JP2005513104A - テンパミン(tempamine)組成物および使用方法 - Google Patents
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Abstract
Description
従って、本発明の目的は、細胞酸化的損傷によって引き起こされる状態を処置するために有効な組成物を提供することである。
(I.定義)
用語「窒素酸化物」とは、本明細書中において、安定な窒素酸化物フリーラジカル、その前駆物質、およびその誘導体を記載するために使用され、この誘導体は、酸素原子がヒドロキシル基で置換されており水素ハライド形態で存在する、対応するヒドロキシルアミン誘導体を包含する。本明細書中に記載される窒素酸化物において、窒素酸化物の不対電子は、部分的に安定である。なぜなら、その窒素核が、強い電子ドナーで置換されている2つの炭素原子に結合されているからである。N−O結合の酸素における部分的負電荷により、この2つの隣接炭素原子は、一緒になって、上記窒素核上の不対電子を局在化させる。窒素酸化物は、複素環式構造または直鎖状構造のいずれかを有し得る。基本的基準は、安定なフリーラジカルである。
ピペリジン窒素酸化物は、化学的に安定なn,n−二置換>NO*ラジカルである。図1A〜1Cは、テンポの化学構造(図1A)、テンポールの化学構造(図1B)およびテンパミンの化学構造(図1C)を示す。これらの環状ラジカルは、細胞透過性であり、非毒性であり、かつ非免疫原性である(Afzal,V.ら、Invest.Raiol.19:549〜552(1984);Ankel,E.G.ら、Life Sci.40:495〜498(1987);DeGraff,W.G.ら、Environ.Mol.Mutagen.19:21〜26(1992))。抗酸化剤のうち、窒素酸化物は、主に酸化剤であり還元剤ではないその作用様式が、普通ではない(Mitchell,J.B.ら、Arch.Biochem.Biophys.298:62〜70(1991);Samuni,A.ら、Free Radical.Res.Commun.12〜13:187〜194(1991))。これらはまた、少なくとも部分的に再生される能力を有する(同書)。窒素酸化物は、以下のいくつかの機構を介してその抗酸化剤活性を発揮する:還元金属イオンのSOD模倣酸化、超原子価金属の還元、およびラジカル鎖反応の中断(Mitchell,J.B.ら、Tempol.Arch.Biochem.Biophys.298:62〜70(1991);Samuni,A.ら、Free Radical.Res.Commun.12〜13:187〜194(1991);Krishna,M.C.ら、Proc Natl Acad Sci U S A.89:5537〜5541(1992))。
本発明を支持して実施される研究において、テンパミンは、抗増殖活性または細胞抗増殖活性を示すか否かを決定するために、インビトロで試験された。実施例1に記載されるように、テンパミンの細胞傷害性が、3つの細胞株(MCF−7(ヒト乳腺癌)、M−109S(ドキソルビシン感受性ヒト乳癌)、およびM−109R(ドキソルビシン耐性ヒト乳癌))に関して決定された。細胞増殖に対する遊離テンパミンの効果が、実施例1Bに記載されるようなメチレンブルーアッセイによって決定された。
従って、本発明は、1つの局面では、酸化的損傷によって引き起こされる状態を処置するに有効な組成物を包含する。この組成物は、薬学的に受容可能な媒体中に、細胞の酸化的損傷または酸化的ストレスに関連した症状を逆転または改善するに有効な量のテンパミンを含む。図11に関して以下に記載されるように、遊離形態のテンパミンは、他のニトロキシドと同様に、短い血中循環寿命(t1/2)を有する。それゆえ、テンパミンがその血中循環寿命を延長するために処方されるテンパミン組成物を提供することが望ましい。適切な(例えば、この化合物の周囲にポリマー鎖または脂質鎖のコーティングを提供する)種々の処方物が存在する。本発明の好ましい実施形態では、テンパミンは、リポソーム中に封入される。ここで記載される研究では、リポソームに封入されたテンパミンを特徴付けして、テンパミンのカプセル化パーセント、テンパミンのインビトロ放出速度、およびインビトロ血漿安定性を決定した。なお他の研究では、このリポソームのインビボ血漿クリアランス、組織分布および放出速度を決定した。
本発明の組成物における使用に適切なリポソームとしては、小胞形成脂質から主に構成されるリポソームが挙げられる。小胞形成脂質は、リン脂質によって例示され、水中で自然に二重層の小胞を形成する。このリポソームはまた、この脂質二重層に組み込まれた他の脂質を含み得、その疎水性部分は、内部の二重層膜の疎水性領域と接触しており、ヘッド基部分は、二重層膜の外部の極性表面を向いている。
本発明において、リポソームを調製する好ましい方法は、遠隔装填による。本発明を支持して実施された研究において、例示的な窒素酸化物テンパミン(tempamine)が、当該分野で記載され(米国特許第5,192,549号)、そして実施例2に記載されるように、イオン濃度勾配に対して遠隔装填することによって予め形成されたリポソーム内に装填された。遠隔装填手順において、薬物は、他の装填方法で達成され得るよりもかなり高い濃縮レベルで、リポソーム内水性区画に蓄積する。
2MLV=多層膜小胞、LUV=大きい単層膜小胞。
(A.分配係数)
テンパミンのn−オクタノール/水分配係数(Kp)を、以前に記載された手順(Samuni,A.ら、Free Radic Biol Med.、22:1165(1997))に従って測定して、リポソームにおけるその相分布を概算した。分配係数を、2.0mMおよび20.0mMのテンパミン濃度で、そして異なる濃度の硫酸アンモニウム(20〜400mM)で、種々のpHレベル(pH4.0、7.0および10.6)で測定した。各相の容積は、1mlであった。結果を表2に示す。
(異なるpHでのn−オクタノール/水相間のテンパミン分布)
リポソーム中にカプセル化されたテンパミンの量を、実施例3に記載されるように、EPRを使用して決定した。図7から理解され得るように、カプセル化されたテンパミンのEPRプロフィール(実線)は、水溶液中の同一の量の遊離テンパミン(点線)よりも、かなり広く、そしてより低い強度であった。データを、表3に要約する。
(硫酸アンモニウム勾配ありなしでのリポソーム調製物におけるテンパミン(tempamine)(TMN)のパーセントカプセル化)
2「+」は、上欄の項目が、含まれたことを示す。
3計算の例:
1.テンパミン含まず=3.8−2.4=1.4;
2.TMNリポソーム(クエンチされず)=8.7−1.4=7.3;
3.パーセントカプセル化=100×7.3/8.7×100=84.1;
クエンチング因数=7.4/2.4=3。
21日の期間にわたって、タマゴホスファチジルコリン(EPC)または水素化ダイズホスファチジルコリン(HPC)のいずれかから構成されるリポソームの懸濁物からのテンパミンの放出を、実施例4に記載されるようにモニターした。テンパミンの水性外部媒体への放出を、3つの温度(4℃、25℃、および37℃)で決定した。EPCから構成されるリポソームについての結果を、図9Aに示し、HPCから構成されるリポソームについての結果を、図9Bに示す。
生理食塩水およびヒト血漿におけるリポソームの安定性を、ヒト血漿または0.15MのNaClを用いてのいずれかで、リポソームの懸濁物を10mMの初期濃度から1mMのテンパミンまで希釈することによって決定した。希釈したリポソームを、37℃で15時間インキュベートした。パーセントカプセル化テンパミンを、実施例3に記載されるように決定した。コントロールリポソーム懸濁物を、0.15MのNaClで1mMテンパミンまで希釈して、即時(時間0)測定した。
現在までに、テンパミンがまた抗悪性腫瘍活性を有することは示されていなかった。インビボにおいて、テンパミンが首尾良くリポソーム内にロードされ、保持され得るかどうかも不明である。遠隔性のローディングおよび保持は望ましい。なぜなら、遠隔性のローディングは閉じ込められた容量にほとんど無関係に、リポソーム内の水性相中に薬物の高い含量を達成するためである。高い薬物ローディングは、腫瘍において噴出および蓄積し得る小単層リポソーム(SUV)の使用を可能にする。この節において、テンパミンが抗悪性腫瘍活性を有し、SUV中にロードおよび保持され、インビボにおいて有効な腫瘍処置のための血液循環寿命を高め得ることを示す、本発明を指示して実施された研究が記載される。
リポソーム包括テンパミンおよび遊離テンパミンの薬物動態および生体分布を、健康なマウスおよび腫瘍を有するマウスにおいて決定した。実施例5に詳述されるように、正常BALB/cマウスおよび皮下にC26腫瘍細胞(106細胞/マウス)の移植片を有するBALB/cマウスに、静脈内注入により1kgあたり18mg(105μモル)のリポソーム包括テンパミンまたは遊離テンパミンを与えた。このリポソーム処方物は脂質標識を含み、リポソーム脂質の分布解析を可能にする。血中、および組織中のテンパミンレベルを、方法の節に記載するEPR技術を使用して測定した。
上記の考察のように、活性酸素種(ROS)は、細胞および組織に対して回復不能な損傷を引き起こし得る。多くの型の癌細胞は、異常な酸化剤レベルを有し(Wiseman,H.ら,Biochem.J.313:17−29(1996))、そして酸化剤−抗酸化剤不均衡と強く関連したいくつかの腫瘍としては、膀胱、血液、腸、乳房、結腸、直腸、肝臓、肺、腎臓、食道、卵巣、前立腺、および皮膚が挙げられる。癌細胞における、大量の活性酸素中間体の発生は、いくつかの腫瘍が変異し、抗蛋白分解酵素を阻害し、そして局所組織を損傷する能力に寄与し得、それにより腫瘍の異質性、浸潤および転移を促進する。従って、本発明は、細胞増殖により特徴付けられる状態の処置のため、テンパミン単独、または他の化学療法剤との組み合わせにおけるテンパミンの使用を検討する
炎症(慢性および急性の両方)は、ROSより生じる損傷と関連した別の症状である。急性炎症より生じる状態としては、UVが起こした皮膚損傷、非ステロイド性抗炎症剤が起こした潰瘍性大腸炎、ならびに細菌性肺損傷または腐食性肺損傷が挙げられる。慢性炎症プロセスが関わる症状の例は、表5に示す。
さらに別の局面において、本発明は、化学療法剤と組み合わせたテンパミンの投与を企図する。本発明を支持して実施された研究において、他の化学療法剤と相乗的に作用するテンパミンの能力が、証明された。ドキソルビシンは、モデルとなる化学療法剤として選択された。テンパミンによるドキソルビシン細胞傷害性の増強が、実施例1Aに記載されるように、3つの細胞株において試験された。実施例1Bに記載されるとおりの細胞傷害性アッセイが、使用された。細胞株の2つ、MCF−7およびM−109Sは、ドキソルビシン感受性株であり、1つの細胞株、M−109Rは、ドキソルビシン耐性であった。MCF−7株は、テンパミンに、より感受性である(100μMの75%の増殖抑制を引き起こした)が、しかしM−109S細胞よりは、ドキソルビシンに感受性でない。結果を表7に要約する。
種々の細胞株に対するドキソルビシンのIC50(μM)に対するテンパミン濃度の効果
以下の実施例は、本明細書中に記載される本発明をさらに例示し、そして本発明の範囲を限定する意図は全くない。
2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−4−アミノ−1−オキシル(4−アミノ−tempoと呼ばれるテンパミン)フリーラジカル、97%を、Aldrich(Milwaukee,WI,USA)より購入された。卵ホスファチジルコリン(EPCI)および水素化ダイズホスファチジルコリン(HPC)を、Lipoid KG(Ludwigshafen,Germany)から入手した。N−カルバミル−ポリ−(エチレングリコールメチルエーテル)−1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミントリエチルアンモニウム塩(2000PEG−DSPE)(このポリエチレン部分は、2000Daの分子量を有する)を、従来通り調製した。コレステロールを、Sigma(St.Louis,MO,USA)から入手した。Sephadex G−50を、Pharmacia(Uppsala,Sweden)から入手した。tert−ブタノ−ルを、BDH,Poole,UKから購入した。フルオレセインホスファチジルエタノールアミンを、Avanti Polar Lipids(Alabaster,AL,USA)から入手した。他の化学物質(緩衝液を含む)を、Sigmaから入手した。透析膜(透析チュービング−ビスキング(大きさ6−27/3インチ)を、Medicell International(London,UK)から入手した。の可能な最も低いレベルの全ての有機炭素および無機イオンを提供する、精製水(WaterPro PS HPLC/Ultrafilter Hybridモデル,Labconco,Kansas City,MO,USA)を、水に基づく全ての調製物において使用した。
(1.電子常磁性共鳴(EPR)測定)
EPR分光計測は、JES−RE3X EPR分光計(JEOL Co.,日本)(Fuchs,Jら、Free Radic.Biol.Med.,22:967−976(1997))を使用して、テンパミン(tempamine)濃度を検出するために採用した。サンプルを、シリンジによって、内径0.81mmおよび壁厚0.05mmのガス透析テフロン(登録商標)キャピラリーチューブ(Zeus Industrial Products,Raritan,NJ,USA)に抜き取った。キャピラリーチューブを、両端の解放した内径2.5mmの水晶管に挿入し、そしてEPR穴に配置した。EPRスペクトルを、中心場を329mT、100kHZ変調周波数、0.1mT変調振幅および非飽和マイクロウェーブパワーで記録した。EPR測定直前に、ローディングされたリポソームを、適したテンパミン濃度範囲(0.02〜0.1mM)になるよう0.15M NaClで希釈した。本実験は、空気下、室温で実施した。これは、テンパミンの活性を決定するための機能的なアッセイである。
全てのサイクリックボルタンメトリーを、−200mVと1.3Vとの間で実施した。
(A.遊離テンパミンのインビボ試験)
(細胞株および培養条件)
MCF−7(ヒト乳腺癌)、M−109S(ドキソルビシン感受性ヒト乳癌)およびM−109R(ドキソルビシン耐性ヒト乳癌)をRPIM培地(Biological Industries、Beit HaEmek、Israel)中に保持し、10%ウシ胎仔血清(FCS)を補った。細胞株は、37℃、湿潤5%CO2大気相の標準的培養条件下で維持した。
細胞増殖に対するテンパミンの影響を、メチレンブルーアッセイ(Horowitz,A.T.、Biochim Biophys Acta.1109:203(1992))によって決定した。簡単に、細胞を96ウエルプレート上に播種し(ウエルあたり6×103細胞の密度のMCF細胞ならびにウエルあたり1.5×103細胞の密度のM−109SおよびM−109R)、そして異なるテンパミン濃度で処理する前に24時間の間、成長させた。テンパミン(5×10−5〜4×10−4)の添加の後、細胞を4日間、培地を交換することなくRPMI+10%FCS中でインキュベートした。次に、細胞を2.5%グルタルアルデヒドで固定し、メチレンブルーで染色し、そして分光光度法的にアッセイした。
アポトーシスをフローサイトメトリー(FACScan)により評価した。1×106個の細胞を、培地から取り除き、PBSで洗浄し、そしてメロシアニン−540(Reid,Sら、J.Immunol.Methods 192:43(1996))で染色した。簡単に、細胞ペレットを、500μlのPBSで再懸濁した。1mg/ml溶液のメロシアニン−540の2.5μlを細胞に添加し、暗所、室温で2分間、インキュベートした。細胞を洗浄し、1mlのPBSに再懸濁し、そして直ちに、蛍光活性化細胞選別フローサイトメトリー(Vantage、Becton Dickinson、Runtherford、NJ、USA)を実行した。
(リポソーム調製)
(A.リポソーム形成)
リポソームを、脂質をtert−ブタノール中で溶かすことによって調製し(6個の処方物の各々において使用される脂質についての表1を参照のこと)、一晩、凍結乾燥した。乾燥脂質粉末を、硫化アンモニウム溶液(150mM)で再懸濁した。再水和を、基質脂質のTm(HPCについて52.2℃およびEPCについて−5℃(Marsh,D.、Chem.Phys.Lipids、57:109−120(1991))より上で実施した。再水和を、多層小胞(MLV)を形成するよう連続攪拌状況下で実施した。水和媒体の容量を、10%(w/v)脂質濃度を得るために調製した。大きな単層小胞(LUV)を、LiposoFast−Basic device(AVESTIN、Ottawa、ON、Canada)を使用して、0.1μmの孔サイズのフィルター(Poretics、Livermore、CA、USA)を通したMLVの抽出物によって調製した。調製におけるリポソームサイズの分布を、Coulter(Model N4 SD)submicron particle analyzerを使用して、光子相関分光学によって測定した。1200±200nmおよび100±10nmのサイズ分布を、それぞれMLVおよびLUVについて得た。本研究において使用されるリポソーム形態は、表1に要約する。
Amselemら(J.Liposome Res.、2:93−123(1992))の透析の手順を、利用した。簡潔には、この手順は、0.15M NaCl(pH=5.2)の100容量に対する2回の連続的な透析交換および0.15M KCl(pH=6.7)の100容量に対する第三の透析交換を使用した。硫酸アンモニウムを、100〜1000の範囲で外部媒体を越えてリポソームの内側に[(NH4)2SO4]の所望の勾配を与えるのに、十分な濃度で溶解した。
濃縮したテンパミンアルコール溶液(70%エタノール中に0.8mlの25mMテンパミン)を、10mlのリポソーム懸濁液に加えた。この最終溶液は、5.6%エタノールおよび2mMテンパミンを含んだ。ローディングを、マトリックス脂質のTm上で実施した。ローディングを、4℃で透析を使用する非カプセル化テンパミンの除去によって特定の時間で終えた。ローディングの有効性を、以下に記載するように決定した。
(テンパミンのパーセントカプセル化)
実施例2に従って調製されたリポソームの包括されたテンパミンの量を、以下の手順によって決定した。最初に、ローディング後リポソーム調製物におけるテンパミンの総量(TMNmix)を、測定した。次いで、フェリシアン化カリウム、遊離(非リポソームの)テンパミンのシグナルを除去するEPR広幅化薬剤の存在下での、ローディング後リポソーム調製物におけるテンパミンの量を、測定した。残ったシグナルは、リポソーム中のテンパミン(TMNliposome(quenched)のシグナルである。リポソーム内のテンパミン濃度が高い場合、このスペクトルを広げ、互いに近接したテンパミン粒子の間のスピン相互作用に起因するそのEPRシグナルのクエンチングを誘導した。次いで、ニゲリシン(nigericin)によってリポソームからテンパミンを放出した後のテンパミンの総量(TMNnigericin)を、測定した。このシグナルは、ローディングのために使用されるテンパミンの総量と同じであり(TMNnigericin=TMNtotal)、そして完全に脱クエンチされている。硫酸アンモニウム勾配を低下させ、そして全てのテンパミンを放出する場合、TMNliposome(not quenched)は、リポソームテンパミンのシグナルを表わす。
TMNliposomes(not quenched)=TMNnigericin−TMNfree (2)
パーセントカプセル化=100×TMNliposome(not quenched)/TMNnigericin (3)
クエンチング因子=TMNliposome(not quenched)/TMNliposome(quenched) (4)
このデータを、表3に示す。
(リポソームからのテンパミン放出)
上記のように調製された、卵子ホスファチジルクロリン(EPC)ベースのリポソームからおよび水素化ダイズホスファチジルクロリン(HPC)ベースのリポソームからのテンパミンの放出は、3つの異なる温度:4℃、25℃および37℃で21日間行われた。リポソーム分散媒体のpHは、約5.5であった。リポソーム懸濁液から、アリコートを、規定された時間でとり、そして非カプセル化テンパミンを、Sephadex−G50カラムを使用してゲルろ過によって除去した。リポソームを、試験管の中に置き、そして特定温度で保存した。
(リポソーム包括テンパミンのインビトロ試験)
(A.リポソーム調製)
立体的に安定化されたリポソームは、HPC:Chol:2000PEG−DSPE;54:41:5のモル比からなり、そして[3H]コレステロールエーテルの痕跡量(100μCi/800μmolリン脂質)を、Gabizonら(Cancer Res.、54:987(1994))によって記載されたように調製した。簡潔に、脂質成分を、tert−ブタノールに溶解し、次いで[3H]コレステロールエーテルを、加えた。「ドライケーク」を、一晩の凍結乾燥によって形成した。水和媒体は、0.25M硫酸アンモニウム(pH5.7)からなった。水和を、60℃(マトリックス脂質のTmより上)で力強いボルテックス下で実施した。リポソームを、高圧力噴出デバイス(Lipex Biomembranes、Vancouver、BC、Canada)を使用して細孔サイズ(0.4、0.2、0.1、0.08、0.05μm)を徐々に減少する二重ポリカルボネート膜を通して60℃での噴出によって縮小した。噴出されたリポソームを、4℃で0.15M NaClの100倍の容量(24時間にわたって4交換)に対して透析した。
Animal Breeding House of the Hebrew University(Jerusalem、Israel)を通じて得られた8〜12週齢のBALB/c雌マウスを、この研究全体を通して使用した。動物を、食物および水を自由に与えて、Hadassah Medical Centerに保管した。全ての手順は、Hebrew UniversityおよびHadassah Medical OrganizationのInstitutional Animal CareおよびUse Commiteeによって求められた基準に従った。各マウスの左側腹に腫瘍細胞(1×106C26細胞)の接種物の一つを皮下注入した。接種の後一週間、遊離形態のテンパミン0.36mg(2.1μmole)/マウス(18mg(105μmole)/kg体重)またはリポソーム包括テンパミンを、尾の静脈を通じて静脈内(i.v.)ボーラスによって注入した。脂質用量は、11mg(14.7μmole)/マウス(377mg(514μmole)/kg体重)であった。注入の1時間後、4時間後、8時間後、24時間後、および48時間で、この動物を、エーテル吸入を用いて麻酔し、眼の摘出によって出血させ、そして肝臓、肺、脾臓、腎臓および腫瘍の除去のため、直ちに屠殺した。各時間点は、3匹マウスからなった。血漿を、遠心分離によって分離した。
器官中の、全テンパミン濃度(カプセル化したおよび遊離型の)を測定するために、リポソームを2%Triton X−100(1:2、器官:Triton X−100溶液)中のPolytronホモジナイザー(Kinematica,Lutzern,Switzerland)における均質化によって可溶化した。脂質膜を破壊するために、均質化混合物を数回、冷却および加温した(Barenholz,Yら、LIPOSOME TECHNOLOGY,G.Gregoriadis(著)、第2版、第1巻、CRC Press、Boca Raton、527頁〜616頁(1993))。試験サンプル中で1%のTriton X−100にするために、血漿サンプルを2%のTriton X−100と1:1で混合し、そしてまた、数回、冷却および加温した。これらの条件は、インタクトのリポソームから、閉じ込めたテンパミン全ての放出を達成するために効果的である。
第F節で上記されるように調節したサンプルから、2連の100μlをSample Oxidizer(Model307、Packard Instrument Co.,Meridien,CT)で酸化させ、そして一晩冷暗所に置いた。その後、サンプルをβ−計数(KONTRON Liquid Scintillation Counter)によって測定した。
(関節炎の処置のためのテンパミン封入リポソーム)
(A.動物)
雌のLewisラット(160〜180g)を、Harlan SpragueDawley,Indianapolis,INから購入した。それらを制御された環境に収容し、標準げっ歯類用固形飼料および水を提供した。
リポソームを実施例5Aに記載のように調製した。
テンパミンを含まないリポソームまたはテンパミン封入リポソームを、Freundの完全アジュバント(最大膨張)の注射後22日目に、健常なラットおよび関節炎ラットに注射した。テンパミンを1.8mg/kg(10.5μmol/kg)の用量で投与した。注射されたリポソームのリン脂質濃度は、42mg/kg(56μmol/kg)であった。注射後4時間、24時間、48時間および72時間において、各試験グループ中の数匹のラットを屠殺し、そしてそれらの血漿、肝臓、腎臓、脾臓、および肺を、リポソームマーカー[3H]コレステリルヘキサデイルエーテル(全組織中)についてはSampleOxidiser(Model307,Packard Instrument Co.,Meriden,CT)を使用して、そしてテンパミン(リポソームを可溶化させるための2%のTritonの添加による組織ホモジネート中)についてはJES−RE3X EPR分光計(JEOL Co.,日本)を使用して試験した。皮膚および足を、リポソームマーカーの存在について試験した。結果を表6A−6Bに示す。
Claims (24)
- 細胞酸化損傷から生じる状態の処置のための組成物であって、薬学的に受容可能な小胞で投与されたテンパミンを含む、組成物。
- 前記薬学的に受容可能な小胞がリポソームである、請求項1に記載の組成物。
- 請求項2に記載の組成物であって、前記リポソームが、小胞形成脂質および約1〜20モルパーセントの間の親水性ポリマーで誘導された脂質から構成される存在する、組成物。
- 請求項3に記載の組成物であって、前記テンパミンが、一緒に封入されている対イオンの存在下での沈殿を達成するのに十分な濃度で前記リポソームの中に封入されている、組成物。
- 前記リポソームは、コレステロールをさらに含む、請求項3に記載の組成物。
- 前記小胞形成脂質が、水素付加ホスファチジルコリンである、請求項3に記載の組成物。
- 前記親水性ポリマーがポリエチレングリコールである、請求項3に記載の組成物。
- 前記対イオンが、硫酸である、請求項4に記載の組成物。
- 細胞に対する酸化損傷によって引き起される状態を処置する方法であって、該方法は、薬学的に受容可能な小胞中の治療有効量のテンパミンを細胞に投与する工程を包含する、方法。
- 請求項9に記載の方法であって、前記投与する工程が、リポソームに封じ込まれた形態でにテンパミンを投与する工程を包含する、方法。
- 請求項10に記載の方法であって、(i)小胞形成脂質、(ii)約1〜20の間のモルパーセントの親水性ポリマーで誘導化された脂質から構成される、リポソームを調製する工程をさらに包含する、方法。
- 請求項11に記載の方法であって、前記調製する工程は、同時に封じ込められた対イオンの存在下の調製を達成するのに十分な濃度で前記リポソーム中に前記テンパミンを封じ込める工程を包含する、方法。
- 請求項11に記載の方法であって、前記調製する工程が、前記小胞形成脂質水素付加ホスファチジルコリンから構成されるリポソームを調製する工程をさらに包含する、方法。
- 請求項11に記載の方法であって、前記調製する工程が、コレステロールを含むリポソームを調製する工程をさらに包含する、方法。
- 請求項11に記載の方法であって、前記調製する工程が、前記親水性ポリマーがポリエチレングリコールであるリポソームを調製する工程をさらに包含する、方法。
- 請求項9に記載の方法であって、化学療法剤を同時投与する工程をさらに包含する、方法。
- 請求項16に記載の方法であって、前記同時投与する工程は、親水性ポリマーで誘導化された小胞形成脂質リポソームに封じ込まれた第2の薬剤を同時投与する工程を包含する、方法。
- 請求項16に記載の方法であって、前記第2の薬剤が、ドキソルビシンアナログ、ダウノルビシンアナログ、シスプラチンアナログ、タキソールアナログ、およびカンプトテシンアナログからなる群より選択される、方法。
- 化学療法活剤の化学療法活性を増強するための方法であって、化学療法剤で処置される被験体にテンパミンを投与する工程を包含する、方法。
- 前記投与する工程が、リポソームに封じ込まれたテンパミンを投与する工程を包含する、請求項19に記載の方法。
- 前記化学療法剤が、リポソームに封じ込まれた形態で投与される、請求項19に記載の方法。
- 請求項20に記載の方法であって、前記リポソームが、以下:(i)小胞形成脂質、(ii)約1〜20の間のモルパーセントの親水性ポリマーで誘導化された脂質から構成される、方法。
- 請求項20に記載の方法であって、前記テンパミンが、一緒に封入されている対イオンの存在下での沈殿を達成するのに十分な濃度で前記リポソームの中に封入されている、方法。
- 請求項19に記載の方法であって、前記投与する工程は、アポトーシス性細胞死の数の増加を提供する、方法。
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