【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、セラミド産生促進剤に関し、より詳細には、皮膚表皮の角質細胞間脂質中のセラミド産生を促進することにより、皮膚のバリア機能および保湿機能を改善し、更には老化に伴う乾燥肌およびアトピー性皮膚炎などによる肌荒れの予防効果ならびに改善効果を有するセラミド産生促進剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚は、生体の最外層を覆い、外界との境界を形成して外界物質の浸入防止、水分を包含する体内成分の損失防止などの生命維持に必須なバリア機能を有している。角質の細胞間には、セラミド、コレステロールおよび脂肪酸を主成分とする脂質が多重な層板構造、いわゆるラメラ構造が形成されている。この層板構造が水分透過バリアとして重要な役割を果たしている。
【０００３】
特に角質におけるセラミドは、上記バリアの形成に必須な成分であると考えられている。しかし、このセラミドの代謝は、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって、健全な状態が損われることがある。その結果、角層中のセラミド量が減少して、例えば、皮膚の保湿機能およびバリア機能の低下を引き起こすことが数多く報告されている。
【０００４】
このような保湿機能またはバリア機能の低下を引き起こした皮膚に対し、セラミド産生を促進する物質を投与して細胞内での内的産生を促進させる技術が提案されている。
【０００５】
例えば、フレグランスジャーナル，１９９９年，第１０巻，ｐ．２３−２８は、このようなセラミド産生を促進する物質としてナイアシンアミドを用いることを開示している。また、他の技術としてセラミド自体を外部から直接皮膚細胞に補給する方法も知られている。しかし、いずれの技術においても、長期的な効果を認めることができず、かつ投与または補給された物質の安定性に欠けるという問題が指摘されている。
【０００６】
また、セラミド産生を促進する物質については、他にも幾つかの技術が開発されている（特許文献１）。しかし、皮膚外用剤および飲食物に使用し得るセラミド産生を促進する物質に関しては、いまだ充分なバリエーションの存在が確認されていない。
【０００７】
【特許文献１】特願２００２−３２７９１２号
【０００８】
【非特許文献１】フレグランスジャーナル，１９９９年，第１０巻，ｐ．２３−２８
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記問題の解決を課題とするものであり、その目的とするところは、生体自体が有するセラミド産生機能を健常に戻すことにより、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって減少した角層中のセラミド代謝を回復させて、セラミド量を増加させ、その結果、優れた、保湿機能およびバリア機能を有する皮膚を取り戻すことができるセラミド産生促進剤を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】
本発明は、ツバキ科植物の根と茎とを除く、前記植物由来の、水および有機溶媒にともに溶解性を示す抽出物を有効成分として含有する、セラミド産生促進剤である。
【００１１】
好ましい実施態様では、前記抽出物は、粗抽出工程と抽出工程とを経て得られる。
【００１２】
更に好ましい実施態様では、前記粗抽出工程に用いられる粗抽出溶媒が、水および３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液からなる群より選択される溶媒であり、そして前記抽出工程に用いられる抽出溶媒が、有機溶媒および７０重量％以上のアルコールを含有する水溶液からなる群より選択される少なくとも１種の溶媒である。
【００１３】
更に好ましい実施態様では、前記粗抽出工程に用いられる粗抽出溶媒が、有機溶媒および７０重量％以上のアルコールを含有する水溶液からなる群より選択される少なくとも１種の溶媒であり、そして前記抽出工程に用いられる抽出溶媒が、水および３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液からなる群より選択される溶媒である。
【００１４】
また更に好ましい実施態様では、前記ツバキ科植物は、つばき科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）ツバキ属（Ｃａｍｅｌｌｉａ Ｌ．）であるツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａｊａｐｏｎｉｃａ Ｌ．）、リンゴツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ ｖａｒ． ｍａｃｒｏｃａｒｐａ Ｍａｓａｍｕｎｅ）、ユキツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ ｓｕｂｓｐ． ｒｕｓｔｉｃａｎａ（Ｈｏｎｄａ）Ｋｉｔａｍｕｒａ）、タイワンヤマツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ ｓｕｂｓｐ． ｈｏｚａｎｅｓｉｓ（Ｈａｙａｔａ）Ｋｉｔａｍｕｒａ）、サザンカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ Ｓａｓａｎｑｕａ Ｔｈｕｎｂ．）、オキナワサザンカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｄｒｕｐｉｆｅｒａ Ｌｏｕｒｅｒｉｏ）、ヒマラヤサザンカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ Ｋｉｓｓｉｉ Ｗａｌｌ．）、トウツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｌｉｎｄｌｅｙ）、サルウインツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓａｌｕｅｎｅｎｓｉｓ Ｓｔａｐｆ）、ヒメサザンカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｌｕｔｃｈｕｅｎｓｉｓ Ｔ．Ｉｔｏ）、チャ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｓｓｉｓ（Ｌ．） Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ， Ｔｈｅａｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｌ．）、およびアッサムチャ（Ｔｈｅａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｌ． ｖａｒ． ａｓｓｍｉｃａ Ｐｉｅｒｒｅ）から選択される、少なくとも１種から得られる。
【００１５】
好ましい実施態様では、前記セラミド産生促進剤は、皮膚外用剤、液体飲料および食品として用いられる。
【００１６】
【発明の実施の形態】
以下、本発明を詳しく説明する。
【００１７】
本発明のセラミド産生促進剤は、ツバキ科植物由来の、水および有機溶媒にともに溶解性を示す抽出物を有効成分として含有する。
【００１８】
本発明において用いられるツバキ科植物としては、つばき科（Ｔｈｅａｃｅａｅ）ツバキ属（Ｃａｍｅｌｌｉａ Ｌ．）であるツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ Ｌ．）、リンゴツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａｖａｒ． ｍａｃｒｏｃａｒｐａ Ｍａｓａｍｕｎｅ）、ユキツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ ｓｕｂｓｐ． ｒｕｓｔｉｃａｎａ（Ｈｏｎｄａ）Ｋｉｔａｍｕｒａ）、タイワンヤマツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ ｓｕｂｓｐ． ｈｏｚａｎｅｓｉｓ（Ｈａｙａｔａ）Ｋｉｔａｍｕｒａ）、サザンカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ Ｓａｓａｎｑｕａ Ｔｈｕｎｂ．）、オキナワサザンカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｄｒｕｐｉｆｅｒａ Ｌｏｕｒｅｒｉｏ）、ヒマラヤサザンカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ Ｋｉｓｓｉｉ Ｗａｌｌ．）、トウツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ Ｌｉｎｄｌｅｙ）、サルウインツバキ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓａｌｕｅｎｅｎｓｉｓ Ｓｔａｐｆ）、ヒメサザンカ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｌｕｔｃｈｕｅｎｓｉｓ Ｔ．Ｉｔｏ）、チャ（Ｃａｍｅｌｌｉａ ｓｉｎｅｓｓｉｓ（Ｌ．） Ｏ． Ｋｕｎｔｚｅ， Ｔｈｅａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｌ．）、およびアッサムチャ（Ｔｈｅａ ｓｉｎｅｎｓｉｓ Ｌ． ｖａｒ． ａｓｓｍｉｃａ Ｐｉｅｒｒｅ）（原色日本植物図鑑・改定１５刷参考）などが挙げられる。
【００１９】
本発明において用いられるツバキ科植物は、生のもの（例えば、採取後そのままのもの）、乾燥品のもの（例えば、天日乾燥処理をしたもの）、またはこれらの組み合わせのいずれの形態でもよく、所望のサイズに裁断または粉砕されていてもよい。使用されるツバキ科植物は、その植物の全草、葉、茎、根、花弁、果実、種子またはその他任意の部位から、当業者によって適切に選択されてもよい。さらには種子からツバキ油を搾り取った後の種子の脱脂物を用いてもよい。特には、果実、種子、葉および花弁の少なくともいずれかを用いることが好ましい。また好ましくは、根と茎とは除かれている方がよい。
【００２０】
本発明においてツバキ科植物の抽出物は、例えば、以下のような方法で得ることができるが、これら方法に限定されない。
【００２１】
先ず、ツバキ科植物を水もしくは３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液といった粗抽出溶媒に浸漬する。所定時間の経過の後に、ツバキ科植物をろ過などの方法で取り除く。ここで、粗抽出溶媒を蒸発乾固させてもよい。次に、抽出溶媒として７０重量％以上のアルコールを含有する水溶液もしくは有機溶媒を加えて、抽出溶媒中のアルコール成分もしくは有機溶媒成分が７０重量％以上となるように調製し、抽出を行う。抽出残渣をろ過除去することにより抽出物が得られる。本発明においてはその後、当業者に公知の手段を用いて、濃縮および精製が行われてもよい。
【００２２】
ここで、上記粗抽出溶媒として用いられる３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液のアルコール含有量は、その下限が好ましくは０．００００１重量％であり、より好ましくは０．００１重量％であり、更により好ましくは０．１重量％である。
【００２３】
他の方法としては、先ず、ツバキ科植物を７０重量％以上のアルコールを含有する水溶液もしくは有機溶媒といった粗抽出溶媒に浸漬する。所定時間の経過の後に、ツバキ科植物をろ過などの方法で取り除く。ここで、粗抽出溶媒を蒸発乾固させてもよい。次に、抽出溶媒として水もしくは３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液を加えて、抽出溶媒中のアルコール成分が３０重量％以下となるように調製し、抽出を行う。抽出残渣をろ過除去することにより抽出物が得られる。本発明においてはその後、当業者に公知の手段を用いて、濃縮および精製が行われてもよい。
【００２４】
ここで、上記抽出溶媒として用いられる３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液のアルコール含有量は、その下限が好ましくは０．００００１重量％であり、より好ましくは０．００１重量％であり、更により好ましくは０．１重量％である。
【００２５】
本発明においては、皮膚細胞でのセラミド産生機能を促進させるものが、水および有機溶媒にともに溶解性を示すことから、そのものの抽出度をより向上させるためには、上記のように粗抽出工程と抽出工程とを経て、ツバキ科植物の抽出物を得ることが好ましい。
【００２６】
すなわち、粗抽出工程において用いられる粗抽出溶媒が、水および３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液からなる群より選択される溶媒である場合、抽出工程に用いられる抽出溶媒は、有機溶媒および７０重量％以上のアルコールを含有する水溶液からなる群より選択される少なくとも１種の溶媒であることが好ましい。
【００２７】
また、粗抽出工程において用いられる粗抽出溶媒が、有機溶媒および７０重量％以上のアルコールを含有する水溶液からなる群より選択される少なくとも１種の溶媒である場合、抽出工程に用いられる抽出溶媒は、水および３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液からなる群より選択される溶媒であることが好ましい。
【００２８】
本発明において、上記粗抽出工程および抽出工程に使用し得るアルコールとしては、例えば、メタノール、エタノール、ｎ−ブタノールおよびｎ−プロパノールといった低級アルコールが挙げられる。また有機溶媒としては、例えば、アセトン；酢酸エチルエステルのようなエステル類；ジエチルエーテルまたは石油エーテルのようなエーテル類；塩化メチレンまたはクロロホルムのような塩素系有機溶媒が挙げられる。これら溶媒はいずれも極性溶媒であり、単独で用いられても、複数の組み合わせで用いられてもよい。
【００２９】
上記抽出は室温で行うこともできるが、好ましくは５℃〜１２０℃、より好ましくは４０℃〜１００℃の温度範囲で行われる。抽出時間は、抽出温度によって異なるものであるが、室温付近で抽出する場合には１日間〜１０日間を要し、５０℃以上で抽出する場合には１時間〜９６時間で抽出できる。
【００３０】
このようにして、ツバキ科植物の抽出物を得ることができる。
【００３１】
本発明に用いられる抽出物は、そのままでセラミド産生促進剤として用いることができるが、濃縮あるいは適当な溶媒（例えば、水または低級アルコール）で希釈して用いることもできる。また、この抽出物を含有する抽出液に噴霧乾燥あるいは凍結乾燥といった操作を施すことによって得られた固形物をセラミド産生促進剤として用いることもできる。
【００３２】
またさらに本発明に用いられる抽出物は、吸着担体を利用して水および有機溶媒にともに溶解性を示す有効成分を分離することで得ることもできる。
【００３３】
例えば、ツバキ科植物を水および３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液といった粗抽出溶媒に浸漬する。所定時間の経過の後に、ツバキ科植物をろ過などの方法で取り除く。次ぎに粗抽出物を含有する粗抽出溶媒を、疎水性の担体を充填したカラムに通し、粗抽出物中の疎水性成分を疎水性の担体に吸着させ、そしてカラムを水または３０重量％以下のアルコールを含有する水溶液で洗浄する。洗浄の後、有機溶媒および／または７０重量％以上のアルコールを含有する水溶液で、疎水性の担体に吸着した疎水性成分を溶出分離する。このようにして、本発明に用いられる抽出物を得ることも可能である。本発明においてはその後、当業者に公知の手段を用いて、濃縮および精製が行われてもよい。
【００３４】
本発明に用いられる抽出物は、本発明のセラミド産生促進剤の全量に対して、好ましくは０．０００１重量％〜９９重量％、より好ましくは０．００１重量％〜１０重量％、より更に好ましくは０．００１重量％〜５重量％、最も好ましくは０．０１重量％〜１重量％の割合で含有されている。本発明のセラミド産生促進剤における抽出物の含有量が０．０００１重量％を下回ると、作用させる細胞に対して適切な活性を提供することができず、その結果、セラミドの産生を満足し得る程度まで促進することができない恐れがある。これら含有量は、抽出物の濃度およびセラミド産生促進剤の剤型によって、当業者により適宜選択される。
【００３５】
本発明のセラミド産生促進剤は、後述する剤型に応じて、任意のその他成分を含有する。このようなその他成分の例としては、油剤、保湿剤、増粘剤、防腐剤、乳化剤、色剤、粉体、ｐＨ調整剤、当業者に周知の任意の薬効成分、紫外線吸収剤、抗酸化剤、香料、アルコール、および水、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。本発明のセラミド産生促進剤に含まれる上記その他成分の含有量は、当業者によって任意に選択され得る。
【００３６】
本発明のセラミド産生促進剤の剤型は、特に限定されず、化粧料、医薬部外品、医薬品などの剤型をとることができる。本発明においては、皮膚外用剤の剤形に調製されることが好ましく、特に化粧料の剤型に使用することが好ましい。このような化粧料のより具体的な例としては、洗顔クリーム、化粧水、乳液、ファンデーション、パック、ローション、ゲル、およびスティックが挙げられる。
【００３７】
本発明のセラミド産生促進剤は、例えば、皮膚に直接付与（例えば、塗布またはスプレー）されることにより、有効成分として含有される上記抽出物が、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって減少した正常ヒト表皮細胞中のセラミド代謝を回復させて、細胞内のセラミド量を増加させる役割を果たす。その結果、優れた保湿機能およびバリア機能を皮膚に提供することができる。本発明のセラミド産生促進剤はまた、上記保湿機能およびバリア機能に代表される皮膚の正常化に加えて、このような機能の低下を予防することもできる。用量は、特に限定されず、使用者の体格、体質などの条件に応じて任意に選択され得る。
【００３８】
あるいは、上記抽出物を含有する本発明のセラミド産生促進剤は、上記のような外用の用途とは別に、（例えば、液体飲料または食品の形態で）内服しても同様のヒト正常皮膚細胞中のセラミド産生機能を向上させることができる。
【００３９】
次に、本発明のセラミド産生促進剤を液体飲料として用いる場合について説明する。
【００４０】
本発明のセラミド産生促進剤を液体飲料として用いる場合、本発明に用いられる抽出物は、上記皮膚外用剤と同様に、ツバキ科植物からの抽出物であればよい。
【００４１】
上記液体飲料に使用される抽出物の下限量は、通常、その全量に対し、０．０００１重量％以上であり、好ましくは０．００１％重量以上であり、より好ましくは０．０１重量％以上である。液体飲料における抽出物の含有量が０．０００１重量％を下回ると、作用させる細胞に対して適切な活性を提供することができず、その結果、セラミドの合成を満足し得る程度まで促進することができない恐れがある。
【００４２】
本発明のセラミド産生促進剤を液体飲料として用いる場合の抽出物の上限量は、特に限定されないが、生産性を高める点から、全量に対し、好ましくは１０重量％以下であり、より好ましくは５重量％以下であり、最も好ましくは１重量％以下である
【００４３】
上記液体飲料は、上記抽出物以外に、当業者に公知の他の飲料成分を含有する。このような飲料成分の例としては、水、果汁、甘味料、増粘剤、防腐剤、乳化剤、着色料、ｐＨ調整剤、当業者に周知の任意の薬効成分、抗酸化剤、香料、およびアルコール、ならびにそれらの組合せが挙げられる。この液体飲料に含まれる上記その他飲料成分の含有量は、当業者によって任意に選択され得る。
【００４４】
次に、本発明のセラミド産生促進剤を食品として用いる場合について説明する。
【００４５】
本発明のセラミド産生促進剤を食品として用いる場合、本発明に用いられる抽出物は、上記皮膚外用剤および液体飲料と同様に、ツバキ科植物からの抽出物であればよい。
【００４６】
上記食品に使用される抽出物の下限量は、通常、その全量に対し、０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上である。この食品中の抽出物の含有量が０．０００１重量％を下回ると、作用させる細胞に対して適切な活性を提供することができず、その結果、セラミドの合成を満足し得る程度まで促進することができない恐れがある。
【００４７】
上記食品に使用される抽出物の上限量は、特に限定されないが、生産性を高める点から、全量に対し、好ましくは１０重量％以下であり、より好ましくは５重量％以下であり、最も好ましくは１重量％以下である。
【００４８】
本発明のセラミド産生促進剤を食品として用いる場合の形態は、特に限定されないが、具体的には、キャンディー、ビスケット、クッキー、キャラメル、チョコレート、ウエハース、パン、ドーナツ、麺類、ドレッシング、マヨネーズ、または食品添加料のような任意の形態が挙げられる。上記食品は、抽出物以外に、当業者に公知の他の食品添加剤を含有していてもよい。このような食品添加剤の例としては、水、油、果汁、甘味料、増粘剤、防腐剤、乳化剤、着色料、ｐＨ調整剤、当業者に周知の任意の薬効成分、抗酸化剤、および香料、ならびにそれらの組み合わせが挙げられる。本発明のセラミド産生促進剤を用いた食品に含まれる上記食品添加剤の含有量は、当業者によって任意に選択され得る。
【００４９】
本発明のセラミド産生促進剤を用いる液体飲料および食品は、有効成分として含有される抽出物が正常ヒト表皮細胞に内的に作用して、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって減少した当該細胞中のセラミド代謝を回復させて、当該細胞内のセラミド量を増加させる。
その結果、優れた、保湿機能およびバリア機能を皮膚に提供することができる。
本発明のセラミド産生促進剤を用いる液体飲料および食品はまた、上記保湿機能およびバリア機能に代表される皮膚の正常化に加えて、このような機能の低下を予防することもできる。液体飲料または食品に利用される場合の、本発明のセラミド産生促進剤の用量は、特に限定されず、使用者の体格、体質などの条件に応じて任意に選択され得る。
【００５０】
【実施例】
以下、本発明のセラミド産生成促進剤に用いるツバキ抽出物の製造、セラミド産生促進効果の測定、ならびに各種化粧料の製造に関する実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００５１】
〈製造例１：ツバキ果皮抽出物の製造〉
ツバキさく果（裂開した果実）の種子を除いた果皮１００ｇをミキサーにて粉砕した。この粉砕物に８０重量％エタノール４００ｍＬを加え、４０℃で４８時間浸漬粗抽出を行った。ろ過して抽出残渣を取り除き、得られた粗抽出物３５０ｍｌを６０℃の加温下で減圧濃縮して乾固した。次いで水２５０ｍＬを加え攪拌した後、４０℃にて４８時間放置した。この後不溶性の沈殿物を濾去してツバキ抽出物２４８ｍＬを得た。このようにして得られた抽出物中に含まれる固形分は０．５（ｗ／ｗ）％であった。
【００５２】
〈製造例２：ツバキ種子脱脂物抽出物の製造〉
ツバキ種子脱脂物１００ｇをミキサーにて粉砕した。この粉砕物に水４００ｍＬを加え、４０℃で４８時間浸漬粗抽出を行った。ろ過して抽出残渣を取り除き、得られた粗抽出物３８０ｍｌを６０℃の加温下に減圧濃縮して乾固した。この乾固物にエタノール２５０ｍＬを加え攪拌した後、４０℃にて４８時間放置した。この後不溶性の沈殿物を濾去してツバキ抽出物２４０ｍＬを得た。このようにして得られた抽出物中に含まれる固形分は０．９（ｗ／ｗ）％であった。
【００５３】
〈製造例３：チャ種皮脱脂物抽出物の製造〉
チャ種子脱脂物１００ｇをミキサーにて粉砕した。この粉砕物に水４００ｍＬを加え、４０℃で４８時間浸漬粗抽出を行った。ろ過して抽出残渣を取り除き、得られた粗抽出物３８５ｍｌを６０℃の加温下に減圧濃縮して乾固した。この乾固物にエタノール２５０ｍＬを加え攪拌した後、４０℃にて４８時間放置した。
この後不溶性の沈殿物を濾去してツバキ抽出物２４５ｍＬを得た。このようにして得られた抽出物中に含まれる固形分は０．８（ｗ／ｗ）％であった。
【００５４】
〈比較製造例１：対照ツバキ種子脱脂物（Ｉ）抽出物の製造〉
ツバキ種子脱脂物１００ｇをミキサーにて粉砕した。この粉砕物に水４００ｍＬを加え、４０℃で４８時間浸漬粗抽出を行った。ろ過して抽出残渣を取り除き、得られた粗抽出物３８０ｍｌを６０℃の加温下に減圧濃縮して乾固した。この乾固物に水２５０ｍＬを加え攪拌した後、４０℃にて４８時間放置した。この後不溶性の沈殿物を濾去してツバキ抽出物２４５ｍＬを得た。このようにして得られた抽出物中に含まれる固形分は２．８（ｗ／ｗ）％であった。
【００５５】
〈比較製造例２：対照ツバキ種子脱脂物（ＩＩ）抽出物の製造〉
ツバキ種子脱脂物１００ｇをミキサーにて粉砕した。この粉砕物に８０重量％エタノール４００ｍＬを加え、４０℃で４８時間浸漬粗抽出を行った。ろ過して抽出残渣を取り除き、得られた粗抽出物３５０ｍｌを６０℃の加温下に減圧濃縮して乾固した後、エタノール２５０ｍＬを加え攪拌した後、４０℃にて４８時間放置した。この後不溶性の沈殿物を濾去してツバキ抽出物２４９ｍＬを得た。このようにして得られた抽出物中に含まれる固形分は３．１（ｗ／ｗ）％であった。
【００５６】
〈実施例１：正常ヒト表皮細胞のセラミド産生能の測定〉
表皮角化細胞増殖用培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２、クラボウ）添付マニュアルに従って培地を調製し、６ウエルのディッシュに正常ヒト表皮ケラチノサイト（クラボウ）を５０００個／ウエルとなるように播種し、３７℃ ＣＯ２インキュベーターにて９０％コンフルエントに達するまで培養する。次いで培地を細胞分化用培地［０．５μＭ−ハイドロコルチゾン、 製造例１〜３および比較製造例１、２で製造した被検サンプル（各抽出物固形分５０ｕｇ／ｍｌ）を含む０．１μＭ−インスリン−１０容量％ウシ胎児血清−ダルベッコ修正基礎培地：Ｈａｍ’Ｆ１２（３：１）]に交換し、２日ごとに培地を交換しながら培養して９日目にディッシュより回収したケラチノサイトよりクロロホルム・メタノール混合溶媒（容量比２：１）で脂質を抽出した。抽出した脂質は乾固した後、前期混合溶媒２００μｌに溶解し、薄層クロマトグラフィーによりセラミドの定量を行った[展開溶媒 クロロホルム：メタノール：酢酸（１９０：９：１）]。なお、被検サンプルを添加せず、同様の実験を行ったものをコントロールとした。実験はそれぞれ２回ずつ行い、コントロールの相対比として算出して表１に示した。
【００５７】
【表１】
【００５８】
表１から明らかなように、本発明にて製造したツバキ果皮抽出物、ツバキ種子脱脂物抽出物、チャ種子脱脂物抽出物を５０ｕｇ／ｍｌ添加した場合、無添加に比べてセラミド量がそれぞれ５４％、８７％および６４％増加することがわかった。一方、対照ツバキ種子抽出物（Ｉ）および（ＩＩ）には、正常ヒト表皮細胞に対してセラミド産生能は、ほとんど認められなかった。
【００５９】
〈実施例２：正常ヒト真皮細胞に対する毒性試験〉
１０％牛胎児血清含有のＲＩＴＣ８０−７培地（極東製薬工業株式会社）で継代した正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＢ１ＲＧＢ）を試験に用いた。６ウエルのディッシュにこの正常ヒト皮膚線維芽細胞を５０００個／ウエルとなるように製造例１〜３および比較製造例１、２で製造した被検サンプル含有培地（各抽出物固形分５０ｕｇ／ｍｌ）を使い播種し、３７℃ ＣＯ２インキュベーターにて９０％コンフルエントに達するまで培養する。４日間培養した後、トリプシン処理にて細胞を浮遊化し、トリパンブルー染色にて死細胞を染色した後、血球計測版を用いて顕微鏡下、総細胞数および死細胞数を計測し、総細胞中の死細胞の割合（％）を求め毒性の指標とした。実験はそれぞれ２回ずつ行い、コントロールの相対比として算出して表２に示した。
【００６０】
【表２】
【００６１】
表２から明らかなように、本発明にて製造したツバキ果皮抽出物、ツバキ種子脱脂物抽出物、チャ種子脱脂物抽出物を５０ｕｇ／ｍｌ添加した場合、対照ツバキ種子抽出物（Ｉ）および（ＩＩ）に比べて、正常ヒト真皮細胞の死細胞の割合は非常に少なかった。
【００６２】
〈実施例３：洗顔クリーム〉
製造例１の抽出物を有効成分として下記の洗顔クリームの処方(全１００重量％)に用いる。
【００６３】
【表３】
【００６４】
成分Ａを加熱溶解し、８０℃に保持する。別に８０℃で加熱溶解した成分Ｂを成分Ａに加え、充分混合する。撹拌しながら冷却を行い、５０℃にて成分Ｃを加え、洗顔クリームを得た。
【００６５】
〈実施例４：化粧水〉
製造例２の抽出物を有効成分として下記の化粧水の処方(全１００重量％)に用いる。
【００６６】
【表４】
【００６７】
全成分を室温にて撹拌および混合して均一な溶液とし、ｐＨ５．５に調整して化粧水を得た。
【００６８】
〈実施例５：乳液〉
製造例３抽出物を有効成分として下記の乳液の処方(全１００重量％)に用いる。
【００６９】
【表５】
【００７０】
成分Ａを加熱溶解し、８０℃に保持する。別に８０℃で加熱溶解した成分Ｂを成分Ａに加え、充分混合する。撹拌しながら冷却を行い、５０℃にて成分Ｃを加え、乳液を得た。
【００７１】
〈実施例６：製剤での試験（経皮水分蒸散）〉
実施例４の化粧水を健常被験者１２名の目尻に８週間にわたり塗布した。塗布前と塗布後との経皮水分蒸散量（被験者の平均値）を測定し、バリア機能の目安とした。表６より実施例９の化粧水を８週間にわたり塗布した方が、皮膚からの水分蒸散量が減少した。このことは、実施例４の化粧水を塗布することにより、皮膚のバリア機能が高まったと考えられる。
【００７２】
【表６】
【００７３】
〈実施例７：製剤での試験（皮膚水分量）〉
実施例６と同様に実施例４で製造した化粧水を健常被験者１２名の目尻に８週間にわたり塗布した。塗布前と塗布後の水分量を測定し（被験者の平均値）、保湿機能改善の目安とした（０週を１００％とした時の割合を示した）。表７に示す結果は実施例４の化粧水を塗布した方が、保湿機能の向上により表皮中の水分量が増加したことを示した。
【００７４】
【表７】
【００７５】
〈実施例７：ジュースの製造〉
合計が１００重量％となるように以下の成分を処方する。
【００７６】
【表８】
【００７７】
上記の全ての成分を室温にて混合および撹拌して均一な溶液として、ジュースを作製する。
【００７８】
〈実施例８：キャンディーの製造〉
合計が１００重量％となるように以下の成分を処方する。
【００７９】
【表９】
【００８０】
上記の全ての成分を７０℃にて混合および撹拌し、適切な型に入れて、室温まで冷却してキャンディーを作製する。
【００８１】
【発明の効果】
本発明によれば、有効成分として含有されるツバキ科植物の抽出物が、加齢、紫外線曝露、乾燥肌、荒れ肌、アトピー性皮膚炎、老人性乾皮症、乾癬などによって減少した表皮細胞中のセラミド代謝を回復させて、細胞内のセラミド量を増加させる役割を果たす。その結果、優れた、保湿機能およびバリア機能を皮膚に提供することができる。本発明のセラミド産生促進剤はまた、上記保湿機能およびバリア機能に代表される皮膚の正常化に加えて、このような機能の低下を予防することもできる。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to a ceramide production promoter, and more particularly, improves the barrier function and moisturizing function of the skin by promoting the production of ceramide in keratinocyte lipids of the skin epidermis, and further improves dry skin with aging. And a ceramide production promoter having an effect of preventing and improving skin roughness due to atopic dermatitis and the like.
[0002]
[Prior art]
The skin covers the outermost layer of the living body, forms a boundary with the outside world, and has a barrier function essential for life support such as prevention of invasion of external substances and prevention of loss of internal components including water. Between the cells of the keratin, a lamella structure is formed, in which a lamella structure is formed by multiplexing lipids containing ceramide, cholesterol and fatty acids as main components. This laminated plate structure plays an important role as a moisture permeation barrier.
[0003]
In particular, ceramide in the keratin is considered to be an essential component for the formation of the barrier. However, this metabolism of ceramide may impair its healthy state due to aging, exposure to ultraviolet rays, dry skin, rough skin, atopic dermatitis, senile xeroderma, psoriasis and the like. As a result, there have been many reports that the amount of ceramide in the stratum corneum is reduced, for example, causing a decrease in the moisturizing function and barrier function of the skin.
[0004]
Techniques have been proposed in which a substance that promotes ceramide production is administered to the skin that has caused such a decrease in the moisturizing function or barrier function, thereby promoting internal production in cells.
[0005]
For example, Fragrance Journal, 1999, Vol. 10, p. Nos. 23-28 disclose the use of niacinamide as a substance promoting such ceramide production. Also, as another technique, a method of directly supplying ceramide itself to skin cells from the outside is known. However, it has been pointed out that any of the techniques cannot provide a long-term effect and the administered or supplemented substance lacks stability.
[0006]
Some other techniques have been developed for substances that promote ceramide production (Patent Document 1). However, with respect to substances for promoting ceramide production that can be used in skin external preparations and foods and drinks, sufficient variation has not yet been confirmed.
[0007]
[Patent Document 1] Japanese Patent Application No. 2002-327912
[Non-Patent Document 1] Fragrance Journal, 1999, Volume 10, p. 23-28
[0009]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to solve the above-mentioned problems. The object of the present invention is to restore the ceramide producing function of a living body to healthy, aging, ultraviolet exposure, dry skin, rough skin, atopic property. Restores the ceramide metabolism in the stratum corneum decreased by dermatitis, senile xeroderma, psoriasis, etc., and increases the amount of ceramide, so that the skin with excellent moisturizing function and barrier function can be regained It is to provide a ceramide production promoter.
[0010]
[Means for Solving the Problems]
The present invention is a ceramide production promoter containing, as an active ingredient, an extract excluding the root and stem of a Camellia plant, which is soluble in both water and an organic solvent.
[0011]
In a preferred embodiment, the extract is obtained through a crude extraction step and an extraction step.
[0012]
In a further preferred embodiment, the crude extraction solvent used in the crude extraction step is a solvent selected from the group consisting of water and an aqueous solution containing 30% by weight or less of alcohol, and the extraction solvent used in the crude extraction step Is at least one solvent selected from the group consisting of an organic solvent and an aqueous solution containing 70% by weight or more of an alcohol.
[0013]
In a further preferred embodiment, the crude extraction solvent used in the crude extraction step is at least one solvent selected from the group consisting of an organic solvent and an aqueous solution containing 70% by weight or more of an alcohol, and Is an solvent selected from the group consisting of water and an aqueous solution containing 30% by weight or less of an alcohol.
[0014]
In a still further preferred embodiment, the camellia plants are theaceaceae (Camellia L.), Camellia japonica L., Camellia japonica var. Macrocarpa maspa masapama macromaspa masapama macropama macrocapa maspa masapasa macropasa macromapa sap. Rusticana (Honda) Kitamura, Camellia japonica subsp. ii Wall.), camellia (Camellia reticulata Lindley), salwin camellia (Camellia saluenensis Stapf), Camellia luchuensis T. Ito, and Cha (Ts. (Thea sinensis L. var. Assmica Pierre).
[0015]
In a preferred embodiment, the ceramide production promoter is used as an external preparation for skin, a liquid beverage, and a food.
[0016]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Hereinafter, the present invention will be described in detail.
[0017]
The ceramide production promoter of the present invention contains, as an active ingredient, an extract derived from a camellia plant and showing solubility in both water and an organic solvent.
[0018]
Examples of the Camellia plants used in the present invention include Camellia japonica L., Camellia japonica L., which is a member of the genus Camellia (Theaceae), and Camellia japonica (L.), Camellia japonica, California, Japan. (Honda) Kitamura), Japanese pine sawyer (Camellia japonica subsp. Hozanesis (Hayata) Kitamura), Sazanca (Camellia Sasanqua Thunb. Wall.), Camellia (Camellia reticulata Lindley), salwin camellia (Camellia saluenensis stapf), Camellia luchuensis T.Ito, Cha (Camellia sessin. (Thea sinensis L. var. Assmica Pierre) (Refer to the primary color Japanese plant picture book, revised 15th edition) and the like.
[0019]
The Camellia plant used in the present invention may be in any form of a raw one (for example, as it is after collection), a dried one (for example, a sun-dried one), or a combination thereof. It may be cut or crushed to a desired size. The Camellia plant to be used may be appropriately selected by those skilled in the art from the whole plant, leaves, stems, roots, petals, fruits, seeds or any other parts of the plant. Furthermore, defatted seeds after squeezing camellia oil from the seeds may be used. In particular, it is preferable to use at least one of fruits, seeds, leaves, and petals. Preferably, the roots and stems are removed.
[0020]
In the present invention, an extract of a Camellia plant can be obtained, for example, by the following methods, but is not limited to these methods.
[0021]
First, a Camellia plant is immersed in a crude extraction solvent such as water or an aqueous solution containing 30% by weight or less of alcohol. After a lapse of a predetermined time, the Camellia plant is removed by a method such as filtration. Here, the crude extraction solvent may be evaporated to dryness. Next, an aqueous solution or an organic solvent containing 70% by weight or more of an alcohol is added as an extraction solvent, and the alcohol component or the organic solvent component in the extraction solvent is adjusted to 70% by weight or more, and extraction is performed. An extract is obtained by removing the extraction residue by filtration. Thereafter, in the present invention, concentration and purification may be carried out using means known to those skilled in the art.
[0022]
Here, the lower limit of the alcohol content of the aqueous solution containing 30% by weight or less of the alcohol used as the crude extraction solvent is preferably 0.00001% by weight, more preferably 0.001% by weight, Even more preferably, it is 0.1% by weight.
[0023]
As another method, first, a Camellia plant is immersed in a crude extraction solvent such as an aqueous solution or an organic solvent containing 70% by weight or more of alcohol. After a lapse of a predetermined time, the Camellia plant is removed by a method such as filtration. Here, the crude extraction solvent may be evaporated to dryness. Next, water or an aqueous solution containing 30% by weight or less of an alcohol is added as an extraction solvent to prepare an extraction solvent so that the alcohol component is 30% by weight or less, and extraction is performed. An extract is obtained by removing the extraction residue by filtration. Thereafter, in the present invention, concentration and purification may be carried out using means known to those skilled in the art.
[0024]
Here, the lower limit of the alcohol content of the aqueous solution containing 30% by weight or less of alcohol used as the extraction solvent is preferably 0.00001% by weight, more preferably 0.001% by weight. More preferably, it is 0.1% by weight.
[0025]
In the present invention, those that promote the function of producing ceramide in skin cells show solubility in both water and organic solvents. And an extraction step, it is preferable to obtain an extract of a Camellia plant.
[0026]
That is, when the crude extraction solvent used in the crude extraction step is a solvent selected from the group consisting of water and an aqueous solution containing 30% by weight or less of an alcohol, the extraction solvent used in the extraction step is an organic solvent and 70%. The solvent is preferably at least one solvent selected from the group consisting of aqueous solutions containing at least alcohol by weight.
[0027]
When the crude extraction solvent used in the crude extraction step is at least one solvent selected from the group consisting of an organic solvent and an aqueous solution containing 70% by weight or more of an alcohol, the extraction solvent used in the extraction step is , Water and an aqueous solution containing 30% by weight or less of an alcohol.
[0028]
In the present invention, examples of the alcohol that can be used in the crude extraction step and the extraction step include lower alcohols such as methanol, ethanol, n-butanol and n-propanol. Examples of the organic solvent include acetone; esters such as ethyl acetate; ethers such as diethyl ether or petroleum ether; and chlorine-based organic solvents such as methylene chloride or chloroform. Each of these solvents is a polar solvent, and may be used alone or in combination of two or more.
[0029]
The extraction can be performed at room temperature, but is preferably performed at a temperature in the range of 5 ° C to 120 ° C, more preferably 40 ° C to 100 ° C. Although the extraction time varies depending on the extraction temperature, it takes 1 to 10 days to extract at around room temperature, and 1 to 96 hours when extracting at 50 ° C. or higher.
[0030]
Thus, an extract of a Camellia plant can be obtained.
[0031]
The extract used in the present invention can be used as it is as a ceramide production promoter, but it can also be used after concentration or dilution with an appropriate solvent (eg, water or lower alcohol). Further, a solid obtained by subjecting the extract containing the extract to spray drying or freeze drying can also be used as a ceramide production promoter.
[0032]
Further, the extract used in the present invention can also be obtained by separating an active ingredient having solubility in both water and an organic solvent using an adsorption carrier.
[0033]
For example, a Camellia plant is immersed in a crude extraction solvent such as water and an aqueous solution containing 30% by weight or less of alcohol. After a lapse of a predetermined time, the Camellia plant is removed by a method such as filtration. Next, the crude extraction solvent containing the crude extract is passed through a column packed with a hydrophobic carrier, the hydrophobic components in the crude extract are adsorbed on the hydrophobic carrier, and the column is treated with water or 30% by weight or less. And washing with an aqueous solution containing an alcohol. After washing, the hydrophobic component adsorbed on the hydrophobic carrier is eluted and separated with an organic solvent and / or an aqueous solution containing 70% by weight or more of an alcohol. In this way, it is possible to obtain the extract used in the present invention. Thereafter, in the present invention, concentration and purification may be carried out using means known to those skilled in the art.
[0034]
The extract used in the present invention is preferably 0.0001% to 99% by weight, more preferably 0.001% to 10% by weight, and still more preferably the total amount of the ceramide production promoter of the present invention. Is contained in a proportion of 0.001% to 5% by weight, most preferably 0.01% to 1% by weight. When the content of the extract in the ceramide production promoter of the present invention is less than 0.0001% by weight, it is not possible to provide an appropriate activity for cells to act on, and as a result, ceramide production can be satisfied. May not be able to promote to a degree. These contents are appropriately selected by those skilled in the art depending on the concentration of the extract and the dosage form of the ceramide production promoter.
[0035]
The ceramide production promoter of the present invention contains any other components according to the dosage form described below. Examples of such other ingredients include oils, humectants, thickeners, preservatives, emulsifiers, colorants, powders, pH adjusters, any medicinal ingredients known to those skilled in the art, ultraviolet absorbers, antioxidants Agents, perfumes, alcohols, and water, and combinations thereof. The content of the other components contained in the ceramide production promoter of the present invention can be arbitrarily selected by those skilled in the art.
[0036]
The dosage form of the ceramide production promoter of the present invention is not particularly limited, and may be in the form of cosmetics, quasi-drugs, pharmaceuticals, and the like. In the present invention, it is preferably prepared in the form of an external preparation for skin, and particularly preferably used in the form of cosmetics. More specific examples of such cosmetics include facial cleansers, lotions, emulsions, foundations, packs, lotions, gels, and sticks.
[0037]
The ceramide production promoter of the present invention is, for example, directly applied (for example, applied or sprayed) to the skin, so that the extract contained as an active ingredient is aged, exposed to ultraviolet rays, dry skin, rough skin, atopy. It restores the metabolism of ceramide in normal human epidermal cells decreased by dermatitis, senile xeroderma, psoriasis, etc., and increases the amount of intracellular ceramide. As a result, an excellent moisturizing function and a barrier function can be provided to the skin. The ceramide production promoter of the present invention can also prevent a decrease in such a function in addition to normalization of the skin represented by the above-mentioned moisturizing function and barrier function. The dose is not particularly limited, and can be arbitrarily selected depending on conditions such as a user's physique and constitution.
[0038]
Alternatively, the ceramide production promoter of the present invention containing the above extract can be used in human normal skin cells even when taken internally (for example, in the form of a liquid beverage or food) separately from the above external use. Can improve the ceramide production function.
[0039]
Next, the case where the ceramide production promoter of the present invention is used as a liquid beverage will be described.
[0040]
When the ceramide production promoter of the present invention is used as a liquid beverage, the extract used in the present invention may be an extract from a Camellia plant, like the above-mentioned external preparation for skin.
[0041]
The lower limit amount of the extract used in the liquid beverage is usually 0.0001% by weight or more, preferably 0.001% by weight or more, more preferably 0.01% by weight or more based on the whole amount. It is. When the content of the extract in the liquid beverage is less than 0.0001% by weight, it is not possible to provide appropriate activity to the cells to act on, and as a result, to promote ceramide synthesis to a satisfactory degree. May not be possible.
[0042]
When the ceramide production promoter of the present invention is used as a liquid beverage, the upper limit amount of the extract is not particularly limited, but is preferably 10% by weight or less, more preferably 5% by weight, based on the viewpoint of enhancing productivity. % By weight, most preferably 1% by weight or less.
The liquid beverage contains, in addition to the extract, other beverage components known to those skilled in the art. Examples of such beverage ingredients include water, fruit juice, sweeteners, thickeners, preservatives, emulsifiers, colorants, pH adjusters, any medicinal ingredients known to those skilled in the art, antioxidants, flavors, and Alcohols, as well as combinations thereof. The content of the other beverage components contained in the liquid beverage can be arbitrarily selected by those skilled in the art.
[0044]
Next, the case where the ceramide production promoter of the present invention is used as food will be described.
[0045]
When the ceramide production promoter of the present invention is used as a food, the extract used in the present invention may be an extract from a Camellia plant, like the above-mentioned external preparation for skin and liquid beverage.
[0046]
The lower limit of the extract used in the food is usually 0.0001% by weight or more, preferably 0.001% by weight or more, more preferably 0.01% by weight or more based on the total amount of the extract. When the content of the extract in the food is less than 0.0001% by weight, it is not possible to provide an appropriate activity for the cells to act on, and as a result, the synthesis of ceramide is promoted to a satisfactory degree. May not be able to do so.
[0047]
The upper limit of the extract used in the food is not particularly limited, but is preferably 10% by weight or less, more preferably 5% by weight or less, most preferably 5% by weight, based on the total amount, from the viewpoint of increasing productivity. Is 1% by weight or less.
[0048]
The form when the ceramide production promoter of the present invention is used as a food is not particularly limited, and specifically, candy, biscuit, cookie, caramel, chocolate, wafer, bread, donut, noodles, dressing, mayonnaise, or food Arbitrary forms such as additives are included. The food may contain, in addition to the extract, other food additives known to those skilled in the art. Examples of such food additives include water, oil, fruit juice, sweeteners, thickeners, preservatives, emulsifiers, colorants, pH adjusters, any medicinal ingredients known to those skilled in the art, antioxidants, And perfumes, and combinations thereof. The content of the food additive contained in the food using the ceramide production promoter of the present invention can be arbitrarily selected by those skilled in the art.
[0049]
The liquid beverages and foods using the ceramide production promoter of the present invention are characterized in that the extract contained as an active ingredient acts internally on normal human epidermal cells, aging, ultraviolet exposure, dry skin, rough skin, atopic skin It restores the ceramide metabolism in the cells, which has been reduced by inflammation, senile xeroderma, psoriasis, etc., and increases the amount of ceramide in the cells.
As a result, excellent moisturizing and barrier functions can be provided to the skin.
The liquid beverages and foods using the ceramide production promoter of the present invention can also prevent the deterioration of such functions in addition to the normalization of the skin represented by the moisturizing function and the barrier function. When used for a liquid beverage or food, the dose of the ceramide production promoter of the present invention is not particularly limited, and can be arbitrarily selected according to conditions such as a user's physique and constitution.
[0050]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to Examples relating to production of camellia extract used for the ceramide production-promoting agent of the present invention, measurement of ceramide production promoting effect, and production of various cosmetics. It is not limited to the embodiment.
[0051]
<Production Example 1: Production of camellia peel extract>
100 g of pericarp excluding the seeds of camellia berries (cleaved fruit) were pulverized with a mixer. To this pulverized product, 400 mL of 80% by weight ethanol was added, and immersion crude extraction was performed at 40 ° C. for 48 hours. The residue was removed by filtration, and 350 ml of the obtained crude extract was concentrated under reduced pressure while heating at 60 ° C. to dryness. Next, 250 mL of water was added and stirred, and then left at 40 ° C. for 48 hours. Thereafter, the insoluble precipitate was removed by filtration to obtain 248 mL of camellia extract. The solid content contained in the extract thus obtained was 0.5 (w / w)%.
[0052]
<Production Example 2: Production of degreased camellia seed extract>
100 g of camellia seed defatted material was pulverized with a mixer. 400 mL of water was added to the pulverized product, and immersion coarse extraction was performed at 40 ° C. for 48 hours. The residue was extracted by filtration, and 380 ml of the obtained crude extract was concentrated under reduced pressure while heating at 60 ° C. to dryness. After 250 mL of ethanol was added to the dried product and stirred, the mixture was left at 40 ° C. for 48 hours. Thereafter, the insoluble precipitate was removed by filtration to obtain 240 mL of camellia extract. The solid content contained in the extract thus obtained was 0.9 (w / w)%.
[0053]
<Production Example 3: Production of tea seed coat defatted extract>
100 g of the defatted tea seed was ground with a mixer. 400 mL of water was added to the pulverized product, and immersion coarse extraction was performed at 40 ° C. for 48 hours. The residue was removed by filtration, and 385 ml of the obtained crude extract was concentrated under reduced pressure while heating at 60 ° C. to dryness. After 250 mL of ethanol was added to the dried product and stirred, the mixture was left at 40 ° C. for 48 hours.
Thereafter, the insoluble precipitate was filtered off to obtain 245 mL of camellia extract. The solid content contained in the extract thus obtained was 0.8 (w / w)%.
[0054]
<Comparative Production Example 1: Production of control camellia seed defatted product (I) extract>
100 g of camellia seed defatted material was pulverized with a mixer. 400 mL of water was added to the pulverized product, and immersion coarse extraction was performed at 40 ° C. for 48 hours. The residue was extracted by filtration, and 380 ml of the obtained crude extract was concentrated under reduced pressure while heating at 60 ° C. to dryness. After 250 mL of water was added to the dried product and stirred, the mixture was left at 40 ° C. for 48 hours. Thereafter, the insoluble precipitate was filtered off to obtain 245 mL of camellia extract. The solid content contained in the extract thus obtained was 2.8 (w / w)%.
[0055]
<Comparative Production Example 2: Production of control camellia seed defatted (II) extract>
100 g of camellia seed defatted material was pulverized with a mixer. To this pulverized product, 400 mL of 80% by weight ethanol was added, and immersion crude extraction was performed at 40 ° C. for 48 hours. The extract was filtered to remove the extraction residue, and the obtained crude extract (350 ml) was concentrated under reduced pressure while heating at 60 ° C to dryness. After adding 250 mL of ethanol and stirring, the mixture was allowed to stand at 40 ° C for 48 hours. Thereafter, the insoluble precipitate was filtered off to obtain 249 mL of camellia extract. The solid content contained in the extract thus obtained was 3.1 (w / w)%.
[0056]
<Example 1: Measurement of ceramide-producing ability of normal human epidermal cells>
A culture medium for epidermal keratinocyte growth medium (HuMedia-KG2, Kurabo Industries) was prepared according to the attached manual, and normal human epidermal keratinocytes (Kurabo) were seeded in a 6-well dish at 5000 cells / well, and 37 ° C. CO 2 Culture in an incubator until reaching 90% confluence. Then, the medium was a cell differentiation medium [0.5 μM-hydrocortisone, 0.1 μM-insulin containing the test samples (50 ug / ml of each extract solid) produced in Production Examples 1 to 3 and Comparative Production Examples 1 and 2. -10% by volume of fetal calf serum-Dulbecco's modified basal medium: Ham'F12 (3: 1)], and culturing while changing the medium every two days. Lipids were extracted with a mixed solvent of methanol (volume ratio 2: 1). After the extracted lipid was dried, it was dissolved in 200 μl of the mixed solvent, and ceramide was quantified by thin layer chromatography [developing solvent: chloroform: methanol: acetic acid (190: 9: 1)]. In addition, what performed the same experiment without adding a test sample was used as control. Each experiment was performed twice, and calculated as a relative ratio of the control, and shown in Table 1.
[0057]
[Table 1]
[0058]
As is clear from Table 1, when the camellia peel extract, the camellia seed defatted extract and the tea seed defatted extract produced according to the present invention were added at 50 ug / ml, the amount of ceramide was 54, respectively, as compared with the case of no addition. %, 87% and 64%. On the other hand, the control camellia seed extracts (I) and (II) showed almost no ceramide-producing ability with respect to normal human epidermal cells.
[0059]
<Example 2: Toxicity test on normal human dermal cells>
Normal human skin fibroblasts (NB1RGB) subcultured in RITC80-7 medium (Kyokuto Pharmaceutical Co., Ltd.) containing 10% fetal bovine serum were used for the test. The test sample-containing medium (solids content of each extract: 50 ug / ml) produced in Production Examples 1 to 3 and Comparative Production Examples 1 and 2 so that the number of the normal human skin fibroblasts becomes 5000 cells / well in a 6-well dish. ) And incubate in a 37 ° C. CO 2 incubator until it reaches 90% confluence. After culturing for 4 days, cells were suspended by trypsin treatment, dead cells were stained by trypan blue staining, and the total number of cells and the number of dead cells were counted under a microscope using a hemocytometer. The percentage (%) of dead cells was determined as an index of toxicity. Each experiment was performed twice, and calculated as a relative ratio of the control, and shown in Table 2.
[0060]
[Table 2]
[0061]
As is clear from Table 2, when the camellia pericarp extract, camellia seed defatted extract and tea seed defatted extract produced in the present invention were added at 50 ug / ml, the control camellia seed extract (I) and ( Compared with II), the proportion of dead human normal dermal cells was very small.
[0062]
<Example 3: Facial cleansing cream>
The extract of Production Example 1 is used as an active ingredient in the following facial cleansing cream formulation (100% by weight in total).
[0063]
[Table 3]
[0064]
Component A is dissolved by heating and kept at 80 ° C. Separately, add Component B heated and dissolved at 80 ° C. to Component A, and mix well. The mixture was cooled while stirring, and the component C was added at 50 ° C. to obtain a face wash cream.
[0065]
<Example 4: Lotion>
The extract of Production Example 2 is used as an active ingredient in the following lotion formulation (100% by weight in total).
[0066]
[Table 4]
[0067]
All components were stirred and mixed at room temperature to form a uniform solution, and the pH was adjusted to 5.5 to obtain a lotion.
[0068]
<Example 5: Emulsion>
Production Example 3 The extract is used as an active ingredient in the following emulsion formulation (total 100% by weight).
[0069]
[Table 5]
[0070]
Component A is dissolved by heating and kept at 80 ° C. Separately, add Component B heated and dissolved at 80 ° C. to Component A, and mix well. The mixture was cooled while stirring, and the component C was added at 50 ° C. to obtain an emulsion.
[0071]
<Example 6: Test with preparation (percutaneous moisture evaporation)>
The lotion of Example 4 was applied to the corners of the eyes of 12 healthy subjects for 8 weeks. The transepidermal water loss before and after application (mean value of the subject) was measured and used as a measure of the barrier function. As shown in Table 6, when the lotion of Example 9 was applied for 8 weeks, the amount of water transpiration from the skin was reduced. This is considered that the skin barrier function was enhanced by applying the lotion of Example 4.
[0072]
[Table 6]
[0073]
<Example 7: Test with formulation (skin moisture content)>
In the same manner as in Example 6, the lotion prepared in Example 4 was applied to the corners of the eyes of 12 healthy subjects for 8 weeks. The amount of water before and after application was measured (mean value of the subject) and used as a measure of the improvement of the moisturizing function (the percentage when 0 week was taken as 100%). The results shown in Table 7 show that the application of the lotion of Example 4 increased the amount of water in the epidermis due to the improvement of the moisturizing function.
[0074]
[Table 7]
[0075]
<Example 7: Production of juice>
The following components are formulated so that the total is 100% by weight.
[0076]
[Table 8]
[0077]
Mix and stir all the above ingredients at room temperature to make a juice as a homogeneous solution.
[0078]
<Example 8: Production of candy>
The following components are formulated so that the total is 100% by weight.
[0079]
[Table 9]
[0080]
Mix and stir all of the above components at 70 ° C., place in a suitable mold and cool to room temperature to make a candy.
[0081]
【The invention's effect】
According to the present invention, the extract of a Camellia plant contained as an active ingredient is reduced in epidermal cells due to aging, exposure to ultraviolet light, dry skin, rough skin, atopic dermatitis, senile xeroderma, psoriasis, and the like. Restores ceramide metabolism and increases the amount of intracellular ceramide. As a result, excellent moisturizing and barrier functions can be provided to the skin. The ceramide production promoter of the present invention can also prevent a decrease in such a function in addition to normalization of the skin represented by the above-mentioned moisturizing function and barrier function.
