JP2005512089A - 血液成分の分離方法及び装置 - Google Patents
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Abstract
Description
式中、rは粒子の半径であり、
ρpは粒子の密度であり、
ρmは液体媒体の密度であり、
ηは媒体の粘度であり、さらに、
gは重力加速度又は遠心加速度である。
ストークスの方程式では、粒子の半径が2乗に累乗されるが、粒子の密度は累乗されないので、その密度ではなく、細胞の粒径がその沈降速度に大きく影響する。このように、粒子が同じような密度を有する場合、遠心水簸時には大きい方の粒子がチャンバ内に残り、他方で小さい方が放出される理由が説明される。
1.アフェレーシス処理から残留物を入手し、遠心分離によって白血球(WBC)を分離及び回収し、さらにヘマトクリット値を5〜20%に調整する。
2.この産物の処理前産物試料を入手し、それに「前」と標示を付け、フロリダ州マイアミ市のCoulter Corporation社から入手したCoulter Automated Cell Counterを使用して、この試料を(3重反復試験で)分析する。
3.3.51mLの分離チャンバ内部で細胞負荷(load)を実現するのに必要な産物の容積を計算する。
4.産物の適正容積を150mLの移変え容器に移し換える。
5.ヒト血清アルブミン又はヒドロキシエチルデンプンを含有する希釈液を調製し、50mLを150mLの移換え容器に移し換え、残部を第2移換え容器に移し換える。
6.入口ポンプループ、除去ポンプループ(内径0.112センチメートル(0.044インチ)管を使用)、出口管路、及び分離チャンバからなる管使い捨てセットを準備する。これらの要素は、ポンプループ44、赤血球ループ46、入口管路28、除去された赤血球用の出口管路30、及び図1のチャンバ18に対応する。
7.除去ポンプの出口を画分回収器に取り付け、5mLのポリプロピレン試験管中に400〜500μLの画分を回収するように設定する。
8.「出口」と標示された600mLの移換え容器に分離チャンバ出口からの出口管路を取り付ける。
9.管セットに調製した希釈液を注入する。
10.4mL/分の流量及び2400rpmの遠心器速度で細胞産物を分離チャンバ中に充填する。
11.細胞を分離チャンバ中に充填している間に、チャンバ出口を介して流出する液体及び細胞を移換え容器中に回収する。
12.50mLの希釈液で管と分離チャンバ内部の細胞とを洗浄する。
13.入口ポンプを停止し、事前に画定した時間の長さの間、分離チャンバ内部の細胞を沈降させる。
14.除去ポンプを使用して1mL/分の流量で細胞を分離チャンバの底から除去し、画分回収器を使用して小量のアリコートの細胞を回収する。
15.一旦、すべての細胞を分離チャンバから取り除いたら、画分回収を中断する。
16.「出口」と標示した移換え容器中及び試験管中の液体と細胞の重さを記録する。
17.CELL−DYN 4000 Systemを使用して「前」及び「出口」試料を分析すると共に、すべての試験管のアリコートも分析する。
Claims (30)
- 少なくとも第1及び第2粒子を有する血液産物を、流体チャンバにその入口を介して充填する段階と、
前記流体チャンバ中の前記充填された血液産物に低密度の流体を追加する段階と、
前記流体チャンバ中の前記粒子をそれらの沈降速度に従って沈降させる段階と、
より大きな沈降速度を有する前記第1又は第2粒子の少なくとも一方を前記流体チャンバの前記入口を介して除去して、前記第1及び第2粒子の他方を前記流体チャンバ中に残す除去する段階と、を含む血液産物を分別する方法。 - 血液産物がすべて分別されてしまうまで、充填する段階と、追加する段階と、沈降させる段階と、除去する段階とを反復する段階をさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記低密度の流体がタンパク質を含有する、請求項1に記載の方法。
- 前記低密度の流体が沈降液を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記第1及び第2粒子の他方を前記流体チャンバから除去する段階と、
前記第1及び第2粒子の他方を回収する段階とをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記回収する段階の前に、前記第1及び第2粒子の他方を濃縮する段階をさらに含む、請求項5に記載の方法。
- 少なくとも白血球及び赤血球を含有する血液産物を流体チャンバに充填する段階と、
前記赤血球の連銭形成を助長し、かつそれらの沈降速度を増大させるために前記充填された血液産物に低密度の流体を追加する段階と、
遠心力下で前記赤血球を前記白血球から沈降させる段階と、
前記沈降させた赤血球を前記白血球から除去する段階と、を含む赤血球を白血球から除去する方法。 - 前記充填する段階が、前記流体の入口を介して充填する段階を含み、さらに
前記除去する段階が、前記沈降された赤血球を前記流体チャンバの前記入口を介して除去する段階を含む、請求項7に記載の方法。 - 前記流体が、赤血球の連銭形成を助長するためにタンパク質を含有する、請求項7に記載の方法。
- 前記流体がヒドロキシエチルデンプンを含む、請求項7に記載の方法。
- 沈降によって第1及び第2粒子を分離する方法であって、
供給源から、前記第1及び第2粒子を含有する流体を供給する段階と、
回転するための遠心器ロータ上に流体チャンバを取り付ける段階と、
前記供給源からの前記流体を前記流体チャンバ中に充填する段階と、
前記チャンバを回転する段階と、
前記粒子の沈降速度を増大させるために低密度の流体を追加する段階と、
前記第1及び第2粒子を沈降させる段階と、
増大した沈降速度を有する前記粒子を除去する段階と、を含む方法。 - 前記供給源のすべての流体が空になるまで、充填する段階と、回転する段階と、追加する段階と、沈降させる段階と、除去する段階とを反復する段階をさらに含む、請求項11に記載の方法。
- 前記流体が沈降液である、請求項11に記載の方法。
- 前記流体がヒドロキシエチルデンプンである、請求項11に記載の方法。
- 少なくとも第1及び第2粒子を有する流体の供給源と、
低密度の流体供給源と、
入口を有する流体チャンバと、
粒子と前記低密度の流体を有する前記流体供給源を前記流体チャンバの前記入口に流体連結する第1導管と、
前記流体チャンバから除去された第1粒子を収容するために、前記流体チャンバの前記入口に流体連結された除去導管と、
前記除去された第1粒子を収容するために、前記除去導管に連結された除去容器と、を備える、血液産物中の第2粒子から第1粒子を除去するシステム。 - 前記流体チャンバの出口と、
前記流体チャンバの前記出口に流体連結する粒子濃縮管路と、
前記流体チャンバの前記出口を介して流れる粒子を回収するために、前記粒子濃縮管路に流体連結する粒子回収容器と、をさらに備える、請求項15に記載のシステム。 - 前記流体チャンバの前記出口に流体連結する流体出口管路と、
前記流体チャンバの前記出口から流出する流体を回収するために、前記流体出口管路に流体連結する流体回収容器とをさらに備える、請求項16に記載のシステム。 - 前記流体チャンバ出口を介して流出する流体から回収するために、前記流体チャンバの前記出口と、前記粒子濃縮管路と、流体出口管路とに流体連結する、粒子を分離するための分離容器をさらに備える、請求項17に記載のシステム。
- 分離するべき粒子の供給源に連結するようになされた第1継ぎ手と、
低密度の流体の供給源に連結するようになされた第2継ぎ手と、
前記第1及び第2継ぎ手に流体連結された第1導管と、
前記第1導管に流体連結された流体チャンバであって、
入口と、
出口と、
前記入口と出口の間に延在する平滑な内部面を有する壁と、
前記壁中の最大断面積であって、前記壁が、前記最大断面積から前記入口に向かって、かつ前記最大断面積から前記出口に向かって先細りする、最大面積とをさらに備える流体チャンバと、
前記流体チャンバの前記出口に流体連結する粒子濃縮器と、を備える使い捨て粒子分離システム。 - 前記流体チャンバの前記入口に流体連結された、粒子を収容するための除去導管をさらに備える、請求項19に記載の使い捨て粒子分離システム。
- 前記流体チャンバの前記入口に前記第1導管を流体連結し、かつ前記流体チャンバの前記入口に前記除去導管を流体連結するための3方向コネクタをさらに備える、請求項20に記載の使い捨て粒子分離システム。
- 前記流体チャンバの前記入口と前記3方向コネクタとに連結された入口導管をさらに備える、請求項21に記載の使い捨て粒子分離システム。
- 前記除去導管に流体連結された除去回収容器をさらに備える、請求項20に記載の使い捨て粒子分離システム。
- 前記粒子濃縮器に流体連結された流体回収容器と、
前記粒子濃縮器に流体連結された粒子回収容器と、をさらに含む、請求項19に記載の使い捨て粒子分離システム。 - 前記分離するべき粒子が、白血球のサブセットに分離するべき白血球を含む、請求項19に記載の使い捨て粒子分離システム。
- 前記除去された粒子が赤血球を含む、請求項20に記載の使い捨て粒子分離システム。
- 白血球及び赤血球を有する白血球産物を白血球のサブセットに分離する方法であって、
前記白血球産物を、流体チャンバにその入口を介して充填する段階と、
前記白血球産物に低密度の流体を追加する段階と、
前記白血球産物中の前記白血球及び赤血球を前記流体チャンバ中で沈降させる段階と、
前記赤血球を前記白血球から分離するために、沈降された赤血球を前記流体チャンバの前記入口を介して除去する段階と、
前記分離された白血球を回収する段階と、を含む方法。 - 前記除去する段階の後で、水簸によって前記白血球を白血球サブセットに分離する段階をさらに含む、請求項27に記載の方法。
- 前記分離する段階時に、前記流体チャンバに追加的な低密度流体を追加する段階をさらに含む、請求項28に記載の方法。
- 前記流体チャンバの前記出口を介して、前記分離された白血球サブセットを除去する段階と、
前記除去された分離した白血球サブセットを粒子濃縮器に供給する段階と、
前記粒子濃縮器中で前記白血球サブセットから流体を分離する段階と、
前記望ましい白血球サブセットを回収する段階と、をさらに含む、請求項28に記載の方法。
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