次いで、プレートを400gで3分間遠心処理し、上澄みを除去した。
4.0 細胞ペレットを、二次抗体(5μg/ml)100μlで7分間再懸濁させた。
5.0 プレートを再び遠心処理し、上澄みを除去し、細胞を、FACS緩衝液(PBS、2%FCS)400μlの入ったFACS管に移した。
6.0 BD FACSCalibur上で試料を分析した。
ヒト末梢血単核細胞上のCD45RBおよびL-セレクチンのダウンレギュレーション
免疫細胞に結合したときに抗体が生物学的効果を示すかどうかを判定するため、CD45RBおよびL-セレクチンをダウンレギュレートする能力を以下のように分析した。
1.0 末梢血単核細胞(PBMC)を培養した。96ウェルU底マイクロ培養プレート1ウェルあたり0.2mLの培地(10%FBS、RPMI、2mMグルタミン、ペニシリン/ストレプトマイシン)の中に0.3×106個の細胞を入れて培養した。
2.0 ダウンレギュレーションに対しては、検定の開始時に、培養物を、抗CD45RB抗体(1mg/mL)またはアイソタイプ対応対照で処理した。
3.0 5%CO2空気混合物を含む加湿されたインキュベータの中で培養物を37℃で24時間インキュベートした。
4.0 24時間後、細胞を洗浄し、抗CD45RB抗体(1mg/mL)とともに4℃で20分インキュベートし、フルオロクロムで標識したヤギ抗ヒトIgGを細胞ペレットに加え、4℃でさらに20分インキュベートし、またはPE標識した抗ヒトCD62L 20μlとともにインキュベートした。
5.0 染色された細胞を洗浄し、0.5%パラホルムアルデヒド中で固定してから回収した。
6.0 FACS VantageまたはFACSCalibur上でデータを取得し、分析データをCell Questソフトウェアで処理した。
ヒト末梢血単核細胞の抗CD3抗体誘導増殖およびサイトカイン放出に対する抗CD45RB抗体の効果
抗CD45RB抗体はさらに、T細胞増殖およびサイトカイン産生に対するそれらの効果を決定すると特徴づけられた。それらの生物学的効果を判定するため、これらの抗体を、PBMNC上の抗CD3抗体とともに、以下で説明するとおりにインキュベートした。
Claims (17)
- CD45RBに結合する単離モノクローナル抗体であって、配列番号55、59、63、67、71、75、79、83、87、91、95、99、103、107、111、115、119、123、127、131、135および139からなるグループから選択されたH鎖アミノ酸配列またはこれらのフラグメントを含むモノクローナル抗体。
- 配列番号57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、97、101、105、109、113、117、121、125、129、133、137および141からなるグループから選択されたL鎖アミノ酸配列を含む、請求項1に記載の単離モノクローナル抗体。
- キメラ抗体である、請求項1に記載の抗体。
- 完全ヒト抗体である、請求項1に記載の抗体。
- 薬剤として許容される担体または希釈薬と結合している、請求項1に記載の抗体。
- 治療薬に結合している、請求項1に記載の抗体。
- 前記治療薬が毒素である、請求項6に記載の抗体。
- 前記治療薬が放射性同位体である、請求項6に記載の抗体。
- CD45RBの発現に関連した細胞増殖を抑制する方法であって、CD45RBを発現する細胞を、有効量の請求項1に記載の抗体で処理することを含む方法。
- in vivoで実施される、請求項9に記載の方法。
- 哺乳動物に対して実施される、請求項10に記載の方法。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項11に記載の方法。
- 前記有効量が0.001〜50mg/kgである、請求項10に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、哺乳動物の細胞、組織または器官の拒絶を含む疾患に罹患している、請求項11に記載の方法。
- 前記哺乳動物が自己免疫疾患に罹患している、請求項11に記載の方法。
- 配列番号55、59、63、67、71、75、79、83、87、91、95、99、103、107、111、115、119、123、127、131、135および139からなるグループから選択されたH鎖アミノ酸配列またはこれらのフラグメントを含む単離ヒト抗CD45RB抗体をコードするヌクレオチド配列を含む単離核酸分子。
- 前記抗CD45RB抗体が、配列番号57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、97、101、105、109、113、117、121、125、129、133、137および141からなるグループから選択されたアミノ酸配列をコードするL鎖核酸を含む、請求項16に記載の単離核酸分子。
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