JP2004345982A - 抗アレルギー剤、抗老化剤及び抗老化用皮膚外用剤 - Google Patents
抗アレルギー剤、抗老化剤及び抗老化用皮膚外用剤 Download PDFInfo
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Abstract
【課題】天然物の中からヒスタミン遊離抑制作用を有するものを見いだし、それを有効成分とした抗アレルギー剤を提供するとともに、天然物の中からコラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はエストロゲン様作用を有するものを見いだし、それを有効成分とした抗老化剤を提供する。
【解決手段】抗アレルギー剤又は抗老化剤に、その有効成分として、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を含有させる。
【選択図】 なし
【解決手段】抗アレルギー剤又は抗老化剤に、その有効成分として、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を含有させる。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、植物からの抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤及び抗老化剤、並びに植物からの抽出物を配合した皮膚外用剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象で、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻害・抑制する物質によりアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療する試みがなされており、ヒスタミン遊離抑制作用を有する生薬としては、これまでに、五斂子の抽出物（特許文献１）、Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属に属する植物の抽出物（特許文献２）、ランタナの根部からの抽出物（特許文献３）が報告されている。
【０００３】
皮膚の真皮・表皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類等からなる細胞外マトリックスによって構成されており、若い皮膚においてはこれらの皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【０００４】
ところが、紫外線、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンは産生量が減少するとともに架橋による弾性低下を起こす。また、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類は細胞間隙への水分保持、組織の潤滑性と柔軟性の保持等、多くの機能を有しているが、これらの機能は加齢によって低下する。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性は低下し、角質が異常剥離を始めるので、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ、くすみ等の老化症状を呈するようになる。
【０００５】
このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類等の真皮マトリックス成分の減少・変性が関与している。したがって、コラーゲン及びヒアルロン酸の産生促進は、皮膚の老化を防止・改善する上で重要である。コラーゲン合成促進作用を有する生薬としては、例えば、甘草葉抽出物（特許文献４）、ハス胚芽抽出物（特許文献５）、Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属に属する植物の抽出物（特許文献２）が報告されている。
【０００６】
また、加齢を伴う皮膚老化の一因は、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することにある。すなわち、エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関わっていて、その分泌不足は種々の内科的疾患を招くほか、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの減少等、好ましくない肌の変化の原因となることが知られている。したがって、エストロゲン分泌減退を補うことは、皮膚の老化を防止・改善する上で重要である。エストロゲン様作用を有する生薬としては、例えば、月桃抽出物（特許文献６）、ハス胚芽抽出物（特許文献５）、Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属に属する植物の抽出物（特許文献２）が報告されている。
【０００７】
【特許文献１】
特開２００２−３０２４５２号公報
【特許文献２】
特開２００３−５５２４５号公報
【特許文献３】
特開２００２−１７９５８３号公報
【特許文献４】
特開２０００−１９１４９８号公報
【特許文献５】
特開２００２−２９９８０号公報
【特許文献６】
特開２００１−３１６２７５号公報
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、第一に、天然物の中からヒスタミン遊離抑制作用を有するものを見いだし、それを有効成分とした抗アレルギー剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第二に、天然物の中からコラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はエストロゲン様作用を有するものを見いだし、それを有効成分とした抗老化剤を提供することを目的とする。
さらに、本発明は、第三に、天然物の中から抗アレルギー作用又は抗老化作用を有するものを見いだし、それを配合した抗アレルギー用又は抗老化用皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
上記目的を解決するため、本発明の抗アレルギー剤又は抗老化剤は、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とし、本発明の抗アレルギー用又は抗老化用皮膚外用剤は、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を配合したことを特徴とする。
本発明の抗アレルギー剤において、前記抽出物がヒスタミン遊離抑制作用を有することが好ましく、本発明の抗老化剤において、前記抽出物がコラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及びエストロゲン様作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することが好ましい。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明において、「Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物」には、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１１】
抽出原料として用いる植物は、Ｓｔｒｉｇａ属に属する限り特に限定されるものではなく、例えば、独脚金（Ｓｔｒｉｇａ ａｓｉａｔｉｃａ （Ｌ．） Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ．）、小白花蘇（Ｓｔｒｉｇａ ｍａｓｕｒｉａ （Ｂｕｃｈ．−Ｈａｍ． ｅｘ Ｂｅｎｔｈ．））等を抽出原料として用いることができる。これらのうち特に独脚金を抽出原料として用いることが好ましい。独脚金は中国では全草を薬用にし、小児の栄養不良、小児の腹下し、黄疸型肝炎等に用いられているが、抗アレルギー作用及び抗老化作用を有することはこれまで知られていなかった。独脚金は、ゴマノハグサ科に属する一年生草本であって、広東、広西、貴州、福建等、中国南部に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
【００１２】
抽出原料として用いる植物の構成部位は特に限定されるものではなく、例えば、全草、葉、茎、花、樹皮、種子、果実、果核等の構成部位を抽出原料として用いることができる。これらのうち特に全草を抽出原料として用いることが好ましい。
【００１３】
Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物に含有される抗アレルギー物質又は抗老化物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物から抗アレルギー作用物質又は抗老化物質を抽出することができる。例えば、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。この際、抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１４】
抽出溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１５】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００１６】
水と親水性有機溶媒との混合液を抽出溶媒として使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１０〜９０質量部添加することが好ましい。
【００１７】
本発明において、抗アレルギー物質又は抗老化物質を抽出するにあたり特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより、抗アレルギー作用又は抗老化作用を有する抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）であり、抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃で１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃で３０分〜４時間程度である。
【００１８】
得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００１９】
得られた抽出液はそのままでも抗アレルギー剤又は抗老化剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の製剤化は常法に従って行うことができる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができ、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を粉末状、果粒状、錠剤状等、任意の剤形に製剤化することができる。
【００２０】
Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚外用剤等に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２１】
以上のようにして得られるＳｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は、抗アレルギー作用又は抗老化作用を有しており、それぞれの作用を利用して抗アレルギー剤又は抗老化剤の有効成分として使用することができる。
【００２２】
ここで、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗アレルギー作用は、例えば、ヒスタミン遊離抑制作用に基づいて発揮される。但し、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗アレルギー作用は、上記作用に基づいて発揮される抗アレルギー作用に限定されるわけではない。なお、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は、ヒスタミン遊離抑制作用を有しているので、ヒスタミン遊離抑制剤の有効成分として利用することもできる。
【００２３】
また、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗老化作用は、例えば、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及びエストロゲン様作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。但し、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるわけではない。なお、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はエストロゲン様作用を有しているので、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又はエストロゲン様作用剤の有効成分として利用することもできる。
【００２４】
Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は、抗アレルギー作用又は抗老化作用を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているので、皮膚外用剤に配合するのに好適であり、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を配合した皮膚外用剤を抗アレルギー用又は抗老化用皮膚外用剤として使用することができる。皮膚外用剤には、本発明の抗アレルギー剤又は抗老化剤のいずれか１種を配合してもよいし、２種以上を組み合わせて配合してもよい。
【００２５】
ここで、「皮膚外用剤」とは、皮膚に適用される各種薬剤を意味し、例えば、化粧料、医薬部外品、医薬品等が含まれる。皮膚外用剤の具体例としては、肌に対するものとして、軟膏、パップ、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー等が挙げられ、頭皮に対するものとして、トニック、リンス、シャンプー、アストリンゼント等が挙げられる。
【００２６】
本発明の皮膚外用剤におけるＳｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の配合量は、皮膚外用剤の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は標準的な抽出物に換算して約０．００５〜１０重量％である。
【００２７】
本発明の皮膚外用剤には、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗アレルギー作用及び抗老化作用の妨げにならない限り、その皮膚外用剤の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を使用することができる。本発明の皮膚外用剤は、皮膚の老化防止・改善に関し、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物のみが主剤となるものに限られるわけではない。
【００２８】
本発明の皮膚外用剤において、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物とともに皮膚外用剤構成成分として利用可能なものとしては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素消去剤等が挙げられ、上記構成成分を併用した場合、併用された構成成分との間の相乗作用が、通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。
【００２９】
Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を配合した皮膚化粧料を製造する場合、他の製造原料の選択が制限されることはほとんどなく、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等の一般的な基剤や助剤はいずれも使用可能である。
【００３０】
以上説明した本発明の抗アレルギー剤、抗老化剤又は皮膚外用剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００３１】
【実施例】
以下、製造実施例、試験例、実施例及び配合例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は、下記の各例に何ら限定されるものではない。
【００３２】
〔製造例１〕
独脚金（Ｓｔｒｉｇａ ａｓｉａｔｉｃａ （Ｌ．） Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ．）の全草の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに水、５０％エタノール（水とエタノールとの重量比１：１）、エタノール２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃、２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、さらに乾燥して各部位の抽出物を得た。抽出物の収率は表１のとおりであった。
【００３３】
【００３４】
〔試験例１〕ヒスタミン遊離抑制試験
製造例１で得られた植物抽出物について、下記の試験法によりヒスタミン遊離抑制作用を試験した。細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、本試験では、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価した。
【００３５】
２５ｍＬの培養フラスコに入れた培地（１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭ培地；以下同じ）にＲＢＬ−２Ｈ３細胞１．０×１０６個を播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で４日間培養した。次いでトリプシン処理し、遠心分離（８００ｒｐｍ，４分間）して細胞を集めた。得られた細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬで培地に懸濁し、そこにマウスモノクローナル抗ジニトロフェニル基ＩｇＥ（ＤＮＰ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ）（シグマ社製）を０．５μｇ／ｍＬの濃度で添加した。この細胞浮遊液を９６穴プレートの１穴に付き１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。
【００３６】
培養終了後、各穴中の培地を除去し、シラガニアン緩衝液で２回洗浄した。次に上記緩衝液３０μＬ及び試料溶液１０μＬを加え、３７℃で１０分間インキュベーションした。次いで、ジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）１０μＬを加え、更に３７℃で１５分間インキュベーションした。その後、氷冷下で上清１０μＬを新たな９６穴プレートに移し替え、これに１ｍｍｏｌ／Ｌ ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミド溶液１０μＬを加え、３７℃で１時間インキュベーションした。
【００３７】
反応終了後、０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣＯ−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液２５０μＬを加え、マイクロプレートリーダーにて６５０ｎｍを対照に４１５ｎｍにおける吸光度Ａを測定した。試料溶液の代りにシラガニアン緩衝液を添加した細胞上清についても同様の処理と吸光度測定を行った（このとき測定された吸光度をＢとした）。また、細胞上清と０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣＯ−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液を同様の処理で反応させたものについても、吸光度測定を行った（このとき測定された吸光度をＣとした）。同様の操作をＤＮＰ−ＢＳＡのかわりにシラガニアン緩衝液を加えたものについても行った（このとき、測定された吸光度をＤとした）。そして、次式によりへキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を求めた。
へキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝［１−｛（Ａ−Ｃ−Ｄ）／（Ｂ−Ｄ）｝］×１００
【００３８】
試料濃度を段階的に減少させてヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を測定し、ヘキソサミニダーゼの遊離を５０％抑制する試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。その結果を表２に示す。
【００３９】
【００４０】
〔試験例２〕コラーゲン産生促進作用試験
製造例１で得られた植物抽出物について、下記の試験法によりコラーゲン産生促進作用を試験した。
ヒトの線維芽細胞を、１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ及び１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸ナトリウムを含むＭＥＭ培地で、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて培養した後、トリプシン処理により細胞を集め、２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し、９６穴マイクロプレートに１００μＬずつ播種した。次いで、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した後、培地を試料添加培地（試料濃度：２５ｐｐｍ（μｇ／ｍＬ））１５０μＬに交換し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で３日間培養した。
【００４１】
この培養上清を９０μＬ採取しＥＬＩＳＡプレートに移し、抗ヒトコラーゲンタイプ１抗体（ケミコン社製）を用いたＥＬＩＳＡ法により、産生されたコラーゲンを、ヒトコラーゲンタイプ１を標準品とする検量線を用いて定量した。
コラーゲン産生促進率（％）は、試料無添加時の値を１００％として算出した。その結果を表３に示す。
【００４２】
【００４３】
〔試験例３〕ヒアルロン酸産生促進作用試験
製造例１で得られた植物抽出物について、下記の試験法によりヒアルロン酸産生促進作用を試験した。
ヒト正常新生児線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）１×１０６個を、７５ｃｍ２フラスコを用いて１０％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地（ｐＨ７．２）で３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて７日間培養した。トリプシン処理により細胞を集め、１％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地を用いて２．２×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し９６穴のマイクロプレートに１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。翌日、試料（試料濃度：５０ｐｐｍ（μｇ／ｍＬ））を溶解した１％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地を各ウェルに１００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で３日間培養した。
【００４４】
産生されたヒアルロン酸の定量はＥＬＩＳＡ法を利用する以下の方法により行った。すなわち、培養上清１０μＬを９０μＬのＰＢＳ（−）で１０倍希釈し、その５０μＬを、あらかじめヒアルロン酸でコーティングしておいたＥＬＩＳＡプレートに添加して各種抗体（ウシ鼻軟骨プロテオグリカンモノマー（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製）、マウスモノクローナル抗ケラタン硫酸抗体（生化学工業社製）、ＨＲＰ標識ウサギ抗マウスＩｇＧ１抗体（ＺＹＭＥＤ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製））を用いてＥＬＩＳＡを行った。ヒアルロン酸の定量は検量線を用いて行った。
ヒアルロン酸産生促進率は、試料無添加時の値を１００％として算出した。その結果を表４に示す。
【００４５】
【００４６】
〔試験例４〕エストロゲン様作用試験
製造例１で得られた植物抽出物について、下記の試験法によりエストロゲン様作用を試験した。
エストロゲン依存性細胞の増殖に対する影響を調べるＴｈｏｍａｓらの方法（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ． Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ． ２８Ａ， ５９５−６０２， １９９２）に準拠して試験を行った。
ヒト乳ガン由来のＭＣＦ−７細胞を７５ｃｍ２フラスコでコンフルエント様になるまで培養し、トリプシン処理により、このＭＣＦ−７細胞を集め、１０％ＦＢＳ（活性炭処理済み）、１％ＮＥＡＡ及び１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含みフェノールレッドを含まないＭＥＭ培地（以下、「ＭＥＭ培地」と略す）を用いて、３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製した。
【００４７】
調製したＭＣＦ−７細胞を２４穴プレートに０．９ｍＬずつ播種し、これを定着させるために３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で培養した。６時間後（０日日）、ＭＥＭ培地で終濃度の１０倍の濃度（５００ｐｐｍ（μｇ／ｍＬ））に調製した試料溶液１００μＬを上記プレートに添加し、培養を続けた。培養開始から６日目、培地を０．９７ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＴＴを含むＭＥＭ培地に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【００４８】
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。
【００４９】
陽性対照としては、０．０２ｐｐｍエチニルエストラジオールを使用した。エストロゲン様作用（エストロゲン依存性増殖作用）の強さは、試料無添加時の吸光度を１００％として次式により算出した。
エストロゲン様作用（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中、「Ａ」は試料添加の場合の吸光度、「Ｂ」は試料無添加の場合の吸光度を表す。
試験の結果を表５に示す。
【００５０】
【００５１】
〔試験例５〕
製造例１で得られた５０％エタノール抽出物を配合した乳液（以下「実施例乳液」という。）を常法に従って調整した。実施例乳液の組成を以下に示す。
【００５２】
独脚金の全草５０％エタノール抽出物 １．０ｇ
セチルアルコール ０．５ｇ
ミツロウ ２．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（１０Ｅ．０） １．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル １．０ｇ
ヒアルロン酸 ０．１ｇ
プロピレングリコール ５．０ｇ
エタノール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．３ｇ
香料 ０．０３ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００５３】
実施例乳液と、独脚金の全草抽出物を含まないほかは実施例乳液と同じ組成の比較例乳液について、下記の評価試験を行った。
被験者：２１〜４０歳の女性多数の中から、皮溝・皮丘が消え、広範囲の角質がめくれている（表６に示す評点が１）、又は皮溝・皮丘が不鮮明で角質が部分的にめくれている（表６に示す評点が２）肌荒れ状態と判定された２０名を選抜して被験者とした。
塗布試験：各被験者に、顔の右半分には実施例乳液を、左半分には比較例乳液を、朝夕各１回、３０日間塗布させた。
【００５４】
［判定１：肌荒れ改善効果］
塗布試験終了後、シルフロ（ＦＬＥＸＩＣＬ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＳ ＬＴＤ製）によるレプリカ法を用いて顔のレプリカをとり、５０倍の顕微鏡で皮紋の状態及び角質剥離状態を観察し、表６に示す評価基準で肌の状態を判定した。判定結果を表７に示す。
【００５５】
【００５６】
【００５７】
表７に示されるように、実施例乳液を塗布した領域は、比較例乳液を塗布した領域に比べて顕著に肌荒れ（皮膚の老化）が改善された。
【００５８】
［判定２・官能評価］
使用感と肌への効果について、実施例乳液と比較例乳液とを比較した場合の優劣を被験者全員に質問した。回答の集計結果を表８に示す。
【００５９】
［表８］
評 価 項 目 実施例乳液が良い 比較例乳液が良い 優劣なし
肌へのなじみ １０名 ４名 ６名
しっとり感 １７名 １名 ２名
肌へののび １６名 ３名 １名
肌荒れ改善の満足感 １５名 ２名 ３名
肌色改善の満足感 １７名 ２名 １名
シワの数と深さの改善 １７名 １名 ２名
【００６０】
表８に示される結果より、官能評価によっても上記判定１と同様の効果と優れた使用感が確認された。
判定１及び２の結果より、独脚金の全草抽出物を配合した皮膚外用剤が皮膚の老化防止・改善作用（肌荒れ改善作用）を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れていることが確認された。
【００６１】
〔配合例１〕
下記の組成の乳液を常法により製造した。
独脚金の水抽出物 １ｇ
ホホバオイル ４ｇ
オリーブオイル ２ｇ
スクワラン ２ｇ
セタノール ２ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ２ｇ
黄杞エキス ０．１ｇ
イチョウ葉エキス ０．１ｇ
コンキオリン ０．１ｇ
オウバクエキス ０．１ｇ
カミツレエキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００６２】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
独脚金の５０％エタノール抽出物 ２ｇ
グリセリン ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
海藻エキス ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー ０．５ｇ
クジンエキス ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００６３】
〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
独脚金のエタノール抽出物 １ｇ
流動パラフィン ５ｇ
サラシミツロウ ４ｇ
セタノール ３ｇ
スクワラン １０ｇ
ラノリン ２ｇ
ステアリン酸 １ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ６ｇ
酵母抽出液 ０．１ｇ
シソ抽出液 ０．１ｇ
シナノキ抽出液 ０．１ｇ
ジユ抽出液 ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００６４】
〔配合例４〕
下記組成のパックを常法により製造した。
独脚金のエタノール抽出物 ５ｇ
ポリビニルアルコール １５ｇ
ポリエチレングリコール ３ｇ
プロピレングリコール ７ｇ
エタノール １０ｇ
セージ抽出液 ０．１ｇ
トウキ抽出液 ０．１ｇ
ニンジン抽出液 ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸エチル ０．０５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００６５】
【発明の効果】
本発明によれば、抗アレルギー剤又は抗老化剤が提供される。また、本発明によれば、抗アレルギー用又は抗老化用皮膚外用剤が提供される。
本発明の抗アレルギー剤又は抗アレルギー用皮膚外用剤によれば、ヒスタミン遊離抑制作用を通じて、ヒスタミンが関与するＩ型アレルギーを効果的に予防及び／又は治療できるものと考えられる。また、本発明の抗老化剤又は抗老化用皮膚外用剤によれば、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はエストロゲン様作用を通じて、皮膚のしわの形成や弾力性低下等の老化現象を効果的に予防・治療することができる。
【発明の属する技術分野】
本発明は、植物からの抽出物を有効成分とする抗アレルギー剤及び抗老化剤、並びに植物からの抽出物を配合した皮膚外用剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
ヒスタミン遊離は、肥満細胞内のヒスタミンが細胞外に遊離する現象で、遊離されたヒスタミンが炎症反応を引き起こす。このため、ヒスタミン遊離を阻害・抑制する物質によりアレルギー性疾患や炎症性疾患を予防・治療する試みがなされており、ヒスタミン遊離抑制作用を有する生薬としては、これまでに、五斂子の抽出物（特許文献１）、Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属に属する植物の抽出物（特許文献２）、ランタナの根部からの抽出物（特許文献３）が報告されている。
【０００３】
皮膚の真皮・表皮は、表皮細胞、線維芽細胞及びこれらの細胞の外にあって皮膚構造を支持するエラスチン、コラーゲン、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類等からなる細胞外マトリックスによって構成されており、若い皮膚においてはこれらの皮膚組織の相互作用が恒常性を保つことにより水分保持、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。
【０００４】
ところが、紫外線、空気の著しい乾燥、過度の皮膚洗浄等、ある種の外的因子の影響があったり加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲンは産生量が減少するとともに架橋による弾性低下を起こす。また、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類は細胞間隙への水分保持、組織の潤滑性と柔軟性の保持等、多くの機能を有しているが、これらの機能は加齢によって低下する。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性は低下し、角質が異常剥離を始めるので、肌は張りや艶を失い、荒れ、シワ、くすみ等の老化症状を呈するようになる。
【０００５】
このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン、ヒアルロン酸をはじめとするムコ多糖類等の真皮マトリックス成分の減少・変性が関与している。したがって、コラーゲン及びヒアルロン酸の産生促進は、皮膚の老化を防止・改善する上で重要である。コラーゲン合成促進作用を有する生薬としては、例えば、甘草葉抽出物（特許文献４）、ハス胚芽抽出物（特許文献５）、Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属に属する植物の抽出物（特許文献２）が報告されている。
【０００６】
また、加齢を伴う皮膚老化の一因は、女性ホルモンの一種であるエストロゲンの分泌が減退することにある。すなわち、エストロゲンは成人女性の健康維持に深く関わっていて、その分泌不足は種々の内科的疾患を招くほか、肌の過敏症、弾力性低下、潤いの減少等、好ましくない肌の変化の原因となることが知られている。したがって、エストロゲン分泌減退を補うことは、皮膚の老化を防止・改善する上で重要である。エストロゲン様作用を有する生薬としては、例えば、月桃抽出物（特許文献６）、ハス胚芽抽出物（特許文献５）、Ｃｈｏｅｒｏｓｐｏｎｄｉａｓ属に属する植物の抽出物（特許文献２）が報告されている。
【０００７】
【特許文献１】
特開２００２−３０２４５２号公報
【特許文献２】
特開２００３−５５２４５号公報
【特許文献３】
特開２００２−１７９５８３号公報
【特許文献４】
特開２０００−１９１４９８号公報
【特許文献５】
特開２００２−２９９８０号公報
【特許文献６】
特開２００１−３１６２７５号公報
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、第一に、天然物の中からヒスタミン遊離抑制作用を有するものを見いだし、それを有効成分とした抗アレルギー剤を提供することを目的とする。
また、本発明は、第二に、天然物の中からコラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はエストロゲン様作用を有するものを見いだし、それを有効成分とした抗老化剤を提供することを目的とする。
さらに、本発明は、第三に、天然物の中から抗アレルギー作用又は抗老化作用を有するものを見いだし、それを配合した抗アレルギー用又は抗老化用皮膚外用剤を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】
上記目的を解決するため、本発明の抗アレルギー剤又は抗老化剤は、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とし、本発明の抗アレルギー用又は抗老化用皮膚外用剤は、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を配合したことを特徴とする。
本発明の抗アレルギー剤において、前記抽出物がヒスタミン遊離抑制作用を有することが好ましく、本発明の抗老化剤において、前記抽出物がコラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及びエストロゲン様作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することが好ましい。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明において、「Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物」には、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物を抽出原料として得られる抽出液、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００１１】
抽出原料として用いる植物は、Ｓｔｒｉｇａ属に属する限り特に限定されるものではなく、例えば、独脚金（Ｓｔｒｉｇａ ａｓｉａｔｉｃａ （Ｌ．） Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ．）、小白花蘇（Ｓｔｒｉｇａ ｍａｓｕｒｉａ （Ｂｕｃｈ．−Ｈａｍ． ｅｘ Ｂｅｎｔｈ．））等を抽出原料として用いることができる。これらのうち特に独脚金を抽出原料として用いることが好ましい。独脚金は中国では全草を薬用にし、小児の栄養不良、小児の腹下し、黄疸型肝炎等に用いられているが、抗アレルギー作用及び抗老化作用を有することはこれまで知られていなかった。独脚金は、ゴマノハグサ科に属する一年生草本であって、広東、広西、貴州、福建等、中国南部に分布しており、これらの地域から容易に入手可能である。
【００１２】
抽出原料として用いる植物の構成部位は特に限定されるものではなく、例えば、全草、葉、茎、花、樹皮、種子、果実、果核等の構成部位を抽出原料として用いることができる。これらのうち特に全草を抽出原料として用いることが好ましい。
【００１３】
Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物に含有される抗アレルギー物質又は抗老化物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物から抗アレルギー作用物質又は抗老化物質を抽出することができる。例えば、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。この際、抽出原料の乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物は、ヘキサン、ベンゼン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００１４】
抽出溶媒としては、水若しくは親水性有機溶媒又はこれらの混合液を室温又は溶媒の沸点以下の温度で用いることが好ましい。
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等の他、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、ろ過、イオン交換、浸透圧の調整、緩衝化等が含まれる。従って、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００１５】
抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００１６】
水と親水性有機溶媒との混合液を抽出溶媒として使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１０〜９０質量部添加することが好ましい。
【００１７】
本発明において、抗アレルギー物質又は抗老化物質を抽出するにあたり特殊な抽出方法を採用する必要はなく、室温又は還流加熱下で、任意の装置を用いて抽出することができる。具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、必要に応じて時々攪拌しながら、３０分〜２時間静置して可溶性成分を溶出した後、ろ過して固形物を除去し、得られた抽出液から抽出溶媒を留去し、乾燥することにより、抗アレルギー作用又は抗老化作用を有する抽出物が得られる。抽出溶媒量は通常、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）であり、抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９５℃で１〜４時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃で３０分〜４時間程度である。
【００１８】
得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００１９】
得られた抽出液はそのままでも抗アレルギー剤又は抗老化剤として使用することができるが、濃縮液又はその乾燥物としたものの方が利用しやすい。Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の製剤化は常法に従って行うことができる。製剤化する場合、保存や取扱いを容易にするために、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容され得るキャリアーその他任意の助剤を添加することができ、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を粉末状、果粒状、錠剤状等、任意の剤形に製剤化することができる。
【００２０】
Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚外用剤等に添加する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。精製は具体的には、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等によって行うことができる。
【００２１】
以上のようにして得られるＳｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は、抗アレルギー作用又は抗老化作用を有しており、それぞれの作用を利用して抗アレルギー剤又は抗老化剤の有効成分として使用することができる。
【００２２】
ここで、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗アレルギー作用は、例えば、ヒスタミン遊離抑制作用に基づいて発揮される。但し、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗アレルギー作用は、上記作用に基づいて発揮される抗アレルギー作用に限定されるわけではない。なお、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は、ヒスタミン遊離抑制作用を有しているので、ヒスタミン遊離抑制剤の有効成分として利用することもできる。
【００２３】
また、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗老化作用は、例えば、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及びエストロゲン様作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。但し、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるわけではない。なお、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はエストロゲン様作用を有しているので、コラーゲン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤又はエストロゲン様作用剤の有効成分として利用することもできる。
【００２４】
Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物は、抗アレルギー作用又は抗老化作用を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているので、皮膚外用剤に配合するのに好適であり、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を配合した皮膚外用剤を抗アレルギー用又は抗老化用皮膚外用剤として使用することができる。皮膚外用剤には、本発明の抗アレルギー剤又は抗老化剤のいずれか１種を配合してもよいし、２種以上を組み合わせて配合してもよい。
【００２５】
ここで、「皮膚外用剤」とは、皮膚に適用される各種薬剤を意味し、例えば、化粧料、医薬部外品、医薬品等が含まれる。皮膚外用剤の具体例としては、肌に対するものとして、軟膏、パップ、クリーム、乳液、ローション、パック、ゼリー等が挙げられ、頭皮に対するものとして、トニック、リンス、シャンプー、アストリンゼント等が挙げられる。
【００２６】
本発明の皮膚外用剤におけるＳｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の配合量は、皮膚外用剤の種類や抽出物の生理活性等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は標準的な抽出物に換算して約０．００５〜１０重量％である。
【００２７】
本発明の皮膚外用剤には、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物の抗アレルギー作用及び抗老化作用の妨げにならない限り、その皮膚外用剤の製造に通常使用される各種主剤及び助剤、その他任意の助剤を使用することができる。本発明の皮膚外用剤は、皮膚の老化防止・改善に関し、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物のみが主剤となるものに限られるわけではない。
【００２８】
本発明の皮膚外用剤において、Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物とともに皮膚外用剤構成成分として利用可能なものとしては、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素消去剤等が挙げられ、上記構成成分を併用した場合、併用された構成成分との間の相乗作用が、通常期待される以上の優れた使用効果をもたらすことがある。
【００２９】
Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を配合した皮膚化粧料を製造する場合、他の製造原料の選択が制限されることはほとんどなく、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等の一般的な基剤や助剤はいずれも使用可能である。
【００３０】
以上説明した本発明の抗アレルギー剤、抗老化剤又は皮膚外用剤は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【００３１】
【実施例】
以下、製造実施例、試験例、実施例及び配合例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明は、下記の各例に何ら限定されるものではない。
【００３２】
〔製造例１〕
独脚金（Ｓｔｒｉｇａ ａｓｉａｔｉｃａ （Ｌ．） Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ．）の全草の乾燥物を細切りしたもの２００ｇに水、５０％エタノール（水とエタノールとの重量比１：１）、エタノール２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃、２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行った。得られた抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、さらに乾燥して各部位の抽出物を得た。抽出物の収率は表１のとおりであった。
【００３３】
〔試験例１〕ヒスタミン遊離抑制試験
製造例１で得られた植物抽出物について、下記の試験法によりヒスタミン遊離抑制作用を試験した。細胞内のヒスタミンが遊離されると同時にヘキソサミニダーゼも遊離されることから、本試験では、ヘキソサミニダーゼ遊離を指標にヒスタミン遊離抑制作用を評価した。
【００３５】
２５ｍＬの培養フラスコに入れた培地（１５％ＦＢＳ添加Ｓ−ＭＥＭ培地；以下同じ）にＲＢＬ−２Ｈ３細胞１．０×１０６個を播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で４日間培養した。次いでトリプシン処理し、遠心分離（８００ｒｐｍ，４分間）して細胞を集めた。得られた細胞を４．０×１０５ｃｅｌｌ／ｍＬで培地に懸濁し、そこにマウスモノクローナル抗ジニトロフェニル基ＩｇＥ（ＤＮＰ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＩｇＥ）（シグマ社製）を０．５μｇ／ｍＬの濃度で添加した。この細胞浮遊液を９６穴プレートの１穴に付き１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で２４時間培養した。
【００３６】
培養終了後、各穴中の培地を除去し、シラガニアン緩衝液で２回洗浄した。次に上記緩衝液３０μＬ及び試料溶液１０μＬを加え、３７℃で１０分間インキュベーションした。次いで、ジニトロフェニル化ウシ血清アルブミン（ＤＮＰ−ＢＳＡ）１０μＬを加え、更に３７℃で１５分間インキュベーションした。その後、氷冷下で上清１０μＬを新たな９６穴プレートに移し替え、これに１ｍｍｏｌ／Ｌ ｐ−ニトロフェニル−Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミド溶液１０μＬを加え、３７℃で１時間インキュベーションした。
【００３７】
反応終了後、０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣＯ−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液２５０μＬを加え、マイクロプレートリーダーにて６５０ｎｍを対照に４１５ｎｍにおける吸光度Ａを測定した。試料溶液の代りにシラガニアン緩衝液を添加した細胞上清についても同様の処理と吸光度測定を行った（このとき測定された吸光度をＢとした）。また、細胞上清と０．１ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣＯ−Ｎａ２ＨＣＯ３溶液を同様の処理で反応させたものについても、吸光度測定を行った（このとき測定された吸光度をＣとした）。同様の操作をＤＮＰ−ＢＳＡのかわりにシラガニアン緩衝液を加えたものについても行った（このとき、測定された吸光度をＤとした）。そして、次式によりへキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を求めた。
へキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）＝［１−｛（Ａ−Ｃ−Ｄ）／（Ｂ−Ｄ）｝］×１００
【００３８】
試料濃度を段階的に減少させてヘキソサミニダーゼ遊離抑制率（％）を測定し、ヘキソサミニダーゼの遊離を５０％抑制する試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。その結果を表２に示す。
【００３９】
〔試験例２〕コラーゲン産生促進作用試験
製造例１で得られた植物抽出物について、下記の試験法によりコラーゲン産生促進作用を試験した。
ヒトの線維芽細胞を、１０％ＦＢＳ、１％ＮＥＡＡ及び１ｍｍｏｌ／Ｌピルビン酸ナトリウムを含むＭＥＭ培地で、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて培養した後、トリプシン処理により細胞を集め、２×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し、９６穴マイクロプレートに１００μＬずつ播種した。次いで、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した後、培地を試料添加培地（試料濃度：２５ｐｐｍ（μｇ／ｍＬ））１５０μＬに交換し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で３日間培養した。
【００４１】
この培養上清を９０μＬ採取しＥＬＩＳＡプレートに移し、抗ヒトコラーゲンタイプ１抗体（ケミコン社製）を用いたＥＬＩＳＡ法により、産生されたコラーゲンを、ヒトコラーゲンタイプ１を標準品とする検量線を用いて定量した。
コラーゲン産生促進率（％）は、試料無添加時の値を１００％として算出した。その結果を表３に示す。
【００４２】
〔試験例３〕ヒアルロン酸産生促進作用試験
製造例１で得られた植物抽出物について、下記の試験法によりヒアルロン酸産生促進作用を試験した。
ヒト正常新生児線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）１×１０６個を、７５ｃｍ２フラスコを用いて１０％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地（ｐＨ７．２）で３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下にて７日間培養した。トリプシン処理により細胞を集め、１％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地を用いて２．２×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し９６穴のマイクロプレートに１００μＬずつ播種し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で一晩培養した。翌日、試料（試料濃度：５０ｐｐｍ（μｇ／ｍＬ））を溶解した１％ＦＢＳを含むα−ＭＥＭ培地を各ウェルに１００μＬずつ添加し、３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で３日間培養した。
【００４４】
産生されたヒアルロン酸の定量はＥＬＩＳＡ法を利用する以下の方法により行った。すなわち、培養上清１０μＬを９０μＬのＰＢＳ（−）で１０倍希釈し、その５０μＬを、あらかじめヒアルロン酸でコーティングしておいたＥＬＩＳＡプレートに添加して各種抗体（ウシ鼻軟骨プロテオグリカンモノマー（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ社製）、マウスモノクローナル抗ケラタン硫酸抗体（生化学工業社製）、ＨＲＰ標識ウサギ抗マウスＩｇＧ１抗体（ＺＹＭＥＤ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製））を用いてＥＬＩＳＡを行った。ヒアルロン酸の定量は検量線を用いて行った。
ヒアルロン酸産生促進率は、試料無添加時の値を１００％として算出した。その結果を表４に示す。
【００４５】
〔試験例４〕エストロゲン様作用試験
製造例１で得られた植物抽出物について、下記の試験法によりエストロゲン様作用を試験した。
エストロゲン依存性細胞の増殖に対する影響を調べるＴｈｏｍａｓらの方法（Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ． Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ． ２８Ａ， ５９５−６０２， １９９２）に準拠して試験を行った。
ヒト乳ガン由来のＭＣＦ−７細胞を７５ｃｍ２フラスコでコンフルエント様になるまで培養し、トリプシン処理により、このＭＣＦ−７細胞を集め、１０％ＦＢＳ（活性炭処理済み）、１％ＮＥＡＡ及び１ｍＭピルビン酸ナトリウムを含みフェノールレッドを含まないＭＥＭ培地（以下、「ＭＥＭ培地」と略す）を用いて、３×１０４ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調製した。
【００４７】
調製したＭＣＦ−７細胞を２４穴プレートに０．９ｍＬずつ播種し、これを定着させるために３７℃、５％ＣＯ２−９５％ａｉｒの条件下で培養した。６時間後（０日日）、ＭＥＭ培地で終濃度の１０倍の濃度（５００ｐｐｍ（μｇ／ｍＬ））に調製した試料溶液１００μＬを上記プレートに添加し、培養を続けた。培養開始から６日目、培地を０．９７ｍｍｏｌ／Ｌ ＭＴＴを含むＭＥＭ培地に交換し、２時間培養後、培地をイソプロパノールに交換して細胞内に生成したブルーホルマザンを抽出した。溶出したブルーホルマザンを含有するイソプロパノールについて、ブルーホルマザンの吸収極大点がある５７０ｎｍの吸光度を測定した。
【００４８】
なお、付着細胞の影響を補正するため、同時に６５０ｎｍの吸光度も測定し、両吸光度の差をもってブルーホルマザンの生成量に比例する値とした（下記の計算式における吸光度はこの補正済み吸光度である）。
【００４９】
陽性対照としては、０．０２ｐｐｍエチニルエストラジオールを使用した。エストロゲン様作用（エストロゲン依存性増殖作用）の強さは、試料無添加時の吸光度を１００％として次式により算出した。
エストロゲン様作用（％）＝Ａ／Ｂ×１００
上記式中、「Ａ」は試料添加の場合の吸光度、「Ｂ」は試料無添加の場合の吸光度を表す。
試験の結果を表５に示す。
【００５０】
〔試験例５〕
製造例１で得られた５０％エタノール抽出物を配合した乳液（以下「実施例乳液」という。）を常法に従って調整した。実施例乳液の組成を以下に示す。
【００５２】
独脚金の全草５０％エタノール抽出物 １．０ｇ
セチルアルコール ０．５ｇ
ミツロウ ２．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（１０Ｅ．０） １．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル １．０ｇ
ヒアルロン酸 ０．１ｇ
プロピレングリコール ５．０ｇ
エタノール ３．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．３ｇ
香料 ０．０３ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００５３】
実施例乳液と、独脚金の全草抽出物を含まないほかは実施例乳液と同じ組成の比較例乳液について、下記の評価試験を行った。
被験者：２１〜４０歳の女性多数の中から、皮溝・皮丘が消え、広範囲の角質がめくれている（表６に示す評点が１）、又は皮溝・皮丘が不鮮明で角質が部分的にめくれている（表６に示す評点が２）肌荒れ状態と判定された２０名を選抜して被験者とした。
塗布試験：各被験者に、顔の右半分には実施例乳液を、左半分には比較例乳液を、朝夕各１回、３０日間塗布させた。
【００５４】
［判定１：肌荒れ改善効果］
塗布試験終了後、シルフロ（ＦＬＥＸＩＣＬ ＤＥＶＥＬＯＰＭＥＮＴＳ ＬＴＤ製）によるレプリカ法を用いて顔のレプリカをとり、５０倍の顕微鏡で皮紋の状態及び角質剥離状態を観察し、表６に示す評価基準で肌の状態を判定した。判定結果を表７に示す。
【００５５】
表７に示されるように、実施例乳液を塗布した領域は、比較例乳液を塗布した領域に比べて顕著に肌荒れ（皮膚の老化）が改善された。
【００５８】
［判定２・官能評価］
使用感と肌への効果について、実施例乳液と比較例乳液とを比較した場合の優劣を被験者全員に質問した。回答の集計結果を表８に示す。
【００５９】
［表８］
評 価 項 目 実施例乳液が良い 比較例乳液が良い 優劣なし
肌へのなじみ １０名 ４名 ６名
しっとり感 １７名 １名 ２名
肌へののび １６名 ３名 １名
肌荒れ改善の満足感 １５名 ２名 ３名
肌色改善の満足感 １７名 ２名 １名
シワの数と深さの改善 １７名 １名 ２名
【００６０】
表８に示される結果より、官能評価によっても上記判定１と同様の効果と優れた使用感が確認された。
判定１及び２の結果より、独脚金の全草抽出物を配合した皮膚外用剤が皮膚の老化防止・改善作用（肌荒れ改善作用）を有するとともに、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れていることが確認された。
【００６１】
〔配合例１〕
下記の組成の乳液を常法により製造した。
独脚金の水抽出物 １ｇ
ホホバオイル ４ｇ
オリーブオイル ２ｇ
スクワラン ２ｇ
セタノール ２ｇ
モノステアリン酸グリセリル ２ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．０） ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ２ｇ
黄杞エキス ０．１ｇ
イチョウ葉エキス ０．１ｇ
コンキオリン ０．１ｇ
オウバクエキス ０．１ｇ
カミツレエキス ０．１ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００６２】
〔配合例２〕
下記組成の化粧水を常法により製造した。
独脚金の５０％エタノール抽出物 ２ｇ
グリセリン ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ３ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） ０．５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル ０．１５ｇ
クエン酸 ０．１ｇ
クエン酸ソーダ ０．１ｇ
油溶性甘草エキス ０．１ｇ
海藻エキス ０．１ｇ
キシロビオースミクスチャー ０．５ｇ
クジンエキス ０．１ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００６３】
〔配合例３〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
独脚金のエタノール抽出物 １ｇ
流動パラフィン ５ｇ
サラシミツロウ ４ｇ
セタノール ３ｇ
スクワラン １０ｇ
ラノリン ２ｇ
ステアリン酸 １ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（２０Ｅ．０） １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル ３ｇ
１，３−ブチレングリコール ６ｇ
酵母抽出液 ０．１ｇ
シソ抽出液 ０．１ｇ
シナノキ抽出液 ０．１ｇ
ジユ抽出液 ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸メチル １．５ｇ
香料 ０．１ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００６４】
〔配合例４〕
下記組成のパックを常法により製造した。
独脚金のエタノール抽出物 ５ｇ
ポリビニルアルコール １５ｇ
ポリエチレングリコール ３ｇ
プロピレングリコール ７ｇ
エタノール １０ｇ
セージ抽出液 ０．１ｇ
トウキ抽出液 ０．１ｇ
ニンジン抽出液 ０．１ｇ
パラオキシ安息香酸エチル ０．０５ｇ
香料 ０．０５ｇ
精製水 残部（全量を１００ｇとする）
【００６５】
【発明の効果】
本発明によれば、抗アレルギー剤又は抗老化剤が提供される。また、本発明によれば、抗アレルギー用又は抗老化用皮膚外用剤が提供される。
本発明の抗アレルギー剤又は抗アレルギー用皮膚外用剤によれば、ヒスタミン遊離抑制作用を通じて、ヒスタミンが関与するＩ型アレルギーを効果的に予防及び／又は治療できるものと考えられる。また、本発明の抗老化剤又は抗老化用皮膚外用剤によれば、コラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用又はエストロゲン様作用を通じて、皮膚のしわの形成や弾力性低下等の老化現象を効果的に予防・治療することができる。
Claims (6)
- Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
- 前記抽出物がヒスタミン遊離抑制作用を有することを特徴とする請求項１記載の抗アレルギー剤。
- Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。
- 前記抽出物がコラーゲン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用及びエストロゲン様作用からなる群より選ばれる１種又は２種以上の作用を有することを特徴とする請求項３記載の抗老化剤。
- Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を配合したことを特徴とする抗アレルギー用皮膚外用剤。
- Ｓｔｒｉｇａ属に属する植物からの抽出物を配合したことを特徴とする抗老化用皮膚外用剤。
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