JP2005523745A - プラズマフェレシスまたは交換輸血を用いる免疫剤治療 - Google Patents

Abstract

外来性エピトープを含む免疫治療剤を投与する前に、被験体の血液における抗体または補体のレベルを、プラズマフェレシスまたは交換輸血によって低下させることによって、治療剤に対する被験体の免疫応答を減少させる。被験体における免疫治療剤に対する免疫応答を低減させる方法であって、該被験体に該免疫治療剤が投与され、ここで、該免疫治療剤は、該被験体に対して外来性の少なくとも１つのエピトープを含み、該方法は、該免疫治療剤の投与前に、該被験体を血液抗体枯渇技術で処置して該被験体の血液中の抗体または補体のレベルを低下させる工程であって、該血液抗体枯渇技術は、プラズマフェレシスおよび交換輸血からなる群より選択される、工程、を包含する、方法が提供される。

Description

（発明の分野）
本発明は、免疫原性の治療剤を利用する治療の分野にある。

（発明の背景）
治療用ウイルス（殺腫瘍性（ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ）ウイルスまたは遺伝子治療用の複製不能ウイルス）は、癌または他の疾患の治療のために用いられる（Ｋｉｒｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，８ （４）（Ｓｕｐｐｌ．）：Ｓ６８−Ｓ７３，２００２ （総説））。治療用細菌（例えば、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）は、抗癌剤としても使用されている（Ｌｏｗ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１７：３７−４１，１９９９；Ｂｅｒｍｕｄｅｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｄｅｖｅｌ．，５ （２）：１９４−１９９，Ｍａｒｃｈ ５，２００２）。

生じる一つの課題は、これらのアプローチの効力に対する免疫応答の効果である（Ｚｗｉｅｂｅｌ，Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２８ （４）：３３６−３４３ ａｔ ３３８，ｌｅｆｔ ｃｏｌｕｍｎ，２００１）。薬剤に依存して、抗体はすでに存在しているもの（例えば、ほとんどのアデノウイルス株に対する場合）であり得る。１つの研究において、アデノウイルス５型に対する中和抗体は、正常のコントロールの６０％において見いだされ、前立腺癌患者の４６％において見いだされる（Ｃｈｅｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，１１：１５５３−１５６７，２０００）。ニューカッスル病ウイルス（Ｐｅｃｏｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．，Ｉｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｍａｙ １，２００２予定）または水疱性口内炎ウイルスのような他の薬剤について、北アメリカの一般集団においてすでに存在する抗体は珍しい。しかし、これらの薬剤の使用は、免疫応答を哺乳動物において誘発する（Ｐｅｃｏｒａ，前出）。

コブラ毒因子は、補体の効果をブロックすることによって感染を容易にし、それにより免疫応答を誘発するために使用されてきた（Ｉｋｅｄａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７４（１０）：４７６５−４７７５，２０００）。しかし、コブラ毒の使用は、現実の解決策ではない。

Ｃｈｅｎ（前出）は、すでに存在するアデノウイルスに対する抗体を議論する中で、アフィニティカラムを用いて治療前に患者からアデノウイルス抗体のレベルを低減させる免疫アフェレシス技術を提案する。しかし、この方法は、高価であり煩雑である。このことは、部分的に、ウイルス特異的な抗原を含むカラムを生成しなければならない。これはまた、補体を除去できない。このことはまた、治療においてネガティブな影響を有し得る。免疫アフェレシスは、免疫吸着としても知られており、プラズマフェレシスとは異なる （Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，”Ｐｌａｓｍａｐｈｅｒｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｍｍｕｎｏａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｕｒｒｅｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｍｅｄｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ’ｌ，５３（Ｓｕｐｐｌ．６４）：Ｓ６１−Ｓ６５，１９９８）。

ウイルス療法に対して患者における抗体応答を低減させる他の手段は、免疫抑制剤の使用である（Ｔｏｄｏ，ｅｔ ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．，１０：２８６９−２８７８，１９９９）。このアプローチの２つの主な欠点は、（１）癌処置の場合（Ｔｏｄｏ，前出）において有利な細胞性免疫が減少すること、および（２）複製能を有する薬剤自体または日和見感染のいずれかによって正常な組織の感染の危険性が増加することである。

プラズマフェレシスは、多数の自己免疫疾患を処置するために使用されている（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，前出）。そうであるにもかかわらず、免疫応答から生じる、ウイルスベースの治療の効力が減少するという問題は、何年にもわたって認識されてきた（Ｓｃｈｕｌｉｃｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９９ （２）：２０９−２１９，１９９７）が、プラズマフェレシスは、このような治療の有効性を増強するためにはこれまでには応用されていない。

（発明の要旨）
本発明は、免疫治療剤が投与されるべき被験体において、その免疫治療剤に対する免疫応答を低減する方法を提供する。ここで、この免疫治療剤は、少なくとも１つの被験体にとって外来性のエピトープを含む。この方法は、プラズマフェレシスおよび交換輸血からなる群より選択される血液抗体枯渇技術でこの被験体を処置して、この薬剤を投与する前にこの被験体の血液中の抗体または補体のレベルを低減する工程を包含する。

本発明の方法は、治療の間の免疫応答を低減させるための技術を提供するが、他方、免疫抑制または免疫アフェレシスに関連する欠点のいくつかを回避することによって、免疫治療剤を利用する、既存の治療アプローチを改善する。

本発明にしたがって、免疫原性であり、そして外来性のエピトープを含む、任意の従来の治療剤が利用され得る。本発明の１つの実施形態において、治療剤は、治療用ウイルス（例えば、殺腫瘍ウイルス、アデノウイルスまたはヘルペスウイルス）である。本発明に従って利用され得る殺腫瘍ウイルスの例としては、ニューカッスル病ウイルス、水疱性口内炎ウイルス、およびレオウイルスが挙げられる。殺腫瘍ウイルスの使用は、ＷＯ００／６２７３５およびＷＯ０１／１９３８０において開示され、この内容は、本明細書において参考として援用される。アデノウイルスは、遺伝子治療において使用されてきており、殺腫瘍ウイルスもまた然りである。別の実施形態において、治療剤は細菌性である。本発明に従って利用され得る細菌性治療剤の例としては、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ細菌、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ細菌またはＢｉｆｉｄｏ細菌が挙げられる。Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍは、好ましいＳａｌｍｏｎｅｌｌａ細菌である。

血液における抗体および補体のレベルの低減の後、抗体および補体のレベルが徐々に回復する。このような回復のための時間量は、多数の因子（個々の患者およびプラズマフェレシス手順によって除去される抗体及び補体の量を含む）に依存する。本発明に従って、プラズマフェレシスと治療剤の投与との間の時間量は、血液において抗体または補体のレベルがプラズマフェレシスの前のレベルより低くなるように選択される。一般に、プラズマフェレシスは、治療剤の投与前、２４時間まで、好ましくは６時間まで、最も好ましくは１時間までに行われる。

本発明に従って、プラズマフェレシスの任意の従来方法が利用され得る。プラズマフェレシスは、血液の流体部分である血漿が、細胞分離器によって血球から除去されるプロセスである。細胞分離器は、遠心分離または濾過によって作用する。ついで、この細胞は、プラズマフェレシスを受ける人物に戻され、他方、血漿は、代表的には捨てられ、そして他の流体（例えば、異なる供給源からの新たな血漿または５％アルブミンなどのコロイド溶液または合成血漿エキスパンダー）によって置き換えられる（Ｒｅｉｍａｎｎ ａｎｄ Ｍａｓｏｎ，１９９０）。用語「血漿交換」とは、より多い血漿容積（＞１Ｌ）の除去により一般的に適用されるが、用語プラズマフェレシスもまた、この情況において使用される（Ｒｅｉｍａｎｎ ａｎｄ Ｍａｓｏｎ，Ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．，１６：３−１０，１９９０（総説）；およびＰａｔｔｅｎ，ｉｎ ＣＲＣ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２３（２）：１４７−１７５））。本明細書において使用される「プラズマフェレシス」は、プラズマフェレシスおよび血漿交換の両方を包含する。

抗体を除去することに加えて、プラズマフェレシスはまた、補体のレベルを低減させるために用いられ得る。補体はまた、治療用ウイルスまたは細菌を用いた治療に対してネガティブな影響を有し得る。濾過によるプラズマフェレシスの場合、患者の自分の血漿は、免疫グロブリンの範囲のサイズの血漿タンパク質の枯渇の後に戻され得る。血漿フィルターを用いるプラズマフェレシスは、よりコスト効果が高いという点（患者の自分の血漿に戻され得るから）、そして不全症候群を生じないという点（例えば、凝固因子の枯渇；Ｓｉａｍｉ，ｅｔ ａｌ．，ＡＳＡＩＯ Ｊ．，４６：３８３−８，２０００）において遠心分離を用いるプラズマフェレシスよりもさらなる利点を有する。

本発明の１つの実施形態において、プラズマフェレシスは、（ａ）細胞および血漿を含む血液を、被験体から得る工程であって、この血漿は、抗体または補体を含む、工程；（ｂ）この血液を遠心分離して、この血漿を、この細胞から単離する工程；および（ｃ）この細胞をこの被験体に戻す工程を包含する。

別の実施形態において、このプラズマフェレシスは、（ａ）細胞および血漿を含む血液を、被験体から得る工程であって、この血漿は、抗体または補体を含む、工程；（ｂ）この血液を、第一のフィルターで濾過してこの血液を該細胞から分離する工程；および（ｃ）この細胞をこの被験体に戻す工程、を包含する。好ましくは、血漿を細胞から分離するための使用される第一のフィルターは、０．１−０．６μｍのカットオフサイズを有する。被験体に血漿を戻すより具体的な実施形態は、工程（ｂ）において単離された血漿を、第二のフィルターで濾過して抗体または補体を、この血漿から枯渇させる工程；およびこの枯渇された血漿をこの被験体に戻す工程、を包含する。好ましくは、この第二のフィルターは、６０キロダルトン−１５０キロダルトンの分子量カットオフを有する。

本発明に従って、免疫剤を投与する前に被験体の血液において抗体または補体のレベルを低減させるために、交換輸血を行うための任意の従来方法（例えば、Ｌｏｏａｒｅｅｓｕｗａｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｑ．Ｊ．Ｍｅｄ．，Ｎｅｗ Ｓｅｒｉｅｓ ７５，Ｎｏ．２７７，ｐｐ．４７１−４８１，Ｍａｙ １９９０；およびＡｄａｍｋｉｎ，Ｐｅｄ．Ｃｌｉｎ．Ｎ．Ａｍｅｒ．，２４（３）：５９９−６０４，Ａｕｇｕｓｔ １９７７を参照）が使用され得る。交換輸血において、患者の血液が除去され、そして同時に、ドナー血液に置き換えられる（Ｓａｃｈｅｒ ＲＡ ａｎｄ Ｌｅｎｅｓ ＢＡ，１９８１）。交換輸血は、プラズマフェレシスのような血液、血漿を交換または置換する方法である。プラズマフェレシスとな異なり、他の血液成分もまた、この方法において交換される。交換輸血は、それぞれ、血液において高いレベルのビリルビンを有する新生児を処置するために使用されており （Ｐｅｔｅｒｅｃ，ｉｎ Ｐｅｒｉｎａｔａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，２２（３）：５６１−５９２，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ １９９５）、そしてビリルビンおよびマラリア寄生虫を取り除く目的でマラリアを処置するために（Ｐｈｉｌｌｉｐｓ ｅｔ ａｌ．，Ｒｅｖ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．，１２（６）：１１００−１１０８，１９９０；Ｅｌｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｏｔ．Ｍｅｄ．Ｊ．，３５：１４８−１４９，１９９０）使用されてきた。交換輸血により免疫剤に対する抗体を低減させる例を、実施例３および４に示す。本明細書において表現「交換輸血」および「血液交換」は同義である。

本発明に従って、被験体は、ヒトまたは非ヒト哺乳動物であり得る。

本明細書において記載される本発明は、以下の実施例を参照してよりよく理解される。この実施例は、例示の目的のみであり、そして特許請求の範囲に規定される本発明を制限しない。以下の実施例において、使用されるＮＤＶは、三連のプラーク精製（ＰＰ）弱毒化（亜病原性）型のＭＫ１０７系統のニューカッスル病ウイルスであり、これは、国際特許公開ＷＯ００／６２７３５（２０００年１０月２６日公開；Ｐｒｏ−Ｖｉｒｕｓ，Ｉｎｃ．）においてよりよく記載される。ＷＯ００／６２７３５の内容のすべては、本明細書により、本明細書において参考として援用される。

（実施例１）
癌患者は、３治療単位（ｃｏｕｒｓｅ）の弱毒化ニューカッスル病ウイルスを受ける。これらの３回の第一の治療単位の各々は、１週間あたり３回の処置を２週間与える合計６回の処置に続き、１週間の安静期間からなる。各々の治療単位について、１０億ＰＦＵ／ｍ^２の第一投与量に続いて、１２０億ＰＦＵ／ｍ^２および２４０億−１２００億ＰＦＵ／ｍ^２の４回の投与量が与えられる。患者の第四の治療単位の前に、患者がウイルスに対する抗体を発生させる時点で、患者は、濾過または遠心分離を用いてプラズマフェレシスを受ける。プラズマフェレシスを完了する１時間以内に、患者は１０億−１２０億ＰＦＵ／ｍ^２の投与量で処置される。翌週以内に、患者は、１２０億−１２００億ＰＦＵ／ｍ^２の範囲のさらなる２投与量を受ける。

（実施例２）
癌患者は、弱毒化ニューカッスル病ウイルスの３治療単位を受ける。これらの３回の第一の治療単位の各々は、１週間あたり３回の処置を２週間与える合計６回の処置に続き、１週間の安静期間からなる。各々の治療単位について、３時間にわたる２４０億ＰＦＵ／ｍ^２の第一投与量に続いて、１２００億ＰＦＵ／ｍ^２の５回の投与量が与えられる。患者の第四の治療単位の前に、患者がウイルスに対する抗体を発生させる時点で、患者は、濾過または遠心分離を用いてプラズマフェレシスを受ける。プラズマフェレシスを完了する１時間以内に、患者は２４０億−１２００億ＰＦＵ／ｍ^２の投与量で３時間にわたり処置される。翌週以内に、患者は、１２００億ＰＦＵ／ｍ^２の範囲のさらなる２投与量を受ける。

（実施例３）
免疫前のマウスの交換輸血は、血清中のニューカッスル病ウイルスＰＰＭＫ１０７に対する中和抗体のレベルを低減させる
（免疫化）
雌性Ｃ３Ｈ／ＨｅｎマウスにｌＥ＋０９ ＰＦＵのＰＰＭＫ１０７（ＷＯ ００／６２７３５に記載される弱毒化ニューカッスル病ウイルス）を１週間に１回少なくとも４週間にわたり静脈内投与して血清中にＰＰＭＫ１０７に対して中和抗体を生成し、従ってＰＰＭＫ１０７に対して予備免役した。

（カテーテル移植）
マウスをケタミン／キシラジン麻酔を行い、そしてその手術部位を剃った（首および胸郭の領域；首の後ろ）。カテーテルの移植を、動脈の内腔にポリエチレンチューブを挿入させて頸動脈にアクセスさせ、定位置に管を維持するために、３つの絹の結紮糸で付着させることによって行った。カテーテルの首尾よい移植の後、そのカテーテルを肩胛骨の間で露出させた。キャップする前に、カテーテルにヘパリン溶液を満たした。血液交換を行う前に、手術から回復させるために３日以上にわたりマウスに与えた。

（血液交換）
血液交換のための準備において、ヘパリン添加した未処理のドナー血液を、同じ系統のマウスから採集した（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎマウス）。

マウスへのドナー血液の注入のための方法として、マウス（特に、尾）を熱ランプに対して暴露させることによって交換を開始して、静脈注射カテーテルチューブの挿入のための準備において尾静脈を拡張させた。尾が尾静脈注射の準備ができるやいなや、カテーテルを尾錠脈に挿入し、ついで、マウスをケタミン／キシラジンで麻酔した。マウスを固定したとき、留置カテーテルはキャップをとり、そして内容物が吸引された。カテーテルを、血液収集管までつながるチューブに接続した。血液が流れ始めると同時に（血液凝固物またはヘパリン残留物をいずれも取り除くために、１−２滴を滴下させた）、所望のサンプル（採血前サンプル）をまず収集して、その後、実際の血液交換プロセスを始めた。２．５分ごとに約１．０ｍｌの血液を、徐々にドナー血液を注入することによって交換を始めた。１ｍｌの注入が完了した後（所望される血液サンプルに依存する）血液を、連続的な様式で収集した。合計で５−６ｍｌのドナー血液を注入し、そして４．５−５．５ｍｌの血液を、マウスから採りだした。血液交換の完了後、カテーテルをヘパリンでフラッシュし、その後、栓をした。血清を、低速度遠心分離の後に各血液サンプルから収集した。

（マウス血清サンプルにおけるＰＶ７０１中和抗体に関するマイクロプレートアッセイ）
抗ＰＰＭＬ１０７血清（アッセイコントロール）を、アッセイ緩衝液（４．５ ｇ／Ｌグルコース、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２％ ＦＢＳ、２ ｍＭ Ｌ−グルタミン、１００ Ｕ／Ｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ）中に、９６プレートの２連の列の１２カラムにわたって、連続希釈した（第一のカラムにおいて１：３６．７５で始まり、１：３．５の希釈を行う。）。サンプル（未知）を、５６℃で３０分にわたって熱不活化し、そのプレートの第一カラムにおいて（３連で）１：１０．５に希釈し、ついでアッセイ緩衝液中にプレートにわたり１：３．５で希釈した。希釈を行った後の合計サンプル容量は、７５μｌ／ウェルであった。ＰＰＭＫ１０７を、２．８Ｅ＋５ＰＦＵ／ｍｌの濃度に希釈した。４０μｌを各ウェルに加えた（１１，２００ＰＰＵ／ウェル）。プレートを２時間にわたり（３７℃で）インキュベートして、抗体（存在する場合）をウイルスに接触させた。ついで、ＨＴ１０８０ヒト線維肉腫細胞を各ウェルにくわえ（５０００細胞を含む４０μｌ）、そしてプレートを６８−７２時間インキュベートさせた。細胞生存性について定量評価をＭＴＳを用いて行った．４０μｌのＭＴＳを各ウェルに加え、そしてプレートを２時間（３７℃で）インキュベートした。シグナル量は、ウェル中の生存細胞の数に正比例する。反応を、２０μｌの１０％ＳＤＳ溶液を各ウェルに加えることによって停止させた。吸光度値を、マイクロプレート吸光度計において４９０ｎｍで読んだ。各希釈系列を、４つのパラメータロジスティクス（４−ＰＬ）フィットを用いてプロットし、そしてＴＣ５０の中点を計算した。抗ＰＰＭＫ１０７血清（アッセイコントロール）を用いて、アッセイにおけるプレート間の再現性を示した。各サンプルについてのＴＣ５０を報告させて、サンプルにおけるＰＰＭＫ１０７中和抗体における相対的相違を実証した。

（結果）
９匹のマウスに血液交換を行った。図１には、ＰＰＭＫ１０７に対する平均抗体力価を示す。交換１ｍｌあたり、抗体力価がベースラインから減少し、そして約４ｍｌの交換の後より低いレベルに達した。このことは、血漿を含む血液を、検出できない抗体力価を有するドナーからの等価の血液成分に交換することにより、血清において測定される抗体のレベルが減少させることができることを実証する。

ＰＰＭＫ１０７に対する中和抗体が発生した後の反復した治療単位について、ＰＰＭＫ１０７を用いたＣ３Ｈ／Ｈｅｎのような免疫能力を有するマウスにおける腫瘍に対する静脈内治療は、この交換輸血の後、より有効になる。マウスに、ＰＰＭＫ１０７（ｌＥ＋０８ＰＦＵから１Ｅ＋０９ＰＦＵまでの、１匹のマウスあたりの用量範囲）を、血液交換を行った後すぐに与える。さらなる血液交換および投与を繰り返した後のすぐの次の血液交換を、最大の抗腫瘍効果を達成するために繰り返す。

（実施例４：血清中のニューカッスル病ウイルスＰＰＭＫ１０７）に対する抗体の中和に対する意識のある予備免役したマウスにおける交換輸血の効果）
この実施例において、カテーテルを頸動脈および頸静脈に挿入した。この技術の利点は、マウスが意識があることであり、このことはしばしば便利である。

（免疫化）
雌性Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎマウスに、ＰＰＭＫ１０７（ＷＯ００／６２７３５に記載される弱毒化ニューカッスルウイルス）を１Ｅ＋０９ＰＦＵの用量で、１週間に１回少なくとも４週間にわたり静脈投与して、血清中にＰＰＭＫ１０７に対する中和抗体を生成させ、そして従ってＰＰＭＫ１０７に対して予備免役させた。

（カテーテル移植）
マウスをケタミン／キシラジンで麻酔し、その手術部位を剃った（首および胸郭の領域；首の後ろ）。カテーテルの移植を、頸動脈および頸静脈の内腔にそれぞれポリエチレンチューブおよびシラスティックチューブを挿入させて頸動脈および頸静脈にアクセスさせ、定位置にカテーテルを維持するために、３つの絹の結紮糸で付着させることによって行った。カテーテルの首尾よい移植の後、そのカテーテルを肩胛骨の間で露出させた。キャップする前に、カテーテルにヘパリン溶液を満たした。血液交換を行う前に、手術から回復させるために３日以上にわたりマウスに与えた。

（血液交換）
血液交換のための準備において、ヘパリン添加した未処理のドナー血液を、同じ系統のマウスから採集した（Ｃ３Ｈ／Ｈｅｎマウス）。

留置カテーテルのキャップをとり、そして内容物を吸飲した後、交換を始めた。動脈カテーテルを、血液収集管につながるチューブに接続した。静脈カテーテルを、血液交換のためのドナー血液を含むシリンジにその後につながるチューブにつないだ。動脈カテーテルからの血液の流れ始めると同時に（血液凝固物またはヘパリン残留物をいずれも取り除くために、１−２滴を滴下させた）、所望のサンプル（採血前サンプル）をまず収集して、その後、実際の血液交換プロセスを始めた。２．５分ごとに約１．０ｍｌの血液を、徐々にドナー血液を注入することによって交換を始めた。１ｍｌの注入が完了した後（所望される血液サンプルに依存する）血液を、連続的な様式で収集した。合計で５−６ｍｌのドナー血液を注入し、そして４．５−５．５ｍｌの血液を、マウスから採りだした。血液交換の完了後、カテーテルをヘパリンでフラッシュし、その後、栓をした。血清を、低速度遠心分離の後に各血液サンプルから収集した。

（前の手順を受けた８匹のマウスのうち、４匹が手術により死亡した。時間上の制約から、尾静脈のカテーテル挿入を、頸静脈／頸動脈カテーテル挿入の代わりに使用した。それにもかかわらず、他の同時進行中の計画において同様の手術がうまくいっていることから、頸静脈／頸動脈のカテーテル挿入はなお有用である。なぜなら、これは、意識のある被験体の処置を可能にするからである）。

この実施例において記載される手術を受けた動物からの血液は、抗体力価について試験しなかった。しかし、この血液は、実施例３に記載される、マウス血清サンプル中のＰＶ７０１中和抗体についてのマイクロプレートアッセイにしたがって試験することができる。

血液交換の後のマウスにおける抗ＰＰＭＫ１０７中和抗体の平均力価である。

Claims (24)

1. 被験体における免疫治療剤に対する免疫応答を低減させる方法であって、該被験体に該免疫治療剤が投与され、ここで、該免疫治療剤は、該被験体に対して外来性の少なくとも１つのエピトープを含み、該方法は、
   該免疫治療剤の投与前に、該被験体を血液抗体枯渇技術で処置して該被験体の血液中の抗体または補体のレベルを低下させる工程であって、該血液抗体枯渇技術は、プラズマフェレシスおよび交換輸血からなる群より選択される、工程、
   を包含する、方法。
2. 前記血液抗体枯渇技術がプラズマフェレシスである、請求項１に記載の方法。
3. 前記血液抗体枯渇技術が交換輸血である、請求項１に記載の方法。
4. 前記免疫治療剤が治療用ウイルスである、請求項１に記載の方法。
5. 前記ウイルスが殺腫瘍（ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ）ウイルスである、請求項４に記載の方法。
6. 前記殺腫瘍ウイルスがニューカッスル病ウイルスである、請求項５に記載の方法。
7. 前記殺腫瘍ウイルスが水疱性口内炎ウイルスである、請求項５に記載の方法。
8. 前記殺腫瘍ウイルスがレオウイルスである、請求項５に記載の方法。
9. 前記ウイルスがアデノウイルスまたはヘルペスウイルスである、請求項４に記載の方法。
10. 前記免疫治療剤が細菌性である、請求項１に記載の方法。
11. 前記細菌性治療剤がＳａｌｍｏｎｅｌｌａである、請求項１０に記載の方法。
12. 前記免疫治療剤がＳａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍである、請求項１１に記載の方法。
13. 前記細菌性治療剤がＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍである、請求項１０に記載の方法。
14. 前記細菌性治療剤がＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍである、請求項１０に記載の方法。
15. 前記プラズマフェレシスは、前記免疫治療剤の投与前２４時間までに行われる、請求項２に記載の方法。
16. 前記プラズマフェレシスは、前記免疫治療剤の投与前６時間までに行われる、請求項１５に記載の方法。
17. 前記プラズマフェレシスは、前記免疫治療剤の投与前１時間までに行われる、請求項１６に記載の方法。
18. 前記プラズマフェレシスは、
    （ａ）細胞および血漿を含む血液を、前記被験体から得る工程であって、該血漿は、抗体または補体を含む、工程；
    （ｂ）該血液を遠心分離して、該血漿を、該細胞から単離する工程；および
    （ｃ）該細胞を該被験体に戻す工程、
    を包含する、請求項２に記載の方法。
19. 前記プラズマフェレシスは、
    （ａ）細胞および血漿を含む血液を、該被験体から得る工程であって、該血漿は、抗体または補体を含む、工程；
    （ｂ）該血液を、第一のフィルターで濾過して該血液を該細胞から分離する工程；および
    （ｃ）該細胞を該被験体に戻す工程、
    を包含する、請求項２に記載の方法。
20. 前記第一のフィルターは、０．１−０．６μｍのカットオフサイズを有する、請求項１９に記載の方法。
21. さらに、
    前記工程（ｂ）において単離された血漿を、第二のフィルターで濾過して抗体または補体を、該血漿から枯渇させる工程；および
    該枯渇された血漿を該被験体に戻す工程、
    を包含する、請求項１９に記載の方法。
22. 前記第二のフィルターは、６０キロダルトン−１５０キロダルトンの分子量カットオフを有する、請求項２１に記載の方法。
23. 前記被験体がヒトである、請求項１に記載の方法。
24. 前記被験体が非ヒト哺乳動物である、請求項１に記載の方法。

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