JP2005505286A5

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Publication number: JP2005505286A5
Application number: JP2003534559A
Authority: JP
Filing date: 2002-10-10
Publication date: 2006-01-05
Anticipated expiration: 2022-10-10

Claims

配列番号１に実質的に類似のＭｅｔ−ＮＳ３−ＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ−ＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む核酸であって、前記ポリペプチドはＮＳ５Ｂタンパク質を産生するように自己プロセシングするのに十分なプロテアーゼ活性を有しており、前記ＮＳ５Ｂタンパク質は酵素的に不活性であることを特徴とする前記核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号２のコード配列に実質的に類似していることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号１のポリペプチドをコードすることを特徴とする請求の範囲第１項に記載の核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号２、配列番号３、配列番号１０または配列番号１１のコード配列であることを特徴とする請求の範囲第３項に記載の核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号２または配列番号３のコード配列であることを特徴とする請求の範囲第３項に記載の核酸。
前記核酸がヒト細胞において前記ヌクレオチド配列から前記ポリペプチドを発現し得る発現ベクターであることを特徴とする請求の範囲第１項〜第５項のいずれか１項に記載の核酸。
ヒト細胞において配列番号１に実質的に類似のＭｅｔ−ＮＳ３−ＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ−ＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂポリペプチドを発現し得る遺伝子発現カセットを含む核酸であって、前記ポリペプチドはＮＳ５Ｂタンパク質を産生するように自己プロセシングし得、前記ＮＳ５Ｂタンパク質は酵素的に不活性であり、前記発現カセットが
ａ）前記ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列に転写的にカップリングしているプロモーター、
ｂ）前記ヌクレオチド配列に機能的にカップリングしている５’リボソーム結合部位、
ｃ）前記ヌクレオチド配列の３’末端に連結しているターミネーター、及び
ｄ）前記ヌクレオチド配列に機能的にカップリングしている３’ポリアデニル化シグナル
を含むことを特徴とする前記核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号２、配列番号３、配列番号１０または配列番号１１に実質的に類似していることを特徴とする請求の範囲第７項に記載の核酸。
前記核酸が更に選択マーカー、複製起点、第１アデノウイルスホモロジー領域、及び前記発現カセットに隣接する第２アデノウイルスホモロジー領域を含むシャトルベクターであり、前記第１ホモロジー領域は塩基対約１〜４２５の野生型アデノウイルス領域の少なくとも右端に実質的に相同の塩基対を少なくとも約１００個有し、前記第２ホモロジー領域はＡｄ５の塩基対約３５１１〜５７９２の野生型アデノウイルス領域または別のアデノウイルスの対応領域の少なくとも左端に実質的に相同の塩基対を少なくとも約１００個有することを特徴とする請求の範囲第８項に記載の核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号１のポリペプチドをコードすることを特徴とする請求の範囲第９項に記載の核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号２であることを特徴とする請求の範囲第９項に記載の核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号３、配列番号１０または配列番号１１であることを特徴とする請求の範囲第９項に記載の核酸。
前記核酸がヒトに投与するのに適したプラスミドであり、更に原核複製起点及び選択マーカーをコードする遺伝子を含むことを特徴とする請求の範囲第８項に記載の核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号１のポリペプチドをコードすることを特徴とする請求の範囲第１３項に記載の核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号２、配列番号３、配列番号１０または配列番号１１のコード配列であることを特徴とする請求の範囲第１４項に記載の核酸。
前記ヌクレオチド配列が配列番号２または配列番号３のコード配列であることを特徴とする請求の範囲第１４項に記載の核酸。
前記プロモーターがヒト前初期サイトメガロウイルスプロモーター（イントロンＡ）であり、５’−リボソーム結合部位が配列番号１２からなり、前記３’ポリアデニル化がウシ成長ホルモン（ＢＧＨ）ポリアデニル化シグナルであることを特徴とする請求の範囲第１４項に記載の核酸。
前記核酸が、選択マーカー、複製起点、及びＥ１欠失、Ｅ３欠失及び発現カセットを含む組換えアデノベクターゲノムを含むアデノウイルスゲノムプラスミドであることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の核酸。
前記核酸が、選択マーカー、複製起点、及び
ａ）Ａｄ５またはＡｄ６のいずれかに対応する塩基対約１〜塩基対約４５０の第１アデノウイルス領域、
ｂ）前記第１領域に連結した、Ｅ１平行またはＥ１逆平行方位の前記遺伝子発現カセット、
ｃ）前記発現カセットに連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３５１１〜塩基対約５５４８またはＡｄ６に対応する塩基対約３５０８〜塩基対約５５４１の第２アデノウイルス領域、
ｄ）前記第２領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約５５４９〜塩基対約２８１３３またはＡｄ６に対応する塩基対約５５４２〜塩基対約２８１５６の第３アデノウイルス領域、
ｅ）前記第３領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３０８１８〜塩基対約３３９６６またはＡｄ６に対応する塩基対約３０７８９〜塩基対約３３７８４の第４アデノウイルス領域、及び
ｆ）前記第４領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３３９６７〜塩基対約３５９３５またはＡｄ６に対応する塩基対約３３７８５〜塩基対約３５７５９の第５アデノウイルス領域
を含むアデノウイルスゲノムプラスミドであることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の核酸。
前記第１領域がＡｄ５に対応し前記第２領域がＡｄ５に対応し、前記第３領域がＡｄ５に対応し、前記第４領域がＡｄ５に対応し、前記第５領域がＡｄ５に対応することを特徴とする請求の範囲第１９項に記載の核酸。
前記プロモーターがヒト前初期サイトメガロウイルスプロモーターであり、前記５’−リボソーム結合部位が配列番号１２からなり、前記３’ポリアデニル化がＢＧＨポリアデニル化シグナルであることを特徴とする請求の範囲第２０項に記載の核酸。
前記発現カセットがＥ１逆平行方位にあり、前記ヌクレオチド配列が配列番号２、配列番号３、配列番号１０または配列番号１１であることを特徴とする請求の範囲第２１項に記載の核酸。
前記第１領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応し、前記第２領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応し、前記第３領域がＡｄ６に対応し、前記第４領域がＡｄ６に対応し、前記第５領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応することを特徴とする請求の範囲第１９項に記載の核酸。
前記プロモーターがヒト前初期サイトメガロウイルスプロモーターであり、前記５’−リボソーム結合部位が配列番号１２からなり、前記３’ポリアデニル化がＢＧＨポリアデニル化シグナルであることを特徴とする請求の範囲第２３項に記載の核酸。
前記発現カセットがＥ１逆平行方位にあり、前記ヌクレオチド配列が配列番号２、配列番号３、配列番号１０または配列番号１１であることを特徴とする請求の範囲第２４項に記載の核酸。
前記発現カセットがＥ１逆平行方位にあり、前記ヌクレオチド配列が配列番号２または配列番号３であることを特徴とする請求の範囲第２４項に記載の核酸。
前記核酸が、複製起点、選択マーカー、及び
ａ）Ａｄ５またはＡｄ６のいずれかに対応する塩基対約１〜塩基対約４５０の第１アデノウイルス領域、
ｂ）前記第１領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３５１１〜塩基対約５５４８またはＡｄ６に対応する塩基対約３５０８〜塩基対約５５４１の第２アデノウイルス領域、
ｃ）前記第２領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約５５４９〜塩基対約２８１３３またはＡｄ６に対応する塩基対約５５４２〜塩基対約２８１５６の第３アデノウイルス領域、
ｄ）前記第３領域に連結した、Ｅ３平行またはＥ３逆平行方位の前記遺伝子発現カセット
ｅ）前記遺伝子発現カセットに連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３０８１８〜塩基対約３３９６６またはＡｄ６に対応する塩基対約３０７８９〜塩基対約３３７８４の第４アデノウイルス領域、及び
ｆ）前記第４領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３３９６７〜塩基対約３５９３５またはＡｄ６に対応する塩基対約３３７８５〜塩基対約３５７５９の第５アデノウイルス領域
を含むアデノウイルスゲノムプラスミドであることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の核酸。
前記第１領域がＡｄ５に対応し、前記第２領域がＡｄ５に対応し、前記第３領域がＡｄ５に対応し、前記第４領域がＡｄ５に対応し、前記第５領域がＡｄ５に対応することを特徴とする請求の範囲第２７項に記載の核酸。
前記プロモーターがヒト前初期サイトメガロウイルスプロモーターであり、前記５’−リボソーム結合部位が配列番号１２からなり、前記３’ポリアデニル化がＢＧＨポリアデニル化シグナルであることを特徴とする請求の範囲第２８項に記載の核酸。
前記第１領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応し、前記第２領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応し、前記第３領域がＡｄ６に対応し、前記第４領域がＡｄ６に対応し、前記第５領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応することを特徴とする請求の範囲第２７項に記載の核酸。
前記プロモーターがヒト前初期サイトメガロウイルスプロモーターであり、前記５’−リボソーム結合部位が配列番号１２からなり、前記３’ポリアデニル化がＢＧＨポリアデニル化シグナルであることを特徴とする請求の範囲第３０項に記載の核酸。
前記核酸が配列番号４に実質的に類似のヌクレオチド配列またはその誘導体から構成されるアデノベクターであり、前記誘導体が配列番号４中に存在するＨＣＶポリタンパク質コード化配列が配列番号３、配列番号１０または配列番号１１のいずれかのＨＣＶポリタンパク質コード化配列で置換されたものであることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の核酸。
前記核酸が、Ｅ１欠失、Ｅ３欠失及び前記発現カセットを含むアデノベクターゲノムを有するアデノベクターであることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の核酸。
前記核酸が、
ａ）Ａｄ５またはＡｄ６のいずれかに対応する塩基対約１〜塩基対約４５０の第１アデノウイルス領域、
ｂ）前記第１領域に連結した、Ｅ１平行またはＥ１逆平行方位の前記遺伝子発現カセット、
ｃ）前記発現カセットに連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３５１１〜塩基対約５５４８またはＡｄ６に対応する塩基対約３５０８〜塩基対約５５４１の第２アデノウイルス領域、
ｄ）前記第２領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約５５４９〜塩基対約２８１３３またはＡｄ６に対応する塩基対約５５４２〜塩基対約２８１５６の第３アデノウイルス領域、
ｅ）前記第３領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３０８１８〜塩基対約３３９６６またはＡｄ６に対応する塩基対約３０７８９〜塩基対約３３７８４の第４アデノウイルス領域、及び
ｆ）前記第４領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３３９６７〜塩基対約３５９３５またはＡｄ６に対応する塩基対約３３７８５〜塩基対約３５７５９の第５アデノウイルス領域
から構成されるアデノベクターであることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の核酸。
前記第１領域がＡｄ５に対応し、前記第２領域がＡｄ５に対応し、前記第３領域がＡｄ５に対応し、前記第４領域がＡｄ５に対応し、前記第５領域がＡｄ５に対応することを特徴とする請求の範囲第３４項に記載の核酸。
前記プロモーターがヒト前初期サイトメガロウイルスプロモーターであり、前記５’−リボソーム結合部位が配列番号１２からなり、前記３’ポリアデニル化がＢＧＨポリアデニル化シグナルであることを特徴とする請求の範囲第３５項に記載の核酸。
前記発現カセットがＥ１逆平行方位にあり、前記ヌクレオチド配列が配列番号２、配列番号３、配列番号１０または配列番号１１であることを特徴とする請求の範囲第３６項に記載の核酸。
前記第１領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応し、前記第２領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応し、前記第３領域がＡｄ６に対応し、前記第４領域がＡｄ６に対応し、前記第５領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応することを特徴とする請求の範囲第３４項に記載の核酸。
前記プロモーターがヒト前初期サイトメガロウイルスプロモーターであり、前記５’−リボソーム結合部位が配列番号１２からなり、前記３’ポリアデニル化がＢＧＨポリアデニル化シグナルであることを特徴とする請求の範囲第３７項に記載の核酸。
前記発現カセットがＥ１逆平行方位にあり、前記ヌクレオチド配列が配列番号２、配列番号３、配列番号１０または配列番号１１であることを特徴とする請求の範囲第３９項に記載の核酸。
前記発現カセットがＥ１逆平行方位にあり、前記ヌクレオチド配列が配列番号２または配列番号３であることを特徴とする請求の範囲第３９項に記載の核酸。
前記核酸が、
ａ）Ａｄ５またはＡｄ６のいずれかに対応する塩基対約１〜塩基対約４５０の第１アデノウイルス領域、
ｂ）前記第１領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３５１１〜塩基対約５５４８またはＡｄ６に対応する塩基対約３５０８〜塩基対約５５４１の第２アデノウイルス領域、
ｃ）前記第２領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約５５４９〜塩基対約２８１３３またはＡｄ６に対応する塩基対約５５４２〜塩基対約２８１５６の第３アデノウイルス領域、
ｄ）前記第３領域に連結した、Ｅ３平行またはＥ３逆平行方位の前記遺伝子発現カセット、
ｅ）前記遺伝子発現カセットに連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３０８１８〜塩基対約３３９６６またはＡｄ６に対応する塩基対約３０７８９〜塩基対約３３７８４の第４アデノウイルス領域、及び
ｆ）前記第４領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３３９６７〜塩基対約３５９３５またはＡｄ６に対応する塩基対約３３７８５〜塩基対約３５７５９の第５アデノウイルス領域
から構成されるアデノベクターであることを特徴とする請求の範囲第８項に記載の核酸。
前記第１領域がＡｄ５に対応し、前記第２領域がＡｄ５に対応し、前記第３領域がＡｄ５に対応し、前記第４領域がＡｄ５に対応し、前記第５領域がＡｄ５に対応することを特徴とする請求の範囲第４２項に記載の核酸。
前記第１領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応し、前記第２領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応し、前記第３領域がＡｄ６に対応し、前記第４領域がＡｄ６に対応し、前記第５領域がＡｄ５またはＡｄ６に対応することを特徴とする請求の範囲第４２項に記載の核酸。
配列番号４の核酸配列またはその誘導体からなるアデノベクターであって、前記誘導体は配列番号４中に存在するＨＣＶポリタンパク質コード化配列が配列番号３、配列番号１０または配列番号１１のいずれかのＨＣＶポリタンパク質コード化配列で置換されたものであることを特徴とする前記アデノベクター。
ａ）Ａｄ５またはＡｄ６のいずれかに対応する塩基対約１〜塩基対約４５０の第１アデノウイルス領域；前記第１領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３５１１〜塩基対約５５４８またはＡｄ６に対応する塩基対約３５０８〜塩基対約５５４１の第２アデノウイルス領域；前記第２領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約５５４９〜塩基対約２８１３３またはＡｄ６に対応する塩基対約５５４２〜塩基対約２８１５６の第３アデノウイルス領域；前記第３領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３０８１８〜塩基対約３３９６６またはＡｄ６に対応する塩基対約３０７８９〜塩基対約３３７８４の第４アデノウイルス領域；及び前記第４領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３３９６７〜塩基対約３５９３５またはＡｄ６に対応する塩基対約３３７８５〜塩基対約３５７５９の第５アデノウイルス領域からなる核酸と請求の範囲第９項に記載のシャトルベクターとの相同組換えによりアデノウイルスゲノムプラスミドを作成する段階、及び
ｂ）前記アデノウイルスプラスミドから前記アデノベクターをレスキューする段階
を含む方法により産生されることを特徴とするアデノベクター。
請求の範囲第６項に記載の核酸を含むことを特徴とする培養組換え細胞。
請求の範囲第９項〜第４６項のいずれか１項に記載の核酸を含むことを特徴とする培養組換え細胞。
ａ）Ａｄ５またはＡｄ６のいずれかに対応する塩基対約１〜塩基対約４５０の第１アデノウイルス領域；前記第１領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３５１１〜塩基対約５５４８またはＡｄ６に対応する塩基対約３５０８〜塩基対約５５４１の第２アデノウイルス領域；前記第２領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約５５４９〜塩基対約２８１３３またはＡｄ６に対応する塩基対約５５４２〜塩基対約２８１５６の第３アデノウイルス領域；前記第３領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３０８１８〜塩基対約３３９６６またはＡｄ６に対応する塩基対約３０７８９〜塩基対約３３７８４の第４アデノウイルス領域；及び前記第４領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３３９６７〜塩基対約３５９３５またはＡｄ６に対応する塩基対約３３７８５〜塩基対約３５７５９の第５アデノウイルス領域からなる核酸と請求の範囲第９項に記載の核酸との相同組換えにより遺伝子発現カセットを含むアデノウイルスゲノムプラスミドを作成する段階、及び
ｂ）前記組換えアデノウイルスプラスミドから前記組換えアデノウイルスをレスキューする段階
を含むことを特徴とするアデノベクターの産生方法。
請求の範囲第１３項〜第１７項及び第３２項〜第４６項のいずれか１項に記載の核酸及び医薬的に許容され得る担体を含むことを特徴とする医薬組成物。
請求の範囲第１３項〜第１７項及び第３２項〜第４６項のいずれか１項に記載の核酸を含むＨＣＶ治療用医薬製剤。
ヒトの患者を治療するために用いられる請求の範囲第５１項に記載の医薬製剤。
１つ以上のＡＤ６領域及びＡＤ６中に存在しない領域を含む組換え核酸であって、少なくとも１つのＡＤ６領域がＥ１Ａ、Ｅ１Ｂ、Ｅ２Ｂ、Ｅ２Ａ、Ｅ４、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ４及びＬ５からなる群から選択されることを特徴とする前記組換え核酸。
ＡＤ６中に存在しない前記領域がＡＤ６中に存在しないポリペプチドをコードする発現カセットであることを特徴とする請求の範囲第５３項に記載の組換え核酸。
前記組換え核酸が、Ｅ１をイントランスで供給したときに複製できるＥ１を少なくとも欠くアデノウイルスベクターであることを特徴とする請求の範囲第５４項に記載の組換え核酸。
前記ベクターが
ａ）Ａｄ５またはＡｄ６のいずれかに対応する塩基対約１〜塩基対約４５０の第１アデノウイルス領域、
ｂ）前記第１領域に連結した、Ｅ１平行またはＥ１逆平行方位の前記遺伝子発現カセット、
ｃ）前記遺伝子発現カセットに連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３５１１〜塩基対約５５４８またはＡｄ６に対応する塩基対約３５０８〜塩基対約５５４１の第２アデノウイルス領域、
ｄ）前記第２領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約５５４９〜塩基対約２８１３３またはＡｄ６に対応する塩基対約５５４２〜塩基対約２８１５６の第３アデノウイルス領域、
ｅ）場合によっては存在する、前記第３領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約２８１３４〜塩基対約３０８１７またはＡｄ６に対応する塩基対約２８１５７〜塩基対約３０７８９の第４アデノウイルス領域、
ｆ）前記第４領域が存在するときにはその第４領域に連結し、前記第４領域が存在しないときには前記第３領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３０８１８〜塩基対約３３９６６またはＡｄ６に対応する塩基対約３０７８９〜塩基対約３３７８４の第５アデノウイルス領域、及び
ｇ）前記第４領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３３９６７〜塩基対約３５９３５またはＡｄ６に対応する塩基対約３３７８５〜塩基対約３５７５９の第６アデノウイルス領域、
から構成され、ただし前記した第２、第３及び第５領域の少なくとも１つがＡｄ６由来であることを特徴とする請求の範囲第５５項に記載の組換え核酸。
前記ベクターが
ａ）Ａｄ５またはＡｄ６のいずれかに対応する塩基対約１〜塩基対約４５０の第１アデノウイルス領域、
ｂ）前記第１領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３５１１〜塩基対約５５４８またはＡｄ６に対応する塩基対約３５０８〜塩基対約５５４１の第２アデノウイルス領域、
ｃ）前記第２領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約５５４９〜塩基対約２８１３３またはＡｄ６に対応する塩基対約５５４２〜塩基対約２８１５６の第３アデノウイルス領域、
ｄ）前記第３領域に連結した、Ｅ３平行またはＥ３逆平行方位の前記遺伝子発現カセット、
ｅ）前記遺伝子発現カセットに連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３０８１８〜塩基対約３３９６６またはＡｄ６に対応する塩基対約３０７８９〜塩基対約３３７８４の第４アデノウイルス領域、及び
ｆ）前記第４領域に連結した、Ａｄ５に対応する塩基対約３３９６７〜塩基対約３５９３５またはＡｄ６に対応する塩基対約３３７８５〜塩基対約３５７５９の第５アデノウイルス領域
から構成され、ただし前記した第２、第３及び第４領域の少なくとも１つがＡｄ６由来であることを特徴とする請求の範囲第５５項に記載の組換え核酸。