JP2003531685A - 脱細胞化脈管補綴物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、血栓閉塞に耐性であり、かつ免疫原性レベルが低い、脱細胞化脈管補綴物（ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｐｒｏｓｔｈｅｓｅｓ）に関する。この脈管補綴物は、裸にされた細胞（ｄｅｎｕｄｅｄｏｆ ｃｅｌｌ）であり、そして抗血栓形成剤および増殖因子でコーティングされており、このことで再細胞化（再細胞化）を促進し、さらに免疫原性を減じる。この補綴物は、構造的一体性を維持したまま、高い機械的強度を有し、動脈破裂に耐え、安全な外科縫合を可能にする。本発明は、血管、弁、または弁を有する血管の部分である、脈管補綴物を提供する。本発明はまた合成脈管ステントをコーティングするために有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の技術分野） 本発明は血栓閉塞に抵抗して、免疫性の低レベルを有する脱細胞化された（ｄ
ｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄ）脈管の補綴に関する。脈管の補綴は、細胞の中で
裸にされて、再細胞化（ｒｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）を進めて、更に
免疫性を減らす抗血栓形成性の代理人および増殖因子でおおわれている。

【０００２】 （発明の背景） 慢性の静脈の不足は、米国の、そして、世界の全体にわたる重大な健康課題で
ある。７００万人以上の人々は悩まされる、そして、少なくとも５００、０００
は足潰瘍化を開発する結果。約９００、新規な０００は、ケースに入れる毎年起
こる。慢性の静脈の不足は、慢性静脈の病気の全ての原因を含む一般用語である
。それは、引き伸ばされた弁および膨張する静脈の壁を有する主要な形式におい
て、そして、長手方向隔壁およびひどく妥協されたルーメンを有する傷になられ
て奇形の弁および厚くなる静脈の壁については、血栓静脈炎に続いている第２の
形式において起こる。静脈の不足、例えば弁形成不全、先天的な奇形および外部
の障害の他の原因は、よりしばしば起こらない。

【０００３】 臨床徴候は、激痛および再発する潰瘍化以外から明らかな徴候まで静脈の不足
レンジと関連した。掛かり合いのサイトは、徴候の厳しさに重要に見える。 このように、表面的な静脈のシステムの静脈瘤は通常優しい、そして、重大な複
雑の発生率は低い。対照的に、深い静脈のまたは容器を穿孔する不足は、よりし
ばしば苦痛、膨張、潰瘍化および長いｔｅｎｎ障害にかかわる。

【０００４】 静脈の不足のための現在の基本的処理は、還流の防止および静脈の圧力の減少
に依存する。寄り掛かり装置、手足立面図、穏やかな利尿剤管理および弾力性が
ある圧縮ストッキングを含む保守的なしかし処理は、下にある病気方法よりむし
ろ徴候のレリーフを狙う。それらは、特に成功していない。

【０００５】 直接のｖａｌｖｕｌｏｐｌａｓｔｙは冗長な尖端端を締めることによって完成
していてもよいのに、間接的なｖａｌｖｕｌｏｐｌａｓｔｙは弁のまわりでＤＡ
ＣＲＯＮまたはポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）袖口を使用する。血行
力学測定値の目立つ増加にもかかわらず、臨床改良は、しばしばより明白でない
。静脈の弁修復および置き換えは、能力を深い静脈のシステムに戻す試みである
。静脈の弁修復は、しかしそれが従来の深い静脈の血栓症のないそれらの患者に
適しているだけである限定が欠点である。弁装置がかなり等級を下げられるかま
たは破壊された。その結果、弁移植は前兆となるレリーフを提供する唯一の利用
できるオプションおよび静脈の圧力の落下であってもよい。提供者弁の量および
質は、重大な課題のままである。

【０００６】 典型的患者において、４０％のｂｒａｃｈｉａｌであるか腋窩の弁に対する３
０％ぐらいは、無能力である。その上、多くの患者は、ｂｒａｃｈｉａｌなｓｍ
ａｌｌｅｒ−ｃａｌｉｂｅｒまたは腋窩の静脈移植片を適応させない静脈のシス
テムを膨張させた。したがって、弁移植は、外科の技術としてのその用途のかな
りの制約が欠点である。

【０００７】 ６ｍｍ未満の内径を有する小さい直径脈管の移植片が、動脈の閉鎖的な病気の
治療のための大動脈−冠状動脈てｉｎｆｒａｐｏｐｌｉｔｅａｌな動脈バイパス
において、そして、腎臓の病気の端段階の血液透析アクセスのためのａｒｔｅｒ
ｉｏ−静脈の導管として広く使われる。現在、自生のｓａｐｈｅｎｏｕｓな静脈
は、小さい直径動脈のｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｖｅな手順のための最も広く使
われている脈管の補綴であり続ける。ｓａｐｈｅｎｏｕｓな静脈を有する幹線の
バイパスのための４年での主要な開通は、４０−７０％である。しかし、この種
のバイパスを造ることにとっての実際的な障害は、４０％の患者に対する１０が
成功した移植片のために移植されることができる受け入れられるｓａｐｈｅｎｏ
ｕｓな静脈を有しないという事実である。

【０００８】 心臓であるか脈管の外科の手順に用いられる脈管組織の前の収穫、異常に拡張
した静脈除去および従来の血栓静脈炎は、不成功の自生のｓａｐｈｅｎｏｕｓな
静脈移植の最も一般の理由である。自生のｓａｐｈｅｎｏｕｓな静脈のそれより
良いか同等の開通率については、小さい直径脈管の補綴の代わりの出所は、緊急
に臨床使用のために必要とされる。死体からの静脈の同種移植片が、また、使わ
れた。それらは、移植片の生命の初期に合理的機能を提供するが、２年以後ひど
い結果を生む。制御率凍ること、記憶ａｔ−１９０ Ｃおよび凍結防止剤（例え
ばジメチルスルホキシドおよびコンドロイチン硫酸塩）を含む現代の低温保存技
術は、ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄされた同種移植片ｓａｐｈｅｎｏｕｓな静脈
の生存能力を向上させる。ｉｎｆｒａｉｎｇｕｉｎａｌなけい骨の動脈再建のた
めのｓａｐｈｅｎｏｕｓな静脈が有する変更されていないｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒ
ｖｅｄされた同種移植片を使用している成功した結果は、５０％まで１０の範囲
の１年の開通率を成し遂げた。患者に対する長期の利点は、静脈移植片拒否およ
び予期されてない早い移植片終了によってしかしそこなわれた。複雑は導管の機
械的な故障に関した。そして、例えば、それによって動脈瘤または断裂を融合さ
せて、より大きい周波数によって起こって、新しい自生の静脈と比較して、より
大きい不健全が生じた。

【０００９】 それらが大きくて小型の動脈の再建において、理想的でない場合であっても、
合成ＤＡＣＲＯＮおよびＰＴＦＥ脈管の補綴は若干の度の臨床成功を成し遂げた
。 加えて、６ｍｍより小さい容器置換は、直径早い移植片閉塞に影響されやすい。
合成の移植片の最もしばしば遭遇された失敗は、血栓症およびａｎａｓｔｏｍｏ
ｔｉｃな過形成から生じる。合成移植片材料の固有の特性および人間のそれらの
限られた自然発生的なｒｅ−ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎは、高い表
層の血栓形成性に貢献する。 移植の後、２年起こっている動脈瘤形成の高い率のため、グルタルアルデヒドを
固定した鈍重で人間の臍の静脈移植片の移植は広く評価されて、主に捨てられた
。 大部分のこれらの移植片は、遅延脈管の治療して退行性の変化を原因として生じ
るので機能しなかった。

【００１０】 非常に免疫原性、化学的に修正された静脈の材料に対する免疫反応は、ｍｕｌ
ｔｉｎｕｃｌｅａｔｅｄされた巨大な細胞および減少する植設再細胞化の侵入に
よって特徴づけられた。さらに、グルタルアルデヒド固定は、自然なマトリック
ス・タンパク質構成を乱した。グルタルアルデヒドの細胞障害性効果は、移植片
壁に細胞移動を禁止した。移植片の堕落は、血栓症によって容器の非常に血栓形
成性の表層および当然の閉塞に結果としてなった。

【００１１】 多くの要因は、特定の補綴によって達成される開通の程度に貢献する。 これらは、織物移植片の場合選ばれた材料、表層血栓形成性、迎合性および多孔
性の固有の特性を含む。材料の表層の特性は、小さい容器の所望の長期の開通を
固定する際の問題が置換するキーであるようである。多数の研究者は生物学上そ
れらを不活発にするために補綴の材料を修正することによって小さい直径脈管の
移植片の臨床効力を最適化しようとした、しかし、不活性この種の材料はまだ開
発されていない。補綴組織複合体の生物学的構成要素を最適化する他の方法は、
ｂｉｏｈｙｂｒｉｄ材料の開発に通じた。若干の実施例は現実的な電池の種をま
かれる合成材料を含む。そして、生物学的化合物（例えばアルブミンおよびコラ
ーゲン）および材料のコーティングが有利な生物学的反応を誘発することは公知
の重合体から合成される。この方法は、また、実際的であるか効果的脈管の補綴
を生まなかった。

【００１２】 一般に、動物または人間から得られる生物学的材料は、現在利用できる技術に
よって完全に繰り返されることができないユニークで特別なミクロ構造的で、機
械で、ｈｅｍｏｄｙｎａｍｉｃａｌで生化学特性を有する。したがって、生物学
上誘導された材料は、ｉｍｐｌａｎｔａｂｌｅな人工の器官の原料として大きい
可能性を有する。動物臓器移植のための豚のオルガンの使用は、人間に移植のた
めの利用できる器官の不足を克服する魅力的なオプションである。しかし、鋭い
拒否の課題は、未解決のバリアのままである。異種器官の細胞表層分子は、主に
ホスト拒否反応を誘発する役割を果たす。このように、ａｌｌｏｇｅｎｉｃであ
るか異種組織の免疫性の不認可および移植片の長期の耐久性の結果として生じる
減少は、理想的な移植片の成功した開発に対する主な障害である。

【００１３】 ａｌｌｏｇｅｎｉｃであるか異種脈管の移植片の最も免疫原性部分は、細胞構
成要素である。対照的に、成熟したコラーゲンは、特に同じ種の個人から移され
るときに、ローまたは抗原性以外を示す。たとえば、化粧の目的のためにまたは
ウシ・コラーゲンを注入される脈管の移植片において吹き込まれるときに、精製
されたウシ・コラーゲンに対する免疫学の反応の誘導は極めて低い。他方、コラ
ーゲンの中で化学的にクロスリンクすることは、非常に免疫原性コラーゲンを描
いて、徹底的にホストを有するその生体適合性を減らすことができる。

【００１４】 さまざまなサイズの直ちに利用できる、合成の、生物学的なｂｉｏｈｙｂｒｉ
ｄ静脈の弁は非常に弁再建手術を容易にする。そして、多数のサイトの弁挿入の
望ましい目的を含む。脈管の容器の開発または血栓症および免疫性の拒否の長期
の可能性を避ける静脈の弁補綴は、慢性の静脈の不足の処置に革命を起こす。

【００１５】 血栓形成性および貧しい組織ｃｏｍｐａｔａｂｉｌｉｔｙの課題は、また、ｉ
ｍｐｌａｎｔａｂｌｅな脈管の広さによって遭遇される。脈管の広さは装置を支
持している。そして、気球血管形成または動脈内膜除去術の後、強化するかまた
は血管を膨張させるために使われる。それらは、概してｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉ
ｃで、弱い組織互換性を有する合成材料でできている。広さは、組織繁茂から血
栓症の閉塞およびｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓのために主に失敗する。

【００１６】 したがって、必要であることは、耐久性があって、構造上の完全性を維持する
ことができる移植片である。具体的には、ｄｉｌａｔｉｏｎａｌなおよび伸長ゆ
がみが最小にされるために、それは全ての寸法の機械の強さを保持しなければな
らない。 移植片は、長期の記憶装置ができなければならない。それは、脈管の再建の広い
バリエーションを適応させるために多くのサイズにおいて利用できなければなら
ない。補綴は、伝染病に抵抗しなければならない。Ｉｎｔｒａｏｐｅｒａｔｉｖ
ｅｌｙに、理想的な移植片は優れた取り扱っている特徴を有しなければならない
。そして、柔軟性、縫合配置の容易さおよび最小の針−穴て隙間の放出を含む。
理想的な移植片の迎合性は、密接にホスト容器のそれに近くなければならない。
理想的には、交差連絡についての乱気流は、ｉｎｔｉｍａｌな過形成を減少させ
るために最小にされなければならない。加えて、ｌｕｍｉｎａｌな表層は、患者
の小板て集合て血栓症以下の配置に抵抗しなければならなくて、生物学的材料の
化学的処理から起こることができる免疫性を避けなければならない。最後に、ｃ
ｏｓｔｃｏｎｔａｉｎｍｅｎｔのこの時代において、移植片は比較的安価でなけ
ればならなくて製造するのが簡単でなければならない。

【００１７】 （発明の概要） 本発明は、少なくとも一つのａｎｔｉ血栓形成性の因子および少なくとも一つ
の増殖因子に共有結合して連結される脱細胞化された脈管の補綴を提供すること
によって上記した課題を解決する。脱細胞化された血管および脈管の弁は、移植
片の再細胞化を進めるために最小の免疫性、抗血栓形成性の代理人および増殖因
子のコラーゲンおよびエラスチン・マトリックス・タンパク質から成る。

【００１８】 本出願の訴訟物である脈管の補綴は、現在の合成であるか修正された自然の脈
管の移植片に勝る利点を提供する新しい特性を有する。移植片のＤｅｃｅｌｌｕ
ｌａｒｉｚａｔｉｏｎは、免疫学の拒否を誘発している主な要因を除去する。こ
れらの補綴はホスト脈管の細胞侵入、細胞付着、増殖、移動および分化のための
また、適切な基板である。これは、次のことの故である。それらは天然のマトリ
ックス・タンパク質から成る。ヘパリンを含むがこれに限らず、抗血栓形成性の
代理人を有する脈管の補綴の共有結合結合は、非共有結合付着サイトを脈管の治
療および改造している方法を改良して、速める塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦ
ＧＦ）を含むがこれに限らずヘパリン−締め具増殖因子のような増殖因子に対し
て提供する。このように、本発明のｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた生物学的
脈管の補綴は、手術後の複雑の長期開通およびより少ない可能性を有する。これ
らの移植片は、回復の率を増やして、拒否の可能性または移植片の封鎖を減少さ
せることによって患者のためになる。

【００１９】 本発明の脱細胞化された移植片は主にコラーゲンおよびエラスチン・マトリッ
クス・タンパク質から成る。そして、それは種の中で非常に節約されて、低い免
疫性を有する。これは、１つの種から異種移植片の使用を許可するもう、移植材
料の同種産地への現在の信頼を減少して、そして、利用できる補綴の供給をかな
り拡張する。選択の移植片が直ちに利用できるために、必要なときに、脱細胞化
されたマトリックスは長期の記憶装置の間、安定している。この特性は、脈管の
外科医がより密接に受け取る血管の直径に合致する補綴を選ぶことができる。ａ
ｎａｓｔｏｍｏｔｉｃな血栓形成に結果としてなりそうにない利用された血流は
、それによって得られる。

【００２０】 本発明の脈管の補綴にもよって、他の薬学的に活性な因子が束縛されるかまた
は免疫学的な不活発な生物学的マトリックスに、一方固定されることができる。
本発明のこれおよび他の効果は、現在利用できる技術によって達成されることが
できない。

【００２１】 したがって、減少する血栓形成性を有する表層をつくるために脱細胞化された
脈管の補綴に固定される抗血栓形成性の代理人を含むことができる脈管の補綴を
提供することは、本発明の目的である。 本発明の他の目的は、長期の耐久性のための高度な機械の強さおよび外科の移植
のための適合性を保持する減少する免疫性を有する脈管の補綴を提供することで
ある。

【００２２】 本発明のさらに他の目的は、倉庫の間、安定している脈管の補綴を提供するこ
とである。

【００２３】 さらに、本発明の別の目的は、動脈瘤形成に抗する充分な機械の力を保持して
、縫合の間際に最小の漏洩を有する外科の裁縫を支持する脱細胞化された脈管の
補綴を提供することになっている。

【００２４】 他の本発明の目的は、脱細胞化された、抗血栓形成性の、増殖因子−バウンド
脈管の補綴を合成脈管の広さおよび広さ−弁装置と組み合わせることである。 それが血栓形成性および免疫性を減らして、自国の血管の機械の強さに近いため
に、さらに別の本発明の目的は脈管組織をｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅするため
に方法を提供することになっている。

【００２５】 本発明のまた、目的は、脱細胞化された脈管組織を少なくとも一つの抗血栓形
成性の因子に連結して、修正された脈管組織が脈管の補綴として使われることが
できるために、少なくとも一つの細胞増殖因子の中で連結している二番を適用す
る方法を提供することである。

【００２６】 それらが免疫学の拒否の方へ異種移植片に減少する傾向を供給した時から、本
発明のｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされて、ヘパリン添加されて増殖因子−バ
ウンド脈管組織は現在使用された補綴より優れている。

【００２７】 本発明のさらに別の効果は、脱細胞化された、ヘパリン添加された、増殖因子
−バウンド脈管の補綴が多数の脈管の置き換えまたは再建手順、慢性の静脈の不
足のための静脈の弁移植、静脈置き換え、心臓弁置き換えの、そして、頸動脈動
脈内膜除去術、大腿動脈ｔｈｒｏｍｂｅｃｔｏｍｙおよび他の脈管の壁修復の後
の脈管のパッチとしてのアプリケーションを有するということである。

【００２８】 本発明の更なる効果は、脱細胞化された脈管の植設、ヘパリンおよびヘパリン
−締め具増殖因子の組合せが新規なプラットフォーム技術を多くの医学の製品の
開発のために用意するということである。

【００２９】 これらの、そしてまた他の、特徴、本発明の目的および利点および本発明の好
適な実施例は、あとに続く詳細な説明から明らかになる。

【００３０】 （発明の詳細な説明） 実施例において、本発明はその上に固定される抗血栓形成性の代理人を有する
脱細胞化された脈管の補綴を提供する、そして、増殖因子は抗血栓形成性の因子
に縛った。脈管組織の細胞構成要素の除去は、組織の抗原性の決定要素の主な出
所を除去して、非常に移植片の免疫原性可能性を減らす。抗血栓形成性の因子は
、裸にされた移植片の新しく露出したコラーゲンの非常に血栓形成性の性質を原
因として生じるので、概して手術後の複雑が生じる脈管の血栓症の可能性を減ら
す。

【００３１】 移植片組織を少なくとも一つの増殖因子でおおうことは、不活性マトリックス
・ティッシュ（それはかなり移植片の開通を増やす）の再細胞化を進めて、拒否
の可能性または容器の狭窄症を減らす。一方更なる善後策を必要とする患者に、
これは不安および危険を少なくする。そして、更なる手術を含む。実施例におい
て、本発明は長期の記憶装置の間、安定していて、直ちに増殖因子でおおわれて
いることができて、成功した脈管の移植片のための予想を改善する免疫学的な不
活性、補綴の材料を提供する。これらの移植片は、免疫学的に受取人に受け入れ
られて、ｔｌｉｒｏｍｂｏｔｉｃであるかｒｅｓｔｅｎｏｔｉｃな閉塞に抵抗す
る。

【００３２】 もう一つの実施例では、本発明は解剖した脈管組織をｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉ
ｚｅして、細胞外マトリックスを抗血栓形成性の代理人および増殖因子に連結す
るために方法を提供する。この方法は組織を水につける連続した工程を使用する
。そして、機械的に細胞破片を除去して、それからティッシュを少なくとも一つ
のプロテアーゼ、少なくとも一つのリパーゼおよび少なくとも一つのヌクレアー
ゼで処理する。その構造上で機械の完全性および抗血栓形成性のコーティングが
維持されるために、補綴は少なくとも一つの洗剤においてすすがれて、従来技術
において当業者にとって公知のいかなる手段にもよって格納される。

【００３３】 血管を意味するために本願明細書において用いられるｔｅｒｍ「ｖａｓｃｕｌ
ａｒ ｔｉｓｓｕｅ」ｉｓ、それの部分、血管から解剖される一つ以上の弁、一
部の血管の範囲内で保持される弁、解剖して非弁の組織から自由な大動脈である
か肺の弁、解剖した血管または心臓の組織の範囲内で保持される大動脈であるか
肺の弁または補綴としての用途に適していてもよい他のいかなる脈管組織も。血
管は動脈および静脈を含むことができる。そして、それの部分および脈管の台が
動脈または静脈を含む。 ｔｅｒｍ「ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄ」ｉｓは中間に本願明細書において
その物理的であるか、化学であるか酵素の手段を使用した、または、それのいか
なる組合せもそれの脈管組織の細胞構成要素を除去した。残留する脱細胞化され
た脈管組織は自国の脈管組織の細胞外基盤から成って、エラスチン、コラーゲン
、フィブリンを含むが、これに限定されるものではなくなることができる、そし
て、他の細胞外タンパク質または非タンパク性の化合物は従来技術において当業
者にとって公知で、脈管組織またはそれのいかなる組合せにもおいて見つけた。 ｔｅｒｍｓ「ｐｒｏｓｔｈｅｓｉｓ」（脈管の補綴）「（脈管のｐｒｏｓｔｈ
ｅｓｅｓ」ｏｒ「中間に本願明細書において由来されるかまたは嵌入される外科
の植設または植設を使用される脈管のｉｍｐｌａｎｔ」ａｒｅ、人間であるか動
物の患者の脈管系）。項は、合成であるか自然の材料でできている外科の植設ま
たは脱細胞化された脈管組織を含むがこれに限らずそれのいかなる組合せにもあ
てはまることを目的とする。 いかなる外科の植設も意味するために本願明細書において用いられるｔｅｒｍ
「ｇｒａｆｔ」ｉｓは、受け取る患者の組織からまたは受取人としての同じであ
るか異なる種の提供者の組織から由来した。移植片は、充分にまたは部分的に合
成で、従来技術において当業者にとって周知のいかなる適切な材料からも成るこ
とができる。 血栓形成の誘導または血栓の安定性を最小にする化合物のいかなる化合物も意
味するために本願明細書において用いられるｔｅｒｍ「抗血栓形成性のａｇｅｎ
ｔ」ｉｓまたは組合せ。抗血栓形成性の化合物は、グリコサミノグリカン（例え
ばヘパリン、ヘパリン硫酸塩、ｄｅｒｍａｔａｎ硫酸塩および当業者にとって公
知の抗血栓性の活動を有する他のいかなるグリコサミノグリカンも）を含む。抗
血栓形成性の化合物は、また、デキストランおよびそれの誘導体（ヒルジンおよ
びそれの誘導体）を含むことができる、そして、クマリンおよび誘導体それにつ
いて４−ｈｙｄｒｏｘｙｃｏｕｍａｒｉｎ、ワルファリン、ｄｉｃｕｍａｒｏｌ
、ｐｈｅｎｐｒｏｃｏｕｍｏｎおよび３−ｄｉｏｎｅ、ａｎｉｓｉｎｄｏｎｅお
よび他のものが熟練したものにとって公知の化合物を話したａｃｅｎｏｃｏｕｍ
ａｒｏｌ（ｉｎｄａｎ−ｌ）を含むがこれに限らず技術。抗血栓形成性の化合物
は、ウロキナーゼ、プラスミノゲン活性剤、アンチトロンビンＩＩＩを含む血液
血栓を溶かして、それの形式を修正したタンパク質を含むがこれに限らず血栓溶
解剤を含むことができる。化合物がそうすることができるａｎｔｉｔｈｒｏｍｂ
ｏｇｅｎｉｃも、脱細胞化された脈管の補綴に固定されることができる、そして
、形成を禁止する他のいかなる化合物も含むかまたは不安定化に参加する、脈管
の補綴の血栓症の閉塞。 いかなるタンパク質も意味するために本願明細書において用いられるｔｅｒｍ
「ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ」ｉｓまたは細胞の成長を誘発するかまたは促進
することができる非タンパク性の化合物。この種の細胞は、内皮細胞、平滑筋細
胞および線維芽細胞を含むが、これに限定されるものではない。増殖因子は線維
芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）、酸性の線
維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦ）、ヘパリン−締め具表皮の増殖因子（ＨＢＥＧＦ
）、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、表皮の増殖因子（ＥＧＦ）、変えている
増殖因子アルファ（ＴＧＦ−ａ）、変えている増殖因子ベータ（ＴＧＦ−Ｐ）、
脈管の内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）、胎盤増殖因子（ＰＩＧＦ）、インシュリ
ンのような増殖因子（ＩＧＦ）または他のいかなる増殖因子も含むが、これに限
定されるものではなくなることができる。そして、断片または誘導体がそれにつ
いて当業者にとって公知である。 患者に植設される補綴の装置を意味するために本願明細書において用いられる
ｔｅｒｍｓ「ｓｔｅｎｔ」ａｎｄ「ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｔｅｎｔ」ａｒｅ（血
管のルーメンの範囲内のどちらでも）または血管の外部を包むこと。装置は、従
来技術において当業者によって全体的にあるいは部分的にＤＡＣＲＯＮ、ＰＴＦ
Ｅまたは使用する他のいかなる材料も含むがこれに限らず合成材料から成ること
ができる。合成の広さ装置は、また、生物学上誘導された材料と組み合わせられ
ることができるかまたは単に非合成材料だけから成ることができる。 １つの種の提供者から得られて、同じ種の受取人において使われる外科的に植
設された材料の移植片を意味するために本願明細書において用いられるｔｅｒｍ
「ａｌｌｏｇｅｎｉｃ」ｉｓまたは移植。 １つの種の動物によって贈与されて、他の種の受け取る動物に植設される外科
的に植設された材料の移植片を意味するために本願明細書において用いられるｔ
ｅｒｍ「ｘｅｎｏｇｅｎｉｃ」ｉｓ。 提供者種は、それについてブタ、羊、牛、さまざまな霊長類種、人間およびい
かなる遺伝子が組み替えられた変化も含むが、これに限定されるものではなくな
ることができる。

【００３４】 トリプシン、プロテイナーゼＫまたは他のいかなるプロテアーゼも含むがこれ
に限らずその組成のアミノ酸に、ペプチドまたはペプチドにタンパク質を消化す
ることができるか従来技術において当業者にとって公知であるペプチダーゼであ
るいかなる酵素も意味するために本願明細書において用いられるｔｅｒｍｓ「ｐ
ｒｏｔｅａｓｅ」ｏｒ「ｐｅｐｔｉｄａｓｅ」ａｒｅ。 従来技術において当業者にとって公知である脂質を消化することができるいか
なる酵素（修正された酵素またはそれの組合せ）も意味するために本願明細書に
おいて用いられるｔｅｒｍ「ｌｉｐａｓｅ」ｉｓ。 酵素または化学手順を意味するために本願明細書において用いられるｔｅｒｍ
「ｎｕｃｌｅａｓｅ」ｉｓまたはそれについて組合せ、それは具体的には、デオ
キシリボヌクレアーゼ（ＤＮＡｓｅ）、リボヌクレアーゼ（ＲＮＡｓｅ）、ｍｉ
ｃｒｏｃｏｃｃａｌなヌクレアーゼ、エキソヌクレアーゼＩＩＩ、Ｓｉヌクレア
ーゼまたは従来技術において当業者にとって公知の他のいかなるヌクレアーゼも
含むがこれに限らず核酸を等級を下げて、破壊する。 従来技術において当業者にとって公知でトリトンＸ−１００、ナトリウム・ド
デシル硫酸塩（ＳＤＳ）、ナトリウムｌａｕｒｙｌ硫酸塩（ＳＬＳ）または他の
いかなる洗剤も含むがこれに限らず組織から可溶性にして、脂質を抜き取ること
ができるかそれの組合せであるいかなる化合物も意味するために本願明細書にお
いて用いられるｔｅｒｍ「ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ」ｉｓまたは組成物。 脈管組織の細胞構成要素の除去は、自然の提供者から得られる脈管の補綴の免
疫性の主要な出所を除去する。マトリックス・タンパク質の中で化学的にクロス
リンクすることは避けられた時から、本発明は人工の免疫性を導かない。

【００３５】 本発明の補綴は、脈管のｓｔｅｎｏｔｉｃな病気の治療ために、動脈の再建手
順、妨害する動脈の病気の治療、静脈の置き換えまたは再建手順、妨害する静脈
の病気の治療、静脈の弁移植および脈管の広さの変更態様を含むがこれに限らず
いくつかの使用を有する。

【００３６】 本発明は、補綴の置き換えとして適切である、しかし、制限する（大動脈−冠
状動脈の小さい直径容器）外部の腸骨の動脈、そして、ｉｎｆｒａｐｏｐｌｉｔ
ｅａｌな動脈バイパス（優れて劣った大静脈および門脈）、そして、手足（いず
れによって慢性の静脈の不足が生じるか不足）の外部の腸骨で他の静脈。広さ−
弁装置が、また、静脈の弁移植への最小限に侵入するアプローチのために使われ
ることができる。 脈管のパッチが、頸動脈動脈内膜除去術、大腿動脈ｔｈｒｏｍｂｅｃｔｏｍｙお
よび脈管の壁修復のために使われることができる。ヘパリンは、アンチトロンビ
ンＩＩＩの抑制する動作を誘導することによって強力な抗凝血性の効果を行使す
る。

【００３７】 脈管の治療に関係しているいくつかの増殖因子はヘパリンに縛ることが高く好
きである。ｂＦＧＦは内皮細胞および平滑筋細胞増殖に対する有力な効果および
移動を有するヘパリン−締め具増殖因子である。うまく、ヘパリン添加された表
層に束縛されるときに、ｂＦＧＦは移植片、速まっている脈管の治療および改造
することに宿主細胞増殖および移動を促進する。そして、移植片堕落を減らす。

【００３８】 広さ装置は更にヘパリン添加を支持することができる、そして、成長は脱細胞
化された脈管の補綴をｆａｃｔｏｒｃｏａｔｅｄした。その外面が容器の内部の
表層と隣接しているために、広さは脈管の容器の外面に隣接して配置されること
ができるかまたは移植片のルーメンに嵌入されることができる。再細胞化がそう
するような時間がコラーゲン、エラスチンおよび他のマトリックス構成要素の新
しい堆積によって、マトリックスを強化するまで、この方法は裸にされた容器に
対する機械式の支持体を提供する。広さは、植設された補綴の断裂へのいかなる
傾向にも反対に作用する。

【００３９】 ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされて、本発明によればａｎｔｉ血栓形成性の
代理人および増殖因子でおおわれている補綴の脈管の弁は、充分に機能的で、代
わりの手段の上の大きな前進が金銭ずくの不足（例えば静脈の袖口、影響を受け
る手足に対する外の圧力の加圧および利尿剤の管理）をｒｅｍｅｄｉａｔｅする
と述べる。ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ、ヘパリン結合およびヘパリン
−締め具増殖因子の現在の組合せは、多くの医学の製品の開発のための新規なプ
ラットフォーム技術である。それも、追加の薬学的に活性な因子を免疫学的な不
活発な生物学的マトリックスに取り付ける手段を提供する。人間への本発明また
は動物の他の種のｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた脈管の異種移植片の移植の
後、宿主細胞は速くａｃｅｌｌｕｌａｒ異種移植片に再び住む。

【００４０】 適当な血行力学刺激およびマトリックス・タンパク質の下で改造する、ホスト
脈管の平滑筋細胞および内皮細胞は、補綴を侵略して、メディアで、そして、そ
れぞれ、移植片のｌｕｍｉｎａｌな表層に決められる。結局、異種移植片は機能
の細胞タイプおよびマトリックス構成要素を有するネイティブ脈管の構造と同様
で、拡張開通を提供する。

【００４１】 本発明（因子が固定される反ｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃおよび脈管のｄｅｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｚｅｄがこのことにより織り上げるコート）の一実施例のそれが
よりｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃにならないこと。おおわれている補綴も、そのｐ
ｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｌな機能を保持して、脈管の補綴の移植に続いてい
る再細胞化を進めるために、内皮細胞、平滑筋細胞または線維芽細胞と相互に作
用する固定された増殖因子を含む。

【００４２】 本発明の好適な実施例において、抗血栓形成性の因子は、ヘパリンである。 増殖因子は脈管の移植片治療および改造している方法を速めるいかなる要因でも
あってもよい。そして、かなりｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた生物学的移植
片の長期の開通を改良する。

【００４３】 好適な増殖因子は、制限されることができなくて、制限されるために、ヘパリ
ン−締め具増殖因子（例えば脱細胞化された脈管の移植片にヘパリン・バウンド
が高く好きであるｂＦＧＦまたはａＦＧＦ）。

【００４４】 より多くの好適な実施例の、ヘパリンが共有結合して例えばリンカー分子によ
って脱細胞化された脈管組織の表層に束縛されるが、制限されないことために、
ｌ−エチル−３−［ ３−ジメチルアミノプロピル ］ カルボジイミド。

【００４５】 好適なヘパリン−締め具増殖因子はｂＦＧＦである。そして、それは脈管組織
の表層上のヘパリンに束縛される。

【００４６】 本発明の実施例において、脱細胞化された脈管組織は動脈の脈管の移植片であ
る。そして、それはａｌｌｏｇｅｎｉｃでもよいか移植片の受取人に関してｘｅ
ｎｏｇｅｎｉｃでもよい。

【００４７】 まだ他の実施態様において、脈管組織は静脈の脈管の移植片である。そして、
それはａｌｌｏｇｅｎｉｃでもよいか移植片の受取人に関してｘｅｎｏｇｅｎｉ
ｃでもよい。

【００４８】 更なる実施態様において、脈管組織は静脈の弁補綴である。そこにおいて、解
剖した静脈部分はｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされることができて、ヘパリン
添加して、弁機能の損失なしにその上に固定される増殖因子を有する少なくとも
一つの機能の弁を含む。

【００４９】 それでも、本発明の更なる実施態様は脈管の広さカバーを提供する。そこにお
いて、ヘパリン添加されて、ａｌｌｏｇｅｎｉｃであるか異種静脈または動脈は
ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされることができる、そして、増殖因子は本発明
のヘパリンにはずむ。 ホストへの外科の移植の前か後に、脈管の補綴は、内部か脈管の広さの外の表層
に適用されることができる。

【００５０】 広さは、当業者にとって公知のいかなる適切な材料の中でもあることができる
。 脈管の広さまたは広さ−弁装置は、静脈の弁移植への最小限に侵入するアプロー
チのための本発明の静脈の弁補綴に適用されることができる。それでも、本発明
の他の実施態様は脈管のパッチである。そこにおいて、ａｌｌｏｇｅｎｉｃであ
るか異種静脈または動脈がｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされることができて、
ヘパリン添加されることができて、増殖因子によって扱われることができて、動
脈内膜除去術および大腿動脈ｔｈｒｏｍｂｅｃｔｏｍｙ、静脈置き換えおよび静
脈損傷が修理する頸動脈のような手順の動脈で金銭ずくのパッチ材料として使わ
れることができる。

【００５１】 本発明の他の実施態様は、脈管組織をｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅして、組織
を少なくとも一つの抗血栓形成性の因子に連結して、少なくとも一つの増殖因子
の第２のコーティングを適用する方法である。

【００５２】 本発明の好適な一実施例において、解剖した脈管組織は、低浸透圧溶液および
機械的に移動しているｃｅｌｌｕａｒ破片を有する組織を順番に洗うことによっ
てｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされる。

【００５３】 機械の除去方法は、スクラップになること、振れ、ピンセットによる除去また
は他の適切な計測器を含むが、これに限定されるものではなくなることができる
、鋭利なまたは他のいかなる方法にもよって当業者に従来技術において周知の。
部分的に脱細胞化された補綴はそれから少なくとも一つのプロテアーゼ、少なく
とも一つのリパーゼ、少なくとも一つのヌクレアーゼおよび少なくとも一つの洗
剤で処理されることができる。その結果、補綴の細胞外基盤は細胞材料の中で裸
にされる。プロテアーゼは、集中範囲においてあることができるの０ころに。ほ
ぼ１０％のｗ／ｖに対する１％のｗ／ｖ。プロテアーゼを有する処理の期間が、
少なくとも５分からほぼ１時間まで、そして、ほぼ３７のＣに対する約２０Ｃで
からの温度であってもよい。

【００５４】 リパーゼは、集中範囲においてあることができるの０ころに。１％のｗ／ｖ−
１０％ ｗ／ｖ。 リパーゼを有する処理の期間が、約５分からほぼ１時間まで、そして、ほぼ３７
のＣに対する約２０Ｃでからの温度であってもよい。

【００５５】 ヌクレアーゼは、集中範囲においてあることができるの０ころに。ほぼ１０単
位／ｍｌに対する１単位／ｍｌ。ヌクレアーゼを有する処理の期間が、約５分か
らほぼ１時間まで、そして、約２０のＣからほぼ３７のＣへの温度であってもよ
い。

【００５６】 各々のプロテアーゼ、リパーゼおよびヌクレアーゼ・工程の後、脈管組織は予
め暖められたｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄされた塩水湖（ＰＢＳ）ま
たは水で洗われる。ティッシュは、それから次の工程で処理される：約１０％の
濃度でのａ）洗剤；ほぼ３０％に対する約５％の濃度でのｂ） ｄｅｈｙｄｒｏ
ｃｈｏｌｉｃな酸；ｃ）蒸留水は、洗う；そして、ｄ）、ナトリウム・ドデシル
の溶液は、約０から集中で硫酸化する。約１０％のｗ／ｖに対する５％のｗ／ｖ
。洗剤および次の工程は、約２０のＣから約３７のＣ． Ｉｎへの温度で実行さ
れることができる脱細胞化された脈管組織が格納される本発明のこの実施態様ア
ルコール溶液。

【００５７】 他の本発明の好適な実施例は、約０から集中でヒドロキシルアミンの溶液を有
する組織に注ぐことによって脱細胞化された脈管組織の少なくとも一つの表層に
、抗血栓形成性の代理人を固定する方法である。約１に対する５Ｍ。０ Ｍ（例
えばリンカー分子の溶液を有する散水が続く）、しかし、制限する例えば（１−
エチル−３つの（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）およ
び抗血栓形成性の代理人）、しかし、制限する（ヘパリン）約１の重量比率の：
１． 本発明の方法の最も好適な実施例の、ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされてヘ
パリン添加された脈管の補綴のティッシュが例えば増殖因子の溶液を有するほぼ
５つの最小限度のために処理されるが、制限されないことために（約５０のｌｌ
ｇ／ｍｌ．に対する約５つのｌｌｇ／ｍｌの集中でのｂＦＧＦ） 他の実施態様において、ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄはヘパリン添加した、
そして、成長ｆａｃｔｏｒｔｒｅａｔｅｄされた移植片はウロキナーゼ、一酸化
窒素提供者、遺伝子送達ベクターまたは他の脈管作動薬を含むがこれに限らず治
療的な特性を有する他の化合物を含むことができる。これらの化合物は、移植片
血栓症を防ぐことができるかまたは方法を癒やしている移植片を調整することが
できるか、止血を調節することができるかまたは一方移植片のまたは移植片受取
人の生理学を修正することができる。

【００５８】 もちろん、前述のことが本発明の好適な実施例だけに関することは理解されな
ければならない、そして、その多数の変更態様または変更は趣旨または本発明の
範囲から逸脱することなく、その中でなされることができる。本発明は、具体例
を経由して更に詳細に記載されている。実施例が図示する目的に対して提供され
て、あることになることは、制限するどちらも意味しもしないし、いかなる方法
でも本発明を定義しもしない。完全な細胞外コラーゲンおよびエラスチン・フレ
ームワークを残すと共に、本発明が効果的に全ての細胞構成要素を除去してもよ
い手順を含んだ脈管組織のＭｅｔｈｏｄｆｏｒ ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚａｔ
ｉｏｎは脈管組織を解剖した。 好適なｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎプ
ロトコルは、あとに続く。

【００５９】 （実施例１） （脈管組織の脱細胞化の方法） 脈管組織は、ほぼ４つのＣ．で４つの日頃に蒸留水のための蒸留水に浸漬された
毎日変えた。ゆるめられた外膜組織は、容器から切られた。

【００６０】 脱細胞化された組織は、ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒｅｄされた２００
ｍｌの塩水湖（ＰＢＳ）（ｐＨ ７）の洗われた３つの時間であった。４は、３
７Ｃまでｐｒｅ−ｗａｒｍｅｄした。脈管組織は、それから順番につかられた：
（ｉ） ０の２００ｍｌ。３７のＣでの３０分間、２５％のトリプシンＥＤＴＡ
；ＰＢＳ（ｐＨ ７）の（ｉｉ） ３つの時間。２００のｍｌ／洗浄、４は３７
Ｃまでｐｒｅ−ｗａｒｍｅｄした；（ｉｉｉ） ０の２００ｍｌ。３７のＣでの
３０分間、５％のリパーゼ；ＰＢＳ（ｐＨ ７）の３つの（ｉｖ）時間。２００
のｍｌ／洗浄、４は３７Ｃまでｐｒｅ−ｗａｒｍｅｄした；ＰＢＳ（ｐＨ ８）
の３つの（ｖ）時間。２００のｍｌ／洗浄、８は３７Ｃまでｐｒｅ−ｗａｒｍｅ
ｄした；２００ｍｌの、３０のための１単位／ｍｌ、ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｌな
ヌクレアーゼは、３７分にＣを書きとめる；（ｖｉ）３７のＣでの（ｖｉｉ）蒸
留水；２００ｍｌの、１０のための１０％、トリトンＸ−１００は、３７分にＣ
を書きとめる；（ｖｉｉｉ）３７のＣでの（ｉｘ）蒸留水；２００ｍｌの、１０
のための１０％、ｄｅｈｙｄｒｏｃｈｏｌｉｃな酸は、３７分にＣを書きとめる
；（ｘ）（ｘｉ）蒸留水；１０％、（ｘｉｉ）特別割引販売３７のＣでの１０分
の間の２００ｍｌ；そして、ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄが織り上げる３７の
Ｃ．での（ｘｉｉｉ）蒸留水は、殺菌されるか、４つのＣでの７０％のエタノー
ルに格納されるかまたは凍った。ローカル屠殺場および新しい犬外部の頸静脈（
ＥＪＶ）弁から収穫される新しいブタ頸動脈を含んで、２００台以上の船は、こ
の手順によって処理された。

【００６１】 （実施例２） 微細なライトおよびｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎの後のブタ頸動脈の
伝送電子微細な（ＴＥＭ）ｅｘａｎａｉｎａｔｉｏｙａ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃ
ａｌ審査が処理する実施例２は、メディアの完全な内部弾力性がある薄片および
エラスチンｌａｍｅｌｌａｒシートを示した。汚れているヘマトキシリンおよび
エオシンは容器壁の残留する核の材料のいかなるサインも示さなかった。そして
、容器の厚みによる成功したｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎを示した。Ｔ
ＥＭは、ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎおよびヘパリン固定すること方法
から生じている容器のミクロ構造的な変化を調査して、細胞破片の除去を確かめ
るために実行された。 基本的な細胞外微細構造が完全なままであると共に、結果は中間の層から細胞事
柄の完全な除去を示した。ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ方法の前に犬Ｅ
ＪＶ弁の中で組織学に汚れることは、静脈および弁のｌｕｍｉｎａｌな表層上の
内皮細胞を示した。平滑筋細胞（ＳＭＣ）は、容器のメディアに存在した。全く
脱細胞化された犬ＥＪＶ弁において、他方、内皮であるものおよびＳＭＣは除去
された。そして、コラーゲンてエラスチン細胞外マトリックス・タンパク質を残
した。弁は、その構造上の完全性を保持した。脱細胞化された移植片の脱細胞化
された脈管組織ＢｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎのＢｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎが研
究を許可した実施例３は、マトリックス・タンパク質代謝を移植する、そして、
移植の後、改造する組織学の汚している示された最初の移植片マトリックス。新
しく形成された脱細胞化された補綴は、Ｎ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉ
ｄｙｌ−ビオチンを使用してアミンのグループ置換によってｂｉｏｔｉｎｙｌａ
ｔｅｄされた。脱細胞化された脈管組織は、１０ｍｌのＮ ｈｙｄｒｏｘｙｓｕ
ｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ−ビオチンに浸漬された（１つのｎｍｏｌ／。Ｎの１、Ｎ
−ｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）またはｂｉｏｔｉｎａｍｉｄｏｃａｐ
ｒｏａｔｅなＮ−ｈｙｄｒｏｘｙｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｅエステル（１つのｎｍ
ｏｌ／、Ｎのｕｌ、Ｎｄｉｍｅｔｈｙｌｆｏｒｍａｍｉｄｅ）、そして、１８−
２４の時間の室温で、シェーカ上の卵を抱く。移植片は、それから蒸留水で洗わ
れて、４Ｃで格納された。ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎの効率は、チェンその他
の方法によって汚れているｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ペルオキシダーゼによっ
て調べられた、Ｊ． Ｓｕｒｇ。 物件。６０、４０９−完全に４１６（１９９６）（本願明細書に引用したものと
する）。

【００６２】 ５０以上の脱細胞化された動脈は、記載されている手順を使用することをｂｉ
ｏｔｉｎｙｌａｔｅｄされた。全ての容器は汚れている強いｓｔｒｅｐｔａｖｉ
ｄｉｎ−ペルオキシダーゼを示した。そして、成功したｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉ
ｏｎを示した。ビオチンの安定性を試験するために、ラベルをつけている、ｂｉ
ｏｔｉｎｙｌａｔｅｄされた容器は、組織培養保育器において培養された。汚れ
ているビオチンの重大な減衰が、８０日のインキュベーションに続いているとわ
からなかった。

【００６３】 （実施例４） ヘパリンの実施例４つのＩｍｎａｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｒａおよび脱細胞化さ
れた脈管組織脱細胞化された容器に対するｂＦＧＦは、主に低い免疫性を有する
コラーゲンおよびエラスチン・マトリックス・タンパク質から成る。これらのタ
ンパク質は、脈管の細胞付着、増殖、移動、代謝および分化のための最も適切な
基板である。脱細胞化された容器はしかしコラーゲンをさらす。そして、ｌｕｍ
ｉｎａｌな表層に関して、それは高い血栓形成性を有する。マトリックス・タン
パク質を融合させるヘパリンの共有結合固定することは補綴の血栓形成性を減ら
す。

【００６４】 ｂＦＧＦはヘパリン（Ｋｄ ＝ ２×１０−９Ｍ）が強く好きである。ｂＦＧ
Ｆで縛られるヘパリン添加された移植片は、強化されたｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ
ｉｚａｔｉｏｎおよびｔｒａｎｓｇｒａｆｔ細胞に移動および速められた移植片
−治療方法を提供する。完全なｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｉｚａｔｉｏｎに賛成の
、ｓｕｂｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌなｂｉｏｈｙｂｒｉｄ静脈の弁移植片が速め直
ることは改造することを織り上げる、そして、ｎｅｏａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ
は長期の移植片開通を改良することができて、弁機能を保つことができる。以下
、詳細な技術について説明する。

【００６５】 ヘパリンは、アミンのグループの脱細胞化された細胞外マトリックス・タンパ
ク質に、結合によって固定された。ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされてｂｉｏ
ｔｉｎｙｌａｔｅｄされた移植片は、ヒドロキシルアミン硫酸塩（１Ｍ）によっ
て注がれた。移植片は循環システムに取り付けられた、そして、ヒドロキシルア
ミン硫酸塩塩は７の率で容器によって供給された。４つのｍｌ／、１時間、分。
因子ｌ−エチル３つの（３ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）
をクロスリンクすることは、ヘパリンのカルボキシル基を活性化した。前もって
処理された移植片上のヘパリンの固定することは、ヘパリン−ＥＤＣ溶液を循環
させることによって実行された（１：２重量比率）７の率での循環システムによ
る。１８時間の室温で、４つのｍｌ／分。１のｐＨ。５は、０によって維持され
た。０５Ｍ塩化水素酸。反応の後、蒸留水は７時に移植片によって循環した。洗
い流される１時間の４つのｍｌ／分は、ヘパリンを解いた。移植片は、それから
殺菌されることができて、４つのＣ．ころに７０％のエタノールに格納されるこ
とができる。７０％のエタノールの倉庫の後、ヘパリン添加された移植片がｐｈ
ｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｌな塩水湖においてすすがれて、それから浸漬されて
、２ｍｌの５分の間のｂＦＧＦ（５０のＦｇ／ｍｌ）につかられたこと直ちに植
設受け取る患者または動物の。

【００６６】 （実施例５） 比色計による脈管組織Ａ上のヘパリン固定することの後のＨｅｐａｒｉｎ ｅ
ｃｉｅｎｃｙおよび安定性が分析する実施例５は、サンプルのヘパリンの量を決
定するために用いた。較正カーブ（２）を準備する際の。５ｍｌのトルイジン青
いＯは、各々の７本の試験管に置かれた。約０から、ヘパリンのさまざまな量。
０に対する０１。０７ ｍｇは染料に加えられた、そして、体積は０を有する５
ｍｌに適応した。２％のｗ／ｖ塩化ナトリウム。試験管は、３０秒間煽動された
。５ｍｌ、Ｎ−ヘキサンは、各々のチューブに加えられて、３０秒間ｖｏｒｔｅ
ｘｅｄした。水の層は、薄められた１：エタノールを有する１０および各々のサ
ンプルの光学の密度は、反応の３０の最小限度の範囲内で６３１ナノメートルで
分光測光法で決定された。ヘパリン添加された移植片は、試験管に移植片の１ｃ
ｍの部分を配置することによるヘパリン内容のために分析されて、２を加えてい
た。５ｍｌのｔｏｌｕｄｉｎｅは、Ｏおよび２を青くする。０の５ｍｌ。２％の
ｗ／ｖ塩化ナトリウム。手順は、前のパラグラフに記載されている可溶なヘパリ
ン分析評価に関しては続いた。２００以上の脱細胞化された動脈は、共有結合し
てヘパリンに連結された。ヘパリン分析評価は、上記の通りにｔｏｌｕｄｉｎｅ
青いＯ分析評価方法を使用して実行された。効率を結合しているヘパリンは、ヘ
パリン固定すること手順に直ちに続いているヘパリン内容の定量化によって調べ
られた。

【００６７】 ヘパリン処理の有無にかかわらない脱細胞化された容器のパラフィン断面は、
青いｔｏｌｕｄｉｎｅで汚された（０．０５％ｍｇの／ｍｌの集中）ヘパリン固
定すること方法の効力を更に調べる。ヘパリン処理を有する容器は容器壁の全て
の厚みによるｔｏｌｕｄｉｎｅ青で汚れている平らな肯定を示したのに、ヘパリ
ン処理のない脱細胞化された容器は青いｔｏｌｕｄｉｎｅによって汚れなかった
。これらの結果は、ヘパリンがうまくそれらの最も厚い部分による脱細胞化され
た容器に連結されることを示した。

【００６８】 安定性を結合しているヘパリンは、それぞれ１日、７日、１４日および２１日
の間の３７のＣで、７０％のアルコールのヘパリン−バウンド移植片またはＰＢ
Ｓのインキュベーションのいずれの記憶装置の後、も、ｔｏｌｕｄｉｎｅ青いｃ
ｏｌｏｒｍｅｔｒｉｃな分析評価を使用して試験された。ヘパリン添加されたブ
タまたは犬脱細胞化された動脈からのヘパリンの最小のロスは、観察されたと、
１０日以後さえ３７のＣ． Ｔｈｅｓｅで、データが証明する：ヘパリン固定す
ること手順が効果的で信頼できる、脈管の補綴の（ｂ）ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉ
ｏｎが本発明によって準備した（ａ）は効率を結合しているヘパリンに影響を及
ぼさない、そして、（ｃ）ヘパリン結合は少なくとも２１日間安定している。さ
らに、被処理移植片は、７０％のアルコールによって容易に殺菌されて、長期の
記憶装置の間、安定している。ヘパリンにリンクされた補綴は２年の７０％のア
ルコールの記憶装置の後、さえ、ヘパリンの重大な量を失わなかった。７０％の
エタノールのＡｆｔｅｒ倉庫を結合しているｂＦＧＦ、ヘパリン添加された移植
片は２ｍｌのｂＦＧＦをｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｌな塩水湖においてすす
がれて、それから浸漬して、つかった（５０（ｕｇ／ｍｌ）５つの最小限度のた
めの）直ちに植設受け取る患者または動物の。図および３Ｂは、３Ａ、異なる期
間の間の３７Ｃで、異なる期間の間の７０％のアルコールおよびＰＢＳのインキ
ュベーションの倉庫の後、脱細胞化されたブタ頸動脈のヘパリン共有結合結合を
示す。

【００６９】 （実施例６） ヘパリン処理の有無にかかわらず、血液凝固の実施例６つのＭｅａｓｕｒｅｍ
ｅｎｔが容器の脈管の移植片（ガラス製の試験管方法）Ｓｅｇｍｅｎｔｓによっ
て誘発されて、長さの２ｃｍは、０、３、７、１４または２１日の間の３７Ｃで
、ＰＢＳにおいて培養された。インキュベーションの後、容器は長手方向に開い
たようにされた、そして、１つのｃｍ２部分は各々の容器の中央から切られた。
外膜は、非ユダヤ人の解剖によって穏やかに各々のサンプルから除去された。各
々の正方形の組織サンプルは、それから９つの同等のサイズ部分に切られて、５
ｍｌのガラス管に配置された。

【００７０】 静脈の血液は各々の研究の同じ人間の志願者から引き出された、そして、その
後、２ｍｌの血液は組織サンプルを有する各々のガラス管に、急速に配置された
。チューブは、それから急速にｐａｒａｆｉｌｍでおおわれていて、サンプル・
ロッカーに置かれた。それらが揺れたように、チューブは視覚的に組織サンプル
に生じているかたまりを求めて詳しく調べられた。血液がサンプルおよび形成に
適用された時間の経過時間は、かたまり時間として記録された。かたまりが生じ
なかった場合、試験は１時間以後止められた。３つのヘパリンは容器を扱った、
そして、２台の制御船は各々の時間位置で試験された。全ての制御容器は、かた
まりを１３の平均のかたまり時間により形成した。９ ：：Ｌ分。扱われた容器
が形成したヘパリンのどれも、試験の６０分の継続期間の間に凝固しない。これ
らの結果は、ヘパリンが容器壁に容器を非その共有結合結合にもかかわらずｔｈ
ｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃにすることに効果的なままのことを示す。更に、ヘパリン
結合は、生理的温度で３週のＰＢＳのインキュベーションの間、安定しているま
まだった。表１は、試験管内の時間分析評価の結果を表す。

【００７１】

【表１】 扱われた脱細胞化された移植片部分（ヘパリン）が最高２１日以後インキュベ
ーションの後、試験の６０分の継続期間以内で、かたまりを形成しなかったヘパ
リン 非ヘパリンが扱った３７のＣ前文でのＰＢＳは、形成される全てが凝結させる移
植片部分（制御）をｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄした。

【００７２】 （実施例７） ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされて、実施例１−５に記載されている方法に
よってヘパリン添加される脱細胞化された非ヘパリン添加された脈管組織Ｐｉｇ
動脈の実施例７つのＡｎｉｍａｌ ｉｍｐｌａ７１ｔａｔｉｏｎは優れた取り扱
っている特徴を有する。そして、良い柔軟性、縫合配置の容易さおよび放出して
いる最小の針−穴を含む。３つのｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされてヘパリン
添加されたブタ頸動脈（異種移植片）は、３匹の犬の右の頸動脈に植設された。
それぞれの犬は、１つの移植片を受けた。血液凝固の阻止は、手術後に犬に与え
られなかった。

【００７３】 それぞれ、２４の６７の日に犠牲にされる１匹の犬および２匹の犬は、特許移
植片を持っていた。交差連絡は、ルーメン拡大なしで完全に癒やされた。２４日
での特許であった移植片は、線維芽細胞細胞が脱細胞化された移植片マトリック
スに侵入した、そして、非連続する、内皮同類細胞がｌｕｍｉｎａｌな表層をカ
バーしたことを示した。６７日での特許であった移植片は、内皮細胞に特有のＦ
ａｃｔｏｒ ＶＩＩＩ−関連した抗原のために汚れている肯定で示すように、内
皮細胞を有する広いｌｕｍｉｎａｌな範囲を有した。ｏｃ−アクチン免疫反応性
を表示している平滑筋細胞は、両方の本来のマトリックス域に存在した。これら
の結果はｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされてヘパリン添加された移植片表層が
ｎｏｎｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃだったことを示す、そして、移植片が示すその
特許は長期の開通を維持するのに必要な特徴を癒やして、改造することを速めた
。２匹の追加の犬は、１ヵ月の間の両面の大腿骨のａｒｔｅｒｉｏｖｅｎｏｕｓ
な移植片（ブタｃａｒｔｏｔｉｄ動脈をｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄして、ヘ
パリン添加した）を受けた。 組織学の審査は、大規模な宿主細胞浸入を示して、方法を癒やすことを速めた。

【００７４】 （実施例８） 脱細胞化された脈管の補綴および脈管の弁補綴の機能上の小板の堆積上のヘパ
リンの効果、新しい犬ＥＪＶ弁および脱細胞化された犬ＥＪＶ弁上の基線小板堆
積および効果のｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎ、ヘパリンの共有結合結合およびヘ
パリンに縛っているｂＦＧＦの程度は、その上に研究される。ｄｅｃｅｌｌｕｌ
ａｒｉｚａｔｉｏｎ、ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎおよび静脈の弁機能上のｈｅ
ｐａｒｉｎｉｚａｔｉｏｎの結合された効果は、前の活発なａｒｔｅｒｉｏ−ｖ
ｅｎｏｕｓな（Ａ−Ｖ）分路研究において調べられる。詳細な技術は、以下のパ
ラグラフにおいて説明される。小板放射性のｌａｂｅｌｉｙａｇおよび前活発な
Ａ−Ｖは、小板堆積をそらす。自家組織の小板は、インジウム酸化物によってラ
ベルをつけられる。ほぼ３０分分路研究の前に、ラベルをつけられた小板は、動
物に静脈内にｒｅｉｎｆｕｓｅｄされる。６匹の成人の雑種の犬は、ｔｈｉａｍ
ｙｌａｌな（１５のｍｇ／ｋｇ）ナトリウムによって麻酔をかけられて、ｉｓｏ
ｆｌｕｒａｎｅに維持される。頸動脈およびＥＪＶは、分離されて、Ａ−Ｖ分路
のそれぞれの入口および出口端にｃａｎｎｕｌａｔｅｄした。Ａ Ｖ分路は移植
片材料の中で各々１つの部分から成る。そして、直列に接続される。移植片は、
直径名目上、６ｍｍおよび長さほぼ５ｃｍである。血流は、分路の出口管を部分
的にふさぐことによってほぼ１００のｍｌ／分に合う。３つの移植片イメージは
、３０分間隔でされる。システムを試験している静脈の弁。システムを試験して
いる静脈の弁は、容器アダプタ、２つの注射器、２台の圧力メーターおよびａｎ
ｇｉｏｓｃｏｐｅシステムから成る。静脈の弁終了および開くは、直接スクリー
ンに視覚化されて、ビデオテープに記録される。下流に圧力および弁の上流は、
同時に記録される。

【００７５】 ５対の新しくて脱細胞化された犬ＥＪＶ弁は、このシステムで試験されて、機
能の静脈の弁の基準を満たす。このように、外部のサポートを有する充分に機能
の静脈の弁は、開いて、還流についての、そして、弁終了の後、３以下が１００
を上回っている圧力で起こらない気圧勾配で、完全に閉じる。ゼロ圧力で、弁リ
ーフレットは、開いている。違いは、新しくて脱細胞化された静脈の弁の間で強
調されない。

【００７６】 （実施例９） それぞれ、ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎて移動試験管内のＳｍｏｏｔ
ｈ筋肉細胞（ＳＭＣ）および内皮細胞上のｂＦＧＦの実施例９つのＥｆｆｅｃｔ
ｓは、犬頸動脈および大腿骨の静脈から分離された。細胞増殖のために、分析評
価、ＳＭＣまたは内皮細胞は２４−井戸プレートにおいてメッキをされた、そし
て、ｂＦＧＦの可変の量は２４時間以後４倍の井戸に加えられた。加算ｂＦＧＦ
のない細胞が、制御のために使われた。細胞は、チェンその他において提供され
る方法によって計数された、Ｊ． Ｓｕｒｇ。物件。６９、３００−完全に本願
明細書に引用したものとする３０６（１９９７）。

【００７７】 細胞移動は、５ｕｍ直径孔を有する硝酸セルロース・フィルタを有する修正さ
れたボイデン室において分析された。ｂＦＧＦの細胞および可変の量は、室に加
えられた。３時間のインキュベーションの後、孔によって移った細胞は、計数さ
れた。それぞれ、細胞増殖および移動上のｂＦＧＦの効果は、２Ａ、図および２
Ｂに示される。人間の再結合物ｂＦＧＦは、犬の平滑筋細胞および内皮細胞増殖
および移動に有力な陽影響を及ぼした。これらの結果は、癒えている脈管の移植
片を速める際のｂＦＧＦの役割を示す。

【００７８】 （実施例１０） Ｖｅｎｏｕｓな弁同種移植片は、ｂｉｏｈｙｂｒｉｄ静脈の弁同種移植片の性
能が対にされた研究傾向の自生のＥＪＶ弁と比較してあることをｐｅｔｆｏｒｒ
ｎａｎｃｅする。ｂｉｏｈｙｂｒｉｄ静脈の弁同種移植片は、エンドツーエンド
の交差連絡によって１つの犬大腿骨の静脈に植設される。自生のＥＪＶ弁は、同
様に対向する大腿骨の静脈に植設される。犬は、グループにつき５つのグループ
の６匹の犬に割り当てられる。グループは、７日、１４日、２８日、３ヵ月およ
び６ヵ月に犠牲の予定である。評価されるパラメータは、開通率、弁機能、地形
測定、移植片の改造することおよび細胞組成物が壁で囲うマトリックスを含む（
ｉ． ｅ。内皮細胞、ＳＭＣ、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、そして、好中
球）。

【００７９】 成人の雄の雑種の犬は、麻酔をかけられる。１つのＥＪＶおよび両方の大腿骨
の静脈の適当な長さの解剖に続いて、ヘパリン（１００のｕｎｉｔｓ／ｋｇ）は
組織的に管理される、そして、脈管の制御は行われていた。ＥＪＶ弁の５ｃｍの
部分は、除去されて、ＰＴＦＥ移植片袖口を有する大腿骨の静脈に植設される。
ｂｉｏｈｙｂｒｉｄ静脈の弁同種移植片は、反対側性の大腿骨の静脈に置かれる
。 対照静脈造影法は、移植片移植の直後に、そして、犠牲に向かって実行される。
各々の弁のＡｎｇｉｏｓｃｏｐｉｃな評価および圧力テストは、また、収穫の後
、実行される。全ての犬はローゼンバーグその他（Ｊ． Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．
４６（６４０−６４８（１９８５）））の技術を使用している手術の前に、１
週を開始しているＣｏｕｍａｄｉｎによって血液凝固を阻止される。そして、そ
れは完全に本願明細書に引用したものとする。チェンその他によって記載されて
いるように、Ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ管理、犠牲、原位置に散水固
定および標本収穫は実行される（アン。Ｖａｓｃ． ｓｕｒｇ．１０， １４７
−１５５ （１９９６） ；Ｊ． Ｖａｓｃ．ｓｕｒｇ．２２、２３７−２４７
（１９９５の））、それは全体として本願明細書に引用したものとする。組織学
に、ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃに、ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌおよ
び統計の分析は、従来技術において当業者にとって周知の技術によって実行され
る。

【００８０】 （実施例１１） 約４ｍｍ、実施例１１のＤｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされて、ヘパリン添加
されて成長−要因おおわれているブタ動脈の移植片Ｐｉｇ頸動脈は直径ｄｅｃｅ
ｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされる。そして、主にコラーゲンおよびエラスチン・マト
リックス・タンパク質を残す。コラーゲンおよびエラスチンのアミノ酸シーケン
スが種全体に非常に節約されるので、ブタ（同種移植片）においてまたは他の種
（異種移植片）において植設されるときに、このマトリックスに基づく移植片は
より免疫原性でない。エラスチンを含まなくて、柔軟性がない合成のコラーゲン
・チューブ移植片と異なって、本発明の脱細胞化された補綴は、コラーゲンおよ
びエラスチンの自国の構成、更にはそれらの強さ（弾力および柔軟性）を維持す
る。マッチされた迎合性が、交差連絡で範囲圧力および過形成を減少して、移植
片およびホスト容器の間にある。

【００８１】 脱細胞化された移植片のＢｉｏｔｉｎｙｌａｔｉｏｎは移植片マトリックス・
タンパク質代謝の研究を許可する、そして、技術を汚している組織学のｂｉｏｔ
ｉｎｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ペルオキシダーゼから移植の後、改造すること
は本来の移植片マトリックスをたどった。動脈がさらした脱細胞化されたブタ、
高くｔｈｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃ、ｌｕｍｉｎａｌな表層上のコラーゲン。アミン
のグループの移植片マトリックス・タンパク質に対するヘパリンの共有結合結合
は、移植片血栓形成性を減らす。ヘパリン共有結合結合のための手順および状況
は、実施例４に記載されている。これらの手順は、脱細胞化された移植片のほぼ
１５のＵＳＰ ｈｅｐａｒｉｎ／ｃｍ２の中で縛っているヘパリンを達成するた
めに修正される。

【００８２】 エタノールの７０％の溶液は、移植片を殺菌して、ヘパリン結合を安定させる
ために用いた。エタノールによって、タンパク質変性が生じなかった。ｂＦＧＦ
は、実施例４にて説明したように、移植片に束縛された。ｂＦＧＦ Ｂｉｎｄｉ
ｎｇ Ａｓｓａｙ。３７のＣ． ｂＦＧＦでのインキュベーションのさまざまな
期間の散水システムがＢａｓＡｋｉｎその他（生化学２８（１７３７−１７４３
（１９８９）））の方法によって、１２５Ｉラベルをつけられる容器を使用して
、結合する効率が安定性を結合しているｂＦＧＦ． ｂＦＧＦを放射性同位元素
で識別して試験されるｂＦＧＦは、生体内に試験される。そして、それは完全に
本願明細書に引用したものとする。ｂＦＧＦ（１００（ｕｇ））２のための混ぜ
る。ｐＨ ８での１００ｍＭのリン酸ナトリウム・バッファの４００のｌページ
の１−ラベルをつけられたボルトン−Ｈｕｎｔｅｒ試薬については、氷に関して
、５時間。５．過剰なボルトン−Ｈｕｎｔｅｒ試薬は、３ｍｌの０を含んでいる
水を加えることによって消される。２ｍｇのリジン、そして、卵が孵化される氷
上の４５の最小限度のための。次、３００のｐ、０のｌ。５％ゼラチンは加えら
れる、そして、反応小びんは３によって洗われる。５ｍｌのゲル濾過バッファ（
５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ（０）。０５％ゼラチン、１ｍＭのｄｉｔｈｉｏｔ
ｈｒｅｉｔｏｌおよび０。３ＭのＮａＣｌ（ｐＨ ７）。５）．結合されたサン
プルは、同じバッファによって釣り合わせられるＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ−２５本
の柱上のゲル濾過を受ける。効率を結合している１２５Ｉ−ｂＦＧＦは、ヘパリ
ン添加された移植片を有する１２５Ｉ−ｂＦＧＦのさまざまな希薄を培養するこ
とで測定される。全ての移植片は、ＰＢＳの洗われた３つの時間であって、０に
食い込む。 γによって測られる長い５ｃｍの部分および放射能レベルは、逆らう。

【００８３】 ヘパリン添加された移植片に縛っている１２５Ｉ−ｂＦＧＦの安定性は、３７
０Ｃで１００のｍｌ／分にｂＦＧＦ−おおわれている移植片によるＰＢＳをポン
プで揚げることによって試験される。移植片に残っている放射能は、４時間、８
時間、２４時間、４８時間、７日および１４の日に測られる。

【００８４】 被処理ブタ動脈はそれらの強さ（５つの空気の圧力で爆発すること）を維持し
て、良い柔軟性を含んで、優れた取り扱っている特徴を有する。そして、縫合配
置および最小の針−穴の容易さが放出する。

【００８５】 （実施例１２） 匹のＥｘ活発なＡ−Ｖｓｌｚｕｎｔ小板堆積Ｓｉｘ成人ブタ（各々の６０ｋｇ
まで４０をはかりにかけること）は、ｔｈｉａｍｙｌａｌな（１５のｍｇ／ｋｇ
）ナトリウムによって麻酔をかけられて、挿管されて、１％のｉｓｏｆｌｕｒａ
ｎｅに維持される。腹部の中央線切開は、首および頸動脈および分離される外部
の頸静脈においてなされる。容器は、Ａ−Ｖ分路のそれぞれの入口および出口端
によってｃａｎｎｕｌａｔｅｄされる。ブタは、投与された抗凝血剤でない。Ａ
−Ｖ分路は、各々の移植片材料が直列に接続した１つの部分から成る。約３の内
径を有する医学の等級ポリエチレン管。１７ｍｍは、個々の部分を接続して、分
路の入口および出口端を形成するために用いる。移植片は直径名目上、４ｍｍで
ある、そして、ほぼ５ｃｍは切望する。自家組織の小板は、インジウム酸化物に
よってラベルをつけられる。ほぼ３０分分路研究の前に、ラベルをつけられた小
板は、動物に静脈内にｒｅｉｎｆｕｓｅｄされる。血流は、分路の出口管を部分
的にふさぐことによってほぼ１５０のｍｌ／分に合う。移植片イメージは、ガン
マ線カメラを有する９０の最小限度の上の３０分間隔でされる。

【００８６】 （実施例１３） 台のＭｏｄｉｆｉｅｄされた同種船はｎｏａ−ｉｍｍｍｎｏｇｅｎｉｃである
、そして、非ｔｌａｒｏｍｂｏｇｅｎｉｃ、癒えて速められるｌａａｖｅおよび
ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた小さい直径がブタ頸動脈（同種）から、融合
させる移植片に関連したほとんどｃｏｎａｐｌｉｃａｔｉｏｆｚｓを有する長期
の開通以外はｅｎｄ−ｔｏ−ｓｉｄｅ交差連絡によってブタ大腿動脈に植設され
る。 Ｅｎｄ−ｔｏ−ｓｉｄｅ交差連絡は、人間の動脈の再建手順の小さい直径移植片
バイパスのための最も共通して使う方法である。 グループ１（ヘパリン効果）： ｂｉｏｔｉｎ−ｈｅｐａｒｉｎ−ｌｉｎｋｅｄされた脱細胞化された移植片の性
能は、ビオチンにリンクされた移植片と比較してある。それぞれの動物において
、１つの大腿動脈はビオチン−ヘパリン連結された脱細胞化された移植片を受け
る、そして、反対側性の容器は内部制御としてビオチンにリンクされた脱細胞化
された移植片を受ける。１週、２週、４週および３ヵ月に、６匹のブタが、各々
の４つの時間位置で使われる。 グループ２（ｂＦＧＦ効果）： ｂＦＧＦが癒えている移植片を速めるかどうか検査するために、１週、２週、４
週および３ヵ月に、６匹のブタは、各々の４つの時間位置に割り当てられる。 それぞれの動物において、１つの大腿動脈はｂＦＧＦ処理を有するビオチン−ヘ
パリン連結された脱細胞化された移植片を受ける、そして、反対側性の容器は内
部制御としてｂＦＧＦ処理のないビオチン−ｈｅｐａｒｉｎｌｉｎｋｅｄ 脱細
胞化された移植片を受ける。 移植片開通、血球カウントおよび凝固パラメータは、規則正しくモニタされる。
移植片ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｚａｔｉｏｎ、好中球による扇動的な浸入、リンパ球
およびマクロファージを含んで、細胞反応は、量を定められる、そして、移植片
のメディアへの線維芽細胞およびＳＭＣの移動： 移植片材料タンパク質代謝、主にタンパク質低下および吸収は、文書化される。
ルーメン直径、ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌな最も厚い部分および領域を含んで、Ｍｏ
ｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃな寸法は、記録された、そして、交差連絡およびｍｉｄｇ
ｒａｆｔ．で、細胞増殖。詳細な議定書は、下で一覧を示す。

【００８７】 ６０ｋｇまで４０をはかりにかけている成人の雄のブタは、麻酔をかけられる
。 大腿動脈の適当な長さの解剖に続いて、ヘパリン（１００のｕｎｉｔｓ／ｋｇ）
は組織的に管理される、そして、脈管の制御は行われていた。脱細胞化された移
植片（４ｍｍの内径を有する長さの５ｃｍ）はｅｎｄ−ｔｏ−ｓｉｄｅ交差連絡
によって大腿動脈に嵌入される。その一方で、制御移植片（４ｍｍの直径（長さ
５ｃｍ））は反対側性の容器に置かれる。ブタは、１週、２週、４週および３ヵ
月に犠牲にされる。移植片開通は、ドップラー超音波によってモニタされる。 一旦血球を点検する１週が部分的なトロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）を計数
して、活性化するならば、血液は除去される。

【００８８】 Ｂｒｏｍｏｄｅｏｘｙｕｒｉｄｉｎｅ（ＢｒｄＵ）（５０のｍｇ／ｋｇ ５０
ｍｌの通常の塩水湖に溶かされる）は、犠牲の前に２４時間、腹膜内に管理され
る。犠牲に向かって、動物は麻酔をかけられる、そして、大腿動脈および移植片
はさらされる。移植片の開通は、超音波の流量計を使用している血流測定値によ
って、直接の点検によって、そして、組織学の分析によって決定される。

【００８９】 ｓｔｅｒｎｏｔｏｍｙは、実行される、そして、左の空洞に広い孔針による圧
力について、１２０で注がれるリンガー溶液動物が右側のアトリウムに置かれる
カニューレを経て、同期をとって、ｅｘｓａｎｇｕｉｎａｔｅｄされる。一旦血
液が循環システムから消去されると、動物は２を使用している圧力について１２
０で２０分の間のｓｉｔｕにおいて固定される散水である。５％ＰＢＳのグルタ
ルアルデヒド。取付けられた大腿動脈の３ｃｍの部分を有する移植片は、収穫さ
れて、一晩緩衝された１０％のホルマリンに取り付けられて、７０％のアルコー
ルへ移される。標本の横断面は、かかと間の２ｍｍおよび各々の交差連絡のつま
先離れたところに、そして、全ての移植片長および取付けられた自国の容器に沿
った５ｍｍの間隔で、容器の長い軸に対するされた垂直である。標本はパラフィ
ンに埋め込まれる、そして、断面は切られて、ヘマトキシリンおよびエオシンで
汚される、そして、Ｖｅｒｈｏｅｆｆ−Ｍａｓｓｏｎは汚れである。最も厚い部
分のＭｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃな測定およびｎｅｏｉｎｔｉｍａおよびｌｕｍｉ
ｎａｌな直径の領域は、コンピュータで実行される。アビディン−ビオチン合成
のｉｍｍｕｎｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ手順は、当業者にとって周知の技術によっ
て細胞タイプおよび増殖している細胞を特徴づけている決定要素を識別するため
に用いた。ｃｃ−ａｃｔｉｎ、Ｆａｃｔｏｒ ＶＩＩＩ−関連した抗原、Ｔ細胞
（ＣＤ４３）、Ｂ−細胞（Ｌ２６）およびマクロファージ（ＨＡＭ５６）に固有
な主要なモノクロナール抗体は、それぞれ、平滑筋細胞、内皮細胞、Ｔリンパ球
、Ｂリンパ球およびマクロファージを識別するために用いる。否定の制御のため
に、予め免疫性のマウス血清が、主要な抗体の代わりに使われる。

【００９０】 増殖している細胞は、反対のＢｒｄＵ単クローン主要な抗体と同一視される。
ＢｒｄＵ−肯定細胞は、手動で量を定められる。明らかに染色された細胞は全細
胞のパーセンテージとして表される。そして、ＢｒｄＵインデックスを与える。
少なくとも１０顕微鏡フィールドは、断面につき量を定められる。

【００９１】 カイ−正方形分析は、扱われた移植片および制御移植片間の開通率の違いの重
要性を決定するために用いる。対になられたＳｔｕｄｅｎｔのｔ試験は、細胞番
号およびｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃな寸法のデータを比較するために用いる。 ｐ値が０未満の場合、結果は重大であるとみなされる。０５． 全てのケースにおいて、本発明の移植片は、優れた開通、宿主細胞による移植
片のより大きい侵入および移植片細胞外マトリックス・タンパク質のより大規模
な吸着に明らかにする他のいかなる種類もの本発明の補綴が比較されるグルタル
アルデヒドを固定した生物学的移植片によって見られてある。

【００９２】 （実施例１４） ブタ・モデルにおいて、本発明および自生の静脈移植片のｂｉｏｅｒａｇｉｎ
ｅｅｒｅｄされた同種移植片およびｅＰＺＦＥ間のＣｏｒｎｐａｒｉｓｏｎが融
合させる実施例１４は、モデルＴｈｉｓが研究するブタにおいて、自生の静脈移
植片およびｅＰＴＦＥ移植片を有する本発明のｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされ
た同種移植片を比較する。ブタｓａｐｈｅｎｏｕｓな静脈は、非常に短くてブタ
大腿動脈より狭くて、したがって、大腿骨のバイパス移植片として不適当である
。 ブタｅｐｉｇａｓｔｒｉｃな静脈は、しかし長くて、ブタ大腿動脈のそれに類似
した直径を有する。グループ３（同種移植片対自家移植片）。新しい自生の静脈
移植片を有する本発明のｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた同種移植片を比較す
るために、取り付けられるｂＦＧＦの有無にかかわらず、ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔ
ｅｄされてｈｅｐａｒｉｎｌｉｎｋｅｄされた同種移植片は、ブタ大腿動脈に植
設される。新しい自生のｅｐｉｇａｓｔｒｉｃな静脈移植片は、反対側性の容器
に植設される。６匹の動物は、１ヵ月に、そして、６ヵ月に研究される。グルー
プ４（同種移植片対ｅＰＴＦＥ移植片）。ｅＰＴＦＥ移植片を有する本発明のｂ
ｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた同種移植片を比較するために、また、取り付け
られるｂＦＧＦを有するｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄされてヘパリンにリンクされ
た同種移植片または同じ移植片は１つのブタ大腿動脈に植設される、そして、ｅ
ＰＴＦＥ移植片は反対側性の容器に植設される。６匹の動物は、１ヵ月に、そし
て、６ヵ月に研究される。宿主細胞編入、移植片材料タンパク質低下およびｍｏ
ｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃな寸法は、量を定められる。移植片開通、血球カウントお
よび凝固パラメータは、規則正しくモニタされる。詳細な議定書は、前の実施例
において与えられる。全てのケースにおいて、本発明の移植片は、優れた開通、
宿主細胞による移植片のより大きい侵入および移植片細胞外マトリックス・タン
パク質のより大規模な吸着に明らかにする本発明の補綴が比較されるＰＴＦＥ移
植片によって見られてあった。

【００９３】 （実施例１５） 犬およびｅＰＴＦＥ移植片から本発明および自生の静脈移植片のｂｉｏｅｎｇ
ｉｎｅｅｒｅｄされたブタ異種補綴間の１５のＣｏｍｐａｒｉｓｏｎを例示する
、モデルがＣｒｏｓｓ−ｌｉｎｋｅｄした犬において、異種生物学的脈管の移植
片が長年動脈の再建の補綴の他の選択として使われた。異種移植片の主要な効果
は、同種移植片と比較した可変のサイズのそれらの便利な供給である。より良い
治療する特徴については、脱細胞化された異種移植片は、より免疫原性でない。
ヘパリン共有結合結合は血栓症を防ぐ、そして、ｂＦＧＦ処理は脈管の治療する
方法を速めて、移植片堕落を防ぐ。この研究において、ブタ異種移植片（本発明
によってｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされる）は、犬モデルの自生の静脈移植片
およびｅＰＴＦＥ移植片と比較される。犬ｓａｐｈｅｎｏｕｓな静脈は、比較的
長くて、犬大腿動脈と同様のサイズを有する。したがって、犬ｓａｐｈｅｎｏｕ
ｓな静脈が、大腿骨のバイパス移植片のために使われる。

【００９４】 グループ５（異種移植片対自家移植片）。 匹敵することは新しい自生の静脈移植片（ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄされてヘパ
リンにリンクされた異種移植片）を有する異種移植片をｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒ
ｅｄした、または、取り付けられるｂＦＧＦを有する同じ移植片は犬大腿動脈に
植設される、そして、新しい自生のｓａｐｈｅｎｏｕｓな静脈移植片は反対側性
の容器に植設される。容器は、１ヵ月に、そして、６ヵ月に研究される。 ６匹の動物は、各々の時間位置でサンプルをとられる。

【００９５】 グループ６（異種移植片対ｅＰＴＦＥ移植片）。 移植片、ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄされてｈｅｐａｒｉｎｌｉｎｋｅｄされた異
種移植片またはｂＦＧＦを有する類似した移植片が取り付けたｅＰＴＦＥを有す
る本発明に一致しているｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた異種移植片を比較す
ることは１つの犬大腿動脈に植設される、そして、ｅＰＴＦＥ移植片は反対側性
の容器に植設される。６匹の動物は、１ヵ月および６ヵ月に研究される。宿主細
胞浸入、移植片材料タンパク質低下およびｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃな寸法は、
量を定められる。移植片開通、血球カウントおよび凝固パラメータは、規則正し
くモニタされる。詳細な議定書は、前の実施例において与えられる。

【００９６】 全てのケースにおいて、本発明の移植片は、優れた開通、宿主細胞による移植
片のより大きい侵入および移植片細胞外マトリックス・タンパク質のより大規模
な吸着に明らかにする他のいかなる種類もの本発明の補綴が比較された移植片に
よって見られてあった。

【００９７】 （実施例１６） 犬外部の頸静脈弁移動電話構成要素の実施例１６のＨｉｓｔｏｌｏｇｙは、明
らかに通常の犬外部の頸静脈弁に示した。しかし脱細胞化された犬外部の頸静脈
弁については、細胞構成要素は、完全に除去された。

【００９８】 （実施例１７） 犬ＥＪＶｖａｌｖｅ Ａ通常の犬ＥＪＶ弁のＨｉｓｔｏｌｏｇｙがヘマトキシ
リンおよびエオシンで汚した実施例１７は、内皮細胞を示した。 脱細胞化された犬ＥＪＶ弁は、内皮細胞のない静脈の弁を示した。

【００９９】 （実施例１８） ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄが融合させる脱細胞化された生物学的脈管の補
綴上の実施例１８のＨｅｐａｒｉｎ固定することは、ｅｖｅｒｔｅｄされ（裏返
しの）て、１時間の１Ｍのヒドロキシルアミン硫酸塩によって前もって処理され
た。ヘパリンのカルボキシル基は、クロス連結している因子ｌ−エチル−３（３
−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）によって活性化された。
脱細胞化された移植片上のヘパリンの固定することは、ヘパリン−ＥＤＣ溶液（
１）を有する２７Ｃで、一晩脱細胞化された脈管の材料を培養することによって
達成された：１時に維持されるｐＨについては、２は比率を重くする。０を有す
る５。０５Ｍ塩化水素酸。解放されたヘパリンは、蒸留水によって洗い落とされ
た。実施例５において詳述されるように、比色分析評価はサンプルのヘパリンの
量を決定するために用いた。結果は、以下の表２に示される。

【０１００】

【表２】 （実施例１９） 犬Ｐｉｇ頸動脈への０７実施例１９のＶａｓｃｕｌａｒ移植は、本発明によれ
ば備えた頸動脈および大腿動脈および犬の静脈の植設する。それぞれの犬は、１
週、２週、１ヵ月、２ヵ月、３ヵ月および６ヵ月の期間の間の両面の頸動脈ａｒ
ｔｅｒｉｏ−動脈のバイパス移植片および両面の大腿骨のａｒｔｅｒｉｏ−静脈
の移植片を受ける。開通率は、毎週の二重超音波審査（犠牲での流れ測定値と同
様に）によって文書化される。移植片の脈管の治療は、細胞タイプ識別、細胞増
殖、ｍｏｒｐｈｏｍｅｔｒｉｃな分析を含むｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌで免疫
組織化学の研究によって分析される（ｌｕｍｉｎａｌな直径、そして、ｎｅｏｉ
ｎｔｉｍａｌな厚み、そして、領域）。マトリックス・タンパク質代謝は、実施
例３において上記の通りに汚れているビオチン−ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎで測
定される。異種移植片移植に対する受け取る犬の免疫反応はまた、研究される。
そして、ブタ・コラーゲンに補足システム起動、ブタ・コラーゲンに対する特定
の抗体製造およびＴ細胞特定の起動を含む。

【０１０１】 脈管の治療を速める際に縛っているｂＦＧＦの役割は、別々の犬の対にされた
内部制御を使用して研究される。６匹の犬が、この研究において使われる。それ
ぞれの犬は、１つの頸動脈のｂＦＧＦ−バウンド移植片および１つの大腿動脈お
よび静脈のもう一方を受信する。それぞれの犬も、移植片を受ける、しかし、い
ずれでもに。内部制御としての頸動脈および大腿骨の静脈において、反対側性の
側上の縛られたｂＦＧＦ。犬は、１ヵ月に犠牲にされる。ｂＦＧＦ−ｃｏａｔｅ
ｄされてコーティングしてない脈管の補綴の開通率および脈管の治療は、比較さ
れる。

【０１０２】 生体内である、ａｒｔｅｒｉｏ−幹線のバイパスが融合させる頸動脈および大
腿骨のａｒｔｅｒｉｏ−静脈の移植片によって、本発明によればｂｉｏｅｎｇｉ
ｎｅｅｒｅｄされるブタ頸動脈移植片の性能は、犬モデルの自生のｓａｐｈｅｎ
ｏｕｓな静脈移植片と比較される。６匹の犬が、この研究において使われる。そ
れぞれの犬は頸動脈および大腿骨の静脈の１つのｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄさ
れた異種移植片を受ける、そして、反対側性の側は内部制御として自生のｓａｐ
ｈｅｎｏｕｓな静脈移植片を受けた。自生のより大きいｓａｐｈｅｎｏｕｓ静脈
は、ｄｏｇｓ’ｌｅｇｓから収穫される。犬は、１ヵ月に犠牲にされる。開通率
および脈管の治療は、ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた異種移植片および自生
のｓａｐｈｅｎｏｕｓな静脈移植片の間で比較される。生体内である、異種移植
片の性能は、ｅＰＴＦＥが融合させる小直径（４ｍｍの内径を有する）と比較さ
れる。６匹の犬が、この研究において使われる。それぞれの犬は頸動脈および大
腿骨の静脈位置で１つのｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた異種移植片を受ける
、そして、反対側性の側は内部制御としてｅＰＴＦＥ移植片を受ける。犬は、１
ヵ月に犠牲にされる。開通率および脈管の治療は、異種移植片およびｅＰＴＦＥ
移植片の間で比較される。

【０１０３】 生体内である、異種移植片の性能は、市販のグルタルアルデヒドを固定した鈍
重な頸動脈移植片と比較される（得る聖であるジュード健康診断、会社、セント
ポール、ミネソタ）。再び、６匹の犬が、この研究において使われる。

【０１０４】 それぞれの犬は頸動脈および大腿骨の位置で１つのｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅ
ｄされた異種移植片を受ける、そして、反対側性の側は内部制御としてグルタル
アルデヒドを固定した鈍重な頸動脈移植片を受ける。犬は、１ヵ月に犠牲にされ
る。開通率および脈管の治療は、異種移植片およびｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄ
ｅｆｉｘｅｄされた鈍重な頸動脈移植片の間で比較される。変更されていない異
種移植片は、本発明によってｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされる異種移植片と比
較してある。６匹の犬が、この研究のために使われる。

【０１０５】 それぞれの犬は頸動脈および大腿骨の静脈の１つのｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅ
ｄされた異種移植片を受ける、そして、反対側性の側は内部制御として新しいブ
タ頸動脈を受ける。犬は、１ヵ月に犠牲にされる。開通率および脈管の治療は、
ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされた異種移植片および新しいブタ頸動脈の間で比
較される。

【０１０６】 長期脈管の改造していて脈管の機能は、頸動脈ａｒｔｅｒｉｏ−動脈のバイパ
ス移植片および大腿骨のａｒｔｅｒｉｏ−静脈の移植片の犬モデルにおいて研究
される。３匹の動物が、この研究において使われる。それぞれの動物は、４つの
ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄされたブタ頸動脈（頸動脈位置での２および大腿骨
の位置での２）を受ける。移植片開通は、二重超音波審査によって毎月、決定さ
れる。３つの月ごとが６ヵ月から始まって、脈管の移植片の容器モーター機能は
、縮小のためのノルエピネフリンに応答して、そして、内皮依存している緩和の
ためのアセチルコリンに研究される。血管造影図て移植片ｌｕｍｉｎａｌな直径
分析は、脈管作動薬に応答して実行される。薬に応答する移植片直径変化のため
のｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌな脈管の超音波（ＩＶＵＳ）の他の測定は、実行さ
れる。動物は、３年で犠牲にされる。移植片は、容器モーター機能のｍｙｏｇｒ
ａｐｈｉｃな分析のために、そして、通常の平滑筋細胞の組織学で分子の分析お
よび内皮細胞表現型（マトリックス構成要素および構造と同様に）のために収穫
される。ｏｆｂｉｏｅｉｉｇｉｔｉｅｅｒｅｄされた脈管組織を試験している。

【０１０７】 （実施例２０） 容器の迎合性は、カスタム構築されたシステムを使用して決定された。システ
ムは、デジタル圧力計（コール−Ｐａｒｍｅｒ、ヴァーノン・ヒルズ、ＩＬ）、
注射器ポンプ（ハーヴァードＡｐｐａｒａｔｕｓ、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ）
、カスタム造られた調節可能なカニューレ、管（コール−Ｐａｒｍｅｒ）、ビデ
オ・カムコーダ（パナソニック（日本））およびビデオ獲得委員会（データＴｒ
ａｎｓｌａｔｉｏｎｓ、マールボロ、ＭＡ）を有するＰｅｎｔｉｕｍ（登録商標
） ＩＩパソコン（デル、Ｒｏｕｎｄロック、ＴＸ）から成った。容器は、２−
０の絹縫合を使用している調節可能なカニューレの上へ縫合された。その後、シ
ステムは容器部分および管から空気を除去するために３７のＣ ＰＢＳによって
フラッシュされた。粘弾性の効果を減らすために、容器は４５秒の間のこの圧力
を保つことによって続かれる注射器ポンプを使用している２２０ｍｍのＨｇに、
遅いインフレーションによって従来の迎合性テストによってあらかじめ調整され
た。次に、容器は０ｍｍのＨｇにゆっくり空気を抜かれた。２２０ｍｍのＨｇに
対する４つのインフレーション−デフレーション・サイクル以後、容器は２００
ｍｍのＨｇにゆっくりふくらまされた、そして、カニューレの長さは容器の湾曲
を除去するように調整された。ｃａｎｎｕｌａｓは、それからこの長さで固定さ
れた。

【０１０８】 迎合性テストの間、容器およびカニューレ・アセンブリは、ｐｈｙｓｉｏｌｏ
ｇｉｃａｌａｌな温度状況をシミュレーションするために３７ＣでＰＢＳの浴槽
でおおい隠された。平衡の後、容器は０から注射器ポンプを使用している１０ｍ
ｍのＨｇ増加の２００ｍｍのＨｇまでふくらまされた。その後、容器は１０ｍｍ
のＨｇ増加において空気を抜かれた。容器の外部の直径は、ビデオ・カムコーダ
を使用している各々のｐｒｅｓｓｕｅ増加で記録された。テレビ画像は、それか
ら直径寸法のためのＰＣの上へダウンロードされた。容器直径は、２００ｍｍの
Ｈｇに、そして、０ｍｍのＨｇへ０から各々の圧力増加のためのＳｃｉｏｎ Ｉ
ｍａｇｅ（子弟株式会社、フレデリック、ＭＤ）を使用しているピクセルにおい
て計られた。０ｍｍのＨｇでの直径と関連するパーセント直径変化はＡＤ ＝
１００のｘ（Ｄｐ−Ｄｏ）／Ｄｏとして算出された、ＡＤがパーセント直径であ
る所で、変わる、Ｄｐは指定された圧力での直径である、そして、Ｄｏは０ｍｍ
のＨｇでの参照直径である。生理的圧力範囲の平均の迎合性、７０−１３０であ
ってみなすｍｍ、Ｈｇは７０および１３０ｍｍのＨｇ間のＡＤ対圧力データによ
る線形後退線の傾斜として算出されて、パーセント直径変化として表されたにつ
きｍｍ圧力のＨｇ変化。データはそれから新しい容器の迎合性に標準化された。
そして、それは１００％であるとみなされた。

【０１０９】 迎合性はｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄされて脱細胞化されたヘパリン扱われ
た容器のために決定された、そして、新しい豚の一般の頸動脈の迎合性と比較し
て、アルコールは豚の一般の頸動脈（ｅＰＴＦＥ脈管の移植片）を保存した、そ
して、市販のグルタルアルデヒドは鈍重な頸動脈を固定した、そして、脈管の人
間の臍の静脈（ＨＵＶ）は接ぎ木する。ｅＰＴＦＥ移植片（ｎ＝２）は最も固い
ものであった。そして、２だけ時までに直径変わった。０−２００のｍｍ Ｈｇ
（１Ａ図およびＢ）の範囲以上の８％。Ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅを固定し
た鈍重な移植片（ｎ＝２）はほとんどｅＰＴＦＥ移植片と同程度固かった。そし
て、直径４において変わるだけだった。０２００ ｍｍ ＨｇのＧｌｕｔａｒａ
ｌｄｅｈｙｄｅを固定したＨＵＶ移植片（ｎ＝２）が約１３を変えるだけである
と共に範囲以上の８％。同じものの上の直径の８％は、圧力の中で変動する。脱
細胞化された容器（ｎ＝４）が堅く最少のものである間、２００ｍｍのＨｇ圧力
の上の７３％、直径増加する新しい、生きている容器（ｎ＝４）は変動する。そ
して、０および２００ｍｍのＨｇ間の直径の８８％増加する。ヘパリン固定する
こと方法は僅かに脱細胞化された容器（ｎ＝２）（それは試験の範囲以上の６９
％、直径が増加した）を堅くした。そして、それはほとんど新しい容器の挙動と
同一だった。それらが２００ｍｍのＨｇの上の５６％、直径広がるだけだったよ
うに、新しい容器（ｎ＝４）のアルコール保存は新しい生の容器と関連してかな
りそれらを堅くした。７０−１３０のｍｍ Ｈｇの生理的圧力範囲の容器の平均
の迎合性は、また、圧力−直径データから算出された（図２Ｃ）。

【０１１０】 インフレーション・フェーズの間の新しい容器の平均の迎合性は、０であった
。１７２の％の／ｍｍのＨｇ．容器に対するヘパリンの結合は、０まで更に生理
的圧力範囲の迎合性を減らした。ほぼ５７％新しい容器の迎合性であった０９７
５ ％／ｍｍ Ｈｇ。比較するために、ｅＰＴＦＥ移植片と同様に市販のグルタ
ルアルデヒドを固定した鈍重な動脈および人間の臍の静脈の生理的圧力範囲の迎
合性は、また、算出された。グルタルアルデヒドを固定したＨＵＶ移植片は、０
の迎合性を有するだけだった。３１％だけ新しい容器の迎合性であった０５３
％／ｍｍ Ｈｇ。Ｇｌｕｔａｒａｌｄｅｈｙｄｅを固定した鈍重な動脈移植片の
迎合性は、０であった。０３１ ％／ｍｍ Ｈｇ（それは、新しい豚の一般の頸
動脈の迎合性の１８％だけであった）。試験される最少の訴状サンプルはｅＰＴ
ＦＥ移植片であった。そして、それは０だけの迎合性を有した。生理的圧力の新
しい容器の迎合性の０２４ ％／ｍｍ Ｈｇまたは約１４％は、変動する。これ
らの結果は、ヘパリン扱われた脱細胞化された脈管の異種移植片が生理的範囲の
新しい自国の容器より応じないにもかかわらず、それらがほとんど２倍応じとし
て生物学的脈管の移植片および約４が折る既存の小直径として合成の移植片より
応じることを示す。

【０１１１】 図およびＢは１Ａ新しい豚の一般の頸動脈（ＰＣＡ（Ｆｒｅｓｈ））のための
圧力対直径結果に明らかにする ― アルコールはＰＣＡ（Ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ
されるアルコール）、脱細胞化されたＰＣＡ、ヘパリン扱われた脱細胞化された
ＰＣＡ（ヘパリン）、ｅＰＴＦＥ移植片、ｇｌｕｔｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ固定さ
れた人間の臍の静脈（ＨＵＶ）を保存した、そして、ｇｌｕｔｅｒａｌｄｅｈｙ
ｄｅは鈍重な動脈（鈍重な）を固定した。圧力／直径データに基づいて、生理的
圧力の平均の迎合性が７０−１３０の中で変動することｍｍ、Ｈｇは決定されて
、新しい容器の迎合性と比較された。脱細胞化された容器は最も応じる、続かれ
たそばに新しい容器（保存されるアルコール）であった、そして、それぞれ、ヘ
パリンは容器を扱った。

【０１１２】 （実施例２１） Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ脈管組織の強さテストを破裂させた容器を試験し
ている爆発において使用される装置は、迎合性試験において使用される同じもの
であった。圧力が増加したように、容器は２−０の絹縫合を使用しているカニュ
ーレに縫合されて、自由に長くなることができた。インフレーション圧力がデー
タ収集委員会（国営Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、オースティン、ＴＸ）を有する
Ｐｅｎｔｉｕｍ（登録商標） ＩＩパソコン（ゲートウェイ、ノース・スー族市
、ＳＤ）上の圧力計から記録されると共に、容器はほぼ４５ｍｍのＨｇ／第二の
割合で室温でＰＢＳによってふくらまされた。最も高い圧力が圧力変換器の２３
００ｍｍのＨｇ制限まで、容器の故障の前に届いたように、爆発圧力は定義され
た。

【０１１３】 試験される（ｎ＝４）新しい容器の中で、いずれも試験の２３００ｍｍのＨｇ
制限の範囲内で爆発しなかった。４杯の酒からの１は１１９４ｍｍのＨｇの圧力
で、容器爆発を保存した。そして、そのことは１６５４ｍｍのＨｇ（図４）で、
４台の脱細胞化された船から１をした。２台のヘパリン扱われた船は試験された
、そして、その他が試験の圧力制限まで、しないと共に、１は１９１２ｍｍのＨ
ｇで爆発した。これらの結果は、容器のいくつかの強さが処理の間、消失するこ
とができるにもかかわらず、それらがまだ生理的１０回以上圧力の高い安全マー
ジンを持っていることを示す。

【０１１４】 容器が彼らが移植の後、安全を保証するために爆発する前に耐えることができ
た最大の圧力を決定するために試験されるときに、図４は結果を示す。４台の新
しい船のどれも、２３００ｍｍのＨｇ圧力の試験制限に、破裂しなかった。４か
ら、アルコールは試験される容器を保存して、ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄし
た、試験の圧力制限までの各々の爆発のうちの１つだけ。２台のヘパリン扱われ
た船は試験された、そして、１は爆発した。これらの結果は、ヘパリン扱われた
移植片が生理的圧力に耐えるために十分に強いことを示す。

【０１１５】 （実施例２２） Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ脈管のＥｉｓｓｕｅｓ．の実施例２２の縫合保持
Ｓｔｒｅ７ｌｇｔｈテストカスタムメイドの装置が、容器を力変換器（オメガＥ
ｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ社、スタムフォード、ＣＴ）、デジタル・メーター（オメ
ガ）、データ収集委員会（国家のＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、Ｐｅｎｔｉｕｍ（
登録商標） ＩＩパソコン（ゲートウェイ）および自動車化されたステージ（ハ
ーヴァードＡｐｐａｒａｔｕｓ）からなる縫合保持強さを見つけるため検査する
際に使われた。 長さの容器３−４ ｃｍの断面は一端で４５の角度で切られた、そして、他端は
縫合保持装置のステージ・クランプにおいて型締された。縫合はそれから左のつ
ま先（かかと）で容器の曲げられた端に置かれた、または、右側（端からの２ｍ
ｍ）は力変換器上のフックによって輪になった、そして、縫合の端はずれを防ぐ
ために最低７つの結び目と共に結ばれた。容器は、それから０の一定の率で力変
換器から引き離された。容器または縫合から引き抜かれる縫合までの８つのｍｍ
／秒は、壊れた。縫合上の最大の力は、容器の縫合保持強さとして記録された。

【０１１６】 ５種類の脈管の交差連絡構造において共通に使用される縫合が、使われた。縫
合の各々の種はかかと、つま先、初期の左右の位置、保存されるアルコールの試
験された３つの時間であった、そして、ヘパリンは容器を扱った。各々の縫合−
容器組合せに対する結果として生じる１２の検査の平均は、比較された（図５Ａ
）。ヘパリンは、有される容器を扱ったかなりより高い（Ｐ ＜ ０。０５）ア
ルコール保存された容器が新しいヘパリン扱われた容器と関連して、８−０のＧ
ｏｒｅＴｅｘを有するかなりより高い縫合保持強さを有すると共に、新しいアル
コール保存された容器と比較して、５−０のＧｏｒｅＴｅｘ縫合を有する保持強
さを縫合する。縫合の全ての種のための保持強さが試験した平均の縫合の違いが
初期（保存されるアルコール）の間になかった、そして、ヘパリンは容器（図５
Ｂ）を扱った。このように、ヘパリン扱われた移植片は、活発なａｎａｓｔｏｍ
ｏｔｉｃな力において耐える十分な縫合保持強さを有しなければならない。

【０１１７】 ５ＡおよびＢが新たに保持強さが決定した縫合を示す図、保存されるアルコー
ルおよびヘパリンは、５つの臨床的に関連した縫合（Ａ）を使用している容器を
扱った。ヘパリン扱われた容器は５−０のＧｏｒｅＴｅｘ縫合を有するかなりよ
り高い縫合保持強さを有した。その一方で、アルコール保存された容器は８−０
のＧｏｒｅＴｅｘ縫合を有するかなりより高い縫合保持強さを有した。容器の各
々のタイプのための平均の縫合保持力は、使用する（Ｂ）縫合の５つの種のため
の強さを平均することによって見つかった。初期（保存されるアルコール）の重
大な違いがなかった、そして、ヘパリンは容器を扱った。

【０１１８】 本出願において引用される全ての刊行の開示は、全体として本願明細書に引用
したものとする。

【０１１９】 本発明は、上記の特定の実施例によって大きい詳細において例示された。これ
らの実施例が例示の実施例であると理解されることになっている、そして、その
本発明はＤｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎの実施例または詳細のいずれにもよって、制限
されることになっていない。当業者は、本発明が本発明の範囲内において、多く
の変更態様およびバリエーションができると認識する。したがって、Ｄｅｔａｉ
ｌｅｄ Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎおよび実施例は、図示するはずで、以下の請求
項にて説明したように、いかなる方法でも本発明の範囲を制限するはずでない。
むしろ、本願明細書に追加される請求項は、本発明の範囲および趣旨の範囲内で
広く解釈されることになっている。

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ】 図および１Ｂは、１Ａ、さまざまなｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌな圧力で補綴の
直径の変化で示すように、異なる脈管の補綴の迎合性（弾力）を示す。

【図１Ｂ】 図および１Ｂは、１Ａ、さまざまなｉｎｔｒａｌｕｍｉｎａｌな圧力で補綴の
直径の変化で示すように、異なる脈管の補綴の迎合性（弾力）を示す。

【図２Ａ】 図および２Ｂは、２Ａ、細胞増殖上のｂＦＧＦおよびｖｉｔｒｏの移動の効果
を示す。

【図２Ｂ】 図および２Ｂは、２Ａ、細胞増殖上のｂＦＧＦおよびｖｉｔｒｏの移動の効果
を示す。

【図３Ａ】 時間のさまざまな長さのための７０％のアルコールに格納されるときに、図３
Ａは脱細胞化されたブタ動脈の効率を連結して共有結合ヘパリンおよび安定性を
示す。

【図３Ｂ】 時間のさまざまな長さのための３７Ｃで、ＰＢＳにおいて培養されるときに、
図３Ｂは脱細胞化されたブタ動脈の効率を連結して共有結合ヘパリンおよび安定
性を示す。

【図４】 図４は、アルコールにおいて保存されるか、ｄｅｃｅｌｌｕｌａｒｉｚｅｄさ
れるかまたはヘパリンで処理された容器の爆発圧力を示す。 図社および５Ｂは初期の縫合保持に明らかにする ― アルコールは保存した、
そして、ヘパリンは容器を扱った。

【図５Ａ】 図５Ａおよび５Ｂは、新鮮なアルコール保存し、そしてヘパリン処理した脈管
の構造保存を示す。

【図５Ｂ】 図５Ａおよび５Ｂは、新鮮なアルコール保存し、そしてヘパリン処理した脈管
の構造保存を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｌ 33/10 Ａ６１Ｌ 33/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ラムズデン， アラン ビー． アメリカ合衆国 ジョージア 30324， アトランタ， ウッズデイル ロード 2000 Ｆターム(参考） 4C081 AB11 AB12 AB13 AB17 AC06 BA02 BA05 BA12 CD06 CD21 CD22 CD23 CD25 CD27 CD29 CE03 DA02 DA03 DC03 DC05 EA06

Claims (31)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 抗血栓形成性の化合物および増殖因子に連結された脱細胞化
   された脈管組織から成る脈管の補綴物。
2. 【請求項２】 前記脱細胞化された脈管組織が血管、血管から解剖された弁
   、一部の血管に保持された弁、大動脈の弁または肺の弁である請求項１に記載の
   脈管の補綴。
3. 【請求項３】 抗血栓形成性の化合物が前記脱細胞化された前記脈管組織に
   共有結合している、請求項１に記載の脈管の補綴。
4. 【請求項４】 前記抗血栓形成性の化合物がグリコサミノグリカンである請
   求項１に記載の抗血栓形成性の化合物。
5. 【請求項５】 グリコサミノグリカンがヘパリンである請求項４に記載の抗
   血栓形成性の化合物。
6. 【請求項６】 抗血栓形成性の化合物がデキストラン、ヒルジン、クマリン
   、血栓溶解剤、その誘導体またはその組合せである請求項１に記載の抗血栓形成
   性の化合物。
7. 【請求項７】 増殖因子がヘパリンに高い類似性を有する請求項５に記載の
   脈管の補綴。
8. 【請求項８】 増殖因子がヘパリンに付着によって脱細胞化された脈管組織
   に連結される請求項５に記載の脈管の補綴。
9. 【請求項９】 増殖因子が線維芽細胞増殖因子、塩基性線維芽細胞増殖因子
   、酸性線維芽細胞増殖因子、ヘパリン結合上皮増殖因子、トランスフォーミング
   成長因子α、トランスフォーミング成長因子β、脈管内皮細胞増殖因子、胎盤増
   殖因子、インスリン様増殖因子またはそれらのである請求項１に記載の脈管の補
   綴。
10. 【請求項１０】 前記増殖因子が内皮および平滑筋細胞の成長を促進する請
    求項１に記載の脈管の補綴。
11. 【請求項１１】 薬学的に活性な因子をさらに含む請求項１に記載の脈管の
    補綴。
12. 【請求項１２】 前記薬学的に活性な因子が血栓溶解剤、一酸化窒素ドナー
    、遺伝子送達ベクターまたは脈管作動薬である請求項１１に記載の脈管の補綴。
13. 【請求項１３】 前記血栓溶解剤がプラスミン、プラスミノゲン、ウロキナ
    ーゼまたはトロンビンである請求項１２に記載の脈管の補綴。
14. 【請求項１４】 前記脈管作動薬が脈管組織の成長を調節するかまたは脈管
    の緊張を調節する請求項１２に記載の脈管の補綴。
15. 【請求項１５】 ステントをさらに含む請求項１に記載の脈管の補綴。
16. 【請求項１６】 前記脈管の補綴がレシピエントに免疫学的に受容可能であ
    る請求項１に記載の脈管の補綴。
17. 【請求項１７】 脱細胞化された脈管の補綴を準備する方法であって、以下
    の工程： ａ）人間または動物から脈管組織を得る工程； ｂ）脈管組織を脱細胞化する工程； ｃ）脱細胞化された脈管組織を抗血栓形成性の化合物に共有結合する工程；お
    よび ｄ）脱細胞化された脈管組織を増殖因子に連結する工程、 を包含する方法。
18. 【請求項１８】 請求項１７に記載の方法であって、前記脈管組織を脱細胞
    化する工程は、以下： ａ）脈管組織を水に浸す工程； ｂ）細胞破片を機械的に除去する工程； ｃ）少なくとも一つのプロテアーゼ、少なくとも一つのリパーゼおよび少なく
    とも一つのヌクレアーゼを用いて脈管組織を処理する工程；ならびに ｄ）外脈管組織を予め暖められたリン酸緩衝化生理食塩水で洗浄する工程、 を包含する、方法。
19. 【請求項１９】 請求項１８に記載の方法であって、前記プロテアーゼが約
    ０．１（ｗ／ｖ）％〜約１０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度を有し、前記プロテアー
    ゼ処理が、約２０℃〜約３７℃の温度で５分間〜約１時間までである、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１８に記載の方法であって、前記リパーゼが約０．
    １（ｗ／ｖ）％〜約１０％（ｗ／ｖ）の範囲の濃度を有し、前記リパーゼ処理が
    、約２０℃〜約３７℃の温度で５分間〜約１時間までである、方法。
21. 【請求項２１】 請求項１８に記載の方法であって、前記ヌクレアーゼが少
    なくとも０．１単位／ｍｌ〜約１０単位／ｍｌの濃度を有し、前記ヌクレアーゼ
    処理が、少なくとも２０℃〜約３７℃の温度で少なくとも５分〜約１時間までで
    ある、方法。
22. 【請求項２２】 請求項１８に記載の方法であって、以下の工程： ａ）約１０％の濃度を有する洗剤を有する脈管組織を処理する工程； ｂ）少なくとも５％〜約３０％までの濃度を有するデヒドロコール酸を用いて
    脈管組織を処理する工程； ｃ）蒸留水を用いて脈管組織を洗浄する工程；ならびに ｄ）約０．５％（ｗ／ｖ）〜約１０％（ｗ／ｖ）の濃度を有するドデシル硫酸
    ナトリウム溶液を用いて脈管組織を処理する工程、 を包含する、方法。
23. 【請求項２３】 請求項１７に記載の方法であって、ここで前記抗血栓形成
    性の化合物を用いて脱細胞化された脈管組織をコーティングする前記工程が、以
    下の工程： ａ）ヒドロキシルアミン硫酸塩を有する脱細胞化された脈管組織を還流する工
    程； ｂ）ヘパリンを該脱細胞化された脈管組織に共有結合する工程；および ｃ）該ヘパリン添加されて脱細胞化された脈管組織から、未結合のヘパリンを
    除去する工程、 を包含する、方法。
24. 【請求項２４】 前記ヒドロキシルアミン硫酸塩が約０．５Ｍ〜約１．０Ｍ
    の濃度を有する請求項２３に記載の方法。
25. 【請求項２５】 ヘパリンを脱細胞化された脈管組織に共有結合する前にリ
    ンカー分子を有する脈管組織を灌流する工程を更に含む、請求項２３に記載の方
    法。
26. 【請求項２６】 前記リンカー分子が１−エチル−３（３−ジメチルアミノ
    −プロピル基）カルボジイミドである請求項２５に記載の方法
27. 【請求項２７】 ヘパリン添加されて脱細胞化された脈管組織を増殖因子に
    連結する方法であって、以下の工程： ａ）ヘパリン添加されて脱細胞化された脈管組織を洗浄する工程；および ｂ）該ヘパリン添加されて脱細胞化された脈管組織を増殖因子に結合させる工
    程、 を包含する、方法。
28. 【請求項２８】 前記増殖因子が約５μｇ／ｍｌ〜約５０μｇ／ｍｌの濃度
    を有する請求項２７に記載の方法。
29. 【請求項２９】 前記処理されたヘパリン添加されて脱細胞化された脈管組
    織から、未結合の増殖因子を除去する工程をさらに含んでいる請求項２７に記載
    の方法。
30. 【請求項３０】 ヒトまたは動物における、請求項１〜１６のいずれかに記
    載の脈管の補綴の使用。
31. 【請求項３１】 血管、血管から解剖した弁、血管の一部内に保持された弁
    、大動脈弁、または肺の弁としての、ヒトまたは動物における、請求項１〜１６
    のいずれかに記載の脈管の補綴の使用。