JP2012162487A - Whitening agent, anti-aging agent and skin cosmetic - Google Patents

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Enyo Shu
艶陽 周
Akinori Kiso
昭典 木曽
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Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To find a material having a whitening action or an anti-aging action among natural products having high safety; and to provide a whitening agent and an anti-aging agent using the same as an active constituent, and a skin cosmetic blended with them.SOLUTION: As the active constituent for the whitening agent and the anti-aging agent, an extract from one or more kinds of plants selected from the group consisting of a Kyou-mizuna, a Kyou-mibuna, Fushimi pepper, Manganji pepper and a Kujou green onion is incorporated. Further, a skin cosmetic is blended with the whitening agent and/or anti-aging agent.

Description

本発明は、美白剤、抗老化剤及び皮膚化粧料に関するものである。   The present invention relates to a whitening agent, an anti-aging agent, and a skin cosmetic.

皮膚においてメラニンは、紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。したがって、皮膚の色黒(皮膚色素沈着症)、シミ、ソバカス等を予防、治療又は改善するためには、メラニンの産生を抑制することが考えられる。   Melanin also plays a role in protecting the body from ultraviolet rays in the skin, but overproduction and uneven accumulation cause skin darkening and spots. Therefore, in order to prevent, treat, or improve skin darkness (skin pigmentation), spots, buckwheat, etc., it is conceivable to suppress the production of melanin.

従来、皮膚色素沈着症、シミ、ソバカス等の予防、治療又は改善には、ハイドロキノン等の化学合成品を有効成分とする美白剤を外用する処置が行われてきた。しかしながら、ハイドロキノン等の化学合成品は、皮膚刺激、アレルギー等の副作用のおそれがあるため、安全性の高い天然原料を有効成分とする美白剤の開発が望まれている。このような観点から、メラニン産生抑制作用を有するものとしては、例えば、トウゴマ根部からの抽出物(特許文献1参照)、サウスウレア(Saussurea)属に属する植物からの抽出物(特許文献2参照)等が知られている。   Conventionally, for the prevention, treatment or improvement of skin pigmentation, stains, buckwheat, etc., a treatment using a whitening agent containing a chemically synthesized product such as hydroquinone as an active ingredient has been performed. However, since chemical synthetic products such as hydroquinone may cause side effects such as skin irritation and allergy, development of a whitening agent containing a highly safe natural raw material as an active ingredient is desired. From this point of view, examples of those having a melanin production inhibitory effect include extracts from roots of castor bean (see Patent Document 1), extracts from plants belonging to the genus Southus (Saussurea), and the like (see Patent Document 2). It has been known.

グルタチオンは、グルタミン酸、システイン及びグリシンの3つのアミノ酸からなるトリペプチドであり、細胞内の主要なシステイン残基を有する化合物である。細胞内におけるグルタチオンは、ラジカルの捕捉、酸化還元による細胞機能の調節、各種酵素のSH供与体としての機能を果たすものであり、抗酸化成分としても知られている。その作用発現は、システイン残基に由来すると考えられている。しかしながら、皮膚中のグルタチオン量は、加齢により低下することが報告されており、このことが皮膚における酸化防御能を低下させ、細胞のDNA及びタンパク質等の構成成分にダメージを与える一因であると考えられている。   Glutathione is a tripeptide consisting of three amino acids, glutamic acid, cysteine and glycine, and is a compound having a major cysteine residue in the cell. Intracellular glutathione functions as a radical donor, regulation of cell function by redox, and an SH donor for various enzymes, and is also known as an antioxidant component. Its action expression is thought to be derived from cysteine residues. However, it has been reported that the amount of glutathione in the skin decreases with aging, and this is one factor that reduces the oxidative defense ability in the skin and damages cellular components such as DNA and proteins. It is believed that.

そのため、皮膚においてグルタチオンの産生を促進することは、加齢により衰える酸化ストレスの防御を高め、かつ紫外線による酸化ストレスに対する障害を抑制することにつながり、皮膚の老化の予防・治療、又はシミ等の色素沈着に対する改善が期待できると考えられる。このような考えに基づき、グルタチオン産生促進作用を有するものとして、テンニンカからの抽出物(特許文献3参照)、クチナシ属に属する植物からの抽出物(特許文献4参照)等が知られている。   Therefore, promoting the production of glutathione in the skin increases the defense against oxidative stress that declines with aging, and suppresses damage to oxidative stress caused by ultraviolet rays. It is considered that improvement for pigmentation can be expected. Based on this idea, extracts from tenninka (see Patent Document 3), extracts from plants belonging to the gardenia (see Patent Document 4), and the like are known as having a glutathione production promoting action.

皮膚は、表皮、基底膜及び真皮から構成されている。真皮は、線維芽細胞と該細胞から分泌されるコラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸等の細胞外マトリックスとにより構成されている。若い皮膚においてはこれらの皮膚組織が恒常性を維持することにより水分保持力、柔軟性、弾力性等が確保され、肌は外見的にも張りや艶があってみずみずしい状態に維持される。   The skin is composed of the epidermis, basement membrane and dermis. The dermis is composed of fibroblasts and an extracellular matrix such as collagen, elastin and hyaluronic acid secreted from the cells. In young skin, these skin tissues maintain their homeostasis, thereby ensuring moisture retention, flexibility, elasticity, and the like, and the skin is kept fresh and fresh with a firmness and gloss.

ところが、皮膚が紫外線、著しい空気の乾燥、過度の皮膚洗浄、ストレス、喫煙等の外的因子の影響を受けたり、加齢が進んだりすると、細胞外マトリックスの主要構成成分であるコラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸等の産生量が減少するとともに、分解や変質を引き起こす。その結果、皮膚の保湿機能や弾力性が低下し、角質の異常剥離が起こり、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワ、くすみ、きめの消失、弾力性の低下等が生じる。   However, when the skin is affected by external factors such as ultraviolet rays, significant air drying, excessive skin cleansing, stress, smoking, etc., or when aging progresses, collagen, elastin and the main components of the extracellular matrix The production amount of hyaluronic acid and the like is reduced, and decomposition and alteration are caused. As a result, the moisturizing function and elasticity of the skin are reduced, abnormal exfoliation of the keratin occurs, and changes accompanying aging of the skin, that is, wrinkles, dullness, disappearance of texture, reduced elasticity, and the like occur.

このように、皮膚の老化に伴う変化、すなわち、シワの形成、張りの消失、弾力性の低下等には、コラーゲン、エラスチン及びヒアルロン酸等の細胞外マトリックス成分の減少、変性が関与している。近年、皮膚の老化に伴う変化を誘導する因子として、過酸化水素や紫外線等によって生じる細胞障害が挙げられており、皮膚のしわ形成等の大きな要因と考えられる。   As described above, changes associated with aging of the skin, that is, formation of wrinkles, disappearance of tension, decrease in elasticity, etc. involve reduction and degeneration of extracellular matrix components such as collagen, elastin and hyaluronic acid. . In recent years, cell damage caused by hydrogen peroxide or ultraviolet rays has been cited as a factor that induces changes associated with skin aging, and is considered to be a major factor such as skin wrinkle formation.

したがって、コラーゲン、エラスチン若しくはヒアルロン酸の産生を促進すること、又は過酸化水素による細胞障害を抑制することは、皮膚の老化を防止又は改善する上で重要である。   Therefore, promoting the production of collagen, elastin or hyaluronic acid, or suppressing cell damage caused by hydrogen peroxide is important in preventing or improving skin aging.

従来、コラーゲン産生促進作用を有するものとしては、例えば、五斂子の葉部からの抽出物(特許文献5)、クスノハガシワからの抽出物(特許文献6)等が知られている。また、エラスチン産生促進作用を有するものとして、例えば、グミ科ヒッポファエ属に属する植物からの抽出物が知られている(特許文献7参照)。   Conventionally, what has a collagen production promotion effect is known, for example, an extract from the leaf part of Pagoda (Patent Document 5), an extract from Kusunohagashi (Patent Document 6), and the like. Moreover, as what has an elastin production promotion effect | action, the extract from the plant which belongs to the genus Hippophae, for example, is known (refer patent document 7).

ヒアルロン酸産生促進作用を有するものとしては、クスノハガシワからの抽出物(特許文献6参照)、スターフルーツ(五斂子)の果実部からの抽出物(特許文献8参照)等が知られている。過酸化水素細胞障害の抑制作用を有するものとして、五斂子の花部からの抽出物(特許文献9参照)等が知られている。   As what has a hyaluronic acid production promoting effect, the extract from Kusunohagashi (refer patent document 6), the extract from the fruit part of a star fruit (5 coconuts) (refer patent document 8), etc. are known. Extracts from the flower parts of quince (see Patent Document 9) and the like are known as having an action of inhibiting hydrogen peroxide cell damage.

表皮は、外部刺激を緩和し、水分等の体内成分の逸失を制御する働きをしており、最下層である基底層から始まって、有棘層、顆粒層、角質層へと連なる4層構造から構成されている。各層に存在する大部分の細胞は、基底層から分化した角化細胞である。基底層で分裂、増殖した角化細胞は、有棘層、顆粒層を通過しながら分化し角質細胞となって、強固な架橋結合をもったケラチン蛋白線維で構成された角質層を構成し、最終的には垢として角質層から脱落する。   The epidermis functions to alleviate external stimuli and control the loss of body components such as moisture, and starts with the basal layer, the lowest layer, and continues to the spiny layer, granule layer, and stratum corneum. It is composed of Most cells present in each layer are keratinocytes differentiated from the basal layer. The keratinocytes that divide and proliferate in the basal layer differentiate into keratinocytes while passing through the spinous layer and the granule layer, forming a stratum corneum composed of keratin protein fibers with strong cross-linking, Eventually it will fall off the stratum corneum as plaque.

角質層は皮膚の最外殻に存在しており、外界からの刺激に対する物理的なバリアとしての役割を果たしている。皮膚ではこのバリア機能を持たせるため、角化細胞が基底層で産生されてから垢となって剥がれ落ちるまでのサイクル(角化)を通常4週間の周期で繰り返し、表皮の新陳代謝を行っている。しかしながら、この角質層も加齢によって新陳代謝機能が衰え、こじわ、くすみ、色素沈着、肌荒れ等の皮膚トラブルを発生することになる。そのため、角化細胞の増殖を促進し、肌の新陳代謝機能を回復させることにより、こじわ、くすみ、色素沈着等の皮膚の老化を改善できるものと考えられる。このような考えに基づき、表皮角化細胞増殖促進作用を有するものとして、タイソウからの抽出物(特許文献10参照)、土貝母からの抽出物(特許文献11参照)等が知られている。   The stratum corneum is present in the outermost shell of the skin and serves as a physical barrier against irritation from the outside world. In order to have this barrier function in the skin, the cycle (keratinization) from the production of keratinocytes in the basal layer to the peeling off of the keratinocytes (keratinization) is usually repeated at a cycle of 4 weeks to perform epidermal metabolism. . However, the metabolic function of this stratum corneum also deteriorates with aging, and skin troubles such as wrinkles, dullness, pigmentation, and rough skin occur. Therefore, it is considered that skin aging such as wrinkles, dullness, and pigmentation can be improved by promoting the proliferation of keratinocytes and restoring the metabolic function of the skin. Based on such an idea, extracts from diatomaceous earth (see Patent Document 10), extracts from shellfish mothers (see Patent Document 11), and the like are known as having epidermal keratinocyte proliferation promoting action. .

また、顆粒層では、細胞膜が肥厚して肥厚細胞膜を形成するとともに、トランスグルタミナーゼ−1の作用により、蛋白分子間がグルタミル−リジン架橋され、強靭なケラチン蛋白線維が形成される。さらに、その一部にセラミド等が共有結合し、疎水的な構造をとることで、細胞間脂質のラメラ構造の土台を供給し、角質バリア機能の基礎が形成される。   In the granular layer, the cell membrane is thickened to form a thickened cell membrane, and the transglutaminase-1 action causes glutamyl-lysine cross-linking between protein molecules to form strong keratin protein fibers. Furthermore, ceramide or the like is covalently bonded to a part of the ceramide to form a hydrophobic structure, thereby providing a foundation for the lamellar structure of the intercellular lipid and forming the basis of the keratin barrier function.

しかし、加齢とともに表皮におけるトランスグルタミナーゼ−1の産生量が減少すると、角質バリア機能及び皮膚の保湿機能が低下するため、肌荒れ、乾燥肌等の皮膚の老化症状を呈したり、乾燥性皮膚疾患(例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、魚鱗癬等)を発症したりするようになる。そのため、表皮におけるトランスグルタミナーゼ−1の産生を促進することにより、皮膚の老化症状や乾燥性皮膚疾患等を予防、治療又は改善することができると考えられる。このようなトランスグルタミナーゼ−1産生促進作用を有するものとして、フロリジン及び/又はフロレチン(特許文献12参照)、ニガリ又はその構成成分である塩化カルシウム(特許文献13参照)等が知られている。   However, when the amount of transglutaminase-1 produced in the epidermis decreases with aging, the keratin barrier function and the skin moisturizing function decrease, so that skin aging symptoms such as rough skin and dry skin may occur, or dry skin diseases ( For example, atopic dermatitis, psoriasis, ichthyosis, etc.) may develop. Therefore, it is considered that skin aging symptoms, dry skin diseases, and the like can be prevented, treated, or improved by promoting production of transglutaminase-1 in the epidermis. Known examples of such transglutaminase-1 production promoting action include phlorizin and / or phloretin (see Patent Document 12), bittern or calcium chloride (see Patent Document 13) as a component thereof.

セラミドは、表皮細胞の角化の過程においてセリンとパルミトイル−CoAとを基に、セラミド合成の律速酵素として知られるセリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)をはじめとする酵素の働きにより生成される。セラミドは、皮膚最外層を覆う角質細胞間脂質の主成分として特異的に存在し、皮膚本来が持つ生体と外界とのバリア膜としての機能維持に重要な役割を果たしている。   Ceramide is produced by the action of an enzyme such as serine palmitoyltransferase (SPT) known as a rate-limiting enzyme for ceramide synthesis based on serine and palmitoyl-CoA in the process of keratinization of epidermal cells. Ceramide exists specifically as the main component of the keratinocyte lipid covering the outermost layer of the skin, and plays an important role in maintaining the function of the skin itself as a barrier film between the living body and the outside world.

角質層の構造は、レンガとモルタルとに例えられ、15層ほどに積み重なった角質細胞を細胞間脂質が繋ぎ止める形で強固なバリア膜を形成している。角質細胞は、アミノ酸を主成分とする天然保湿因子を細胞内に含有することによって水分を保持し、一方、角質細胞間脂質は、約50%のセラミドを主成分とし、コレステロール、脂肪酸等の両親媒性脂質から構成されており、疎水性部分と親水性部分とが交互に繰り返される層板構造、いわゆるラメラ構造を特徴としている。   The stratum corneum structure is compared to brick and mortar, and a strong barrier membrane is formed in such a way that intercellular lipids connect the stratum corneum stacked in about 15 layers. Keratinocytes retain water by containing natural moisturizing factors mainly composed of amino acids in the cells, while stratum corneum lipids are composed of approximately 50% ceramide as a main component, and parents such as cholesterol and fatty acids. It is composed of an amphiphilic lipid, and is characterized by a lamellar structure in which hydrophobic portions and hydrophilic portions are alternately repeated, so-called lamellar structure.

様々な内的・外的要因による皮膚のバリア機能の低下は、経表皮水分蒸散量を増加させ、皮膚のかさつき、落屑、掻痒感等を惹き起こし、いわゆる乾燥肌に陥る。また、皮膚のバリア機能の低下は、皮膚の炎症を増大させ、外界からの様々な刺激に対する防御機能が低下するという悪循環に陥る。最近の研究において、加齢により、又はバリア障害として知られるアトピー性皮膚炎患者において、角質セラミド成分(いわゆる細胞間脂質)の減少や組成変化が報告されており(非特許文献1参照)、皮膚のバリア機能の維持、改善にセラミドが重要であることが広く知られるようになっている。このような考え方に基づいて、皮膚のバリア機能を改善する方法として、セラミドを外部から補う方法(非特許文献2参照)や皮膚内部においてセラミド産生能を高める方法(非特許文献参照)等が知られている。 The decrease in the skin barrier function due to various internal and external factors increases the transepidermal water transpiration, causing skin roughness, desquamation, pruritus, etc., resulting in so-called dry skin. Moreover, the decrease in the barrier function of the skin increases the inflammation of the skin and falls into a vicious circle in which the protective function against various stimuli from the outside world is reduced. In recent studies, keratin ceramide components (so-called intercellular lipids) have been decreased and compositional changes have been reported in patients with atopic dermatitis known as aging or barrier disorders (see Non-patent Document 1). It is widely known that ceramide is important for maintaining and improving the barrier function of ceramide. Based on such a way of thinking, methods for improving the barrier function of the skin include a method of supplementing ceramide from the outside (see Non-Patent Document 2), a method of increasing the ceramide production ability inside the skin (see Non-Patent Document 3 ), and the like. Are known.

皮膚細胞では、水チャンネルとして知られるアクアポリンが、細胞膜上に発現して、細胞間隙の水をはじめとする低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。   In skin cells, it is known that aquaporins, known as water channels, are expressed on the cell membrane and play a role of taking in low-molecular substances such as interstitial water into cells.

ヒトでは、13種類のアクアポリン(AQP0〜AQP12)の存在が知られている。表皮細胞においては、主としてAQP3が存在しており、水に加えて、水分保持作用に関与するグリセロールや尿素等の低分子化合物をも取り込む役割を担っていると考えられている。   In humans, the presence of 13 types of aquaporins (AQP0 to AQP12) is known. In epidermal cells, AQP3 is mainly present, and it is considered to play a role of taking in low-molecular compounds such as glycerol and urea involved in water retention action in addition to water.

しかしながら、AQP3は加齢とともに減少し、このことが水分保持機能の低下の一因であることが示唆されているため、AQP3の発現を促進することにより、加齢による水分保持能やバリア機能等を制御することが可能であると考えられる(非特許文献4参照)。このような考えに基づき、AQP3発現促進作用を有するものとして、例えば、トコフェリルレチノエート(特許文献14参照)、ノウゼンハレン科植物より得られる抽出物(特許文献15参照)等が知られている。   However, AQP3 decreases with aging, and it has been suggested that this contributes to a decrease in water retention function. Therefore, by promoting the expression of AQP3, the water retention capacity and barrier function due to aging, etc. Can be controlled (see Non-Patent Document 4). Based on such an idea, for example, tocopheryl retinoate (see Patent Document 14), an extract obtained from a Nozenhalenaceae plant (see Patent Document 15) and the like are known as having AQP3 expression promoting action.

特開2001−213757号公報JP 2001-213757 A 特開2002−201122号公報JP 2002-201222 A 特開2008−285422号公報JP 2008-285422 A 特開2006−347934号公報JP 2006-347934 A 特開2002−226323号公報JP 2002-226323 A 特開2003−146837号公報JP 2003-146837 A 特開2005−22993号公報JP 2005-22993 A 特開2003−300893号公報Japanese Patent Laid-Open No. 2003-300893 特開2006−8571号公報JP 2006-8571 A 特開2006−316028号公報JP 2006-316028 A 特開2006−56854号公報JP 2006-56854 A 特開2004−51596号公報JP 2004-51596 A 特開2007−106712号公報JP 2007-106712 A 特開2006−290873号公報JP 2006-290873 A 特開2004−168732号公報JP 2004-168732 A

Akimoto K et al.,"J. Dermatol.",1993,Vol.20,p.1-6Akimoto K et al., "J. Dermatol.", 1993, Vol. 20, p.1-6 "フレグランスジャーナル",2004,Vol.32,No.11,p.23-32"Fragrance Journal", 2004, Vol.32, No.11, p.23-32 Tanno O et al.,"Br. J. Dermatol.",2000,Vol.143,p.524-531Tanno O et al., "Br. J. Dermatol.", 2000, Vol.143, p.524-531 "フレグランスジャーナル",2006,Vol.34,No.10,p.19-23"Fragrance Journal", 2006, Vol.34, No.10, p.19-23

本発明は安全性の高い天然物の中から美白作用又は抗老化作用を有するものを見出し、それを有効成分とする美白剤及び抗老化剤、並びにこれらを配合した皮膚化粧料を提供することを目的とする。   The present invention provides a whitening agent or an anti-aging agent which has a whitening action or an anti-aging action among highly safe natural products, and provides a whitening agent and an anti-aging agent containing the same as an active ingredient, and a skin cosmetic containing these. Objective.

上記課題を解決するために、本発明の美白剤又は抗老化剤は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし及び九条ねぎからなる群より選択される1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする。また、本発明の皮膚化粧料は、前記美白剤及び/又は抗老化剤を配合したことを特徴とする。   In order to solve the above-mentioned problems, the whitening agent or anti-aging agent of the present invention is selected from the group consisting of one or more plants selected from the group consisting of Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi and Kujo Negi. The extract is contained as an active ingredient. Moreover, the skin cosmetic of the present invention is characterized by blending the above-mentioned whitening agent and / or anti-aging agent.

前記美白剤に有効成分として含有させる前記抽出物は、メラニン産生抑制作用及び/又はグルタチオン産生促進作用を有することが好ましい。また、前記抗老化剤に有効成分として含有させる前記抽出物は、I型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、過酸化水素細胞障害抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用からなる群より選択される1種又は2種以上の作用を有することが好ましい。   It is preferable that the extract contained as an active ingredient in the whitening agent has a melanin production inhibitory action and / or a glutathione production promotion action. In addition, the extract contained as an active ingredient in the anti-aging agent is a type I collagen production promoting action, elastin production promoting action, hyaluronic acid production promoting action, hydrogen peroxide cell damage inhibiting action, epidermal keratinocyte growth promoting action It preferably has one or more actions selected from the group consisting of transglutaminase-1 production promoting action, serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA expression promoting action and aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action.

本発明によれば、優れた美白作用を有しかつ安全性の高い美白剤、及び優れた抗老化作用を有しかつ安全性の高い抗老化剤を提供することができる。さらに、本発明によれば、美白作用又は抗老化作用に優れた皮膚化粧料を提供することができる。   According to the present invention, it is possible to provide a whitening agent having an excellent whitening action and high safety, and an anti-aging agent having an excellent anti-aging action and high safety. Furthermore, according to this invention, the skin cosmetics excellent in the whitening effect | action or anti-aging effect | action can be provided.

以下、本発明の実施の形態について説明する。
〔美白剤,抗老化剤〕
本実施形態の美白剤又は抗老化剤は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし及び九条ねぎからなる群より選択される1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有するものである。
Embodiments of the present invention will be described below.
[Whitening agent, anti-aging agent]
The whitening agent or anti-aging agent of the present embodiment includes, as an active ingredient, an extract from one or more plants selected from the group consisting of Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi and Kujo Negi. It contains.

ここで、本実施形態において「抽出物」には、上記植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。   Here, in the present embodiment, the “extract” refers to an extract obtained using the above plant as an extraction raw material, a diluted or concentrated solution of the extract, a dried product obtained by drying the extract, or these Either a crude product or a purified product is included.

本実施形態において使用する抽出原料は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎである。   The extraction raw material used in this embodiment is Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo Green Onion.

京水菜は、アブラナ科アブラナ属の越年草であるミズナ(Brassica rapa var. nipposinica)の一品種であって、古くから京都地方で栽培され、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る京水菜の構成部位としては、例えば、全草のほか、葉部、茎部、花部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは地上部である。   Kyomizuna is a variety of Mizuna (Brassica rapa var. Nipposinica), a perennial plant belonging to the Brassica family Brassica, and has been cultivated in the Kyoto region for a long time and can be easily obtained from these areas. Examples of the constituent parts of Kyoto mizuna that can be used as an extraction raw material include whole grass, ground parts such as leaves, stems, and flower parts, root parts, or a mixture of these parts. Part.

京壬生菜は、アブラナ科アブラナ属の越年草であるミズナ(Brassica rapa var. nipposinica)の一品種であって、古くから京都市壬生地域で栽培され、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る京壬生菜の構成部位としては、例えば、全草のほか、葉部、茎部、花部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは地上部である。   Kyoto Kana is a varieties of Brassica rapa var. Nipposinica, a perennial plant of the Brassicaceae genus Brassica, which has long been cultivated in the Kyushu area of Kyoto City and can be easily obtained from these areas. it can. Examples of the constituent parts of Kyoto raisana that can be used as an extraction raw material include whole grass, above-ground parts such as leaves, stems, and flower parts, root parts, or a mixture of these parts, but preferably It is the ground part.

伏見とうがらしは、ナス科トウガラシ属の多年草(日本などの温帯では一年草)であるトウガラシ(Capsicum annum)の一品種であって、古くから京都市伏見地域で栽培され、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る伏見とうがらしの構成部位としては、例えば、全草のほか、葉部、茎部、花部、果実部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは果実部である。   Fushimi pepper is a variety of Capsicum annum, a perennial plant belonging to the genus Capsicum, which is cultivated in the Fushimi area of Kyoto City. It can be obtained. Examples of the constituent parts of Fushimi red pepper that can be used as the raw material for extraction include whole grass, aboveground parts such as leaves, stems, flower parts, fruit parts, root parts, or a mixture of these parts. Preferably it is a fruit part.

万願寺とうがらしは、ナス科トウガラシ属の多年草(日本などの温帯では一年草)であるトウガラシ(Capsicum annum)の一品種であって、京都府舞鶴市の万願寺地域等で栽培され、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る万願寺とうがらしの構成部位としては、例えば、全草のほか、葉部、茎部、花部、果実部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは果実部である。   Manganji Togarashi is a variety of Capsicum annum that is a perennial of the genus Capsicum (Annual Grass in Japan and other temperate zones) and is cultivated in the Manganji area of Maizuru City, Kyoto Prefecture. It can be easily obtained. Examples of the constituent parts of Manganji shrimp that can be used as an extraction raw material include whole grass, above-ground parts such as leaves, stems, flower parts, fruit parts, root parts, or a mixture of these parts. Preferably it is a fruit part.

九条ねぎは、ネギ科ネギ属に属するネギ(Allium fistulosum)の一品種であって、古くから京都市南区九条地域で栽培され、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得る九条ねぎの構成部位としては、例えば、全草のほか、葉部、茎部、葉鞘部、花部などの地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、好ましくは地上部である。   Kujo leek is a cultivar of Allium fistulosum belonging to the genus Allium, and has been cultivated in the Kujo area, Minami-ku, Kyoto, and can be easily obtained from these areas. Examples of the constituent parts of Kujo leek that can be used as an extraction raw material include whole grass, above-ground parts such as leaf parts, stem parts, leaf sheath parts, flower parts, root parts, or a mixture of these parts. The above-ground part is preferable.

上記植物からの抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、上記植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。   The extract from the plant can be obtained by drying the extraction raw material, pulverizing it as it is or using a crusher, and subjecting it to extraction with an extraction solvent. Drying may be performed in the sun or using a commonly used dryer. Moreover, after performing pretreatment, such as degreasing, with a nonpolar solvent such as hexane, it may be used as an extraction raw material. By performing pretreatment such as degreasing, extraction treatment with the polar solvent of the plant can be efficiently performed.

抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は2種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。   As the extraction solvent, it is preferable to use a polar solvent, and examples thereof include water and hydrophilic organic solvents. These are used alone or in combination of two or more at room temperature or a temperature below the boiling point of the solvent. It is preferable.

抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本実施形態において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。   Examples of water that can be used as the extraction solvent include pure water, tap water, well water, mineral spring water, mineral water, hot spring water, spring water, fresh water, and the like, and those subjected to various treatments. Examples of the treatment applied to water include purification, heating, sterilization, filtration, ion exchange, osmotic pressure adjustment, buffering, and the like. Therefore, the water that can be used as the extraction solvent in this embodiment includes purified water, hot water, ion exchange water, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, and the like.

抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数1〜5の低級脂肪族アルコール;アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン;1,3−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数2〜5の多価アルコール等が挙げられる。   Examples of hydrophilic organic solvents that can be used as extraction solvents include lower aliphatic alcohols having 1 to 5 carbon atoms such as methanol, ethanol, propyl alcohol, and isopropyl alcohol; lower aliphatic ketones such as acetone and methyl ethyl ketone; 1,3-butylene. Examples thereof include polyhydric alcohols having 2 to 5 carbon atoms such as glycol, propylene glycol and glycerin.

2種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水10容量部に対して低級脂肪族アルコール1〜90容量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水10容量部に対して低級脂肪族ケトン1〜40容量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水10容量部に対して多価アルコール10〜90容量部を混合することが好ましい。   When using the liquid mixture of 2 or more types of polar solvents as an extraction solvent, the mixing ratio can be adjusted suitably. For example, when using a mixed solution of water and a lower aliphatic alcohol, it is preferable to mix 1 to 90 parts by volume of a lower aliphatic alcohol with respect to 10 parts by volume of water. When using a mixed solution, it is preferable to mix 1 to 40 parts by volume of a lower aliphatic ketone with 10 parts by volume of water, and when using a mixed solution of water and a polyhydric alcohol, water 10 It is preferable to mix 10 to 90 parts by volume of a polyhydric alcohol with respect to the volume part.

抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の5〜15倍量(質量比)の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。   The extraction treatment is not particularly limited as long as the soluble component contained in the extraction raw material can be eluted in the extraction solvent, and can be performed according to a conventional method. For example, the extraction raw material is immersed in an extraction solvent 5 to 15 times (mass ratio) of the extraction raw material, the soluble components are extracted at room temperature or under reflux, and then filtered to remove the extraction residue. A liquid can be obtained. When the solvent is distilled off from the obtained extract, a paste-like concentrate is obtained, and when this concentrate is further dried, a dried product is obtained.

なお、上述のようにして得られた抽出液はそのままでも美白剤又は抗老化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。   In addition, although the extract obtained as mentioned above can be used as it is as an active ingredient of a whitening agent or an anti-aging agent, a concentrated solution or a dried product is easier to use.

また、上記植物からの抽出物は特有の匂いを有しているため、その生理活性の低下を招かない範囲で脱色、脱臭等を目的とする精製を行うことも可能であるが、皮膚化粧料等に配合する場合には大量に使用するものではないから、未精製のままでも実用上支障はない。   In addition, since the extract from the plant has a peculiar odor, it can be purified for the purpose of decolorization, deodorization and the like within a range not causing a decrease in its physiological activity. Since it is not used in a large amount when it is blended, etc., there is no practical problem even if it is not purified.

以上のようにして得られる京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物は、優れた美白作用又は抗老化作用を有しているため、それぞれの作用を利用して美白剤又は抗老化剤の有効成分として用いることができる。   Since the extract from Kyomizuna, Kyoennagara, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo green onion obtained as described above has an excellent whitening effect or anti-aging effect, use each action. It can be used as an active ingredient of a whitening agent or an anti-aging agent.

ここで、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物が有する美白作用は、例えば、メラニン産生抑制作用及び/又はグルタチオン産生促進作用に基づいて発揮される。ただし、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物が有する美白作用は、上記作用に基づいて発揮される美白作用に限定されるものではない。   Here, the whitening effect possessed by the extract from Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo onion is exhibited based on, for example, a melanin production inhibiting action and / or a glutathione production promoting action. However, the whitening effect of the extract from Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi, or Kujo Green onion is not limited to the whitening effect exhibited on the basis of the above action.

また、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物が有する抗老化作用は、例えば、I型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、過酸化水素細胞障害抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用からなる群より選択される1種又は2種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物が有する抗老化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗老化作用に限定されるものではない。   In addition, the anti-aging action of the extract from Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo onion is, for example, type I collagen production promoting action, elastin production promoting action, hyaluronic acid production promoting action, peroxidation 1 selected from the group consisting of an inhibitory action on hydrogen cell damage, an action for promoting keratinocyte proliferation, an action for promoting production of transglutaminase-1, an action for promoting expression of serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA, and an action for promoting expression of aquaporin 3 (AQP3) mRNA It is exhibited based on the action of two or more species. However, the anti-aging effect of the extract from Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo onion is not limited to the anti-aging action exhibited based on the above-mentioned action.

なお、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物は、抽出物が有するメラニン産生抑制作用、グルタチオン産生促進作用、I型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、過酸化水素細胞障害抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用又はアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用を利用して、メラニン産生抑制剤、グルタチオン産生促進剤、I型コラーゲン産生促進剤、エラスチン産生促進剤、ヒアルロン酸産生促進剤、過酸化水素細胞障害抑制剤、表皮角化細胞増殖促進剤、トランスグルタミナーゼ−1産生促進剤、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進剤又はアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進剤の有効成分として使用してもよい。   In addition, the extract from Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo onion has melanin production inhibitory action, glutathione production promoting action, type I collagen production promoting action, elastin production promoting action, hyaluron. Acid production promoting action, hydrogen peroxide cell damage inhibiting action, epidermal keratinocyte proliferation promoting action, transglutaminase-1 production promoting action, serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA expression promoting action or aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action Utilized, melanin production inhibitor, glutathione production promoter, type I collagen production promoter, elastin production promoter, hyaluronic acid production promoter, hydrogen peroxide cell disorder inhibitor, epidermal keratinocyte proliferation promoter, transglutaminase -1 production promoter, serine palmito Transferase (SPT) mRNA expression promoter or aquaporin 3 (AQP3) may be used as an active ingredient of mRNA expression promoting agent.

本実施形態の美白剤又は抗老化剤は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物のうちのいずれか一つを上記有効成分として用いてもよいし、これらの2種以上を混合して上記有効成分として用いてもよい。京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物を混合して上記有効成分として用いる場合、その配合比は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物が有する美白作用又は抗老化作用の程度等により適宜調整すればよい。   The whitening agent or anti-aging agent of the present embodiment may be any one of the extracts from Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo Negi, and these may be used as the active ingredients. Two or more of these may be mixed and used as the active ingredient. When using as an active ingredient by mixing an extract from Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo Negi, the mixing ratio is Kyomizuna, Kyoto Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo Negi What is necessary is just to adjust suitably according to the grade of the whitening effect | action or anti-aging effect which the extract from has.

本実施形態の美白剤又は抗老化剤は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物のみからなるものでもよいし、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物を製剤化したものでもよい。   The whitening agent or anti-aging agent of the present embodiment may be composed only of an extract from Kyomizuna, Kyojo Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo Negi, or a mixture thereof. An extract from Fushimi red pepper, Manganji red pepper, Kujo green onion or a mixture thereof may be used.

本実施形態の美白剤又は抗老化剤を製剤化する場合は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、錠剤状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味・矯臭剤等を用いることができる。京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物は、他の組成物(例えば、皮膚外用剤、美容用飲食品等)に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。   When formulating the whitening agent or anti-aging agent of the present embodiment, a pharmaceutically acceptable carrier such as dextrin and cyclodextrin and other optional auxiliaries are used in accordance with a conventional method, and are in the form of powder, granules, tablets Can be formulated into an arbitrary dosage form such as a liquid or a liquid. In this case, as an auxiliary agent, for example, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a stabilizer, a flavoring / flavoring agent, and the like can be used. Extracts from Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo Negi, or mixtures thereof may be used in other compositions (for example, external preparations for skin, cosmetic foods and drinks, etc.) In addition, it can be used as an ointment, a liquid for external use, a patch and the like.

本実施形態の美白剤又は抗老化剤を製剤化する場合、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物の含有量は、特に限定されるものではなく、目的に応じて適宜設定することができる。   When formulating the whitening agent or anti-aging agent of the present embodiment, the content of the extract from Kyomizuna, Kyoen fresh vegetables, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo green onion, or a mixture thereof is not particularly limited. And can be appropriately set according to the purpose.

なお、本実施形態の美白剤又は抗老化剤は、必要に応じて、美白作用又は抗老化作用を有する他の天然抽出物等を、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物とともに配合して有効成分として用いることができる。   In addition, the whitening agent or anti-aging agent of the present embodiment, if necessary, other natural extracts having a whitening action or an anti-aging action, such as Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo Negi It can mix | blend with the extract from these, or these mixtures, and can be used as an active ingredient.

本実施形態の美白剤又は抗老化剤の患者に対する投与方法としては、経皮投与、経口投与等が挙げられるが、疾患の種類に応じて、その予防・治療等に好適な方法を適宜選択すればよい。   Examples of the method for administering the whitening agent or anti-aging agent of the present embodiment to a patient include transdermal administration, oral administration, and the like. Depending on the type of the disease, a suitable method for the prevention / treatment, etc. can be selected as appropriate. That's fine.

また、本実施形態の美白剤又は抗老化剤の投与量も、疾患の種類、重症度、患者の個人差、投与方法、投与期間等によって適宜増減すればよい。   In addition, the dose of the whitening agent or anti-aging agent of the present embodiment may be appropriately increased or decreased depending on the type of disease, severity, individual differences among patients, administration method, administration period, and the like.

本実施形態の美白剤は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物が有するメラニン産生抑制作用及び/又はグルタチオン産生促進作用を通じて、皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着を予防・改善することができる。ただし、本実施形態の美白剤は、これらの用途以外にもメラニン産生抑制作用及び/又はグルタチオン産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。   The whitening agent of the present embodiment is a skin blackening, a stain, a buckwheat, through a melanin production inhibitory action and / or a glutathione production promoting action possessed by an extract from Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo Onion. It is possible to prevent and improve pigmentation. However, the whitening agent of the present embodiment can be used for all purposes that are meaningful in exhibiting a melanin production inhibitory action and / or a glutathione production promoting action in addition to these uses.

本実施形態の抗老化剤は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし又は九条ねぎからの抽出物が有するI型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、過酸化水素細胞障害抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用からなる群より選択される1種又は2種以上の作用を通じて、皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状を予防、治療又は改善することができる。ただし、本実施形態の抗老化剤は、上記の用途以外にもI型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、過酸化水素細胞障害抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用からなる群より選択される1種又は2種以上の作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。   The anti-aging agent of the present embodiment is Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togari or Kujo green onion extract type I collagen production promoting action, elastin production promoting action, hyaluronic acid production promoting action, peroxidation 1 selected from the group consisting of an inhibitory action on hydrogen cell damage, an action for promoting keratinocyte proliferation, an action for promoting production of transglutaminase-1, an action for promoting expression of serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA, and an action for promoting expression of aquaporin 3 (AQP3) mRNA Through the action of two or more species, skin aging symptoms such as skin wrinkle formation, reduced elasticity, and reduced moisturizing function can be prevented, treated, or improved. However, the anti-aging agent of the present embodiment is not limited to the above uses, but promotes type I collagen production, elastin production, hyaluronic acid production, hydrogen peroxide cell damage, epidermal keratinocyte proliferation Significance of exerting one or more actions selected from the group consisting of a transglutaminase-1 production promoting action, a serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA expression promoting action and an aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action Can be used for all applications.

また、本実施形態の美白剤又は抗老化剤は、それぞれ優れた美白作用又は抗老化作用を有するため、例えば、皮膚外用剤又は飲食品に配合するのに好適である。この場合に、皮膚外用剤又は飲食品に配合される美白剤及び/又は抗老化剤は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物のみからなるものでもよいし、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物を製剤化したものでもよい。   Moreover, since the whitening agent or anti-aging agent of this embodiment has the respectively excellent whitening effect | action or anti-aging effect, it is suitable for mix | blending with a skin external preparation or food-drinks, for example. In this case, the whitening agent and / or anti-aging agent blended in the external preparation for skin or food and drink is composed only of an extract from Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togara or Kujo Negi, or a mixture thereof. It may be a thing, or it may be a formulation of an extract from Kyomizuna, Kyobu Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo green onion, or a mixture thereof.

ここで、皮膚外用剤としては、その区分に制限はなく、後述する皮膚化粧料のほか、経皮的に使用される医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものである。   Here, the external preparation for skin is not limited in its category, and includes a wide range of quasi-drugs and pharmaceuticals used transdermally, in addition to the skin cosmetics described below.

飲食品としては、その区分に制限はなく、経口的に摂取される一般食品、健康食品、保健機能食品、医薬部外品、医薬品等を幅広く含むものである。   The food and drink is not limited in its category, and includes a wide variety of foods such as general foods, health foods, health functional foods, quasi drugs, and pharmaceuticals that are taken orally.

また、本実施形態の美白剤又は抗老化剤は、それぞれ優れた美白剤作用又は抗老化作用を有するので、美白又は老化現象に関連する研究のための試薬としても好適に利用することができる。   Further, since the whitening agent or anti-aging agent of the present embodiment has an excellent whitening agent action or anti-aging action, respectively, it can be suitably used as a reagent for research related to whitening or aging phenomenon.

〔皮膚化粧料〕
上記美白剤又は抗老化剤は、それぞれ優れた美白作用又は抗老化作用を有しているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。この場合に、皮膚化粧料に配合される美白剤及び/又は抗老化剤は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物のみからなるものでもよいし、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物を製剤化したものでもよい。上記美白剤及び/又は抗老化剤を皮膚化粧料に配合することによって、皮膚化粧料に美白作用及び/又は抗老化作用を付与することができる。
[Skin cosmetic]
The above-mentioned whitening agent or anti-aging agent has an excellent whitening action or anti-aging action, and is therefore suitable for blending into skin cosmetics. In this case, the whitening agent and / or anti-aging agent to be blended in the skin cosmetic may consist of only an extract from Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo Negi, or a mixture thereof. In addition, an extract from Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo onion, or a mixture thereof may be used. By blending the above-described whitening agent and / or anti-aging agent into the skin cosmetic, it is possible to impart a whitening action and / or an anti-aging action to the skin cosmetic.

上記美白剤及び/又は抗老化剤を配合し得る皮膚化粧料としては、特に限定されるものではなく、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーション、リップクリーム、入浴剤、ヘアートニック、ヘアーローション、石鹸、ボディシャンプー等が挙げられる。   The skin cosmetic that can be blended with the above-described whitening agent and / or anti-aging agent is not particularly limited, for example, ointments, creams, emulsions, lotions, packs, foundations, lip balms, bath preparations, hair arts, Hair lotion, soap, body shampoo, etc. are mentioned.

上記美白剤及び/又は抗老化剤を皮膚化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料の種類に応じて適宜調整することができるが、好適な配合率は、上記美白剤又は抗老化剤に含まれる京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物の質量に換算して約0.0001〜10質量%であり、特に好適な配合率は約0.001〜1質量%である。   When the whitening agent and / or anti-aging agent is blended in the skin cosmetic, the blending amount can be appropriately adjusted according to the type of the skin cosmetic, but the preferred blending ratio is the whitening agent or anti-aging agent. It is about 0.0001 to 10% by mass in terms of the mass of an extract from Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo green onion contained in the aging agent, or a mixture thereof, and a particularly suitable blending ratio Is about 0.001-1 mass%.

本実施形態の皮膚化粧料は、京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし若しくは九条ねぎからの抽出物又はこれらの混合物が有するメラニン産生抑制作用、グルタチオン産生促進作用、I型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、過酸化水素細胞障害抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用又はアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用を妨げない限り、通常の皮膚化粧料の製造に用いられる主剤、助剤又はその他の成分、例えば、収斂剤、殺菌・抗菌剤、美白剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素除去剤、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、香料等を併用することができる。このように併用することで、より一般性のある製品となり、また、併用された他の有効成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。   The skin cosmetics of this embodiment are Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi or Kujo onion extract or a mixture thereof, melanin production inhibiting action, glutathione production promoting action, type I collagen production promoting action , Elastin production promoting action, hyaluronic acid production promoting action, hydrogen peroxide cell damage inhibiting action, epidermal keratinocyte proliferation promoting action, transglutaminase-1 production promoting action, serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA expression promoting action or aquaporin 3 ( AQP3) Main agents, auxiliaries or other components used in the production of normal skin cosmetics, such as astringents, bactericides / antibacterial agents, whitening agents, UV absorbers, moisturizers, as long as they do not interfere with the mRNA expression promoting action Cell activator, anti-inflammatory / antiallergic agent, antioxidant / active oxygen remover, oil , Waxes, hydrocarbons, fatty acids, alcohols, esters, surfactants can be used in combination with perfumes. When used in combination, it becomes a more general product, and a synergistic effect with other active ingredients used in combination may lead to an excellent effect that is more than normally expected.

本実施形態の皮膚化粧料は、メラニン産生抑制作用及び/又はグルタチオン産生促進作用を通じて、皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着を予防・改善することができる。また、本実施形態の皮膚化粧料は、I型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、過酸化水素細胞障害抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用からなる群より選択される1種又は2種以上の作用を通じて、皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状を予防、治療又は改善することができる。   The skin cosmetic of the present embodiment can prevent and improve pigmentation such as skin darkening, spots, and freckles through a melanin production inhibitory action and / or a glutathione production promoting action. In addition, the skin cosmetic of this embodiment has type I collagen production promoting action, elastin production promoting action, hyaluronic acid production promoting action, hydrogen peroxide cell damage inhibiting action, epidermal keratinocyte proliferation promoting action, transglutaminase-1 production. Formation of skin wrinkles and reduction of elasticity through one or more actions selected from the group consisting of promoting action, serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA expression promoting action and aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action It is possible to prevent, treat or ameliorate skin aging symptoms such as reduced moisturizing function.

なお、本実施形態の美白剤、抗老化剤及び皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物(例えば,マウス,ラット,ハムスター,イヌ,ネコ,ウシ,ブタ,サル等)に対して適用することもできる。   The whitening agent, anti-aging agent, and skin cosmetic of the present embodiment are preferably applied to humans, but animals other than humans (for example, mice) can be used as long as their respective effects are exhibited. , Rat, hamster, dog, cat, cow, pig, monkey, etc.).

以下、製造例及び試験例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。   Hereinafter, although a manufacture example and a test example are shown and this invention is demonstrated concretely, this invention is not restrict | limited to each following example at all.

〔製造例1〕京水菜抽出物の製造
乾燥した京水菜の地上部の粉砕物20gに50容量%エタノール水溶液200mLを加え、還流抽出器で80℃にて2時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた抽出液を減圧下に濃縮し、乾燥して京水菜50%エタノール抽出物5.0gを得た(試料1)。
[Production Example 1] Manufacture of Kyomizuna extract 200 mL of 50 vol% ethanol aqueous solution was added to 20 g of ground product of dried Kyomizuna, heated and extracted at 80 ° C for 2 hours with a reflux extractor, and filtered while hot. . The obtained extract was concentrated under reduced pressure and dried to obtain 5.0 g of 50% ethanol extract of Kyoto mizuna (sample 1).

〔製造例2〕京壬生菜抽出物の製造
乾燥した京壬生菜の地上部の粉砕物20gに50容量%エタノール水溶液200mLを加え、還流抽出器で80℃にて2時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた抽出液を減圧下に濃縮し、乾燥して京壬生菜50%エタノール抽出物6.0gを得た(試料2)。
[Production Example 2] Manufacture of Kyojou Nana Vegetable Extract Add 50 mL of 50 vol% ethanol aqueous solution to 20 g of ground product of dried Kyojou Nana and heat extract at 80 ° C for 2 hours with a reflux extractor. Filtered. The obtained extract was concentrated under reduced pressure and dried to obtain 6.0 g of a 50% ethanol extract of Kyodon fresh vegetables (Sample 2).

〔製造例3〕伏見とうがらし抽出物の製造
乾燥した伏見とうがらしの果実部の粉砕物20gに50容量%エタノール水溶液200mLを加え、還流抽出器で80℃にて2時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた抽出液を減圧下に濃縮し、乾燥して伏見とうがらし50%エタノール抽出物7.9gを得た(試料3)。
[Production Example 3] Manufacture of Fushimi red pepper extract 20 g of 50 vol% ethanol aqueous solution was added to 20 g of the dried fruit part of Fushimi red pepper, heated and extracted at 80 ° C for 2 hours with a reflux extractor, and filtered while hot. . The obtained extract was concentrated under reduced pressure and dried to obtain 7.9 g of 50% ethanol extract of Fushimi red pepper (sample 3).

〔製造例4〕万願寺とうがらし抽出物の製造
乾燥した万願寺とうがらしの果実部の粉砕物20gに50容量%エタノール水溶液200mLを加え、還流抽出器で80℃にて2時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた抽出液を減圧下に濃縮し、乾燥して万願寺とうがらし50%エタノール抽出物7.1gを得た(試料4)。
[Production Example 4] Production of Manganji Tofu extract Extract 20 g of 50 vol% ethanol aqueous solution was added to 20 g of pulverized dried Manganji Toga pepper fruit, heated and extracted at 80 ° C for 2 hours with a reflux extractor, and filtered while hot . The obtained extract was concentrated under reduced pressure and dried to obtain 7.1 g of 50% ethanol extract from Manganji shrimp (sample 4).

〔製造例5〕九条ねぎ抽出物の製造
乾燥した九条ねぎの地上部の粉砕物20gに50容量%エタノール水溶液200mLを加え、還流抽出器で80℃にて2時間加熱抽出し、熱時濾過した。得られた抽出液を減圧下に濃縮し、乾燥して九条ねぎ50%エタノール抽出物6.1gを得た(試料5)。
[Production Example 5] Production of Kujo green onion extract To 20 g of ground product of dried Kujo green onion, 200 mL of 50 vol% ethanol aqueous solution was added, heated and extracted at 80 ° C for 2 hours with a reflux extractor, and filtered while hot. . The obtained extract was concentrated under reduced pressure and dried to obtain 6.1 g of Kujo leek 50% ethanol extract (Sample 5).

〔試験例1〕B16メラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用試験
製造例1〜5により得られた京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)について、以下のようにしてB16メラノーマ細胞に対するメラニン産生抑制作用を試験した。
[Test Example 1] Test for inhibiting melanin production on B16 melanoma cells Kyoto mizuna extract (sample 1), Kyoto rai extract (sample 2), Fushimi pepper extract (sample 3) obtained in Production Examples 1-5 In addition, Manganji Togarashi extract (sample 4) and Kujo green onion extract (sample 5) were tested for melanin production inhibitory action on B16 melanoma cells as follows.

B16メラノーマ細胞を、10%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を24.0×10cells/mLの細胞密度になるように10%FBS及び1mmol/Lテオフィリン含有ダルベッコMEM培地で希釈した後、48ウェルプレートに1ウェルあたり300μLずつ播種し、6時間培養した。 B16 melanoma cells were cultured using Dulbecco's MEM medium containing 10% FBS, and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with Dulbecco's MEM medium containing 10% FBS and 1 mmol / L theophylline to a cell density of 24.0 × 10 4 cells / mL, and then seeded at 300 μL per well in a 48-well plate. Incubate for hours.

培養終了後、被験試料(試料1〜5,試料濃度は下記表1を参照)を添加した10%FBS及び1mmol/Lテオフィリン含有ダルベッコMEM培地又は使用無添加の10%FBS及び1mmol/Lテオフィリン含有ダルベッコMEM培地を各ウェルに300μL添加し、4日間培養した。培養終了後、各ウェルから培地を取り除き、2mol/LのNaOH溶液200μLを添加して超音波破砕機により細胞を破壊し、波長475nmにおける吸光度を測定してメラニン産生量とした。   After culturing, 10% FBS and 1 mmol / L theophylline-containing Dulbecco's MEM medium added with test samples (samples 1 to 5, see sample concentration below) or 10% FBS and 1 mmol / L theophylline containing no use were added. Dulbecco's MEM medium was added in an amount of 300 μL to each well and cultured for 4 days. After completion of the culture, the medium was removed from each well, 200 μL of 2 mol / L NaOH solution was added, the cells were disrupted with an ultrasonic disrupter, and the absorbance at a wavelength of 475 nm was measured to obtain the amount of melanin produced.

また、単位細胞あたりのメラニン産生抑制作用を評価するために、上記と同様にして培養した後、培地を除去し400μLのPBS緩衝液で洗浄して、終濃度0.05mg/mLで10%FBS含有ダルベッコMEMに溶解したニュートラルレッドを各ウェルに200μL添加し、2.5時間培養した。培養後、ニュートラルレッド溶液を除去し、エタノール・酢酸溶液(エタノール:酢酸:水=50:1:49)を各ウェルに200μL添加し、色素を抽出した。抽出後、波長540nmにおける吸光度を測定した。   In addition, in order to evaluate the melanin production inhibitory action per unit cell, after culturing in the same manner as above, the medium was removed and washed with 400 μL of PBS buffer, and 10% FBS at a final concentration of 0.05 mg / mL. 200 μL of neutral red dissolved in Dulbecco's MEM was added to each well and cultured for 2.5 hours. After incubation, the neutral red solution was removed, and 200 μL of ethanol / acetic acid solution (ethanol: acetic acid: water = 50: 1: 49) was added to each well to extract the dye. After extraction, the absorbance at a wavelength of 540 nm was measured.

さらに、空試験として、試料を添加せずに上記と同様にして培養した細胞について、波長475nmにおける吸光度及び540nmにおける吸光度を測定した。得られた結果から、下記式により単位細胞あたりのメラニン産生抑制率(%)を算出した。   Furthermore, as a blank test, the absorbance at a wavelength of 475 nm and the absorbance at 540 nm were measured for cells cultured in the same manner as described above without adding a sample. From the obtained results, the melanin production inhibition rate (%) per unit cell was calculated by the following formula.

メラニン産生抑制率(%)={1−(B/D)/(A/C)}×100
上記式において、Aは「試料無添加時の475nmにおける吸光度」を表し、Bは「被験試料添加時の475nmにおける吸光度」を表し、Cは「試料無添加時の540nmにおける吸光度」を表し、Dは「被験試料添加時の540nmにおける吸光度」を表す。
結果を表1に示す。
Melanin production inhibition rate (%) = {1− (B / D) / (A / C)} × 100
In the above formula, A represents “absorbance at 475 nm when no sample is added”, B represents “absorbance at 475 nm when a test sample is added”, C represents “absorbance at 540 nm when no sample is added”, and D Represents “absorbance at 540 nm when a test sample is added”.
The results are shown in Table 1.

Figure 2012162487
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表1に示すように、京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)は、いずれも優れたメラニン産生抑制作用を有することが確認された。   As shown in Table 1, Kyomizuna extract (sample 1), Kyojou fresh vegetable extract (sample 2), Fushimi pepper extract (sample 3), Manganji temple pepper extract (sample 4) and Kujo green onion extract (sample) 5) was confirmed to have an excellent melanin production inhibitory effect.

〔試験例2〕グルタチオン産生促進作用試験
製造例4により得られた万願寺とうがらし抽出物(試料4)について、以下のようにしてグルタチオン産生促進作用を試験した。
[Test Example 2] Glutathione production promoting action test The Manganji Tofu extract (Sample 4) obtained in Production Example 4 was tested for glutathione production promoting action as follows.

ヒト正常皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を、10%FBS含有α−MEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2.0×10cells/mLの細胞密度になるように10%FBS含有α−MEM培地で希釈した後、48ウェルプレートに1ウェル当たり200μLずつ播種し、一晩培養した。 Human normal skin fibroblasts (NB1RGB) were cultured using α-MEM medium containing 10% FBS, and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with 10% FBS-containing α-MEM medium to a cell density of 2.0 × 10 5 cells / mL, then seeded at 200 μL per well in a 48-well plate and cultured overnight.

培養後、被験試料(試料4,試料濃度は下記表2を参照)を添加した1%FBS含有ダルベッコMEM培地又は試料無添加の1%FBS含有ダルベッコMEM培地を各ウェルに200μL添加し、24時間培養した。培養終了後、各ウェルから培地を除去し、400μLのPBS緩衝液にて洗浄した後、150μLのM−PER(PIERCE社製)を使用して細胞を溶解した。   After culturing, 200 μL of 1% FBS-containing Dulbecco MEM medium containing 1% FBS or sample-free 1% FBS-containing Dulbecco MEM medium supplemented with a test sample (sample 4, see Table 2 below) is added to each well for 24 hours. Cultured. After completion of the culture, the medium was removed from each well, washed with 400 μL of PBS buffer, and then the cells were lysed using 150 μL of M-PER (PIERCE).

このうちの100μLを使用して総グルタチオンの定量を行った。すなわち、96ウェルプレートに溶解した細胞抽出液100μL、0.1Mリン酸緩衝液50μL、2mM NADPH25μL及びグルタチオンレダクターゼ25μL(終濃度17.5unit/mL)を加え37℃で10分間加温した後、10mM 5,5'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid)25μLを加え、5分後までの波長412nmにおける吸光度を測定し、ΔOD/minを求めた。総グルタチオン濃度は、酸化型グルタチオン(和光純薬社製)を使用して作成した検量線をもとに算出した。得られた値を総タンパク量当たりのグルタチオン量に補正した後、下記式によりグルタチオン産生促進率(%)を算出した。   Of these, 100 μL was used to quantify total glutathione. Specifically, 100 μL of cell extract dissolved in 96-well plate, 50 μL of 0.1 M phosphate buffer, 2 μM NADPH and 25 μL of glutathione reductase (final concentration: 17.5 units / mL) were added and heated at 37 ° C. for 10 minutes, followed by 10 mM. 25 μL of 5,5′-dithiobis (2-nitrobenzoic acid) was added and the absorbance at a wavelength of 412 nm until 5 minutes later was measured to obtain ΔOD / min. The total glutathione concentration was calculated based on a calibration curve prepared using oxidized glutathione (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). After correcting the obtained value to the amount of glutathione per total protein amount, the glutathione production promotion rate (%) was calculated by the following formula.

グルタチオン産生促進率(%)=B/A×100
上記式において、Aは「試料無添加時の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量(対照)」を表し、Bは「被験試料添加時の細胞中における総タンパク量当たりのグルタチオン量」を表す。
結果を表2に示す。
Glutathione production promotion rate (%) = B / A × 100
In the above formula, A represents “the amount of glutathione per total amount of protein in the cell when no sample is added (control)”, and B represents “the amount of glutathione per total amount of protein in the cell when added to the test sample”. .
The results are shown in Table 2.

Figure 2012162487
Figure 2012162487

表2に示すように、万願寺とうがらし抽出物(試料4)は優れたグルタチオン産生促進作用を有することが確認された。   As shown in Table 2, it was confirmed that Manganji pepper extract (sample 4) has an excellent glutathione production promoting action.

〔試験例3〕I型コラーゲン産生促進作用試験
製造例2及び5により得られた京壬生菜抽出物(試料2)及び九条ねぎ抽出物(試料5)について、以下のようにしてI型コラーゲン産生促進作用を試験した。
[Test Example 3] Type I collagen production promoting action test The Kyojo fresh vegetable extract (sample 2) and Kujo green onion extract (sample 5) obtained in Production Examples 2 and 5 were used to produce type I collagen as follows. The promoting action was tested.

ヒト正常線維芽細胞(NB1RGB)を、10%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1.6×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、96ウェルマイクロプレートに1ウェルあたり100μLずつ播種し、一晩培養した。 Human normal fibroblasts (NB1RGB) were cultured using Dulbecco's MEM medium containing 10% FBS, and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with the above medium to a cell density of 1.6 × 10 5 cells / mL, then seeded at 100 μL per well in a 96-well microplate and cultured overnight.

培養終了後、培地を抜き、被験試料(試料2及び試料5,試料濃度は下記表3を参照)を添加した0.25%FBS含有ダルベッコMEM培地又は試料無添加の0.25%FBS含有ダルベッコMEM培地を各ウェルに150μLずつ添加し、3日間培養した。培養後、各ウェルの培地中のI型コラーゲン量をELISA法により測定した。測定結果から、下記式によりI型コラーゲン産生促進率(%)を算出した。   After completion of the culture, the medium was removed, and the 0.25% FBS-containing Dulbecco MEM medium added with the test sample (Sample 2 and Sample 5, refer to Table 3 below) or the sample-free 0.25% FBS-containing Dulbecco 150 μL of MEM medium was added to each well and cultured for 3 days. After culture, the amount of type I collagen in the medium of each well was measured by ELISA. From the measurement results, the type I collagen production promotion rate (%) was calculated by the following formula.

I型コラーゲン産生促進率(%)=A/B×100
上記式において、Aは「被験試料添加時のI型コラーゲン量」を表し、Bは「試料無添加時のI型コラーゲン量」を表す。
結果を表3に示す。
Type I collagen production promotion rate (%) = A / B × 100
In the above formula, A represents “type I collagen amount when test sample is added”, and B represents “type I collagen amount when no sample is added”.
The results are shown in Table 3.

Figure 2012162487
Figure 2012162487

表3に示すように、京壬生菜抽出物(試料2)及び九条ねぎ抽出物(試料5)は、優れたI型コラーゲン産生促進作用を有することが確認された。   As shown in Table 3, it was confirmed that the Kyodon fresh vegetable extract (sample 2) and the Kujo green onion extract (sample 5) have an excellent type I collagen production promoting effect.

〔試験例4〕エラスチン産生促進作用試験
製造例4により得られた万願寺とうがらし抽出物(試料4)について、以下のようにしてエラスチン産生促進作用を試験した。
[Test Example 4] Elastin production promoting action test The Manganji pepper extract (sample 4) obtained in Production Example 4 was tested for elastin production promoting action as follows.

ヒト正常線維芽細胞(NB1RGB)を、10%FBS含有ダルベッコMEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2.2×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、96ウェルマイクロプレートに1ウェル当たり100μLずつ播種し、一晩培養した。 Human normal fibroblasts (NB1RGB) were cultured using Dulbecco's MEM medium containing 10% FBS, and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with the above medium to a cell density of 2.2 × 10 5 cells / mL, then seeded at 100 μL per well in a 96-well microplate, and cultured overnight.

培養終了後、培地を除去し、被験試料(試料4、試料濃度は下記表4を参照)を添加した0.25%FBS含有ダルベッコMEM培地又は試料無添加の0.25%FBS含有ダルベッコMEM培地を各ウェルに150μL添加し、2日間培養した。培養終了後、上清を回収し、以下のようにして培養上清に遊離したエラスチン量をELISA法により測定した。測定結果から、下記式によりエラスチン産生促進率(%)を算出した。   After completion of the culture, the medium was removed, and 0.25% FBS-containing Dulbecco MEM medium to which a test sample (sample 4, sample concentration see Table 4 below) was added or 0.25% FBS-containing Dulbecco MEM medium to which no sample was added. Was added to each well and cultured for 2 days. After completion of the culture, the supernatant was collected, and the amount of elastin released into the culture supernatant was measured by ELISA as follows. From the measurement results, the elastin production promotion rate (%) was calculated by the following formula.

エラスチン産生促進率(%)=A/B×100
上記式において、Aは「被験試料添加時のエラスチン量」を表し、Bは「試料無添加時のエラスチン量」を表す。
結果を表4に示す。
Elastin production promotion rate (%) = A / B × 100
In the above formula, A represents “the amount of elastin when the test sample is added”, and B represents “the amount of elastin when no sample is added”.
The results are shown in Table 4.

Figure 2012162487
Figure 2012162487

表4に示すように、万願寺とうがらし抽出物(試料4)は優れたエラスチン産生促進作用を示した。   As shown in Table 4, Manganji red pepper extract (Sample 4) exhibited an excellent elastin production promoting action.

〔試験例5〕ヒアルロン酸産生促進作用試験
製造例1〜5により得られた京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)について、以下のようにしてヒアルロン酸産生促進作用を試験した。
[Test Example 5] Hyaluronic acid production promoting action test Kyomizuna extract (sample 1), Kyojo fresh vegetable extract (sample 2), Fushimi red pepper extract (sample 3), Manganji Togarashi obtained in Production Examples 1-5 The extract (sample 4) and the Kujo green onion extract (sample 5) were tested for hyaluronic acid production promoting effect as follows.

ヒト正常新生児皮膚表皮角化細胞(NHEK)を、ヒト正常新生児表皮角化細胞用培地(KGM)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、96ウェルプレートに1ウェルあたり100μLずつ播種し、24時間培養した。 Human normal neonatal skin epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured using human normal neonatal epidermal keratinocyte medium (KGM), and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with the above medium to a cell density of 1 × 10 5 cells / mL, then seeded at 100 μL per well in a 96-well plate, and cultured for 24 hours.

培養終了後、被験試料(試料1〜5,試料濃度は下記表5を参照)を添加したKGM培地又は試料無添加のKGM培地を各ウェルに100μLずつ添加し、7日間培養した。培養後、各ウェルの培地中のヒアルロン酸量を、ヒアルロン酸結合タンパク(HABP)を用いたサンドイッチ法により測定した。測定結果から、下記式によりヒアルロン酸産生促進率(%)を算出した。   After completion of the culture, 100 μL of a KGM medium added with a test sample (samples 1 to 5 and sample concentration shown in Table 5 below) or a sample-free KGM medium was added to each well and cultured for 7 days. After the culture, the amount of hyaluronic acid in the medium of each well was measured by a sandwich method using hyaluronic acid binding protein (HABP). From the measurement results, the hyaluronic acid production promotion rate (%) was calculated by the following formula.

ヒアルロン酸産生促進率(%)=A/B×100
上記式において、Aは「被験試料添加時のヒアルロン酸量」を表し、Bは「試料無添加時のヒアルロン酸量」を表す。
結果を表5に示す。
Hyaluronic acid production promotion rate (%) = A / B × 100
In the above formula, A represents “the amount of hyaluronic acid when the test sample is added”, and B represents “the amount of hyaluronic acid when no sample is added”.
The results are shown in Table 5.

Figure 2012162487
Figure 2012162487

表5に示すように、京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)は、いずれも優れたヒアルロン酸産生促進作用を示した。特に九条ねぎ抽出物(試料5)は、低濃度においても優れたヒアルロン酸産生促進作用を有することが確認された。   As shown in Table 5, Kyomizuna extract (Sample 1), Kyojou fresh vegetable extract (Sample 2), Fushimi Tofu extract (Sample 3), Manganji Tofu extract (Sample 4) and Kujo onion extract (Sample) 5) showed an excellent hyaluronic acid production promoting action. In particular, it was confirmed that the Kujo green onion extract (sample 5) has an excellent hyaluronic acid production promoting action even at a low concentration.

〔試験例6〕過酸化水素に対する細胞障害抑制作用試験
製造例1〜5により得られた京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)について、下記の試験方法により過酸化水素に対する細胞障害抑制作用を試験した。
[Test Example 6] Cytotoxicity inhibitory effect test for hydrogen peroxide Kyoto Mizuna extract (Sample 1), Kyoto Kashiwa Green extract (Sample 2), Fushimi Tofu extract (Sample 3) obtained in Production Examples 1 to 5 In addition, Manganji Togarashi extract (sample 4) and Kujo green onion extract (sample 5) were tested for their cytotoxic effects against hydrogen peroxide by the following test method.

ヒト正常皮膚線維芽細胞(NB1RGB)を、10%FBS含有α−MEM培地を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2.5×10cells/mLの細胞密度になるように5%FBS含有α−MEM培地で希釈した後、48ウェルのマイクロプレートに1ウェル当たり200μLずつ播種し、一晩培養した。 Human normal skin fibroblasts (NB1RGB) were cultured using α-MEM medium containing 10% FBS, and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells are diluted with 5% FBS-containing α-MEM medium to a cell density of 2.5 × 10 5 cells / mL, then seeded at 200 μL per well in a 48-well microplate and cultured overnight. did.

培養後、培地を除去し、被験試料(試料1〜5,試料濃度は下記表6を参照)を添加した1%FBS含有α−MEM培地又は試料無添加の1%FBS含有α−MEM培地を各ウェルに200μLずつ添加し、24時間培養した。培養終了後、各ウェルから培地を抜き、400μLのPBS緩衝液で洗浄し、過酸化水素を溶解したHank’s緩衝液(過酸化水素最終濃度:1mM)を200μL添加し、2時間培養した。   After culturing, the medium was removed, and a 1% FBS-containing α-MEM medium to which a test sample (samples 1 to 5 and sample concentration shown in Table 6 below) was added or a sample-free 1% FBS-containing α-MEM medium 200 μL was added to each well and cultured for 24 hours. After completion of the culture, the medium was removed from each well, washed with 400 μL of PBS buffer, and 200 μL of Hank's buffer (hydrogen peroxide final concentration: 1 mM) dissolved in hydrogen peroxide was added and cultured for 2 hours.

また、過酸化水素を溶解していないHank’s緩衝液を200μL添加し、同様の条件で培養した。さらに、試料溶液を添加せずに培養し、培養後、過酸化水素を溶解したHank’s緩衝液を200μL添加し、同様の条件で培養した。   In addition, 200 μL of Hank's buffer solution in which hydrogen peroxide was not dissolved was added and cultured under the same conditions. Furthermore, it culture | cultivated without adding a sample solution, and after culture | cultivation, 200 microliters of Hank's buffer solution which melt | dissolved hydrogen peroxide was added, and it culture | cultivated on the same conditions.

培養後、400μLのPBS緩衝液で洗浄し、終濃度0.05mg/mLで1%FBS含有α−MEM培地に溶解したニュートラルレッド溶液を200μLずつ添加し、2.5時間培養した。この後、ニュートラルレッド溶液を除去し、エタノール・酢酸溶液(エタノール:酢酸:水=50:1:49)300μLを各ウェルに加え、色素を抽出した。その後、マイクロプレートリーダーを用い540nmでの吸光度を測定し、過酸化水素障害抑制率(%)を求めた。なお、過酸化水素障害抑制率は、下記の計算式により算出した。   After culturing, the plate was washed with 400 μL of PBS buffer, 200 μL of neutral red solution dissolved in 1% FBS-containing α-MEM medium at a final concentration of 0.05 mg / mL was added and cultured for 2.5 hours. Thereafter, the neutral red solution was removed, and 300 μL of an ethanol / acetic acid solution (ethanol: acetic acid: water = 50: 1: 49) was added to each well to extract the dye. Thereafter, the absorbance at 540 nm was measured using a microplate reader to determine the hydrogen peroxide disorder inhibition rate (%). In addition, the hydrogen peroxide disorder inhibition rate was calculated by the following formula.

過酸化水素障害抑制率(%)={1−(C−A)}/(C−B)}×100
上記式において、Aは「被験試料添加・過酸化水素処理時の吸光度」を表し、Bは「試料無添加・過酸化水素処理時の吸光度」を表し、Cは「試料無添加・過酸化水素無処理時の吸光度」を表す。
上記試験の結果を表6に示す。
Hydrogen peroxide damage inhibition rate (%) = {1− (C−A)} / (C−B)} × 100
In the above formula, A represents “absorbance at the time of test sample addition / hydrogen peroxide treatment”, B represents “absorbance at the time of no sample addition / hydrogen peroxide treatment”, and C represents “absorbance at no sample addition / hydrogen peroxide treatment”. It represents “absorbance without treatment”.
The results of the above test are shown in Table 6.

Figure 2012162487
Figure 2012162487

表6に示すように、京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)は、過酸化水素障害抑制率を有することが確認された。特に伏見とうがらし抽出物(試料3)は、優れた過酸化水素障害抑制率を有していた。   As shown in Table 6, Kyomizuna extract (Sample 1), Kyojou fresh vegetable extract (Sample 2), Fushimi Tofu extract (Sample 3), Manganji Tofu extract (Sample 4) and Kujo onion extract (Sample) 5) was confirmed to have a hydrogen peroxide disorder inhibition rate. In particular, the Fushimi red pepper extract (Sample 3) had an excellent inhibition rate of hydrogen peroxide damage.

〔試験例7〕表皮角化細胞増殖促進作用試験
製造例1〜5により得られた京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)について、以下のようにして表皮角化細胞増殖促進作用を試験した。
[Test Example 7] Epidermal keratinocyte proliferation promoting action test Kyomizuna extract (Sample 1), Kyojo fresh vegetable extract (Sample 2), Fushimi pepper extract (Sample 3) obtained in Production Examples 1 to 5, Manganji shrimp extract (sample 4) and Kujo green onion extract (sample 5) were tested for the epidermal keratinocyte proliferation promoting action as follows.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地(Epilife-KG2)を用いて培養した後、トリプシン処理にて細胞を回収した。回収した細胞を3.0×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、コラーゲンコートした96ウェルプレートに1ウェルあたり100μLずつ播種し、一晩培養した。培養終了後、被験試料(試料1〜5,試料濃度は下記表7を参照)を添加したEpiLife-KG2培地又は試料無添加のEpiLife-KG2培地を各ウェルに100μL添加し、3日間培養した。 Normal human newborn epidermis keratinocytes (NHEK) were cultured using normal human epidermal keratinocyte long-term culture growth medium (Epilife-KG2), and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with the above medium to a cell density of 3.0 × 10 4 cells / mL, then seeded at 100 μL per well in a collagen-coated 96-well plate, and cultured overnight. After completion of the culture, 100 μL of EpiLife-KG2 medium to which a test sample (samples 1 to 5 and sample concentration is shown in Table 7 below) was added or EpiLife-KG2 medium to which no sample was added was added to each well and cultured for 3 days.

表皮角化細胞増殖促進作用は、MTTアッセイ法を用いて測定した。培養終了後、培地を除去し、終濃度0.4mg/mLでPBS緩衝液に溶解したMTTを各ウェル100μLずつ添加した。2時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを2−プロパノール100μLで抽出した。抽出後、波長570nmにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長650nmにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。得られた結果から、下記式により表皮角化細胞増殖促進率(%)を算出した。   The epidermal keratinocyte proliferation promoting action was measured using the MTT assay. After completion of the culture, the medium was removed, and 100 μL of MTT dissolved in PBS buffer at a final concentration of 0.4 mg / mL was added. After culturing for 2 hours, blue formazan produced in the cells was extracted with 100 μL of 2-propanol. After extraction, the absorbance at a wavelength of 570 nm was measured. At the same time, the absorbance at a wavelength of 650 nm was measured as turbidity, and the difference between the two was used as the amount of blue formazan produced. From the obtained results, the epidermal keratinocyte proliferation promotion rate (%) was calculated by the following formula.

表皮角化細胞増殖促進率(%)=A/B×100
上記式において、Aは「被験試料添加時のブルーホルマザン生成量」を表し、Bは「試料無添加のブルーホルマザン生成量」を表す。
上記試験の結果を表7に示す。
Epidermal keratinocyte proliferation promotion rate (%) = A / B × 100
In the above formula, A represents “the amount of blue formazan produced when the test sample is added”, and B represents “the amount of blue formazan produced without the sample added”.
Table 7 shows the results of the above test.

Figure 2012162487
Figure 2012162487

表7に示すように、京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)は、優れた表皮角化細胞増殖促進作用を有することが確認された。特に京壬生菜抽出物(試料2)及び万願寺とうがらし抽出物(試料4)は、優れた表皮角化細胞増殖促進作用を有していた。   As shown in Table 7, Kyomizuna extract (Sample 1), Kyojou fresh vegetable extract (Sample 2), Fushimi Tofu extract (Sample 3), Manganji Tofu extract (Sample 4) and Kujo onion extract (Sample) 5) was confirmed to have an excellent epidermal keratinocyte proliferation promoting action. In particular, the Kyoen fresh vegetables extract (sample 2) and Manganji pepper extract (sample 4) had excellent epidermal keratinocyte proliferation promoting action.

〔試験例8〕トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用試験
製造例1〜3及び5により得られた京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)及び九条ねぎ抽出物(試料5)について、以下のようにしてトランスグルタミナーゼ−1産生促進作用を試験した。
[Test Example 8] Transglutaminase-1 production promoting action test Kyomizuna extract (Sample 1), Kyojou fresh vegetable extract (Sample 2), Fushimi pepper extract (Sample 3) obtained in Production Examples 1-3 and 5 ) And Kujo green onion extract (Sample 5) were tested for their transglutaminase-1 production promoting effect as follows.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、正常ヒト新生児表皮角化細胞用増殖培地(KGM)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を1×10cells/mLの細胞密度になるように上記培地で希釈した後、96ウェルプレートに1ウェルあたり100μLずつ播種し、2日間培養した。 Normal human neonatal epidermal keratinocytes (NHEK) were cultured using normal human neonatal epidermal keratinocyte growth medium (KGM), and then cells were collected by trypsin treatment. The collected cells were diluted with the above medium to a cell density of 1 × 10 5 cells / mL, then seeded at 100 μL per well in a 96-well plate, and cultured for 2 days.

培養終了後、被験試料(試料1〜3及び5,試料濃度は下記表8を参照)を添加したKGM培地又は試料無添加のKGM培地を各ウェルに100μLずつ添加し、24時間培養した。培養終了後、培地を除去し、細胞をプレートに固定させ、細胞表面に発現したトランスグルタミナーゼ−1の量を、モノクローナル抗ヒトトランスグルタミナーゼ−1抗体(Biomedical Technologies Inc.社製)を用いたELISA法により測定した。得られた測定結果から、下記式によりトランスグルタミナーゼ−1産生促進率(%)を算出した。   After completion of the culture, 100 μL each of KGM medium added with test samples (samples 1 to 3 and 5, for sample concentration, see Table 8 below) or KGM medium without sample was added to each well and cultured for 24 hours. After completion of the culture, the medium was removed, the cells were fixed to the plate, and the amount of transglutaminase-1 expressed on the cell surface was determined by ELISA using a monoclonal anti-human transglutaminase-1 antibody (Biomedical Technologies Inc.). It was measured by. From the obtained measurement results, the transglutaminase-1 production promotion rate (%) was calculated by the following formula.

トランスグルタミナーゼ−1産生促進率(%)=A/B×100
上記式において、Aは「被験試料添加時の吸光度」を表し、Bは「試料無添加時の吸光度」を表す。
試験結果を表8に示す。
Transglutaminase-1 production promotion rate (%) = A / B × 100
In the above formula, A represents “absorbance when a test sample is added”, and B represents “absorbance when no sample is added”.
The test results are shown in Table 8.

Figure 2012162487
Figure 2012162487

表8に示すように、京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)及び九条ねぎ抽出物(試料5)は、優れたトランスグルタミナーゼ−1産生促進作用を有することが確認された。特に、京水菜抽出物(試料1)は、低濃度(0.78μg/mL)においても優れたトランスグルタミナーゼ−1産生促進作用を有していた。   As shown in Table 8, Kyomizuna extract (sample 1), Kyojou green extract (sample 2), Fushimi pepper extract (sample 3) and Kujo green onion extract (sample 5) are excellent transglutaminase- 1 was confirmed to have a production-promoting action. In particular, the Kyoto mizuna extract (sample 1) had an excellent transglutaminase-1 production promoting action even at a low concentration (0.78 μg / mL).

〔試験例9〕セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用試験
製造例1〜5により得られた京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)について、以下のようにしてSPT mRNA発現促進作用を試験した。
[Test Example 9] Serine palmitoyltransferase (SPT) mRNA expression promoting action test Kyoto Mizuna extract (sample 1), Kyojou fresh vegetable extract (sample 2), Fushimi pepper extract (sample) obtained in Production Examples 1-5 3) Manganji Togarashi extract (sample 4) and Kujo green onion extract (sample 5) were tested for SPT mRNA expression promoting effect as follows.

正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞(NHEK)を、80cmフラスコで正常ヒト表皮角化長期培養用増殖培地(EpiLife-KG2)を用い、37℃、5%CO−95%airの条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。回収した細胞を20×10cells/mLの細胞密度になるようにEpilife-KG2培地で希釈した後、35mmシャーレ(FALCON社製)に2mLずつ播種し(40×10cells/シャーレ)、37℃、5%CO−95%airの条件下で24時間培養した。 Normal human newborn foreskin epidermal keratinocytes (NHEK) were used in a normal human epidermal keratinized long-term growth medium (EpiLife-KG2) in an 80 cm 2 flask under conditions of 37 ° C., 5% CO 2 -95% air. The cells were precultured and cells were collected by trypsin treatment. The collected cells are diluted with Epilife-KG2 medium so as to have a cell density of 20 × 10 4 cells / mL, and then seeded in 2 mL each in a 35 mm petri dish (manufactured by FALCON) (40 × 10 4 cells / petri dish). ° C., and cultured for 24 hours under the conditions of 5% CO 2 -95% air.

培養後に培地を除去し、被験試料(試料1〜5,試料濃度は下記表9を参照)を添加したEpilife-KG2培地又は試料無添加のEpilife-KG2培地を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO−95%airの条件下にて24時間培養した。培養後、培地を除去し、ISOGEN(ニッポンジーン社製,Cat. No. 311-02501)にて総RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるように総RNAを調製した。 After culturing, the medium was removed, and 2 mL each of Epilife-KG2 medium to which the test samples (samples 1 to 5 and sample concentrations are shown in Table 9) were added or no sample added was added to each dish. ° C., and cultured for 24 hours under conditions of 5% CO 2 -95% air. After culturing, the medium is removed, and total RNA is extracted with ISOGEN (Nippon Gene, Cat. No. 311-02501), and the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer so that it becomes 200 ng / μL. Total RNA was prepared.

この総RNAを鋳型とし、SPT及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(Cepheid社製)を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit(Perfect Real Time)(タカラバイオ社製,code No. RR063A)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。SPTの発現量は、「試料無添加」及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、さらに「試料無添加」の補正値を100としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりSPT mRNA発現促進率(%)を算出した。   Using this total RNA as a template, the expression level of SPT and mRNA of GAPDH as an internal standard was measured. Detection was performed by real-time 2-step RT-PCR reaction using a real-time PCR device Smart Cycler (Cepheid) and TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit (Perfect Real Time) (Takara Bio, code No. RR063A). . The expression level of SPT was calculated based on the total RNA preparation prepared from the cells cultured in “no sample” and “added sample”, respectively, and a correction value was obtained from the GAPDH value. The correction value of “sample addition” when the value was 100 was calculated. From the obtained results, the SPT mRNA expression promotion rate (%) was calculated by the following formula.

SPT mRNA発現促進率(%)=A/B×100
上記式において、Aは「被験試料添加時の補正値」を表し、Bは「試料無添加時の補正値」を表す。
結果を表9に示す。
SPT mRNA expression promotion rate (%) = A / B × 100
In the above formula, A represents “correction value when test sample is added” and B represents “correction value when sample is not added”.
The results are shown in Table 9.

Figure 2012162487
Figure 2012162487

表9に示すように、京水菜抽出物(試料1)、京壬生菜抽出物(試料2)、伏見とうがらし抽出物(試料3)、万願寺とうがらし抽出物(試料4)及び九条ねぎ抽出物(試料5)は、優れたSPT mRNA発現促進作用を有することが確認された。特に京水菜抽出物(試料1)及び京壬生菜抽出物(試料2)は、低濃度(3.13μg/mL)においても優れたSPT mRNA発現促進作用を有することが確認された。   As shown in Table 9, Kyomizuna extract (Sample 1), Kyojou fresh vegetable extract (Sample 2), Fushimi Tofu extract (Sample 3), Manganji Tofu extract (Sample 4) and Kujo onion extract (Sample) 5) was confirmed to have an excellent SPT mRNA expression promoting action. In particular, it was confirmed that the Kyoto mizuna extract (sample 1) and the kyosei rape extract (sample 2) have an excellent SPT mRNA expression promoting action even at a low concentration (3.13 μg / mL).

〔試験例10〕アクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用試験
製造例2及び3により得られた京壬生菜抽出物(試料2)及び伏見とうがらし抽出物(試料3)について、以下のようにしてAQP3 mRNA発現促進作用を試験した。
[Test Example 10] Aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action test About the Kyodon fresh vegetables extract (sample 2) and Fushimi pepper extract (sample 3) obtained in Production Examples 2 and 3, AQP3 was prepared as follows. The mRNA expression promoting effect was tested.

正常ヒト新生児表皮角化細胞(NHEK)を、80cmフラスコで正常ヒト表皮角化細胞長期培養用増殖培地(EpiLife-KG2)を用い、37℃、5%CO−95%airの条件下にて前培養し、トリプシン処理により細胞を集めた。回収した細胞を20×10cells/mLの細胞密度になるようにEpilife-KG2培地で希釈した後、35mmシャーレ(FALCON社製)に2mLずつ播種し(40×10cells/シャーレ)、37℃、5%CO−95%airの条件下で24時間培養した。 Normal human newborn epidermal keratinocytes (NHEK) were used in a growth medium for long-term culture of normal human epidermal keratinocytes (EpiLife-KG2) in an 80 cm 2 flask under conditions of 37 ° C., 5% CO 2 -95% air. The cells were precultured and cells were collected by trypsin treatment. The collected cells are diluted with Epilife-KG2 medium so as to have a cell density of 20 × 10 4 cells / mL, and then seeded in 2 mL each in a 35 mm petri dish (manufactured by FALCON) (40 × 10 4 cells / petri dish). ° C., and cultured for 24 hours under the conditions of 5% CO 2 -95% air.

培養後に培地を除去し、被験試料(試料2及び3,試料濃度は下記表10を参照)を添加したEpilife-KG2培地又は試料無添加のEpilife-KG2培地を各シャーレに2mLずつ添加し、37℃、5%CO−95%airの条件下にて24時間培養した。培養後、培地を除去し、ISOGEN(ニッポンジーン社製,Cat. No. 311-02501)にて総RNAを抽出し、それぞれのRNA量を分光光度計にて測定し、200ng/μLになるように総RNAを調製した。 After culturing, the medium was removed, and 2 mL each of Epilife-KG2 medium to which the test sample (samples 2 and 3, sample concentration was added) or the sample-free Epilife-KG2 medium was added was added to each dish. ° C., and cultured for 24 hours under conditions of 5% CO 2 -95% air. After culturing, the medium is removed, and total RNA is extracted with ISOGEN (Nippon Gene, Cat. No. 311-02501), and the amount of each RNA is measured with a spectrophotometer so that it becomes 200 ng / μL. Total RNA was prepared.

この総RNAを鋳型とし、AQP3及び内部標準であるGAPDHのmRNAの発現量を測定した。検出はリアルタイムPCR装置Smart Cycler(Cepheid社製)を用いて、TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit(Perfect Real Time)(タカラバイオ社製,code No. RR063A)によるリアルタイム2Step RT-PCR反応により行った。AQP3の発現量は、「試料無添加」及び「試料添加」でそれぞれ培養した細胞から調製した総RNA標品を基にして、GAPDHの値で補正値を求め、さらに「試料無添加」の補正値を100としたときの「試料添加」の補正値を算出した。得られた結果から、下記式によりAQP3 mRNA発現促進率(%)を算出した。   Using this total RNA as a template, the expression levels of AQP3 and the internal standard GAPDH mRNA were measured. Detection was performed by real-time 2-step RT-PCR reaction using a real-time PCR device Smart Cycler (Cepheid) and TaKaRa SYBR Prime Script RT-PCR kit (Perfect Real Time) (Takara Bio, code No. RR063A). . The expression level of AQP3 is calculated based on the total RNA preparation prepared from the cells cultured in “no sample added” and “added sample”, respectively. The correction value of “sample addition” when the value was 100 was calculated. From the obtained results, the AQP3 mRNA expression promotion rate (%) was calculated by the following formula.

AQP3 mRNA発現促進率(%)=A/B×100
上記式において、Aは「被験試料添加時の補正値」を表し、Bは「試料無添加時の補正値」を表す。
結果を表10に示す。
AQP3 mRNA expression promotion rate (%) = A / B × 100
In the above formula, A represents “correction value when test sample is added” and B represents “correction value when sample is not added”.
The results are shown in Table 10.

Figure 2012162487
Figure 2012162487

表10に示すように、京壬生菜抽出物(試料2)及び伏見とうがらし抽出物(試料3)は、優れたAQP3 mRNA発現促進作用を有することが確認された。   As shown in Table 10, it was confirmed that the Kyoto fresh vegetable extract (sample 2) and the Fushimi pepper extract (sample 3) have an excellent AQP3 mRNA expression promoting effect.

〔配合例1〕
下記組成に従い、乳液を常法により製造した。
京水菜抽出物(製造例1) 0.01g
万願寺とうがらし抽出物(製造例4) 0.01g
ホホバオイル 4.00g
1,3−ブチレングリコール 3.00g
アルブチン 3.00g
ポリオキシエチレンセチルエーテル(20E.O.) 2.50g
オリーブオイル 2.00g
スクワラン 2.00g
セタノール 2.00g
モノステアリン酸グリセリル 2.00g
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.) 2.00g
パラオキシ安息香酸メチル 0.15g
グリチルリチン酸ステアリル 0.10g
黄杞エキス 0.10g
グリチルリチン酸ジカリウム 0.10g
イチョウ葉エキス 0.10g
コンキオリン 0.10g
オウバクエキス 0.10g
カミツレエキス 0.10g
香料 0.05g
精製水 残部(全量を100gとする)
[Formulation Example 1]
A milky lotion was produced by a conventional method according to the following composition.
Kyoto Mizuna Extract (Production Example 1) 0.01g
Manganji Togarashi Extract (Production Example 4) 0.01g
Jojoba oil 4.00 g
1,3-butylene glycol 3.00 g
Arbutin 3.00g
Polyoxyethylene cetyl ether (20E.O.) 2.50g
2.00 g of olive oil
Squalane 2.00g
Cetanol 2.00g
Glyceryl monostearate 2.00g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O.) 2.00g
Methyl paraoxybenzoate 0.15g
Stearyl glycyrrhizinate 0.10g
Twilight extract 0.10g
Dipotassium glycyrrhizinate 0.10g
Ginkgo biloba extract 0.10g
Conchiolin 0.10g
Oat extract 0.10g
Chamomile extract 0.10g
Fragrance 0.05g
Purified water remainder (total amount is 100 g)

〔配合例2〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
伏見とうがらし抽出物(製造例3) 0.05g
九条ねぎ抽出物(製造例5) 0.05g
クジンエキス 0.1g
オウゴンエキス 0.1g
流動パラフィン 5.0g
サラシミツロウ 4.0g
スクワラン 10.0g
セタノール 3.0g
ラノリン 2.0g
ステアリン酸 1.0g
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン(20E.O.) 1.5g
モノステアリン酸グリセリル 3.0g
油溶性甘草エキス 0.1g
1,3−ブチレングリコール 6.0g
パラオキシ安息香酸メチル 1.5g
香料 0.1g
精製水 残部(全量を100gとする)
[Formulation Example 2]
A cream having the following composition was produced by a conventional method.
Fushimi pepper extract (Production Example 3) 0.05g
Kujo green onion extract (Production Example 5) 0.05g
Kujin extract 0.1g
Ogon Extract 0.1g
Liquid paraffin 5.0g
Salami beeswax 4.0g
Squalane 10.0g
Cetanol 3.0g
Lanolin 2.0g
Stearic acid 1.0g
Oleic acid polyoxyethylene sorbitan (20E.O.) 1.5g
3.0 g glyceryl monostearate
Oil soluble licorice extract 0.1g
1,3-butylene glycol 6.0 g
1.5 g of methyl paraoxybenzoate
Fragrance 0.1g
Purified water remainder (total amount is 100 g)

〔配合例3〕
下記組成の美容液を常法により製造した。
京水菜抽出物(製造例1) 0.01g
京壬生菜抽出物(製造例2) 0.01g
カミツレエキス 0.1g
ニンジンエキス 0.1g
キサンタンガム 0.3g
ヒドロキシエチルセルロース 0.1g
カルボキシビニルポリマー 0.1g
1,3−ブチレングリコール 4.0g
グリチルリチン酸ジカリウム 0.1g
グリセリン 2.0g
水酸化カリウム 0.25g
香料 0.01g
防腐剤(パラオキシ安息香酸メチル) 0.15g
エタノール 2.0g
精製水 残部(全量を100gとする)
[Composition Example 3]
A serum having the following composition was produced by a conventional method.
Kyoto Mizuna Extract (Production Example 1) 0.01g
0.01g of Kyodon fresh vegetables extract (Production Example 2)
Chamomile extract 0.1g
Carrot extract 0.1g
Xanthan gum 0.3g
Hydroxyethylcellulose 0.1g
Carboxyvinyl polymer 0.1g
1,3-butylene glycol 4.0 g
0.1g dipotassium glycyrrhizinate
Glycerin 2.0g
Potassium hydroxide 0.25g
Fragrance 0.01g
Preservative (Methyl paraoxybenzoate) 0.15g
Ethanol 2.0g
Purified water remainder (total amount is 100 g)

本発明の美白剤、抗老化剤及び皮膚化粧料は、皮膚の黒化、シミ、ソバカス等の色素沈着の予防・改善;皮膚のシワの形成、弾力性の低下、保湿機能の低下等の皮膚の老化症状の予防、治療又は改善に大きく貢献できる。   The whitening agent, anti-aging agent, and skin cosmetic of the present invention are used to prevent and improve skin darkening, pigmentation such as spots and freckles; skin wrinkle formation, reduced elasticity, reduced moisturizing function, etc. Can greatly contribute to the prevention, treatment or improvement of aging symptoms.

Claims (5)

京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし及び九条ねぎからなる群より選択される1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美白剤。   A whitening agent comprising, as an active ingredient, an extract from one or more kinds of plants selected from the group consisting of Kyomizuna, Kyoen Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi and Kujo Green Onion. 前記抽出物が、メラニン産生抑制作用及び/又はグルタチオン産生促進作用を有することを特徴とする請求項1に記載の美白剤。   The whitening agent according to claim 1, wherein the extract has a melanin production inhibitory action and / or a glutathione production promotion action. 京水菜、京壬生菜、伏見とうがらし、万願寺とうがらし及び九条ねぎからなる群より選択される1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗老化剤。   An anti-aging agent characterized by containing, as an active ingredient, an extract from one or more plants selected from the group consisting of Kyomizuna, Kyojou Nana, Fushimi Togarashi, Manganji Togarashi and Kujo Green Onion. 前記抽出物が、I型コラーゲン産生促進作用、エラスチン産生促進作用、ヒアルロン酸産生促進作用、過酸化水素細胞障害抑制作用、表皮角化細胞増殖促進作用、トランスグルタミナーゼ−1産生促進作用、セリンパルミトイルトランスフェラーゼ(SPT)mRNA発現促進作用及びアクアポリン3(AQP3)mRNA発現促進作用からなる群より選択される1種又は2種以上の作用を有することを特徴とする請求項3に記載の抗老化剤。   The extract is a type I collagen production promoting action, elastin production promoting action, hyaluronic acid production promoting action, hydrogen peroxide cell damage inhibiting action, epidermal keratinocyte proliferation promoting action, transglutaminase-1 production promoting action, serine palmitoyltransferase The anti-aging agent according to claim 3, which has one or more actions selected from the group consisting of (SPT) mRNA expression promoting action and aquaporin 3 (AQP3) mRNA expression promoting action. 請求項1若しくは2に記載の美白剤及び/又は請求項3若しくは4に記載の抗老化剤を配合したことを特徴とする皮膚化粧料。   A skin cosmetic comprising the whitening agent according to claim 1 and / or the anti-aging agent according to claim 3 or 4.
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Cited By (4)

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JP2015203008A (en) * 2014-04-11 2015-11-16 富士化学工業株式会社 Aquaporin production improver
CN109468182A (en) * 2018-11-29 2019-03-15 山东禹王生态食业有限公司 A kind of whitening beauty soap and preparation method thereof
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