JP2004008084A - ヒトａｂｃトランスポーター遺伝子を検出するためのプライマーセットおよび検出方法 - Google Patents
ヒトａｂｃトランスポーター遺伝子を検出するためのプライマーセットおよび検出方法 Download PDFInfo
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Abstract
【課題】微量の臨床検体におけるヒトＡＢＣトランスポーターの発現レベルを定量的に測定するためのキット、ならびに測定方法を提供する。
【解決手段】特定な塩基配列で表されるプライマーセット（１）〜（４８）、プライマーセット（１）〜（４８）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ファミリーを検出するためのキット、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ファミリーの特定のサブファミリーを検出するためのキット、ならびに、試料におけるＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現を検出する方法であって、プライマーセット（１）〜（４８）のいずれかを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応によりＡＢＣトランスポーター遺伝子を増幅させることを含む方法。
【選択図】 なし
【解決手段】特定な塩基配列で表されるプライマーセット（１）〜（４８）、プライマーセット（１）〜（４８）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ファミリーを検出するためのキット、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ファミリーの特定のサブファミリーを検出するためのキット、ならびに、試料におけるＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現を検出する方法であって、プライマーセット（１）〜（４８）のいずれかを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応によりＡＢＣトランスポーター遺伝子を増幅させることを含む方法。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＡＢＣトランスポーター遺伝子を検出するための特異的プライマーセット、およびこれを用いるＡＢＣトランスポーター遺伝子の検出方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
疾患の治療において患者に薬剤を投与する場合、患者間で薬剤応答性の差異が存在することが知られている。この原因の一つとして、薬物代謝酵素および薬剤標的分子（酵素、受容体など）の遺伝子多型や発現レベルの違いが挙げられる。また、薬剤応答性には、薬物トランスポーターによる細胞内への薬物の流入および排出の制御も大きく関与している。
【０００３】
ヒトＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーターが疾患の原因や薬物輸送に関与していることが報告されている。ＡＢＣトランスポーターは、細菌からヒト等の高等生物にわたるすべての細胞において見いだされる、最も大きな蛋白質のスーパーファミリーの１つであり、約２５０種類（ヒトでは約５０種類）のメンバーが知られている。ほとんどのＡＢＣ蛋白質は、トランスポーターとして機能するが、イオンチャネルとして機能するものも存在する。多くのＡＢＣ蛋白質は、臨床的に非常に重要な意味をもつ。例えば、癌に化学療法に対する耐性を与え、薬物の体内動態に関与する多剤耐性Ｐ−糖蛋白質、嚢胞性繊維症遺伝子産物、デュービン−ジョンソン症候群に関与する蛋白質等が知られている（Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１， １１５６−１１６６ （２００１））。
【０００４】
したがって、個別の患者に対して効率の良い治療を行うためには、ＡＢＣトランスポーターの構造および作用メカニズムを解析して種々の疾患との関連性を解明するとともに、それぞれの患者におけるＡＢＣトランスポーターの発現レベルを測定することが有用であろう。
【０００５】
ヒトゲノム解析から、約５０種類のＡＢＣトランスポーター遺伝子の存在が予測されている。これらのトランスポーター遺伝子の配列には相同性の高い領域が含まれているため、定量的ＰＣＲを行うためにそれぞれの遺伝子の発現レベル（ｍＲＮＡレベル）を特異的に測定することができるＰＣＲプライマーを設計することは容易ではなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
したがって、本発明の目的は、微量の臨床検体におけるヒトＡＢＣトランスポーターの発現レベルを定量的に測定するためのキット、ならびに測定方法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、４８種類のヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現レベルを、特異的かつ定量的に測定することができるＰＣＲプライマーのセットを提供する。本発明のプライマーセットは、それぞれ配列番号１および配列番号２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１）、それぞれ配列番号３および配列番号４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２）、それぞれ配列番号５および配列番号６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３）、それぞれ配列番号７および配列番号８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４）、それぞれ配列番号９および配列番号１０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（５）、それぞれ配列番号１１および配列番号１２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（６）、それぞれ配列番号１３および配列番号１４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（７）、それぞれ配列番号１５および配列番号１６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（８）、それぞれ配列番号１７および配列番号１８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（９）、それぞれ配列番号１９および配列番号２０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１０）、それぞれ配列番号２１および配列番号２２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１１）、それぞれ配列番号２３および配列番号２４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１２）、それぞれ配列番号２５および配列番号２６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１３）、それぞれ配列番号２７および配列番号２８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１４）、それぞれ配列番号２９および配列番号３０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１５）、それぞれ配列番号３１および配列番号３２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１６）、それぞれ配列番号３３および配列番号３４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１７）、それぞれ配列番号３５および配列番号３６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１８）、それぞれ配列番号３７および配列番号３８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１９）、それぞれ配列番号３９および配列番号４０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２０）、それぞれ配列番号４１および配列番号４２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２１）、それぞれ配列番号４３および配列番号４４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２２）、それぞれ配列番号４５および配列番号４６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２３）、それぞれ配列番号４７および配列番号４８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２４）、それぞれ配列番号４９および配列番号５０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２５）、それぞれ配列番号５１および配列番号５２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２６）、それぞれ配列番号５３および配列番号５４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２７）、それぞれ配列番号５５および配列番号５６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２８）、それぞれ配列番号５７および配列番号５８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２９）、それぞれ配列番号５９および配列番号６０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３０）、それぞれ配列番号６１および配列番号６２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３１）、それぞれ配列番号６３および配列番号６４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３２）、それぞれ配列番号６５および配列番号６６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３３）、それぞれ配列番号６７および配列番号６８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３４）、それぞれ配列番号６９および配列番号７０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３５）、それぞれ配列番号７１および配列番号７２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３６）、それぞれ配列番号７３および配列番号７４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３７）、それぞれ配列番号７５および配列番号７６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３８）、それぞれ配列番号７７および配列番号７８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３９）、それぞれ配列番号７９および配列番号８０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４０）、それぞれ配列番号８１および配列番号８２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４１）、それぞれ配列番号８３および配列番号８４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４２）、それぞれ配列番号８５および配列番号８６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４３）、それぞれ配列番号８７および配列番号８８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４４）、それぞれ配列番号８９および配列番号９０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４５）、それぞれ配列番号９１および配列番号９２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４６）、それぞれ配列番号９３および配列番号９４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４７）、ならびに、それぞれ配列番号９５および配列番号９６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４８）からなる群より選択される。これらのオリゴヌクレオチドはいずれも、配列番号に示される塩基配列において１もしくは２塩基が置換されていてもよい。
【０００８】
本発明はまた、プライマーセット（１）〜（１２）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＡサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、プライマーセット（１３）〜（２３）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＢサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（２４）〜（３６）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＣサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（３７）〜（４０）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＤサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（４１）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＥサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（４１）〜（４３）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＦサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（４４）〜（４８）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＧサブファミリー遺伝子を検出するためのキットを提供する。本発明はまた、プライマーセット（１）〜（４８）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ファミリーを検出するためのキットを提供する。
【０００９】
別の観点においては、本発明は、試料におけるＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現を検出する方法であって、プライマーセット（１）〜（４８）のいずれかを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応によりＡＢＣトランスポーター遺伝子を増幅させることを含む方法を提供する。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明のプライマーセットの各オリゴヌクレオチドは、例えば汎用のＤＮＡ合成装置（例えば３９４合成器、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いて化学的に合成することができる。オリゴヌクレオチドは、当該技術分野においてよく知られる他の方法のいずれかを用いて合成してもよい。
【００１１】
試料における特定のＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現を検出するためには、試料からＲＮＡを抽出して鋳型ｃＤＮＡを調製し、本発明のプライマーセットを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応により目的とするＡＢＣトランスポーター遺伝子を増幅させる。
【００１２】
試料からＲＮＡを抽出する方法は当該技術分野においてよく知られており、例えば、グアニジン−イソチオシアネートおよびフェノール・クロロホルム抽出を用いることができる。あるいは市販のＲＮＡ抽出試薬を用いてもよい。
【００１３】
ＲＮＡを鋳型としてｃＤＮＡを合成する方法も当該技術分野においてよく知られている。プライマーとして本発明のプライマーセットを用い、ｄＮＴＰｓの存在下で、逆転写酵素を用いてｃＤＮＡを合成する。逆転写酵素としては、例えば、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いることができる。
【００１４】
次に、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により目的とするＡＢＣトランスポーター遺伝子を増幅する。ポリメラーゼとしては例えばＥｘ Ｔａｑ（登録商標）（Ｔａｋａｒａ）を用いることができる。ＰＣＲの条件は、例えば、９５℃、３０ｓｅｃ→５８℃（Ｔｍ，融解温度）、３０ｓｅｃ→７２℃、３０ｓｅｃを４０サイクル行う。ただし、ＰＣＲ条件（Ｔｍ，融解温度）はプライマーセットとＡＢＣトランスポーター遺伝子の種類によって異なり、適当な条件を選択する方法は当該技術分野においてよく知られている。次に、増幅産物をゲル電気泳動等で解析して、目的とするＡＢＣトランスポーター遺伝子の存在を検出することができる。
【００１５】
定量的ＰＣＲを行うためには、試料のＰＣＲ反応におけるＤＮＡの増幅を、ＤＮＡに取り込まれたＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ（登録商標）（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）の蛍光強度でモニターし、設定した閾値に蛍光強度が達するサイクル数を求める。これをコピー数が既知の対照試料を用いて得られたサイクル数と比較することにより、試料中のｃＤＮＡのコピー数を計算して求めることができる。
【００１６】
このようにして、本発明のプライマーセットを用いて、試料中のＡＢＣトランスポーター遺伝子を特異的かつ定量的に検出することができる。
【００１７】
【実施例】
実施例１ プライマーの選定
ヒトＡＢＣトランスポーターの遺伝子配列は、ＧｅｎｅＢａｎｋ等の公共データベースから得た。表１に、本発明において用いた遺伝子配列のデータベース登録番号を示す。
【００１８】
【表１】
【００１９】
各ＡＢＣトランスポーター遺伝子の配列について、融解温度が６０±７℃を基本的指標にして、適切な長さの増幅産物を与えるセンスおよびアンチセンスプライマーの組の候補を数種ずつ選択した。次に、ホモロジー検索を行い、プライマー候補が他のＡＢＣトランスポーター遺伝子と高いホモロジーを有する場合にはこれを候補から除いた。また、分子内に二次構造（ヘアーピン構造）が形成される場合やプライマー同士がダイマーを形成する場合にはこれも除いた。このようにして、各ＡＢＣトランスポーター遺伝子に特異的なプライマーセットを選択した。
【００２０】
【表２】
【００２１】
【表３】
【００２２】
【表４】
【００２３】
【表５】
【００２４】
次に、得られたプライマーセットの配列に基づいて、ＤＮＡ合成機によりオリゴヌクレオチドＤＮＡを合成した。クロンテック社より購入したヒト各臓器のｃＤＮＡを用いて、各ＡＢＣトランスポーター遺伝子を、それに対応するセンスおよびアンチセンスプライマーにより増幅した。図１−５に示されるように、本発明のプライマーセットを用いて、各ＡＢＣトランスポーター遺伝子について、目的とする遺伝子のみが増幅されることが確認された。
【００２５】
実施例２ ヒト白血球における各種ＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現
得られたＰＣＲプライマーを用いて、ヒト白血球におけるＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現量の定量的ＰＣＲを行った。
【００２６】
コピー数測定用の標準（対照）試料は、各ＡＢＣトランスポーター遺伝子の全長もしくはＰＣＲ増幅されるべき部分を含む断片をベクター（ｐＣＲＩＩ ＴＯＰＯ， ｐＣＲ ２．１ ＴＯＰＯ， ｐＣＭＶ６−ＸＬ４， ｐｃＤＮＡ， ｐＦａｓｔＢａｃ等）に組み込んだプラスミドを構築し、種々のプラスミド濃度（コピー数）の存在下で、本発明の各プライマーセットを用いてＰＣＲ反応を行った。各プライマーの最終濃度は、２００ｎＭに調整した。装置はＳｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（ＴａＫａＲａ）を用い、試薬はＥｘ Ｔａｑ（登録商標）Ｒ−ＰＣＲ Ｖｅｒｓｉｏｎ（ＴａＫａＲａ）を使用した。ＰＣＲの条件は、９５℃、３０ｓｅｃ→Ｔｍ（各プライマーについて計算した融解温度）、３０ｓｅｃ→７２℃、３０ｓｅｃを４０サイクル行った。ＰＣＲ反応中、ＤＮＡに取り込まれたＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ（登録商標）（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）の蛍光強度をモニターし、設定した閾値に蛍光強度が達するサイクル数を測定した。各ＡＢＣトランスポーター遺伝子について、サイクル数とコピー数との検量線を求めた。
【００２７】
定量的ＰＣＲは、Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ社より購入したヒト白血球のｃＤＮＡを用いて行った。ＰＣＲの条件は上述の標準（対照）試料の場合と同じであった。ＰＣＲ反応中、ＤＮＡに取り込まれたＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ（登録商標）（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）の蛍光強度をモニターし、設定した閾値に蛍光強度が達するサイクル数を測定した。これを上記の標準試料の検量線と比較することにより、白血球における各ＡＢＣトランスポーター遺伝子のコピー数を求めた。結果を図６および７に示す。本発明のプライマーセットを用いて、ヒト白血球試料における各種ＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現量を定量することができた。
【００２８】
【配列表】
ＳＥＱＵＥＮＣＥ ＬＩＳＴＩＮＧ
＜１１０＞ Ｔｈｅ ｃｉｒｃｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
＜１２０＞ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＡＢＣ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅｓ
＜１３０＞ ｐｒｋ０００１
＜１６０＞ ９６
＜１７０＞ ＰａｔｅｎｔＩｎ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．１
＜２１０＞ １
＜２１１＞ １８
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １
ａａｇｃｔｃｔｔｔｇ ｃａｃｔａｇｇａ １８
＜２１０＞ ２
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２
ｇｔｔｇｔｃｔｇａｇ ａａａｃａｇａｇｔａ ｇ ２１
＜２１０＞ ３
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３
ａｃｔｔｔｇｃｃａａ ｇａａｇｃａｇａｇｔ ｇａ ２２
＜２１０＞ ４
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４
ｃａｇｃｃｔｔｔｇｇ ｃａｃａａｔｔａｇｇ ｇ ２１
＜２１０＞ ５
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５
ｇａｇａｔｇｃｔｇｇ ｔｃａｔｇｔａｃｇｃ ｔ ２１
＜２１０＞ ６
＜２１１＞ １９
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６
ａｃａｇｃａｇｇｃｔ ｃｔｃｃｇａｔｃａ １９
＜２１０＞ ７
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７
ａｃｔｇａｔｃｔｔｔ ｃａｃａｃｃｇｃｔｃ ｇｔｔｃ ２４
＜２１０＞ ８
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８
ａｇｇｔｇａｇｃａａ ｇｔｃａｇｔｔｔｃｇ ｇｔ ２２
＜２１０＞ ９
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９
ｇｇａｇｇａａｇａｔ ａａｔａｇｔｔｇｔｇ ｇａ ２２
＜２１０＞ １０
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １０
ａａｔｔｔｃａａｇｔ ｇｃｇｔｔｃｔｔｇｇ ２０
＜２１０＞ １１
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １１
ｃｔｇｇａａｇａａｔ ａｃａｇｃｃｔｔｔｃ ｔｃｃ ２３
＜２１０＞ １２
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １２
ｃａｇｇｔｔｔｇｃｔ ａｔｃａｃｃｃｃｔａ ｔｇ ２２
＜２１０＞ １３
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １３
ｇｃａｇｇｇａａｇａ ｃｇｔｃｃａｃｇｔｔ ｔｃ ２２
＜２１０＞ １４
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １４
ｃｃｇｇｔｃｔｇｃｇ ｔａｃｃａｔｇａｇａ ｇｔ ２２
＜２１０＞ １５
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １５
ａａｇａｔｇｔｇｃａ ａｃｃｔｔｔａｇｃｃ ２０
＜２１０＞ １６
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １６
ｇｃｔｔａｇｔｃａａ ａｔｇｃｃｔｃｔｇｔ ｃ ２１
＜２１０＞ １７
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １７
ｇａｔａｇｔｔａａａ ｃａｇａｇｔｔｔｃｇ ａｃ ２２
＜２１０＞ １８
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １８
ｔｃａａａｔｇｃａｔ ｔｔｔｇｔａｃｃａｃ ２０
＜２１０＞ １９
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １９
ｔｇｃｔｃｔｃａｇｔ ａｔｔｔｃａｃｇａｔ ｔｇ ２２
＜２１０＞ ２０
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２０
ｇａａｃｃａａｔａｃ ａｃｃｔｔａｇｃｇｔ ｔ ２１
＜２１０＞ ２１
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２１
ｃａｔｇｇａｔｃｃｇ ａａｇｔｃｇａａａｃ ｇｇ ２２
＜２１０＞ ２２
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２２
ｃａｇｔｃｔｔｇｔｔ ｇｇｔｔｔｃｃａｇｃ ａｇａ ２３
＜２１０＞ ２３
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２３
ｔｔｃａｔｃｔａｔｇ ｇｔｔｇｇｃａａｃｔ ２０
＜２１０＞ ２４
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２４
ｔｃｔｃｃａｔａｇｇ ｃａａｔｇｔｔｃｔｃ ２０
＜２１０＞ ２５
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２５
ｃａｃｃａｇｔｇｃｃ ｃｔｇｇａｔｇｃａａ ａｃ ２２
＜２１０＞ ２６
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２６
ｃａｇａｇｔｇｃｔｇ ｇｃｃａｃａｃｃａａ ａｇ ２２
＜２１０＞ ２７
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２７
ａｃｃｔｃｔａｔｔｃ ｃｃｇｃｃｔｇｇｔｔ ｃ ２１
＜２１０＞ ２８
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２８
ｃａｔｃａｃｃａｇｇ ｃａａａｇｃｔｃｔａ ｇｔｃ ２３
＜２１０＞ ２９
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２９
ｃｃｇａｃｔｇｔｃｔ ａｃｇｇｔｃｃｇａａ ２０
＜２１０＞ ３０
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３０
ａｃａｔｔｔｇｃｔｔ ｃａａｇｔｃｃａｔｃ ｇｇｔ ２３
＜２１０＞ ３１
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３１
ｇａｃａｔｃｇｇｃｔ ｇｇｔｔｔｇａｔａｇ ｃｔ ２２
＜２１０＞ ３２
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３２
ｇａｇｔｔｔｃｃａｇ ｃｃｃｔｔｃａｃｃａ ２０
＜２１０＞ ３３
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３３
ｇｔｇｇａｇａｇｇｇ ｇａｃｇａｃａｃｇａ ２０
＜２１０＞ ３４
＜２１１＞ ２６
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３４
ｃａｔａｇｃｔａｇｃ ａｃｃａｔａｃｃｃｃ ａａｇａｃｃ ２６
＜２１０＞ ３５
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３５
ｔｔｇｔｃｔｔｇｇａ ｔｃａｇｇｇｔａａｇ ２０
＜２１０＞ ３６
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３６
ｃｔｔｃａｇｔｇｃａ ａａｔａｔｇｔａｇｔ ｃｃ ２２
＜２１０＞ ３７
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３７
ｃｇａｇｇｔｇｃｔｇ ａａａｇａｃｔｔｃａ ｃ ２１
＜２１０＞ ３８
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３８
ｃｔｃｃｔｇｇｃｔｇ ａｔｇａａａｃｃｇａ ２０
＜２１０＞ ３９
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３９
ｇａｃｔｔｃａｃａｇ ｃｔｇｇｃｃａｃａａ ｃｇａ ２３
＜２１０＞ ４０
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４０
ａａａｇｔｇｃｃｃｇ ｃｃａｔｔａｃｔｃｃ ｃａａ ２３
＜２１０＞ ４１
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４１
ｇｔｔｃａａｇａａｇ ｃｔｃｔａｇａｔｃｇ ａｃ ２２
＜２１０＞ ４２
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４２
ｃａｇｔａａｔｔｇｃ ｔｔｃｃｔｔａｔｇｃ ｔｇ ２２
＜２１０＞ ４３
＜２１１＞ ２７
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４３
ｇｔｃｃｃａｇｇｇｇ ｔｃｔｃａａｃｔｃｔ ｃｔａｇａｇｇ ２７
＜２１０＞ ４４
＜２１１＞ ２６
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４４
ｔｔｇｔｃｔａｇａｇ ｃａａｃｃｔｇｃａｃ ｃｇｔｃｔｔ ２６
＜２１０＞ ４５
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４５
ｇｃｃｃｔｔｃｃｔｇ ａｃａａｇｃｔａｇａ ｃ ２１
＜２１０＞ ４６
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４６
ｃａｔａｔａｇｇｃｃ ｃｔｇｃａｇｔｔｃｔ ｇａｃ ２３
＜２１０＞ ４７
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４７
ａｇｇｔｇｇｃｔｔｇ ｃａａｔｔｃｇｃｃｔ ２０
＜２１０＞ ４８
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４８
ｃｃａａｔｃｔｔｃｔ ｃｃａｔｇｃｔａｃｃ ｇａｔｇｔ ２５
＜２１０＞ ４９
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４９
ｃｔａｇａｇｇｃａｔ ｃｔｔｃｔａｃｇｇｇ ａ ２１
＜２１０＞ ５０
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５０
ａｔａａｃａｃｔｃａ ｇｔｔｇｇｇａａｔｃ ｇｇ ２２
＜２１０＞ ５１
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５１
ｔｃｃｃａｃｔｔｇｔ ｃａｔｃｔｔｃｔｃｔ ｃ ２１
＜２１０＞ ５２
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５２
ｃａｇｃａｃｔｔｔｇ ｔｃｇａａｃａｃａｃ ２０
＜２１０＞ ５３
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５３
ｇｔｇｇａｇｔｔｔｇ ａｃａｃｃｃｃａｔｃ ｇｇｔｃ ２４
＜２１０＞ ５４
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５４
ｃｃａａｔｃｃｇｇａ ａｃｔｇｃｔｇｔｇｃ ｇａａａｇ ２５
＜２１０＞ ５５
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５５
ｃｔｃａｔｇｃｃａｇ ｃｔｇａｇａｃｇｃｔ ｔ ２１
＜２１０＞ ５６
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５６
ｇｇｔｃｔｇｔｃｃａ ｇｔｔｇｃｇａａｃａ ａｃｃ ２３
＜２１０＞ ５７
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５７
ｔｇａａｇｃｔｃｔｔ ｔｃｃｃｃａｃｃｇｇ ａａｃｔ ２４
＜２１０＞ ５８
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５８
ｇｃｃａｇｇａａｇｃ ｃａｔｔｔａｔｃａａ ｇａｃｃｃ ２５
＜２１０＞ ５９
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５９
ｔｔｃａｇｃｇｇｃａ ｃｃａｔｃｃｇａｔｔ ２０
＜２１０＞ ６０
＜２１１＞ ２６
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６０
ａｃｃａｃｃｔｔｔｔ ｇｇａｇｇａｔｇｔｔ ｔｔｃｃｇｔ ２６
＜２１０＞ ６１
＜２１１＞ ３０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６１
ｔｃａａａｔｃｔｃｔ ａｃｃｔｇｇａｇｇｔ ｃｔａｇａｔｇｃｇｇ ３０
＜２１０＞ ６２
＜２１１＞ ３０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６２
ｃｔｔｇｔｔｇｇｔｃ ａｔｃａｃｃａａａｇ ｔｇｇａａａａｇｇｇ ３０
＜２１０＞ ６３
＜２１１＞ ２６
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６３
ｔｃｇｇｇｃｃｔｇｇ ｔｇａｇｃａｇｃｔｔ ｃａｃａｃａ ２６
＜２１０＞ ６４
＜２１１＞ ２８
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６４
ｇｇｇｃｔｃｔａｇｃ ａｇｃｃｇｇａａｇａ ｇｃａｃｃａａｃ ２８
＜２１０＞ ６５
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６５
ａｃｔｇｔｇａｃｃａ ｃａｔｃｃｔｇｇｔｔ ａｔｇｇｇ ２５
＜２１０＞ ６６
＜２１１＞ ２８
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６６
ｇａｇｃｃａｔｃａａ ｇｔａｇｃｃｔａｔｔ ｃｃａｇｇｇｔｔ ２８
＜２１０＞ ６７
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６７
ａａｇｃｃａｇａｔｔ ｃｔｇｃａｔｔｔｇｃ ｇａ ２２
＜２１０＞ ６８
＜２１１＞ ３０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６８
ｔｃａａｇａｔｇｇａ ａｇｔｇａｇｔｇｇｇ ｇｔｔａａａｃｇａｇ ３０
＜２１０＞ ６９
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６９
ｃａｔａｔｔｃｃｔｇ ｇｔｔｔａｇｃａｇａ ２０
＜２１０＞ ７０
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７０
ｇｔｇａｇｃａｔｇｔ ｔａａａａｃｇｔｔｇ ２０
＜２１０＞ ７１
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７１
ｇｇａａｇｔｔｃｇａ ｇａａｇｃｔｇｇａｃ ｔ ２１
＜２１０＞ ７２
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７２
ｃｃｔｔｃａｔｇｔｇ ａｔｃｃｇａｇｃｔｔ ｇ ２１
＜２１０＞ ７３
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７３
ａａｔｔｇｇａｔａｃ ｔｇｃｔａｔｃｃｇｔ ２０
＜２１０＞ ７４
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７４
ｇｇａａｔｔｃａｃｃ ｔａｇａａａａｔｃｃ ｔｇ ２２
＜２１０＞ ７５
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７５
ｇｇａａａｃａｔｃａ ｔｇａｇｔａｃｔａｃ ｃｔ ２２
＜２１０＞ ７６
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７６
ｇａｃｔｔｃｇａａｔ ｇｇｔｔｔａｃａｔｃ ｃ ２１
＜２１０＞ ７７
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７７
ｔｔｃｔｇｇａｃａｔ ｇｔｃｃｃｔｇａａｇ ｔｃａｃａ ２５
＜２１０＞ ７８
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７８
ａｃｃｃｇｇａｇｃａ ａｇｇａｇｇｔｃｔｔ ２０
＜２１０＞ ７９
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７９
ｃａａａｃａａｃｔａ ｔａｇｇｃｃａｃｇａ ａ ２１
＜２１０＞ ８０
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８０
ｇｇｃａａａｃｃａｇ ｇｔａａｇｔａｃａｇ ２０
＜２１０＞ ８１
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８１
ａａｇｇｇｔｇｃｔｇ ｔｇａｔｃｇｔｔｇｔ ２０
＜２１０＞ ８２
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８２
ｃｔｃａｃａａｔａａ ｇｇｔｇｇｔｃａｃｃ ｔｃｔ ２３
＜２１０＞ ８３
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８３
ｃａａｃｇｔｇｔｇａ ｇｃｃｃｔｃｔａｃｃ ｔ ２１
＜２１０＞ ８４
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８４
ｇｃｃｔｃｔｇａｃｔ ｇｃａｔｃａｃａｃｔ ｃａ ２２
＜２１０＞ ８５
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８５
ｃｇｔｇｔｇｇａａｇ ｇａｇｇａｔｔｔｇａ ｃｃ ２２
＜２１０＞ ８６
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８６
ｇａｃｃａｇｔｃｃｔ ｃａｃｃａａｃｃｃｔ ｔ ２１
＜２１０＞ ８７
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８７
ｃｔｔｃａｔｃｔｃｃ ｃｔｃｃｇｃｃｔｃａ ｔｔｇｃｃ ２５
＜２１０＞ ８８
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８８
ｇｃｔｇａｇｃａｃｇ ａｇａｃａｃｃｃａｃ ａａａｃｃ ２５
＜２１０＞ ８９
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８９
ｇａｔｃｔｃｔｃａｃ ｃｃｔｇｇｇｇｃｔｔ ｇｔｇｇａ ２５
＜２１０＞ ９０
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９０
ｔｇｔｇｃａａｃａｇ ｔｇｔｇａｔｇｇｃａ ａｇｇｇａ ２５
＜２１０＞ ９１
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９１
ｃｔｇｇｃｃｔａｃｃ ｔｔｇｔｇｃｔｇｃｇ ｔ ２１
＜２１０＞ ９２
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９２
ｃｃｇｃａｔｃａａｃ ｔｔｇｇｇａａｇａｃ ｔｃｃｔ ２４
＜２１０＞ ９３
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９３
ａｔｃｔｃａｔｔａｇ ｃａｇｇｔａｇｔｇａ ａａｇｃｃ ２５
＜２１０＞ ９４
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９４
ｃｔｔｇｃｔｔｃａｔ ｃｔａａａｃｃｃａｃ ａａｃｔｃ ２５
＜２１０＞ ９５
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９５
ｔａｔａａａａｔｇｃ ｃｔｃｔｃｇｇｇａａ ｃｃｔｃ ２４
＜２１０＞ ９６
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９６
ｔｇｇｃｇｔｇａａｔ ｃａｃｃａｇｔｃｔｔ ｇ ２１
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＡサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図２】図２は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＢサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図３】図３は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＣサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図４】図４は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＤ、ＡＢＣＥおよびＡＢＣＦサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図５】図５は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＧサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図６】図６は、ヒト白血球試料におけるＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＢサブファミリーの各遺伝子のコピー数を示す。
【図７】図７は、ヒト白血球試料におけるＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＣサブファミリーの各遺伝子のコピー数を示す。
【発明の属する技術分野】
本発明は、ＡＢＣトランスポーター遺伝子を検出するための特異的プライマーセット、およびこれを用いるＡＢＣトランスポーター遺伝子の検出方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】
疾患の治療において患者に薬剤を投与する場合、患者間で薬剤応答性の差異が存在することが知られている。この原因の一つとして、薬物代謝酵素および薬剤標的分子（酵素、受容体など）の遺伝子多型や発現レベルの違いが挙げられる。また、薬剤応答性には、薬物トランスポーターによる細胞内への薬物の流入および排出の制御も大きく関与している。
【０００３】
ヒトＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）トランスポーターが疾患の原因や薬物輸送に関与していることが報告されている。ＡＢＣトランスポーターは、細菌からヒト等の高等生物にわたるすべての細胞において見いだされる、最も大きな蛋白質のスーパーファミリーの１つであり、約２５０種類（ヒトでは約５０種類）のメンバーが知られている。ほとんどのＡＢＣ蛋白質は、トランスポーターとして機能するが、イオンチャネルとして機能するものも存在する。多くのＡＢＣ蛋白質は、臨床的に非常に重要な意味をもつ。例えば、癌に化学療法に対する耐性を与え、薬物の体内動態に関与する多剤耐性Ｐ−糖蛋白質、嚢胞性繊維症遺伝子産物、デュービン−ジョンソン症候群に関与する蛋白質等が知られている（Ｄｅａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １１， １１５６−１１６６ （２００１））。
【０００４】
したがって、個別の患者に対して効率の良い治療を行うためには、ＡＢＣトランスポーターの構造および作用メカニズムを解析して種々の疾患との関連性を解明するとともに、それぞれの患者におけるＡＢＣトランスポーターの発現レベルを測定することが有用であろう。
【０００５】
ヒトゲノム解析から、約５０種類のＡＢＣトランスポーター遺伝子の存在が予測されている。これらのトランスポーター遺伝子の配列には相同性の高い領域が含まれているため、定量的ＰＣＲを行うためにそれぞれの遺伝子の発現レベル（ｍＲＮＡレベル）を特異的に測定することができるＰＣＲプライマーを設計することは容易ではなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
したがって、本発明の目的は、微量の臨床検体におけるヒトＡＢＣトランスポーターの発現レベルを定量的に測定するためのキット、ならびに測定方法を提供することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明は、４８種類のヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現レベルを、特異的かつ定量的に測定することができるＰＣＲプライマーのセットを提供する。本発明のプライマーセットは、それぞれ配列番号１および配列番号２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１）、それぞれ配列番号３および配列番号４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２）、それぞれ配列番号５および配列番号６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３）、それぞれ配列番号７および配列番号８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４）、それぞれ配列番号９および配列番号１０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（５）、それぞれ配列番号１１および配列番号１２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（６）、それぞれ配列番号１３および配列番号１４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（７）、それぞれ配列番号１５および配列番号１６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（８）、それぞれ配列番号１７および配列番号１８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（９）、それぞれ配列番号１９および配列番号２０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１０）、それぞれ配列番号２１および配列番号２２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１１）、それぞれ配列番号２３および配列番号２４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１２）、それぞれ配列番号２５および配列番号２６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１３）、それぞれ配列番号２７および配列番号２８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１４）、それぞれ配列番号２９および配列番号３０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１５）、それぞれ配列番号３１および配列番号３２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１６）、それぞれ配列番号３３および配列番号３４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１７）、それぞれ配列番号３５および配列番号３６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１８）、それぞれ配列番号３７および配列番号３８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（１９）、それぞれ配列番号３９および配列番号４０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２０）、それぞれ配列番号４１および配列番号４２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２１）、それぞれ配列番号４３および配列番号４４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２２）、それぞれ配列番号４５および配列番号４６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２３）、それぞれ配列番号４７および配列番号４８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２４）、それぞれ配列番号４９および配列番号５０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２５）、それぞれ配列番号５１および配列番号５２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２６）、それぞれ配列番号５３および配列番号５４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２７）、それぞれ配列番号５５および配列番号５６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２８）、それぞれ配列番号５７および配列番号５８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（２９）、それぞれ配列番号５９および配列番号６０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３０）、それぞれ配列番号６１および配列番号６２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３１）、それぞれ配列番号６３および配列番号６４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３２）、それぞれ配列番号６５および配列番号６６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３３）、それぞれ配列番号６７および配列番号６８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３４）、それぞれ配列番号６９および配列番号７０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３５）、それぞれ配列番号７１および配列番号７２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３６）、それぞれ配列番号７３および配列番号７４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３７）、それぞれ配列番号７５および配列番号７６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３８）、それぞれ配列番号７７および配列番号７８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（３９）、それぞれ配列番号７９および配列番号８０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４０）、それぞれ配列番号８１および配列番号８２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４１）、それぞれ配列番号８３および配列番号８４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４２）、それぞれ配列番号８５および配列番号８６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４３）、それぞれ配列番号８７および配列番号８８で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４４）、それぞれ配列番号８９および配列番号９０で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４５）、それぞれ配列番号９１および配列番号９２で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４６）、それぞれ配列番号９３および配列番号９４で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４７）、ならびに、それぞれ配列番号９５および配列番号９６で表される塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット（４８）からなる群より選択される。これらのオリゴヌクレオチドはいずれも、配列番号に示される塩基配列において１もしくは２塩基が置換されていてもよい。
【０００８】
本発明はまた、プライマーセット（１）〜（１２）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＡサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、プライマーセット（１３）〜（２３）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＢサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（２４）〜（３６）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＣサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（３７）〜（４０）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＤサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（４１）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＥサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（４１）〜（４３）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＦサブファミリー遺伝子を検出するためのキット、ならびにプライマーセット（４４）〜（４８）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＧサブファミリー遺伝子を検出するためのキットを提供する。本発明はまた、プライマーセット（１）〜（４８）を含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ファミリーを検出するためのキットを提供する。
【０００９】
別の観点においては、本発明は、試料におけるＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現を検出する方法であって、プライマーセット（１）〜（４８）のいずれかを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応によりＡＢＣトランスポーター遺伝子を増幅させることを含む方法を提供する。
【００１０】
【発明の実施の形態】
本発明のプライマーセットの各オリゴヌクレオチドは、例えば汎用のＤＮＡ合成装置（例えば３９４合成器、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ社）を用いて化学的に合成することができる。オリゴヌクレオチドは、当該技術分野においてよく知られる他の方法のいずれかを用いて合成してもよい。
【００１１】
試料における特定のＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現を検出するためには、試料からＲＮＡを抽出して鋳型ｃＤＮＡを調製し、本発明のプライマーセットを用いて、ポリメラーゼ連鎖反応により目的とするＡＢＣトランスポーター遺伝子を増幅させる。
【００１２】
試料からＲＮＡを抽出する方法は当該技術分野においてよく知られており、例えば、グアニジン−イソチオシアネートおよびフェノール・クロロホルム抽出を用いることができる。あるいは市販のＲＮＡ抽出試薬を用いてもよい。
【００１３】
ＲＮＡを鋳型としてｃＤＮＡを合成する方法も当該技術分野においてよく知られている。プライマーとして本発明のプライマーセットを用い、ｄＮＴＰｓの存在下で、逆転写酵素を用いてｃＤＮＡを合成する。逆転写酵素としては、例えば、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社）を用いることができる。
【００１４】
次に、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により目的とするＡＢＣトランスポーター遺伝子を増幅する。ポリメラーゼとしては例えばＥｘ Ｔａｑ（登録商標）（Ｔａｋａｒａ）を用いることができる。ＰＣＲの条件は、例えば、９５℃、３０ｓｅｃ→５８℃（Ｔｍ，融解温度）、３０ｓｅｃ→７２℃、３０ｓｅｃを４０サイクル行う。ただし、ＰＣＲ条件（Ｔｍ，融解温度）はプライマーセットとＡＢＣトランスポーター遺伝子の種類によって異なり、適当な条件を選択する方法は当該技術分野においてよく知られている。次に、増幅産物をゲル電気泳動等で解析して、目的とするＡＢＣトランスポーター遺伝子の存在を検出することができる。
【００１５】
定量的ＰＣＲを行うためには、試料のＰＣＲ反応におけるＤＮＡの増幅を、ＤＮＡに取り込まれたＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ（登録商標）（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）の蛍光強度でモニターし、設定した閾値に蛍光強度が達するサイクル数を求める。これをコピー数が既知の対照試料を用いて得られたサイクル数と比較することにより、試料中のｃＤＮＡのコピー数を計算して求めることができる。
【００１６】
このようにして、本発明のプライマーセットを用いて、試料中のＡＢＣトランスポーター遺伝子を特異的かつ定量的に検出することができる。
【００１７】
【実施例】
実施例１ プライマーの選定
ヒトＡＢＣトランスポーターの遺伝子配列は、ＧｅｎｅＢａｎｋ等の公共データベースから得た。表１に、本発明において用いた遺伝子配列のデータベース登録番号を示す。
【００１８】
【表１】
各ＡＢＣトランスポーター遺伝子の配列について、融解温度が６０±７℃を基本的指標にして、適切な長さの増幅産物を与えるセンスおよびアンチセンスプライマーの組の候補を数種ずつ選択した。次に、ホモロジー検索を行い、プライマー候補が他のＡＢＣトランスポーター遺伝子と高いホモロジーを有する場合にはこれを候補から除いた。また、分子内に二次構造（ヘアーピン構造）が形成される場合やプライマー同士がダイマーを形成する場合にはこれも除いた。このようにして、各ＡＢＣトランスポーター遺伝子に特異的なプライマーセットを選択した。
【００２０】
【表２】
【表３】
【表４】
【表５】
次に、得られたプライマーセットの配列に基づいて、ＤＮＡ合成機によりオリゴヌクレオチドＤＮＡを合成した。クロンテック社より購入したヒト各臓器のｃＤＮＡを用いて、各ＡＢＣトランスポーター遺伝子を、それに対応するセンスおよびアンチセンスプライマーにより増幅した。図１−５に示されるように、本発明のプライマーセットを用いて、各ＡＢＣトランスポーター遺伝子について、目的とする遺伝子のみが増幅されることが確認された。
【００２５】
実施例２ ヒト白血球における各種ＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現
得られたＰＣＲプライマーを用いて、ヒト白血球におけるＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現量の定量的ＰＣＲを行った。
【００２６】
コピー数測定用の標準（対照）試料は、各ＡＢＣトランスポーター遺伝子の全長もしくはＰＣＲ増幅されるべき部分を含む断片をベクター（ｐＣＲＩＩ ＴＯＰＯ， ｐＣＲ ２．１ ＴＯＰＯ， ｐＣＭＶ６−ＸＬ４， ｐｃＤＮＡ， ｐＦａｓｔＢａｃ等）に組み込んだプラスミドを構築し、種々のプラスミド濃度（コピー数）の存在下で、本発明の各プライマーセットを用いてＰＣＲ反応を行った。各プライマーの最終濃度は、２００ｎＭに調整した。装置はＳｍａｒｔ Ｃｙｃｌｅｒ（ＴａＫａＲａ）を用い、試薬はＥｘ Ｔａｑ（登録商標）Ｒ−ＰＣＲ Ｖｅｒｓｉｏｎ（ＴａＫａＲａ）を使用した。ＰＣＲの条件は、９５℃、３０ｓｅｃ→Ｔｍ（各プライマーについて計算した融解温度）、３０ｓｅｃ→７２℃、３０ｓｅｃを４０サイクル行った。ＰＣＲ反応中、ＤＮＡに取り込まれたＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ（登録商標）（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）の蛍光強度をモニターし、設定した閾値に蛍光強度が達するサイクル数を測定した。各ＡＢＣトランスポーター遺伝子について、サイクル数とコピー数との検量線を求めた。
【００２７】
定量的ＰＣＲは、Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ社より購入したヒト白血球のｃＤＮＡを用いて行った。ＰＣＲの条件は上述の標準（対照）試料の場合と同じであった。ＰＣＲ反応中、ＤＮＡに取り込まれたＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ（登録商標）（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）の蛍光強度をモニターし、設定した閾値に蛍光強度が達するサイクル数を測定した。これを上記の標準試料の検量線と比較することにより、白血球における各ＡＢＣトランスポーター遺伝子のコピー数を求めた。結果を図６および７に示す。本発明のプライマーセットを用いて、ヒト白血球試料における各種ＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現量を定量することができた。
【００２８】
【配列表】
ＳＥＱＵＥＮＣＥ ＬＩＳＴＩＮＧ
＜１１０＞ Ｔｈｅ ｃｉｒｃｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
＜１２０＞ Ｐｒｉｍｅｒ ｓｅｔ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ＡＢＣ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅｓ
＜１３０＞ ｐｒｋ０００１
＜１６０＞ ９６
＜１７０＞ ＰａｔｅｎｔＩｎ ｖｅｒｓｉｏｎ ３．１
＜２１０＞ １
＜２１１＞ １８
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １
ａａｇｃｔｃｔｔｔｇ ｃａｃｔａｇｇａ １８
＜２１０＞ ２
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２
ｇｔｔｇｔｃｔｇａｇ ａａａｃａｇａｇｔａ ｇ ２１
＜２１０＞ ３
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３
ａｃｔｔｔｇｃｃａａ ｇａａｇｃａｇａｇｔ ｇａ ２２
＜２１０＞ ４
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４
ｃａｇｃｃｔｔｔｇｇ ｃａｃａａｔｔａｇｇ ｇ ２１
＜２１０＞ ５
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５
ｇａｇａｔｇｃｔｇｇ ｔｃａｔｇｔａｃｇｃ ｔ ２１
＜２１０＞ ６
＜２１１＞ １９
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６
ａｃａｇｃａｇｇｃｔ ｃｔｃｃｇａｔｃａ １９
＜２１０＞ ７
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７
ａｃｔｇａｔｃｔｔｔ ｃａｃａｃｃｇｃｔｃ ｇｔｔｃ ２４
＜２１０＞ ８
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８
ａｇｇｔｇａｇｃａａ ｇｔｃａｇｔｔｔｃｇ ｇｔ ２２
＜２１０＞ ９
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９
ｇｇａｇｇａａｇａｔ ａａｔａｇｔｔｇｔｇ ｇａ ２２
＜２１０＞ １０
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １０
ａａｔｔｔｃａａｇｔ ｇｃｇｔｔｃｔｔｇｇ ２０
＜２１０＞ １１
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １１
ｃｔｇｇａａｇａａｔ ａｃａｇｃｃｔｔｔｃ ｔｃｃ ２３
＜２１０＞ １２
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １２
ｃａｇｇｔｔｔｇｃｔ ａｔｃａｃｃｃｃｔａ ｔｇ ２２
＜２１０＞ １３
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １３
ｇｃａｇｇｇａａｇａ ｃｇｔｃｃａｃｇｔｔ ｔｃ ２２
＜２１０＞ １４
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １４
ｃｃｇｇｔｃｔｇｃｇ ｔａｃｃａｔｇａｇａ ｇｔ ２２
＜２１０＞ １５
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １５
ａａｇａｔｇｔｇｃａ ａｃｃｔｔｔａｇｃｃ ２０
＜２１０＞ １６
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １６
ｇｃｔｔａｇｔｃａａ ａｔｇｃｃｔｃｔｇｔ ｃ ２１
＜２１０＞ １７
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １７
ｇａｔａｇｔｔａａａ ｃａｇａｇｔｔｔｃｇ ａｃ ２２
＜２１０＞ １８
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １８
ｔｃａａａｔｇｃａｔ ｔｔｔｇｔａｃｃａｃ ２０
＜２１０＞ １９
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ １９
ｔｇｃｔｃｔｃａｇｔ ａｔｔｔｃａｃｇａｔ ｔｇ ２２
＜２１０＞ ２０
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２０
ｇａａｃｃａａｔａｃ ａｃｃｔｔａｇｃｇｔ ｔ ２１
＜２１０＞ ２１
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２１
ｃａｔｇｇａｔｃｃｇ ａａｇｔｃｇａａａｃ ｇｇ ２２
＜２１０＞ ２２
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２２
ｃａｇｔｃｔｔｇｔｔ ｇｇｔｔｔｃｃａｇｃ ａｇａ ２３
＜２１０＞ ２３
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２３
ｔｔｃａｔｃｔａｔｇ ｇｔｔｇｇｃａａｃｔ ２０
＜２１０＞ ２４
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２４
ｔｃｔｃｃａｔａｇｇ ｃａａｔｇｔｔｃｔｃ ２０
＜２１０＞ ２５
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２５
ｃａｃｃａｇｔｇｃｃ ｃｔｇｇａｔｇｃａａ ａｃ ２２
＜２１０＞ ２６
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２６
ｃａｇａｇｔｇｃｔｇ ｇｃｃａｃａｃｃａａ ａｇ ２２
＜２１０＞ ２７
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２７
ａｃｃｔｃｔａｔｔｃ ｃｃｇｃｃｔｇｇｔｔ ｃ ２１
＜２１０＞ ２８
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２８
ｃａｔｃａｃｃａｇｇ ｃａａａｇｃｔｃｔａ ｇｔｃ ２３
＜２１０＞ ２９
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ２９
ｃｃｇａｃｔｇｔｃｔ ａｃｇｇｔｃｃｇａａ ２０
＜２１０＞ ３０
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３０
ａｃａｔｔｔｇｃｔｔ ｃａａｇｔｃｃａｔｃ ｇｇｔ ２３
＜２１０＞ ３１
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３１
ｇａｃａｔｃｇｇｃｔ ｇｇｔｔｔｇａｔａｇ ｃｔ ２２
＜２１０＞ ３２
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３２
ｇａｇｔｔｔｃｃａｇ ｃｃｃｔｔｃａｃｃａ ２０
＜２１０＞ ３３
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３３
ｇｔｇｇａｇａｇｇｇ ｇａｃｇａｃａｃｇａ ２０
＜２１０＞ ３４
＜２１１＞ ２６
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３４
ｃａｔａｇｃｔａｇｃ ａｃｃａｔａｃｃｃｃ ａａｇａｃｃ ２６
＜２１０＞ ３５
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３５
ｔｔｇｔｃｔｔｇｇａ ｔｃａｇｇｇｔａａｇ ２０
＜２１０＞ ３６
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３６
ｃｔｔｃａｇｔｇｃａ ａａｔａｔｇｔａｇｔ ｃｃ ２２
＜２１０＞ ３７
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３７
ｃｇａｇｇｔｇｃｔｇ ａａａｇａｃｔｔｃａ ｃ ２１
＜２１０＞ ３８
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３８
ｃｔｃｃｔｇｇｃｔｇ ａｔｇａａａｃｃｇａ ２０
＜２１０＞ ３９
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ３９
ｇａｃｔｔｃａｃａｇ ｃｔｇｇｃｃａｃａａ ｃｇａ ２３
＜２１０＞ ４０
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４０
ａａａｇｔｇｃｃｃｇ ｃｃａｔｔａｃｔｃｃ ｃａａ ２３
＜２１０＞ ４１
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４１
ｇｔｔｃａａｇａａｇ ｃｔｃｔａｇａｔｃｇ ａｃ ２２
＜２１０＞ ４２
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４２
ｃａｇｔａａｔｔｇｃ ｔｔｃｃｔｔａｔｇｃ ｔｇ ２２
＜２１０＞ ４３
＜２１１＞ ２７
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４３
ｇｔｃｃｃａｇｇｇｇ ｔｃｔｃａａｃｔｃｔ ｃｔａｇａｇｇ ２７
＜２１０＞ ４４
＜２１１＞ ２６
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４４
ｔｔｇｔｃｔａｇａｇ ｃａａｃｃｔｇｃａｃ ｃｇｔｃｔｔ ２６
＜２１０＞ ４５
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４５
ｇｃｃｃｔｔｃｃｔｇ ａｃａａｇｃｔａｇａ ｃ ２１
＜２１０＞ ４６
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４６
ｃａｔａｔａｇｇｃｃ ｃｔｇｃａｇｔｔｃｔ ｇａｃ ２３
＜２１０＞ ４７
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４７
ａｇｇｔｇｇｃｔｔｇ ｃａａｔｔｃｇｃｃｔ ２０
＜２１０＞ ４８
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４８
ｃｃａａｔｃｔｔｃｔ ｃｃａｔｇｃｔａｃｃ ｇａｔｇｔ ２５
＜２１０＞ ４９
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ４９
ｃｔａｇａｇｇｃａｔ ｃｔｔｃｔａｃｇｇｇ ａ ２１
＜２１０＞ ５０
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５０
ａｔａａｃａｃｔｃａ ｇｔｔｇｇｇａａｔｃ ｇｇ ２２
＜２１０＞ ５１
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５１
ｔｃｃｃａｃｔｔｇｔ ｃａｔｃｔｔｃｔｃｔ ｃ ２１
＜２１０＞ ５２
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５２
ｃａｇｃａｃｔｔｔｇ ｔｃｇａａｃａｃａｃ ２０
＜２１０＞ ５３
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５３
ｇｔｇｇａｇｔｔｔｇ ａｃａｃｃｃｃａｔｃ ｇｇｔｃ ２４
＜２１０＞ ５４
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５４
ｃｃａａｔｃｃｇｇａ ａｃｔｇｃｔｇｔｇｃ ｇａａａｇ ２５
＜２１０＞ ５５
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５５
ｃｔｃａｔｇｃｃａｇ ｃｔｇａｇａｃｇｃｔ ｔ ２１
＜２１０＞ ５６
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５６
ｇｇｔｃｔｇｔｃｃａ ｇｔｔｇｃｇａａｃａ ａｃｃ ２３
＜２１０＞ ５７
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５７
ｔｇａａｇｃｔｃｔｔ ｔｃｃｃｃａｃｃｇｇ ａａｃｔ ２４
＜２１０＞ ５８
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５８
ｇｃｃａｇｇａａｇｃ ｃａｔｔｔａｔｃａａ ｇａｃｃｃ ２５
＜２１０＞ ５９
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ５９
ｔｔｃａｇｃｇｇｃａ ｃｃａｔｃｃｇａｔｔ ２０
＜２１０＞ ６０
＜２１１＞ ２６
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６０
ａｃｃａｃｃｔｔｔｔ ｇｇａｇｇａｔｇｔｔ ｔｔｃｃｇｔ ２６
＜２１０＞ ６１
＜２１１＞ ３０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６１
ｔｃａａａｔｃｔｃｔ ａｃｃｔｇｇａｇｇｔ ｃｔａｇａｔｇｃｇｇ ３０
＜２１０＞ ６２
＜２１１＞ ３０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６２
ｃｔｔｇｔｔｇｇｔｃ ａｔｃａｃｃａａａｇ ｔｇｇａａａａｇｇｇ ３０
＜２１０＞ ６３
＜２１１＞ ２６
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６３
ｔｃｇｇｇｃｃｔｇｇ ｔｇａｇｃａｇｃｔｔ ｃａｃａｃａ ２６
＜２１０＞ ６４
＜２１１＞ ２８
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６４
ｇｇｇｃｔｃｔａｇｃ ａｇｃｃｇｇａａｇａ ｇｃａｃｃａａｃ ２８
＜２１０＞ ６５
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６５
ａｃｔｇｔｇａｃｃａ ｃａｔｃｃｔｇｇｔｔ ａｔｇｇｇ ２５
＜２１０＞ ６６
＜２１１＞ ２８
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６６
ｇａｇｃｃａｔｃａａ ｇｔａｇｃｃｔａｔｔ ｃｃａｇｇｇｔｔ ２８
＜２１０＞ ６７
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６７
ａａｇｃｃａｇａｔｔ ｃｔｇｃａｔｔｔｇｃ ｇａ ２２
＜２１０＞ ６８
＜２１１＞ ３０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６８
ｔｃａａｇａｔｇｇａ ａｇｔｇａｇｔｇｇｇ ｇｔｔａａａｃｇａｇ ３０
＜２１０＞ ６９
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ６９
ｃａｔａｔｔｃｃｔｇ ｇｔｔｔａｇｃａｇａ ２０
＜２１０＞ ７０
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７０
ｇｔｇａｇｃａｔｇｔ ｔａａａａｃｇｔｔｇ ２０
＜２１０＞ ７１
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７１
ｇｇａａｇｔｔｃｇａ ｇａａｇｃｔｇｇａｃ ｔ ２１
＜２１０＞ ７２
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７２
ｃｃｔｔｃａｔｇｔｇ ａｔｃｃｇａｇｃｔｔ ｇ ２１
＜２１０＞ ７３
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７３
ａａｔｔｇｇａｔａｃ ｔｇｃｔａｔｃｃｇｔ ２０
＜２１０＞ ７４
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７４
ｇｇａａｔｔｃａｃｃ ｔａｇａａａａｔｃｃ ｔｇ ２２
＜２１０＞ ７５
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７５
ｇｇａａａｃａｔｃａ ｔｇａｇｔａｃｔａｃ ｃｔ ２２
＜２１０＞ ７６
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７６
ｇａｃｔｔｃｇａａｔ ｇｇｔｔｔａｃａｔｃ ｃ ２１
＜２１０＞ ７７
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７７
ｔｔｃｔｇｇａｃａｔ ｇｔｃｃｃｔｇａａｇ ｔｃａｃａ ２５
＜２１０＞ ７８
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７８
ａｃｃｃｇｇａｇｃａ ａｇｇａｇｇｔｃｔｔ ２０
＜２１０＞ ７９
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ７９
ｃａａａｃａａｃｔａ ｔａｇｇｃｃａｃｇａ ａ ２１
＜２１０＞ ８０
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８０
ｇｇｃａａａｃｃａｇ ｇｔａａｇｔａｃａｇ ２０
＜２１０＞ ８１
＜２１１＞ ２０
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８１
ａａｇｇｇｔｇｃｔｇ ｔｇａｔｃｇｔｔｇｔ ２０
＜２１０＞ ８２
＜２１１＞ ２３
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８２
ｃｔｃａｃａａｔａａ ｇｇｔｇｇｔｃａｃｃ ｔｃｔ ２３
＜２１０＞ ８３
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８３
ｃａａｃｇｔｇｔｇａ ｇｃｃｃｔｃｔａｃｃ ｔ ２１
＜２１０＞ ８４
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８４
ｇｃｃｔｃｔｇａｃｔ ｇｃａｔｃａｃａｃｔ ｃａ ２２
＜２１０＞ ８５
＜２１１＞ ２２
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８５
ｃｇｔｇｔｇｇａａｇ ｇａｇｇａｔｔｔｇａ ｃｃ ２２
＜２１０＞ ８６
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８６
ｇａｃｃａｇｔｃｃｔ ｃａｃｃａａｃｃｃｔ ｔ ２１
＜２１０＞ ８７
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８７
ｃｔｔｃａｔｃｔｃｃ ｃｔｃｃｇｃｃｔｃａ ｔｔｇｃｃ ２５
＜２１０＞ ８８
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８８
ｇｃｔｇａｇｃａｃｇ ａｇａｃａｃｃｃａｃ ａａａｃｃ ２５
＜２１０＞ ８９
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ８９
ｇａｔｃｔｃｔｃａｃ ｃｃｔｇｇｇｇｃｔｔ ｇｔｇｇａ ２５
＜２１０＞ ９０
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９０
ｔｇｔｇｃａａｃａｇ ｔｇｔｇａｔｇｇｃａ ａｇｇｇａ ２５
＜２１０＞ ９１
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９１
ｃｔｇｇｃｃｔａｃｃ ｔｔｇｔｇｃｔｇｃｇ ｔ ２１
＜２１０＞ ９２
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９２
ｃｃｇｃａｔｃａａｃ ｔｔｇｇｇａａｇａｃ ｔｃｃｔ ２４
＜２１０＞ ９３
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９３
ａｔｃｔｃａｔｔａｇ ｃａｇｇｔａｇｔｇａ ａａｇｃｃ ２５
＜２１０＞ ９４
＜２１１＞ ２５
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９４
ｃｔｔｇｃｔｔｃａｔ ｃｔａａａｃｃｃａｃ ａａｃｔｃ ２５
＜２１０＞ ９５
＜２１１＞ ２４
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９５
ｔａｔａａａａｔｇｃ ｃｔｃｔｃｇｇｇａａ ｃｃｔｃ ２４
＜２１０＞ ９６
＜２１１＞ ２１
＜２１２＞ ＤＮＡ
＜２１３＞ ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ
＜４００＞ ９６
ｔｇｇｃｇｔｇａａｔ ｃａｃｃａｇｔｃｔｔ ｇ ２１
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＡサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図２】図２は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＢサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図３】図３は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＣサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図４】図４は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＤ、ＡＢＣＥおよびＡＢＣＦサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図５】図５は、ＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＧサブファミリーの各遺伝子を増幅した結果のゲル電気泳動写真を示す。
【図６】図６は、ヒト白血球試料におけるＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＢサブファミリーの各遺伝子のコピー数を示す。
【図７】図７は、ヒト白血球試料におけるＡＢＣトランスポーターのＡＢＣＣサブファミリーの各遺伝子のコピー数を示す。
Claims (57)
- 配列番号１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号７で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号８で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号９で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号１０で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号１１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号１２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号１３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号１４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号１５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号１６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号１７で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号１８で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号１９で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号２０で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号２１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号２２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号２３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号２４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号２５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号２６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号２７で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号２８で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号２９で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号３０で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号３１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号３２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号３３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号３４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号３５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号３６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号３７で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号３８で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号３９で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号４０で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号４１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号４２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号４３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号４４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号４５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号４６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号４７で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号４８で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号４９で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号５０で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号５１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号５２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号５３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号５４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号５５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号５６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号５７で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号５８で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号５９で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号６０で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号６１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号６２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号６３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号６４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号６５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号６６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号６７で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号６８で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号６９で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号７０で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号７１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号７２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号７３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号７４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号７５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号７６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号７７で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号７８で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号７９で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号８０で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号８１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号８２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号８３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号８４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号８５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号８６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号８７で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号８８で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号８９で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号９０で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号９１で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号９２で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号９３で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号９４で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 配列番号９５で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、および配列番号９６で表される塩基配列またはその１もしくは２塩基が置換されている塩基配列を有するオリゴヌクレオチドを含むプライマーセット。
- 請求項１−１２に記載のプライマーセットを含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＡサブファミリー遺伝子を検出するためのキット。
- 請求項１３−２３に記載のプライマーセットを含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＢサブファミリー遺伝子を検出するためのキット。
- 請求項２４−３６に記載のプライマーセットを含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＣサブファミリー遺伝子を検出するためのキット。
- 請求項３７−４０に記載のプライマーセットを含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＤサブファミリー遺伝子を検出するためのキット。
- 請求項４１記載のプライマーセットを含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＥサブファミリー遺伝子を検出するためのキット。
- 請求項４１−４３に記載のプライマーセットを含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＦサブファミリー遺伝子を検出するためのキット。
- 請求項４４−４８に記載のプライマーセットを含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ＡＢＣＧサブファミリー遺伝子を検出するためのキット。
- 請求項１−４８に記載のプライマーセットを含む、ヒトＡＢＣトランスポーター遺伝子ファミリーを検出するためのキット。
- 試料におけるＡＢＣトランスポーター遺伝子の発現を検出する方法であって、請求項１−４８のいずれかに記載のプライマーセットを用いてポリメラーゼ連鎖反応によりＡＢＣトランスポーター遺伝子を増幅させることを含む方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002165863A JP2004008084A (ja) | 2002-06-06 | 2002-06-06 | ヒトａｂｃトランスポーター遺伝子を検出するためのプライマーセットおよび検出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2002165863A JP2004008084A (ja) | 2002-06-06 | 2002-06-06 | ヒトａｂｃトランスポーター遺伝子を検出するためのプライマーセットおよび検出方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004008084A true JP2004008084A (ja) | 2004-01-15 |
Family
ID=30433603
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002165863A Pending JP2004008084A (ja) | 2002-06-06 | 2002-06-06 | ヒトａｂｃトランスポーター遺伝子を検出するためのプライマーセットおよび検出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
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| JP (1) | JP2004008084A (ja) |
-
2002
- 2002-06-06 JP JP2002165863A patent/JP2004008084A/ja active Pending
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