JP2003532409A - 樹状細胞に対するヒトモノクローナル抗体 - Google Patents

樹状細胞に対するヒトモノクローナル抗体

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Abstract

(57)【要約】 樹状細胞に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体及びその抗原結合部分を開示する。さらに、前記抗体又は抗体部分を含む二重特異体、イムノトキシン及び抗原共役体も開示する。本ヒト抗体は、V-D-J組換え及びアイソタイプ・スイッチングを起こすことにより、複数のアイソタイプのヒトモノクローナル抗体を産生できるトランスジェニックマウスなどの非ヒトトランスジェニック動物に生産させることができる。またさらに、本ヒト抗体を含んで成る医薬組成物、本ヒト抗体を生産する非ヒトトランスジェニック動物及びハイブリドーマ、並びに、本ヒト抗体を利用する治療法及び診断法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 発明の背景 樹状細胞は免疫系の特化細胞であり、一次及び二次Ｔ及びＢリンパ球応答を開
始するという固有の能力を持つ。樹状細胞は専門的な抗原提示細胞（APC）とも
特徴付けられ、ＭＨＣや、抗原刺激を受ける前のＴリンパ球に刺激を与えるのに
重要な共刺激分子を発現する。樹状細胞の持つこのような固有の性質は「天然の
佐剤」とも呼ばれ、自己免疫疾患でのその役割や、多種の疾患の免疫治療でのそ
の活用に、大きな関心が持たれてきた。
【０００２】 樹状細胞の培養法が近年、大きく進歩したことから、この複雑な種類の細胞の
我々の理解が大きく向上した。樹状細胞には、細胞系譜、組織内での位置、表現
型、及び機能で区別されるいくつかの種類がある。免疫応答の開始においてＴリ
ンパ球と最も関連性の高い樹状細胞の種類は骨髄細胞由来のものである。骨髄細
胞由来樹状細胞はさらに分かれて、１）リンパ系由来であり、成熟中のＴリンパ
球の削除に特に関与していると思われる胸腺樹状細胞、２）骨髄細胞系譜であり
、皮膚で特殊なＡＰＣ機能を有するランゲルハンス細胞、及び３）特に血液、脾
臓及びリンパ節で見られる骨髄細胞系譜由来樹状細胞、となる。
【０００３】 （ランゲルハンス細胞を含む）骨髄細胞系譜由来樹状細胞の特徴は以下の通り
である。１）抗原取り込み能力、及び提示に向けたプロセシング能力、２）組織
内での選択的移動能力、及び３）（抗原刺激を受ける前及び後の）Ｔリンパ球を
直接刺激する能力、である。
【０００４】 樹状細胞は近年、その特徴付けが進んだとはいえ、樹状細胞特異的受容体又は
分子については、ほとんど知られていない。他の骨髄系及び非骨髄系細胞とも共
有する樹状細胞関連分子は数多くあるが、樹状細胞に特異的な、利用できる試薬
は数が限られている。樹状細胞と特異的又は優先的に反応する試薬、特に抗体は
、腫瘍又は感染性疾患抗原に対する強力な免疫応答を誘導するターゲティング剤
として、可能性が大きい。さらに、このような細胞特異的ターゲティング剤を操
作すれば、骨髄及び臓器移植や他の自己免疫疾患で、強力なAPC（例えば樹状細
胞）が消失するよう、毒素を送達させることができるかも知れない。
【０００５】 従って、樹状細胞特異的結合剤は、治療上及び診断上、大きな価値を有するで
あろう。
【０００６】 発明の概要 本発明は、抗原提示細胞（APC）、特に樹状細胞に特異的に結合する単離され
たヒトモノクローナル抗体や、このような抗体を単独又は他の治療薬又は診断用
試薬と組み合わせて（混合又は連結させるなどして）含有する組成物を、提供す
るものである。従って、本発明の抗体及び組成物は、例えば抗原提示に影響を与
えたり、又はAPCが媒介する疾患を治療するなど、樹状細胞を標的とする多種の
治療に利用できる。
【０００７】 いくつかの実施例では、本ヒト抗体は、樹状細胞に対する高親和性結合を特徴
とし、さらに、定義された機能を持つ分子又は細胞（例えば腫瘍細胞、細菌、ウ
ィルス、エフェクター細胞）を樹状細胞に狙わせることで、樹状細胞の成長及び
／又は機能に影響を与える能力も、特徴とする。従って、本発明のヒトモノクロ
ーナル抗体は、インビボ及びインビトロで、診断薬又は治療薬として利用できる
。
【０００８】 他の実施例では、本ヒト抗体は、樹状細胞上の特定の新規なエピトープ（受容
体など）に結合することを特徴とする。さらに他の実施例では、本ヒト抗体は、
マクロファージマンノース受容体又は関連する受容体に結合することを特徴とす
る。
【０００９】 本発明の単離されたヒト抗体は、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2
、IgAsec、IgD、及びIgEなどの様々な抗体アイソタイプを包含するものである。
典型的には、これらには、IgG1（IgG1κなど）及びIgMアイソタイプが含まれる
。本抗体は完全長（IgG1又はIgG4 抗体など）であってもよく、又は抗原結合部
分（Fab、F(ab'）2、Fv又は一本鎖Fvフラグメントなど）のみが含まれていても
よい。ある実施例では、本ヒト抗体は組換えヒト抗体である。別の実施例では、
本ヒト抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有す
るトランスジェニックマウスなどの非ヒトトランスジェニック動物から得たＢ細
胞を不死化細胞に融合させて含有するハイブリドーマにより産生される。
【００１０】 本発明の具体的なヒト抗体には、ここでA3、A5、A23、A24、A33、B9、B11、B3
3、B47、C8、C10、C20、C28、C29、C30、C35、E1、E8、E10、E18、E20、E21 及
びE24と言及することとするハイブリドーマが産生したものがある。
【００１１】 別の実施例では、本発明のヒト抗体は、樹状細胞に特異的に結合することと、
以下の性質： ａ）少なくとも約107M-1、好ましくは約109M-1、そしてより好ましくは約1010 M-1乃至1011M-1又はそれ以上の結合親和定数； ｃ）少なくとも約103、より好ましくは約104、そして最も好ましくは約105M-1 S-1の結合定数（Kassoc）； ｄ）約10-3s-1、好ましくは約10-4s-1、より好ましくは10-5s-1、そして最も
好ましくは10-6s-1の解離定数（Kdis）； ｅ）樹状細胞をオプソニン化する能力； ｆ）樹状細胞に結合した後に内部移行する能力； ｇ）樹状細胞にインシツー（例えばヒト組織内など）で結合する能力； ｈ）樹状細胞を活性化する能力（例えばサイトカイン放出、免疫調節性表面分
子の発現を誘導する、など）；又は ｉ）約10μg/ml以下の濃度で（インビトロなどで）、ヒトエフェクター細胞の
存在下で、樹状細胞の成長を抑制する、及び／又は、樹状細胞のファゴサイトー
シス及び致死を媒介する、能力、 のうちの一つ以上を有することを、特徴とする。
【００１２】 実施例の一つでは、本発明の単離されたヒト抗体は、樹状細胞に、少なくとも
約107M-1、好ましくは約108M-1、より好ましくは約109M-1、そしてより好ましく
は約1010乃至1011M-1又はそれ以上強力な親和定数で結合する。
【００１３】 別の態様では、本発明は、本発明の抗体又は抗原結合部分をコードする核酸分
子を提供するものである。従って、本発明の抗体をコードする核酸を含有する組
換え発現ベクターや、このようなベクターでトランスフェクトしたホスト細胞、
さらにこれらのホスト細胞を培養することで本発明の抗体を作製する方法は、本
発明の包含するところである。
【００１４】 さらに別の態様では、本発明は、樹状細胞に特異的に結合するヒトモノクロー
ナル抗体の多様なアイソタイプ（例えばIgG、IgA及び／又はIgM）を発現するこ
とのできる、トランスジェニックマウスなどの非ヒトトランスジェニック動物由
来の単離されたＢ細胞を提供するものである。好ましくは、前記の単離されたＢ
細胞は、樹状細胞の精製もしくは濃縮標品で免疫化した、トランスジェニックマ
ウスなどの非ヒトトランスジェニック動物から得られるとよい。好ましくは、前
記のトランスジェニックマウスなどの非ヒトトランスジェニック動物が、ヒト重
鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するとよい。こうして、
この単離されたＢ細胞を不死化させて、樹状細胞に対するヒトモノクローナル抗
体の供給源（ハイブリドーマなど）とする。
【００１５】 従って、本発明はさらに、樹状細胞に特異的に結合するヒトモノクローナル抗
体を産生できるハイブリドーマも提供するものである。実施例の一つでは、本ハ
イブリドーマには、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを
有する、トランスジェニックマウスなどの非ヒトトランスジェニック動物を由来
とするＢ細胞を、不死化細胞に融合させたものが含まれる。非ヒトトランスジェ
ニック動物を、樹状細胞の精製もしくは濃縮標品で免疫化すれば、抗体産生性ハ
イブリドーマを作製することができる。本発明の具体的なハイブリドーマには、
A3、A5、A23、A24、A33、B9、B11、B33、B47、C8、C10、C20、C28、C29、C30、C
35、E1、E8、E10、E18、E20、E21 及びE24がある。
【００１６】 さらに別の態様では、本発明は、（ここでは「HuMab」と言及する）トランス
ジェニックマウスなど、樹状細胞に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を
発現する非ヒトトランスジェニック動物を提供するものである。ある具体的な実
施例では、本非ヒトトランスジェニック動物は、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽
鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニックマウスである。当該非ヒ
トトランスジェニック動物は、樹状細胞の精製もしくは濃縮標品で免疫化するこ
とができる。好ましくは、前記トランスジェニックマウスなどの本非ヒトトラン
スジェニック動物は、V-D-J組換え及びアイソタイプ・スイッチングを起こすこ
とにより、複数のアイソタイプ（例えばIgG、IgA及び／又はIgM）の抗樹状細胞
ヒトモノクローナル抗体を産生できるとよい。アイソタイプ・スイッチングは、
例えば古典的又は非古典的なアイソタイプ・スイッチングなどのいずれで起きて
もよい。
【００１７】 別の態様では、本発明は、樹状細胞に特異的に反応するヒトモノクローナル抗
体を生成する方法を提供するものである。ある実施例では、本方法は、ヒト重鎖
導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニック
マウスなどの非ヒトトランスジェニック動物を、樹状細胞の精製もしくは濃縮標
品で免疫化するステップを含む。次に、この動物のＢ細胞（例えば脾Ｂ細胞）を
得て骨髄腫細胞に融合させて、樹状細胞に対するヒトモノクローナル抗体を分泌
する不死のハイブリドーマ細胞を形成する。
【００１８】 本発明の単離された抗樹状細胞ヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分
を、誘導体化したり、又は、別のペプチド又はタンパク質（例えばFab'フラグメ
ント）などの別の機能的分子に連結してもよい。例えば、本発明の抗体又は抗原
結合部分を、一つ又は別の抗体（例えば二重特異的又は多重特異的抗体など）の
一種以上の他の分子物質に、（例えば化学結合、遺伝子融合、非共役結合又は他
の方法などにより）機能的に連結してもよい。従って、ある態様では、本発明は
、例えば細胞傷害性薬物、酵素活性のある毒素、又はその一フラグメント、放射
性同位体、又は、免疫調節性（例えば抗炎症性）化合物、又は抗癌剤などの小分
子などの治療的部分に共役させたヒト抗樹状細胞抗体又はその一フラグメントを
特徴とする。
【００１９】 さらに本発明のヒト抗樹状細胞抗体を抗原に連結すれば、樹状細胞にこの抗原
を狙わせてこの抗原を内部移行させ、プロセシング及び提示させることができる
。前記抗原は、例えば腫瘍細胞抗原、微生物抗原、ウィルス抗原又は自己抗原で
もよい。
【００２０】 さらに別の態様では、本発明は、抗原（例えば腫瘍細胞抗原、微生物抗原、又
はウィルス抗原）に対する被験体の免疫応答を誘導又は向上する方法を提供する
。本方法は、樹状細胞表面上の一成分に対する少なくとも一つの結合特異的部分
を、少なくとも一つの抗原に連結して含む分子複合体を、被験体に投与するステ
ップを含むが、このとき、前記樹状細胞表面上の前記一成分とは、結合特異的部
分で結合した分子複合体の内部移行を媒介するものである。ある実施例では、当
該免疫応答は、抗原に結合する抗体を含む。別の実施例では、当該免疫応答は、
MHC-I又はMHC-II複合体の一成分として抗原に結合するＴ細胞を含む。
【００２１】 ある態様では、免疫応答の誘導に向けて、細胞全体（例えば腫瘍細胞、エフェ
クター細胞など）又は病原体を樹状細胞に狙わせるために、本抗樹状細胞抗体又
はその一フラグメントを利用することができる。ある実施例では、本発明のヒト
抗樹状細胞抗体をコードする核酸分子で細胞をトランスフェクト又は形質導入し
て、当該抗樹状細胞抗体がこの細胞の表面上に発現するようにすることができる
。別の実施例では、本発明のヒト抗樹状細胞抗体を、ある細胞（例えば腫瘍細胞
、細菌又はウィルス）の細胞表面に、直接化学的に、又は、他の方法で架橋する
、繋ぎ止める又はタグ付けして、この細胞を樹状細胞が狙うようにすることもで
きる。
【００２２】 更なる態様では、本発明は、樹状細胞の表面上の一成分に対する少なくとも一
つの結合特異的部分を少なくとも一つの抗原に連結して含む分子複合体を有効量
、被験体に投与するステップを含む、被験体を免疫化する方法を提供するもので
あり、ただしこのとき前記樹状細胞の表面上の一成分は、前記結合特異的部分で
結合した分子複合体の内部移行を媒介するものである。
【００２３】 別の態様では、本発明は、樹状細胞に対する少なくとも一つの第一結合特異的
部分と、ヒトFcγRI又はヒトFcα受容体などのFc受容体に対する第二結合特異的
部分とを含む二重特異的又は多重特異的分子を特徴とする。別の態様では、本発
明は、樹状細胞に対する少なくとも一つの第一結合特異的部分と、標的細胞上の
抗原に対する第二結合特異的部分とを含む二重特異的又は多重特異的分子を特徴
とする。標的細胞とは、例えば腫瘍細胞、微生物病原体、又はウィルスや、ウィ
ルス感染細胞など、その消去がホストにとって有益であろうと思われる細胞であ
る。
【００２４】 さらに本発明の多重特異的分子には、三重特異的、四重特異的、及び他の多重
特異的分子が含まれる。ある実施例では、本多重特異的分子は、例えば細胞傷害
性活性に関与する表面たんぱくに結合する分子など、抗エンハンスメント因子（
EF）部分を含有する。
【００２５】 ある具体的な実施例では、本発明の二重特異的及び多重特異的分子は、少なく
とも一つの抗体又はそのフラグメント（例えばFab、Fab'、F(ab')2、Fv又は一本
鎖Fvなど）を含んで成る。ある具体的な実施例では、当該抗体又はそのフラグメ
ントは、完全ヒト抗体又はその一部分、又は「キメリック」もしくは「ヒト化」
抗体又はその一部分である（例えば、（マウスなどの）非ヒト抗体由来の可変領
域又は少なくとも相補性決定領域（CDR）を有し、残りの部分がヒト由来になっ
ているなど）。
【００２６】 ある実施例では、本二重特異的又は多重特異的分子の前記少なくとも一つの抗
体又はそのフラグメントは、例えばFcγRI（CD64)、FcγRII（CD32）、及びFcγ
RIII（CD16）などのFc-ガンマ受容体（FcγR）など、ヒトIgG受容体などのFc受
容体に結合するものである。好適なFcγ受容体は高親和性Fcγ受容体である、Fc
γRIである。しかしながら、ヒトIgA受容体（例えばFcαRI）などの他のFc受容
体も標的とすることができる。このFc受容体は好ましくは、単球、マクロファー
ジ、又は活性化した多核白血球などのエフェクター細胞の表面上に位置するもの
だとよい。ある好適な実施例では、本二重特異的及び多重特異的分子は、Fc受容
体に、この受容体の免疫グロブリンFc（例えばIgG又はIgA）結合部位とは異なる
部位で結合する。従って、本二重特異的及び多重特異的分子の結合は、生理レベ
ルの免疫グロブリンの遮断を受けない。
【００２７】 別の態様では、本発明は、マクロファージ又は活性化PMN細胞など、Fc受容体
を発現しているエフェクター細胞を、本発明の二重特異的又は多重特異的分子に
連結した形で含む標的特異的エフェクター細胞を提供する。この二重特異的又は
多重特異的分子はエフェクター細胞にそのFc受容体を介して結合させるが、樹状
細胞にも結合するため、エフェクター細胞の標的を樹状細胞に設定することにな
る。
【００２８】 別の態様では、本発明は、薬学的に許容可能な担体と、樹状細胞に特異的に結
合する、本発明による少なくとも一つのヒトモノクローナル抗体又はその抗原結
合部分と、を含んで成る、薬学的組成物及び診断用組成物などの組成物を提供す
るものである。実施例の一つでは、本組成物は、好ましくはそれぞれが異なるエ
ピトープに結合する、複数のヒト抗体又はその抗原結合部分の組み合わせを含ん
で成る。例えば、エフェクター細胞の存在下で樹状細胞の高度に効果的な致死を
媒介するようなヒトモノクローナル抗体を含んで成る薬学的組成物を、樹状細胞
の成長を抑制する別のヒトモノクローナル抗体に組み合わせることができる。従
って、このような組合せにより、治療上の利益を最大にするようテーラー・メー
ドされた複数の治療法が可能となる。本発明による少なくとも一つのヒトモノク
ローナル抗体又はその抗原結合部分と、本発明の少なくとも一つの二重特異的又
は多重特異的分子又は他の治療薬（例えば細胞傷害性物質）との組み合わせを含
んで成る、薬学的組成物などの組成物も、本発明の範囲内にある。
【００２９】 さらに別の態様では、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合部分（即ち二
重特異的もしくは多重特異的抗体）を用いて、樹状細胞の成長を抑制したり、及
び／又は、ヒト多核白血球（PMN）、単球及びマクロファージなどのヒトエフェ
クター細胞による樹状細胞のファゴサイトーシス及び／又は致死を誘導すること
で、樹状細胞の増殖及び／又は分化を抑制する方法を提供する。ある実施例では
、本方法は、樹状細胞を、インビトロ又はインビボで、一種又は組合せになった
本発明のヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分に、ヒトエフェクター細
胞の存在下で接触させるステップを含む。本方法を、例えばインビトロ又はエク
スビボなど（例えば樹状細胞及びエフェクター細胞を含む培養株など）、培養で
利用することもできる。例えば、樹状細胞及びエフェクター細胞を含有する試料
をインビトロで培養し、本発明の抗体又はその抗原結合部分（又は本発明の二重
特異的もしくは多重特異的分子）に組み合わせることができる。反対に、本方法
を、例えばインビボ（治療又は予防などの）プロトコルの一部として、被験体内
で行うこともできる。
【００３０】 インビボ法の場合、本抗体又はその抗原結合部分（又は本発明の二重特異的も
しくは多重特異的分子）を、樹状細胞が媒介する疾患に罹患した被験体に投与す
ることができる。これらの疾患には、例えば自己免疫疾患、炎症性疾患、及び移
植片対宿主疾患がある。本発明の方法及び組成物を用いて治療（例えば緩解）又
は予防できる自己免疫疾患の例には、限定はしないが、リウマチ性関節炎、多発
性硬化症、糖尿病、重症筋無力症、悪性貧血、アジソン病、紅斑性狼瘡、ライタ
ー症候群、及びグレーブズ病がある。
【００３１】 ある実施例としては、例えば被験体をサイトカインで処置するなど、Fcα受容
体又はFcγ受容体などのFc受容体の発現又は活性を、向上又は抑制するなど調節
する作用物質で、被験体を追加処置することができる。本二重特異的又は多重特
異的分子による治療中の投与に好適なサイトカインには、顆粒球コロニー刺激因
子（G-CSF）、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）、インターフ
ェロン-γ（IFN-γ）、及び腫瘍壊死因子（TNF）、がある。
【００３２】 本発明の単離されたヒトモノクローナル抗体組成物を、さらに、例えば抗炎症
性又は免疫抑制性治療法、又は細胞毒など、他の公知の治療法と組み合わせて投
与することもできる。
【００３３】 さらに別の態様では、本発明は、例えば樹状細胞関連疾患について診断するた
めなど、試料中の樹状細胞の存在をインビトロ又はインビボで検出する方法を提
供するものである。ある実施例では、本抗体と樹状細胞との間の複合体が形成で
きるような条件下で、本発明のヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分（
即ち二重特異的もしくは多重特異的分子）に、テストしようとする試料を、コン
トロール試料と一緒に、接触させることでこれが行われる。次に、両試料中の複
合体形成を（ELISAを用いるなどして）検出し、試料間に、複合体形成の何らか
の統計上有意な違いがあれば、その違いはテスト試料中の樹状細胞の存在の指標
となる。
【００３４】 本発明の他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明及び請求の範囲から明白とな
るであろう。
【００３５】 （発明の詳細な説明） 本発明は、抗原に対する免疫応答を調節すると共に、樹状細胞が媒介する疾患
を治療及び診断するための、新規な抗体を基にした治療法を提供するものである
。
【００３６】 本発明の治療法は、抗原提示細胞（APC）上、特に樹状細胞及びそれに関連す
る細胞上に存在するエピトープに結合する、単離されたヒトモノクローナル抗体
又はその抗原結合部分を利用するものである。ある実施例では、V-D-J組換え及
びアイソタイプ・スイッチングを起こすことで樹状細胞に対する複数のアイソタ
イプのヒトモノクローナル抗体（例えばIgG、IgA及び／又はIgE）を産生できる
、トランスジェニックマウスなどの非ヒトトランスジェニック動物で、本ヒト抗
体を生成させる。従って、本発明の様々な態様には、ヒト抗体、抗体フラグメン
ト及び抗体ミメティック、その薬学的組成物や、このようなモノクローナル抗体
を作製するための非ヒトトランスジェニック動物及びＢ細胞及びハイブリドーマ
が含まれる。本発明の抗体を利用して、樹状細胞又は樹状細胞抗原を発現する関
連細胞種を検出したり、又は、樹状細胞の成長、分化及び／又は活性をインビト
ロ又はインビボで抑制する方法も、本発明の包含するところである。
【００３７】 本発明をより容易に理解できるよう、いくつかの用語をまず定義しておく。定
義は他にも、詳細な説明の項で行うこととする。
【００３８】 ここで用いる用語「樹状細胞」には、未成熟及び成熟樹状細胞や、樹状細胞に
分化できる関連する骨髄前駆細胞、又は、樹状細胞と共通の抗原を発現するとい
う点で関連する抗原提示細胞（例えば単球及びマクロファージなど）が含まれる
。ここで用いる用語「関連する」には、共通の前駆細胞又は細胞系譜を由来とす
る細胞が含まれる。ある好適な実施例では、本発明の抗体が樹状細胞に結合する
と、樹状細胞の成長が抑制される。別の好適な実施例では、本発明の抗体が樹状
細胞へ結合すると、定義された機能を持つ分子又は細胞（例えば腫瘍細胞、エフ
ェクター細胞、微生物病原体など）を樹状細胞に狙わせることで、樹状細胞の成
長及び／又は機能に対する作用が伝達される。更なる実施例では、本発明の抗体
が樹状細胞に結合すると、樹状細胞内部にこの抗体が移行する。
【００３９】 ここで用いる用語「抗体」とは、少なくとも二本の重（Ｈ）鎖及び二本の軽（
Ｌ）鎖をジスルフィド結合で相互に接続して含む糖たんぱくを言う。各重鎖は、
重鎖可変領域（ここではHCVR又はVHと省略）及び重鎖定常領域から成る。重鎖定
常領域は、三つのドメイン、CH1、CH2及びCH3から成る。各軽鎖は、軽鎖可変領
域（ここでLCVR又はVLと省略する）及び軽鎖定常領域から成る。軽鎖定常領域は
一つのドメイン、CLから成る。VH及びVL領域はさらに、相補性決定領域（CDR）
と呼ばれる、より保存性の高いフレームワーク領域（FR）と呼ばれる領域が介在
する超可変領域に分けることができる。各VH及びVLは、三つのCDR及び四つのFR
が、次の順：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4順にアミノ末端からカルボ
キシ末端まで並んだものから成る。重鎖及び軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用
する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の多種の細胞（例えば
エフェクター細胞など）及び古典的な補体系の第一コンポーネント（C1q）を含
め、免疫グロブリンの結合をホスト組織又は因子に伝達しているのであろう。
【００４０】 ここで用いる場合の、抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）とは
、抗原（樹状細胞上の抗原など）に特異的に結合する能力の残った抗体の一つ以
上のフラグメントを言う。抗体が抗原に結合する機能は、完全長抗体のうちの数
フラグメントが行っているとの示唆がある。ある抗体の「抗原結合部分」という
用語に包含される結合フラグメントの例には、（ｉ）VL、VH、CL及びCH1ドメイ
ンから成る一価のフラグメントであるFabフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域で
ジスルフィド架橋で連結された二つのFabフラグメントを含んで成る二価のフラ
グメントであるF(ab')2フラグメント；（ｉｉｉVH及びCH1ドメインから成るFdフ
ラグメント；（ｉｖ）一つの抗体の一本の腕のVL及びVHドメインから成るFvフラ
グメント；（ｖ）VHドメインから成るdAbフラグメント(Ward et al., (1989) Na
ture 341:544-546)；及び（ｖｉ）単離後の相補性決定領域（CDR）、がある。さ
らに、Fvフラグメントの二つのドメイン、VL及びVHは別々の遺伝子にコードされ
てはいるが、組換え法により合成のリンカーで繋げれば、VL及びVH領域を対にし
て一個のタンパク質の鎖として一価の分子を形成させることもできる（一本鎖(s
cFv)として公知である；Bird et al. (1988) Science 242:423-426; and Huston
et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883を参照されたい）。
このような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含されること
を、意図している。これらの抗体フラグメントは、当業者に公知の従来技術を用
いて得られており、それらフラグメントは、インタクト抗体と同じ態様で、実用
性についてスクリーニングされている。
【００４１】 用語「二重特異的分子」には、（ａ）樹状細胞、及び（ｂ）エフェクター細胞
の表面上のFc受容体、などと、結合又は相互作用するという二つの異なる結合特
異性を有する、タンパク質、ペプチド、又は、タンパク質もしくはペプチド複合
体など、あらゆる物質が含まれるものと、意図されている。別の実施例では、本
発明の二重特異的分子は、（ａ）樹状細胞、及び（ｂ）標的細胞（例えば腫瘍細
胞）上の抗原、と、結合又は相互作用するという二つの異なる結合特異性を有す
る。用語「多重特異的分子」又は「ヘテロ特異的分子」には、（ａ）樹状細胞、
及び（ｂ）エフェクター細胞の表面上のFc受容体、及び（ｃ）少なくとも一つの
他の成分、などと、結合又は相互作用するという三つの以上の異なる結合特異性
を有する、タンパク質、ペプチド、又は、タンパク質もしくはペプチド複合体な
ど、あらゆる物質が含まれるものと、意図されている。従って、本発明は、限定
はしないが、樹状細胞抗原などの細胞表面抗原、及び、エフェクター細胞上のFc
受容体又は標的細胞（腫瘍細胞など）上の抗原を狙った、二重特異的、三重特異
的、四重特異的、及び他の多重特異的分子を包含するものである。用語「二重特
異的分子」には、さらにジアボディ（原語diabody）が含まれる。ジアボディと
は、VH及びVLドメインが単一のポリペプチド鎖上に発現しているが、これら同じ
鎖上の二つのドメイン同士が対を成すには短すぎるリンカーを用いることで、こ
れらドメインが別の鎖の相補ドメインと対を成すようにして、抗原結合部位を二
つにしてあるような二価の二重特異的抗体である（Holliger, P., et al. (1993
) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448; Poljak, R.J., et al. (1994) S
tructure 2:1121-1123を参照されたい）。
【００４２】 ここで用いる用語「ヘテロ抗体」とは、相互に連結した二つ以上の抗体、抗体
結合フラグメント（例えばFab）、その誘導体、又は抗原結合領域であって、そ
のうちの少なくとも二つが異なる特異性を有するようなものを言う。このような
異なる特異性には、樹状細胞に対する結合特異性や、エフェクター細胞上のFc受
容体、又は、腫瘍細胞などの標的細胞上の抗原又はエピトープに対する結合特異
性が含まれる。
【００４３】 用語「ヒト抗体」とは、ここで用いる場合、ヒト生殖細胞免疫グロブリン配列
を由来とする可変及び定常領域を有する抗体を包含するものであると、意図され
ている。本発明のヒト抗体には、ヒト生殖細胞免疫グロブリン配列がコードして
いないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムもしくは部位特異的変異誘
発で導入した変異や、インビボでの体細胞変異など）が含まれていてもよい。し
かしながら、ここで用いる用語「ヒト抗体」には、マウスなどの他のほ乳類種の
生殖細胞を由来とするCDR配列がヒトフレームワーク配列に移植されているよう
な抗体が含まれるとは、意図されていない。
【００４４】 ここで用いる用語「モノクローナル抗体」又は「モノクローナル抗体組成物」
とは、単一の分子組成の抗体分子の製剤を言う。モノクローナル抗体組成物は、
ある特定のエピトープに対し、単一の結合特異性及び親和性を呈する。従って、
用語「ヒトモノクローナル抗体」とは、単一の結合特異性を呈し、ヒト生殖細胞
免疫グロブリン配列を由来とする可変及び定常領域を有するような抗体を言う。
ある実施例では、本ヒトモノクローナル抗体は、ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導
入遺伝子を含むゲノムを有する、トランスジェニックマウスなどの非ヒトトラン
スジェニック動物由来のＢ細胞を、不死化細胞に融合させて有するハイブリドー
マが産生するものである。
【００４５】 ここで用いる用語「組換えヒト抗体」には、組換え法により調製、発現、創製
又は単離された全てのヒト抗体が含まれるものと意図されており、例えば、ヒト
免疫グロブリン遺伝子についてトランスジェニックである動物（例えばマウス）
から単離された抗体（下の項Ｉでさらに解説する）；ホスト細胞にトランスフェ
クトされる組換え発現ベクタを用いて発現させた抗体、組換えコンビナトリアル
ヒト抗体ライブラリから単離された抗体、又は、ヒト免疫グロブリン遺伝子配列
の他のDNA配列へのスプライシングを含む他の何らかの手段によって調製、発現
、創製又は単離された抗体、である。このような組換えヒト抗体は、ヒト生殖細
胞免疫グロブリン配列を由来とする可変及び定常領域を有する。しかしながら、
いくつかの実施例では、このような組換えヒト抗体に、インビトロ変異誘発（又
は、ヒトIg配列がトランスジェニックになった動物を用いる場合、インビボ体細
胞変異誘発）を行うことで、この組換え抗体のVH及びVL領域のアミノ酸配列が、
ヒト生殖細胞VH及びVL配列を由来とし、また関連はしているが、インビボのヒト
抗体生殖細胞レパートリーには天然では存在しないであろう配列になっている。
【００４６】 ここで用いる「異種抗体」とは、このような抗体を産生する非ヒトトランスジ
ェニック生物に関連して定義されている。この用語は、当該非ヒトトランスジェ
ニック動物を構成していない生物に見られるものに相当するアミノ酸配列又はコ
ーディング核酸配列を有し、一般には当該非ヒトトランスジェニック動物の種以
外の種を由来とするような抗体を言う。
【００４７】 ここで用いる「異種ハイブリッド抗体」とは、異なる生物を由来とする軽鎖及
び重鎖を有する抗体を言う。例えば、ヒト重鎖をマウス軽鎖に結合させて有する
抗体は、異種ハイブリッド抗体である。異種ハイブリッド抗体の例には、上で解
説したキメラ抗体及びヒト化抗体がある。
【００４８】 ここで用いる「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体か
ら略、切り離された抗体である（例えば、樹状細胞や関連する骨髄系由来抗原提
示細胞（単球及びマクロファージなど）に特異的に結合し、樹状細胞以外の細胞
種に特異的に結合する抗体から略、切り離されている、単離された抗体など）。
しかしながら、樹状細胞に特異的に結合する単離された抗体は、樹状細胞上のコ
グネート抗原に関連する抗原を発現する細胞種など、他の細胞に対する交差反応
性は有していてもよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化
学物質から略、切り離されていてもよい。本発明の実施例の一つでは、異なる特
異性を有する「単離された」モノクローナル抗体の組み合わせを、よく定義され
た組成物中に配合する。
【００４９】 ここで用いる用語「特異的結合」及び「特異的に結合する」とは、所定の抗原
又は細胞種に結合する抗体の特異性を言う。ある特定の抗原又は細胞種に「特異
的に結合する」又は「特異的である」抗体は、この抗原又は細胞種に、他の抗原
又は細胞種に対する選択性を上回る選択性で結合する。本発明の抗体の各々は、
ある特定の標的エピトープ（例えば樹状細胞表面上に存在するものなど）に特異
的に結合するが、本発明の特異抗体は、いくつかの実施例では、他のAPCとも何
らかの交差反応性を呈するものでもよい。他の実施例では、本特異抗体は、樹状
細胞とのみ反応する。典型的には、本抗体は、少なくとも約1×107M-1の親和性
で結合し、そして所定の抗原には、この所定の抗原又は近い関係の抗原以外の非
特異抗原（例えばBSA、カゼインなど）への結合親和性よりも少なくとも二倍高
い親和性で結合する。「抗体が抗原を認識する」及び「ある抗原に特異的な抗体
」という文言は、ここでは、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と互換
可能に用いられている。
【００５０】 ここで用いる用語、IgG抗体に対する「高親和性」とは、少なくとも約107M-1
、好ましくは少なくとも約109M-1、より好ましくは少なくとも約1010M-1、1011M-1 、1012M-1、又はそれ以上、例えば最高1013M-1又はそれ以上など、の結合親和
性を言う。しかしながら、「高親和」結合は、他の抗体アイソタイプについては
多様である。例えばIgMアイソタイプに対する「高親和」結合とは、少なくとも
約107M-1の結合親和性を言う。
【００５１】 ここで用いる用語「Kassoc」とは、ある特定の抗体−抗原相互作用の結合定数
を言うものと、意図されている。
【００５２】 ここで用いる用語「Kdis」とは、ある特定の抗体−抗原相互作用の解離定数を
言うものと、意図されている。
【００５３】 ここで用いる「アイソタイプ」とは、重鎖定常領域遺伝子にコードされた抗体
クラス（例えばIgM又はIgG1）を言う。
【００５４】 ここで用いる「アイソタイプ・スイッチング」とは、ある抗体のクラス又はア
イソタイプが、一つのIgクラスから他のIgクラスの一つへと変化する現象を言う
。
【００５５】 ここで用いる「スイッチングのないアイソタイプ」とは、アイソタイプ・スイ
ッチングが起きなかったときに産生する重鎖のアイソタイプクラスを言う。スイ
ッチングのないアイソタイプをコードするCH遺伝子は、典型的には、機能的再編
成の起きるVDJ遺伝子からすぐ下流の一番目のCH遺伝子である。アイソタイプ・
スイッチングは、古典的もしくは非古典的アイソタイプ・スイッチングに分類さ
れてきた。古典的アイソタイプ・スイッチングは、導入遺伝子中の少なくとも一
つのスイッチ配列領域に関与する組換え事象が起きたときに起きる。非古典的ア
イソタイプ・スイッチングは、例えばヒトσμとヒトΣμとの間に相同組換えが
起きたときに起きることがある（δ関連欠失）。導入遺伝子同士及び／又は染色
体同士の間の組換えなど、別の非古典的スイッチングの仕組みが起きて、アイソ
タイプ・スイッチングにつながることもある。
【００５６】 ここで用いる用語「スイッチ配列」とは、スイッチ組換えを担うようなDNA配
列を言う。典型的にはμスイッチ領域である「スイッチ・ドナー」配列は、スイ
ッチ組換え中に欠失することになるコンストラクト領域の５’末端（即ち上流）
にあるであろう。「スイッチ・アクセプター」領域は、欠失することになるコン
ストラクト領域と、置換定常領域（例えばγ、ε、等々）との間にあるであろう
。組換えが必ず起きるという特定の部位はないため、最終的な遺伝子配列は、コ
ンストラクトからは予測できないことが多いであろう。
【００５７】 ここで用いる「糖鎖形成パターン」とは、タンパク質、より具体的には免疫グ
ロブリンたんぱくに共有結合する糖単位のパターンであると、定義しておく。あ
る異種抗体の糖鎖形成パターンが、導入遺伝子のCH遺伝子の由来となった種より
も、当該非ヒトトランスジェニック動物の種の糖鎖形成パターンの方に類似して
いると、当業者が認識する場合、この異種抗体の糖鎖形成パターンは、当該非ヒ
トトランスジェニック動物の種が産生する抗体上に天然で起きる糖鎖形成パター
ンに略、類似であると特徴付けることができる。
【００５８】 ここで用いる、ある物質に適用する用語「天然の」とは、その物質が天然に見
られるという事実を言う。例えば、（ウィルスを含む）生物中に存在するポリペ
プチド又はポリヌクレオチド配列であって、天然の源から単離でき、研究室で人
の手による改変を意図的に行っていないような配列は、天然のものである。
【００５９】 ここで用いる用語「再編成した」とは、Vセグメントが、D-J又はJ部分のすぐ
隣に位置して、それぞれ基本的に完全なVHもしくはVLドメインをコードするコン
フォメーションになっているような重鎖又は軽鎖免疫グロブリン遺伝子座の配置
を言う。再編成のあった免疫グロブリン遺伝子座は、生殖細胞DNAに比較すれば
判別することができる。再編成のあった遺伝子座は、少なくとも一つの組換えの
あった七量体／九量体ホモロジー配列を有するであろう。
【００６０】 Vセグメントに関してここで用いる用語「再編成していない」又は「生殖細胞
配置」とは、Vセグメントに、D又はJセグメントのすぐ隣に来るような組換えが
起きていない配置を言う。
【００６１】 ここで用いる用語「核酸分子」には、DNA分子及びRNA分子が含まれるものと、
意図されている。核酸分子は一本鎖でも、二本鎖でもよいが、好ましくは二本鎖
DNAであるとよい。
【００６２】 樹状細胞に結合する抗体又は抗体部分（例えばVH、VL、CDR3）をコードする核
酸に関してここで用いる用語「単離された核酸分子」とは、当該抗体又は抗体部
分をコードする当該ヌクレオチド配列が、樹状細胞以外の細胞に結合する抗体又
は抗体部分をコードする他のヌクレオチド配列を含まないような核酸分子を言う
ものと意図されている。このとき、この他の配列は、ヒトゲノムDNA中で当該核
酸を天然でフランクしているものでもよい。
【００６３】 核酸について、用語「実質的な相同性」とは、二つの核酸、又はそのうちの指
定した配列が、最適にアライメントして比較したときに、ヌクレオチドの少なく
とも約８０％、通常では少なくとも約９０％乃至９５％、そしてより好ましくは
ヌクレオチドの少なくとも約９８％乃至９９．５％が、適当なヌクレオチド挿入
又は欠失を持ちながらも同一であることを指す。あるいは、それらの部分が選択
的ハイブリダイゼーション条件下で相補鎖にハイブリダイズするときに、実質的
な相同性があることになる。
【００６４】 二つの配列間のパーセント同一性は、これら二つの配列を最適にアライメント
するのに導入せねばならないギャップの数、及び各ギャップの長さを考慮に入れ
たときの、これら配列に共通の同一位置の数の関数である（即ち、％相同性＝同
一位置の数／位置の総数×100）。二つの配列間の配列の比較及びパーセント同
一性の決定は、以下の非限定的な例に解説するように、数学的アルゴリズムを用
いて行うことができる。
【００６５】 二つのヌクレオチド間のパーセント同一性は、GCGソフトウェア・パッケージ
（http://www.gcg.comで入手できる）のGAPプログラムを用い、NWSgapdna.CMP
行列を用いて、ギャップ・ウェイトを40、50、60、70、又は80 にし、そしてレ
ングス・ウェイトを1、2、3、4、5、又は6にして決定することができる。二つの
ヌクレオチド又はアミノ酸配列間のパーセント同一性はまた、ALIGNプログラム
（バージョン2.0)に組み込まれた E. マイヤース及びW. ミラーのアルゴリズム(
Comput. Appl. Biosci., 4:11-17 (1988)) を用い、PAM120 ウェイト残基表を用
いて、ギャップ・レングス・ペナルティを12、そしてギャップ・ペナルティを4
にして、決定することもできる。さらに、二つのアミノ酸配列間のパーセント同
一性は、GCGソフトウェア・パッケージ（http://www.gcg.comで入手できる)のGA
Pプログラムに組み込まれたニードルマン及びワンシュ (J. Mol. Biol. (48):44
4-453 (1970))のアルゴリズムを用い、Blossum 62 行列又はPAM250行列を用いて
、ギャップ・ウェイトを16、14、12、10、8、6、又は4にし、レングス・ウェイ
トを1、2、3、4、5、又は6にして、決定することができる。
【００６６】 さらに本発明の核酸及びタンパク質の配列を「クエリー配列」として利用して
、公開データベースの検索を行って、例えば関連する配列を同定することなどが
できる。このような検索は、Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-
10のNBLAST 及びXBLASTプログラム（バージョン2.0）を利用すれば行える。BLAS
Tヌクレオチド検索を、NBLASTプログラムを用い、スコア= 100、ワード長= 12
にして行うと、本発明の核酸分子に相同なヌクレオチド配列を得ることができる
。BLASTタンパク質検索を、 XBLASTプログラムを用い、スコア= 50、ワード長=
3にして行うと、本発明のタンパク質分子に相同なアミノ酸配列を得ることがで
きる。比較を目的としてギャップのあるアライメントを行うには、ギャップドBL
AST をAltschul et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25(17):3389-3402が解説
するとおりに利用できる。BLAST及びギャップドBLASTプログラムを利用する場合
、各プログラムの（例えばXBLAST 及びNBLAST)のデフォルト・パラメータを利用
できる。http://www.ncbi.nlm.nih.gov. を参照されたい。
【００６７】 当該核酸は全細胞であっても、細胞ライセート中にあっても、又は部分的に精
製された形又は概ね純粋な形で存在してもよい。核酸が「単離された」又は概ね
「純粋にされた」とは、アルカリ/SDS処置、CsClバンディング、カラムクロマト
グラフィー、アガロースゲル電気泳動法、及び当業で公知の他の手法を含め、標
準的技術により、他の細胞中の核酸又はタンパク質など、他の細胞成分又は他の
混入物質が取り除かれていることを言う。F. Ausubel, et al., ed. Current Pr otocols in Molecular Biology , Greene Publishing and Wiley Interscience,
New York (1987)を参照されたい。
【００６８】 cDNA、ゲノム又は混合物から採った、（改変した制限部位等々を除き）しばし
ば天然配列のままである本発明の核酸組成物には、遺伝子配列をもたらす標準的
技術により、変異を起こさせてもよい。このような変異は、コーディング配列の
場合、希望通りのアミノ酸配列への影響を与えるものでもよい。具体的には、天
然V、D,J、定常、スイッチ及び他のここに解説したような配列に略、相同な又は
由来とするDNA配列が考えられる（このとき「由来とする」とは、ある配列が別
の配列と同一であるか、又は変更されていることを指す）。
【００６９】 用語「作用的に連結した」又は「作用可能に連結した」とは、当該分子同士が
相互に機能的に結び付いているために、一方の分子の活性又は状態に変化がある
と、他方の分子の活性又は状態に変化が起きるようなことを意味すると、意図さ
れている。核酸が「作用的に連結している」とは、別の核酸配列と機能的な関係
に配置されていることを言う。例えば、プロモータ又はエンハンサが、あるコー
ディング配列の転写に影響を与える場合、そのプロモータ又はエンハンサはこの
配列に作用的に連結していることになる。転写調節配列に関する場合、作用的に
連結した、とは、連結したDNA配列が連続しており、さらに二つのタンパク質コ
ーディング領域を接合する必要がある場合、連続していると同時に読み枠内にあ
ることを意味する。スイッチ配列の場合、作用的に連結したとは、これらの配列
がスイッチ組換えを起こせることを指す。典型的には、作用的に連結した二つの
ポリペプチドは、ペプチド結合を介して共有結合していることが多い。
【００７０】 ここで用いる「ベクター」という用語は、連結された先の別の核酸を輸送する
ことのできる核酸分子を言うものと、意図されている。ベクタの種類の一つは、
追加するDNAセグメントをライゲートできる環状の二本鎖DNAループを言う「プラ
スミド」である。もう一つのベクタの種類は、追加するDNAセグメントをウィル
スゲノム中にライゲートさせることのできるウィルスベクタである。ベクタのい
くつかは、導入された先のホスト細胞内で自律的複製が可能である（例えば、細
菌性の複製開始点を有する細菌ベクターや、エピソーム性ほ乳類ベクターなど）
。他のベクター （例えばエピソーム以外のほ乳類ベクター）は、ホスト細胞に
導入されるやホスト細胞のゲノムに組み込まれて、ホストゲノムと一緒に複製さ
れる。さらに、いくつかのベクターは、作用的に連結された先の遺伝子の発現を
命令することができる。このようなベクターをここでは「組換え発現ベクター（
又は単に「発現ベクター」）と呼ぶ。一般に、組換えDNA技術で実用性のある発
現ベクターは、しばしばプラスミドの形である。プラスミドが最も普通に用いら
れている形のベクターであるため、本明細書では「プラスミド」及び「ベクター
」を互換可能に用いている場合がある。しかしながら、本発明は、例えばウィル
スベクター（例えば複製欠陥レトロウィルス、アデノウィルス、及びアデノ随伴
ウィルスなど）、同等の機能を果たす他の形の発現ベクターも包含することを、
意図している。
【００７１】 ここで用いる用語「組換えホスト細胞」（又は単に「ホスト細胞」）とは、組
換え発現ベクターを導入した先の細胞を言うものと、意図されている。このよう
な用語は、特定の対象細胞だけでなく、このような細胞の後代も言うことを意図
していると、理解されたい。突然変異又は環境による影響が原因で、後の世代に
何らかの改変が起きることがあるため、このような後代は、実際には親細胞と同
一ではないかも知れないが、それでも尚、ここで用いる用語「ホスト細胞」の範
囲内に包含されている。
【００７２】 本発明の多様な態様を、以下の小項でさらに詳述する。
【００７３】 Ｉ．樹状細胞に対するヒト抗体の生成 本発明のヒトモノクローナル抗体（mAb）を作製する特に好適な方法をここで
詳述するが、例えばケーラー及びミルスタインの標準的体細胞ハイブリッド形成
技術 Nature 256: 495 (1975) など、従来のモノクローナル抗体法を含め、多様
な他の技術も利用できる。体細胞ハイブリッド形成法が好ましいが、例えばＢリ
ンパ球のウィルス又は腫瘍遺伝子による形質転換など、モノクローナル抗体を生
成する他の技術も利用できる。
【００７４】 ハイブリドーマを作製するのに好適な動物系はマウス系である。マウス系での
ハイブリドーマ作製は、良く確立された手法である。融合用の脾細胞の免疫化プ
ロトコール及び免疫化した脾細胞の分離技術は当業者に公知である。融合相手（
例えばマウス骨髄腫細胞）及び融合法も公知である。
【００７５】 ある好適な実施例では、樹状細胞を狙ったヒトモノクローナル抗体を、マウス
系ではなくヒト免疫系の部分を持つトランスジェニックマウスを用いて生成する
。ここでは「HuMab」マウスと呼ぶこれらのトランスジェニックマウスは、再編
成していないヒト重（μ及びγ）鎖及びκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードする
ヒト免疫グロブリン微小遺伝子座を、内因性μ及びκ鎖遺伝子座を不活性化する
標的変異と一緒に含有する (Lonberg, N. et al. (1994) Nature 368(6474): 85
6-859)。従って、このマウスは、低下したマウスIgM又はκの発現を呈し、免疫
化に応答して、導入したヒト重鎖及び軽鎖導入遺伝子がクラス・スイッチング及
び体細胞変異を行って、高親和ヒトIgGκモノクローナルを生成する(Lonberg, N
. et al. (1994), supra; reviewed in Lonberg, N. (1994) Handbook of Exper
imental Pharmacology 113:49-101; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Inter
n. Rev. Immunol. Vol. 13: 65-93, and Harding, F. and Lonberg, N. (1995)
Ann. N.Y. Acad. Sci 764:536-546）。HuMabマウスのこの製剤は下記の項II及び
Taylor, L. et al. (1992) Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen, J. e
t al. (1993) International Immunology 5: 647-656; Tuaillon et al. (1993)
Proc. Natl. Acad. Sci USA 90:3720-3724; Choi et al. (1993) Nature Genet
ics 4:117-123; Chen, J. et al. (1993) EMBO J. 12: 821-830; Tuaillon et a
l. (1994) J. Immunol. 152:2912-2920; Lonberg et al., (1994) Nature 368(6
474): 856-859; Lonberg, N. (1994) Handbook of Experimental Pharmacology
113:49-101; Taylor, L. et al. (1994) International Immunology 6: 579-591
; Lonberg, N. and Huszar, D. (1995) Intern. Rev. Immunol. Vol. 13: 65-93
; Harding, F. and Lonberg, N. (1995) Ann. N.Y. Acad. Sci 764:536-546; Fi
shwild, D. et al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851（これら全参考
文献の内容全体を、言及をもってここに編入することとする）に詳述されている
。さらに、すべてLonberg 及びKay及びGenPharm Internationalの米国特許第5,5
45,806号; 第5,569,825号; 第5,625,126号; 第5,633,425号; 第5,789,650号; 第
5,877,397号; 第5,661,016号; 第5,814,318号; 第5,874,299号; 及び第5,770,42
9号; Suraniらの米国特許第5,545,807号; １９９８年６月１１日公開の国際公報
WO 98/24884；１９９４年１１月１０日公開のWO 94/25585；１９９３年６月２４
日公開のWO 93/1227；１９９２年１２月２３日公開のWO 92/22645；１９９２年
３月１９日公開のWO 92/03918（これら全部の開示全体を、言及をもってここに
編入することとする）も参照されたい。
【００７６】 HuMab免疫化 樹状細胞に対する完全ヒトモノクローナル抗体を生成するには、HuMabマウス
を、Lonberg, N. et al. (1994) Nature 368(6474): 856-859; Fishwild, D. et
al. (1996) Nature Biotechnology 14: 845-851及びWO 98/24884が解説したよ
うに、樹状細胞の精製もしくは濃縮標品で免疫化することができる。好ましくは
、このマウスは一回目の免疫化時点で生後６乃至１６週であるとよいであろう。
例えば、樹状細胞の精製もしくは濃縮標品（１００万乃至１０００万個の細胞）
を用いて、HuMabマウスを腹腔内で免疫化することができる。樹状細胞の精製も
しくは濃縮標品を用いた免疫化で抗体が生成されない場合、マウスにさらに、樹
状細胞のライセートで免疫化を行って、免疫応答を促進することもできる。
【００７７】 多様な抗原を用いて蓄積した経験から、HuMabトランスジェニックマウスは、
まず抗原を完全フロイントアジュバントに入れて腹腔内(IP）注射して免疫化し
、一週間おきに（最高６回）抗原の不完全フロイントアジュバント溶液でIP免疫
化したときに、最も良く応答することが示されている。免疫応答は、眼窩後方の
血液から得た血漿試料で、免疫化プロトコル期間中、観察することができる。血
漿を例えばELISA又はフローサイトメトリで（以下に解説するように）スクリー
ニングして、充分な抗体価の抗樹状細胞ヒト免疫グロブリンを持つマウスを融合
に利用することができる。マウスに抗原を腹腔内注射して追加刺激してから３日
後に死亡させ、脾臓を摘出してもよい。各抗原について２乃至３回の融合を行わ
ねばならないだろうと予測できる。数匹のマウスを各抗原について免疫化するこ
とになるであろう。例えば、合計１２匹のHC07及びHC012株HuMabマウスを免疫化
してもよい。
【００７８】 樹状細胞に対するヒトモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの作製 マウス脾細胞を分離し、PEGでマウス骨髄腫細胞株に標準的プロトコルに基づ
いて融合させることができる。次に、こうして得られたハイブリドーマを、抗原
特異抗体を産生しているか、スクリーニングする。例えば、免疫化したマウスの
脾臓リンパ球の単個細胞懸濁液を、50%PEGで、P3X63-Ag8.653非分泌性マウス骨
髄腫細胞 (ATCC、CRL 1580）の数の６分の１に融合させる。細胞を約2×105にな
るように 底の平らな微量定量プレートに塗った後、２週間、20% 胎児クローン
血清、18% 「653」調整培地、 5% オリゲン(アイゲン社製）、4 mM L-グルタミ
ン、1 mM L-グルタミン、1 mMピルビン酸ナトリウム、5mM HEPES、0.055 mM 2-
メルカプトエタノール、50 単位/ml ペニシリン、50 mg/ml ストレプトマイシン
、50 mg/ml ゲンタマイシン及び1×HAT (シグマ社製；HAT は融合から２４時間
後に加える）を含有する選択培地でインキュベートする。二週間後、細胞を、HA
TをHTに置き換えた培地で培養する。次に、個々の細胞をELISAでヒト抗樹状細胞
モノクローナルIgM 及びIgG抗体についてスクリーニングする。広汎なハイブリ
ドーマ成長があったら、培地を通常１０乃至１４日後に観察する。抗体を分泌し
ているハイブリドーマを再度塗り、再度スクリーニングし、抗樹状細胞モノクロ
ーナル抗体であるヒトIgGについてやはり陽性であったら、少なくとも二回、限
界希釈でサブクローンしてもよい。こうして安定なサブクローンをインビトロで
培養して、少量の抗体を組織培養培地で生成させてから、特徴付けを行う。
【００７９】 ヒトモノクローナル抗体の樹状細胞への結合の特徴付け 本発明のヒトモノクローナル樹状細胞抗体の結合を特徴付けするために、ハイ
ブリドーマを、例えばフローサイトメトリで樹状細胞との能動的反応性について
スクリーニングすることができる。
【００８０】 簡単に説明すると、樹状細胞を採集して洗浄した後、９６ウェルプレートに加
え、ハイブリドーマ上清の希釈液（又は、0.1%のトゥイーン８０及び２０％マウ
ス血清を含有するモノクローナル抗体PBS溶液）と一緒に、４℃で１時間、イン
キュベートする。次にプレートを洗浄し、二次抗体（例えばFITC又はPEで標識し
た抗ヒトIgG）と一緒にさらに１時間、４℃でインキュベートする。洗浄後、細
胞を1%パラホルムアルデヒドで固定し、解析する。試料の解析は、FACScan装置
により、単個細胞に当たる光及び側光散乱性質を用いて行うことができる。（フ
ローサイトメトリ検定に加え、又はその代わりに、）蛍光顕微鏡法を用いた代替
的な検定を利用してもよい。細胞を上に解説したとおりに染色し、蛍光顕微鏡法
で調べることができる。この方法により、個々の細胞を可視化できるが、抗原濃
度によっては、感受性が低くなることがある。
【００８１】 樹状細胞に強力に結合するハイブリドーマをサブクローンし、さらに特徴付け
ることになる。各ハイブリドーマから、親細胞の反応性の残った一個のクローン
を（フローサイトメトリで）選び出し、５乃至１０個のバイアルの細胞銀行を作
って、-140℃で保存し、抗体精製に利用することができる。
【００８２】 ヒト抗樹状細胞抗体を精製するには、選別したハイブリドーマを、モノクロー
ナル抗体精製用の２リットル入りのスピナーフラスコで成長させることができる
。上清を濾過し、濃縮してから、プロテインＡ−セファロース（ニュージャージ
ー州ピスカタウェイ、ファルマシア社製）でアフィニティ・クロマトグラフィを
行ってもよい。溶離したIgGをゲル電気泳動法及び高速液体クロマトグラフィで
調べて、純度を確認することもできる。バッファ溶液をPBSに替え、濃度をOD280
で吸光係数1.43を用いて決定してもよい。モノクローナル抗体をアリクォートし
、-80℃で保存してもよい。
【００８３】 選別したヒト抗樹状細胞モノクローナル抗体が固有のエピトープに結合するか
どうかを調べるには、各抗体を市販の試薬（イリノイ州ロックフォード、ピアー
ス社製）を用いてビオチン化することができる。未標識のモノクローナル抗体と
、ビオチン化したモノクローナル抗体とを用い、フローサイトメトリを上述のよ
うに利用して、競合実験を行うことができる。ビオチン化モノクローナル抗体の
結合は、ストレプトアビジン−アルカリホスファターゼをプローブにして検出で
きる。
【００８４】 精製後の抗体のアイソタイプを決定するには、アイソタイプELISAを行うこと
ができる。微量定量プレートのウェルを10μgの抗ヒトIgで一晩かけて４℃で被
膜してもよい。5%BSAで遮断した後、このプレートを10μg／mlのモノクローナル
抗体又は精製済みのアイソタイプコントロールに、周囲温度で２時間、反応させ
る。次に、このウェルを、ヒトIgG1又はヒトIgM特異的アルカリホスファターゼ
共役プローブに反応させることができる。洗浄後、プレートをpNPP 基質(1 mg/m
l)で展開させて、405-650の光学密度で解析する。
【００８５】 さらに抗樹状細胞ヒトIgGを、ウェスタンブロットで樹状細胞との反応性につ
いてテストしてもよい。簡単に説明すると、樹状細胞の細胞抽出物を調製し、ド
デシル硫酸ナトリウム（SDS）ポリアクリルアミドゲル電気泳動にかける。電気
泳動後、分離した当該抗原をニトロセルロース・メンブレンに写し取り、20%マ
ウス血清で遮断し、テスト対照のモノクローナル抗体でプローブすることとなる
。ヒトIgGの結合は、抗ヒトIgGアルカリホスファターゼを用いて検出でき、BCIP
/NBT基質タブレット（ミズーリ州セントルイス、シグマ・ケミカル社製）で展開
させることができる。
【００８６】 ヒトモノクローナル抗体の樹状細胞に対するファゴサイトーシス及び細胞致死
活性 樹状細胞に対する特異的結合に加え、ヒトモノクローナル抗樹状細胞抗体を、
樹状細胞のファゴサイトーシス及び致死を媒介するその能力についてテストする
こともできる。モノクローナル抗体活性をインビトロでこのようにテストすると
、インビボモデルでテストする前の予備的スクリーニングとなる。簡単に説明す
ると、健康なドナーから採取した多核白血球（PMN）又は他のエフェクター細胞
を、フィッコール・ハイパック密度遠心分離法で精製し、次に、混入した赤血球
を溶解させる。洗浄後のPMNを、10%熱不活化ウシ胎児血清を補ったRPMI中に懸濁
させ、51Crで標識した樹状細胞に、様々なエフェクター細胞対樹状細胞比（エフ
ェクター細胞：樹状細胞）で混合してもよい。次に、精製済みのヒト抗樹状細胞
IgGを多様な濃度で加えてもよい。無関係のヒトIgGを陰性のコントロールとして
用いてもよい。検定は０乃至１２０分間、３７℃で行うことができる。51Crの培
養上清中への放出を測定すると、試料の細胞溶解を検定することができる。また
、複数のモノクローナル抗体があったときに細胞溶解を促進できるかを判定する
ために、抗樹状細胞モノクローナルを相互に組み合わせてテストしてもよい。
【００８７】 また、樹状細胞に結合するヒトモノクローナル抗体をインビボモデル（例えば
マウス）でテストして、樹状細胞のファゴサイトーシス及び致死を媒介する上で
のそれらの有効性について調べてもよい。これらの抗体は、限定はしないが例え
ば以下の基準に基づいて選別することができる。 １．）生きた樹状細胞への結合； ２．）樹状細胞への高親和結合； ３．）樹状細胞上の固有のエピトープへの結合（補完的な活性を持つモノクロ
ーナル抗体を組み合わせて用いた場合に、同じエピトープへの結合をめぐって競
合する可能性をなくすため）； ４．）樹状細胞のオプソニン化； ５．）ヒトエフェクター細胞の存在下における樹状細胞の成長抑制、ファゴサ
イトーシス及び／又は致死の媒介； ６．）樹状細胞への結合後の内部移行； ７．）インシツー（例えばヒト組織での）での樹状細胞への結合 ８．）樹状細胞の活性化（例えばサイトカイン放出、免疫調節性表面分子（例
えばCD80(B7.1）、CD86（B7.2）、CD40、及びCD54（ICAM））の発現を誘導する
、など）； ９．）樹状細胞上のヒトマンノース受容体への結合；及び １０．）霊長類間で保存されている樹状細胞抗原への結合。
【００８８】 本発明の好適なヒトモノクローナル抗体は、これらの基準の一つ以上、そして
好ましくは全てに、合致するものである。ある具体的な実施例では、本ヒトモノ
クローナル抗体を、例えば二種以上の抗樹状細胞モノクローナル抗体又はそのフ
ラグメントを含む医薬組成物としてなど、組み合わせて用いる。例えば、所望の
治療効果又は診断効果を得るために、異なる、しかし補完的な活性を有する複数
のヒト抗樹状細胞モノクローナル抗体を単一の治療で組み合わせてもよい。その
一例は、樹状細胞内部に急速に移行する抗樹状細胞ヒトモノクローナル抗体を、
免疫刺激性サイトカインの放出など、樹状細胞の抗原提示細胞活性を誘導する別
のヒト抗樹状細胞モノクローナル抗体と組み合わせた形で含有する組成物であろ
う。
【００８９】 ＩＩ．ヒトモノクローナル抗樹状細胞抗体を産生する非ヒトトランスジェニッ
ク動物の作製 さらに別の態様では、本発明は、樹状細胞に特異的に、好ましくは高親和性で
結合するヒトモノクローナル抗体を発現できる、トランスジェニックマウスなど
の非ヒトトランスジェニック動物を提供するものである。ある好適な実施例では
、トランスジェニックマウス（HuMabマウス）などの本非ヒトトランスジェニッ
ク動物は、ヒト重鎖導入遺伝子及び軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するもので
ある。ある実施例では、トランスジェニックマウスなどの当該非ヒトトランスジ
ェニック動物は、樹状細胞の精製されたもしくは濃縮された標品及び／又は樹状
細胞ライセートで、免疫化してある。好ましくは、トランスジェニックマウスな
どの当該の非ヒトトランスジェニック動物が、V-D-J組換え及びアイソタイプ・
スイッチングを起こすことにより、樹状細胞に対する複数のアイソタイプのヒト
モノクローナル抗体（例えばIgG、IgA及び／又はIgEなど）を産生できるとよい
。アイソタイプ・スイッチングは、例えば古典的又は非古典的アイソタイプ・ス
イッチングで起きるものでよい。
【００９０】 外からの抗原刺激に異種の抗体レパートリーで応答する非ヒトトランスジェニ
ック動物を設計するには、そのトランスジェニック動物に含めた異種の免疫グロ
ブリン導入遺伝子が、Ｂ細胞発生の経路全体を通じて適正に機能することが必要
である。ある好適な実施例では、異種の重鎖導入遺伝子の適正な機能に、アイソ
タイプ・スイッチングが含まれる。従って、本発明の導入遺伝子は、アイソタイ
プ・スイッチングを行い、さらに以下のうちの一つ以上を起こすように構築され
る。即ち、（１）高レベル及び細胞種特異的な発現、（２）機能的な遺伝子再編
成、（３）対立遺伝子排除の活性化及び対立遺伝子排除に対する応答、（４）充
分な一次的レパートリーの発現、（５）シグナル伝達、（６）体細胞超変異、及
び（７）免疫応答中に導入遺伝子抗体遺伝子座が優性になること、である。
【００９１】 前記の基準全てが合致されねばならない訳ではない。例えば、トランスジェニ
ック動物の内因性免疫グロブリン遺伝子座を機能的に破壊したような実施例では
、導入遺伝子が対立遺伝子排除を活性化する必要はない。さらに、導入遺伝子が
、機能的に再編成した重鎖及び／又は軽鎖免疫グロブリン遺伝子を含む実施例で
は、機能的遺伝子再編成という二番目の基準は、少なくともその導入遺伝子が既
に再編成しているために、必要ではない。分子免疫学の背景については、言及を
もってここに編入することとするFundamental Immunology, 2nd edition (1989)
, Paul William E., ed. Raven Press, N.Y.を参照されたい。
【００９２】 いくつかの実施例では、本発明のヒトモノクローナル抗体を生成させるのに用
いる非ヒトトランスジェニック動物は、再編成した、再編成していない、又は、
再編成したもの及び未再編成のものが組み合わせになった、異種の免疫グロブリ
ン重鎖及び軽鎖導入遺伝子を、このトランスジェニック動物の生殖細胞に含有し
ている。重鎖導入遺伝子のそれぞれは少なくとも一つのCH遺伝子を含む。加えて
、この重鎖導入遺伝子には、トランスジェニック動物のＢ細胞で複数のCH遺伝子
をコードする異種導入遺伝子のアイソタイプ・スイッチングが起きるのに役立つ
機能的なアイソタイプ・スイッチ配列が含まれていてもよい。このようなスイッ
チ配列は、導入遺伝子CH遺伝子を供給する側の種由来の生殖細胞免疫グロブリン
遺伝子座に天然で存在するものでも、又は、このようなスイッチ配列は、トラン
スジェニック・コンストラクトを受け取る側（トランスジェニック動物）の種に
あるものを由来としてもよい。例えば、トランスジェニックマウスを作製するの
に用いるヒト導入遺伝子コンストラクトは、マウス重鎖遺伝子座に天然で存在す
るものと類似のスイッチ配列を取り入れた方が、より高頻度でアイソタイプ・ス
イッチングを行うであろう。これはおそらくは、マウススイッチ配列は、マウス
スイッチリコンビナーゼ酵素系で機能するのに最適になっており、ヒトスイッチ
配列はそうでないからである。スイッチ配列は、従来のクローニング法で分離及
びクローンしてもよいが、又は、免疫グロブリンスイッチ領域配列に関して公開
された配列情報に基づいて設計された重複合成オリゴヌクレオチドから、デノボ
合成してもよい (言及をもってここに編入することとするMills et al., Nucl.
Acids Res. 15:7305-7316 (1991); Sideras et al., Intl. Immunol. 1:631-642
(1989))。前述のトランスジェニック動物のそれぞれについて、機能的に再編成
した異種の重鎖及び軽鎖免疫グロブリン導入遺伝子は、トランスジェニック動物
のＢ細胞に有意な比率で見られる（少なくとも１０％）。
【００９３】 本発明のトランスジェニック動物を作製するのに用いる導入遺伝子には、少な
くとも一つの可変遺伝子セグメント、一つの多様性遺伝子セグメント、一つのジ
ョイニング遺伝子セグメント、及び少なくとも一つの定常領域遺伝子セグメント
をコードするDNAを含んで成る重鎖導入遺伝子が含まれる。免疫グロブリン軽鎖
導入遺伝子は、少なくとも一つの可変遺伝子セグメント、一つのジョイニング遺
伝子セグメント、及び少なくとも一つの定常領域遺伝子セグメントをコードする
DNAを含んで成る。重鎖及び軽鎖遺伝子セグメントをコードする遺伝子セグメン
トは、非ヒトトランスジェニック動物にとって異種である。それはなぜならこれ
らが、この非ヒトトランスジェニック動物を構成していない種由来の免疫グロブ
リン重鎖及び軽鎖遺伝子セグメントをコードするDNAを由来とするか、又はそれ
に相当するからである。本発明の一態様では、個々の遺伝子セグメントが未再編
成のままであるよう、即ち、機能的免疫グロブリン軽鎖又は軽鎖をコードするよ
うな再編成はされないよう、当該導入遺伝子が構築される。このような未再編成
の導入遺伝子は、樹状細胞に暴露したとき、V、D、及びJ遺伝子セグメントの組
換え（機能的再編成）に役立ち、そして好ましくはD領域遺伝子セグメントの全
部又は一部分が、非ヒトトランスジェニック動物の再編成後の免疫グロブリン重
鎖に組み込まれるのに役立つ。
【００９４】 代替的な実施例では、当該導入遺伝子が再編成のない「ミニ遺伝子座」を含む
。このような導入遺伝子は典型的には、C、D、及びJセグメントのかなりの部分
や、V遺伝子セグメントの一部を含む。このような導入遺伝子コンストラクトで
は、例えばプロモータ、エンハンサ、クラススイッチ領域、RNAプロセシングの
ためのスプライシング供与側配列及びスプライシング受容側配列、リコンビネー
ション・シグナル、等々の多様な調節配列は、異種のDNAを由来とする相当する
配列を含むこととなる。このような調節配列を、本発明で用いる非ヒト動物の種
と同じ又は関連する種から取り出して、導入遺伝子に取り入れてもよい。例えば
、ある導入遺伝子において、ヒト免疫グロブリン遺伝子セグメントをげっ歯類免
疫グロブリンエンハンサー配列と組み合わせて、トランスジェニックマウスで使
用してもよい。あるいは、ほ乳類のゲノムに天然で存在することが公知の機能的
DNA配列に対して同種ではない合成の調節配列を導入遺伝子に取り入れてもよい
。合成の調節配列は、例えばスプライシング受容側部位又はプロモータ／エンハ
ンサモチーフの許容可能な配列などを決めるコンセンサスの規則に基づいて、設
計する。例えば、ミニ遺伝子座とは、ゲノミック免疫グロブリン遺伝子座のうち
の一部を含んで成るものであり、その内側（つまり前記部分の末端ではない）の
少なくとも一箇所で、天然型の生殖細胞Ig遺伝子座に比較して、必須ではないDN
A部分（例えば介在配列；イントロン又はその一部など）を欠失させたものであ
る。
【００９５】 本発明のある好適な実施例では、樹状細胞に対するヒト抗体を産生させるのに
用いるトランスジェニック動物は、（例えばpHC1 又はpHC2を）WO 98/24884の実
施例5、6、8、又は14 に解説された軽鎖導入遺伝子を一コピー含有する動物と交
配した、WO 98/24884 の実施例12に解説された導入遺伝子のコピーを少なくとも
一つ、典型的には２乃至１０、そして時には２５乃至５０又はそれ以上、含有し
、そしてその仔を、WO 98/24884の実施例10で解説したJH欠失動物と交配させる
（これら参考文献の内容を言及を持ってここに編入することを明示しておく）。
動物はこれら三つの形質の各々についてホモ接合型になるように交配する。この
ような動物は以下の遺伝子型を有することになる：（WO98/24884の実施例12に解
説された）ヒト重鎖未再編成のミニ遺伝子座を一コピー（染色体半数体一組当た
り）、再編成したヒトK軽鎖コンストラクトを（染色体半数体一組当たり）一コ
ピー、及び（WO98/24884の実施例10に解説した）各内因性マウス重鎖遺伝子座に
おいて機能的JHセグメントの全てを除去する欠失。このような動物を、JHセグメ
ントの欠失がホモ接合型になったマウスと交配し（WO98/24884の実施例10）て、
このJH欠失がホモ接合型、そしてヒト重鎖及び軽鎖コンストラクトがヘミ接合型
になった仔を得る。その結果得られる動物に抗原を注射し、これらの抗原に対す
るモノクローナル抗体の生成に用いる。
【００９６】 このような動物から分離されたＢ細胞は、ヒト重鎖及び軽鎖について、各遺伝
子のコピーを一つしか含有していないために、一重特異的である。さらにこれら
は、WO98/24884の実施例9及び12が解説するように、JH領域全体に欠失が導入さ
れているために、内因性マウス重鎖遺伝子の両方のコピーが非機能的になってお
り、従ってヒト又はマウス重鎖についても一重特異的であろう。Ｂ細胞のうちの
かなりの割合が、ヒト又はマウス軽鎖について一重特異的になっているであろう
。なぜなら、大部分のＢ細胞で、再編成したヒトκ軽鎖遺伝子のコピー一個が発
現することで、内因性マウスκ及びラムダ鎖遺伝子の再編成が対立遺伝子上及び
アイソタイプ上、排除されるからである。
【００９７】 前記好適な実施例のトランスジェニックマウスは、著しいレパートリー、理想
的には天然マウスのそれと略類似のレパートリーの免疫グロブリン産生を呈する
であろう。従って、例えば内因性Ig遺伝子を失活させてある実施例では、総免疫
グロブリンレベルは血清中約0.1乃至10mg/ml、好ましくは0.5乃至5mg/mlの範囲
内にあり、理想的には少なくとも約1.0mg/mlであろう。IgMからIgGへスイッチン
グを行うことのできる導入遺伝子をこのトランスジェニックマウスに導入した場
合、成体マウスの血清IgG対IgM比は好ましくは約10:1である。IgG対IgM比は、未
成熟マウスではずっと低いであろう。一般に、脾臓及びリンパ節Ｂ細胞のうちの
約10%を越えるもの、好ましくは40乃至80%が、ヒトIgGたんぱくのみを発現する
。
【００９８】 このレパートリーは理想的には、非トランスジェニックマウスで見られるもの
に近いものであり、通常は、少なくとも約10%、好ましくは25乃至50%又はそれ以
上がそうである。一般に、少なくとも約千種類の異なる免疫グロブリン（理想的
にはIgG）、好ましくは104乃至106種又はそれ以上が、主にマウスゲノムに導入
された異なるV、J及びD領域の数に応じて、産生されるであろう。これらの免疫
グロブリンは、典型的には、樹状細胞たんぱくなど、抗原性の高いタンパク質の
約半分又はそれ以上を認識するであろう。典型的には、これら免疫グロブリンは
、所定の抗原に対して、少なくとも約107M-1、好ましくは少なくとも約109M-1、
より好ましくは少なくとも約1010M-1、1011M-1、1012M-1、又はそれ以上、例え
ば最高で1013M-1、又はそれ以上など、の親和性を呈するであろう。
【００９９】 いくつかの実施例では、所定の抗原種に対する抗体応答に表れるV遺伝子の選
択幅が制限されるよう、所定のレパートリーを持つマウスを作製するのが好まし
いかも知れない。所定のレパートリーを有するある重鎖導入遺伝子が、例えば、
ヒトにおいて所定の抗原種に対する抗体応答で優先的に用いられるようなヒトVH
遺伝子を含んでいてもよい。あるいは、様々な理由（例えば、所定の抗原に対し
て親和性の高いV領域をコードしている可能性が低い；体細胞変異及び親和性尖
鋭化を行う性向が低い；又は、特定のヒトにとって免疫原性がある、など）から
、いくつかのVH遺伝子を、定義されたレパートリーから除外してもよい。このよ
うに、様々な重鎖又は軽鎖遺伝子セグメントを含有する導入遺伝子に再編成が起
きる前に、このような遺伝子セグメントを、例えばトランスジェニック動物以外
の生物の種由来のものと同様、ハイブリダイゼーション又はDNA配列決定などに
より、容易に同定できるであろう。
【０１００】 前に解説したように、本発明のトランスジェニックマウスは、樹状細胞の精製
もしくは濃縮標品及び／又は樹状細胞ライセートで、免疫化することができる。
このマウスが生ずるＢ細胞は、導入遺伝子内スイッチ組換え（cisスイッチング
）を通じてクラス・スイッチングを行うと共に、樹状細胞に対して反応性の免疫
グロブリンを発現するであろう。この免疫グロブリンは、重鎖及び軽鎖ポリペプ
チドがヒト導入遺伝子にコードされたヒト配列抗体になっている可能性があり、
またその配列には、体細胞変異及びV領域組換えジョイントを由来とする配列や
、生殖細胞にコードされた配列が含まれているであろう。このようなヒト配列免
疫グロブリンには、体細胞変異が起きたりV-J及びV-D-J組換えジョイントに差が
あるために、他の非生殖細胞配列も含まれているかも知れないが、ヒトVL又はVH 遺伝子セグメント及びヒトJL又はJLセグメントにコードされたポリペプチド配列
に略、同一であると言うことができる。このようなヒト配列抗体については、各
鎖の可変領域は、典型的には、ヒト生殖細胞V、J、そして重鎖の場合にD遺伝子
セグメントに、少なくとも８０％コードされている。しばしばこの可変領域の少
なくとも８５％が、導入遺伝子上にあるヒト生殖細胞配列にコードされている。
また、この可変領域のうちのしばしば９０又は９５％又はそれ以上が、導入遺伝
子上のヒト生殖細胞配列にコードされている。しかし、体細胞変異やVJ及びVDJ
ジョイニングでは非生殖細胞配列が導入されるため、このヒト配列抗体は、マウ
スの生殖細胞中のヒト導入遺伝子に見られる通りのヒトV、D、又はJ遺伝子セグ
メントにはコードされていない可変領域配列（及び頻度は低いが定常領域配列）
をしばしば有しているであろう。典型的には、このような非生殖細胞配列（又は
個々のヌクレオチド位置）はCDR中又はCDR付近に集まっていたり、又は、体細胞
変異が起こりやすいことが知られている領域に集まっているであろう。
【０１０１】 所定の抗原に結合するヒト配列抗体が、アイソタイプ・スイッチングの結果生
ずることもあり、その結果、ヒト配列γ鎖（例えばγ1、γ2a、γ2B、又はγ3）
及びヒト配列軽鎖（例えばK）を含むようなヒト抗体が産生されることがある。
このようなアイソタイプ・スイッチングが起きたヒト配列抗体は、親和性成熟や
、抗原によるＢ細胞選択、特に二次（又は後続の）抗原刺激によるＢ細胞選択の
結果、しばしば一箇所以上の体細胞変異を、典型的には可変領域に、そしてしば
しばCDR内又はCDRのうちの約１０残基以内に、含有している。これらの高親和ヒ
ト配列抗体は、少なくとも1×109M-1、典型的には少なくとも5×109M-1、しばし
ば1×1010M-1、そして時には5×1010M-1乃至1×1011M-1又はそれ以上の結合親和
性を有しているであろう。
【０１０２】 本発明の別の態様は、樹状細胞に高親和性（例えば2×109M-1を越える親和性
など）で結合するヒトモノクローナル抗体を発現するハイブリドーマを作製する
のに利用できるマウス由来のＢ細胞に関するものである。このように、本発明の
別の実施例では、これらのハイブリドーマを用いて、樹状細胞に対する少なくと
も2×109M-1の親和定数（Ka）を有する免疫グロブリンを含む組成物を作製し、
このとき前記免疫グロブリンは、 （１）ヒトVL遺伝子セグメント及びヒトJLセグメントにコードされたポリペプ
チド配列に略、同一なポリペプチド配列を有する軽鎖可変領域、及び（２）ヒト
CL遺伝子セグメントにコードされたポリペプチド配列に略、同一なポリペプチド
配列を有する軽鎖定常領域、から成るヒト配列軽鎖と； （１）ヒトVH遺伝子セグメント、選択的にD領域、及びヒトJHセグメントにコ
ードされたポリペプチド配列に略、同一なポリペプチド配列を有する重鎖可変領
域、及びヒトCH遺伝子セグメントにコードされたポリペプチド配列に略、同一な
ポリペプチド配列を有する定常領域、から成るヒト配列重鎖と、 を含んで成る。
【０１０３】 樹状細胞に対する高親和ヒトモノクローナル抗体の開発は、ヒト免疫グロブリ
ン導入遺伝子を組み込んで含むゲノムを有するトランスジェニックマウスのうち
で、ヒト可変領域遺伝子セグメントのレパートリーを拡張する方法により、促進
されるが、このとき、当該の方法は、前記の組み込まれたヒト免疫グロブリン導
入遺伝子には存在しないV領域遺伝子セグメントを含むV遺伝子導入遺伝子をゲノ
ムに導入するステップを含む。しばしば、前記V領域導入遺伝子は、ヒトゲノム
で天然で起きたり、組換え法で別々にスプライシングされたりして、V遺伝子セ
グメントの順序が狂ったり省略されたりすることがあるように、ヒトVH又はVL（
VK）遺伝子セグメントアレイの一部分を含む酵母人工染色体である。しばしば少
なくとも５個又はそれ以上の機能的V遺伝子セグメントがこのYAC（酵母人工染色
体）上に含まれることがある。この違いにより、Vレパートリー拡張法でトラン
スジェニックマウスを作製することも可能であるが、このとき、このマウスは、
V領域導入遺伝子上に存在するV領域遺伝子セグメントにコードされた可変領域配
列と、ヒトIg導入遺伝子上にコードされたC領域と、を含む免疫グロブリン鎖を
発現することとなる。Vレパートリー拡張法により、少なくとも５個の異なるV遺
伝子を有するトランスジェニックマウスや、少なくとも約２４個又はそれ以上の
V遺伝子を含有するマウスも作製できる。いくつかのV遺伝子セグメントは、非機
能的（例えば偽遺伝子である、等々）であってもよく、このようなセグメントは
、残しても、又は必要に応じ、当業者に公知の組換え法で選択的に削除してもよ
い。
【０１０４】 マウス生殖細胞を操作して、J及びC遺伝子セグメントを含有するヒトIg導入遺
伝子には実質的に存在しないような拡張されたVセグメント・レパートリーを有
する機能的YACを含有させたら、この形質を伝播させ、他の遺伝的背景に交配し
てもよい。このような他の遺伝的背景には、拡張されたVセグメントレパートリ
ーを有する機能的YACを、異なるヒトIg導入遺伝子を有するマウス生殖細胞に交
配することが含まれる。拡張されたVセグメント・レパートリーを有する複数の
機能的YACを、ある一つの（又は複数の）ヒトIg導入遺伝子で働くよう、生殖細
胞に交配してもよい。ここではYAC導入遺伝子と言及するが、このような導入遺
伝子は、ゲノムに組み込まれたときに、酵母の自律的複製に必要な配列など、酵
母配列を実質的に欠いてもよく、このような配列は、選択に応じ、酵母の複製後
、必要でなくなった時点で（即ち、マウスES細胞又はマウスプロザイゴート（原
語：prozygote）に導入する前に）、遺伝子操作（例えば制限消化、及びパルス
−フィールド・ゲル電気泳動又は他の適した方法など）で、取り除いてもよい。
ヒト配列免疫グロブリン発現という形質を伝播させる方法には、ヒトIg導入遺伝
子と、選択によっては、拡張されたVセグメント・レパートリーを有する機能的Y
ACも有するトランスジェニックマウスを交配させる方法がある。VH及びVL遺伝子
セグメントの両方がYAC上にあってもよい。トランスジェニックマウスを、ヒトI
g導入遺伝子及び／又は他のヒトリンパ球たんぱくをコードする導入遺伝子を含
め、他のヒト導入遺伝子を持つバックグラウンドなど、担当医が希望する何らか
のバックグラウンドに交配してもよい。さらに本発明は、拡張されたV領域レパ
ートリーYAC導入遺伝子を有するトランスジェニックマウスが産生する高親和ヒ
ト配列免疫グロブリンも提供する。前述の記載では、本発明のトランスジェニッ
ク動物のある好適な実施例を解説したが、以下の４つの種類に分類された他の実
施例も、考察するところである： Ｉ．未再編成の重鎖及び再編成した軽鎖免疫グロブリン導入遺伝子を含有する
トランスジェニック動物； ＩＩ．未再編成の重鎖及び未再編成の軽鎖免疫グロブリン導入遺伝子を含有す
るトランスジェニック動物； ＩＩＩ．再編成した重鎖及び未再編成の軽鎖免疫グロブリン導入遺伝子を含有
するトランスジェニック動物；及び ＩＶ．再編成した重鎖及び再編成した軽鎖免疫グロブリン導入遺伝子を含有す
るトランスジェニック動物。
【０１０５】 これらの種類のトランスジェニック動物のうち、好適な優先順は以下の通り：
ＩＩ＞Ｉ＞ＩＩＩ＞ＩＶ（ただしこのとき内因性の軽鎖遺伝子（又は少なくとも
K遺伝子）は、相同組換え（又は他の方法）でノック・アウトしてある）及びＩ
＞ＩＩ＞ＩＩＩ＞ＩＶ（このとき内因性軽鎖遺伝子は、ノック・アウトされてお
り、対立遺伝子排除で劣性となってなくてはならない）である。
【０１０６】 ＩＩＩ．樹状細胞に結合する二重特異的／多重特異的分子 本発明のさらに別の実施例では、樹状細胞に対するヒトモノクローナル抗体、
又はその抗原結合部分を誘導体化するか、又は別の機能分子、例えば別のペプチ
ド又はタンパク質（例えばFab'フラグメント）に連結して、複数の結合部位又は
標的エピトープに結合する二重特異的又は多重特異的分子を作製することができ
る。例えば、本発明の抗体又は抗原結合部分を、例えば別の抗体、抗体フラグメ
ント、ペプチド又は結合ミメティックなどの一種以上の他の結合分子に、（例え
ば化学結合、遺伝子融合、非共有結合による結合、又は他の結合などで）機能的
に連結することができる。
【０１０７】 従って、本発明は、樹状細胞に対する少なくとも一つの第一結合特異的部分と
、第二標的エピトープに対する第二結合特異的部分とを含む二重特異的及び多重
特異的分子を包含するものである。本発明のある好適な実施例では、前記第二標
的エピトープは、例えば腫瘍細胞抗原、微生物抗原、ウィルス抗原又は自己抗原
など、標的細胞上の抗原である。これらの二重特異的及び多重特異的分子は、標
的細胞を樹状細胞の標的に決定することで、このような標的細胞又は標的細胞抗
原に対する免疫応答を樹状細胞が調節できるようにする。
【０１０８】 本発明の別の実施例では、前記第二標的エピトープはFcγRI(CD64）又はヒトF
cα受容体（CD89）などのFc受容体である。従って、本発明は、FcγR、FcαR又
はFcεR発現エフェクター細胞（例えば単球、マクロファージ又は多核白血球（P
MN））、と樹状細胞の両方に結合できる二重特異的及び多重特異的分子も包含す
る。これらの二重特異的及び多重特異的分子は、エフェクター細胞の標的を樹状
細胞に決定することで、本発明のヒトモノクローナル抗体同様、例えば樹状細胞
のファゴサイトーシス、抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ADCC）、サイトカイ
ン放出、又はスーパーオキシドアニオンの生成などのFc受容体媒介性エフェクタ
ー細胞活性を惹起できるであろう。
【０１０９】 本発明の二重特異的及び多重特異的分子には、高Fc結合特異的部分又は抗標的
細胞抗原や抗樹状細胞結合特異的部分に加え、さらに第三結合特異的部分を含め
ることもできる。ある実施例では、この第三結合特異的部分は、例えば細胞傷害
活性に関与する表面タンパクに結合して標的細胞に対する免疫応答を増加させる
分子など、抗エンハンスメント因子（EF）部分である。この「抗エンハンスメン
ト因子部分」は、抗原又は受容体などの特定の分子に結合することで、Fc受容体
、標的細胞抗原又は樹状細胞に対する結合決定基の作用を高めるような、抗体、
機能的抗体フラグメント又はリガンドであってよい。この「抗エンハンスメント
因子部分」はFc受容体、標的細胞抗原又は樹状細胞に結合するものでもよい。あ
るいは、抗エンハンスメント因子部分は、第一及び第二結合特異的部分が結合す
る先の物質とは異なる物質に結合してもよい。例えば、抗エンハンスメント因子
部分は、標的細胞に対する免疫応答増加につながるような（CD2、CD3、CD8、CD2
8、CD4、CD40、ICAM-1)を介して）細胞傷害性Ｔ細胞又は他の免疫細胞に結合し
てもよい。
【０１１０】 一実施例では、本発明の二重特異的及び多重特異的分子は、例えばFab、Fab'
、F(ab')2、Fv又は一本鎖Fvなどを含め、少なくとも一つの抗体又はその抗体フ
ラグメントを結合特異的部分として含んで成る。当該抗体はさらに、（言及をも
ってその内容をここに編入することを明示しておく）ラドナーらの１９９０年８
月７日発行の米国特許第４，９４６，７７８号に解説されたFv又は一本鎖コンス
トラクトなど、軽鎖又は重鎖二量体、又は何らかのその最小フラグメントであっ
てもよい。
【０１１１】 ある実施例では、本発明の二重特異的及び多重特異的分子は、例えば腫瘍細胞
抗原、微生物抗原、ウィルス抗原又は自己抗原など、標的細胞上の抗原に対する
結合特異的部分と、樹状細胞に対する第二結合特異的部分とを含んで成る。
【０１１２】 別の実施例では、本発明の二重特異的及び多重特異的分子は、エフェクター細
胞の表面上にあるFcγR又はFcαRに対する結合特異的部分と、樹状細胞に対する
第二結合特異的部分とを含んで成る。
【０１１３】 ある一つの実施例では、Fc受容体に対する結合特異的部分を、その結合がヒト
免疫グロブリンＧ（IgG）の遮断を受けないヒトモノクローナル抗体で提供する
。ここで用いる用語「IgG受容体」とは、１番染色体上にある８個のγ鎖遺伝子
のいずれかを言う。これらの遺伝子は、FcγRI（CD64）、FcγRII(CD32）、及び
FcγRIII（CD16）という三種類のFcγ受容体に分類される合計１２種の膜貫通又
は可溶性受容体アイソホームをコードしている。ある好適な実施例では、当該Fc
γ受容体はヒト高親和性FcγRIである。このヒトFcγRIは72kDaの分子であり、
単量体IgGに高い親和性（108−109M-1）を呈する。
【０１１４】 これらの好適なモノクローナル抗体の生成及び特徴付けは、ファンガーらのPC
T 出願WO 88/00052 及び米国特許第4,954,617号（これらの教示全体を言及をも
ってここに編入する）に解説されている。これらの抗体は、FcγRI、FcγRII又
はFcγRIIIに、その受容体のFcγ結合部位とは異なる部位にあるエピトープで結
合するため、生理レベルのIgGの遮断を実質的に受けない。本発明で有用な具体
的な抗FcγRI抗体は、mAb 22、mAb 32、mAb 44、mAb 62及びmAb 197である。mAb
32を産生するハイブリドーマはアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
ATCCから受託番号No. HB9469で入手できる。抗 FcγRI mAb 22、mAb22のF(ab'）2 フラグメントはメダレックス社（ニュージャージー州アナンデール）から得る
ことができる。他の実施例では、抗Fcγ受容体抗体はヒト化型のモノクローナル
抗体22 (H22)である。H22抗体の生成及び特徴付けは、Graziano, R.F. et al. (
1995) J. Immunol 155 (10): 4996-5002 及びPCT/US93/10384に解説されている
。H22 抗体産生細胞系はアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションに１９
９２年１１月４日に指定番号HA022CL1で寄託されており、受託番号CRL 11177を
受けている。
【０１１５】 さらに別の好適な実施例では、Fc受容体に対する結合特異的部分を、その結合
は免疫グロブリンＡ（IgA）の遮断を受けないことが好ましい、例えばFcアルフ
ァ受容体（FcαRI（CD89））などのヒトIgA受容体に結合する抗体に提供させる
。用語「IgA」には、１９番染色体上にある一個のα遺伝子（FcαRI）の遺伝子
産物が含まれるものと、意図されている。この遺伝子は、55乃至110kDaの、選択
的スプライシングが起きる複数の膜貫通型アイソホームをコードしていることが
知られている。FcαRI(CD89)は単球／マクロファージ、好酸性及び好中性顆粒球
上に構成的に発現するが、非エフェクター細胞集団には発現しない。FcαRIは中
程度の親和性（ほぼ5×107M-1) を両IgA1及びIgA2に対して有するが、この親和
性は、G-CSF又はGM-CSFなどのサイトカインに暴露したときに上昇する (Morton,
H.C. et al. (1996) Critical Reviews in Immunology 16:423-440)。A3、A59
、A62及びA77と同定された四種類のFcαRI特異的モノクローナル抗体が、FcαRI
にIgAリガンド結合ドメイン以外の箇所で結合するが、その解説がMonteiro, R.C
. et al., 1992, J. Immunol. 148:1764になされている。
【０１１６】 FcαRI及びFcγRIは本発明で用いるのに好適なトリガー受容体である。なぜな
らこれらは（１）主に、単球、PMN、マクロファージ及び樹状細胞などの免疫エ
フェクター細胞上で発現し；（２）高レベル（例えば細胞一個当たり 5,000-100
,000）で発現し；（３）細胞傷害性活性（例えばADCC、ファゴサイトーシスなど
）の媒介因子であり；（４）自己抗原を含め、それらが標的とする抗原の抗原提
示促進を媒介する、からである。
【０１１７】 他の実施例では、さらに本発明の二重特異的及び多重特異的分子は、樹状細胞
上の抗原など、樹状細胞を、結合などにより認識する結合特異的部分を含んで成
る。ある好適な実施例では、当該結合特異的部分を、本発明のヒトモノクローナ
ル抗体に提供させる。
【０１１８】 ここで用いる「エフェクター細胞特異抗体」とは、エフェクター細胞のFc受容
体に結合する抗体又は機能的抗体フラグメントを言う。本発明で用いるのに好適
な抗体は、エフェクター細胞のFc受容体に、内因性免疫グロブリンが結合しない
箇所で結合するものである。
【０１１９】 ここで用いる用語「エフェクター細胞」とは、免疫応答の認識段階及び活性化
段階ではなく、免疫応答のエフェクター段階に関与する免疫細胞を言う。免疫細
胞の例には、骨髄系又はリンパ球などのリンパ系由来の細胞（例えばＢ細胞及び
細胞溶解性Ｔ細胞（CTL）を含むＴ細胞など）、キラー細胞、ナチュラルキラー
細胞、マクロファージ、単球、好酸球、好中球、多核白血球、顆粒球、マスト細
胞、及び好塩基球、がある。いくつかのエフェクター細胞は、特異的Fc受容体を
発現して、特異的免疫機能を行う。好適な実施例では、エフェクター細胞は、例
えば抗体依存的細胞媒介性細胞傷害性（ADCC）を誘導できる好中球など、ADCCを
誘導できるものである。例えば、FcRを発現する単球、マクロファージは、標的
細胞の特異的致死や、免疫系の他の成分に対する抗原提示、又は抗原を提示した
細胞への結合に関与している。他の実施例では、エフェクター細胞は、標的抗原
、標的細胞又は微生物を貪食することができるものである。エフェクター細胞上
の特定のFcRの発現は、サイトカインなどの体液性因子で調節されることがある
。例えば、FcγRIの発現は、インターフェロンガンマ（IFN-γ）で上方調節され
ることが判明している。このように発現が高められると、標的に対するFcγRI担
持細胞の細胞傷害活性が増す。エフェクター細胞は標的抗原又は標的細胞を貪食
又は溶解させることができる。
【０１２０】 「標的細胞」とは、本発明の組成物（例えばヒトモノクローナル抗体、二重特
異的又は多重特異的分子など）の標的とすることのできる、被験体（ヒト又は動
物など）内の何らかの好ましくない細胞を意味する。ある実施例では、当該標的
細胞は樹状細胞である。別の実施例では、標的細胞には、腫瘍細胞、微生物病原
体、ウィルス、又はウィルス感染細胞、が含まれる。
【０１２１】 ヒトモノクローナル抗体が好ましいが、本発明の二重特異的又は多重特異的分
子に利用できる他の抗体は、マウス、キメラ及びヒト化モノクローナル抗体であ
る。
【０１２２】 キメラマウス−ヒトモノクローナル抗体（即ちキメラ抗体）は、当業で公知の
組換えDNA技術により作製できる。例えば、マウス（又は他の種の）モノクロー
ナル抗体分子のFc定常領域をコードする遺伝子を制限酵素で消化して、マウスFc
をコードする領域を取り除き、ヒトFc定常領域をコードする遺伝子の同等の部分
に置換する。（例えばロビンソンらの国際特許公報PCT/US86/02269; アキラらの
ヨーロッパ特許出願184,187号; タニグチ M.らのヨーロッパ特許出願171,496号;
モリソンらのヨーロッパ特許出願173,494号; ノイベルガーらの国際出願WO 86
/01533; キャビリーらの米国特許第4,816,567号; キャビリーらのヨーロッパ特
許出願125,023号; Better et al. (1988 Science 240:1041-1043); Liu et al.
(1987) PNAS 84:3439-3443; Liu et al., 1987, J. Immunol. 139:3521-3526; S
un et al. (1987) PNAS 84:214-218; Nishimura et al., 1987, Canc. Res. 47:
999-1005; Wood et al. (1985) Nature 314:446-449;及びShaw et al., 1988, J
. Natl Cancer Inst. 80:1553-1559を参照されたい）。
【０１２３】 キメラ抗体はさらに、Fv可変領域のうちで抗原結合に直接関与しない配列を、
ヒトFv可変領域由来の同等の配列に置換することでも、ヒト化することができる
。ヒト化キメラ抗体の総括的レビューはMorrison, S. L., 1985, Science 229:1
202-1207 及びOi et al., 1986, BioTechniques 4:214に記載がある。これらの
方法には、重鎖又は軽鎖の少なくとも一方の免疫グロブリンFV可変領域の全部又
は一部をコードする核酸配列を分離、操作及び発現させることが含まれる。この
ような核酸の供給源は当業者に公知であり、例えば抗GPIIbIIIa抗体産生ハイブ
リドーマである7E3から得てもよい。次に、このキメラ抗体又はそのフラグメン
トをコードする組換えDNAを、適当な発現ベクタ内にクローンしてよい。あるい
は、適したヒト化抗体は、CDR置換法、米国特許第5,225,539号; Jones et al. 1
986 Nature 321:552-525; Verhoeyan et al. 1988 Science 239:1534; 及びBeid
ler et al. 1988 J. Immunol. 141:4053-4060で作製することもできる。
【０１２４】 ある特定のヒト抗体のCDRの全てを、非ヒトCDRの少なくとも一部分に置換した
り、又は、CDRのうちのいくつかだけを、非ヒトCDRに置換してもよい。必要なの
は、ヒト化抗体をFc受容体へ結合させるのに必要な数のCDRを置換するだけであ
る。
【０１２５】 ヒト抗体のCDRの少なくとも一部分を、非ヒト抗体を由来とするCDRに置換でき
れば、いかなる方法でも、抗体をヒト化することができる。ウィンター氏は本発
明のヒト化抗体を調製するのに利用できそうな方法を解説している（言及をもっ
てその内容をここに編入することを明示しておく、１９８７年３月２６日出願の
英国特許出願GB 2188638A）。ヒトCDRは、非ヒトCDRに、オリゴヌクレオチド部
位指定変異誘発法を利用して、国際出願WO 94/10332 題名：Humanized Antibodi
es to Fc Receptors for Immunoglobulin G on Human Mononuclear Phagocytes
が解説するとおりに置換してもよい。
【０１２６】 さらに、特定のアミノ酸を置換、欠失又は追加したようなキメラ及びヒト化抗
体も、本発明の範囲内にある。具体的には、好適なヒト化抗体は、アミノ酸置換
をフレームワーク領域に有することで、抗原への結合を高めるなどを狙ったもの
である。例えば、マウスCDRを有するヒト化抗体では、ヒトフレームワーク領域
にあるアミノ酸を、マウス抗体の相当する位置にあるアミノ酸に置換することが
できる。このような置換により、場合によっては、抗原に対するヒト化抗体の結
合が高まることが知られている。アミノ酸を追加、欠失、又は置換してある抗体
をここでは、改変された抗体又は変更された抗体と言及する。
【０１２７】 改変された抗体という用語には、さらに、例えばモノクローナル抗体、キメラ
抗体、及びヒト化抗体など、抗体のうちの数部分を欠失、追加又は置換すること
で改変された抗体が含まれるものと、意図されている。例えば、定常領域を欠失
させて、抗体の血清半減期などの半減期、安定性又は親和性を高めるはずの定常
領域と置換する改変を、抗体に行うことができる。いかなる改変も、その二重特
異的及び多重特異的分子が、FcγRに特異的な少なくとも一つの抗原結合領域を
有し、かつ、少なくとも一つのエフェクター機能を惹起するものであれば、本発
明の範囲内にある。
【０１２８】 本発明の二重特異的及び多重特異的分子は、化学的技術（例えばD. M. Kranz
et al. (1981) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:5807)、「ポリオーマ」技術（
レディングの米国特許第4,474,893号を参照されたい)、又は組換えDNA技術を用
いて、作製できる。
【０１２９】 具体的には、本発明の二重特異的及び多重特異的分子は、構成する結合特異的
部分、例えば抗FcR及び抗樹状細胞結合特異的部分など、を当業で公知の、ここ
に開示した実施例に解説した方法を用いて共役させることで、調製できる。例え
ば、当該二重特異的及び多重特異的分子の各結合特異的部分を別々に作製してか
ら、後に相互に共役してもよい。当該結合特異的部分がタンパク質又はペプチド
である場合、多種のカップリング又は架橋剤を共有結合的な共役に利用できる。
架橋剤の例には、プロテインＡ、カルボジイミド、N-スクシンイミジル-S-アセ
チル-チオアセテート(SATA)、5,5'-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸) (DTNB)、o-
フェニレンジマレイミド(oPDM)、N-スクシンイミジル-3-(2-ピリジルジチオ)プ
ロピオネート(SPDP)、及びスルホスクシンイミジル4-(N-マレイミドメチル) シ
クロヘキサン-1-カルボキシレート(スルホ-SMCC) (例えばKarpovsky et al. (19
84) J. Exp. Med. 160:1686; Liu, MA et al. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 82:8648を参照されたい)。他の方法には、ポーラスの説いた方法(Behring I
ns. Mitt. (1985) No. 78, 118-132); Brennan et al. (Science (1985) 229:81
-83)、及びGlennie et al. (J. Immunol. (1987) 139: 2367-2375)がある。好適
な共役剤は、両者ともピアース・ケミカル社（イリノイ州ロックフォード）から
入手可能なSATA及びスルホ-SMCCである。
【０１３０】 結合特異的部分が複数の抗体（例えば二つのヒト化抗体など）である場合、こ
れらは、二本の重鎖のＣ末端ヒンジ領域のスルフヒドリル結合を介して共役させ
ることができる。特に好適な実施例では、このヒンジ領域に奇数、好ましくは一
つ、のスルフヒドリル残基を含有させる修飾を、共役前に行う。
【０１３１】 あるいは、両方の結合特異的部分を同じベクターにコードさせ、同じホスト細
胞で発現及び集合させることもできる。この方法は、 当該二重特異的及び多重
特異的分子が mAb x mAb、mAb x Fab、Fab x F(ab')2又はリガンドx Fab融合た
んぱくである場合に、特に便利である。本発明の二重特異的及び多重特異的分子
、例えば二重特異的分子、は、一本鎖分子でもよく、例えば一本鎖二重特異的抗
体や、一本鎖抗体及び結合決定基を含んで成る一本鎖二重特異的分子や、又は、
二つの結合決定基を含んで成る一本鎖二重特異的分子であってもよい。さらに二
重特異的及び多重特異的分子は一本鎖分子でもよく、又は、少なくとも二つの一
本鎖分子を含んで成るものでもよい。二重特異的及び多重特異的分子を調製する
方法は、例えば米国特許第5,260,203号；米国特許第5,455,030号；米国特許第4,
881,175号；米国特許第5,132,405号；米国特許第5,091,513号；米国特許第5,476
,786号；米国特許第5,013,653号；米国特許第5,258,498号；及び米国特許第5,48
2,858号に解説されている。
【０１３２】 本二重特異的及び多重特異的分子の、それらの特異的標的への結合は、酵素結
合免疫吸着検定法(ELISA）、ラジオイムノアッセイ（RIA)、FACS解析、バイオ検
定（例えば成長抑制）、又はウェスタン・ブロット検定法で確認できる。これら
の検定法のそれぞれは、一般に、関心の対象であるタンパク質−抗体複合体の存
在を、目的の複合体に特異的な標識付試薬（例えば抗体）を利用して検出するも
のである。例えば、前記FcR−抗体複合体は、例えば抗体−FcR複合体を認識して
特異的に結合する酵素結合抗体又は抗体フラグメントなどを利用して、検出でき
る。あるいは、複合体は多種の他の免疫検定法のいずれかを利用しても、検出で
きる。例えば、抗体を放射性標識し、ラジオイムノアッセイ（RIA）で用いるこ
ともできる（例えば言及をもってここに編入することとするWeintraub, B., Pri
nciples of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Ass
ay Techniques, The Endocrine Society, March, 1986を参照されたい）。この
放射性同位体を、γカウンター又はシンチレーションカウンターを利用したり、
又はオートラジオグラフィなどの手段で、検出することができる。
【０１３３】 ＩＶ．抗体共役体／イムノトキシン 別の態様では、本発明は、細胞毒、薬物又は放射性同位体などの治療的部分に
共役させたヒト抗樹状細胞モノクローナル抗体又はその一フラグメントを特徴と
する。細胞毒に共役してあるようなこれらの抗体共役体は「イムノトキシン」と
呼ばれる。細胞毒又は細胞傷害性薬剤の例には、細胞にとって（例えば殺すなど
）有害なあらゆる物質が含まれる。例には、タキソール、シトカラシンＢ、グラ
ミシジンＤ、臭化エチジウム、エメチン、ミトマイシン、エトポシド、テノポシ
ド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノル
ビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン
、アクチノマイシンＤ、1-デヒドロテストステロン、糖質コルチコイド、プロカ
イン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びプロマイシン及びこ
れらの類似体又は同族体がある。治療的作用物質には、限定はしないが、代謝拮
抗物質（例えばメトトレキセート、6-メルカプトプリン、6-チオグアニン、シタ
ラビン、5-フルオロウラシル、デカルバジン）、アルキル化剤（例えばメクロレ
トアミン（原語mechlorethamine）チオテパ、クロラムブシル、メルファラン、
カルムスチン(BSNU)及びロムスチン(CCNU)、シクロトスファミド、ブスルファン
、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ミトマイシンＣ、及びcis-ジク
ロロジアミンプラチナム（II) (DDP)シスプラチン）、アントラサイクリン（例
えばダウノルビシン（前のダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（
例えばダクチノマイシン（前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマ
イシン、及びアントラマイシン（AMC))、及び抗有糸分裂剤（例えばビンクリス
チン及びビンブラスチン）がある。本発明の抗体を、放射性ヨウ素などの放射性
同位体に共役させて、自己免疫又は炎症性疾患や移植片対宿主疾患などの樹状細
胞関連疾患を治療する細胞傷害性放射性医薬品を作製することもできる。
【０１３４】 本発明の抗体共役体は、所定の生物学的応答を改変するのに利用できるが、そ
の薬物成分は、古典的な化学的治療薬に制限されるものと、捉えられてはならな
い。例えば、本薬物成分は所望の生物学的活性を持つタンパク質又はポリペプチ
ドであってもよい。このようなタンパク質には、例えば、酵素活性のある毒素、
又はその活性フラグメント、例えばアブリン、リシンＡ、シュードモナスエキソ
トキシン、又はジフテリア毒素；腫瘍壊死因子又はインターフェロン−γなどの
タンパク質；又は、例えばリンホカイン、インターロイキン-1（「IL-1」）、イ
ンターロイキン-2（「IL-2」）、インターロイキン-6（「IL-6」）、顆粒球マク
ロファージコロニー刺激因子（「GM-CSF」）、顆粒球コロニー刺激因子（「G-CS
F」）、又は他の成長因子などの生物学的応答修飾因子、が含まれよう。
【０１３５】 このような治療的成分を抗体に共役させる技術は当業で公知であり、例えばAr
non et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cance
r Therapy", in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al.
(eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985); Hellstrom et al., "Antibo
dies For Drug Delivery", in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson
et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987); Thorpe, "Antibody
Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review", in Monoclona
l Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al.
(eds.), pp. 475-506 (1985); "Analysis, Results, And Future Prospective O
f The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy", in Mo
noclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (ed
s.), pp. 303-16 (Academic Press 1985), 及び Thorpe et al., "The Preparat
ion And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates", Immunol. Rev
., 62:119-58 (1982)を参照されたい。
【０１３６】 別の態様では、樹状細胞に特異的なヒト抗体は、例えば腫瘍細胞、エフェクタ
ー細胞又は微生物病原体などの標的全細胞を、樹状細胞に直接狙わせるのに利用
できる。抗樹状細胞抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば本発明のヒト
樹状細胞特異抗体又はその抗原結合フラグメントをコードする核酸配列を含有す
るベクタで細胞をトランスフェクト又は形質導入するなどにより、細胞表面上に
直接発現させることができる。これは、例えば、膜貫通ドメインとヒト抗樹状細
胞抗体又はその抗原結合フラグメントとを含有する融合タンパク質をコードする
核酸で、標的細胞をトランスフェクトすれば、可能である。このような核酸、融
合タンパク質、及びこのような融合タンパク質を発現する細胞の作製法は、例え
ば米国特許第09/203,958号（その内容全文を、この言及をもってここに編入する
こととする）に解説されている。あるいは、抗樹状細胞抗体又はその抗原結合フ
ラグメントを、細胞又は病原体に、化学的リンカー、脂質タグ、又は他の関連法
を利用して、結合させることもできる (deKruif, J. et al. (2000) Nat. Med.
6:223-227; Nizard, P. et al. (1998) FEBS Lett. 433:83-88)。表面に抗樹状
細胞抗体又はその抗原結合フラグメントが繋ぎ止められた細胞を用いると、腫瘍
細胞又は微生物病原体など、その細胞に対する特異的免疫応答を誘導できよう。
【０１３７】 Ｖ．薬学的組成物 別の態様では、本発明は、一種又は組合せになった本発明のヒトモノクローナ
ル抗体又はその抗原結合部分を、薬学的に許容可能な担体と一緒に調剤された形
で含有する薬学的組成物などの治療用組成物を提供するものである。このような
組成物には、さらに、例えば他の抗体、細胞毒又は薬物（免疫抑制剤など）など
の他の治療用試薬を含めることができ、単独で投与しても、又は、放射線などの
他の治療法と併用してもよい。
【０１３８】 ある実施例では、二種以上のヒト抗樹状細胞モノクローナル抗体を含んで成る
、補完的活性を有するヒト抗樹状細胞モノクローナル抗体を、医薬組成物などと
して組み合わせて用いる。例えば、エフェクター細胞の存在下で樹状細胞の高度
に効果的な致死を媒介するヒトモノクローナル抗体を、樹状細胞の成長を抑制す
る別のヒトモノクローナル抗体と組み合わせることができる。別の実施例では、
樹状細胞の内部に素早く移行するヒトモノクローナル抗体を、例えば免疫刺激性
サイトカインの放出など、樹状細胞の抗原提示細胞活性を誘導する別のヒトモノ
クローナル抗体と、組み合わせることもできる。
【０１３９】 別の実施例では、本組成物は、（例えばFc受容体に対する少なくとも一つの結
合特異的部分と、樹状細胞に対する少なくとも一つの結合特異的部分とを含有す
るなどの）本発明の二重特異的又は多重特異的分子を、一種又は組み合わせて含
む。
【０１４０】 さらに別の実施例では、本組成物は、樹状細胞に対する少なくとも一つの結合
特異的部分を、別の分子、例えば細胞毒、又は標的細胞上の抗原などの抗原、に
機能的に連結させて含む。
【０１４１】 ここで用いる「薬学的に許容可能な担体」には、生理学的に適合性ある、あら
ゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗カビ剤、等張剤及び吸収遅延剤
、等々が包含される。好ましくは、当該担体は、（注射又は輸注などによる）静
脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊髄又は表皮投与に適しているとよい。投与経路
によっては、有効化合物、即ち抗体、二重特異的及び多重特異的分子、を、当該
化合物を失活させそうな酸又は他の天然条件の作用から当該化合物を保護する物
質で被膜してもよい。
【０１４２】 「薬学的に許容可能な塩」とは、親化合物の所望の生物学的活性が残っており
、望ましくない毒性作用を与えないような塩を言う（例えば Berge, S.M., et a
l. (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19を参照されたい）。このような塩の例には、
酸添加塩及び塩基添加塩がある。酸添加塩には、無毒性の無機酸、例えば塩酸、
硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン、等々から誘導されるも
のや、脂肪族モノカルボン酸及びジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、水酸
化アルカン酸、芳香族の酸、脂肪族及び芳香族のスルホン酸、等々の非毒性の無
機酸から誘導されるものがある。塩基添加塩には、例えばナトリウム、カリウム
、マグネシウム、カルシウム等々のアルカリ土類金属から誘導されるものや、N,
N'-ジベンジルエチレンジアミン、N-メチルグルカミン、クロロプロカイン、コ
リン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカイン、等々の非毒性の有
機アミンから誘導されるものがある。
【０１４３】 本発明の組成物は、当業で公知の多種の方法で投与することができる。当業者
であれば理解されるであろうが、投与の経路及び／又は形態は、所望の結果に応
じて様々であろう。有効化合物は、インプラント、経皮用パッチ、及びマイクロ
封入送達系を含め、制御放出製剤など、有効化合物が急速に放出されないように
保護する担体と一緒に調製することができる。酢酸ビニルエチレン、ポリ無水物
、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸など、生
分解性、生体適合性のポリマーを利用できる。このような製剤を調製する数多く
の方法に特許が認められているか、又は、当業者に公知である。例えば Sustain
ed and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Mar
cel Dekker, Inc., New York, 1978を参照されたい。
【０１４４】 特定の投与経路で本発明の化合物を投与する場合、当該化合物を、その失活を
防ぐような物質で被膜するか、又は当該化合物をそのような物質と同時に投与す
ることが必要かも知れない。例えば、当該化合物をリポソーム又は希釈剤などの
適した担体に入れて、被験体に投与してもよい。薬学的に許容可能な希釈剤には
、 生理食塩水及び緩衝水溶液がある。リポソームには、水中油中水CGFエマルジ
ョンや、従来のリポソームがある (Strejan et al. (1984) J. Neuroimmunol. 7
:27)。
【０１４５】 薬学的に許容可能な担体には、無菌の水溶液又は分散液や、無菌の注射用溶液
又は分散液の即時調製用の無菌粉末がある。薬学的に活性な物質のためのこのよ
うな媒質及び作用薬の利用は当業者に公知である。従来の媒質又は作用薬が当該
有効化合物にとって不適合でない限り、本発明の医薬組成物中へのその利用は考
察されたところである。補助的な有効化合物も、当該組成物中に組み込んでよい
。
【０１４６】 治療用組成物は、典型的には、製造及び保管条件下で無菌かつ安定でなければ
ならない。当該組成物は、高い薬物濃度に適した溶液、マイクロエマルジョン、
リポソーム、又は他の秩序ある構造として調製することができる。担体は、例え
ば水、エタノール、ポリオル（例えばグリセロール、プロピレングリコール及び
液体ポリエチレングリコール、等々）及びこれらの適した混合物などを含有する
溶媒又は分散媒であってよい。適正な流動性は、例えばレシチンなどのコーティ
ングを利用したり、分散液の場合には必要な粒子の大きさを維持したり、そして
界面活性剤を利用するなどして、維持できる。多くの場合、糖類、マンニトール
、ソルビトールなどの多価アルコール、又は塩化ナトリウムなどの等張剤を組成
物中に含めることが好ましいであろう。注射用組成物の吸収を長引かせるには、
モノステアリン酸塩及びゼラチンなど、吸収を遅らせる作用薬を組成物中に含め
るとよい。
【０１４７】 無菌の注射用溶液は、必要量の有効化合物を、必要に応じて上に列挙した成分
のうちの一種又は組合せと一緒に適した溶媒に組み込んだ後、滅菌マイクロ濾過
を行うことで、調製できる。一般に、分散液は、塩基性の分散媒と上に列挙した
うちの必要な他の成分を含有する無菌の賦形剤に、有効化合物を取り入れて調製
されている。無菌の注射用溶液の調製用の無菌粉末の場合、好適な調製法は、有
効成分と、予め無菌濾過されたその溶液から出た付加的な所望の成分との粉末が
生ずる真空乾燥及び凍結乾燥（凍結乾燥）である。投薬計画は、最適な所望の応
答（例えば治療上の応答）が得られるよう、調節する。例えば、一回の大量投与
を行ってもよいが、複数回に分けた用量を時間をかけて投与してもよく、又は、
用量を、治療状況の緊急度が示す通りに比例的に増減させてもよい。非経口用組
成物を単位剤形で調合すると、投与が容易となり、また投薬量が均一となって特
に便利である。ここで用いる単位剤形とは、治療しようとする被験体に特に単位
投薬量として合わせた物理的に個別の単位を言う。このとき各単位は、必要な薬
学的担体と関連して所望の治療的効果を得るよう計算された所定量の有効化合物
を含有する。本発明の単位剤形の詳細は、（ａ）当該有効化合物の固有の性質、
及び、達成しようとする特定の治療効果、及び（ｂ）このような有効化合物を個
人の感受性処置のために調合する当業に内在する限界、の支配を受け、また直接
依存する。
【０１４８】 薬学的に許容可能な抗酸化剤の例には、：（１）アスコルビン酸、塩酸システ
イン、二硫化ナトリウム、重二硫化ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、等々の水溶
性抗酸化剤、（２）アスコルビン酸パルミテート、ブチルヒドロキシアニソール
（ＢＨＡ）、ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、レシチン、没食子酸プロピ
ル、アルファ−トコフェロール、等々の油溶性抗酸化剤、及び、（３）例えばク
エン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ソルビトール、酒石酸、リン酸
、等々といった金属キレート剤、がある。
【０１４９】 治療用組成物の場合、本発明の調剤には、経口、鼻孔、局所（バッカル及び舌
下剤を含む）、直腸、膣及び／又は非経口投与に適したものが含まれる。調剤は
便利なように単位剤形で提供してもよく、製薬業で公知のいずれの方法で調製し
てもよい。一回分の用量型を作製するのに担体材料と組み合わせることのできる
有効成分の量は、治療しようとする被験体、及び特定の投与形態に応じて様々で
あろう。一回分の用量型を作製するのに担体材料と組み合わせることのできる有
効成分の量は、一般的には、治療効果を生じる組成物量となるであろう。概して
、１００パーセントのうち、この量は有効成分で約０．０１パーセントから約９
９パーセント、好ましくは約０．１パーセントから約７０パーセント、最も好ま
しくは約１パーセントから約３０パーセントの範囲になるであろう。
【０１５０】 膣投与に適した本発明の調剤には、に当業で適していることが公知である担体
をさらに含有するペッサリ、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォーム、
又はスプレー調剤がある。本発明の組成物の局所又は経皮投与に向けた投薬形に
は、粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、溶液、パ
ッチ、及び吸入剤が含まれる。有効化合物は無菌条件下で薬学的に許容可能な担
体に混合してもよく、そして、必要であれば何らかの保存剤、緩衝剤、及び推進
薬に混合してもよい。
【０１５１】 ここで用いられる「非経口投与」及び「非経口的に投与する」という文言は、
多くの場合注射による、腸内及び局所投与以外の投与形態を意味し、限定的な意
味はないが、静脈内、筋肉内、動脈内、鞘内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹
腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、髄腔内、硬膜外及び
胸骨内注射及び輸注が含まれる。
【０１５２】 本発明の医薬組成物中に用いてよい適した水性及び非水性の担体の例には、水
、エタノール、ポリオル（例えばグリセロール、プロピレングリコール、ポリエ
チレングリコール、等々）、及びこれらの適した混合物、オリーブ油などの植物
油、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルがある。適正な流動性
は、例えば、レシチンなどのコーティング材料を利用したり、分散液の場合には
必要な粒子の大きさを維持したり、界面活性剤を用いるなどして維持することが
できる。
【０１５３】 これらの組成物には、さらに、保存剤、湿潤剤、乳化剤及び分散剤などのアジ
ュバントを含めてもよい。微生物の存在を防止するには、上記の滅菌法と、多様
な抗菌剤、及び抗カビ剤、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノールソル
ビン酸、等々などを含めることの両方を行うと確実にできよう。さらに、糖類、
塩化ナトリウム、等々の等張剤を組成物中に含めるのも好ましいかも知れない。
加えて、注射可能な薬剤形の吸収を長引かせるには、モノステアリン酸アルミニ
ウム及びゼラチンなど、吸収を送らせる作用薬を含めれば可能である。
【０１５４】 本発明の化合物を、ヒト及び動物に医薬として投与する場合、それらを、単独
で与えても、又は、薬学的に許容可能な担体と組み合わせて０．０１から９９．
５％（より好ましくは０．１から９０％）の有効成分を含有する医薬組成物とし
て与えてもよい。
【０１５５】 選択した投与経路に関係なく、適した水和化形で用いてもよい本発明の化合物
、及び／又は、本発明の医薬組成物は、当業者に公知の従来の方法によって薬学
的に許容可能な剤形に調合する。
【０１５６】 本発明の医薬組成物中の有効成分の実際の投薬量は、患者にとって毒性となる
ことなく、特定の患者、組成物、及び投与形態にとって所望の治療的応答を得る
のに効果的である有効成分量が得られるように、変更してもよい。選択される投
薬量は、用いる本発明の特定の組成物又はそのエステル、塩もしくはアミドの活
性、投与経路、投与時間、用いる特定の化合物の排出速度、治療期間、用いる特
定の化合物と組み合わせて用いるその他の薬物、化合物及び／又は材料、治療し
ようとする患者の年齢、性別、体重、状態、全身の健康及び医療歴、及び、医業
で公知の同様のファクターを含め、様々な薬物動態学的ファクターに依存するで
あろう。
【０１５７】 当業で通常の技術を有する医師又は獣医であれば、必要な医薬組成物の効果的
な量を容易に決定でき、処方することができる。例えば、この医師又は獣医は、
医薬組成物中で用いる本発明の化合物の量を、所望の治療効果を得るには少ない
量から開始し、所望の効果が得られるまでこの投薬量を次第に増加させていって
もよいであろう。一般的には、本発明の組成物の適した一日当たりの用量は、治
療効果を生じるには最も少ない量である当該化合物量となるであろう。このよう
な有効量は、一般的には、上述したようなファクターに依存することであろう。
投与は静脈内、筋肉内、腹腔内、又は皮下的に行われるのが好ましく、好ましく
は標的部位に近位で行われるとよい。必要に応じて、効果的な一日当たりの用量
の治療用組成物を、一日かけて、選択に応じて単位剤形で、適当な間隔で２回、
３回、４回、５回、６回又はそれ以上の小用量に、別々に分割して投与してもよ
い。本発明の化合物を単独で投与することも可能であるが、当該化合物を薬剤調
剤（組成物）として投与することが好ましい。
【０１５８】 治療用組成物を、当業で公知の医療器具で投与してもよい。例えば、ある好適
な実施例では、本発明の治療用組成物を、例えば米国特許第5,399,163号;第5,38
3,851号; 第5,312,335号; 第5,064,413号; 第4,941,880号; 第4,790,824号; 又
は第4,596,556号に解説された器具など、針のない皮下注射器具で投与すること
ができる。本発明で有用な公知のインプラント及びモジュールの例には、制御さ
れた速度で投薬するインプラント可能なマイクロ輸注ポンプを開示する米国特許
第4,487,603号；皮膚を通じて薬剤を投与する治療用器具を開示する米国特許第4
,486,194号；精確な輸注速度で医薬を送達する薬剤輸注ポンプを開示する米国特
許第4,447,233号；継続的な薬物送達用のインプラント可能な可変流量式輸注装
置を開示する米国特許第4,447,224号；複数のチャンバー区画を有する浸透圧薬
物送達システムを開示する米国特許第4,439,196号；及び浸透圧薬物送達システ
ムを開示する米国特許第4,475,196号、がある。これらの特許を、言及をもって
ここに編入することとする。このようなインプラント、送達システム、及びモジ
ュールは他にも数多く、当業者に公知である。
【０１５９】 実施例によっては、本発明のヒトモノクローナル抗体を、インビボで確実に適
切に分散するよう調合してもよい。例えば、血液脳関門（BBB）は数多くの親水
性の高い化合物を排除する。本発明の治療用化合物が、（必要であれば）BBBを
確実に通過できるようにするには、これらを例えばリポソーム中に調合すること
ができる。リポソームの製造法については、例えば米国特許第4,522,811号; 第5
,374,548号；及び第5,399,331号を参照されたい。このリポソームには、特定の
細胞又は臓器に選択的に輸送されて、目的の薬物送達を高めるような一種以上の
成分を含めてもよい（例えばV.V. Ranade (1989) J. Clin. Pharmacol. 29:685
を参照されたい)。標的決定成分の例には、葉酸又はビオチン（例えばロウらの
米国特許第5,416,016号を参照されたい）；マンノシド (Umezawa et al., (1988
) Biochem. Biophys. Res. Commun. 153:1038)；抗体 (P.G. Bloeman et al. (1
995) FEBS Lett. 357:140; M. Owais et al. (1995) Antimicrob. Agents Chemo
ther. 39:180);サーファクタントプロテインＡ受容体 (Briscoe et al. (1995)
Am. J. Physiol. 1233:134)、本発明の調剤や、本発明の分子の成分を含められ
そうな様々な種；p120 (Schreier et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:9090)が
あるが、さらにK. Keinanen; M.L. Laukkanen (1994) FEBS Lett. 346:123; J.J
. Killion; I.J. Fidler (1994) Immunomethods 4:273も参照されたい。本発明
の実施例の一つでは、本発明の治療用化合物を、リポソーム中に調剤する。より
好適な実施例では、前記リポソームが、標的決定成分を含む。最も好適な実施例
では、前記リポソーム中の本治療用化合物を、腫瘍又は感染部位近位に大量注射
して送達する。本組成物は、注射筒による注入が容易な程度に流動的でなくては
ならない。また、製造及び保管条件下で安定でなくてはならず、細菌及びカビな
どの微生物の混入作用から守られていなければならない。
【０１６０】 「治療上有効な投薬量」は、樹状細胞の成長及び／又は活性を、未処置の被験
体に比較して、少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さら
により好ましくは少なくとも約６０％、そしてさらにより好ましくは少なくとも
約８０％、調節することが好ましい。化合物が、樹状細胞の成長及び／又は活性
を調節する能力は、抗原提示及び／又は免疫調節での効験を予測する動物モデル
系で評価することができる。あるいは、ある組成物のこのような性質は、ここに
解説した、かつ当業の開業医に公知の検定法でインビトロなどで、樹状細胞によ
る免疫細胞刺激を当該化合物が調節する能力を調べても、評価できる。ある実施
例では、治療用化合物の治療上有効量とは、 被験体において、樹状細胞の成長
及び／又は活性を抑制できるか、又は、自己免疫の症状などの症状を改善できる
ものである。別の実施例では、治療用化合物の治療上有効量とは、樹状細胞によ
る抗原プロセッシング及び提示を高め、ひいては、免疫原又は標的抗原に対する
免疫応答を高めることができるものである。当業者であれば、このような量を、
被験体の体格、症状の重篤度、被験体の免疫活性、及び選択した特定の組成物又
は投与経路といった因子に応じて、決定できることであろう。
【０１６１】 本組成物は無菌でなければならず、本組成物を注射筒で送達できる程度に流動
的でなければならない。担体は、水に加え、等張の緩衝生理食塩水、エタノール
、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチ
レングリコール、等々）、及びこれらの適した混合液であってよい。適正な流動
性は、例えばレシチンなどのコーティングを用いたり、分散液の場合には必要な
粒子の大きさを維持したり、そして界面活性剤を利用するなどにより、維持でき
る。多くの場合、例えば糖類、マンニトール又はソルビトールなどの多価アルコ
ール、及び塩化ナトリウムなどの等張剤を組成物中に加えることが好ましい。注
射用組成物の吸収を長期に渡らせるには、例えばモノステアリン酸アルミニウム
又はゼラチンなど、吸収を遅らせる作用薬を組成物中に含めると、可能である。
【０１６２】 有効化合物が上に記載したとおりに適宜保護されていれば、当該化合物を例え
ば不活性の希釈剤又は同化可能な食用担体などと一緒に、経口投与してもよい。
【０１６３】 ＶＩ．発明の用途及び方法 本発明の組成物（例えば、樹状細胞に対するヒトモノクローナル抗体及びその
誘導体／共役体）は、インビトロ及びインビボで診断上及び治療上の実用性を有
する。
【０１６４】 例えば、種々の疾患を治療、予防又は診断する目的で、これらの分子を、例え
ばインビトロ又はエクスビボで培養細胞に投与したり、又は、例えばインビボな
どで被験体に投与することができる。ここで用いる用語「被験体」には、ヒト及
び非ヒト動物が含まれるものと、意図されている。本発明の「非ヒト動物」とい
う用語は、例えばヒト以外の霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、
は虫類、等々、ほ乳類及び非ほ乳類などのあらゆる脊椎動物を包含するものであ
る。
【０１６５】 ある具体的な実施例では、種々の樹状細胞媒介性又は樹状細胞関連疾患を治療
、予防又は診断するために、本ヒト抗体及びその誘導体をインビボで用いる。
【０１６６】 ある一実施例では、好適なヒト動物には、樹状細胞が媒介する又は樹状細胞が
関連する疾患を有するヒトの患者が含まれる。例えば、本発明の方法及び組成物
を、例えば樹状細胞による免疫調節に関係した異常な又は不要な免疫活性を特徴
とする疾患など、自己免疫、免疫系又は炎症性疾患の患者を治療するのに利用で
きる。本発明のヒト抗樹状細胞を用いた治療が有効であろう自己免疫、免疫系及
び炎症性疾患には、リウマチ性関節炎、多発性硬化症、糖尿病、重症筋無力症、
悪性貧血、アジソン病、紅斑性狼瘡、ライター症候群、及びグレーブズ病、があ
る。例えば、自己免疫疾患患者には、樹状細胞が媒介する自己抗原提示を抑制す
るのが有効であろう。
【０１６７】 本発明のヒト抗樹状細胞抗体を用いて治療できる疾患の他の例には、移植片拒
絶及び移植片体宿主疾患がある。
【０１６８】 移植片拒絶 近年、皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓及び骨髄などの組織及び臓器を移植
する外科的技術の効果が大きく進歩した。おそらく現在ある問題の大きなものは
、移植された同種移植片又は臓器に対するレシピエントの免疫寛容を誘導するの
に満足のいく薬剤がないことであろう。同種細胞又は臓器をホスト（即ち提供者
及び受容者が、同じ種の異なる個体である）に移植するとき、ホストの免疫系が
移植片中の外来抗原に対して免疫応答（宿主対移植片疾患）してしまい、移植組
織の破壊が起きる可能性が高い。CD8＋細胞、CD4＋細胞及び単球のすべてが、こ
の移植組織拒絶に関与している。本発明の治療用薬剤は、受容者において樹状細
胞により媒介される、同種抗原が誘導する免疫応答を抑制し、ひいてはこのよう
な細胞を、移植組織又は臓器の破壊に参与させなくするのに有用である。
【０１６９】 移植片対宿主疾患 本発明の治療用薬剤の関連する用途の一つは、「移植片対宿主」疾患（GVHD）
に関与する免疫応答の調節においてである。GVHDは、致命的になる可能性のある
疾患であり、免疫適格細胞を、同種のレシピエントに移植したときに起きる。こ
の場合、ドナーの免疫適格細胞はレシピエントの組織を攻撃しているのであろう
。GVHDの過程においては皮膚、腸管上皮及び肝臓の組織がしばしば標的となり、
破壊されることがある。この疾患は骨髄移植など、免疫組織を移植する場合に特
に重篤な問題となるが、心臓及び乾燥移植を含め、他の場合にはそれほどの重篤
なGVHDが報告されたことはない。本発明の治療用薬剤は、樹状細胞などのホスト
抗原提示細胞の活性を抑制するのに用いられる。
【０１７０】 別の実施例では、本発明の方法及び組成物を用いて、被験体の抗原に対する免
疫応答を調節することができる。本発明のヒト抗樹状細胞抗体を用いると、抗原
を樹状細胞に狙わせ、ひいては、抗原に対する免疫応答が誘導されるよう、抗原
提示及びプロセッシングを調節することができる。この抗原は、腫瘍抗原でも、
又は微生物病原体などの病原体由来の抗原でもよい。前記病原体はウィルス（例
えばHIV）、細菌、真菌、又は寄生生物であってもよい。さらに当該抗原は、ア
ルツハイマー病患者などの患者のアミロイド沈着物の成分であってもよく、抗原
がAβペプチドであるなどでもよい。
【０１７１】 例えば、樹状細胞の表面上の一成分に対する少なくとも一つの結合特異的部分
を、ある抗原に連結して含むような分子複合体であって、この複合体が樹状細胞
に結合すると、この分子複合体の内部移行が媒介されるような分子複合体、を被
験体に投与すれば、この抗原に対する免疫応答を誘導又は向上させることができ
る。抗原に対して生ずるこの免疫応答には、当該抗原に結合する抗体と、MHC-I
又はMHC-II複合体の一成分として当該抗原に結合するＴ細胞とが含まれる。従っ
て、本発明のヒト抗樹状細胞抗体を利用して、樹状細胞により標的決定される被
験体免疫化を媒介させることもできる。例えば、樹状細胞の表面上の一成分に対
する少なくとも一つの結合特異的部分を、ある抗原に連結して含むような分子複
合体であって、この複合体が樹状細胞に結合すると、この分子複合体の内部移行
が媒介されて、この抗原のプロセッシング及び提示が促進されるような分子複合
体、で、被験体を免疫化することができる。
【０１７２】 別の態様では、樹状細胞に特異的なヒト抗体を、腫瘍細胞、エフェクター細胞
又は微生物病原体などの細胞全体を、樹状細胞に直接狙わせるのに利用すること
ができる。抗樹状細胞抗体又はその抗原結合フラグメントは、例えば本発明のヒ
ト樹状細胞特異抗体をコードする核酸配列を含有するベクタで、細胞をトランス
フェクト又は形質導入するなどにより、細胞表面上に直接発現させることができ
る。代わりに、抗樹状細胞抗体又はその抗原結合フラグメントを、化学的リンカ
ー、脂質のタグ、又は他の関連する方法で、細胞又は病原体に結合させることも
できる。抗樹状細胞抗体又はその抗原結合フラグメントを表面に繋げた形で有す
る細胞を、腫瘍細胞又は微生物病原体などの細胞に対する特異的免疫応答を誘導
するのに利用できよう。
【０１７３】 このように、本発明の抗体を用いて、病原体、毒素又は自己抗原に対する免疫
応答を刺激することができる。この治療法が特に有用であろう病原体の例には、
現在効果的なワクチンがない病原体や、従来のワクチンが競合的に効果が低い病
原体がある。これらには、限定はしないが、HIV、肝炎（Ａ型、Ｂ型及びＣ型）
、インフルエンザ、疱疹、ジアルジア、マラリア、リーシュマニア、スタフィロ
コッカス−アウレウス、シュードモナス−アエルギノサ、がある。
【０１７４】 本発明の組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子）をまず、
治療上又は診断上の利用に関係する結合活性についてインビトロでテストしても
よい。例えば、本発明の組成物は、下の実施例の項で解説するフロー・サイトメ
トリ及び内部移行検定でテストすることができる。さらに、樹状細胞の細胞溶解
も含め、少なくとも一つのエフェクター媒介型エフェクター細胞活性を惹起する
上でのこれら分子の活性についても検定してよい。エフェクター細胞が媒介する
ファゴサイトーシス及び細胞溶解を検定するプロトコルは、当業で公知である。
【０１７５】 本発明の組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子）は、樹状
細胞媒介又は樹状細胞関連疾患の治療及び診断において、更なる実用性を有する
。例えば、本ヒトモノクローナル抗体、多重特異的又は二重特異的分子は、以下
：樹状細胞のオプソニン化；ヒトエフェクター細胞存在下における、樹状細胞の
ファゴサイトーシス又は細胞溶解の媒介；樹状細胞の成長の抑制；樹状細胞内部
への移行；又は抗原を樹状細胞に狙わせること、といった生物学的活性の一つ以
上をインビボ又はインビトロで惹起するのに利用できる。
【０１７６】 本発明の組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子）を投与す
る方法は、当業で公知である。使用する分子の適した投薬量は、被験体の年齢及
び体重や、用いる特定の薬物に依存することであろう。本分子を、例えば131I、90 Y、105Rh、等々の放射性核種に、Goldenberg, D.M. et al. (1981) Cancer Re
s. 41: 4354-4360、及びEP 0365 997に解説されたとおりに共役させることがで
きる。本発明の組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子）は、
免疫調節性の作用薬に共役させてもよい。
【０１７７】 本発明の組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子）に連結さ
れたエフェクター細胞など、標的特異的エフェクター細胞は治療薬としても利用
できる。標的設定するエフェクター細胞は、マクロファージ、好中球又は単球な
どのヒト白血球であってもよい。他の細胞には、好酸球、ナチュラルキラー細胞
及び他のIgG又はIgA受容体担持細胞がある。必要に応じ、エフェクター細胞を、
治療しようとする被験体から得てもよい。この標的特異的エフェクター細胞は、
生理学的に許容可能な溶液に細胞を含有させた懸濁液としても、投与できる。投
与する細胞の数は、108-109のオーダーであってもよいが、治療の目的に応じて
様々であろう。ある実施例では、前記の量は、樹状細胞などの局在化を起こして
、ファゴサイトーシスなどによる細胞致死を行わせるのに充分な量となるであろ
う。別の実施例では、本発明の組成物に連結した樹状細胞などの標的特異的樹状
細胞を治療薬として用い、腫瘍細胞、微生物病原体、ウィルス又はウィルス感染
細胞などの標的細胞への局在化を行わせたり、又は、抗原を狙わせたりして、抗
原プロセッシング及び提示などによるこのような標的細胞又は標的抗原に対する
免疫応答を行わせることができる。投与経路も様々であってよい。
【０１７８】 標的特異的エフェクター細胞又は標的特異的樹状細胞を用いた治療は、標的細
胞を除去する他の技術と一緒に行ってもよい。例えば、本発明の組成物（例えば
ヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子など）及び／又はこれらの組成物で武
装したエフェクター細胞を用いた抗樹状細胞治療法を、抗炎症性又は免疫抑制治
療など、化学療法又は免疫調節的治療法と併用することができる。さらに、コン
ビネーション免疫治療法を用いて、二つの異なる細胞傷害性エフェクター集団に
樹状細胞を狙わせてもよい。例えば、抗FcガンマRI又は抗CD3に連結した抗樹状
細胞抗体を、IgG又はIgA受容体特異的結合剤と一緒に用いてもよい。
【０１７９】 別の実施例では、本発明のヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子で標的決
定した樹状細胞を免疫調節的治療法と併用して、例えば標的細胞又は標的抗原に
対する免疫応答を高める免疫刺激などを行うことができる。樹状細胞を標的決定
する治療法は、他の形の免疫治療、例えばサイトカイン処置（例えばインターフ
ェロン、TNFα、GM-CSF、G-CSF、IL-2など）と組み合わせることもできる。
【０１８０】 さらに本発明の二重特異的及び多重特異的分子は、抗原プロセッシング及び提
示などの樹状細胞活性を調節したり、細胞表面上の受容体にキャップをする及び
消失させるなどにより樹状細胞上の認識抗原のレベルを調節するのにも、利用で
きる。
【０１８１】 補体に結合する、例えばIgG1、-2、又は-3又はIgM由来の部分などの補体結合
部位を有する本発明の組成物（ヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子など）
も、補体の存在下で利用することができる。実施例の一つでは、標的細胞を含む
細胞集団を、本発明の結合作用物質及び適したエフェクター細胞でエクスビボで
処置するときに、補体又は補体を含有する血清を添加することで、これを補って
もよい。本発明の結合作用物質で覆われた標的細胞のファゴサイトーシスは、補
体たんぱくを結合させると向上させることができる。別の実施例では、本発明の
組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子など）で覆われた標的
細胞を、補体により溶解させることもできる。
【０１８２】 さらに本発明の組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子など
）を、補体と一緒に投与してもよい。従って、ヒト抗体、多重特異的又は二重特
異的分子と、血清又は補体とを含んで成る組成物も、本発明の範囲内にある。こ
れらの組成物は、当該の補体がそのヒト抗体、多重特異的又は二重特異的分子の
近くにあるために、有利である。あるいは、本発明のヒト抗体、多重特異的又は
二重特異的分子と、補体又は血清とを、別々に投与することもできる。
【０１８３】 他の実施例では、被験体をサイトカインで処置するなど、免疫細胞の活性及び
／又はFcγ又はFcα受容体の発現又は活性を、向上又は抑制するなど、調節する
ような作用物質で、被験体をさらに処置することができる。本多重特異的分子で
治療中に投与するのに好適なサイトカインには、顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF
)、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF)、インターフェロン-γ
（IFN-γ）及び腫瘍壊死因子（TNFα）、がある。
【０１８４】 さらに本発明の組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及び二重特異的分子など
）は、樹状細胞などに標識を付けるためなど、このような細胞を標的に設定する
のにも利用できる。このような用途では、検出の可能な分子に当該結合作用物質
を結合させてもよい。従って、本発明は、樹状細胞をエクスビボ又はインビトロ
で位置確認する方法も提供するものである。この検出可能な標識は、例えば放射
性同位体、蛍光化合物、酵素、又は酵素コファクターなどであってよい。
【０１８５】 ある実施例では、本発明は、樹状細胞又は樹状細胞抗原の存在を試料中で検出
する方法、又は、樹状細胞又は樹状細胞抗原の量を測定する方法を提供するもの
である。当該方法は、試料及びコントロール試料を、樹状細胞又は樹状細胞抗原
に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分に、この抗体
又はその部分と樹状細胞又は樹状細胞抗原との間の複合体形成が可能な条件下で
、接触させるステップを含む。こうして複合体の形成を検出し、コントロール試
料と比較したときに、当該試料に複合体形成の違いがあれば、この試料中に樹状
細胞又は樹状細胞抗原が存在することの指標となる。
【０１８６】 さらに別の実施例では、本発明は、インビボ又はインビトロで樹状細胞の存在
を検出する又は樹状細胞の量を定量する方法を提供するものである。本方法は、
（ｉ）検出可能なマーカーに共役させた本発明の組成物（例えば多重又は二重特
異的分子）又はその一フラグメントを被験体に投与するステップと、（ｉｉ）前
記検出可能なマーカーを検出する手段に、前記被験体を暴露して、樹状細胞を含
有する区域を特定するステップと、を含む。
【０１８７】 さらに本発明の範囲内には、本発明の組成物（例えばヒト抗体、多重特異的及
び二重特異的分子など）と、使用上の指示とを含むキットも含まれる。本キット
には、さらに、サイトカイン又は補体や、又は、一種以上の本発明の別のヒト抗
体（例えば、樹状細胞上の、第一のヒト抗体とは異なるエピトープに結合する、
補完的活性を有するヒト抗体など）など、少なくとも一つの更なる試薬を含める
こともできる。
【０１８８】 さらに本発明を以下の実施例で解説するが、以下の実施例を更なる限定として
捉えられてはならない。本出願全体を通じて引用された全図面及び全参考文献、
特許及び公開済み特許出願の内容を、その言及をもってここに編入することを明
示しておく。
【０１８９】 参考文献 1. G.Kobler and Milstein C. (1975) Continuous cultures of fused cells se
creting antibody of predefined specificity. Nature 256: 495-497. 2. G.L. Boulianne. Hozum N., and Shulman M.J. (1984) Production of func
tional chimeric mouse/human antibody. Nature 312: 643-646. 3. P.T. Jones. Dear P.H., Foote J., Neuberger M.S., and Winter G. (1989)
Replacing the complementarity-determining regions in a human antibody
with those of a mouse. Nature 321: 522-525. 4. J.D. Marks et al.(1991) By-passing Immunization Human antibodies fro
m V-gene libraries displayed on phage. J. Mol. Biol. 222: 581-597. 5. N. Lonberg, et al. 1994. Antigen-specific human antibodies from mice
comprising four distinct genetic modifications. Nature 368(6474): 856-85
9. 6. G.Gafie, Howe S.C., Butcher M.C. C. W., and Howard H.C. (1997) Antib
odies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lines
. Nature 266:550-552.
【０１９０】 実施例 実施例１ 樹状細胞に対するヒトモノクローナル抗体の作製 HuMAbマウスのHCO7株を、樹状細胞の標品で免疫化して、ヒト抗樹状細胞モノ
クローナル抗体を生成させた。HCO7 HuMAbマウスは、言及をもってその全開示を
ここに編入することとする米国特許第5,770,429号及び第5,545,806号に記載され
た通りに作製した。
【０１９１】 具体的には、フロイント・アジュバントに乳化させたヒト樹状細胞を４回、腹
腔内注射してHCO7マウスを免疫化した。簡単に説明すると、樹状細胞を以下のよ
うに調製した。全血又はロイコパック血小板アフェレーシス標品を密度勾配遠心
分離して、ヒト末梢血単核細胞（PBMC）を得た。組織培養フラスコに２時間接着
させて単球を分離し、続いて、2 ng/ml GM-CSF 及び10 ng/ml IL-4 を加えたマ
クロファージ無血清培地（ギブコ社製）で５乃至９日間、インキュベートして、
樹状細胞に分化させた。免疫化用の細胞は、新鮮なまま用いるか、又は−８０℃
で凍結保存した。マウスは２乃至３週間毎に免疫化した。最後に、リン酸緩衝生
理食塩水に樹状細胞を含めて静脈注射してから、脾臓摘出を行った。応答のある
マウスの脾臓を採取し、単個細胞に分散させた。
【０１９２】 抗樹状細胞抗体を産生するハイブリドーマを作製するには、抗樹状細胞抗体を
含有する血漿を持つマウスの脾細胞を、P3X63-Ag8.653骨髄腫細胞（ATCCに指定
番号ATCC CRL 1580で寄託された非分泌性マウス骨髄腫細胞にPEGで融合させた。
HAT含有培地による成長で、ハイブリドーマを淘汰した。ハイブリドーマが成長
した後（約１０乃至１４日）、ハイブリドーマを含有する各ウェルを、抗ヒトIg
G ELISAを用いて調べて、ヒトIgGの産生についてスクリーニングした。
【０１９３】 陽性のハイブリドーマを以下の性質：（１）ヒトIgG抗体の産生、及び（２）
樹状細胞への結合、に基づいてスクリーニング及び選択した。
【０１９４】 ヒトIgGを分泌するハイブリドーマを、多種の血球との反応性について、フロ
ーサイトメトリで調べた。GM-CSF及び IL-4を補った培地で５乃至７日間培養し
て、接着した単球から樹状細胞を調製した。顆粒球（PMN）、単球及びリンパ球
を、ヘパラン処置した全血から得た。これらの細胞を、IgG陽性クローンのハイ
ブリドーマ上清と一緒に４℃でインキュベートした。結合はFITC標識ヤギ抗ヒト
IgG（Fc）プローブを用いて検出した。当該細胞に関連した蛍光は、FACScalibur
装置を用いた解析で決定した。
【０１９５】 スクリーニングしたいくつかのハイブリドーマが、フローサイトメトリで評価
したときに下の表１に示すような樹状細胞との反応性を実証したヒトIgG1κ抗体
を産生した（例えばA3、A5、A23、A24、A33、B9、B11、B33、B47、C8、C10、C20
、C28、C29、C30、C35、E1、E8、E10、E18、E20、E21 及びE24)。いくつかのヒ
ト抗体は、他の血球種と比較して大変高くかつ優先的な反応性を、樹状細胞に対
して示した。
【０１９６】
【表１】
【０１９７】 検索表：− 結合は検出されず ＋/− 弱／不定の結合 ＋ 低／有意な結合 ＋＋ 高い結合 ＋＋＋ 非常に高い結合
【０１９８】 実施例２ 抗樹状細胞ヒトモノクローナル抗体の特徴付け Ｉ．精製されたヒト抗樹状細胞抗体の樹状細胞への結合特異性 樹状細胞に対する特異性を持つヒトIgG抗体を分泌したいくつかのハイブリド
ーマを精製に向けてサブクローン及び展開させた。5%のCO2を含有する加湿した
インキュベータ内の回転フラスコで成長させたハイブリドーマ培養株の上清から
、モノクローナル抗体を分離した。抗体は、メーカの指示により（イリノイ州ロ
ックフォード、ピアース社製）、プロテインＡ−アガロースカラムでクロマトグ
ラフィを行って精製した。
【０１９９】 次に、樹状細胞と、多種の他の造血細胞種の代表である細胞株との反応性につ
いて、精製済みのヒト抗体をフローサイトメトリで調べた。簡単に説明すると、
上に解説したように、GM-CSF及びIL-4を補った培地で５乃至７日間培養して、接
着した単核細胞から樹状細胞を調製した。U937、CEM、THP-1及びL540細胞株を、
10%ウシ胎児血清を補った培地で培養した。細胞を回収し、洗浄し、飽和濃度の
ヒトモノクローナル抗体B11、C20、E21 又はアイソタイプコントロール（ヒトIg
G1）と一緒に、振盪させながら４℃で１時間、インキュベートした。さらに、FI
TCで標識したヤギ抗ヒトIgG(Fc)プローブと一緒に１時間、４℃でインキュベー
トして、抗体結合を検出した。細胞を洗浄し、1%パラホルムアルデヒドで固定し
、細胞に伴う蛍光を、FACScalibur（ベクトン・ディッキンソン社製）装置を用
いてCellQuest ソフトウェアで解析した。
【０２００】 図１に示すように、ヒトモノクローナル抗体B11は樹状細胞だけに結合した。
モノクローナル抗体C20は樹状細胞に特異的に結合し、低レベルの反応性を単球
様細胞株U937及びTHP-1及びホジキンリンパ腫細胞株L540に対して見せた。同様
に、ヒトモノクローナル抗体E21は樹状細胞に優先的に結合したが、L540細胞及
びTHP-1細胞に対しても低レベルだが反応した。これらのデータは、ヒトモノク
ローナル抗体B11、C20及びE21が異なる抗原を認識すること、そしてこれらは造
血系譜の他の細胞に比較して、樹状細胞に優先的に結合することを実証するもの
である。
【０２０１】 ＩＩ．精製されたヒト抗樹状細胞抗体の樹状細胞に対する用量依存的結合 精製されたヒト抗樹状細胞モノクローナル抗体B11、C20、及びE21の樹状細胞
との用量依存的反応性をフローサイトメトリで調べた。
【０２０２】 樹状細胞を、上に解説したように接着性単核細胞から調製した。細胞を回収し
、多様な濃度のモノクローナル抗体B11、C20、E21又はアイソタイプコントロー
ルと一緒に４℃でインキュベートした。FITCで標識したヤギ抗ヒトIgG(Fc)プロ
ーブで抗体結合を検出し、細胞に伴う蛍光を、FACScalibur装置を用いてCellQue
stソフトウェアで調べた。
【０２０３】 各モノクローナル抗体は、図２に示すように、アイソタイプを合わせたコント
ロールIgG抗体に比較して、用量依存的な結合を樹状細胞に対して示した。これ
らのデータは、精製されたヒトモノクローナル抗体B11、C20及びE2が濃度依存的
態様で樹状細胞に結合することを実証している。これら抗樹状細胞抗体間で結合
強度に違いがあることは、これらが樹状細胞上の固有の分子又はエピトープを認
識することを示す。
【０２０４】 ＩＩＩ．ヒト抗体B11のCD34＋幹細胞由来樹状細胞への結合 循環血単球から分化させた樹状細胞は、その利用が可能であるために、研究及
び臨床の両方の用途で、最もよく用いられている種類の樹状細胞である。しかし
ながら、前駆幹細胞を由来とする樹状細胞も利用が可能であり、ヒト組織の樹状
細胞をより精確に反映したものであろう。従って、次の研究では、Cd34＋前駆細
胞から分化した樹状細胞を、ヒトモノクローナル抗体B11との反応性について、
フローサイトメトリで評価した。
【０２０５】 精製済みのモノクローナル抗体B11を、蛍光イソチオシアネート（FITC）で標
識するために、0.3M炭酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ９．５でよく透析した。FITCの
ストック溶液は、1mgの固形FITCを1mlのDMSOに溶解させて調製した。ストックFI
TCを、継続的に混合しながら滴下で加えて、抗体たんぱく1mg当たり50μgのFITC
とした。FITC添加後、溶液を暗室で１乃至３時間、室温でインキュベートした。
FITCで標識された抗体を、PBSで平衡させたセファデックスG-10カラムでゲル濾
過して分離した。
【０２０６】 Cd34＋前駆細胞及び樹状細胞分化培地は、ポエティック・テクノロジーズ社（
メリーランド州ガイザーズバーグ）から得た。細胞は、このメーカーの指示に従
って分化させた。樹状細胞を回収し、様々な濃度のB11-FITC又はアイソタイプコ
ントロール抗体（ヒトIgG-FITC）と一緒に、４℃でインキュベートした。細胞に
伴う蛍光度は、FACScalibur 装置を用い、CellQuestソフトウェアで解析して調
べた。
【０２０７】 結果を図３に示すが、この結果は、ヒトモノクローナル抗体B11が、CD34＋幹
細胞から分化した樹状細胞に用量依存的態様で結合することを実証している。従
って、B11標的抗原は、単球由来及び前駆幹細胞由来の樹状細胞上で発現してい
るのである。
【０２０８】 ＩＶ．ヒト抗体B11のマクロファージ及び樹状細胞への結合 ヒト抗樹状細胞モノクローナル抗体B11が、樹状細胞に対して相対的にマクロ
ファージに結合する能力を、フローサイトメトリで評価した。
【０２０９】 樹状細胞を上に解説したように接着性単核細胞から調製した。マクロファージ
は、接着性単核細胞から、５乃至７日間、M-CSFと一緒に培養することで調製し
た。細胞を回収し、10μg/ml のモノクローナル抗体B11又はアイソタイプコント
ロールと一緒に、４℃でインキュベートした。ヒト抗体結合は、FITC標識付ヤギ
抗ヒトIgG（Fc）プローブで検出した。細胞に伴う蛍光は、FACScalibur装置を用
いてCellQuestソフトウェアで解析して調べた。
【０２１０】 その結果を図４に示すが、この結果は、ヒト抗体B11がマクロファージに、樹
状細胞に結合するより低い程度で結合することを実証している。このように、B1
1標的抗原は、マクロファージ上にも発現しているが、発現レベルは、樹状細胞
で観察されるものよりも低い。モノクローナル抗体B11のマクロファージとのこ
の反応性は、樹状細胞とマクロファージの類似性から見ても、驚くほどのことで
はない。 これら二つの細胞種には、Ｔ及びＢリンパ球応答を刺激する能力を含
め、構造上及び機能上の両方で共通の性質があるため、抗体B11のマクロファー
ジとの交差反応性は、抗原提示細胞を狙うのに有利であろう。
【０２１１】 Ｖ．THP-1細胞上のヒト抗体B11標的抗原の誘導 ヒトモノクローナル抗体B11を、ヒト単球性白血病由来の単球様細胞株であるT
HP-1細胞との結合について、THP-1細胞を樹状細胞表現型に向かって分化してい
くよう誘導する前後に、フローサイトメトリで調べた。
【０２１２】 簡単に説明すると、THP-1細胞を標準的培養培地か、又は、GM-CSF及びIL-4を
補った培地で成長させた。この細胞を、10μg/mlのモノクローナル抗体B11-FITC
又はアイソタイプコントロール抗体（ヒト IgG-FITC) と一緒に４℃でインキュ
ベートした。この細胞に伴う蛍光を、FACScalibur装置を用いてCellQuestソフト
ウェアで解析して調べた。その結果を図５に示す。
【０２１３】 これらのデータは、正常な成長条件下では、THP-1細胞はB11標的抗原を発現し
ないことを実証している。しかしながら、THP-1細胞をGM-CSF及びIL-4を含有す
る培地で培養して樹状細胞表現型に向かって誘導すると、B11標的抗原の発現が
同時に誘導される。従って、これらの結果は、樹状細胞に特異的に伴う標的抗原
（B11）に対する、B11ヒト抗体の特異性をさらに裏付けるものである。
【０２１４】 ＶＩ．ヒト抗体B11のマカク樹状細胞への結合 カニクイザルマカクの動物（サル）モデルは、標的抗原が霊長類間で保存され
ている限り、抗体の臨床上の用途に関する適切な情報を提供することができる。
従って、ヒトモノクローナル抗体B11の、カニクイザル由来の樹状細胞との交差
反応性をフローサイトメトリで評価した。
【０２１５】 新鮮なカニクイザルの血液を、シエラ・バイオメディカルズ社から入手し、接
着性単核細胞をGM-CSF及びIL-4と一緒に培養して樹状細胞を調製した。樹状細胞
を、10μg/ml モノクローナル抗体B11-FITC又はアイソタイプコントロール抗体
（ヒトIgG-FITC)と一緒に４℃でインキュベートした。細胞に伴う蛍光を、FACSc
alibur装置を用いて解析して調べた。
【０２１６】 図６に示すように、ヒトモノクローナル抗体B11は、カニクイザルマカク由来
の樹状細胞に結合したことから、B11標的抗原が霊長類間で保存されていること
が示唆された。
【０２１７】 ＶＩＩ．ヒト抗体B11のヒト組織内樹状細胞への結合 ヒトモノクローナル抗体B11の、ヒト組織由来の樹状細胞との反応性を免疫組
織化学法で評価した。これらの実験は、抗体B11の、ヒト組織の他の細胞又は抗
原との何らかの交差反応性も評価できるよう、設計されていた。
【０２１８】 剖検又は外科的生検でヒト組織の凍結切片を得て、ティシュー−テックO.C.T.
培地に寝かせ、-70℃未満で凍結保存した。組織を5mm切片とし、アセトンで１０
分間固定し、一晩かけて乾燥させた。染色前に、スライドを10%中性緩衝ホルマ
リンで１０秒間かけて固定した。間接的な免疫ペルオキシダーゼ技術を用いた。
まず、Fc依存的結合を遮断するために熱凝集IgGを含有するPBSで希釈したB11-FI
TC又はアイソタイプを適合させたFITC抗体で、切片を染色した。ウサギ抗FITC抗
体を用い、次にペルオキシダーゼで標識した抗ウサギ試薬を用いて、一次抗体を
検出した。各スライドを、認定病理学者に読み取ってもらい、結合を以下の検索
表： ± (不定)、1+ (弱い)、2+ (中程度)、3+ (強い)、4+ (非常に強い)、Neg.
(陰性)、に基づいて格付けした。下の表２に示す結果は、調べたすべての組織
で、樹状細胞及びいくつかのマクロファージにはっきりとした染色があったこと
を示す。特異的染色はアイソタイプコントロール抗体では観察されなかった。
【０２１９】 これらのデータは、ヒトモノクローナル抗体B11がヒト組織の樹状細胞だけで
なく、程度は低いがヒト組織のマクロファージにも結合することを示している。
脾臓中の単核細胞及び骨髄中の前駆細胞にも、僅かなB11の結合が見られたこと
は、未成熟樹状細胞への結合を表すものかも知れない。ヒト抗体B11は調べた試
料中の他の細胞種又は組織とは交差反応しなかったことから、この抗体の樹状細
胞への特異性、さらに程度は低いがマクロファージへの特異性が実証された。
【０２２０】
【表２】
【０２２１】 組織交差反応性検査は、メリーランド州フレデリックのパソロジー・アソシエ
ーツ・インターナショナルの研究室IM598で行われた。
【０２２２】 ＶＩＩＩ．ヒト抗体B11の一本鎖Fv（ScFv）フラグメントのヒト樹状細胞への
結合 ヒトモノクローナル抗体B11の一本鎖Fvフラグメントの、ヒト組織由来樹状細
胞に対する反応性を、フローサイトメトリで評価した。
【０２２３】 B11 ScFvは、ヒトモノクローナル抗体B11のVL (SEQ ID NO:1 及び2) 及び VH
(SEQ ID NO: 3 及び4) ドメインを、図９に示すように連結することで構築され
た。ScFvの樹状細胞への結合を抗EFG抗体を用いて検出できるよう、EGF配列も含
めた。樹状細胞をB11-ScFvと一緒に１時間、４℃でインキュベートした後、洗浄
してから、抗EFG-FITC プローブと一緒に１時間、４℃でインキュベートした。
この試料をFACS解析で解析した。
【０２２４】 FACS解析の結果は、このヒトモノクローナル抗体B11のB11 -ScFv フラグメン
トがヒト樹状細胞に結合したことを実証した。従って、ScFvを所定の抗原又は毒
素に連結すると、ScFvをそれぞれワクチン又はイムノトキシンとして利用できる
のである。
【０２２５】 ＩＸ．ヒト抗体B11のF(ab')2フラグメントのヒト樹状細胞への結合 ヒトモノクローナル抗体B11のF(ab')2フラグメントの、ヒト組織由来樹状細胞
に対する反応性を、フローサイトメトリで評価した。これらの実験は、ヒト抗体
B11のFc部分が、B11の樹状細胞への結合に大きく関与しているかどうかも評価で
きるよう、設計されていた。
【０２２６】 F(ab')2フラグメントは、精製されたB11mAbをペプシンで標準的条件下で消化
することで調製した。このF(ab')2 フラグメントを、プロテインＬクロマトグラ
フィで精製した。ヒト単球をGM-CSF及びIL-4中で培養して調製したばかりの樹状
細胞を、抗体全体又はF(ab')2フラグメントと一緒に１時間、４℃でインキュベ
ートした。この細胞を洗浄してから、抗ヒトIgG-F(ab')2-PEプローブと一緒に１
時間、４℃でインキュベートした。この細胞を再度洗浄し、FACScalibur装置及
びCellquestソフトウェアを用いて解析した。
【０２２７】 図１０に示すように、FACS解析の結果では、ヒトモノクローナル抗体B11全体
及びB11のF(ab')2フラグメントが、同じ様な動態で樹状細胞に結合したことが示
され、このモノクローナル抗体全体のうちのこのFc部分は、B11の樹状細胞への
結合にあまり寄与していないことが分かった。
【０２２８】 実施例３ B11標的抗原の特徴付け Ｉ．樹状細胞のヒトモノクローナル抗体B11標的抗原の免疫沈降 ヒトモノクローナル抗体B11を用いて、それが認識する標的抗原を樹状細胞か
ら免疫沈降させた。
【０２２９】 簡単に説明すると、樹状細胞の細胞ライセートを調製し、モノクローナル抗体
B11又はアイソタイプコントロールIgG抗体と一緒に４℃でインキュベートした。
抗体−抗原複合体を、抗ヒトIgG-アガロースで捕獲し、SDSポリアクリルアミド
ゲル電気泳動で分離した。
【０２３０】 分子量約180キロダルトンに相当するバンドが、二つの異なる樹状細胞ライセ
ートの標品を由来とする抗体B11免疫沈降物で見られたが、コントロール試料で
は見られなかった。従って、これらの免疫沈降研究では、ヒトモノクローナル抗
体B11が、SDS-PAGEで解析したときの分子量が１８０キロダルトンの標的抗原を
樹状細胞上で認識することが示された。
【０２３１】 ＩＩ．樹状細胞のヒトモノクローナル抗体B11標的抗原のＮ末端配列決定 上述の免疫沈降後に、B11標的抗原のＮ末端アミノ酸配列決定をして、公知の
タンパク質とのホモロジーを調べた。
【０２３２】 細胞ライセートを樹状細胞から調製し、モノクローナル抗体B11と一緒に４℃
でインキュベートした。抗体−抗原複合体を抗ヒトIgG-アガロースで捕獲し、SD
Sポリアクリルアミドゲル電気泳動で分離した。ゲルのタンパク質をニトロセル
ロースに写し取り、モノクローナル抗体B11標的抗原に相当するバンドをＮ末端
アミノ酸配列決定用に溶離させた。このＮ末端配列決定及びデータベース検索は
、ミッドウェスト・アナリティカル社（ミズーリ州セントルイス）で行った。
【０２３３】 モノクローナル抗体B11標的抗原のＮ末端の１５個のアミノ酸残基を配列決定
したところ、以下： DDXXQFLIXXEDXKR (SEQ ID NO:5) B11抗原 LDTRQFLIYNEDHKR (SEQ ID NO:6) マクロファージマンノース受容体 のように、ヒトマクロファージマンノース受容体とのタンパク質配列ホモロジー
がみとめられた。
【０２３４】 ヒトタンパク質データベースをコンピュータ検索したところ、B11抗原に対し
て有意なホモロジーを有するタンパク質は他には明らかにならなかった。
【０２３５】 さらなる研究では、樹状細胞ライセートを一晩かけて、抗マウスIgGを添加し
たアガロースと一緒にインキュベートして、非特異的な結合たんぱくを取り除い
た。このアガロースを遠心し、透明になった上清を回収し、予め抗体B11を加え
てある抗ヒトIgG-アガロースと一緒に一晩、インキュベートした。このアガロー
スをPBSで洗浄し、還元性充填バッファと一緒に沸騰させた。最後にこのアガロ
ースを遠心し、その上清をゲルに充填した。抗体B11は約150乃至180kDのタンパ
ク質を免疫沈降させた。このタンパク質をPVDFメンブレンにブロットし、ミッド
ウェスト・アナリティカル社に送ってマイクロ配列決定を行ってもらった。
【０２３６】 モノクローナル抗体B11標的抗原をＮ末端マイクロ配列決定した結果、以下の
タンパク質配列：LLDTR QFLIY LEDTK RCVDA (SEQ ID NO:7)が判明した。この配
列もやはり、ヒトマクロファージマンノース受容体のそれ（GenBank受託番号NP_
002429) と適合し、２０個のアミノ酸にわたって100%の同一性があることが、ナ
ショナル・センター・フォー・バイオテクノロジー・インフォメーションのウェ
ブサイト(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)のBLASTアルゴリズムを用いて分かっ
た。これらのデータは、ヒトモノクローナル抗体B11が認識する、樹状細胞上の
標的分子は、マクロファージマンノース受容体であることを示している。
【０２３７】 ＩＩＩ．B11は樹状細胞によるFITC-デキストラン取り込みを抑制する 以下の実験は、抗体B11がマンノース受容体を遮断するかどうか、ひいては、
病原体とこのマンノース受容体との相互作用（細胞感染など）を防止又は抑制す
るのに、この抗体を利用できるか、を調べるよう設計された。
【０２３８】 樹状細胞を、FITC-デキストラン（500μg／ml）と、アイソタイプコントロー
ルヒトIgG又はB11 HuMAb（25μg／ml）のいずれかと一緒に、３０分間、図１１
に示す温度でインキュベートした。デキストラン分子は、マンノース受容体を通
じて樹状細胞に特異的に内部移行することが公知である（F. Sallusto et. al.
J. Exp. Med. 1995, 185:389-400)。標識（FITC）付デキストランの取り込みを
、FACS解析（即ちFACScalibur装置を用いた樹状細胞試料中の蛍光強度）で調べ
た。FITC-デキストラン取り込みのパーセントを、３７℃で100%に、そして４℃
で0%に設定した。
【０２３９】 図１１に示すように、抗体B11は、これらの条件下で、FITC-デキストランの取
り込みを61.5%遮断した。これらの結果は、ヒトモノクローナル抗体B11を用いる
と、マンノース受容体との病原体の相互作用を遮断できることを示唆している。
【０２４０】 実施例４ ヒト抗樹状細胞抗体の活性 Ｉ． ヒトモノクローナル抗体B11の樹状細胞への内部移行 樹状細胞への結合後にヒト抗体B11が内部移行する程度をフローサイトメトリ
で評価した。
【０２４１】 樹状細胞は上述したように接着性単核細胞から調製した。この細胞を飽和濃度
のモノクローナル抗体B11-FITCと一緒に４℃で１時間インキュベートしてこの抗
体を最大に表面結合させ、低温のPBSで洗浄して過剰な抗体を取り除き、さらに
３７℃で多様な時間、インキュベートして、抗体に内部移行させた。次に試料を
低温のPBSで洗浄して反応を停止させ、さらに0.1% PBA、pH 2.5 で洗浄して表面
に結合した抗体を細胞から剥がした。残った蛍光は、内部移行した抗体B11-FTIC
である。コントロール細胞はすぐに 0.1% PBA、pH 2.5 で洗浄して４℃に維持し
て、内部移行が最小の場合とするか、又は、0.1% PBA、pH 7 のみで洗浄して、
抗体-FITCの最大負荷があった場合とした。抗体内部移行のパーセントを以下の
式： % 内部移行= (試料の平均蛍光強度−酸で洗浄した４℃のコントロールの平
均蛍光強度）/ (PBSで洗浄した４℃のコントロールの平均蛍光強度−酸で洗浄し
た４℃のコントロールの平均蛍光強度） で計算した。
【０２４２】 図７に示すその結果は、ヒトモノクローナル抗体B11が樹状細胞への結合後に
効率的に内部移行することを実証している。ヒト抗樹状細胞モノクローナル抗体
B11のこのようなこれまで未知の性質から、この抗体を用いて、抗原及び毒素な
どの作用物質を、樹状細胞の内部に送達できることが分かる。
【０２４３】 ＩＩ．樹状細胞へのB11-FITCの内部移行 さらに顕微鏡検査も用いて、抗体B11が樹状細胞への結合後に内部移行するこ
とを確認した。
【０２４４】 単球をGM-CSF (10 ng/ml) 及びIL-13 (50 ng/ml) と一緒に非接着性条件下で
７日間、インキュベートして、樹状細胞を生じさせた。これらを、mAb B11-FITC
(1μg）に、 ヒトIgG (600μg）及び抗CD32 mAb IV.3 (10μg）の存在下で配合
して非特異的取り込みを遮断し、３７℃でインキュベートした。コントロール細
胞はこの全過程にわたって氷上でインキュベートした。３７℃に１５分間及び６
０分間置いた後、樹状細胞を氷上に置き、抗CD11c-PE (1μg)で染色した。mAb B
11 の内部移行を、共焦点顕微鏡法で、BioRad MRC1024レーザースキャニング共
焦点顕微鏡を用いて調べた。細胞は、蛍光について、15 mW Kr/Arレーザーから
出る488 nmの光線と、二つの光検出子 (FITCの蛍光には522/35 nm の二色、そし
てPE蛍光には605/32 nm の二色)とを用いてスキャンした。63倍のPlan-APO 1.4
NA 対物レンズ（ニューヨーク州ソーンウッド、カール・ツァイス社製）を、絞
りを2.1に設定して用いると、約1.0μmの厚さの蛍光像の光切片を検出できた。
細胞全体を切片にした後に、細胞中央のスライスから代表となる像を選んだ。
【０２４５】 これらの結果から、B11 mAbは、マンノース受容体への結合後に樹状細胞内部
に急速に移行することが裏付けられ、この抗体は抗原又は毒素を抗原提示細胞内
に効率的に送達できることがやはり示唆された。FACSデータと一致して、この内
部移行は１５分以内に明かとなり、１時間でほぼ終了した。
【０２４６】 ＩＩＩ．標的設定された抗原が送達された後の樹状細胞による抗原提示のヒト
モノクローナル抗体B11による促進 樹状細胞による抗原のプロセッシング及び提示を促進するのにヒトモノクロー
ナル抗体B11を利用できるかを調べるために、化学的架橋試薬SMCCを用いてこの
抗体を破傷風トキソイド（TT）抗原に共役させた。
【０２４７】 樹状細胞は接着性単核細胞から上述のように調製したが、例外として、細胞は
テフロン（登録商標）容器内で培養した。樹状細胞を回収し、96ウェル微量定量
プレートに、１ウェル当たり5000個の細胞になるように、10%のウシ胎児血清を
加えたマクロファージ無血清培地中に再プレーティングした。破傷風トキソイド
に共役させたモノクローナル抗体B11、又は、破傷風トキソイド単独、を、多様
な濃度でこの樹状細胞に加えた。単核細胞に破傷風トキソイドを加え、さらにIL
-2を加えて一緒にインキュベートして生成させた自己由来の破傷風トキソイド特
異Ｔ細胞を、１ウェル当たり50,000個の細胞になるように、樹状細胞を含有する
各ウェルに添加した。細胞を７日間、３７℃で一緒に培養し、生存細胞数を、MT
Tを基にした検定法を利用して、メーカーの指示（ウィスコンシン州マジソン、
プロメガ社）に従って検定した。破傷風トキソイド特異的Ｔリンパ球を特異的に
刺激する上での、樹状細胞を誘導する能力を、破傷風トキソイド又は抗体B11-破
傷風トキソイドに細胞を暴露してから比較した。その結果（図８）、破傷風トキ
ソイドをモデル抗原としてB11に共役させると、抗原特異的Ｔ細胞増殖で測定す
る限りでは、有意により効率的な抗原提示が起きることが示された。
【０２４８】 別の実験では、樹状細胞に、破傷風トキソイド（TT)を共役させたB11か、又は
、B11抗体と混合した破傷風トキソイド（共役させていないコントロール）を負
荷した後に、3H-チマジン（Thymadine）をＴ細胞増殖の読み取り値として用いた
。もう一つのコントロールとして、FcγRII（CD32)の遮断抗体であるmAb IV-3を
、B11-TT共役体の入ったいくつかのウェルに加えて、このFc受容体がB11-TTによ
る抗原プロセッシング及び提示の促進に寄与するかどうかを調べた。翌日、細胞
に、解凍したばかりの、予め樹立された破傷風トキソイド特異的Ｔ細胞を４日間
、配合した。その最後の日は一日中、細胞を、3H-チマジンと一緒に３７℃で共
インキュベートした。Ｔ細胞に取り込まれた3Hの量を検定した。
【０２４９】 前の実験と同様、その結果（図１２）は、破傷風トキソイドをモデル抗原とし
てB11に共役させると、抗原特異的Ｔ細胞増殖で測定したときに、有意により効
率的な抗原提示が起きることを示した。過剰量のmAb IV.3 を加えても、B11-TT
共役体による抗原提示の促進に有意な変化はなかったことから、B11-TTのFcγRI
Iとの相互作用はこの活性には必要ではないことが分かった。
【０２５０】 まとめると、図８及び１２に示したこれらの研究結果は、破傷風トキソイド単
独に比べ、同じレベルのＴ細胞刺激を達成するのに必要な、抗体B11に共役させ
る破傷風トキソイドの量は１０分の１乃至１００分の１であることを示している
。加えて、図８で見る限り、Ｔ細胞刺激の絶対度は、破傷風トキソイドを抗体B1
1で樹状細胞に標的設定したときに２倍高かった。 このように、これらのデータ
は、抗原をヒトモノクローナル抗体B11に共役させられること、そして、抗体で
標的決定された抗原は、標的決定されていない抗原よりもより効率的にプロセッ
シング及び提示され、ひいては、抗原特異的Ｔ細胞応答が促進されることを実証
している。
【０２５１】 実施例５ 樹状細胞に対するヒトモノクローナル抗体E21の特徴付け Ｉ． ヒト抗体E21抗原の分子量解析 樹状細胞ライセートを培養ヒト樹状細胞から調製した。簡単に説明すると、樹
状細胞を洗浄し、溶解緩衝液を含有する４℃のトリトンX-100に再懸濁させた。
分画していないこのライセートを4-15% SDS-ポリアクリルアミドゲルに添加した
後、このタンパク質をニトロセルロースに写し取った。そのブロットを10 ug/ml
E21と一緒にインキュベートし、続いて抗ヒトIgGアルカリホスファターゼプロ
ーブと一緒にインキュベートしてから、西洋わさびペルオキシダーゼを用いて視
覚化した。
【０２５２】 この実験の結果から、ヒトモノクローナル抗体E21抗原は分子量で約３６乃至
４０キロダルトンであることが分かった。
【０２５３】 ＩＩ．ヒト抗体E21のヒト皮膚及び表皮ヒト樹状細胞への結合 図１に示すように、ヒトモノクローナル抗体Ab E21は樹状細胞に優先的に結合
した。この実験は、ヒト抗体E21の皮膚及び表皮樹状細胞への反応性を、凍結皮
膚のE21を用いた免疫組織化学解析で調べられるよう、設計された。
【０２５４】 ヒト皮膚の凍結切片をFITC-E21 又はFITC-huIgGコントロールで染色し、ウサ
ギ抗FITCプローブを用いて検出した。
【０２５５】 免疫組織化学解析の結果は、ヒト抗体E21は、ヒト皮膚切片中の皮膚樹状細胞
／マクロファージ及び表皮樹状細胞（ランゲルハンス細胞）の両方と反応するこ
とを実証している。
【０２５６】 ＩＩＩ．ヒト抗体E21のマカク樹状細胞への結合 カニクイザル・マカクの動物（サル）モデルは、標的抗原が霊長類間で保存さ
れていることを前提に、抗体の臨床上の用途に関する適切な情報を提供すること
ができる。従って、ヒトモノクローナル抗体E21の、カニクイザル由来樹状細胞
との交差反応性をフローサイトメトリで評価した。
【０２５７】 カニクイザル単球をGM-CSF及びIL-4処置で樹状細胞に分化させ、E21との結合
についてフローサイトメトリで調べた。樹状細胞をE21と一緒に１時間、４℃で
インキュベートした後、洗浄し、さらに、ヒト抗IgG-FITCプローブと一緒に１時
間、４℃でインキュベートした。試料を、FACScalibur装置を用いて解析した。
【０２５８】 結び 以上の実施例は、高い親和性で樹状細胞に特異的に反応するヒトモノクローナ
ル抗体の作製を解説したものである。
【０２５９】 具体的には、ヒトモノクローナル抗体B11は、樹状細胞上のヒトマクロファー
ジマンノース受容体を特異的に認識する。さらに、ヒトモノクローナル抗体B11
は、樹状細胞内部へ効率的に移行し、樹状細胞による抗原プロセッシング及び提
示を促進する。
【０２６０】 ヒトモノクローナル抗体E21は、B11とは異なるヒト樹状細胞上抗原に結合する
。E21はまた、カニクイザル・マカク（サル）由来の樹状細胞とも交差反応する
ことから、E21抗原が霊長類間で保存されており、更なる抗体開発のための適切
な動物モデルを提示した。
【０２６１】 これらの結果は、本発明の完全ヒトモノクローナル抗体は、そのフラグメント
、共役体及び二重特異的分子も含め、樹状細胞が関連する疾患の診断及び治療に
利用できるという結論を裏付けている。
【０２６２】 同等物 当業者であれば、ごく日常的な実験を利用するのみで、ここに解説された本発
明の具体的実施例の同等物を数多く認識され、又は確認できることであろう。こ
のような同等物は以下の請求の範囲の包含するところと、意図されている。
【図面の簡単な説明】
【図１】 図１は、ヒトモノクローナル抗体B11、C20及びE21の、樹状細胞及
び造血細胞系U937、CEM、THP-1及びL540との反応性を、フローサイトメトリで評
価して示す。結合は平均蛍光強度で測定した。
【図２】 図２は、ヒトモノクローナル抗体B11、C20及びE21の樹状細胞への
用量依存的な結合を、フローサイトメトリで評価して示す。結合は平均蛍光強度
で測定した。
【図３】 図３は、ヒトモノクローナル抗体B11のCD34＋幹細胞由来樹状細胞
との用量依存的な反応性を、フローサイトメトリで評価して示す。結合は平均蛍
光強度で測定した。
【図４】 図４は、ヒトモノクローナル抗体B11の樹状細胞及びマクロファー
ジとの結合を、フローサイトメトリで評価して示す。
【図５】 図５は、樹状細胞表現型に分化するよう誘導されたTHP-1へのヒト
モノクローナル抗体B11の結合を、フローサイトメトリで評価して示す。
【図６】 図６は、ヒトモノクローナル抗体B11のマカク樹状細胞への結合を
フローサイトメトリで評価して示す。結合は平均蛍光強度で測定した。
【図７】 図７は、ヒトモノクローナル抗体B11の樹状細胞へのパーセント内
部移行を、３７℃で経時的に示す。
【図８】 図８は、抗原単独に比較して、抗体B11により上昇した抗原提示を
、破傷風トキソイド特異的Ｔ細胞の刺激で測定して示す。
【図９】 図９は、ヒトモノクローナル抗体B11のVL (SEQ ID NO:1 及び 2)
及び VH (SEQ ID NO: 3 及び 4)ドメインを連結して作製されたB11 ScFvコンス
トラクトを示す。
【図１０】 図１０は、FACS解析で測定したときのヒトモノクローナル抗体B1
1全体及びB11のF(ab')2フラグメント間の樹状細胞への結合の比較を示す。
【図１１】 図１１は、樹状細胞内部へのFITC-デキストラン移行のパーセン
トを示す。
【図１２】 図１２は、抗原をB11に共役させると抗原提示が促進されるため
、破傷風トキソイド単独で見られるのと同じレベルのＴ細胞刺激を達成するのに
必要な、抗体B11に共役させる破傷風トキソイドの量が１０乃至１００分の１に
少なくなることを示す。
【図１３】 図１３は、抗体B11の可変軽鎖（VL）及び可変重鎖（VL）のヌク
レオチド及び相当するアミノ酸配列を示す。
【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書
【提出日】平成１４年７月１７日（２００２．７．１７）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/12 Ａ６１Ｐ 35/00 35/00 37/00 37/00 37/02 37/02 37/06 37/06 Ｃ０７Ｋ 16/28 Ｃ０７Ｋ 16/28 19/00 19/00 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/06 Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｙ 5/10 33/577 Ｂ 15/02 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ Ｇ０１Ｎ 33/53 5/00 Ｂ 33/577 Ｅ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ， ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，Ｉ Ｎ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ， ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，Ｐ Ｌ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ， ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ケラー ティボー アメリカ合衆国 ペンシルべニア州 18942 オッツヴィル パーク ロード 30 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 AA20 BA46 BA61 BA80 CA02 DA02 GA03 GA08 GA09 GA11 GA27 HA15 HA20 4B064 AG27 CA10 CA19 CA20 CC01 CC24 DA01 DA13 4B065 AA91X AA93X AA94X AA94Y 4C085 AA14 AA21 AA27 BB33 BB34 BB35 BB36 BB37 CC03 CC07 CC08 CC23 EE01 4H045 AA10 AA11 AA20 AA30 BA10 BA41 BA50 CA40 DA76 EA20 EA50 FA72 FA74

Claims (55)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 樹状細胞に特異的に結合する、単離されたヒトモノクローナル
    抗体又はその抗原結合部分であって、以下の特徴： ａ）樹状細胞に対する少なくとも約107M-1の結合親和定数； ｂ）樹状細胞をオプソニン化する能力； ｃ）樹状細胞への結合後に内部移行する能力；又は ｄ）樹状細胞を活性化する能力、 のうちの一つ以上を有する、単離されたヒトモノクローナル抗体又はその結合部
    分。
  2. 【請求項２】 IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgAsec、IgD、及
    びIgEからなる群より選択されるアイソタイプを有する、請求項１に記載の単離
    されたヒト抗体又はその抗原結合部分。
  3. 【請求項３】 IgG1κである、請求項１に記載の単離されたヒト抗体又はその
    抗原結合部分。
  4. 【請求項４】 樹状細胞の細胞表面上にある抗原に結合する、請求項１に記載
    の単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分。
  5. 【請求項５】 マクロファージマンノース受容体に結合する、請求項４に記載
    の単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分。
  6. 【請求項６】 ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有
    する非ヒトトランスジェニック動物から得られるＢ細胞を不死化細胞に融合させ
    て含むハイブリドーマにより産生される、請求項１に記載の単離されたヒト抗体
    又はその抗原結合部分。
  7. 【請求項７】 A3、A5、A23、A24、A33、B9、B11、B33、B47、C8、C10、C20、
    C28、C29、C30、C35、E1、E8、E10、E18、E20、E21及びE24からなる群より選択
    されるハイブリドーマにより産生される、請求項１に記載の単離されたヒト抗体
    又はその抗原結合部分。
  8. 【請求項８】 ヒトエフェクター細胞の存在下で樹状細胞の細胞溶解を媒介す
    る単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
  9. 【請求項９】 ヒトエフェクター細胞による樹状細胞の細胞溶解を、1 x 10-7 M 以下のIC50でインビトロで媒介することのできる、請求項８に記載の単離され
    たヒト抗体又はその抗原結合部分。
  10. 【請求項１０】 樹状細胞の成長を抑制する、単離されたヒトモノクローナル
    抗体又はその抗原結合部分。
  11. 【請求項１１】 樹状細胞の成長を、1 x 10-7M 以下のIC50でインビトロで抑
    制することのできる、請求項１０に記載の単離されたヒト抗体又はその抗原結合
    部分。
  12. 【請求項１２】 ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを
    有する非ヒトトランスジェニック動物から得られるＢ細胞を不死化細胞に融合さ
    せて含むハイブリドーマであって、樹状細胞に特異的に結合するヒトモノクロー
    ナル抗体を検出可能な量、産生する、ハイブリドーマ。
  13. 【請求項１３】 前記ヒトモノクローナル抗体が、以下の特徴： ａ） 樹状細胞に対する少なくとも約107M-1の結合親和定数； ｂ）樹状細胞をオプソニン化する能力；又は ｃ）インビトロにおいて、ヒトエフェクター細胞の存在下で、約10μg/ml以下
    の濃度で樹状細胞の成長を抑制する又は樹状細胞の細胞溶解を媒介する能力、 のうちの一つ以上を有する、請求項１２に記載のハイブリドーマ。
  14. 【請求項１４】 A3、A5、A23、A24、A33、B9、B11、B33、B47、C8、C10、C20
    、C28、C29、C30、C35、E1、E8、E10、E18、E20、E21 及びE24からなる群より選
    択される、請求項１３に記載のハイブリドーマ。
  15. 【請求項１５】 樹状細胞に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を発現
    する非ヒトトランスジェニック動物であって、ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖
    導入遺伝子を含むゲノムを有する、非ヒトトランスジェニック動物。
  16. 【請求項１６】 ヒト重鎖導入遺伝子及びヒト軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを
    有する非ヒトトランスジェニック動物を、前記動物のＢ細胞によって抗体が産生
    されるよう、樹状細胞で免疫化するステップと； 前記動物のＢ細胞を単離するステップと； 前記Ｂ細胞を骨髄腫細胞に融合して、樹状細胞に特異的なヒトモノクローナル
    抗体を分泌する不死のハイブリドーマ細胞を形成するステップと を含む、樹状細胞に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体を生成する方法。
  17. 【請求項１７】 樹状細胞に対する少なくとも一つの第一結合特異的部分と、
    Fc受容体に対する第二結合特異的部分と、を含む二重特異的分子。
  18. 【請求項１８】 前記Fc受容体がヒトFcγRI又はヒトFcα受容体である、請求
    項１７に記載の二重特異的分子。
  19. 【請求項１９】 Fc受容体に、前記受容体の免疫グロブリン結合部位とは異な
    る部位で結合する、請求項１７に記載の二重特異的分子。
  20. 【請求項２０】 請求項１に記載の単離されたヒトモノクローナル抗体又はそ
    の抗原結合部分と、薬学的に許容可能な担体とを含む組成物。
  21. 【請求項２１】 請求項１に記載の単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分
    を二種以上、組み合わせて含む組成物であって、前記抗体又はその抗原結合部分
    のそれぞれが樹状細胞上の別個のエピトープに結合する、組成物。
  22. 【請求項２２】 樹状細胞の成長が抑制されるよう、樹状細胞に特異的に結合
    する単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分に、樹状細胞を接
    触させるステップを含む、樹状細胞の成長を抑制する方法。
  23. 【請求項２３】 樹状細胞の細胞溶解が起きるよう、エフェクター細胞の存在
    下で樹状細胞に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗
    原結合部分に、樹状細胞を接触させるステップを含む、樹状細胞の細胞溶解を誘
    導する方法。
  24. 【請求項２４】 樹状細胞に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル
    抗体又はその抗原結合部分を、樹状細胞が媒介する疾患を治療又は予防するのに
    有効量、被験体に投与するステップを含む、樹状細胞が媒介する疾患を治療又は
    予防する方法。
  25. 【請求項２５】 前記ヒトモノクローナル抗体が、Fc受容体に対する結合特異
    的部分に共役されている、請求項２４に記載の方法。
  26. 【請求項２６】 前記ヒトモノクローナル抗体が細胞毒に共役されている、請
    求項２４に記載の方法。
  27. 【請求項２７】 前記ヒトモノクローナル抗体が、免疫調節性化合物に共役さ
    れている、請求項２４に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 前記疾患が自己免疫疾患である、請求項２４に記載の方法。
  29. 【請求項２９】 前記疾患が移植片対宿主疾患である、請求項２４に記載の方
    法。
  30. 【請求項３０】 樹状細胞に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル
    抗体又はその抗原結合部分に、試料及びコントロール試料を、前記抗体又はその
    部分と樹状細胞との間の複合体形成が可能であるような条件下で、接触させるス
    テップと； 複合体の形成を検出するステップと、 を含む、試料中の樹状細胞の存在を検出する方法であって、 コントロール試料に比較したときの前記試料の複合体形成の差が、前記試料中
    の樹状細胞の存在の指標である、方法。
  31. 【請求項３１】 樹状細胞に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体又はそ
    の抗原結合部分の重鎖及び軽鎖の可変及び定常領域をコードするヌクレオチド配
    列を含む発現ベクターであって、前記抗体又はその抗原結合部分が、以下の特徴
    ： ａ）樹状細胞に対する少なくとも約107M-1の結合親和定数； ｂ）樹状細胞をオプソニン化する能力； ｃ）樹状細胞への結合後に内部移行する能力；又は ｄ）樹状細胞を活性化する能力、 のうちの一つ以上を有する、発現ベクター。
  32. 【請求項３２】 樹状細胞に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体又はそ
    の抗原結合部分を被験体に投与するステップであって、前記抗原を樹状細胞に狙
    わせるよう、前記抗体又はその抗原結合部分が前記抗原に作用的に連結されてい
    る、ステップ を含む、被験体において樹状細胞に抗原を狙わせる方法。
  33. 【請求項３３】 ａ）樹状細胞の表面上の一成分に対する少なくとも一つの結
    合特異的部分と； ｂ）前記結合特異的部分に連結された少なくとも一つの抗原と を含み、前記成分が、前記結合特異的部分で結合したときの前記分子複合体の内
    部移行を媒介する、分子複合体。
  34. 【請求項３４】 一つ以上の前記結合特異的部分が、A3、A5、A23、A24、A33
    、B9、B11、B33、B47、C8、C10、C20、C28、C29、C30、C35、E1、E8、E10、E18
    、E20、E21 及び E24からなる群より選択される抗体及びその抗原結合フラグメ
    ントを含む、請求項３３に記載の分子複合体。
  35. 【請求項３５】 前記抗原が腫瘍抗原、微生物抗原、ウィルス抗原、及び自己
    抗原からなる群より選択される、請求項３３に記載の分子複合体。
  36. 【請求項３６】 前記抗原が、前記結合特異的部分に化学的に連結されている
    、請求項３３に記載の分子複合体。
  37. 【請求項３７】 前記抗原が、前記結合特異的部分に組換えにより融合されて
    いる、請求項３３に記載の分子複合体。
  38. 【請求項３８】 被験体において抗原に対する免疫応答を誘導する又は向上さ
    せる方法であって、前記被験体において前記抗原に対する免疫応答が向上する又
    は誘導されるよう、前記被験体に分子複合体を投与するステップを含み、前記分
    子複合体が： ａ）樹状細胞の表面上の一成分に対する少なくとも一つの結合特異的部分と； ｂ）前記結合特異的部分に連結された少なくとも一つの抗原と を含み、 前記成分が、前記結合特異的部分で結合したときの前記分子複合体の内部移行
    を媒介する、方法。
  39. 【請求項３９】 前記免疫応答が、前記抗原に結合する抗体を含む、請求項３
    ８に記載の方法。
  40. 【請求項４０】 前記免疫応答が、MHC-I又はMHC-II複合体の一成分として抗
    原に結合するＴ細胞を含む、請求項３８に記載の方法。
  41. 【請求項４１】 前記抗原が、腫瘍抗原、微生物抗原、及びウィルス抗原から
    なる群より選択される、請求項３８に記載の方法。
  42. 【請求項４２】 ａ）樹状細胞の表面上の一成分に対する少なくとも一つの結
    合特異的部分と； ｂ）前記結合特異的部分に連結された少なくとも一つの抗原と を含む分子複合体を被験体に有効量、投与するステップを含み、 前記成分が、前記結合特異的部分で結合したときの前記分子複合体の内部移行
    を媒介する、 被験体を免疫化する方法。
  43. 【請求項４３】 樹状細胞に対する少なくとも一つの第一結合特異的部分と、
    標的細胞上の抗原に対する第二結合特異的部分と、を含む二重特異的分子。
  44. 【請求項４４】 前記標的細胞が、腫瘍細胞、微生物病原体、ウィルス及びウ
    ィルス感染細胞からなる群より選択される、請求項４３に記載の二重特異的分子
    。
  45. 【請求項４５】 樹状細胞を活性化する、単離されたヒトモノクローナル抗体
    又はその抗原結合部分。
  46. 【請求項４６】 樹状細胞によるサイトカイン放出を誘導する、請求項４５に
    記載の単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分。
  47. 【請求項４７】 樹状細胞の表面上の免疫調節性受容体の発現を調節する、請
    求項４５に記載の単離されたヒト抗体又はその抗原結合部分。
  48. 【請求項４８】 前記免疫調節性受容体が、CD80 (B7.1)、CD86 (B7.2)、CD40
    、及びCD54 (ICAM)からなる群より選択される、請求項４５に記載の単離された
    ヒト抗体又はその抗原結合部分。
  49. 【請求項４９】 ある細胞が樹状細胞に狙われるよう、樹状細胞に特異的に結
    合するヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分を、前記細胞の表面に連結
    するステップ、 を含む、細胞を樹状細胞に狙わせる方法。
  50. 【請求項５０】 細胞が、前記細胞の表面上に、樹状細胞に特異的に結合する
    ヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合フラグメントを発現するよう、前記抗
    体又はその抗原結合部分をコードする核酸分子を前記細胞にトランスフェクトす
    ることで、前記細胞を樹状細胞に狙わせるステップ を含む、ある細胞を樹状細胞に狙わせる方法。
  51. 【請求項５１】 樹状細胞に特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル
    抗体又はその抗原結合部分であって、前記抗体が、SEQ ID NO:2 に示すアミノ酸
    配列を有する可変軽鎖と、SEQ ID NO:4に示すアミノ酸配列を有する可変重鎖と
    を含む、単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
  52. 【請求項５２】 樹状細胞上のヒトマンノース受容体に結合して遮断する、単
    離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合部分。
  53. 【請求項５３】 樹状細胞上のヒトマンノース受容体への病原体の結合を防ぐ
    方法であって、請求項５２に記載の抗体又はその抗原結合部分を、樹状細胞に、
    病原体の前記細胞への結合を防ぐのに充分な量、接触させるステップを含む、方
    法。
  54. 【請求項５４】 前記病原体がウィルス又は細菌である、請求項５３に記載の
    方法。
  55. 【請求項５５】 ヒト皮膚樹状細胞、ヒト表皮樹状細胞、及びカニクイザル・
    マカク由来樹状細胞上の、PAGEで測定したときに分子量が３６乃至４０kDである
    抗原に、特異的に結合する単離されたヒトモノクローナル抗体又はその抗原結合
    部分。
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