JP2005247753A - 細胞分化誘導剤 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】杉、松および檜からなる樹木の熱水抽出物と、オオバコの熱水抽出物とを併用混合した水溶性でありかつエチルアルコール可溶性のものを有効成分として含有する細胞分化誘導剤、好ましくは白血病細胞分化誘導剤または皮膚癌細胞分化誘導剤としたのである。抽出成分や組成が従来品とは異なるこの発明の細胞分化誘導剤は、白血病細胞や皮膚癌細胞などの癌細胞に対して有効成分の新しい細胞分化誘導剤になる。
【選択図】なし
Description
植物用栄養液(フローラ社製:HB−101)の揮発成分を室温で蒸発させて乾燥させ、得られた有形成分を95%エチルアルコールに溶解し、このエチルアルコール溶解物を種々の濃度で有効成分として採用して、以下の細胞増殖抑制試験により細胞分化誘導剤に調整した場合の薬効(ヒトは白血病細胞に対する増殖抑制性と分化誘導活性)および安全性を調べた。
12wellプレートの下記培地上にHL60細胞(ヒト白血病細胞)を各10万個/ml/wellになるように播種し、前記したエチルアルコール溶解物を50μg/ml(実施例1)、3μg/ml(実施例2)、1μg/ml(実施例3)、0.5μg/ml(比較例1)、0μg/ml(比較例2:無添加区)添加し、インキュベータ内37℃の条件下で3日間の培養を行なった。その間、24時間毎に顕微鏡を用いて血球計算盤上の細胞数をカウントし、その増減の変動を調べ、計数細胞数を記録し、グラフ化したものを図1に示した。
RPMI−1640 Medium in 10% FCS
RPMI−1640 Medium SIGMA lot.22K2354
FCS HY Clone in USA
(a) 使用検体:細胞増殖抑制試験後のHL60細胞(HB101の乾燥有形成分のエチルアルコール溶解物濃度3μg/ml添加区分cellおよび無添加区細胞)
試験材料:発色試験 Nitro Blue Tetrazolium SIGMA N6876
TPA(12-O-Tetradecanoyl-13-ace)stock solution
(b) 試験方法:
(1) 細胞増殖抑制試験で培養したHL60細胞(HB101の乾燥有形成分のエチルアルコール溶解物濃度3μg/ml(実施例2)および0μg/ml(比較例2:無添加区))を100μl採取し、96wellプレート上に添加した。
(2) NBT(ニトロブルーテトラゾリウム)in TPA(2×10-6M)溶液を同量(100μl)採取し、96well各プレート上に添加した。
(3) 両液添加後、本96wellプレートを37℃で40分間培養した。
(4) 培養終了後、顕微鏡下で細胞の呈色状態を観察した。
(c) 評価方法
この試験では、HB101の添加培養により分化誘導された細胞については無添加区と比較して黒色に強く呈色する。呈色後、HB101添加区分HL60細胞および無添加区HL60細胞における呈色度合を比較することにより、HB101添加培養における分化誘導活性を判定した。
(d) 試験結果
上記の試験結果から、比較例2(無添加区)のHL60細胞の細胞分化誘導率は0%であったが、実施例2のHL60細胞の細胞分化誘導率は4.2%であった。
(1) 実施例2の2000mg/kgをCrj:CD(SD)IGS系の雄ラット5匹に1回経口投与し、その毒性を調べた。その結果、死亡例はみられず、一般状態、体重および剖検でも異常は認められなかった。したがって、実施例2の最小致死量は2000mg/kgを超えるものと判断された。
毒素に関わる遺伝子の5倍以上の増減があったものについてみると、cytosolic epoxide hydrolase, stress activated protein kinase alpha II, N-heparan sulfate sulfotranferase, connexin proteinなどの遺伝子において変化がみられたものの、発現が減少傾向にあり、数値的にも変化量が大きくないことから、毒性の影響は見られず、その他の遺伝子の変化量も微量であることから、実施例2の毒性反応は殆どないと考えられた。
サンプルの血清2μlをH4プロテインチップ上に滴下し、洗浄処理後、EAMEAM0.5μlにてチップ上に固定化処理を行なった。タンパク質を固定化したH4プロテインチップをプロテインチップアナライザーSELDIにセットし、分子量分布の測定を行なった。
この結果、分子量5000から15000には主なピークが5個観察されたが、その全てが対照群と投与群の両方に見られ、その量の違いの明確な傾向も認められなかった。
また、分子量15000から50000においては、主なピークが8個観察されたが、これらもその全てが対照群と投与群の両方に見られるものであり、その量の違いの明確な傾向も見られなかった。
これらのことから、投与群と対照群との間に、血清中の発現タンパク量の違いは認められず、毒性反応は見受けられなかった。
Claims (4)
- 杉、松および檜を含む樹木の熱水抽出物と、オオバコの熱水抽出物とを併用した水溶性混合抽出物におけるエチルアルコール可溶性成分を有効成分として含有してなる細胞分化誘導剤。
- 細胞分化誘導の対象細胞が、癌細胞である請求項1に記載の細胞分化誘導剤。
- 癌細胞が、白血病細胞である請求項2に記載の細胞分化誘導剤。
- 癌細胞が、皮膚癌細胞である請求項2に記載の細胞分化誘導剤。
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