JP2005075829A - 局所経路によるロディオラ・クレヌラタ(Rhodiolacrenulata)抽出物の使用 - Google Patents
局所経路によるロディオラ・クレヌラタ(Rhodiolacrenulata)抽出物の使用 Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】本発明は、特に、局所塗布用組成物であって、患者の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための活性物質を含み、上記活性物質はロディオラ・クレヌラタ抽出物であることを特徴とする局所塗布用組成物に関する。本発明により、皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織の柔軟性の増加、抗皺効果、皺の出現の遅延及び予防、ニキビの出現に対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果、並びに、皮膚組織の落屑促進(「ピーリング」)等の化粧処置を行うことができる。
【選択図】 なし
Description
ADP+PCr⇔ATP+Cr
ロディオラ・クレヌラタ抽出物を、根を切断して粉末状にしたものから調製した。得られた粉末をエタノールと混合し、10%(w/w)エタノール溶液を得た。この溶液を還流して1時間抽出し、室温にしてからろ過し、エタノールを除去した。得られたものを水/グリコールの75/25(w/w)混合液中に5%(w/w)で溶解した後、分離(cut−off)閾値の異なるセラミックフィルター上で限外ろ過し、最終ろ過は0.45μmにおいて行った。
最後に、キサンタンゲルの存在下又は非存在下で、防腐剤としてメチルパラベンを0.1%加えた。
ロディオラ・クレヌラタ抽出物を、根を切断して粉末状にしたものから調製した。得られた粉末をシクロヘキサンと混合し、10%(w/w)シクロヘキサン溶液を得た。この溶液を還流して24時間抽出し、室温にしてからろ過し、シクロヘキサンを除去した。得られたものを水/グリコールの75/25(w/w)混合液中に5%(w/w)で溶解した後、分離閾値の異なるセラミックフィルター上で限外ろ過し、最終ろ過は0.45μmにおいて行った。
最後に、カルボマーゲルの存在下又は非存在下で、防腐剤としてメチルパラベンを0.1%加えた。
ロディオラ・クレヌラタ抽出物を、根を切断して粉末状にしたものから調製した。得られた粉末を水75%とブチレングリコール25%からなる溶媒中に混合し、10%(w/w)の該溶媒溶液を得た。45℃において1晩浸漬し、分離閾値の異なるセラミックフィルター上でこの溶液を限外ろ過し、最終ろ過は0.45μmにおいて行った。
最後に、セルロースゲルの存在下又は非存在下で、防腐剤としてメチルパラベンを0.1%加えた。
ロディオラ・クレヌラタ抽出物を、根を切断して粉末状にしたものから調製した。得られた粉末を水75%とブチレングリコール25%からなる溶媒中に混合し、1%(w/w)の該溶媒溶液を得た。4℃において1晩浸漬し、分離閾値の異なるセラミックフィルター上でこの溶液を限外ろ過し、最終ろ過は0.45μmにおいて行った。
最後に、キサンタンゲルの存在下又は非存在下で、防腐剤としてメチルパラベンを0.1%加えた。
実施例4で調製したロディオラ・クレヌラタ抽出物の角質細胞に対する細胞毒性を調べた(パラニトロフェニルリン酸(PNPP)を用いて測定した)。
正常なヒト角質細胞を腹部生検から抽出し、96ウェル培養プレート中に播種した。細胞を一旦コンフルエントにした後、培地単独(コントロール)、又は、実施例4で調製したロディオラ・クレヌラタ抽出物を0.01%、0.1%、1%、3%、5%若しくは10%(w/w)含有する培地中で、37℃において24時間、5%CO2を含む雰囲気下で培養した。
0.1%トリトンX100(シグマ社)及び0.1M酢酸ナトリウム(シグマ社)を含むpH5の脱塩水にPNPP(シグマ社)を5mMで溶解した溶液200μlを、各培養ウェル中に注入した。37℃において2時間培養した後、1NのNaOH(メルク社)を添加して反応を終結させた。405nmにおける吸光度を読み取り、結果をコントロール(活性物質なし)に対する生存細胞の比率で表す。
「細胞ATP量の測定」
正常なヒト角質細胞を、1ウェル当たり15×103個の割合で96ウェルマイクロプレート中に播種する。37℃において72時間培養した後、培地を除去して異なる濃度の活性物質を含有する培地で置き換える。
細胞を連続3日間培養した後、PBSバッファーで洗浄する。細胞質ゾルのATPを、以下の反応に基づいて生物発光法で定量する。
ルシフェリン+O2+ルシフェラーゼ+ATP→オキシルシフェリン+AMP+PPi+CO2+ルシフェラーゼ+光子
RLUATP=RLUTotal−RLU0
細胞質ゾルのATP測定と平行して、別のマイクロプレート中でクマシーブルー(BioRad社Protein Assay)を用いた試験により細胞タンパク質を定量する。
結果(ATP量)を、タンパク質1μg当たりのATP量(pmole)で表す。下記の表は平均値(N=4)をまとめたものである。
一方、2%(w/w)ロディオラ・クレヌラタ抽出物で処理した細胞について、タンパク質量がわずかに減少(11%)していることが分かる。
図1は、ロディオラ・クレヌラタ抽出物の濃度を変えた際の、ヒト角質細胞中のATP量を表す。
上述の実験条件下において、ロディオラ・クレヌラタ抽出物は、ヒト角質細胞のエネルギー代謝を活性化できる。
実際に、試験した濃度範囲内において、細胞質ゾルのATP量は用量依存的に増加した。
濃度2%(w/w)において、ロディオラ・クレヌラタ抽出物は、角質細胞のATP量を59%増加できる。
皮膚組織におけるエネルギー代謝を、NMR(核磁気共鳴)分光法によりin situにおいて測定した。この試験は、ロディオラ・クレヌラタ抽出物を3%(w/w)含有する製剤が皮膚におけるエネルギー代謝に及ぼす効果を、健康な志願者についてin vivo試験で評価するために行った。試験は、18歳を超える健康な志願者16人について行った。ロディオラ・クレヌラタ抽出物を3%(w/w)含有する製剤を、健康な志願者16人の左右どちらかの前腕に1日2回、28日間塗布した。この志願者のうち8人のもう一方の前腕に、プラセボ製剤を同一期間塗布した。残りの8人には、もう一方の前腕には何の処置も行わなかった(「コントロール」前腕)。
皮膚におけるエネルギー代謝の変化は、皮膚の主要なリン酸化代謝産物(無機リン酸塩(Pi)、ホスホクレアチン(PCr)及びアデノシン三リン酸(ATP))の相対濃度を測定することによるリン(P31)NMR分光法で測定できる。
ADP+PCr⇔ATP+Cr
下図の結果によって、ロディオラ・クレヌラタ抽出物を含有する製剤を28日間塗布すると、PCr/Ptotal比が著しく増加することが分かる。
プラセボ製剤を塗布した前腕においては、測定時間に関わらず、上記比率の向上は見られなかった。
図中で用いる記号は次のとおりである。
●:D0と有意差がある(p<0.05)
ns:D0と有意差はない
*:「コントロール」群と有意差がある(p<0.05)
28日後の「コントロール」及び「塗布」条件下におけるPCr/Ptotal比の変化(%):
本発明の物質を含む製剤の化粧品としての許容性の評価
実施例4で得られたロディオラ・クレヌラタ抽出物について、これを純粋な状態で使用し、ウサギにおける眼刺激試験、ラットに1回経口投与した際に異常毒性がないことの確認試験、及び、モルモットにおける感作性試験によって毒性試験を行った。
上記製剤を、ウサギ3匹の皮膚に、≪皮膚に対する急性刺激/腐食性≫の研究に関するOECD推奨の方法に従って、希釈せずに0.5mlずつ塗布した。
上記製剤を純粋な状態で、≪眼に対する急性刺激/腐食性≫の研究に関して1987年2月24日にOECD指令書405番によって公式に推奨されている方法に従い、0.1mlを1回でウサギ3匹の眼中に滴下した。
この試験の結果から、これらの製剤は、純粋な状態で使用した場合、91/326のEECの意味において、眼に対して「刺激がない」ものと考えられる。
上記製剤を、1987年2月24日のOECD指令書401番から着想して化粧品に適用したプロトコールに従って、雄ラット5匹及び雌ラット5匹に、5g/体重1kgの量を1回で経口投与した。
LD0及びLD50は、5000mg/kgを超えることが分かった。従って、試験した製剤は、経口摂取が危険な製剤には分類されない。
上記製剤に対して、OECD406番の指令書に従ったプロトコールであるMagnusson−Kligmann極大試験を行った。
これらの製剤は、皮膚との接触において「感作性がない」ものとして分類される。
水中油エマルション型の化粧品又は医薬品の製剤における本発明の生成物の使用
『製剤9a』
A
水 qsp 100
ブチレングリコール 2
グリセリン 3
ジヒドロキシセチルリン酸ナトリウム、 2
イソプロピルヒドロキシセチルエーテル
B
ステアリン酸グリコールSE 14
トリイソノナオイン 5
(triisononaoin)
ヤシ油脂肪酸オクチル 6
C
pH5.5に調節した 2
ブチレングリコール、
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン
D
本発明の生成物 0.01〜10%
A
水 qsp 100
ブチレングリコール 2
グリセリン 3
ポリアクリルアミド、イソパラフィン、 2.8
ラウレス−7
B
ブチレングリコール、 2
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン;
2
フェノキシエタノール、
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン 0.5
ブチレングリコール
D
本発明の生成物 0.01〜10%
A
カルボマー 0.50
プロピレングリコール 3
グリセリン 5
水 qsp 100
B
ヤシ油脂肪酸オクチル 5
ビサボロール 0.30
ジメチコン 0.30
C
水酸化ナトリウム 1.60
D
フェノキシエタノール、 0.50
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
E
香料 0.30
F
本発明の生成物 0.01〜10%
A
PEG30−ジポリヒドロキシステアリン酸 3
カプリン酸トリグリセリド 3
オクタン酸セテアリル 4
アジピン酸ジブチル 3
ブドウ種子油 1.5
ホホバ油 1.5
フェノキシエタノール、 0.5
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
B
グリセリン 3
ブチレングリコール 3
硫酸マグネシウム 0.5
EDTA 0.05
水 qsp 100
C
シクロメチコン 1
ジメチコン 1
D
香料 0.3
E
本発明の生成物 0.01〜10%
A
キサンタンガム 0.8
水 qsp 100
B
ブチレングリコール、 0.5
メチルパラベン、
エチルパラベン、プロピルパラベン
フェノキシエタノール、 0.5
メチルパラベン、
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
C
クエン酸 0.8
D
ラウレス硫酸ナトリウム 40.0
E
本発明の生成物 0.01〜10%
A
ミネラルワックス 17.0
イソステアリン酸イソステアリル 31.5
プロピレングリコールジペラルゴン 2.6
(propylene glycol dipelargonate)
イソステアリン酸プロピレングリコール 1.7
PEG−8ミツロウ 3.0
水添パーム核油脂肪酸グリセリド、 3.4
水添パーム油脂肪酸グリセリド
ラノリン油 3.4
ゴマ油 1.7
乳酸セチル 1.7
鉱物油、ラノリンアルコール 3.0
B
ヒマシ油 qsp 100
二酸化チタン 3.9
CI 15850:1 0.616
CI 45410:1 0.256
CI 19140:1 0.048
CI 77491 2.048
C
本発明の生成物 0.01〜5%
A
水 qsp 100
カルボマー 0.5
ブチレングリコール 15
フェノキシエタノール、メチルパラベン、 0.5
プロピルパラベン、ブチルパラベン、
エチルパラベン
B
本発明の生成物 0.01〜10%
Claims (16)
- 患者の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための局所塗布用組成物を製造する目的でのロディオラ・クレヌラタ抽出物の使用。
- 前記皮膚組織は皮膚であり、好ましくは、前記皮膚組織は、特に人間の、表皮及び/又は真皮である
ことを特徴とする請求項1に記載の使用。 - 角質細胞及び/又は繊維芽細胞のエネルギー代謝を増加させるための
請求項1又は2に記載の使用。 - 前記患者は哺乳動物、特に人間である
ことを特徴とする請求項1〜3のいずれか1項に記載の使用。 - 前記局所塗布用組成物は、抽出物を0.01%〜10%(w/w)含む
ことを特徴とする請求項1〜4のいずれか1項に記載の使用。 - 前記ロディオラ・クレヌラタ抽出物は、ペンタン、デカン、シクロヘキサン、ヘキサン、石油エーテル、モノクロロメタン、ジクロロメタン、クロロホルム、イソプロパノール、プロパノール、酢酸エチル、エタノール、メタノール、アセトン、ブチレングリコール、プロピレングリコール、ペンチレングリコール、グリセリン及び水、並びに、これら溶媒のうち少なくとも2種の混合物からなる群から選択される溶媒で抽出して得られる
ことを特徴とする請求項1〜5のいずれか1項に記載の使用。 - 前記溶媒は特に水−アルコール又は水−グリコールの混合物である
ことを特徴とする請求項6に記載の使用。 - 前記抽出物は、ロディオラ・クレヌラタの根及び/又は茎の下部の抽出物である
ことを特徴とする請求項1〜7のいずれか1項に記載の使用。 - 前記抽出物は、植物ロディオラ・クレヌラタの少なくとも一部、好ましくはロディオラ・クレヌラタの根及び/又は茎の下部を粉末状に粉砕して得られる
ことを特徴とする請求項1〜8のいずれか1項に記載の使用。 - 前記抽出物は、クレヌラチン(crenulatine)、その塩の少なくとも1種、又は、その誘導体の少なくとも1種を含む
ことを特徴とする請求項1〜9のいずれか1項に記載の使用。 - 皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延若しくは予防、及び/又は、皮膚組織の柔軟性の増加、及び/又は、抗皺効果若しくは皺の出現の遅延若しくは予防、及び/又は、ニキビの出現に対する抵抗、遅延若しくは予防、及び/又は、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果、及び/又は、皮膚組織の落屑を促進(「ピーリング」)するための
請求項1〜10のいずれか1項に記載の使用。 - 少なくとも組成物を塗布する部分の皮膚組織におけるエネルギー代謝を増加させるための活性物質を含み、
前記活性物質は請求項1〜11のいずれか1項に記載のロディオラ・クレヌラタ抽出物である
ことを特徴とする局所塗布用組成物。 - 患者の皮膚組織の少なくとも一部に請求項12に記載の組成物を局所的に塗布して、患者の皮膚組織の少なくとも前記一部におけるエネルギー代謝を増加させる
ことを特徴とする化粧処置方法。 - 前記化粧処置は、これを必要とする患者に対して、特に、母集団から事前に前記患者を選択して行う
ことを特徴とする請求項13に記載の化粧処置方法。 - 前記化粧処置は、皮膚組織のたるみに対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織の柔軟性の増加、抗皺効果、皺の出現の遅延及び予防、ニキビの出現に対する抵抗、遅延及び予防、皮膚組織、特に皮膚に対する色素脱失効果、並びに、皮膚組織の落屑促進(「ピーリング」)からなる群より選択される
ことを特徴とする請求項13又は14に記載の方法。 - 皮膚組織の細胞の増殖能を増大できる、すなわち、これらの細胞、特に角質細胞及び/又は繊維芽細胞の増殖を増大できる
ことを特徴とする請求項13〜15のいずれか1項に記載の方法。
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