JP2005021170A

JP2005021170A - 飼料ならびにペットフード

Info

Publication number: JP2005021170A
Application number: JP2004276259A
Authority: JP
Inventors: Masaru Shibata; 勝柴田; Hiroshi Hara; 弘原; Yasushi Kojima; 靖小嶋
Original assignee: Oji Paper Co Ltd
Current assignee: New Oji Paper Co Ltd
Priority date: 2004-09-24
Filing date: 2004-09-24
Publication date: 2005-01-27

Abstract

【課題】飼料やペットフードにおいて、担子菌の免疫賦活効果を経口で期待する為には、有効成分を抽出し、濃縮する必要があったが、抽出や濃縮をせずそのまま食するだけで高い免疫賦活効果が期待できるものが求められてきた。また、熱水抽出したエキスの場合、水不溶性の画分を利用できないという問題点もあった。
【解決手段】粒子径２０〜１００μmに微粒子化された担子菌を５重量％以上含有することを特徴とする飼料ならびにペットフード。担子菌はハタケシメジの子実体または菌糸体またはそれらの乾燥物であることが好ましく、また、担子菌は飼料中に５〜３０重量％含有することが好ましい。
【選択図】なし

Description

本発明は担子菌を含有する免疫賦活効果を持つ飼料ならびにペットフードに関するものであり、さらに詳しくは、担子菌を微粒子化して添加することにより免疫賦活効果を高めた、飼料ならびにぺットフードに関するものである。

担子菌由来の種々の多糖体や蛋白多糖体が抗腫瘍効果を示すことが知られている（非特許文献１）。これらの中には、免疫系を主とする生体防御機構の機能を調節する作用を有することが示されている物質があり、この免疫調節作用を介して抗腫瘍効果を発現すると考えられている。

現在では、これらの物質は生物学的応答修飾物質（Biological Response Modifier：BRM ）の一つと位置づけられている。既存の免疫療法剤としては、カワラタケ抽出物の「クレスチン」、シイタケ抽出物の「レンチナン」、スエヒロタケ抽出物の「シゾフィラン」が認可、実用化されている。しかし、それぞれ単独では、万人の免疫賦活活性を上昇させ、十分な抗腫瘍効果を期待することが出来ないため、多剤免疫療法（いくつかのBRM を併用する）が採用されるようになってきている。また、経口投与では、効果が出にくい為、有効成分を抽出・濃縮して使用したり、精製して注射薬として使用されている。

ハタケシメジの抽出物については、王子製紙（株）森林資源研究所が抗腫瘍効果を発表（非特許文献２、３参照）している。そして、金沢大学の池川らのグループが「やまびこ宝しめじ」（ハタケシメジの人工栽培品）にマウスの腹腔内のSarcoma180移植ガンに対し抗腫瘍活性を持っていることを報告した（非特許文献４）。同時に池川らのグループは、アミラーゼ処理したハタケシメジをマウスに経口で投与することによっても抗腫瘍効果があったことを報告した。

人工栽培品の担子菌の場合、培地成分や培養方法によって担子菌中の成分が大きく変わることが知られており、天然物品や栽培方法の違った人工栽培品がいつでも同様の生理活性効果が期待できるとは限らない。ハタケシメジの高収率かつ効率的な人工栽培方法は、王子製紙（株）森林資源研究所により、既に確立されており（特許文献１）、本法を用いてハタケシメジ「亀山１号」を種菌とする品質の安定な人工栽培品を安価に供給できるようになっている。王子製紙（株）と（株）永昌源は、上記のハタケシメジ「亀山１号」を種菌とする人工栽培品の抽出物ならびにその精製物に非常に高い抗腫瘍活性を持つことを報告した（特許文献２）。また、この方法で栽培した人工栽培品を使用するかぎり、製造ロットごとで高い抗腫瘍活性が落ちないことを確認している。

担子菌の熱水抽出物の免疫賦活効果、抗腫瘍効果などが知られるようになってから、担子菌を含有させた健康食品（ヒメマツタケ：特許文献３〜４、ブナシメジ：特許文献５、マイタケ：特許文献６）や飼料（特許文献７〜８）、ペットフード（特許文献９）などが開発された。しかし、経口での摂取では効果が低いため、主要成分の高分子多糖類をエキスとして抽出し、高度に濃縮してから添加する方法がとられている。ハタケシメジについても、ハタケシメジの熱水抽出エキスを高度に濃縮し、粉末化、カプセル化したものが健康食品として１９９９年７月から製造販売されている。

上記のような抽出エキスではなく、担子菌の乾燥粉末を飼料、ペットフード等に添加する場合、飼料製造の作業性の観点から数百μｍ以上の粉末を混合することが一般的で１００μｍ以下の微粒子は通常添加されていない。スエヒロタケについては、坑ウイルス活性を高めるために微粉砕物を飼料に添加したものが報告されている（特許文献１０）。一方、食品では、担子菌を微粒子化して添加すると消化吸収がよくなり、胃腸障害を減らせるという報告（ヒメマツタケ：特許文献１１、霊芝：特許文献１２）はあるが、微粒子化することにより抗腫瘍活性が飛躍的に上昇するということについてはまだ知られていない。
特公平５−１５４０４号公報特開平１１−３０２１９１号公報特開昭５５−７４７９７公報特開昭５５−１０８２９２公報特開平５−３０６２３３公報特開平９−２３８６９７公報特開昭５０-１５７１７４公報特開昭５１−５７５７０公報特開平０５−２６０９０３公報特開平７−１７０９１９公報特開平８−１４９９６４公報特開平５−１３９９８９公報伊藤均、新圭志郎：抗腫瘍性多糖、感染症７５号１８−２２頁、１９８４年第17回全国育樹祭育林技術交流集会要旨集：ｐ１１−１３（1993）三井グラフ９７：ｐ８−９（1994）日本癌学会要旨集、1997 今関六也、本郷次雄：原色日本菌類図鑑（１）、保育社、１９８７年

ハタケシメジ等担子菌の免疫賦活効果を経口で期待する為には、有効成分を抽出し、濃縮する必要があったが、抽出や濃縮をせずそのまま食するだけで高い免疫賦活効果が期待できるものが求められてきた。また、熱水抽出したエキスの場合、水不溶性の画分を利用できないという問題点もあった。

発明者らが鋭意探索した結果、担子菌を直接微粒子化することによって、抽出や濃縮を行うことなく、免疫賦活効果が上昇すること、また、水不溶性画分も利用できることを見出した。特に食用として長年親しまれてきたハタケシメジで、大量かつ効率的に人工栽培可能なハタケシメジ「亀山１号」を種菌とする人工栽培品は、強力な免疫賦活活性・抗腫瘍活性があり、その効果は製造ロットごとで安定しており、微粒子化し、飼料ならびにぺットフードに添加することによって高い免疫賦活効果が期待できることを見出した。従って本発明は、担子菌を微粒子化することによって免疫賦活活性を高めることを特徴とする、担子菌を含有する飼料ならびにペットフードに関するものであり、本発明は、好ましい態様において、前記担子菌がハタケシメジ「亀山１号」を種菌とする人工栽培子実体または菌糸体であるハタケシメジを微粒子化することによって免疫賦活効果を高めることを特徴とする担子菌を含有する飼料ならびにペットフードを提供する。

即ち、本発明は下記の（１）〜（３）の構成を採用する。
（１）粒子径２０〜１００μmに微粒子化さた担子菌を５重量％以上含有することを特徴とする飼料ならびにペットフード。

（２）前記担子菌がハタケシメジの子実体または菌糸体またはそれらの乾燥物であることを特徴とする、上記（１）に記載の担子菌を含有する飼料ならびにペットフード。

（３）上記（１）又は（２）に記載された担子菌を５〜３０重量％含有することを特徴とする飼料ならびにペットフード。

本発明の微粒子化した担子菌（ハタケシメジ等の子実体または菌糸体）を添加した飼料ならびにペットフードは、Sarcoma180移植ガンに対し免疫賦活効果による強い抗腫瘍活性を持っており、免疫賦活剤として有用である。本抗腫瘍活性は、免疫賦活効果（マクロファージの活性化）によるもので免疫活性低下による様々な疾病に対しても有効である。また、食品として常用されている担子菌（ハタケシメジなど）を微粒子化するだけなので、従来の抗癌剤と比べ毒性がなく安全である。さらに、人工栽培品や培養菌糸体は、安価で安定した品質の原料としてハタケシメジを含有させた飼料ならびにペットフードの製造に利用できる。

以下に、本発明を詳細に説明する。担子菌としては免疫賦活活性の高い担子菌、例えば、ハタケシメジ、ヒメマツタケ、マイタケ、シイタケ、エノキタケ、ブナシメジ、メシマコブ、霊芝などいずれでも良く、特に抗腫瘍活性が強く、品質の安定しているハタケシメジが良い。ハタケシメジ（Lyophyllum decastes(Fr.) Sing.）はキシメジ科シメジ属のキノコで、マツタケより味が良いといわれるホンシメジに最も近縁のキノコであり、ホンシメジと同様に歯ごたえが良く美味である。天然品は、庭先や畑などの比較的身近な場所に株状に発生する（今関六也、本郷次雄：原色日本菌類図鑑（１）、保育社、１９８７年）。

本発明に使用されるハタケシメジは、人工栽培可能なハタケシメジ「亀山１号」（種苗法品種登録番号６７４０号、農林水産植物の種類：はたけしめじ、出願品種の名称：亀山１号）を種菌として使用することが最適である。さらに、栽培用培地成分としてＢＲＭ様効果が報告されているキチン質（カニ殻）、ビール酵母粕等を用いたものが良い。ハタケシメジは王子製紙（株）森林資源研究所が確立した栽培方法（特許文献１）で「亀山１号」を種菌として使用することがのぞましい。または、同方法で栽培し、市販している登録商標「しゃきんこ」のハタケシメジを原料として利用することも出来る。また、「亀山１号」をタンク培養して回収した菌糸体を利用することもできる。

本発明の担子菌の微粒子化は、生の子実体や菌糸体、それらの乾燥物も出発原料として用いることができる。生の子実体や菌糸体は、フードスライサーまたはフードダイサーで０．５〜１ｃｍ角の大きさにカットし、水分含量が１０％以下になるまで乾燥させる。乾燥は、熱風乾燥法、真空乾燥法、凍結乾燥法のいずれでも良い。乾燥させた子実体ならびに菌糸体は、フードプロセッサー、衝撃式粉砕機、石臼式粉砕機などで段階的に微粒子化する。湿式では、ガラス、アルミナ、ジルコニア、スチール、チタニア等の材質のビーズまたはボールを粉砕媒体として用いた振動ミル粉砕装置により、２０μｍ以下の微粒子を製造することができる。また、出発原料を乾燥させず、凍結粉砕法や湿式の振動ミル粉砕装置によって微粒子化することもできる。

担子菌を１ｍｍ以上、１００μｍ〜１ｍｍ、５０μｍ〜１００μｍ、２０μｍ〜５０μｍ、２０μｍ以下の５段階に粉末化して、マウスへの経口投与法により免疫賦活による抗腫瘍活性を測定した結果、１００μｍ以下に微粒子化したサンプルでは、有意に抗腫瘍活性が上昇することを見出した。また、高度に微粒子化したサンプルの方が抗腫瘍活性が高いことを見出した。経口投与法により、効果があることが確認できたので、担子菌の１００μｍ以下の微粒子を飼料ならびにペットフードに適当量添加することが有効である。また、飼料ならびにペットフードとしては、既存のものに添加して使用することできる。

本発明の飼料ならびにペットフード中に用いられる微粒子化した担子菌（ハタケシメジ）の割合は５重量％以上であり、好ましくは５〜８０重量％である。微粒子化したハタケシメジの摂取量は、一般に体重１ｋｇ、１日あたり１０ｍｇ〜１０ｇ、好ましくは、１００ｍｇ〜１ｇを目安に摂取する。

本発明の微粉末化したハタケシメジ等担子菌を含有した飼料ならびにペットフードは、急性毒性、変異原性が無く、高い免疫賦活活性による高い抗腫瘍効果を有するので極めて有用である。

以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
＜実施例１＞
ハタケシメジの人工栽培と微粒子化バーク堆肥（中日本農産（株）社製）：米ぬか：カニ殻を絶乾重量比100 ：20：4 の割合で混合した後、含水率を６２％にした培養基を850 ｍｌ容のポリプロピレン製栽培ビンに６２０ｇ充填した。ビン内の培養基全体に空気を補給し、菌糸の生育を良好にするために、ビン開口部から底部まで直径２ｃｍの大きさの穴をあけ、高圧殺菌釜（１２０℃、１時間）で殺菌した。培養基の温度を２５℃以下に冷却した後、クリーンルーム内でハタケシメジ「亀山１号」を植菌した。

室温２３℃、湿度８０％（RH）に調整した室内で５０日培養し、培養基に菌糸を充分に蔓延させた。菌掻きを行い、水分を補給した後、前記のバーク堆肥で開口部を１〜２ｃｍの厚さになるように被覆した。さらに被覆した培養ビンを室温２１℃、湿度８０％（RH）の室内で７日培養した。次に菌糸が侵入していない表層部の被覆部を除去し、室温１７℃、湿度９５％（RH）、照度１５０ルックスの条件に調整した室内で栽培を継続し、種菌接種後７５日の培養で１ビン当り１２０ｇの子実体を収穫した。

前記収穫した人工栽培のハタケシメジの子実体１００Ｋg をフードスライサーで薄くカットし、熱風乾燥機で水分含量８％まで乾燥させ、乾燥物１０Ｋｇを得た。乾燥物をフードプロセッサーにかけることにより、１ｍｍ以上の画分（約２Ｋｇ）と１００μｍ〜１ｍｍの画分（約８Ｋｇ）を製造した。１００μｍ〜１ｍｍの画分（約６Ｋｇ）をスーパーセル（増幸産業、ＭＫＳＣ−４００）で処理することにより、５０μｍ〜１００μｍの画分（約２Ｋｇ）と２０μｍ〜５０μｍの画分（約４Ｋｇ）を製造した。２０μｍ〜５０μｍの画分（約２Ｋｇ）を振動ボールミルを用いて、２０μｍ以下の画分まで微粒子化した。
＜ハタケシメジ粉末サンプルリスト＞
サンプルＨ−１：粒子径１ｍｍ以上
サンプルＨ−２：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＨ−３：粒子径５０μｍ〜１００μｍ
サンプルＨ−４：粒子径２０μｍ〜５０μｍ
サンプルＨ−５：粒子径２０μｍ以下

＜実施例２＞免疫賦活による抗腫瘍活性試験
実施例１のハタケシメジ粉末サンプル（Ｈ−１〜５）をＭＦ飼料（オリエンタル酵母社製）に１０重量％添加したものを試料として用い、無添加のものを対照群として用いた。

マウスは５週齢のマウス（ＩＣＲ／ＳＬＣ系、♀）１０匹を一群として試験に用いた。これに移植後７日目のマウスから採取したＳａｒｃｏｍａ１８０ガン細胞（５×１０⁵個）を移植した。ガン細胞移植２４時間後から、飼料にハタケシメジ粉末サンプルを添加したものに変更した。移植２１日目にガンの大きさを測定し、対照群と比較してガン抑制率（％）を測定した。また、移植２８日目におけるガンのマウス生存率を対照群と比較した。その結果を表1に示した。ハタケシメジ粉末を添加することにより、その免疫賦活効果による坑腫瘍活性が出現し、粉末を微粒子するに従い、坑腫瘍活性が上昇した。特に１００μｍ以下は、生存率も飛躍的に上昇した。

＜実施例３＞免疫賦活効果による抗腫瘍活性試験
実施例１のハタケシメジ粉末サンプル（Ｈ−4）をＭＦ飼料（オリエンタル酵母社製）に段階的に添加したものを試料として用い、無添加のものを対照群として用いた。

マウスは５週齢のマウス（ＩＣＲ／ＳＬＣ系、♀）１０匹を一群として試験に用いた。これに移植後７日目のマウスから採取したＳａｒｃｏｍａ１８０ガン細胞（５×１０⁵個）を移植した。ガン細胞移植２４時間後から、飼料にハタケシメジ粉末サンプルを添加したものに変更した。移植２１日目にガンの大きさを測定し、対照群と比較してガン抑制率（％）を測定した。また、移植２８日目におけるマウス生存率を対照群と比較した。その結果を表２に示した。１％以上で免疫賦活活性による坑腫瘍活性があり、５％以上で生存率が飛躍的に上昇した。

＜実施例４＞各種担子菌の微粒子化
実施例１と同様に市場で販売されている担子菌（ヒメマツタケ、マイタケ、シイタケ、エノキタケ、ブナシメジ、霊芝）を、各４Ｋg をフードスライサーで薄くカットし、熱風乾燥機で水分含量８％まで乾燥させ、乾燥物４００ｇを得た。乾燥物をフードプロセッサーにかけることにより、１００μｍ〜１ｍｍの画分（約４００ｇ）を製造した。さらに、１００μｍ〜１ｍｍの画分（約２００ｇ）をスーパーセル（増幸産業、ＭＫＳＣ−４００）で処理することにより、２０μｍ〜１００μｍの画分（約２００ｇ）を製造した。
ヒメマツタケ：
サンプルＡ―１：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＡ―２：粒子径２０μｍ〜１００μｍ
マイタケ：
サンプルＭ−１：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＭ―２：粒子径２０μｍ〜１００μｍ
シイタケ：
サンプルＳ―１：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＳ―２：粒子径２０μｍ〜１００μｍ
エノキタケ：
サンプルＥ―１：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＥ―２：粒子径２０μｍ〜１００μｍ
ブナシメジ：
サンプルＢ―１：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＢ―２：粒子径２０μｍ〜１００μｍ
霊芝：
サンプルＲ―１：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＲ−２：粒子径２０μｍ〜１００μｍ

＜実施例５＞各種担子菌の抗腫瘍活性試験
実施例４の担子菌粉末サンプルをＭＦ飼料（オリエンタル酵母社製）に１０％添加したものを試料として用い、無添加のものを対照群として用いた。マウスは５週齢のマウス（ＩＣＲ／ＳＬＣ系、♀）１０匹を一群として試験に用いた。これに移植後７日目のマウスから採取したＳａｒｃｏｍａ１８０ガン細胞（５×１０⁵個）を移植した。ガン細胞移植２４時間後から、飼料に各種粉末サンプルを添加したものに変更した。移植２１日目にガンの大きさを測定し、対照群と比較してガン抑制率（％）を測定した。また、移植２８日目におけるマウス生存率を対照群と比較した。その結果を表３に示した。担子菌粉末を微粒子化し、飼料に添加することにより免疫賦活効果による坑腫瘍活性が出現し、上昇した。特に１００μｍ以下は、生存率も飛躍的に上昇した。

＜実施例６＞担子菌の菌糸体の製造方法と微粒子化
１L容の三角フラスコ４０本に液体培地［馬鈴薯浸出液（栄研）200ｇ/L、ブドウ糖20ｇ/L、ポリペプトン（日本製薬）10ｇ/L、酵母エキス（DIFCO）5ｇ/L］５００ｍｌを入れ、滅菌後、同培地で前培養した種菌液（ハタケシメジ、マイタケ、ブナシメジ）を５％接種し、２５℃で３週間振盪培養する。得られた菌糸体を濾布で濾別し、さらにその菌糸体をろ紙に挟み脱水する。脱水した菌糸体は、熱風乾燥機で水分含量８％まで乾燥させた。各担子菌の菌糸体乾燥物をフードプロセッサーにかけることにより、１００μｍ〜１ｍｍの画分（約２００ｇ）を製造した。さらに、１００μｍ〜１ｍｍの画分（約１００ｇ）をスーパーセル（増幸産業、ＭＫＳＣ−４００）で処理することにより、２０μｍ〜１００μｍの画分（約１００ｇ）を製造した。
ハタケシメジ菌糸体：
サンプルＨＭ−１：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＨＭ―２：粒子径２０μｍ〜１００μｍ
マイタケ菌糸体：
サンプルＭＭ―１：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＭＭ―２：粒子径２０μｍ〜１００μｍ
ブナシメジ菌糸体：
サンプルＢＭ―１：粒子径１００μｍ〜１ｍｍ
サンプルＢＭ―２：粒子径２０μｍ〜１００μｍ

＜実施例7＞担子菌菌糸体の坑腫瘍活性
実施例6の担子菌菌糸体粉末サンプルをＭＦ飼料（オリエンタル酵母社製）に１０％添加したものを試料として用い、無添加のものを対照群として用いた。マウスは５週齢のマウス（ＩＣＲ／ＳＬＣ系、♀）１０匹を一群として試験に用いた。これに移植後７日目のマウスから採取したＳａｒｃｏｍａ１８０ガン細胞（５×１０⁵個）を移植した。ガン細胞移植２４時間後から、飼料に各種粉末サンプルを添加したものに変更した。移植２１日目にガンの大きさを測定し、対照群と比較してガン抑制率（％）を測定した。また、移植２８日目におけるマウス生存率を対照群と比較した。その結果を表４に示した。担子菌菌糸体粉末を微粒子化し、飼料に添加することにより、その免疫賦活効果による坑腫瘍活性が出現し、上昇した。特に１００μｍ以下は、生存率も飛躍的に上昇した。

Claims

粒子径２０〜１００μmに微粒子化された担子菌を５重量％以上含有することを特徴とする飼料ならびにペットフード。
前記担子菌がハタケシメジの子実体または菌糸体またはそれらの乾燥物であることを特徴とする、請求項１に記載の担子菌を含有する飼料ならびにペットフード。
請求項１又は請求項２に記載された担子菌を５〜３０重量％含有することを特徴とする飼料ならびにペットフード。