JP2003534374A - 少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸塩と組合せまたは複合した少なくとも一つのポリマーを含む医薬組成物、複合ポリマーおよびその用途 - Google Patents

少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸塩と組合せまたは複合した少なくとも一つのポリマーを含む医薬組成物、複合ポリマーおよびその用途

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸誘導体と組合せまたは複合した少なくとも一つのポリマーを含有する医薬組成物、少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸誘導体との新規な複合ポリマーおよびとりわけ癌治療におけるそれらの用途に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 この発明は、少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸誘導体と組合せ(c
ombined)または複合した(conjugated)少なくとも一つのポリマーを含む医薬組成
物、少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸誘導体と複合した新規なポリ
マー、および特に癌の治療におけるその用途に関する。
【０００２】 本発明の目的のために、「ポリマー」という用語は、少なくとも一つのヒドロ
キシ官能基を含む高分子を意味することを意図している。 少なくとも一つのヒドロキシ官能基を含むポリマー、特にポリアルコールとポ
リサッカライドの場合には、それらの天然の形態でもよく、あるいはそれらが含
有するヒドロキシ官能基は、エステル化またはエーテル化により容易に置換され
得るように官能化されていてもよい。
【０００３】 ポリサッカライドは、全て同一であるモノサッカライドの分子から構成されて
いる(ホモポリサッカライド)であるか、または異なるモノサッカライドの分子か
ら構成されている(ヘテロポリサッカライド)であるかによって、二つのクラスに
分けられる。 ホモポリサッカライドの中では、澱粉、グリコーゲン、セルロース、デキスト
ランおよびキチンのようなグルコサン類がまず第一に挙げられる。グルコサン類
と同様に、アラバン類、キシラン類およびペクチン類も挙げられる。 ヘテロポリサッカライドの中では、特に、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−アラビノー
ス、Ｌ−ラムノースおよびＤ−グルクロン酸を含む分枝構造であるゴム類、なら
びにヘミセルロース類が挙げられる。
【０００４】 デキストランは、ロイコノストック メゼンテロイド(Leuconostoc mesenteroi
de)およびロイコノストック デキストラニカム(Leuconostoc dextranicum)のよ
うな細菌由来の中性のポリサッカライドである。これらの細菌は酵素、デキスト
ランシュクラーゼ(dextransucrase)を有し、この酵素はショ糖をいくつかのヒド
ロキシ官能基を含むα(１,６)-結合したＤ-グルコース単位から構成された高分
子に変換する。デキストランのコロイド特性およびその弱い免疫原性は、血漿代
用物としての使用を可能にした。デキストランのヒドロキシ官能基は容易に官能
化され得るから、多くのデキストラン誘導体が作られている。置換基の性質と置
換の程度により、生成物は天然のデキストランの生物学的性質よりはるかに広範
な生物学的性質を有する。
【０００５】 官能化されたデキストランの特別な場合には、例えば、デキストランのある種
のカルボキシメチルベンジルアミド誘導体(ＣＭＤＢ)は、その置換度により、種
々の細胞系、特にＨＢＬ１００およびＨＨ９乳房前腫瘍系およびヒトの乳癌細胞
(ＭＣＦ−７)に対して増殖抑制活性を示すことが報告されている(R. Bagheri-Ya
rmandら、1994, In Vitro Cell. Dev. Biol. 30A, 8822-8824)。この増殖抑制活
性は、ベンジルアミド基の存在に関連していることが示された。細胞増殖の阻害
は、Ｓ期における細胞数の減少と、Ｇ0／Ｇ1期における細胞の蓄積に関連してい
る(R. Bagheri-Yarmandら、Anticancer Res., 1992, 12, 1641-1616)。ある種の
ＣＭＤＢＳが、種々の生長因子(ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＰＤＧＦ ＢＢ、ＴＧＦβ
)とその膜結合レセプターとの相互作用を修飾することを、最近の研究が明らか
にした(例えば、P. Bittounら、Biochemical Pharmacology, 1999, 57, 1399-14
06参照)。ＣＭＤＢsはパラクリンとオートクリン回路を妨げることにより抗増殖
活性を発揮する(Liu JF. ら、Anticancer Res., 1997, 17, 253-258; Bagheri-Y
armand R.ら、Biochem. Biophys. Res. Commun., 1997, 239, 424-428; Bagheri
-Yarmand R.ら、Br. J. Cancer., 1998, 78, 111-118およびBagheri-Yarmand R.
ら、Cell Growth. Differ., 1998, 9, 497-504)。胸腺欠損(またはヌード)マウ
スでのインビボ試験で、ＭＣＦ−７ｒａｓヒト乳ガン細胞モデルの接種で誘発し
た腫瘍の増殖が、ＣＭＤＢでの処置により遮断されることが例証された。組織分
析によれば、これらの腫瘍での血管新生の減少が明らかになった。いくつかのカ
ルボキシメチルベンジルアミドスルホネート誘導体(ＣＭＤＢＳ)が、その置換度
によりＨＢＬ１００とＨＨ９細胞系に増殖抑制作用を有することも明らかになっ
た(Bagheri-Yarmand R.ら、Biochem. Biophys. Res. Commun., 1997, 239, 424-
428)。
【０００６】 抗ガン治療法を見出す目的で、例えばフェニル酢酸ナトリウム(ＮａＰＡ)のよ
うないくつかのフェニル酢酸塩を用いることも既に提案されている。ＮａＰＡは
フェニルアラニンの普通の代謝物であり、通常血漿中にμモル濃度で存在する。
ＮａＰＡのより高い濃度(ミリモルのオーダー）は、種々のヒト癌細胞表現型の
細胞性塞栓と逆突然変異を導く(特にSamid D.ら、Cancer Res., 1992, 52, 1998
-1992; Samid D.ら、Blood, 1992, 80, 1576-1581; Samid D.ら、J. Clin. Inve
st., 1993, 91, 2288-2295およびSamid D.ら、Cancer Res., 1994, 54, 891-895
)。
【０００７】 ＮａＰＡとその誘導体は、胸腺欠損マウスに移植されたＭＣＦ−７ｒａｓ癌細
胞のモデルに関して抗腫瘍活性も示す(Adam L.ら、Cancer Res., 1995, 55, 515
6-5160)。ＮａＰＡは、前立腺の悪性腫瘍、髄芽細胞腫またはグリオームの患者
に対して行われたフェーズＩとフェーズＩＩの臨床試験に用いられた(Thibault
A.ら、Cancer Res., 1994, 54, 1690-1694およびChang SM.ら、J. Clin; Oncol.
, 1999, 17, 3, 984-990)。ＮａＰＡが細胞増殖を阻害する機序は、投与量に対
して可逆的でありかつ依存している。
【０００８】 抗癌治療の目的は、腫瘍細胞を殺すかまたはその増殖を遮断することであり、
一方同時に正常細胞を助命することである。腫瘍細胞に対して効果的であるため
には、ＮａＰＡはインビボで１５０mg／kgのオーダーの濃度で用いられなければ
ならない。しかし、この濃度ではＮａＰＡは癌細胞と健康な細胞の両方に細胞毒
性を有し、これは望ましくない。 この理由のため、健康な細胞に対して細胞毒性を有しない新規な抗癌治療を開
発する真の必要がある。
【０００９】 特に、米国特許５,７１０,１７８号で、ＮａＰＡを、例えば、インターフェロ
ン、インターロイキン、腫瘍壊死因子、グルタミン拮抗剤、ホルモン、ビタミン
などのような生物活性を有するある種の物質と組合せることが既に提案されてい
る。このタイプの組合せでは、用いられるＮａＰＡの投与量を減少させることが
できない。
【００１０】 本発明者らは、これらの問題を軽減し、かつ新規な抗癌剤を提供するため、本
発明の課題を展開した。 本発明の課題は、有効成分として、： ａ）少なくとも一つの遊離ヒドロキシ官能基を含むポリマーと、次の式(Ｉ)： Ｒ2-(ＣＨ2)n-ＣＯＯＲ1 ［式中、 − Ｒ1は水素原子、ハロゲン原子、ナトリウムまたはカリウムのような１価の
アルカリ金属原子、または基-ＣＯ(ＣＨ2)m-Ｒ3を表し、 − Ｒ2およびＲ3は無置換フェニル基を表し、 − ｎおよびｍは同一であり、１〜３の整数である］ の少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸誘導体との複合体であって； 次の式(ＩＩＩ)： (ポリマー)-(ＯＯＣ-(ＣＨ2)n-Ｒ2)d (ＩＩＩ) ［式中、ポリマーは少なくとも一つの遊離ヒドロキシ官能基を含み、ｎは１〜３
の整数であり、Ｒ2は無置換のフェニル基を表し、ｄは式(Ｉ)の誘導体の置換イ
ンデックス(ｄｓ)であって、≧ ０.０５かつ≦ １.５であり、好ましくは＞ ０.
１５であり、より好ましくは０.５〜０.８である］ に対応する複合体； ｂ) ５０００Ｄａ以上の分子量を有し、少なくとも一つの遊離ヒドロキシ官
能基を含む少なくとも一つのポリマーと、次の式(Ｉ')： Ｒ'2-(ＣＨ2)n'-ＣＯＯＲ'1 (Ｉ') ［式中、 − Ｒ'1はナトリウムもしくはカリウムのような１価のアルカリ金属原子であり
、 − Ｒ'2は無置換のフェニル基を表し、 − ｎ'は１〜３の整数である] の少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸塩との組合せ； ｃ) およびそれらの混合物、 からなる群から選択される少なくとも一つの組成物、ならびに任意の一以上のそ
の他の追加的な有効成分を、医薬的に許容される賦形剤および/または生理学的
に許容される担体の存在下もしくは非存在下に含むことを特徴とする医薬組成物
である。
【００１１】 本発明では、上記の式(ＩＩＩ)の複合化合物をＮａＰＡＣsと略称する。 また、本発明によれば、医薬的に許容される賦形剤は、１以上の賦形剤および
／またはリポソームのような１以上の輸送体からなっていてもよい。
【００１２】 本発明により使用されるポリマーは、天然(自然のまま)または合成であっても
よく、遊離ヒドロキシ官能基が、これらのポリマーに付加的な生物学的または物
理化学的性質を付与できる、カルボキシ；例えばメチルカルボキシのようなアル
キルカルボキシ；アーリルアルキルカルボキシ；Ｎ−ベンジルエチレンカルボキ
シアミド；サルフェート；およびスルホネート基から選択される１以上の化学的
官能性基で任意に置換(官能化)されていてもよい。
【００１３】 本発明により使用できるポリマーは、天然または合成で、任意に官能化されて
いてもよいポリオール類およびポリサッカライド類から選択するのが好ましい。 ポリオール類のうち、特に、ポリエチレングリコールおよびポリプロピレング
リコールのようなポリアルキレングリコール類ならびにポリビニルアルコール類
が例示される。 本発明の有利な具体例によれば、ポリマーは、天然または合成で、任意に官能
化されていてもよいポリサッカライド類から選択され、それらのうち特に、澱粉
、グリコーゲン、セルロース類、デキストラン類、ポリ-β-１,３-グルカン類、
キチンのようなグルコサン類、アラバン類、キシラン類ならびにペクチン類が挙
げられる。
【００１４】 天然または合成で、任意に官能化されていてもよいデキストラン類およびポリ
-β-１,３-グルカン類は、この発明による医薬組成物が上記のポリマーとフェニ
ルアルキルカルボン酸塩とを組合せた形態で含むときに、特に好ましい。 官能化された合成デキストランとしては、例えば１以上のカルボキシ、メチル
カルボキシ、Ｎ-ベンジルメチレンカルボキシアミド、サルフェートおよび／ま
たはスルホネート基を含むデキストランのような、特許出願ＥＰ-Ａ-００２３８
５４；ＥＰ-Ａ-０１４６４５５またはＷＯ９９／２９７３４に記載の化合物が、
具体的に挙げられる。
【００１５】 これらの官能化された合成デキストラン類のうち、次の式(ＩＩ)： ＤＭＣaＢbＳｕC (ＩＩ) ［式中、 − Ｄはポリサッカライド鎖、好ましくはグルコサイド単位の配列からなるポリ
サッカライド鎖を表し、 − ＭＣはメチルカルボキシ基を表し、 − ＢはＮ-ベンジルメチレンカルボキシアミド基を表し、 − Ｓｕはサルフェート基(グルコサイド単位を有する遊離ヒドロキシ官能基の
硫酸化)を表し、 − ａ、ｂおよびｃは、それぞれ基ＭＣ、ＢおよびＳｕの置換度(ｄｓ)を表し； ａは０に等しいかまたは≦ ２であり； ｂは０に等しいかまたは≦ １であり； ｃは０に等しいかまたは≦ １であり；ａ + ｂ + ｃの和は≦ ３であると解さ
れる］ のデキストラン誘導体が好ましい。
【００１６】 式(ＩＩ)のデキストラン類およびそれらの製造方法は、特許出願ＷＯ９９／２
９７３４に記載されている。式(ＩＩ)のこれらのデキストラン誘導体はＤＭＣＢ
sと略称され、観念的にはＲ-ＯＸサブユニット(Ｘはメチルカルボキシル(ＭＣ)
、ベンジルアミド(Ｂ)またはサルフェート基である)からなるコポリマーである
と考えられている。したがって、ポリサッカライド鎖は、グルコシド単位１００
％の代わりに、観念的なＲ-ＯＨサブユニットの３００％からなっていると考え
られる。したがって、メチルカルボキシ基の置換度(ｄｓ)１.２を有するメチル
カルボキシデキストラン(ＤＣＭ)は、グルコシド単位当たり、置換された基(Ｒ-
ＭＣ)１.２および遊離ヒドロキシ基(Ｒ-ＯＨ) １.８を含む。
【００１７】 上記の式の(ＩＩ)デキストラン誘導体のうち、０.５≦ ａ ≧１.５；０.１≦ ｂ ≧１；および０≦ ｃ ≧０.６の化合物が好ましい。 これらの式(ＩＩ)のデキストラン誘導体のうち： ｉ） ａ＝０.７０；ｂ＝０.３；ｃ＝０； ii） ａ＝０.９１；ｂ＝０.１８；ｃ＝０； iii） ａ＝０.６７；ｂ＝０.３３；ｃ＝０；(ＬＳ４ ＤＭＣＢと称される)、 iv） ａ＝０.６８；ｂ＝ｃ＝０(ＬＳ１２と称される) ｖ） ａ＝０.６７；ｂ＝０.３９；ｃ＝０；(ＬＳ１７と称される)、 vi） ａ＝０.６８；ｂ＝０.３４；ｃ＝０； vii） ａ＝０.６８；ｂ＝０.２０；ｃ＝０； viii） ａ＝０.７；ｂ＝０.３；ｃ＝０；(ＤＭＣＢ７と称される)、 ix） ａ＝０.６０；ｂ＝０.４０；ｃ＝０；(ＬＳ１７-ＤＭＣＢと称される)、 ｘ） ａ＝０.６０；ｂ＝０.３５；ｃ＝０；(ＤＭＣＢ１０と称される)、
のものが、特に好ましい。
【００１８】 上記の式(Ｉ')のフェニルアルキルカルボン酸塩のうち、具体的にはフェニル
酢酸ナトリウム、フェニル酢酸カリウム、フェニルプロピオン酸ナトリウム、フ
ェニルプロピオン酸カリウム、フェニル酪酸ナトリウムおよびフェニル酪酸カリ
ウムが例示される。 本発明による医薬組成物が、少なくとも一つの式(Ｉ)の化合物と複合した少な
くとも一つの式(ＩＩ)のデキストランを含むとき、形成される複合化合物は次の
式(ＩＩＩａ)： (ＤＭＣaＢbＳｕc)-(ＯＯＣ-(ＣＨ2)n-Ｒ2)d (ＩＩＩａ) ［式中、Ｄ；ＭＣ；Ｃ；Ｂ；Ｓｕ；Ｒ2；ａ，ｂおよびｃは、式(Ｉ)および(ＩＩ
)の化合物について上記で与えられたものと同じ意味を有し、ｄは式(ＩＩＩ)の
化合物について上で与えられたものと同じ意味を有し、ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄの和は３
以下である］ に対応する。
【００１９】 特に好ましい具体例によれば、本発明による医薬組成物は、上記の少なくとも
一つの式(ＩＩＩ)の複合化合物、より好ましくは少なくとも一つの式(ＩＩＩａ)
の複合化合物を含む。 上記の式(ＩＩＩａ)の複合化合物のうち、ａ ＞ ０.５； ｂ ＞ ０.１５； ｃ
= ０または＜ ０.８およびｄ ＜ １.５のものが好ましい。
【００２０】 さらに好ましいのは、 ｉ） ａ＝０.６８；ｂ＝０.２０；ｃ＝０およびｄ＝０.１４； ii） ａ＝０.６４；ｂ＝０.４３；ｃ＝０およびｄ＝０.３５； iii） ａ＝０.６７；ｂ＝０.３９；ｃ＝０およびｄ＝０.３５ (ＬＳ１７-Ｎａ
ＰＡＣ)； iv） ａ＝１；ｂ＝ｃ＝０；ｄ＝０.１；ならびに ｖ） ａ＝１；ｂ＝ｃ＝０およびｄ＝０.３ である式(ＩＩＩａ)の複合化合物である。
【００２１】 少なくとも一つの式（Ｉ'）のフェニルアルキルカルボン酸塩と組合せたポリ
マーおよび式(ＩＩＩ)または(ＩＩＩａ)の複合化合物は、驚くべきことに、別々
に使用される化合物のそれぞれより強い抗癌活性を有し、結果として各有効成分
の有効量を減少することができ、同時にこれらを含む医薬組成物の抗癌効果を高
める。 しかも驚くべきことに、この抗癌活性は、式(ＩＩＩ)または(ＩＩＩａ)の複合
化合物を用いたときに、より一層強い。 この発明の医薬組成物中に、ポリマーと式(Ｉ')のフェニルカルボン酸塩とが
組合せた型態で存在するとき、ポリマーと、式(Ｉ')の化合物との間の濃度比(ｍ
Ｍで表す)は、好ましくは１０：１〜１：１の間であり、より好ましくは１０：
２〜１：１の間である。
【００２２】 本発明による医薬組成物が、抗凝集剤、抗酸化剤、色素、矯味改質剤、または
平滑、集合もしくは分離剤のような、医薬組成物を製造するのに使用される常用
の１以上の添加剤、および一般に医薬品産業で通常使用される賦形剤を含み得る
ことは勿論である。 本発明による医薬組成物は、いくつかの生理活性：すなわち増殖抑制、細胞増
殖抑制、壊死、プロアポプトティック、抗脈管形成、抗転移および分裂促進因子
阻害活性を有する。 そのため、医薬組成物は、抗癌剤として、特に乳癌(ホルモン依存性もしくは
非ホルモン依存性乳癌)および黒色腫に活性である。
【００２３】 上記の医薬組成物は、皮下、静脈内または経口のように全身的に投与されるの
が好ましい。 少なくとも一つの式(Ｉ')のフェニルカルボン酸塩と組合せたポリマーまたは
式(ＩＩＩ)の複合化合物の全有効量は、大きな割合で変動でき、特に式(ＩＩＩ)
の複合化合物が用いられるとき、好ましくは１週間に２回の割合で、１日当たり
０.１mg／kg〜１日当たり２００mg／kgの範囲で、より好ましくは１週間に２回
の割合で、１日当たり１５mg／kg〜１日当たり１５０mg／kgの範囲である。
【００２４】 上記の式(ＩＩＩ)の複合化合物は新規化合物であり、その能力は本発明のもう
一つの主題を構成している。 式(ＩＩＩ)の化合物の中では、式(ＩＩＩａ)の化合物が好ましい。 式(ＩＩＩａ)の化合物の中では、ａ＞０.５；ｂ＞０.１５；ｃ＝０または＜０
.８でｄ＜１.５の化合物が好ましい。 さらにとりわけ、ｄｓ値が次の： i） ａ＝０.６８；ｂ＝０.２０；ｃ＝０およびｄ＝０.１４； ii） ａ＝０.６４；ｂ＝０.４３；ｃ＝０およびｄ＝０.３５； iii） ａ＝０.６７；ｂ＝０.３９；ｃ＝０およびｄ＝０.３５（ＬＳ１７-Ｎａ
ＰＡＣ）； iv） ａ＝１；ｂ＝ｃ＝０およびｄ＝０.１；ならびに ｖ） ａ＝１；ｂ＝ｃ＝０およびｄ＝０.３ である、式(ＩＩＩａ)の複合化合物が好ましい。
【００２５】 上記の式(ＩＩＩ)の複合化合物は、式(Ｉ)の前記誘導体と前記ポリマーとの間
に共有結合を形成し、式(ＩＩＩ)の所期の化合物を生成するように、例えば、有
機溶媒中で、ポリマーの少なくとも一つの遊離ヒドロキシ官能基と、少なくとも
一つの上記の式(Ｉ)のフェニルアルキルカルボン酸誘導体とのエステル化反応を
、脂肪族もしくは芳香族３級アミン、またはカップリング剤、またはアシルクロ
ライドもしくは無水物の存在下に行うことを含む、通常のエステル化方法に従っ
て製造できる。
【００２６】 この製造方法は、ポリマーの可溶化の前工程、例えば、ポリマーをリチウム塩
の存在下に、反応溶媒中で加熱するか、または官能化されたデキストランの場合
のみであるが、カラム上でのイオン交換および好ましくはエステル化反応におい
て触媒として使用される脂肪族または芳香族３級アミンでの中和の何れかを含む
ことができる。
【００２７】 このエステル化に影響し得る５つの因子がある。すなわち： １）有機溶媒の性質：有機溶媒は、ジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)、ホルムア
ミド、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド(ＤＭＦ)およびこれらの混
液から選択するのが好ましい。ＤＭＦが特に好ましい； ２）３級アミンまたはカップリング剤の性質：この方法において使用できる３級
アミンは、ピリジンおよびそのアルキル誘導体、トリエチルアミン、トリブチル
アミンならびにＮ,Ｎ-ジメチルアニリンから選択するのが好ましい。ピリジンお
よびトリエチルアミンが特に好ましい。３級アミンの使用量は、用いられるポリ
マー中の遊離ヒドロキシ官能基の量の関数として計算できる。カップリング剤と
しては、例えば、１,１'-カルボニルジイミダゾール(ＣＤＩ)またはＮ,Ｎ'-ジシ
クロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ)のようなカルボジイミドを、０〜６０℃の
温度で、式(Ｉ)のフェニルアルキルカルボン酸誘導体のＣＤＩに対するモル比が
０.００１〜１０で、ＣＤＩのポリマーに対するモル比が０.０１〜１０の間で変
動し得る割合で用いることができる。ＣＤＩはＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ホルムアミド
などのような有機溶媒に可溶である； ３）反応時間； ４）反応温度； ５）使用されるポリマー中の遊離ヒドロキシ官能基の数(または濃度）。
【００２８】 例えば、トリエチルアミン塩の形態にある式(ＩＩ)の化合物中の遊離ヒドロキ
シ官能基の量は、次の方法で計算できる。 各グルコシド単位は３つの観念的な、置換し得るサブユニットからなる。 これは： Ｒ-ＯＨ モル質量：５４ｇ/mol ＲＯＣＨ2ＣＯＮＨＣＨ2φ(φ＝フェニル) モル質量：２０１ｇ/mol ＲＯＣＨ2ＣＯＯＨＮＥｔ3(Ｅｔ＝エチル) モル質量：２１３ｇ/mol を与える。
【００２９】 乾燥製品の質量(mass)の関数として、遊離ヒドロキシ官能基の数は、次の方程
式を用いて決定される： （１） ｈ×０.０５４＋ｂ×０.２０１＋ｔ×０.２１３＝１ｇ [ｈ/(ｈ＋ｂ＋ｔ)]×３＝ｄｓOH [ｂ/(ｈ＋ｂ＋ｔ)]×３＝ｄｓ b [ｔ/(ｈ＋ｂ＋ｔ)]×３＝ｄｓ a で、 ｈ：デキストラン誘導体の遊離ヒドロキシのモル数； ｂ：式(ＩＩ)の化合物におけるＮ-ベンジルメチレンカルボキシアミド基 (ＲＯＣＨ2ＣＯＮＨＣＨ2φ)のモル数； ｔ：式(ＩＩ)の化合物におけるＲＯＣＨ2ＣＯＯＨＮＥｔ3基のモル数； ｄｓ b ：Ｎ-ベンジルメチレンカルボキシアミド基の置換度； ｄｓ a ：メチルカルボキシ基の置換度； ｄｓOH：遊離ＯＨの量；または （２） ｈ＋ｂ＋ｔ＝(３×ｈ)/ｄｓ ｔ＝ｄｓ a /ｄｓOH ｂ＝ｄｓ b /ｄｓOH を与える。
【００３０】 次いで、これらの方程式は方程式(１）に代替される。 ｈ[０.０５４＋(ｄｓ a /ｄｓOH)×０.２１３＋(ｄｓ b /ｄｓOH)×０.２０１]
＝１ 結果として ｈ＝１/[０.０５４＋(ｄｓ a /ｄｓOH)×０.２１３＋(ｄｓ b /ｄｓOH)×０.２
０１] 例えば、次の置換度を有する式(ＩＩ)の化合物に対して： ｄｓ b ＝０.３３；ｄｓ a ＝０.６７；ｄｓOH＝３-(ｄｓ b ＋ｄｓ a )＝２ したがって、遊離ヒドロキシ残基の量は、ｈ＝６.０６mmol/ｇである。
【００３１】 複合化工程(Ｖ２)で用いられるトリエチルアミン(Ｖ１)および式(Ｉ)のフェニ
ルアルキルカルボン酸誘導体の量は、次の比により決定される。 Ｖ１：(ＮΦCH2COCl/ＮOH) Ｖ２：（ＮΦCH2COCl/ＮNET3） ＮΦCH2COCl：式(Ｉ)のフェニルアルキルカルボン酸誘導体のミリモル数 ＮOH：ヒドロキシ基のミリモル数 ＮNET3：トリエチルアミンのミリモル数で。
【００３２】 式(ＩＩＩ)の複合化合物で、式(Ｉ)の化合物の置換度ｄは、酸滴定分析、赤外
線分光光度法またはＵＶ吸収分光光度法により測定できる。 合成が終了したとき、式(ＩＩＩ)の複合化合物は、例えば、アルコール性媒体
中での沈殿および／または限外ろ過のような常法に従って任意に精製できる。
【００３３】 上記の手法の他に、本発明は、また以下の記述から明らかになるであろう他の
手法を含む。それは、本発明による式(ＩＩＩ)の複合化合物の合成例、式(Ｉ)の
フェニルアルキルカルボン酸塩と組合せまたは複合した式(ＩＩ)のデキストラン
の間の相乗作用のいくつかの実証例、および添付の図面にも関する。添付の図面
において： − 図１は、ＭＣＦ-７細胞増殖に対する、物質単独と組合せた物質との比較抑
制効果を表し； − 図２は、細胞サイクルの３つのフェーズ(Ｇ0/Ｇ1/ＳおよびＧ2/Ｍ)内でのＭ
ＣＦ-７ｒａｓ細胞の分布に対する、ＬＳ４ ＤＭＣＢとの組合せにおけるＮａＰ
ａの効果を示し； − 図３は、胸腺欠損マウスにおけるＭＣＦ-７ｒａｓ細胞の接種により誘発し
た腫瘍の体積の減少に対する、物質単独と物質組合せとの比較効果を表し； − 図４は、胸腺欠損マウスにおけるＭＣＦ-７ｒａｓ細胞の接種により誘発し
た腫瘍の体積の減少に対する、式(ＩＩＩ)の複合化合物(ＮａＰＡＣ)の効果を表
し； − 図５は、胸腺欠損マウスにおける１２０５ＬＵ細胞の接種により誘発した腫
瘍の体積の減少に対する、ＮａＰＡ単独およびＬＳ１７-ＮａＰＡＣの効果を示
す。
【００３４】 しかし、これらの例は、発明の主題を説明するためにのみされたものであり、
決して限定を構成するものではないことを明瞭に理解さるべきである。
【００３５】実施例１：ＬＳ１７-ＮａＰＡＣの合成 ＬＳ１７-ＮａＰＡＣの合成には、まず前駆体ＬＳ１７を無水極性溶媒、一般
にはＤＭＦのようなルイス塩基に溶解できるようにするため、ピリジン塩の形態
に変換することを必要とした。
【００３６】ピリジン塩の形態への変換 ＬＳ１７(４１ｇ)を再蒸留水(７７４ml)に溶解した。このようにして得られた
溶液を、プロライト(Purolite)Ｃ１００Ｈイオン交換樹脂(６９.２ｇ)を含むカ
ラムに通した。樹脂カラム出口で回収される溶液のｐＨをピリジンで５.５に調
節した。次にこの溶液を凍結し、凍結乾燥した。オーブン中で、真空下に５０℃
で２４時間乾燥後に約３８ｇのＬＳ１７がピリジン塩の形態(ＬＳ１７-ｐｙｒ)
で得られた。
【００３７】フェニルアセテートの結合 上記の工程で得たＬＳ１７-ｐｙｒの３７ｇを無水ＤＭＦ２.５Ｌに溶解した。
得られた溶液を窒素気流下に、ジャケット付き５Ｌの反応器に注入した。次いで
、ピリジン４２.８mlを加えた。さらに、無水ＤＭＦ３５２ml中でフェニル酢酸
クロライド３５.２mlを混合して、フェニル酢酸クロライドの溶液を調製し、ジ
ャケット付き反応器中の混合物に、撹拌下急速に加えた。反応混合物を１時間撹
拌した。 １Ｍ水酸化ナトリウム液を添加して反応を停止した。次いで、得られたＬＳ１
７-ＮａＰＡＣを、カットオフ閾値５００ｇ／molを有する膜を備えたミリポア-
システムを用いる接線限外濾過により精製した。次いで、精製した溶液を濃縮し
、凍結し、次いで凍結乾燥した。 ＬＳ１７-ＮａＰＡＣは次の置換度を有した。 ａ＝０.６７；ｂ＝０.３９；ｃ＝０およびｄ＝０.３５。
【００３８】実施例２〜１５：ＤＭＦ中での式(ＩＩ)の複合化合物の合成 使用したデキストラン誘導体：ａ＝０.６７、ｂ＝０.３３のＬＳ４ ＤＭＣＢ
ＬＳ４ ＤＭＣＢの可溶化の前工程 デキストランＬＳ４ ＤＭＣＢを、カチオン交換樹脂クロマトグラフィー(ＩＲ
-１２０ Ｈ+樹脂)により、３級アミン塩の形態で可溶化した。４つのアミンを使
用した：トリエチルアミン、トリブチルアミン、ピリジンおよびＮ,Ｎ-ジメチル
アニリン。 ＬＳ４ ＤＭＣＢデキストラン誘導体６ｇを再蒸留水２００mlに溶解し、ＩＲ-
１２０ Ｈ+樹脂のカラム(容積：１.９meq/ml、容量：１０％)でクロマトグラフ
にかけた。生成物は、カラム容積の２〜３倍に相当する再蒸留水の量を用いてク
ロマトグラフにかけた。回収された物質を３級アミン溶液で中和した。この３級
アミン液は、使用される３級アミンによって別々に調製した。トリブチルアミン
とＮ,Ｎ-ジメチルアミンは水に非混和性であるので、中和溶液はエタノール中で
調製した。容積１０００mlの最終溶液をロータリー エバポレーションにより濃
縮し、次いで凍結し、凍結乾燥した。
【００３９】 このように可溶化したＬＳ４ ＤＭＣＢデキストランを、以下ＮａＰＡＣ ＭＦ
と称する式(ＩＩＩ)の複合化合物を調製するために用いた。 合成条件を以下の表１にまとめる。いずれの合成の前でも、デキストランを５
０℃のオーブンに入れる。乾燥デキストランを、反応温度に維持したジャケット
付き反応器中で、撹拌しながらＤＭＦに溶解する。３級アミンの１０％(ｖ：ｖ)
ＤＭＦ溶液をシリンジを用いて加える。次に同様にして調製したフェニル酢酸ク
ロライドをシリンジを用いて加える。１時間後、再蒸留水１５０mlを加えて反応
を停止する。０.１Ｍ水酸化ナトリウム溶液を用いてｐＨを７に調節する。
【００４０】 得られた溶液を、３工程で精製する。 −溶媒を除去するための、ロータリー エバポレーター中での蒸発乾固； −塩基性媒体中、エーテルでの抽出：蒸発後に得られる固体を再蒸留水５０mlに
再溶解する。得られる溶液のｐＨを、希水酸化ナトリウム溶液を用いて１０に調
節し、次いでその溶液を分液ロート中、ジエチルエーテル(３×２０ml)で洗浄す
る。水相を希塩酸で中和し、限外濾過する； −限外濾過：水相の容量を再蒸留水で２Ｌに調節し、２Ｍ ＮａＣｌ液(２０Ｌ)
次いで再蒸留水で限外濾過する。保持物(retentate)を凍結し、次いで凍結乾燥
する。
【００４１】 実施例２〜９、１１および１５の生成物を精製し、精製後得られた物質は次の
性質を示す。
【００４２】
【表】
【００４３】
【表１】
【００４４】実施例１６：ＭＣＦ-７細胞増殖阻害に対する式(Ｉ')のフェニルアルキルカルボ ン酸塩と組合せまたは複合した式(ＩＩ)のデキストランのインビトロでの相乗作 用の実証 Ｉ）材料と方法 １．ＭＣＦ-７腫瘍細胞系 ＭＣＦ-７腫瘍細胞ラインは、浸潤性小管乳腺癌の胸膜転移に由来するエスト
ロゲン感応性上皮細胞系である。これを、ウシ胎児血清１０％、グルタミン１％
、ピルビン酸ナトリウム１％を補充したダルベッコ修正イーグル培地(Dulbecco'
s Modified Eagle Medium、DMEM)中で培養する。液体窒素中で凍結乾燥した形態
でクライオチューブ中に細胞を貯蔵する。クライオチューブを水浴中３７℃で部
分的に解凍する。完全培地２mlを加え、次いで細胞懸濁液を混合する。予め培地
を用いて培養フラスコ(COSTAR(登録商標) T25)を準備する。細胞懸濁液をフラス
コに加え、５％のＣＯ2を含有する３７℃の培養器に入れる。
【００４５】 細胞が実質的に融合したときに、カルシウムとマグネシウムを用いない２mlの
リン酸バッファー(ＰＢＳ)で単層を一回洗浄する。ＰＢＳが除去されてから、細
胞を分離するため、トリプシン２mlを単層に堆積させる。各トリプシン化は、番
号付けした継代培養(numbered passage)に相当する。その後、トリプシンの作用
を停止するために、完全培地８mlを添加する。 均質化の後で、細胞懸濁液を１０００rpmで３〜４分間遠心分離する。細胞含
有ペレットを回収し、次いで完全培地の１０ml中で希釈する。７５cm2培養フラ
スコ(Ｔ７５、COSTAR(登録商標))中に、正確な量の細胞を接種するため、マラセ
ー細胞を用いてml当たりの細胞数を測定する。細胞を５％のＣＯ2を含有する湿
気雰囲気中３７℃で培養する。
【００４６】２．増殖動態 細胞を、ml当たりおよびウェル当たり１５０００細胞の割合で２４ウェルのプ
レート(ＣＯＳＴＡＲ(登録商標))に無作為に接種する。１日当たり４ウェルの割
合で毎日標品を採取する。コールター カウンターＺＭ(登録商標)カウンティン
グにより、各ウェル当たり３回の測定をするようにして、各ウェルに含まれる細
胞数を決定した。このデータに基づいて、ＭＣＦ-７細胞増殖の曲線を時間の関
数としてプロットする。
【００４７】３．細胞増殖アッセイ 指数増殖期に採取した細胞を、ml当たりおよびウェル当たり１５０００細胞の
割合で、２４ウェルのプレートに接種し、これらは、ＦＣＳ１０％、ピルビン酸
ナトリウム１％およびグルタミン１％を補充したＤＭＥＭ培地中である。 ２４時間培養後に、試験すべき物質の種々の濃度を、濃度当たり４つのウェル
の割合で加える。これらの物質を、所望の濃度を得るように、ＦＣＳ２％、ピル
ビン酸ナトリウム１％およびグルタミン１％を含むＤＭＥＭ培地で希釈する。物
質を加えずに陰性対照を調製した。
【００４８】 ７２時間培養後に、細胞を脱着し、次いでＭＣＦ-７細胞のために所定のパラ
メータをセットしたコールター カウンターＺＭ(登録商標)を用いてカウントす
る。検出のダイアメーター(閾値）はアテニュエーション３２に対し５である。
後者は、サンプル中に含まれている所望のダイアメーターの粒子数を決定する。
作成した希釈度を考慮に入れ、当初の細胞懸濁液のml当たりの細胞数をこの値か
ら決定する。次いで、阻害百分率Ｉはこれらの結果から次の方程式を用いて決定
できる： ％Ｉ＝[１−(処理細胞中の正味増加／未処理細胞中の正味増加)]×１００ 未処理細胞中の正味増加は、Ｄ0での細胞数（物質をウェルに添加した時点で
の細胞数）を引いた対照ウェル(ＦＣＳ２％含有ＤＭＥＭ培地)に含まれる細胞数
に相当する。 処理細胞中の正味増加は、Ｄ72での処理細胞数からＤ0細胞数を引いたものに
相当する。
【００４９】４．ＭＴＴ増殖アッセイ ＭＴＴ(３-(４,５-ジメチルチアゾール-２-イル)-２,５-ジフェニル-テトラゾ
リウムブロマイド)は、アルカリ媒体中で還元され得る性質を有し、したがって
、着色化合物、ブルーホルマザンを与える。ミトコンドリアは、それらの膜結合
デヒドロゲナーゼによってこの還元を行うことができる。結果として、機能性ミ
トコンドリア数、間接的には生細胞数は、着色の強度の関数として定量できる。 指数増殖期に採取される細胞を、２００μｌ当たり５０００細胞の割合で９６
ウェルのプレートに接種するが、これは、ＦＣＳ２％、グルタミン１％およびピ
ルビン酸ナトリウム１％を補充したＤＭＥＭ培地中である。２４時間の培養後に
、試験すべき物質の種々の濃度を、濃度当たり３つのウェルの割合で加える。物
質を加えずに陰性対照を作成する。
【００５０】 ７２時間培養後に、細胞を緩衝食塩水で２回洗浄し、次いで各ウェルにＭＴＴ
１００μｌを加える。４時間培養後に、プレートリーダーを用いてプレートを５
７０ｎｍで読む前に、ＤＭＳＯ１００μｌをウェルに添加する。 阻害百分率Ｉを前記方程式を用いて決定する。この時点の未処理細胞の正味増
加は、対照ウェルに含有されている細胞濃度マイナスＤ0の細胞濃度に相当する
。
【００５１】ＩＩ）結果 １．ＭＣＦ-７細胞増殖動態 これらの動態は、ＭＣＦ-７細胞の増殖を特徴付けることを可能とする。この
増殖は、半対数座標としてプロットされ、３期に分類される： 誘導期： これは、細胞を新しい培地に適応させ、これらを表面に付着させる
のに要する時間に相当する。この期は遅延時間(ＴL)により特徴付けられる。 対数期： これは、細胞が有系分裂により分裂し、２つの娘細胞を与えるのに
要する時間に相当する。 この期は、次の方程式で決定される倍増時間（ＴD）で特徴付けられる。 ＴD＝[(ｔ−ｔ0)×ｌｏｇ２]／(Ｌｏｇ Ｎ−Ｌｏｇ Ｎ0) 静止増殖期： これは、融合流での細胞を表す。これらの細胞は細胞に利用可
能な全表面を塞ぎ、もはや増殖できない。培地の枯渇と代謝物濃度の増加がアポ
プトーシスをもたらす。 倍増時間とまた遅延時間は、全ての細胞で同一ではない。ＭＣＦ-７細胞に関
しては、倍増時間は非常に早く１８時間のオーダで、遅延時間については２４時
間のオーダである。
【００５２】２．ＭＣＦ-７系に対して試験されるべき物質の効果 これらのアッセイの目的は、少なくとも一つのデキストランと、少なくとも一
つの式(Ｉ')のフェニルカルボン酸塩とを組合せまたは複合することが、単独で
使用される物質の各々の活性に対して、相乗作用をもたらすことを実証するため
である。このため、物質単独(フェニル酢酸ナトリウム：ＮａＰＡとＬＳ４ ＤＭ
ＣＢデキストラン誘導体)ならびに対応する組合せおよび複合生成物もＭＣＦ-７
腫瘍細胞系に対して試験した。組合せは、同一溶液中でデキストランＬＳ４ Ｄ
ＭＣＢとＮａＰＡとの混合物からなる。複合については、デキストランＬＳ４
ＤＭＣＢへの共有結合を介するＮａＰＡの結合を表す。合成例３、６および８の
複合化合物(ＮａＰＡＣ ＭＦ３：ｄ＝０.２４、ＮａＰＡＣ ＭＦ６：ｄ＝０.７
１；およびＮａＰＡＣ ＭＦ８：ｄ＝０.５３)を次のように試験した。
【００５３】 ａ）ＮａＰＡ単独の効果 ＭＣＦ-７細胞に対するＮａＰＡ単独の効果を、１ｍＭ〜５０ｍＭの濃度範囲
に対して細胞を勘定することにより、まず観察する。ＮａＰＡは、濃度の関数と
して増加する抗増殖効果を引き起こす。これらの濃度が３０ｍＭより大きいとき
は、細胞増殖の阻害は１００％を超え、したがって、その物質の細胞毒性を反映
している。ＩＣ50(細胞の５０％増殖の阻止を生ずる最小用量)は、５ｍＭの濃度
で得られる。 １ｍＭより低い濃度でのＮａＰＡの効果を評価した。実際上の理由から、阻害
百分率は、比色法(ＭＴＴ)により定量した。これらの濃度において、ＮａＰＡは
、ＭＣＦ-７細胞に対して有意な効果を有すると思われない。
【００５４】 ｂ）デキストランＬＳ４ ＤＭＣＢ単独の効果 １μｇ／ml〜１５００μｇ／mlの範囲の濃度の増殖阻止効果をコールターカウ
ンターＺＭ(登録商標)による細胞の直接勘定により評価した。この物質は、１０
００μｇ／mlを超えない濃度でＭＣＦ-７ｒａｓ細胞に対して阻害効果を有さな
いと思われる。 より高い濃度で、ＭＴＴ比色法により行った試験は、阻害百分率が、約３０％
阻害の最大値で平衡状態に達することを示す。
【００５５】 ｃ）物質単独と組合せた物質の比較効果 比較試験をＭＴＴ比色法で行う。 １０００μｇ／mlにおけるデキストランＬＳ４ ＤＭＣＢと、０.２μＭ〜０.
２ｍＭを範囲とするＮａＰＡの濃度(重量で表わすと０.３３μｇから０.３３ｍ
ｇのＮａＰＡの濃度に相当する)との組合せは、ＭＣＦ-７腫瘍細胞の増殖を４０
〜５０％の間の阻害を得ることを可能にする（図１）。同じ阻害は、５ｍＭの遊
離ＮａＰＡの濃度で得られる。したがって、本発明による少なくとも一つのデキ
ストランと少なくとも一つの式(Ｉ)のフェニルアルキルカルボン酸塩の組合せは
、ＭＣＦ-７細胞増殖の阻害に対して相乗作用を示し、用いられるＮａＰＡの量
を少なくとも６倍減少することを可能にする。
【００５６】 ｄ）物質単独と複合物質の比較効果 比較試験を、コールター カウンターＺＭ(登録商標)による細胞勘定により行
う。 比較ｃ）とちょうど同じように、ＭＣＦ-７細胞増殖の阻害に対する複合物質
の効果は、使用される物質単独の効果よりはるかに大きい。 ＮａＰＡＣ ＭＦ６で置換度０.８のものは、物質のｍｇ当たりＮａＰＡを２.
２７ｍＭ含有する。ＮａＰＡＣ ＭＦ６の最大効果は２５０μｇ／ｍｌの濃度で
観察される。これは遊離ＮａＰＡの０.５６ｍＭの当量濃度を表す。 ＮａＰＡ単位で、この阻害は５０ｍＭの濃度で得られる。
【００５７】 同一結果がＮａＰＡＣ ＭＦ３およびＮａＰＡＣ ＭＦ８で得られた。 結果として、この発明により少なくとも一つの式(ＩＩ)のデキストランと、少
なくとも一つの式(Ｉ)のフェニルアルキルカルボン酸誘導体の複合化は、ＭＣＦ
-７細胞増殖の阻害に対して相乗効果を与え、ＭＦ-７細胞増殖を有意に阻害する
ために必要とされるＮａＰＡの濃度を少なくとも１０倍減少させることが可能と
なる。
【００５８】実施例１７：ＭＣＦ-７ｒａｓ細胞増殖の阻害に対する、式(ＩＩ)のデキストラ
ンと式(Ｉ')のフェニルカルボン酸塩との間の相乗作用のインビトロでの実証
Ｉ）材料と方法 １ 非ホルモン依存性ヒト乳癌細胞モデル Ｈａ-ｒａｓ癌遺伝子を移入したＭＣＦ-７細胞を、ＦＣＦ１０％、Ｌ-グルタ
ミン２ｍＭ、ピルビン酸ナトリウム１ｍＭ、ペニシリン５０単位／mlおよびスト
レプトマイシン５０μｇ／mlを補充したＤＭＥＭ培地中、３７℃の温度で、ＣＯ2 ５％を含有する湿気のある雰囲気中で培養した。
【００５９】２．ＭＴＴ増殖アッセイ 上記実施例１７に記載のものと同じ条件下に、９６-ウェルのマイクロプレー
ト中で行った。
【００６０】３．ＤＮＡ分析 ＤＮＡ合成を研究するため、ＭＣＦ-７ｒａｓ細胞を、[Ｈ3]-チミジン(比放射
能８２Ｃｉ／mmol；英国アマシャム ライフ サイエンス インク)１μＣｉまたは
ブロモデオキシウリジン(ＢｒｄＵ；フランス ベーリンガー)１０μＣｉと共に
、ＣＯ2を５％含有する湿気のある雰囲気中、６時間培養して標識した。[Ｈ3]-
チミジンと共に培養した細胞を、スカトロン半自動採取システム(スカトロン；
ノルウェー、リャー)を用いて採取した。ガラス繊維ろ紙で濾過後、取り込まれ
た放射能を測定した。細胞を固定し、ＢｒｄＵ-標識ＤＮＡを変性後、抗Ｂｒｄ
Ｕ-ＰＯＤ血清(フランス、ベーリンガー)１００μｌ／ウェルを加えた。プレー
トを３０分間インキュベートした。ＢｒｄＵ／抗-ＢｒｄＵ-ＰＯＤ複合体をエラ
イザータイプの反応により検出し、反応生成物をマイクロプレートリーダー(フ
ランス、バイオラッド)を用いて４９０nmにおいて吸光度を測定することにより
定量する。エライザーアッセイの結果は、[Ｈ3]-チミジン取り込みアッセイで得
られる値と相関している。
【００６１】４．調整実験培地 細胞増殖因子の作用阻害について試験した物質の作用を研究するためにこの培
地を使用する。 ＭＣＦ-７ｒａｓ細胞(５×１０6)を、ＦＣＳ１０％を補充したＤＭＥＭ培地中
、８０％密集に達するまで培養し、ＰＢＳバッファーで２回洗浄し、次いでＤＭ
ＥＭ培地中３７℃で２４時間培養した。次いで、ＭＣＦ-７ｒａｓ細胞でこのよ
うに調整した培地(調整培地)を採取し、遠心分離し、次いで使用前に-８０℃で
貯蔵した。 ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３線維芽細胞(１０5細胞)を、２４-ウェルプレート(フラン
ス、ポリラボ)中、ＦＣＳ１０％を補充したＤＭＥＭ中での培養に付し、密集ま
で培養し、ＤＭＥＭで２回洗浄し、ＢＳＡ(ミズーリ、セントルイス、シグマ)０
.１％含有の血清がないＤＭＥＭ培地中で２４時間培養した。 この処理の後に、細胞は静止状態であった。次いで、種々の濃度で試験すべき
物質(ＮａＰＡおよびＬＳ４ ＤＭＣＢ)の存在下または非存在下に、ＭＣＦ-７ｒ
ａｓ細胞で調整した培地０.７５ml／ウェルとＤＭＥＭ０.２５ml／ウェルとの混
合物で培地を置き換えた。４８時間の処理後に、細胞を細胞カウンター(コール
ター)を用いて数えた。
【００６２】５．細胞周期分析 細胞周期を分析するため、細胞を、ＦＣＳ２％を補充したＤＭＥＭ培地中、ウ
ェル当たり５×１０4細胞／mlの割合でプレートに接種した。２４時間培養後、
試験した種々の物質を加えた。 ７２時間後に、ＭＣＦ-７ｒａｓ細胞を、ＢｒｄＵの存在下に４時間培養した
。次いで細胞を、ＰＢＳバッファーで洗浄し、７０％エタノールで固定した。細
胞内に取り込まれたＢｒｄＵは、イソチオシアン酸フルオレセイン(ベーリンガ
ー マンハイム)に複合した抗-ＢｒｄＵで明らかになる。次いで細胞を遠心分離
し、ヨウ化プロピジウム(ベーリンガー マンハイム)５０μｌ／ml含有の染色液
中に１０分間再懸濁した。次いで染色細胞を、ＦＡＣＳｃａｎ(コールター)で分
析する。
【００６３】６．アポプトーシスの評価 ゆっくり時間をかけて数回、細胞の生存率をトリパンブルー排除により測定し
た。同じ細胞を遠心分離し、アネキシンバッファー(ベーリンガー マンハイム)
で洗浄した。ホスファチジルセリンの転流(translocation)を、ＦＩＴＣ標識ア
ネキシンＶで測定し、ヨウ化プロピジウムでの処理後に細胞をＦＡＣＳｃａｎ(
コールター)を用いて分析した。
【００６４】７．試験した物質 この例では、以下の物質を、単独でまたは組合せて種々の濃度で、７２時間培
養後にＭＣＦ-７ｒａｓ細胞増殖について研究した。 − セラテック社より販売されているＮａＰＡを蒸留水に溶解した。 − デキストラン誘導体ＬＳ４ ＤＭＣＢ、ＤＭＣＢ７およびＬＳ１７。 ＤＭＣＢ７の構造は、R. Bagheri-Yarmandら、1994、In Vitro Cell. Dev. Bi
ol. 30A, 8822-8824に記載されている。
【００６５】（ＩＩ）結果 得られた結果は、７２時間の処理後、単独使用したＮａＰＡが使用した用量の
関数としてＭＣＦ-７ｒａｓ細胞増殖を阻害する(３０および４０ｍＭにおいて７
０％阻害)ことを示す。デキストランＬＳ４ ＤＭＣＢは、使用した用量の関数と
して殆ど差なくＭＣＦ-７ｒａｓ細胞増殖を阻害し、最大阻害(３５％)は１８.５
ｍＭの用量で起こる。デキストランＤＭＣＢ７は、７ｍＭの濃度で６０％阻害を
有し、使用した用量の関数としてＭＣＭ-７ｒａｓ細胞増殖を阻害する。ただし
、デキストランＬＳ４ ＤＭＣＢは、４ｍＭより少ない用量で、腫瘍細胞増殖に
対してＤＭＣＢ７より、より効果的である。
【００６６】 デキストランＬＳ４ ＤＭＣＢまたはデキストランＤＭＣＢ７と、ＮａＰＡと
の組合せは、単独で用いた各物質に対する線量-効果曲線を用いて分析した(下記
の表２、３および４を参照)。デキストランＤＭＣＢ７の用量を増加させ、単独
またはＮａＰＡ５ｍＭの一定用量との組合せで試験した(下記の表２を参照)。デ
キストランＬＳ４ ＤＭＣＢの用量を増加させ、単独またはＮａＰＡの増量と組
合せて試験した(下記の表３を参照)。 デキストランＬＳ１７を用いて同じ実験を行い、結果を下記の表４に示す。 阻害百分率Ｉを上記実施例１７に記載のように算出した。
【００６７】 デキストランＤＭＣＢ７、ＬＳ４ ＤＭＣＢまたはＬＳ１７とＮａＰＡとの間
の相乗効果は、次のイソボリック方程式(T. Mosmann, J. Immunol. Methods, 19
83, 65, 55-63)を用いて算出した。 Ｄ＝Ａc／Ａe＋Ｂc／Ｂe ［式中、ＡcおよびＢcは、組合せに用いたデキストラン誘導体とＮａＰＡの濃度
にそれぞれ対応し、ＡeとＢeは単独で用いられ同じ降下を引き起こすこれら２つ
の化合物のそれぞれの濃度に対応し；Ｄは組合せ値であり、Ｄｍは平均組合せ値
である］ ＤまたはＤｍが１より少ないとき、２つの物質の組合せは、相乗効果を有する。
ＤまたはＤｍ＝１または１より大きいとき、２つの物質の組合せは、相加効果ま
たは拮抗効果をそれぞれ有する。
【００６８】 単独で用いたデキストラン誘導体(Ａe)をＮａＰＡと組合せて使用したときに
得られる阻害パーセントに近い阻害パーセントを得ることを可能にする単独で用
いたデキストラン誘導体の濃度(Ａe)が非常に高く、したがって正確に測定でき
ないようなとき、Ａc／Ａe比は０になり、結果的にＤ＝Ｂc／Ｂeになる。そのよ
うなデキストラン誘導体の濃度(Ａe)は、表２、３および４に示されており、Ａc に対しての濃度よりとても大きい。 スチューデントｔ-検定を用いて、効果に対する付加組合せ値(Ｄ＝１)と比較
した組合せ値(ＤまたはＤｍ)の統計的有意性(Ｐ)を算出できるようにするために
、各実験は３回繰り返した。
【００６９】
【表２】
【００７０】
【表３】
【００７１】
【表４】
【００７２】 表２に示した結果は、ＮａＰＡ５ｍＭと１より高いＤＭＣＢ７の濃度で、細胞
増殖阻害(７０％阻害)に対する組合せの相乗作用を示す。１ｍＭより低いＤＭＣ
Ｂ７の濃度では、付加効果を引き起こす。 表３に示した結果は、細胞増殖の阻止に対するＬＳ４ ＤＭＣＢ(３.７〜１８.
５ｍＭ)と組合せたＮａＰＡ(０.７５ｍＭ〜４ｍＭ)の相乗作用を示す。この相乗
作用は、４ｍＭのＩＣ50(５０％阻害を引き起こす最小濃度)を得ることを可能と
し、そのためこのＩＣ50はＮａＰＡを単独で用いたときより５倍高い。 表４に示した結果は、ＬＳ１７とＮａＰＡとの間の相乗作用が、３および１ｍ
Ｍのそれぞれの濃度で実証されることを示す。 結果的に、少なくとも一つの式(Ｉ')のフェニルアルキルカルボン酸塩と少な
くとも一つのデキストランとの組合せは、腫瘍細胞増殖阻害に対して相乗効果を
発揮する。
【００７３】 細胞周期の種々の期におけるＮａＰＡ単独(１０ｍＭ)、デキストランＬＳ４
ＤＭＣＢ単独(１８.５ｍＭ)およびそれらの組合せ(ＮａＰＡ：１０ｍＭ；ＬＳ４
ＤＭＣＢ：１８.５ｍＭ)で処理したＭＣＦ-７ｒａｓ細胞の分布の分析を４８時
間処理後に行った。 結果を図２に示す。 これらの結果は、ＮａＰＡでの処理は、ＤＮＡ複製のブロックに随伴してＧ0
／Ｇ1期(Ｇ0：休止期；Ｇ：細胞分裂間期)の細胞の阻止を誘引することを示す。
デキストランＬＳ４ ＤＭＣＢとＮａＰＡを組合せたときは、ＤＮＡ複製の阻害
とＧ0／Ｇ1期の細胞の分布が増加する。そのため、少なくとも一つのデキストラ
ンと少なくとも一つの式(Ｉ')のフェニルカルボン酸塩の組合せは、Ｇ0／Ｇ1期
におけるＭＣＦ-７ｒａｓ細胞を阻止することを可能とし、したがって単独で使
用した物質の各々の静菌効果を強化する。
【００７４】 アポプトーシスに関して、ＮａＰＡは単独でまたはタモキシフェンとの組合せ
で、アポプトーシスを誘引することが知られている(Adamら、Cancer Res., 1997
, 57, 1023-1029)。 この発明の内容において、ＮａＰＡ５ｍＭとＤＭＣＢ７またはＬＳ４ ＤＭＣ
Ｂとの組合せは、別々に用いた物質より、ＭＣＦ-７ｒａｓ細胞のより大きなア
ポプトーシスを誘引することが観察された。
【００７５】実施例１８：非ホルモン依存性乳癌(ＭＣＦ-７ｒａｓ細胞)に対する、式(ＩＩ)
のデキストランと組合せた式(Ｉ')のフェニルアルキルカルボン酸塩のインビボ
での抗腫瘍効果の研究 セラテック(Seratec)社より販売されているＮａＰａを蒸留水に溶解した。 この実施例では、前記のごときデキストラン誘導体ＬＳ４ ＤＭＣＢを用いた
。 ハーラン(Harlan)研究所(Gannat, France)の３週令の雌無胸腺マウス５０匹を
、温度調節した部屋で飼い、それぞれ１２時間毎の明／暗の周期に付した。 マウスには水と食糧を与えた。 上記実施例１７に記載のように、ＭＣＦ-７ｒａｓ腫瘍系の細胞を、ＦＣＳ１
０％を補充したＤＭＥＭ培地中、８０％の集密に達するまで培養した。遠心分離
後に、ＦＣＳ１０％を補充したＤＭＥＭ中に細胞を再懸濁した。 次いで、各マウスに、動物当たり５×１０6細胞の割合で、乳腺の近傍に、上
記の細胞を皮下に接種した。 接種３週間後に、感染したマウスの７０％が触知可能な皮下腫瘍を示した。
【００７６】 腫瘍の体積(Ｖ)を次の方法で算出した： Ｖ＝(４／３)π(ｒ1)2(ｒ2)； （ｒ1は腫瘍の最小半径；ｒ2は腫瘍の最大半径を表す） 腫瘍の接種後４週間で、腫瘍の平均体積は約１０ｍｍ3であった。 接種後４週で、食塩０.１ml中で調製したＮａＰＡ(４０mg／kg)、またはデキ
ストランＬＳ４ ＤＭＣＢ(１５０mg／kg)、またはＮａＰＡ(４０mg／kg)とデキ
ストランＬＳ４ ＤＭＣＢ(１５０mg／kg)との組合せの溶液を１週間に２回、Ｎ
ａＰＡ単独とＬＳ４ ＤＭＣＢ単独については７週間、マウスに注射した。Ｎａ
ＰＡとデキストランＬＳ４ ＤＭＣＢとの組合せの注射は、６週間で停止した。 各試験溶液について、当初接種した５０匹のマウス中、ランダムに１０匹のマ
ウスを処置に付した。
【００７７】 同じ期間中、１０匹のマウスのグループに、０.１mlの食塩を注射して、対照
グループとした。 各腫瘍の体積を週１回測定した。 図３に、９５％信頼区間での平均の型で示す。 各種の統計比較を、多変量線形モデルにおける、アノーバ(ANOVA)およびマン-
ホイットニー(Mann-Whitney)検定法を用いて行った。 得られた結果を図３に示し、そこでは、mm3での腫瘍体積を週での時間関数と
して示し、黒い四角は対照マウスグループでの結果に対応し、白い四角はＮａＰ
Ａ単独投与のマウスのグループで得た結果に対応し、三角はデキストランＬＳ４
ＤＭＣＢ単独で投与したマウスのグループで得た結果に対応し、アスターリス
クはＮａＰＡとデキストランＬＳ４との混合物投与のマウスグループで得た結果
に対応する。
【００７８】 処置７週後に、ＮａＰＡの注射が腫瘍細胞増殖を５９％(ｐ＝０.０４９)阻害
したことを観察する。 処置４週後に、デキストランＬＳ４ ＤＭＣＢの注射は、腫瘍細胞増殖を３８
％(ｐ＝０.００８４)阻害したが；７週後に再び細胞の増殖を始めた(ｐ＞０.０
５)。 ＮａＰＡとデキストランＬＳ４ ＤＭＣＢとの組合せを含有する溶液の注射は
腫瘍細胞発育を８３％阻害し、細胞増殖の再開は観察されなかった(ｐ＝０.０４
６)。 これらの物質の明白な毒性は処置期間中、観察されなかった。
【００７９】 これらの結果の全ては、式(Ｉ)の少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン
酸塩と式(ＩＩ)の少なくとも一つのデキストラン誘導体の組合せが、相乗作用を
奏し、腫瘍細胞増殖をかなり減少させ得ることを示し、この減少は別々に用いた
物質の各々で観察された腫瘍細胞増殖の減少より明らかに大である。これらのイ
ンビボの結果は、インビトロで観察された細胞増殖の阻害に対する相乗作用を確
認するものである。
【００８０】実施例１９：非ホルモン依存性胸部腫瘍(ＭＣＦ-７ｒａｓ細胞)に対する、式(Ｉ Ｉ)のデキストランに複合した式(Ｉ)のフェニルアルキルカルボン酸塩のインビ
ボでの抗腫瘍効果の研究 この実施例では、前記の実施例１で合成した式(ＩＩＩ)の複合化合物を用いた
(ＬＳ１７-ＮａＰＡＣ)。 ２つの異なった用量のＬＳ１７-ＮａＰＡＣを実施例１８に記載のプロトコー
ルに従って、雌の無胸腺マウスで試験した。 マウスを１５mg／kgの用量のＬＳ１７-ＮａＰＡＣで処置し、明らかな毒性は
観察されなかった。得られた結果を図４に示す。そこでは、黒い四角は処置をし
ない対照マウスのグループで得られた結果、丸は１５mg／kgの用量のＬＳ１７-
ＮａＰＡＣで処置したマウスのグループで得られた結果を表す。
【００８１】 これらの結果は、１５mg／kgの用量でのＬＳ１７-ＮａＰＡＣは４０mg／kgの
用量で単独で用いたＮａＰＡと同様に(上の実施例１８参照)、処置６週後にＭＣ
Ｆ-７ｒａｓ腫瘍発育を５７％阻害する(ｐ＝０.００６９)ことを示し、一方、単
独で使用したデキストランＬＳ１７は、ＭＣＦ７ｒａｓ細胞増殖にインビトロで
効果を有さない。これらの結果は、複合形態で用いた化合物の有効用量が、組合
せ形態で用いた化合物のものより低いことを示し、結果として、式(ＩＩＩ)の複
合化合物の場合より相乗作用が著しいことを示す。
【００８２】実施例２０：ヒトメラノーマ(１２０５ＬＵ細胞)に対する等価濃度におけるＬＳ １７-ＮａＰＡＣおよびＮａＰＡ単独の抗腫瘍効果のインビボでの比較研究 上記の実施例１７に記載のプロトコールに従って、１２０５ＬＵヒトメラノー
マ細胞を、動物当たり１０6細胞の割合で、１４匹の雌無胸腺ラットのグループ
に皮下接種した。接種４日後に、感染マウスの１００％が感知可能な皮下腫瘍を
示した。 ５週間、週に２回の割合で、４匹のマウスの第１グループに対照グループとし
て１００μｌの食塩を注射し、４匹のマウスの第２グループには、６０mg／kg／
１００μｌの用量でＬＳ１７-ＮａＰＡＣを注射し、６匹マウスの第３グループ
には、６.９mg／kg／１００μｌの用量でＮａＰＡを注射した。 ＬＳ１７-ＮａＰＡＣの６０mg／kg／１００μｌの用量が、ＮａＰＡの６.９mg
／kg／１００μｌを含むことに注目することは重要である。 最初の注射前、次いで５週間の処置の間に週に１回、各腫瘍の体積を測定した
。これを実施例１７に定義の方程式に従って算出した。
【００８３】 ノンパラメトリック検定に付した結果を図５に示す。ＮａＰＡ単独使用は、腫
瘍成育に対する有意な効果を有するように見えないことは注目し得る。一方、６
０mg／kgの用量で用いたＬＳ１７-ＮａＰＡＣは、ＮａＰＡに比較すると腫瘍の
成育を阻害する(ｐ＝０.００１)。 結果として、ＬＳ１７-ＤＭＣＢとのＮａＰＡの複合化は、１２０５ＬＵメラ
ノーマ細胞から得られた腫瘍の体積の減少に対して等価濃度で、単独で用いたＮ
ａＰＡより有効である。
【００８４】 さらに、処置の終わりに、腫瘍の各々の塊を測定するためにマウスを犠牲にし
た。得られた結果は、未処置マウス(対象グループ)から採取した腫瘍の大きさを
表す曲線と、６.９ｍ／kgの用量でのＮａＰＡ単独または６０mg／kgの用量での
ＬＳ１７-ＮａＰＡＣで処置したマウスから採取した腫瘍の大きさを表す曲線が
、上記で得られた結果を確認していることを示す。未処置マウスから採取した腫
瘍の大きさとＮａＰＡ単独処置のマウスから採取した腫瘍の大きさとの間に有意
な差はない。したがって、６.９mg／kgの用量でのＮａＰＡ単独の処置は有意性
がないと見られ、６０mg／kgの等価用量でのＬＳ１７-ＮａＰＡＣ(ｐ＜０.００
５)と反対である。
【００８５】実施例２１：等価濃度でのＬＳ１７-ＮａＰＡＣ、ＬＳ１７-ＤＭＣＢ単独および ＮａＰＡ単独の抗脈管形成活性のインビトロ研究(ＨＵＶＥＣ細胞) 一方でＮａＰＡが、他方で官能化デキストラン(ＣＭＤＢ７)が抗脈管形成、抗
侵襲性および抗転移活性をインビトロとインビボで有することが、以前に示され
ている(Adamら、Cancer Re., 1997, 57, 1023-1029；Bagheriら、Cancer Res. 1
999, 59, 507-510)。 不死化健全内皮細胞(ＨＵＶＥＣ)を９６ウェルのマイクロプレート(ＣＯＳＴ
ＡＲ(登録商標))中に、ウェル当たりかつＦＣＳ２％を補充したＤＭＥＭ培地１
００μｌ当たり、１００００細胞の割合で接種した。標準範囲を作った後に、細
胞数を測定した。
【００８６】 ２４時間培養後に、ＦＣＳ２％含有のＤＭＥＭ培地中で調製した試験すべき物
質の各種濃度でＨＵＶＥＣ細胞を培養した。細胞数を測定するために、物質を加
えた時点での吸光度を測定し、標準範囲と比較した。 ７２時間培養後に、細胞上澄液を除去し、カルシウムとマグネシウムを含有す
るＰＢＳバッファーで１回洗浄する。次いで、ＭＴＴの溶液１００μｌを加え、
細胞を４時間培養した。培養４時間後に、ＭＴＴを除去し、生成した結晶をＤＭ
ＳＯに１０分間撹拌して溶解した。吸光度を５７０nmで測定する。 試験したＬＳ１７-ＮａＰＡＣの１０μｇ／ml濃度を、ＮａＰＡ単独の１.３２
１６μｇ／mlの濃度またはＬＳ１７-ＤＭＣＢ単独の８.７μｇ／ｍの濃度と比較
する。 これらの結果は、単独でテストしたＮａＰＡとＬＳ１７-ＤＭＣＢは、ＨＵＶ
ＥＣ細胞増殖への阻害効果を示すと見られないことを示す。
【００８７】 一方、ＬＳ１７-ＮａＰＡＣは処置７２時間後に用量依存でこれらの細胞の増
殖を阻害する。５０％の阻害が、６０５μｇ／mlのオーダーの濃度で観察される
。 結果として、ｌｓ１７-ＮａＰＡＣは、ＨＵＶＥＣ内皮細胞の増殖を阻害する
。そのため、ＬＳ１７-ＮａＰＡＣは、腫瘍血管分布を減少(抗脈管形成活性)さ
せるため、内皮細胞の増殖を阻止するのに使用できると推測される。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、ＭＣＦ-７細胞増殖に対する、物質単独と組合せた物質との比較抑制
効果を表す。
【図２】 図２は、細胞サイクルの３つのフェーズ(Ｇ0/Ｇ1/ＳおよびＧ2/Ｍ)内でのＭＣ
Ｆ-７ｒａｓ細胞の分布に対する、ＬＳ４ ＤＭＣＢとの組合せにおけるＮａＰａ
の効果を示す。
【図３】 図３は、胸腺欠損マウスにおけるＭＣＦ-７ｒａｓ細胞の接種により誘発した
腫瘍の体積の減少に対する、物質単独と物質組合せとの比較効果を表す。
【図４】 図４は、胸腺欠損マウスにおけるＭＣＦ-７ｒａｓ細胞の接種により誘発した
腫瘍の体積の減少に対する、式(ＩＩＩ)の複合化合物(ＮａＰＡＣ)の効果を表す
。
【図５】 図５は、胸腺欠損マウスにおける１２０５ＬＵ細胞の接種により誘発した腫瘍
の体積の減少に対する、ＮａＰＡ単独およびＬＳ１７-ＮａＰＡＣの効果を示す
。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１４年３月６日（２００２．３．６）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 バグリ，ロジータ アメリカ合衆国、テキサス 77025、ヒュ ーストン、ブレイズウッド♯218、4055 エス (72)発明者 ショベ，フレデリク フランス、エフ−95600 オボンヌ リュ デュ ボワ ジャック、エスカリエ セ、４ (72)発明者 クレパン，ミシェル フランス、エフ−75013 パリ リュ レ グノ、60 (72)発明者 ダリコレイア，ラティファ フランス、エフ−59230 サン タマン レ ゾ、ルート ド リール、1184 (72)発明者 ディブヌデット，メラニ フランス、エフ−93220 ガニ、リュ コ ンタン 、39 (72)発明者 ジェルヴラ，クローディア フランス、エフ−75019 パリ、リュ ド モ、63 (72)発明者 ユアン，レミ フランス、エフ−59230 サン タマン レ ゾ、アヴェニュ デ ププリエ、レジ ダンス レ パロンブ、アパルトマン 86 (72)発明者 ジョズフォンヴィツ，ジャクリーヌ フランス、エフ−60260 ラモルレ、ドゥ ジェーム アヴェニュ、65 Ｆターム(参考） 4C076 BB01 BB13 BB16 CC27 EE30A EE59A FF67

Claims (16)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 有効成分として、： ａ) 少なくとも一つの遊離ヒドロキシ官能基を含むポリマーと、次の式(Ｉ)： Ｒ2-(ＣＨ2)n-ＣＯＯＲ1 (Ｉ) ［式中、 − Ｒ1は水素原子、ハロゲン原子、ナトリウムもしくはカリウムのような１価
    のアルカリ金属原子、または基-ＣＯ(ＣＨ2)mＲ3を表し、 − Ｒ2およびＲ3は無置換のフェニル基を表し、 − ｎおよびｍは同一であり、１〜３の整数である］ の少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸誘導体との複合体であって、次
    の式(ＩＩＩ)： (ポリマー)-(ＯＯＣ-(ＣＨ2)n-Ｒ2)d (ＩＩＩ) ［式中、ポリマーは少なくとも一つの遊離ヒドロキシ官能基を含み、ｎは１〜３
    の整数であり、Ｒ2は無置換のフェニル基を表し、ｄは式(Ｉ)の誘導体の置換イ
    ンデックス(ｄｓ)であって、≧ ０.０５でかつ≦ １.５であり、好ましくは＞
    ０.１５である］ に対応する複合体； ｂ) ５０００Ｄａ以上の分子量を有し、かつ少なくとも一つの遊離ヒドロキ
    シ官能基を含む少なくとも一つのポリマーと、次の式(Ｉ')： Ｒ'2-(ＣＨ2)n'-ＣＯＯＲ'1 (Ｉ') ［式中、 − Ｒ'1はナトリウムもしくはカリウムのような１価のアルカリ金属原子であり
    、 − Ｒ'2は無置換のフェニル基を表し、 − ｎ'は１〜３の整数である] の少なくとも一つのフェニルアルキルカルボン酸塩との組合せ； ｃ) およびそれらの混合物、 からなる群から選択される少なくとも一つの組成物、ならびに任意の一以上のそ
    の他の補足的な有効成分を、医薬的に許容される賦形剤および/または生理学的
    に許容される担体の存在下もしくは非存在下に含むことを特徴とする医薬組成物
    。
  2. 【請求項２】 ポリマーが、天然物または合成物であり、遊離ヒドロキシ官
    能基が、カルボキシ、アルキルカルボキシ、アリールアルキルカルボキシ、Ｎ-
    ベンジルエチレンカルボキシアミド、サルフェートおよびスルホネート基から選
    択される一以上の化学的官能基で、任意に官能化されていてもよいことを特徴と
    する、請求項１に記載の医薬組成物。
  3. 【請求項３】 ポリマーがポリオール類およびポリサッカライド類から選択
    されることを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬組成物。
  4. 【請求項４】 ポリサッカライドが、澱粉、グリコーゲン、セルロース類、
    デキストラン類、ポリ-β-１,３-グルカン類およびキチンのようなグルコサン類
    ；アラバン類；キシラン類ならびにペクチン類から選択されることを特徴とする
    、請求項３に記載の医薬組成物。
  5. 【請求項５】 官能化された合成デキストランが、次の式(ＩＩ)： ＤＭＣaＢbＳｕC (ＩＩ) ［式中、 − Ｄは、好ましくはグルコサイド単位の配列を含むポリサッカライド鎖を表し
    、 − ＭＣはメチルカルボキシ基を表し、 − ＢはＮ-ベンジルメチレンカルボキシアミド基を表し、 − Ｓｕはサルフェート基(グルコサイド単位を有する遊離ヒドロキシ官能基の
    硫酸化)を表し、 − ａ、ｂおよびｃは、それぞれ基ＭＣ、ＢおよびＳｕの置換度(ｄｓ)を表し； ａは０に等しいかまたは≦ ２であり； ｂは０に等しいかまたは≦ １であり； ｃは０に等しいかまた≦ １であり、そして；ａ + ｂ + ｃの和は≦ ３である
    と解される］ のデキストラン誘導体から選択されることを特徴とする、請求項４に記載の医薬
    組成物。
  6. 【請求項６】 式(ＩＩ)のデキストランが、０.５ ≦ ａ ≧ １.５； ０.１
    ≦ ｂ ≧ １；および０ ≦ ｃ ≧ ０.６であるものから選択されることを特徴と
    する、請求項５に記載の医薬組成物。
  7. 【請求項７】 式(Ｉ')のフェニルアルキルカルボン酸塩が、フェニル酢酸
    ナトリウム、フェニル酢酸カリウム、フェニルプロピオン酸ナトリウム、フェニ
    ルプロピオン酸カリウム、フェニル酪酸ナトリウムおよびフェニル酪酸カリウム
    から選択されることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一つに記載の医薬組
    成物。
  8. 【請求項８】 ポリマーと、式(Ｉ')のフェニルアルキルカルボン酸塩との
    濃度比が、１０：１〜１：1の間にあることを特徴とする、請求項１〜７のいず
    れか一つに記載の医薬組成物。
  9. 【請求項９】 次の式(ＩＩＩａ)： (ＤＭＣaＢbＳｕc)-(ＯＯＣ-(ＣＨ2)n-Ｒ2)d (ＩＩＩａ) ［式中、Ｄ；ＭＣ；Ｃ；Ｂ；Ｓｕ；Ｒ2； ａ、ｂ、およびｃは請求項１および５
    に記載のものと同じ意味を有し、ｄは請求項１に記載のものと同じ意味を有し、 ａ + ｂ + ｃ + ｄの和は３以下である］ の少なくとも一つの複合体を含むことを特徴とする、請求項１〜８のいずれか一
    つに記載の医薬組成物。
  10. 【請求項１０】 式(ＩＩＩａ)の複合化合物が、ａ ＞ ０.５； ｂ ＞ ０.
    １５； ｃ = ０または＜ ０.８およびｄ ＜ １.５のものから選択されることを
    特徴とする、請求項９に記載の医薬組成物。
  11. 【請求項１１】 次の生物学的活性： 増殖抑制、細胞増殖抑制、壊死性、
    プロアポトティック、抗脈管形成、抗転移および分裂促進因子阻害活性を有する
    ことを特徴とする、請求項１〜１０のいずれか一つに記載の組成物。
  12. 【請求項１２】 全身投与を意図していることを特徴とする、請求項１〜１
    １のいずれか一つに記載の組成物。
  13. 【請求項１３】 １週間に２回の割合で、1日当たり０.１ｍｇ/ｋｇ〜1日当
    たり２００ｍｇ/ｋｇの範囲の量での投与を意図していることを特徴とする、請
    求項１２に記載の組成物。
  14. 【請求項１４】 次の式(ＩＩＩ)： (ポリマー)-(ＯＯＣ-(ＣＨ2)n-Ｒ2)d (ＩＩＩ) ［式中、天然または合成の、そして任意に官能化されていてもよいポリマーが、
    少なくとも一つの遊離ヒドロキシ官能基を含み、ｎ、Ｒ2およびｄが請求項１に
    記載のものと同じ意味を有する］ の複合化合物。
  15. 【請求項１５】 次の式(ＩＩＩａ)： (ＤＭＣaＢbＳｕc)-(ＯＯＣ-(ＣＨ2)n-Ｒ2)d (ＩＩＩａ) ［式中、Ｄ；ＭＣ；Ｃ；Ｂ；Ｓｕ；Ｒ2； ａ、ｂ、およびｃは請求項９に記載の
    ものと同じ意味を有し、ｄは請求項１に記載のものと同じ意味を有し、ａ + ｂ
    + ｃ + ｄの和は３以下である］ に相当することを特徴とする、請求項１４に記載の複合化合物。
  16. 【請求項１６】 ａ ＞ ０.５； ｂ ＞ ０.１５； ｃ = ０または＜ ０.８
    およびｄ ＜ １.５であるものから選択されることを特徴とする、請求項１５に
    記載の複合化合物。
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