JP2004155688A - シャペロン活性を有する合成ペプチド、脱炭酸活性の測定方法、伝達性海綿状脳症用薬剤及びその探索方法 - Google Patents

Abstract

【課題】分子シャペロン活性を有する新規な合成ペプチドや伝達性海綿状脳症用薬剤及びその探索方法等を提供する。
【解決手段】アミノ酸配列Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｘ_１（Ｘ_１はＡｓｐ又はＧｌｕである。）を少なくとも一部に有するペプチド、又はＩｌｅ−Ｓｅｒ−Ｘ_２−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｘ_３−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｘ_４−Ｔｙｒ（Ｘ_２、Ｘ_３及びＸ_４はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｒｇである。）を少なくとも一部に有するペプチドを、プリオン蛋白質のアミノ酸配列由来のＬｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙを少なくとも一部に有するペプチドに加えることによって、後者のペプチドの脱炭酸活性を観測することができる。
【選択図】 なし

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、プリオン蛋白質の部分アミノ酸配列（セグメント）に対してシャペロン活性を有する新規な合成ペプチド、脱炭酸活性の測定方法、伝達性海綿状脳症用薬剤及びその探索方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
伝達性海綿状脳症（クロイツフェルト・ヤコブ病、スクレイピー、牛海綿状脳症など）の治療薬の開発には、社会からの強力な要請がある。これまでに幾つかの低分子化合物が開発されてきているが、効力性と副作用の点から、より優れた活性をもつ化合物の開発が望まれている（Ｋ．Ｔ． Ａｄｊｏｕ ｅｔ ａｌ．， ＣＮＳ Ｄｒｕｇｓ １０， ８３−８９ （１９９８））。
【０００３】
伝達性海綿状脳症と高分子シャペロン（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｘ）との関連性は既に指摘されているが、高分子シャペロンの単離同定には到っていない（Ｆ．Ｅ． Ｃｏｈｅｎ ＆ Ｓ．Ｂ． Ｐｒｕｓｉｎｅｒ， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ６７， ７９３−８１９ （１９９８））。但し、１３個のアミノ酸残基からなる合成ペプチド（ｉＰｒｐ１３）によるヒト（又はマウス）感染性プリオン蛋白質（Ｐｒｐ^Ｓｃ）の正常プリオン蛋白質（Ｐｒｐ^Ｃ）への変換が既に報告されている（Ｃ． Ｓｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ ３５５， １９２−１９７ （２０００）， Ｃ． Ｓｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｃｈｅｍ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２２６， ６７２−６８０ （１９９６））。
【０００４】
所望の分子シャペロン活性を有する短鎖ペプチド又は低分子有機化合物を開発するためには、生物活性を有する既存のアミノ酸配列中のアミノ酸残基を他のアミノ酸残基に置換するという方法や自然界からのランダムスクリーニング方法が採用される。例えば、前者の方法では、その配列中のアミノ酸残基の親媒性に着目して、似たような性質をもつほかのアミノ酸残基と入れ替える。また、Ｎ末端のアセチル化、Ｃ末端のアミド化、あるいはペプチド結合（−ＣＯＮＨ−）を−ＣＨ_２−ＮＨ−、−ＣＨ＝ＣＨ−、−ＮＨＣＯ−のように変換したり、適当な位置に２つのシステイン残基を導入して直線型から環状型にしたり、あるいはその逆方向（環状型から直線型）へ変換したり、またＬ−アミノ酸残基をＤ−アミノ酸残基と交換したりする改変方法もある。更に、新しい１つの合成方法として、天然型アミノ酸配列の逆配列合成法もある（Ｂ−Ｌ． Ｌｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ．， １９， １６０２−１６０６ （１９９６））。
【０００５】
そのような既知手段の中で、Ｓｏｔｏ らはｉＰｒｐ１３の逆配列ペプチドに関する分子シャペロン活性を全く言及していない（Ｃ． Ｓｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ ３５５， １９２−１９７ （２０００）， Ｃ． Ｓｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ｃｈｅｍ． Ｃｏｍｍｕｎ．， ２２６， ６７２−６８０ （１９９６））。
【０００６】
感染性プリオン蛋白質（Ｐｒｐ^Ｓｃ）と伝達性海綿状脳症との関連性は多くの研究者に依って議論されているが、正常なプリオン蛋白質（Ｐｒｐ^Ｃ）については、銅結合蛋白質やストレス応答蛋白質以外の機能は不明である。但し、プリオン蛋白質の部分ペプチドがトリフロロエタノール存在下、オキザロアセテートに対して脱炭酸活性を発現するかもしれないことが推測されているが実証されていない（特開２００２−２２７３６号公報）。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、分子シャペロン活性を有する新規なシャペロン活性を有する合成ペプチド、脱炭酸活性の測定方法、伝達性海綿状脳症用薬剤及びその探索方法を提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は鋭意検討した結果、プリオン蛋白質のアミノ酸配列由来のアミノ酸配列Ｒ^４ＮＨ−Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＣＯＲ^５（配列表中の配列番号１３）又はＲ^４ＮＨ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−ＣＯＲ^５（配列表中の配列番号１４）（Ｒ^４は水素原子又はアセチル基であり、Ｒ^５はＯＨ又はＮＨ_２である。）で表されるアミノ酸配列の何れか１つが、トリフロロエタノール（ＴＦＥ）存在下で、オキザロアセテートの脱炭酸活性を促進することを見出し、更にそのアミノ酸配列はアミノ酸配列Ｒ^１ＮＨ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｘ_１−ＣＯＲ^２（配列表中の配列番号１０）（Ｘ_１はＡｓｐ又はＧｌｕであり、Ｒ^１は水素原子又はアセチル基であり、Ｒ^２はＯＨ又はＮＨ_２である。）で表されるペプチドか、又はＲ^３ＮＨ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｘ_２−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｘ_３−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｘ_４−Ｔｙｒ−ＣＯＲ^４（配列表中の配列番号１１）若しくはＲ^３ＮＨ−Ｔｙｒ−Ｘ_４−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｘ_３−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｘ_２−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−ＣＯＲ^４（配列表中の配列番号１２）（Ｘ_２、Ｘ_３及びＸ_４はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｒｇであり、Ｒ^１は水素原子又はアセチル基であり、Ｒ^２はＯＨ又はＮＨ_２である。）で表されるペプチドのうち何れか１つのペプチド又はクロルプロマジンを加えると、ＴＦＥ非存在下でも、オキザロアセテートの脱炭酸活性を促進することを見出し、本発明を完成させた。
【０００９】
更に好ましい態様としては、Ｘ_１はＡｓｐ、Ｘ_２、Ｘ_３及びＸ_４はＡｓｐ又はＡｒｇである。
【００１０】
また、本願発明に係る伝達性海綿状脳症用薬剤の探索方法は、上記のいずれかの合成ペプチドを用いるか、又はカルシトニン等の塩基性アミノ酸リジン残基を少なくとも１個含む両親媒性アミノ酸配列を用いることを特徴とする。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明のペプチドは活性化エステル法、混合酸無水物法、アジド法などのＣ端活性化法、カルボジミドなどのカップリング法、Ｎ−カルボキシ無水物（ＮＣＡ）法、酸化還元法あるいは固相合成法等の方法により合成することができる。
【００１２】
本発明のペプチドの有効成分として含む分子シャペロン剤においては該ペプチドに代えてあるいは該ペプチドと共に、上記のペプチドの生理学的に許容される塩を有効成分として含んでいてもよく、生理学的に許容される塩としてはアルカリ、無機酸または有機酸、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム、水酸化カリウム、塩酸、硫酸、燐酸、酢酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、オレイン酸、フマール酸等との塩を挙げることができる。
【００１３】
本発明におけるペプチドまたはその塩は治療または予防のための経口的あるいは非経口的に投与することができる。
【００１４】
経口投与剤としては散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤などの固形製剤あるいはシロップ剤、エリキシル剤などの液状製剤とすることができる。また、非経口投与剤としては注射剤、直腸投与剤、皮膚外用剤、吸入剤とすることができる。これらの製剤は活性成分に薬学的に認容できる製造助剤を加えることにより常法に従って製造される。更に、公知の技術により持続性製剤とすることも可能である。
【００１５】
経口投与用の固形製剤を製造するには活性成分と賦形剤、例えば乳糖、澱粉、結晶セルロース、乳酸カルシウム、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、無水ケイ酸などと混合して散剤とするか、更に必要に応じて白糖、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの結合剤、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウムなどの崩壊剤などを加えて湿式または乾式造粒して顆粒剤とする。錠剤を製造するにはこれらの散剤及び顆粒剤をそのままあるいはステアリン酸マグネシウム、タルクなどの滑沢剤を加えて打錠すればよい。これらの顆粒または錠剤はヒドロキシメチルセルロースフタレート、メタアクリル酸、メタアクリル酸メチルコポリマーなど腸溶性基剤で被覆して腸溶性製剤、あるいはエチルセルロース、カルナウバロウ、硬化油などで被覆して持続性製剤とすることもできる。また、カプセル剤を製造するには散剤又は顆粒剤などの硬カプセルに充填するか、活性成分をグリセリン、ポリエチレングリコール、ゴマ油、オリーブ油などに溶解したのちゼラチン膜で被覆し軟カプセルとすることができる。
【００１６】
経口投与用の液状製剤を製造するには活性成分と白糖、ソルビトール、グリセリンなどの甘味剤とを水に溶かして透明なシロップ剤、更に精油、エタノールなどを加えてエリキシル剤とするか、アラビアゴム、トラガント、ポリソルベート８０、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどを加えて乳剤または懸濁剤としてもよい。これらの液状製剤には所望により矯味剤、着色剤、保存剤などを加えてもよい。
【００１７】
注射剤を製造するには活性成分を必要に応じて塩酸、水酸化ナトリウム、乳酸、乳酸ナトリウム、リン酸一水素ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなどのｐＨ調整剤、塩化ナトリウム、ブドウ糖などの等張化剤とともに注射用蒸留水に溶解し、無菌ろ過してアンプルに充填するか、更にマンニトール、デキストリン、シクロデキストリン、ゼラチンなどを加えて真空下凍結乾燥し、用事溶解型の注射剤としてもよいし、活性成分にレシチン、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン硬化蓖麻子油などを加えて水中で乳化せしめ注射用乳剤とすることもできる。
【００１８】
直腸投与剤を製造するには活性成分及びカカオ脂、脂肪酸のモノ、ジ及びトリグリセリド、ポリエチレングリコールなどの坐剤用基剤とを加湿して溶融し、型に流し込んで冷却するか、活性成分をポリエチレングリコール、大豆油などに溶解したのちゼラチン膜で被覆すればよい。
【００１９】
皮膚外用剤を製造するには活性成分を白色ワセリン、ミツロウ、流動パラフィン、ポリエチレングリコールなどに加えて必要ならば加湿して練合し軟膏剤とするか、ロジン、アクリル酸アルキルエステル重合体などの粘着剤と練合したのちポリエチレンなどの不織布に展延してテープ剤としてもよい。
【００２０】
吸入剤を製造するには活性成分をフロンガスなどの噴射剤に溶解または分散して耐圧容器に充填しエアゾール剤としてもよい。
【００２１】
本発明のペプチドの投与量は伝達性海綿状脳症の患者（牛、羊などの動物も含め）の年齢、体重及び病態に依ってことなるが、通常一日当たり約１〜５００ｍｇであり、１乃至数回に分けて投与することが望ましい。
【００２２】
以下に、本発明について、実施例に基づいて具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。また、本活性測定方法を全種プリオン蛋白質の全長アミノ酸配列に応用したり、アミノ酸親媒性などの分類法に関する既知知見を用いて蛋白質データベース等から本発明のシャペロン活性を有する合成ペプチドのアミノ酸配列と相同性の高い（４０％以上）配列を持つ蛋白質を探索し、その相同性の高いアミノ酸配列を含む該蛋白質のアミノ酸配列全体又は部分を同一目的（例えば、伝達性海綿状脳症の治療、予防又は検査薬の開発）に利用することも容易に類推でき、本発明範囲に含まれる。更に、本活性測定法は、伝達性海綿状脳症の治療、予防又は検査用の薬剤の探索方法にも利用できることは明白であり、その用途法が本実施例に限定されるものではない。
【００２３】
【実施例】
先ず、種々の合成ペプチドを準備した。本実施例に用いた合成ペプチドは下記表１に示すとおりである。
【００２４】
【表１】

【００２５】
配列番号１、２、３及び５に記載のアミノ酸配列は公知である（Ａ． Ｉｗａｈｏｒｉ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌ． Ｐｈａｒｍ． Ｂｕｌｌ． ２０， ２６７−２７０ （１９９７）； Ｋ． Ｊｏｈｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ３６５， ５３０−５３２ （１９９３）； Ｇ． Ｆｏｒｉｏｎｉ ｅｔ ａｌ， Ｎａｔｕｒｅ ３６２， ５４３−５４６ （１９９３）； Ｃ． Ｓｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ ３５５， １９２−１９７ （２０００））。一方、配列番号４、６、７、８及び９に記載のアミノ酸配列は本発明範囲に含まれるものである。また、配列番号１、２、３、４及び９に記載のアミノ酸配列は、塩基性アミノ酸リジン残基を少なくとも１個含む両親媒性アミノ酸配列であり、このような両親媒性アミノ酸配列としては、他にカルシトニンが挙げられる。
【００２６】
次に、脱炭酸酵素活性測定を行った。この測定方法は以下のとおりである。２．９８ｍＭオキザロアセテート（１．７ｍｌ； ５０ｍＭ ＭＯＰＳ， ０．１５Ｍ ＮａＣｌ， ｐＨ７．５）とトリフロロエタノール（ＴＦＥ）（０．２ｍｌ）を分光器セルに加え、室温で、５分間攪拌した。攪拌後、その溶液に２．０ｍＭ濃度の測定用サンプルを０．１ｍｌ加えて反応溶液全量を２ｍｌとし、室温で、１分間攪拌（Ｉｕｃｈｉ， ＨＳ−３Ｂ， 回転スピード４）した。その後、攪拌を停止し、分光器（Ｕｌｔｒｏａｓｐｅｃ ３１００ｐｒｏ， Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｅｓ ｃｏｒｐ．）で２８５ｎｍの吸光度を測定した。対照サンプルとしては２．０ｍＭ配列番号２（０．２ｍＭ）を用いた。
【００２７】
反応開始後、２５００秒後の配列番号２に記載のアミノ酸配列存在下での吸光度減少量ａを求めた。同様にして、配列番号２に記載のアミノ酸配列非存在下でのオキザロアセテートの吸光度減少量ｂを求めた。試験ペプチド（配列番号１、３、４、５、６、７及び８）についても同様にして吸光度減少量ｃを求め、下記の数式１により試験ペプチドの配列番号２に記載のアミノ酸配列に対する相対比活性を求めた。
【００２８】
【数１】

【００２９】
この測定結果を表２に示す。
【００３０】
【表２】

【００３１】
この結果より配列番号３及び４に記載のアミノ酸配列はＴＦＥ存在下脱炭酸活性を有していることが明らかとなった。
【００３２】
次に、合成ペプチドのシャペロン活性測定を行った。この測定方法は以下のとおりである。２．９８ｍＭオキザロアセテート（１．７ｍｌ； ５０ｍＭ ＭＯＰＳ， ０．１５Ｍ ＮａＣｌ， ｐＨ７．５）とＴＦＥ（０．２ｍｌ）を分光器セルに加え、室温で、５分間攪拌した。攪拌後、その溶液に２．０ｍＭ濃度の測定用サンプルを０．１ｍｌ加えて反応溶液全量を２ｍｌとし、室温で、１分間攪拌（Ｉｕｃｈｉ， ＨＳ−３Ｂ， 回転スピード４）した。その後、攪拌を停止し、分光器（Ｕｌｔｒｏａｓｐｅｃ ３１００ｐｒｏ， Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｅｓ ｃｏｒｐ．）で２８５ｎｍの吸光度を測定した。対照サンプルとしては２．０ｍＭ配列番号３（又は４）に記載のアミノ酸配列（０．２ｍＭ）を用いた。反応開始後、２５００秒後の配列番号３に記載のアミノ酸配列存在下での吸光度減少量ｄを求めた。同様にして、配列番号３に記載のアミノ酸配列非存在下でのオキザロアセテートの吸光度減少量ｅを求めた。
【００３３】
次に、上記操作のＴＦＥの代わりに試験ペプチド（配列番号５、６、７又は８）を０．２ｍｌ加え、室温で５分間攪拌した。攪拌後、その溶液に２．０ｍＭ濃度の測定用サンプル（配列番号３）を０．１ｍｌ加えて反応溶液全量を２ｍｌとし、室温で、１分間攪拌（Ｉｕｃｈｉ， ＨＳ−３Ｂ， 回転スピード４）した。攪拌を停止後、分光器で２８５ｎｍの吸光度減少量ｆを測定した。下記の数式２により試験ペプチドの配列番号３（又は４）に記載のアミノ酸配列に対する相対比活性を求めた。
【００３４】
【数２】

【００３５】
この測定結果を表３に示す。
【００３６】
【表３】

【００３７】
この結果より、本発明のペプチド（配列番号６）はシャペロン活性を有していることが明らかとなった。
【００３８】
更に、他の方法により、合成ペプチドのシャペロン活性測定を行った。この測定方法は以下のとおりである。分光器セル中、２ｍＭ配列番号３（又は４）（０．２ｍｌ）、緩衝液（５０ｍＭ ＭＯＰＳ， ０．１５Ｍ ＮａＣｌ， ｐＨ７．０）（１．４ｍｌ）の混合溶液に、２ｍＭ測定用サンプル（配列番号５，６，７，８）（０．２ｍｌ）を加え、室温で４８時間攪拌（Ｉｕｃｈｉ， ＨＳ−３Ｂ， 回転スピード４）した。攪拌後、２．９８ｍＭオキザロアセテート（０．２ｍｌ）を加えて全量を２．０ｍｌとし、更に１分間攪拌した。攪拌を停止し、分光器（Ｕｌｔｒａｓｐｅｃ ３１００ｐｒｏ， Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｅｓ ｃｏｒｐ．）で２８５ｎｍの吸光度減少量を反応開始後５０００秒間測定した。対照サンプルとしては、測定用サンプル非存在下、トリフロロエタノール（ＴＦＥ）存在下の配列番号３で測定した吸光度減少量を１．００とした。
【００３９】
この測定結果を表４に示す。
【００４０】
【表４】

【００４１】
この結果より、本発明のペプチド（配列番号６及び７）はシャペロン活性を有していることが明らかとなった。
【００４２】
次に、上記の方法とは異なる方法により、脱炭酸活性測定を行った。この測定方法は以下のとおりである。分光器セル中、２ｍＭ配列番号９（０．２ｍｌ）、緩衝液（５０ｍＭ ＭＯＰＳ， ０．１５ＭＮａＣｌ， ｐＨ７．０）（１．４ｍｌ）の混合溶液に、ＴＦＥ（０．２ｍｌ）を加え、室温で４８時間攪拌（Ｉｕｃｈｉ， ＨＳ−３Ｂ， 回転スピード４）した。攪拌後、２．９８ｍＭオキザロアセテート（０．２ｍｌ）を加えて全量を２．０ｍｌとし、更に１分間攪拌した。攪拌を停止し、分光器（Ｕｌｔｒａｓｐｅｃ ３１００ｐｒｏ， Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｅｓ ｃｏｒｐ．）で２８５ｎｍの吸光度減少量を反応開始後５０００秒間測定した。対照サンプルとしては、測定用サンプル非存在下、トリフロロエタノール（ＴＦＥ）存在下の配列番号２で測定した吸光度減少量を１．００とした。
【００４３】
この測定結果を表５に示す。
【００４４】
【表５】

【００４５】
この結果より、配列番号９に記載のアミノ酸配列はＴＦＥ存在下で脱炭酸活性を有していることが明らかとなった。
【００４６】
次に、抗精神病薬等として使用されるクロルプロマジンのシャペロン活性測定を行った。この測定方法は以下のとおりである。分光器セル中、２ｍＭ配列番号９（０．２ｍｌ）、緩衝液（５０ｍＭ ＭＯＰＳ， ０．１５ＭＮａＣｌ， ｐＨ６．０）（１．４ｍｌ）の混合溶液に、２ｍＭ測定用サンプル（例えば、クロルプロマジン）を加え、室温で４８時間攪拌（Ｉｕｃｈｉ， ＨＳ−３Ｂ， 回転スピード４）した。攪拌後、２．９８ｍＭオキザロアセテート（０．２ｍｌ）を加えて全量を２．０ｍｌとし、更に１分間攪拌した。攪拌を停止し、分光器（Ｕｌｔｒａｓｐｅｃ ３１００ｐｒｏ， Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｅｓ ｃｏｒｐ．）で２８５ｎｍの吸光度減少量を反応開始後５０００秒間測定した。対照サンプルとしては、配列番号９非存在下、探索用サンプル（クロルプロマジン）存在下で測定した吸光度減少量を１．００とした。
【００４７】
この測定結果を表６に示す。
【００４８】
【表６】

【００４９】
この結果より、本発明のシャペロン活性測定法は伝達性海綿状脳症用治療薬としての低分子有機化合物を探索できることが明らかとなった。
【００５０】
【発明の効果】
上記ペプチドは分子シャペロン活性を有し、伝達性海綿状脳症の治療、予防又は検査薬としての用途を有する。
【００５１】
【配列表】

Claims (10)

1. 下記のアミノ酸配列
   Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｘ_１（Ｘ_１はＡｓｐ又はＧｌｕを表す。）を少なくとも一部に有することを特徴とするシャペロン活性を有する合成ペプチド。
2. 下記のアミノ酸配列
   Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｘ_２−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｘ_３−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｘ_４−Ｔｙｒ又は
   Ｔｙｒ−Ｘ_４−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｘ_３−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｘ_２−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ
   （Ｘ_２、Ｘ_３及びＸ_４はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｒｇである。）を少なくとも一部に有することを特徴とするシャペロン活性を有する合成ペプチド。
3. 前記アミノ酸配列のＮ末端がＮＨ_２又はＮＨＣＯＣＨ_３であり、Ｃ末端がＣＯＯＨ又はＣＯＮＨ_２であることを特徴とする請求項１又は２に記載のシャペロン活性を有する合成ペプチド。
4. 下記のアミノ酸配列
   Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ｘ_２−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｘ_３−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｘ_４−Ｔｙｒ又は
   Ｔｙｒ−Ｘ_４−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｘ_３−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｘ_２−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ
   （Ｘ_２、Ｘ_３及びＸ_４はＡｓｐ、Ｇｌｕ又はＡｒｇである。）を少なくとも一部に有するペプチドを、トリフロロエタノールとオキザロアセテートを含む緩衝液に加える工程を有することを特徴とする脱炭酸活性の測定方法。
5. プリオン蛋白質のアミノ酸配列由来の下記のアミノ酸配列
   Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ又は
   Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ
   を少なくとも一部に有するペプチドを、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の合成ペプチドとオキザロアセテートを含む緩衝液に加える工程を有することを特徴とする脱炭酸活性の測定方法。
6. 前記アミノ酸配列のＮ末端をＮＨ_２又はＮＨＣＯＣＨ_３とし、Ｃ末端をＣＯＯＨ又はＣＯＮＨ_２とすることを特徴とする請求項４又は５に記載の脱炭酸活性の測定方法。
7. 請求項１乃至３のいずれか１項に記載の合成ペプチドを用いたことを特徴とする伝達性海綿状脳症用薬剤。
8. プリオン蛋白質のアミノ酸配列由来の下記のアミノ酸配列
   Ｌｙｓ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｍｅｔ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ又は
   Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｍｅｔ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ｍｅｔ−Ａｓｎ−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ
   を少なくとも一部に有するペプチドを用いることを特徴とする伝達性海綿状脳症用薬剤の探索方法。
9. 前記アミノ酸配列のＮ末端をＮＨ_２又はＮＨＣＯＣＨ_３とし、Ｃ末端をＣＯＯＨ又はＣＯＮＨ_２とすることを特徴とする請求項８に記載の伝達性海綿状脳症用薬剤の探索方法。
10. 塩基性アミノ酸リジン残基を少なくとも１個含む両親媒性アミノ酸配列を用いることを特徴とする伝達性海綿状脳症用薬剤の探索方法。