JP2003525945A

JP2003525945A - 固相合成法及び試薬

Info

Publication number: JP2003525945A
Application number: JP2001565370A
Authority: JP
Inventors: ジェイ．スワンソン，メルビン
Original assignee: サーモディックス，インコーポレイティド
Priority date: 2000-03-09
Filing date: 2001-02-06
Publication date: 2003-09-02
Anticipated expiration: 2021-02-06
Also published as: JP5048193B2; DE60118714D1; US6410643B1; EP1268505A2; AU3484501A; WO2001066554A3; EP1268505B1; CA2399043A1; ATE323098T1; DE60118714T2; MXPA02007445A; CA2399043C; WO2001066554A2

Abstract

(57)【要約】高密度の反応性基を有する表面を提供するために支持体の表面に被覆されるように適合した試薬組成物。このように被覆された表面は適切な目的で使用されることができ、固相重合支持体表面としての使用に特に好適である。この合成支持体は、ポリヌクレオチド、ポリペプチド及びポリサッカリドの合成などの繰り返し及び組み合わせ合成において使用できる。ポリマーコーティングは高められた有効表面積を提供するために使用することができ、特に、シリコンウェハなどの支持体表面の有効面積がそれ自体制限されている状況下において使用することができる。そうするときに、ポリマーコーティングは反応性密度及び表面積又は体積などの特性を最適な組み合わせを提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本願は米国を除く全ての国を指定国とする、２００１年２月６日にSurmodics,
Inc.という米国国籍の企業を出願人とするＰＣＴ国際特許出願として出願され
たものである。

【０００２】技術分野１つの態様において、本発明は固相（例えば、反復もしくは組み合わせ(repet
itive or combinatorial)合成における使用のための方法、試薬及び支持体表面
に関する。別の態様において、本発明は、置換されたポリアクリルアミド試薬に
関する。さらに別の態様において、本発明は支持体表面を変性するのに使用する
ための試薬に関し、特に、このような試薬をこのような表面に結合させるための
光化学手段の使用に関する。

【０００３】発明の背景 R.B. Merrifieldの１９６３年の発展性のある研究以来、固相合成は極端に発
展してきた。典型的には、使用される反応は通常の合成と同一であるが、試薬の
うちの１つは固体支持体上に固定されている。固相合成は、例えば、ポリヌクレ
オチド、ポリサッカリド及びポリペプチドの合成、並びに、反復及び組み合わせ
化学における他の応用において使用できる。

【０００４】固相技術の基本的な利点は、支持体（それに結合している全ての試薬を含む）
は不溶性のままであり、それ故、他の全ての試薬から容易に分離されることであ
る。過剰の試薬、他の反応生成物及び副生成物は溶剤を除去するときにすばやく
かつ効率的に除去される。固相種の精製も、急速かつ完全であり、全プロセスは
自動化されうる。

【０００５】近年、固相合成の原理は「組み合わせ化学（combinatorial chemistry)」とし
て知られている新たな方法に応用されてきた。一団となって効率的にスクリーニ
ングされうる分子の大きな集団又はライブラリーを形成するために組み合わせ化
学を科学者は使用する。より大きな、より多様な化合物ライブラリーを製造する
ことにより、有意な治療及び商業的価値のある新規の化合物を見出す可能性が企
業にとって高まる。この分野は、微細化、ロボティックスおよびレセプター開発
において基礎的な進歩により可能になる化学と生物学との集約である。

【０００６】従来の医薬設計と同様に、組み合わせ化学は有機合成法にたよるものである。
その相違は単一の化合物を合成する代わりに範囲にわたるものであり、組み合わ
せ化学は化合物の大きな集団（ライブラリー）を合成するために自動化及び微細
化を用いる。しかし、大きな集団は独立に活性化合物を生じないので、科学者は
これらの巨大な集団内に活性化合物を見つけ出す必要もある。このように、組み
合わせ有機合成は、化学「構築ブロック」のセットを用いた、ランダムでなく規
則的で繰り返しのものであり、多様な分子のセットを形成する。

【０００７】組み合わせ有機合成には少なくとも３つの共通のアプローチがある。配列され
た、空間的にアドレス可能な合成の間に、構築ブロックは個々の反応ウェル又は
位置において系統的に反応し、「個別の分子」を生成する。活性化合物は、グリ
ッド上のその位置により特定される。この方法は、スケールにおいても(Parke-D
avis Pharmaceutical DIVERSOMER技術）、また、小型でも（Affymax "VLSIPS"技
術）応用されている。第二の技術は、エンコード化混合物合成としても知られて
おり、ヌクレオチド、ペプチド又は他のタイプのより不活性な化学タグを用いて
各化合物を特定する。

【０００８】第三のアプローチである脱巻(deconvolution)の間に、一連の化合物の混合物
は組み合わせで合成され、各時間はある特定の構造特徴を作る。各混合物は混合
物として検定され、そして最も活性な組み合わせが探求される。次のラウンドは
管理可能な数の別個の構造が合成されそしてスクリーニングされるまで、系統的
に他の構造特徴を作る。ペプチドを研究している科学者は、例えば、数百万の可
能性から最も活性なペプチドシーケンスを最適化し又は見つけ出すために脱巻を
使用することができる。

【０００９】関連する主題で、反応性基又は他の所望の官能性を提供するように変性された
表面はポリマー及び非ポリマー分子の両方の固相合成を行なうために使用されて
きた。種々の固相樹脂は市販されており、例えば、Polystyrene, ArgoGel（商標
）及びArgoPore（商標）樹脂のラインを含むArgonaut Technologiesから入手可
能なものである。同様のラインにそって、Argonaut Technologiesに譲受された
公開された国際特許出願ＷＯ９７２７２２６（高官能化ポリエチレングリコール
グラフト化ポリスチレン支持体）は、ポリ（メチルスチレン）の主鎖及びポリ（
エチレンオキシド）の側鎖を有するポリマー及びグラフトコポリマーを記載して
いる。

【００１０】このような支持体はJW Labadie("Polymeric Supports for Solid Phase Synth
esis"), Current Opinions in Chemical Biology 2:346(1998)にも記載されてい
る。この論文は、例えば、官能性スチレンモノマーを用いて、又は、後官能化工
程において、軽度に架橋したポリスチレン中に官能基を導入することができる方
法を記載している。しかしながら、両方のアプローチでは、例えば事前に存在す
る支持体に別個のコーティングとして追加するのとは対照的に、支持体（例えば
、ビーズ）自体を形成するために使用されるポリスチレンポリマーに官能基が明
らかに結合されている。

【００１１】 Labadieの論文は、また、ＰＥＧ−グラフト化されたポリスチレン、例えば、
ヒドロキシル官能性ポリスチレンにエチレンオキシドをグラフト化することによ
り製造されるTentaGel製品の形態の使用を記載している。この論文は、さらに、
ベース樹脂としてポリスチレンジオールを使用することによりポリスチレングラ
フト結合で分岐を有する設計であるArgoGel（商標）として特定されるグラフト
樹脂により、ＰＥＧグラフト樹脂に関連する種々の「欠点」を克服する方法を記
載している。これらのアプローチの各々では、得られるポリマーは、ポリマー鎖
に沿った複数の位置で官能基を有するではなく、末端での官能基に限定されるよ
うである。

【００１２】さらに別の主題において、種々のポリマー組成物は電気泳動ゲルとしての使用
について記載されている。ポリアクリルアミドゲル電気泳動における最近の進歩
を記載しているRighettiら、J. Chromatog. B. Biomed. Sci.10;699(1-2):63-75
(1997)を概して参照されたい。

【００１３】例えば、米国特許第５，４７０，９１６号明細書（"Formulations for Polyac
rylamide Matrices in Electrokinetic and Chromatographic Methodologies"）
を参照されたい。’９１６号特許明細書は独特のクラスのモノマーの重合又は共
重合により得られる配合物を記載している。

【００１４】例えば、米国特許第５，７８５，８３２号明細書（"Covalently Cross-linked
, Mixed-bed Agarose-polyacrylamide Matrices for Electrophoresis and Chro
matography")を参照されたい。それは新規のクラスのＮ−モノ及び二置換アクリ
ルアミドモノマーをベースとするポリアクリルアミドマトリックスを記載してい
る。’８３２号特許明細書は共有結合した（架橋した）ポリアクリルアミド−ア
ガロースのタイプの混合ベッドマトリックスは核酸の断片、特に中サイズ（５０
〜５，０００塩基対）のＤＮＡ及び高分子量タンパク（＞５００，０００Ｄａ）
の分離に有用であることを記載している。’８３２号特許明細書は、中サイズの
核酸の断片の分離における使用に適切である、共有結合したポリアクリルアミド
−アガロース混合ベッドマトリックスを提供している。

【００１５】上記のような置換ポリアクリルアミドは電気泳動ゲルの製造における使用に限
定されており、出願人の知るところでは、以前には、固相合成表面を提供する目
的でそのまま又は光化学手段により表面に結合させたことはない。

【００１６】別の主題では、本発明の譲受人は以前に種々の目的で、種々の試薬を用いて表
面の改質を記載してきた。特に、これらの試薬は、例えば、支持体表面へのポリ
マー及び他の分子の結合のために、光化学の使用を一般に伴い、特に光反応性基
の使用を伴う。例えば、米国特許第４，７２２，９０６号、同第４，９７９，９
５９号、同第５，２１７，４９２号、同第５，５１２，３２９号、同第５，５６
３，０５６号、同第５，６３７，４６０号、同第５，７１４，３６０号、同第５
，７４１，５５１号、同第５，７４４，５１５号、同第５，７８３，５０２号、
同第５，８５８，６５３号及び同第５，９４２，５５５号明細書を参照されたい
。

【００１７】発明の要旨本発明は固相合成を行うための方法であって、ａ）固相合成における使用に適合した表面を提供する支持体材料を提供するこ
と、ｂ）下記式

【化１８】

【００１８】（式中、Ｒ₁は水素であるか又はＣ₁〜Ｃ₆アルキルであり、そしてＲ₂及びＲ₃は
互いに独立に、水素であるか、

【００１９】

【化１９】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルである（Ｒ₄は、１個以上の窒素原子を含有する複素環もしくはＣ₁〜Ｃ₆ア
ルキルであり、Ｒ₅はＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェニルであって、

【００２０】

【化２０】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有する））のモノマーの重合により生
成されるポリマー試薬を提供すること、ｃ）前記ポリマー試薬を前記支持体表面に適用して、前記ポリマー試薬を前記
支持体表面に共有結合させること、ｄ）例えば、ヌクレオチド及びアミノ酸から選ばれる、固相合成に適合した第
一の反応性モノマーを提供すること、前記モノマーは結合した反応性置換基と熱
化学的に反応性である対応する基を含み、そして好ましくは、固相合成において
次の第二のモノマー単位と反応性である１個以上の基をも含む、ｅ）前記結合した反応性置換基と前記対応する基を反応させるために適切な条
件下に前記支持体表面上で前記ポリマー試薬を前記第一のモノマーと接触させそ
して反応させ、成長しているポリマー鎖を提供すること、及び、ｆ）前記成長しているポリマー鎖に次のモノマーを提供しそして順次に結合さ
せて、所望のポリマー生成物を得ること、の工程を含む、方法を提供する。

【００２１】この様式で一旦生成されると、得られたポリマー生成物は保持されそして現場
で（例えば、その結合状態で）使用され、又は、支持体上のその位置から解離さ
れそして取り出され、異なる様式で使用されてよい。

【００２２】別の態様において、本発明は高密度の反応性基を有する表面を提供するために
支持体表面上に被覆されるように適合したポリマー試薬組成物を提供する。この
ように被覆された表面は適切な目的に使用することができ、そして特に固相合成
用支持体表面としての使用に特に好適である。そして、合成支持体表面は、ポリ
ヌクレオチド、ポリペプチド及びポリサッカリドの合成などの繰り返し及び組み
合わせ合成において使用されうる。ポリマーコーティング（被覆物）は、特に、
ビーズ又はシリコンウェハの表面などの支持体表面の有効面積自体が制限されて
いる状況で、高められた有効表面積を提供するために使用できる。そうすること
で、ポリマーコーティングは反応性基密度及び表面積もしくは体積などの特性の
最適な組み合わせを提供する。

【００２３】好ましい態様において、ポリマー試薬は安定な共有結合を介して支持体表面上
に被覆されるように適合した親水性もしくは両親媒性ポリマー試薬の形態で提供
され、それにより、ペプチド、オリゴヌクレオチド、他のオリゴマー（例えば、
ペプチド核酸）もしくは非ポリマー性有機化合物の固相合成に適する、高いが制
御可能な官能基の密度を有する表面を提供する。

【００２４】特に好ましい態様において、試薬は下記式

【化２１】

【００２５】（式中、Ｒ₁は水素又はＣ₁〜Ｃ₆アルキルであり、Ｒ₂及びＲ₃は、互いに独立に
、水素であるか、

【化２２】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルであり、ここで、Ｒ₄は１個以上の窒素原子を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルも
しくは複素環であり、そしてＲ₅は

【化２３】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルである）の１種以上の官能基含有モノマーの重合により製造される。

【００２６】このタイプの特定のモノマーは、例えば、Righetti('832)に記載されており、
その開示を参照により本明細書中に取り込む。本発明の１つの好ましい態様にお
いて、ポリマー試薬は加水分解に対して極端に耐性である高度に親水性のモノマ
ーであるＮ−アクリロイル−アミノ−エトキシエタノール（ＡＡＥＥ）を含むモ
ノマーから製造される(Chiari, Micheletti,Nesi,Fazio,Righetti;Electrophore
sis15, 1994,177-186)。このタイプの他のモノマーは米国特許第５，８５８，６
５３号明細書に記載されており、その開示を参照により本明細書中に取り込む。

【００２７】本発明の方法及び試薬は、合成能力（容量）を、反応体積を対応して又は過度
に増加させる必要なしに高めることが望まれる状況で特に有用性を見出す。本発
明の試薬はポリマー分子がこれまで可能でなかった様式で精製、特性化及び制御
されうる、予備形成されたポリマー組成物を提供する。

【００２８】好ましい態様において、試薬は、予備形成された合成ポリマーの表面への結合
（支持体上での現場での重合により形成されるものとは区別される）を含み、そ
してより好ましくは、予備形成されたポリマーの光化学手段による結合を含む。
官能基がポリマー主鎖にそって複数の位置で存在していることも好ましい。官能
基の数（又は平均数）及び位置はポリマーを形成するために使用されるモノマー
の選択、例えば、官能基含有モノマーと「希釈」モノマーとの比により制御でき
る。

【００２９】本発明のポリマー試薬組成物は膨潤性、官能基密度、反応性、透過性、親水性
及び加水分解安定性などの特性の最適な組み合わせを提供する。特に好ましい態
様において、試薬組成物は１種以上の異なる反応性基を提供するポリマー誘導体
を含む。試薬組成物は適切な様式で表面に結合されることができ、そして好まし
くは、表面に共有結合され、より好ましくは光反応性基の使用により結合される
。

【００３０】適切な支持体材料は、ビーズ、スライド、ウェハ、フィルム、ディスク及びプ
レート（例えば、マイクロウェルプレート）を含み、オルガノシラン処理された
ガラス、オルガノシラン処理されたシリコン、ポリプロピレン、ポリエチレン及
びポリスチレン（場合により、ジビニルベンゼンで架橋されている）などの材料
から製造される。さらなる支持体材料は、グラフト化ポリアクリルアミドビーズ
、ラテックスビーズ、ジメチルアクリルアミドビーズ（場合により、Ｎ，Ｎ’−
ビス−アクリロイルエチレンジアミンにより架橋されている）、疎水性ポリマー
で被覆されたガラスビーズなど（すなわち、硬質もしくは半硬質表面を有する）
を含む。ジビニルベンゼンで架橋した、ポリエチレングリコールグラフト化ポリ
スチレン型ビーズも使用できる。

【００３１】特に好ましい態様において、試薬はヒドロキシル置換されたポリアクリルアミ
ド試薬を含む。このような試薬は所望の様式及び濃度で、例えば、光化学的に表
面に結合されて、所望の反応性基の密度（例えば、第一級ヒドロキシル）基を有
する表面を提供することができる。

【００３２】本発明のポリマーは、適切な手段、例えば、１種以上の官能基を提供するモノ
マーと、１種以上の反応性コモノマー（例えば、光反応性基を提供するモノマー
）及び／又は１種以上の非反応性コモノマー（例えば、光反応性基も官能基も含
まない「希釈」モノマー）とを反応させることにより製造できる。関連する技術
の当業者は、この記述によって、本発明のポリマーは所望の表面特性を達成する
ようにあつらえられたモノマーの濃度及び比率を用いてラジカル重合によって合
成されうることを理解するであろう。このようにして、官能基の相対及び絶対濃
度、並びに、ポリマーの分子量（及び枝分かれの程度など）、及びポリマーの固
定化の手段（例えば、その長さ方向にそった光活性化可能な基の数及び／又は位
置）は性能を最適化するように全て調節されうる。

【００３３】種々のタイプ及び反応性の官能基を有するコモノマーも選択されうる。唯一の
決定因子ではないが、最終的なポリマーの主鎖及び官能基の間に含まれることが
できるスペーサーの長さは官能基の反応性に予測可能な又は決定可能な効果を有
することができる。さらに、比較的に不活性なモノマーは希釈モノマーとして有
効に含まれることができ、それにより、官能基の密度を所望のレベルに調節する
ことができ、そして所望のポリマー特性を達成し、例えば、その親水性、疎水性
又は両親媒性を調節してその溶媒和特性に影響を及ぼすことができる。

【００３４】最後に、表面にポリマーを固定化するための反応性基を提供するコモノマーも
含まれてよい。このようなモノマーは好ましくは光活性化基を含み、又は、熱化
学的反応性基を含むことができ、ポリマーを表面上の対応する反応性サイト又は
基に直接的に結合させるか、光活性化基を提供する別の試薬に結合させることが
できる。例えば、ヒドロキシル基は種々の活性化剤（例えば、１，１−カルボニ
ルジイミダゾール、２，２，２−トリフルオロエタンスルホニルクロリド又は２
−フルオロ−１−メチルピリジニウムｐ−トルエンスルホネート）により活性化
されうる。このような反応はアミン基を有する表面（例えば、３−アミノプロピ
ルトリエトキシシランで被覆したガラス）上にヒドロキシルポリマーを固定化す
るために使用できる。この例において、表面上のアミンと反応しない過剰の活性
化ヒドロキシル基は加水分解されて、遊離ヒドロキシル基に戻ることができる。
ポリマー中のコモノマーの分布を最適化するために、異なる重合速度を有するコ
モノマーを選択することもできる。場合により、又は、さらに、コモノマーの分
布はブロックコポリマーの調製及び使用により制御されそして影響を受けること
ができる。

【００３５】安定な共有結合を介して表面に固定化するための手段及びここに記載されてい
るタイプの複数の官能基を有する親水性もしくは両親媒性ポリマーも提供されう
る。このようなポリマーは、ペプチド、オリゴヌクレオチド、同様のタイプのポ
リマー（例えば、ペプチド核酸）及び非ポリマー性有機化合物の固相合成に特に
有用性を見出す。予備合成されたポリマーの使用は、例えば、グラフト化ポリマ
ー又は現場で形成さるものとは対照的に、多くの利点を有し、このような利点は
固定化前にポリマーを精製しそして特性化することができることを含む。

【００３６】さらに別の態様において、本発明は表面上に反応性基を提供するための方法を
提供し、この方法は、本明細書中に記載された試薬組成物で表面を被覆する工程
を含む。さらなる態様において、本発明はこのような試薬組成物で被覆された支
持体表面を提供する。

【００３７】詳細な説明好ましい態様において、本発明の試薬は官能基を含有するモノマーを、場合に
よりそして好ましくは他のモノマー、例えば、他の有用な基を含有するモノマー
、希釈モノマーなどとの組み合わせで重合することにより調製される。

【００３８】好ましい態様において、本発明のポリマーは下記の群、

【化２４】

【００３９】（式中、Ｒ₁は水素又はＣ₁〜Ｃ₆アルキルであり、Ｒ₂及びＲ₃は互いに独立に、
水素であるか、又は、

【００４０】

【化２５】

【００４１】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルであり、ここで、Ｒ₄は１個以上の窒素原子を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルも
しくは複素環であり、そしてＲ₅は

【００４２】

【化２６】

【００４３】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルである）から選ばれる１種以上のモノマーの重合により製造される。

【００４４】場合によりそして好ましくは、得られるポリマーは、また、例えば、光基含有
共重合性モノマーによりポリマー中に１個以上の光基を取り込むことにより、光
化学手段により表面に結合される。

【００４５】コモノマーは、所望の反応性を含む所望の特性もしくは機能を提供するように
選択できる。唯一の決定因子ではないが、官能基及びポリマー主鎖の間のスペー
サーの長さはしばしば官能基の反応性に影響を及ぼす。

【００４６】さらに、「不活性」又は「希釈」モノマーは、最適な溶媒和特性を得るための
親水性又は両親媒性ポリマーなどの所望のポリマー特性を達成するために、そし
て官能基の濃度を最適なレベルに調節するために使用できる。このようなモノマ
ーの例は、例えば、アクリルアミド、Ｎ−ビニルピロリドン、メタクリルアミド
、Ｎ−イソプロピルアクリルアミド、Ｎ−ビニルピリジン、Ｎ−ビニルカプロラ
クタム、スチレン、酢酸ビニル及びＮ−アクリロイルモルホリンを含む。

【００４７】本発明の好ましい組成物は共重合性モノマーに直接的又は間接的に共有結合さ
れ又は結合されるように適合した１個以上の潜反応性（好ましくは光反応性）ペ
ンダント基を含む。光反応性基は、本明細書中に規定され、そして好ましい基は
このような特性を保持する条件下に貯蔵されるのに十分に安定である。例えば、
米国特許第５，００２，５８２号明細書を参照されたい。この開示を参照により
本明細書中に取り込む。潜反応性基は種々の部分の電磁スペクトルに応答性であ
るように選択されることができ、紫外部分及び可視部分のスペクトルに応答性で
あるもの（本明細書中で「光反応性」と呼ぶ）は特に好ましい。

【００４８】光反応性基は特定の施用された外部刺激に対して応答して活性種を生成し、例
えば、同一又は異なる分子により提供されるような隣接の化学構造に共有結合を
生じる。光反応性基は貯蔵条件下には変化しない共有結合を保持するが、外部エ
ネルギー源による活性化時に他の分子と共有結合を形成する分子中の原子群であ
る。

【００４９】光反応性基は、ラジカル及び特にニトレン、カルベン及びケトンの励起状態な
どの活性種を電磁エネルギーの吸収時に発生する。光反応性基は種々の部分の電
磁線スペクトルに応答するように選択されることができ、そして、例えば、紫外
及び可視部分のスペクトルに応答性である光反応性基は好ましく、そして本明細
書中において「光化学基」又は「光基」ともしばしば呼ばれることがある。

【００５０】光反応性アリールケトンは好ましく、例えば、アセトフェノン、ベンゾフェノ
ン、アントラキノン、アントロン及びアントロン様複素環（すなわち、１０−位
にＮ，Ｏ又はＳを有するようなアントロンの複素環類似体）又はその置換（例え
ば、環置換）誘導体である。好ましいアリールケトンの例はアクリドン、キサン
トン及びチオキサントンを含むアントロンの複素環誘導体及びその環置換誘導体
を含む。

【００５１】このようなケトンの官能基は好ましい。というのは、それらは明細書中に記載
される活性化／不活性化／再活性化サイクルを容易に経験することができるから
である。ベンゾフェノンは特に好ましい光反応性部分である。というのは、それ
は、トリプレット状態への系内移行（intersystem crossing)を経験する励起シ
ングレット状態の初期形成を伴う光化学励起を経験することができるからである
。励起されたトリプレット状態は（例えば、支持体表面から）水素原子を引き抜
くことにより、炭素−水素結合中に入り、それにより、ラジカル対を生成するこ
とができる。ラジカル対が次いで崩壊すると、新規の炭素−炭素結合が生成する
。反応性結合（例えば、炭素−水素）が結合のためにないならば、ベンゾフェノ
ン基の紫外光線誘導励起は可逆性であり、そして分子はエネルギー源の除去時に
基底状態のエネルギーレベルに戻る。ベンゾフェノン及びアセトフェノンなどの
光活性化性アリールケトンは、これらの基が水中で複数回の再活性化を受けそし
て高められたコーティング効率を提供するので特に重要である。

【００５２】アジドはさらなる好ましいクラスの光反応性基を構成し、そしてフェニルアジ
ド及び特に４−フルオロ−３−ニトロフェニルアジドなどのアリールアジド（Ｃ ₆ Ｒ₅Ｎ₃）、ベンゾイルアジド及びｐ−メチルベンゾイルアジドなどのアシルア
ジド（−ＣＯ−Ｎ₃）、エチルアジドホルメート、フェニルアジドホルメートな
どのアジドホルメート（−Ｏ−ＣＯ−Ｎ₃）、ベンゼンスルホニルアジドなどの
スルホニルアジド（−ＳＯ₂−Ｎ₃）及び、ジフェニルホスホリルアジド及びジエ
チルホスホリルアジドなどのホスホリルアジド（ＲＯ）₂ＰＯＮ₃を含む。アジド
化合物は別のクラスの光反応性基を構成し、そしてジアゾメタン及びジフェニル
ジアゾメタンなどのアゾアルカン（−ＣＨＮ₂）、ジアゾアセトフェノン及び１
−トリフルオロメチル−１−ジアゾ−２−ペンタノンなどのジアゾケトン（−Ｃ
Ｏ−ＣＨＮ₂）、ｔ−ブチルジアゾアセテート及びフェニルジアゾアセテートな
どのジアゾアセテート（−Ｏ−ＣＯ−ＣＨＮ₂）及びｔ−ブチルαジアゾアセト
アセテートなどのβ−ケト−α−ジアゾアセテート（−ＣＯ−ＣＮ₂−ＣＯ−Ｏ
−）を含む。他の光反応性基は３−トリフルオロメチル−３−フェニルジアジリ
ンなどのジアジリン（−ＣＨＮ₂）及びケテン及びジフェニルケテンなどのケテ
ン（−ＣＨ＝Ｃ＝Ｏ）を含む。

【００５３】光反応性基の活性化時に、試薬分子は光反応性基の残基による共有結合により
、互いに及び／又は材料の表面に共有結合される。例示の光反応性基及び活性化
時のその残基は以下に示すとおりである（Ｒ及びＲ’はどの非阻害性有機基であ
ってもよい）

【００５４】

【表１】

【００５５】本発明の光活性化性モノマーは炭素−水素結合を有するいかなる表面に対して
施用してもよく、炭素−水素結合と光反応性基は反応して、得られるポリアクリ
ルアミドを表面に固定化する。適切な基材の例は、限定するわけではないが、ポ
リプロピレン、ポリスチレン、ポリ（塩化ビニル）、ポリカーボネート、ポリ（
メチルメタクリレート）、パリレン及び、ガラス及び他の無機表面を予備処理す
るために使用される各種オルガノシランを含む。

【００５６】本発明のポリマーは好ましくは所望の表面特性を達成するようにあつらえられ
た濃度及び比率のモノマーを用いたラジカル重合により合成される。このように
、官能基のレベル、ポリマーの分子量及びポリマーの固定化の手段（例えば、光
活性化基の導入による）は、所望の製品を得るために及び／又は１つ以上の性能
又は物理化学特性を最適化するために当業者により調節されうる。

【００５７】本発明の試薬は固相合成における使用のための官能化支持体表面を提供するた
めに種々の方法で使用されうる。１つの態様において、試薬は別個に包装されそ
して提供され、そして場合により、バルクで提供され、使用時に使用者により表
面に適用されてよい。別の態様において、試薬は支持体自体の製造時に支持体に
適用されそして共有結合され（例えば、光化学手段による）、そして得られた被
覆された支持体材料が実質的に使用できる状態で包装されそして販売されてよい
。

【００５８】

【化２７】

【００５９】

【化２８】

【００６０】

【化２９】

【００６１】

【化３０】

【００６２】

【化３１】

【００６３】以下の実施例は本発明を例示するために提供するが、それを制限しない。本発
明は好ましい態様について記載したが、当業者は本発明が添付の特許請求の範囲
の精神及び範囲内で変更して実施できることを認識するであろう。

【００６４】実施例例１４−ベンゾイルベンゾイルクロリド（ＢＢＡ−Ｃｌ）の調製（化合物Ｉ）反応性光基を調製するために、４−ベンゾイル安息香酸（ＢＢＡ）１．０ｋｇ
（４．４２モル）を、還流凝縮器及びオーバーヘッドスタラーを装備した乾燥し
た５リットルモートンフラスコに添加し、次いで、６４５ｍｌ（８．８４モル）
のチオニルクロリド及び７２５ｍｌのトルエンを添加した。ジメチルホルムアミ
ド３．５ｍｌを、その後、添加し、そして混合物を還流下に４時間加熱した。冷
却後に、溶剤を減圧下に除去し、そして残留チオニルクロリドを３×５００ｍｌ
のトルエンを用いた３回の蒸発により除去した。生成物を１：４のトルエン：ヘ
キサンから再結晶化して、真空炉内での乾燥後に９８８ｇ（９１％収率）を提供
した。生成物の融点は９２〜９４℃であった。８０ＭＨｚ（¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣ
ｌ₃））での核磁気共鳴（ＮＭＲ）分析は所望の生成物：芳香族プロトン７．２
０−８．２４（ｍ，９Ｈ）と一致した。全てのケミカルシフト値はテトラメチル
シラン内部標準からのｐｐｍダウンフィールドである。最終の化合物は、例えば
、例３に記載されるとおりの光活性化可能なポリマーの合成に使用されるモノマ
ーの調製における使用のために貯蔵した。

【００６５】例２Ｎ−（３−アミノプロピル）メタクリルアミドヒドロクロリド（ＡＭＰＡ）の調
製（化合物ＩＩ）アミン含有モノマー中間体を製造するために、１０００ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中の
１，３−ジアミノプロパン１９１０ｇ（２５．７７モル）の溶液を１２リットル
モートンフラスコに添加し、アイスバスで冷却した。２５０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂中
のｔ−ブチルフェニルカーボネート１０００ｇ（５．１５モル）の溶液を、その
後、反応温度を１５℃未満に維持する速度で滴下して加えた。添加の後に、混合
物を室温に温め、２時間攪拌した。反応混合物を９０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂及び５０
０ｇの氷で希釈し、次いで、２５００ｍｌの２．２ＮのＮａＯＨをゆっくりと添
加した。溶液が塩基性であることを確認する試験の後に、生成物を分液漏斗に移
し、そして有機相を除去し、抽出物１としてよけた。その後、水性相を３×１２
５０ｍｌのＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出し、各抽出物を別個のフラクションとして保存した
。４つの有機抽出物を、１つの１２５０ｍｌの０．６ＮＮａＯＨで順次にフラク
ション１から始めてフラクション４まで洗浄した。この洗浄手順を２回目に新鮮
な１２５０ｍｌの０．６ＮＮａＯＨで繰り返した。その後、有機抽出物を合わせ
、そしてＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥した。恒量重量にまでろ過しそして溶剤を蒸発させ
ることにより、８２５ｇのＮ−モノ−ｔ−ＢＯＣ−１，３−ジアミノプロパンを
提供し、それをさらなる精製を行わずに使用した。

【００６６】１０２０ｍｌのＣＨＣｌ₃中の無水メタクリル酸８０６ｇ（５．２３モル）の
溶液を、オーバーヘッドスタラーを装備した１２リットルモートンフラスコに入
れ、そしてアイスバスで冷却した。フェノチアジン６０ｍｇを開始剤として添加
し、次いで、８２５ｍｌのＣＨＣｌ₃中のＮ−モノ−ｔ−ＢＯＣ−１，３−ジア
ミノプロパン８２５ｇ（４．７３モル）を滴下して添加した。添加の速度は全時
間にわたって反応温度を１０℃未満に維持するように制御した。添加を完了した
後に、アイスバスを取り除き、そして混合物を一晩攪拌した。その後、生成物を
２４００ｍｌの水で希釈し、そして分液漏斗に移した。徹底的な混合の後に、水
性相を除去し、そして有機相を２４００ｍｌの２ＮＮａＯＨで洗浄し、水性相を
塩基性に確保した。その後、有機相をＮａ₂ＳＯ₄上で乾燥し、そして乾燥剤を除
去するためにろ過した。ＣＨＣｌ₃溶剤の一部を、生成物と溶剤との合計重量が
約３０００ｇとなるまで減圧下に除去した。所望の生成物を、その後、攪拌され
たＣＨＣｌ₃溶液に１１．０リットルのヘキサンをゆっくり添加することにより
沈殿させ、次いで４℃で一晩保管した。生成物をろ過により分離し、そして固体
を９００ｍｌのヘキサン及び１５０ｍｌのＣＨＣｌ₃の溶剤の組み合わせで２回
濯いだ。固体の徹底した乾燥により、９００ｇのＮ−［Ｎ’−（ｔ−ブチルオキ
シカルボニル）−３−アミノプロピル］−メタクリルアミドを提供し、それは示
差走査熱量法（ＤＳＣ）によりｍ．ｐ．が８５．８℃である。ＮＭＲ分光分析器
での分析は所望の生成物と一貫していた：¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）アミドＮＨ’
ｓ６．３０−６．８０，４．５５−５．１０（ｍ，２Ｈ），ビニルプロトン５．
６５，５．２０（ｍ，２Ｈ），Ｎに隣接するメチレン２．９０−３．４５（ｍ，
４Ｈ），メチル１．９５（ｍ，３Ｈ），残りのメチレン１．５０−１．９０（ｍ
，２Ｈ）及びｔ−ブチル１．４０（ｓ，９Ｈ）。

【００６７】３つ口の２リットル丸底フラスコはオーバーヘッドスターラー及びガススパー
ジチューブを装備していた。メタノール７００ｍｌをフラスコに添加し、そして
アイスバスで冷却した。攪拌しながら、約５リットル／分の速度で合計４０分間
、ＨＣｌガスを溶剤中にバブリングした。最終のＨＣｌ／ＭｅＯＨ溶液モル濃度
は指示薬としてフェノールフタレインを用いて１ＮＮａＯＨで滴定して８．５Ｍ
であると決定された。Ｎ−［Ｎ’−（ｔ−ブチルオキシカルボニル）−３−アミ
ノプロピル］メタクリルアミド９００ｇ（３．７１モル）を、オーバーヘッドス
ターラー及びガスアウトレットアダプターを装備した５リットルモートンフラス
コに添加し、次いで、１１５０ｍｌのメタノール溶剤を添加した。ある量の固形
分がこの溶剤体積とともにフラスコ中に残った。フェノチアジン３０ｍｇを抑制
剤として添加し、次いで、６５５ｍｌ（５．５７モル）の８．５ＭＨＣｌ／Ｍｅ
ＯＨ溶液を添加した。固形分はガスを発生しながらゆっくりと溶解したが、反応
は発熱性ではなかった。混合物を室温で一晩攪拌して、完全な反応を確保した。
その後、すべての固形分をろ過により除去し、さらなる３０ｍｇのフェノチアジ
ンを添加した。その後、溶剤を減圧下にストリッピングし、得られた固体残留物
を減圧下での蒸発で、３×１０００ｍｌのイソプロパノールとともに共沸させた
。最終的に、生成物を２０００ｍｌの還流用イソプロパノール中に溶解し、そし
て攪拌しながらゆっくりと４０００ｍｌの酢酸メチルを添加した。混合物をゆっ
くりと冷却し、４℃で一晩保存した。化合物ＩＩをろ過により分離し、恒量まで
乾燥し、６３０ｇの収量を与え、ＤＳＣでの融点は１２４．７℃であった。ＮＭ
Ｒ分光分析器での分析は所望の生成物と一貫していた：¹ＨＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）ビニ
ルプロトン５．６０，５．３０（ｍ，２Ｈ），アミドＮに隣接するメチレン３．
３０（ｔ，２Ｈ），アミンＮに隣接するメチレン２．９５（ｔ，２Ｈ），メチル
１．９０（ｍ，３Ｈ），残りのメチレン１．６５−２．１０（ｍ，２Ｈ）。最終
の化合物は、例えば例３に記載されるとおりの光活性化可能なポリマーの合成に
おけて使用されるモノマーの製造における使用のために貯蔵した。

【００６８】例３Ｎ−［３−（４−ベンゾイルベンズアミド）プロピル］メタクリルアミド（ＢＢ
Ａ−ＡＰＭＡ）の製造（化合物ＩＩＩ）以下のように、例１の反応性基及び例２のアミンモノマーを反応させて（アミ
ド結合により）、光基含有モノマーを生成した。例２に記載の一般法により製造
した化合物ＩＩ、１２０ｇ（０．６７２モル）を、オーバーヘッドスターラーを
装備した乾燥した２リットル3つ口丸底フラスコに添加した。フェノチアジン、
２３〜２５ｍｇを抑制剤として添加し、次いで８００ｍｌのクロロホルムを添加
した。アイスバス上で懸濁液を１０℃未満に冷却し、そして例1に記載される一
般法により製造した１７２．５ｇ（０．７０５モル）の化合物Ｉを固体として添
加した。５０ｍｌのクロロホルム中のトリエチルアミン２０７ｍｌ（１．４８５
モル）を、その後、１〜１．５時間にわたって滴下して添加した。アイスバスを
取り除き、そして周囲温度での攪拌を２．５時間続けた。その後、生成物を６０
０ｍｌの０．３ＮＨＣｌ及び２×３００ｍｌの０．０７ＮＨＣｌで洗浄した。硫
酸ナトリウム上での乾燥の後に、クロロホルムを減圧下で除去し、そして、重合
を抑制するために各再結晶化において２３〜２５ｍｇのフェノチアジンを用いて
、生成物を４：１のトルエン：クロロホルムから２回再結晶化した。化合物ＩＩ
Ｉの典型的な収率は９０％であり、融点は１４７〜１５１℃であった。ＮＭＲ分
光分析器での分析は所望の生成物と一貫していた：¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）芳香
族プロトン７．２０−７．９５（ｍ，９Ｈ）、アミドＮＨ６．５５（広いｔ，１
Ｈ），ビニルプロトン５．６５，５．２５（ｍ，２Ｈ），アミドＮに隣接するメ
チレン３．２０−３．６０（ｍ，４Ｈ），メチル１．９５（ｓ，３Ｈ），残りの
メチレン１．５０−２．００（ｍ，２Ｈ）。最終の化合物は、例えば、例８〜１
１及び１３に記載されるとおりに、光活性化可能なポリマーの合成における使用
のために貯蔵した。

【００６９】例４Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）アクリルアミド（ＨＰＡ）の製造（化合物ＩＶ
）ヒドロキシル基の形の官能基を含有するモノマーを以下のとおりに製造した。
アクリロイルクロリド５３ｍｌ（０．６６モル）を、イソプロパノール／ドライ
アイスバス中に浸漬した３つ口丸底フラスコ中で−４０℃に冷却した。フラスコ
は滴下漏斗、温度計及びアルゴンインレットを装備していた。エタノール（１０
００ｍｌ）を−４０℃に冷却し、冷たいアクリロイルクロリドに添加した。３−
アミノ−１−プロパノール１００ｍｌ（１．３モル）を１０００ｍｌのエタノー
ル中に溶解した。この溶液を滴下漏斗に移し、そしてアクリロイルクロリドに滴
下して添加した。溶液をエタノール／ドライアイスバス中で２時間攪拌し、次い
で、４℃で一晩攪拌した。溶剤を蒸発させた。２５ｍｇのフェノチアジンを添加
した後に、残留物をクロロホルム中に溶解し、そしてシリカゲル上で精製した。
クロロホルムで洗浄した後に、生成物をアセトンで溶離し、６９．１ｇ（８２％
の収率）を生じた。

【００７０】例５Ｎ−（２−エトキシ−（２−ヒドロキシエチル））アクリルアミド（ＨＥＥＡ）
の製造（化合物Ｖ）別のヒドロキシル基含有モノマーを例４と本質的に同一の手順で製造したが、
４０．４ｍｌ（０．５モル）のアクリロイルクロリドを１００．２ｍｌ（１．０
モル）の２−（２−アミノエトキシ）エタノールと反応させた。化合物をシリカ
ゲルからアセトンを用いて溶離し、９４．６ｇ（１１９％収率）を与えた。

【００７１】例６Ｎ−アクリルアミド−Ｄ−グルコサミン（ＡＧＡ）の製造（化合物ＶＩ）ヒドロキシル基の形の官能基を含有する別の代わりのモノマーを以下のとおり
に製造した。グルコサミンヒドロクロリド１０．０ｇ（０．０４６４モル）を１
２ｍｌの３．８Ｍ水酸化ナトリウムに添加した。炭酸カリウム０．３０ｇ（０．
００２２モル）及び亜硝酸ナトリウム０．３５ｇ（０．００５１モル）をその後
に添加し、透明な溶液が得られるまで混合物を攪拌した。この透明な溶液に１０
ｍｌのクロロホルムを添加し、そして混合物をアイスバス中で激しく攪拌した。
アイスバス中で攪拌しながら、５ｍｌのクロロホルム中のアクリロイルクロリド
４．４５ｇ（４．０ｍｌ：０．０４９２モル）の溶液を１００マイクロリットル
部分として、５５μｌの１０Ｎ水酸化ナトリウム（４．９５ｍｌ合計）と交互に
添加した。添加の完了後に攪拌を３０分間続けた。クロロホルムを除去した。ｐ
Ｈを３に調節し、次いで、アクリル酸を除去するためにクロロホルムの３×１０
ｍｌ抽出を行った。水溶液を約４℃で貯蔵した。ＡＧＡの重合における使用は例
１２及び１３に記載されている。

【００７２】例７Ｎ−（２−メルカプトエチル）−２，６−ビス（４−ベンゾイルベンズアミド）
ヘキサンアミドの製造（化合物ＶＩＩ）光活性化可能な連鎖移動試薬を以下のとおりに製造した。リシンモノヒドロク
ロリド３．６５ｇ（２０ミリモル）を８ｍｌの２Ｎ水酸化ナトリウムに溶解させ
、アイスバス中で冷却した。例１に記載の一般法により製造した、１０．７７ｇ
（４４ミリモル）の４−ベンゾイルベンゾイルクロリドの１７ｍｌのクロロホル
ム中の溶液を４．４８ｇの水酸化ナトリウムの１９ｍｌの水中の溶液と同時に添
加した。反応物をアイスバス上で２時間攪拌し、その後、３時間で室温にまで温
めた。塩酸を用いてｐＨを１に調節し、さらに６０ｍｌのクロロホルムを添加し
た。遠心分離器を用いて層を分離し、水性相を３×５０ｍｌのクロロホルムで抽
出した。合わせた有機抽出物を硫酸ナトリウム上で乾燥した。得られた固体生成
物を８０％酢酸から再結晶化しようと試みたが、生成物の回収性は低かった。母
液を水で希釈し、生成物を沈殿させ、その後、それをクロロホルム中に溶解させ
、１０％の重炭酸ナトリウムで洗浄し、１Ｎの塩酸そして最後に水で洗浄した。
この溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、そして生成物を精製することなく使用
した。ＮＭＲ分光分析器での分析は所望の生成物と一貫するものであった：¹Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）酸プロトン８．４５（広いｓ，１Ｈ）、芳香族及びアミド
プロトン７．００−８．１０（ｍ，２０Ｈ），ＣＨ４．５０−４．９０（ｍ，１
Ｈ），Ｎに隣接するメチレン３．３０−３．７０（ｍ，２Ｈ），残りのメチレン
１．１０−２．２５（ｍ，６Ｈ）。

【００７３】リシン誘導体４．３５ｇ（７．７３ミリモル）及びＮ−ヒドロキシスクシンイ
ミド０．９０１ｇ（７．８３ミリモル）を４０ｍｌの乾燥１，４−ジオキサン中
に溶解させ、次いで、１０ｍｌのジオキサン中の１．９５１ｇ（９．４５ミリモ
ル）の１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）を添加した。混合物
を室温で一晩攪拌した。得られた白色固体をろ過し、そして２×２５ｍｌの１，
４−ジオキサンで洗浄した。溶剤を減圧下に除去し、残留物を３×２５ｍｌのヘ
キサンで濯ぎ、過剰のＤＣＣを除去した。得られたＮ−オキシスクシンイミド（
ＮＯＳ）エステル４．１０ｇ（８１％収率）をさらに精製せずに使用した。

【００７４】２−アミノエタンチオールヒドロクロリド０．７５ｇ（６．６ミリモル）をア
ルゴン雰囲気下に１５ｍｌのクロロホルム及び１．０９ｍｌのトリエチルアミン
で希釈した。２５ｍｌのクロロホルム中のＮＯＳエステル４．１０ｇ（６．２２
ミリモル）を３０分にわたって室温で滴下して加えた。４時間の反応の後に、混
合物を水及び０．０５Ｎ塩酸で洗浄し、次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥した。
９５：５のＣＨＣｌ₃：ＣＨ₃ＯＨ溶剤系を用いて生成物をシリカゲルフラッシュ
クロマトグラフィーを用いて精製し、２．３０ｇの生成物を５９％の収率で得た
。ＮＭＲ分光分析器での分析は所望の生成物と一貫するものであった：¹ＨＮＭ
Ｒ（ＣＤＣｌ₃）芳香族及びアミドプロトン６．９０−８．００（ｍ，２１Ｈ）
，ＣＨ４．４０−４．８５（ｍ，１Ｈ），Ｎに隣接するメチレン３．００−３．
７５（ｍ，４Ｈ），残りのメチレン１．００−２．９５（ｍ，８Ｈ）及びＳＨ１
．４０（ｔ，１Ｈ）。

【００７５】例８アクリルアミド、ＢＢＡ−ＡＰＭＡ及び（ＨＰＡ）のコポリマーの製造（ランダ
ムフォトＰＡ−ＨＰＡ）（化合物ＶＩＩＩ）本発明の光活性化可能なコポリマーを以下のとおりに製造した。本明細書中に
記載される「希釈」モノマーとしての使用のためのアクリルアミド１．６９ｇ（
２３．８ミリモル）を、例３に記載される一般法により製造された０．１７ｇ（
０．４９ミリモル）のＢＢＡ−ＡＭＰＡ（光基含有モノマー、化合物ＩＩＩ）、
例４に記載される一般法により製造された３．１４ｇ（２４．３ミリモル）のＨ
ＰＡ（ＯＨ含有モノマー、化合物ＩＶ）、０．１０ｇ（０．５８ミリモル）の２
，２’−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）及び０．０４９ｍｌ（０．３
２ミリモル）のＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥ
Ｄ）とともに４３．５ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解した。この溶液を４分間のヘリウ
ムスパージで脱酸素した。ヘッドスペースをアルゴンで置換し、そして容器を一
晩シールして５５℃に加熱した。反応溶液を透析チューブ（１２−１４，０００
ＭＷＣＯ）中に入れ、５日間、脱イオン水に対して透析した。水溶液を親液化し
、フォトロード（photo load)０．０９４μモル／ｍｇ（理論値０．０９７μモ
ル／ｍｇ）の４ｇの白色固体を得た。

【００７６】例９ＢＢＡ−ＡＰＭＡ及び（ＨＰＡ）のコポリマー（ランダムフォトＨＰＡ）の製造
（化合物ＶＩＩＩ）本発明の光活性化可能なコポリマーを以下のとおりに（アクリルアミドなどの
「希釈」モノマーを使用せずに）製造した。例３に記載の一般法により製造され
たＢＢＡ−ＡＭＰＡ（化合物ＩＩＩ）０．１７ｇ（０．４９ミリモル）を、例４
に記載の一般法により製造された４．８７ｇ（３７．７３ミリモル）のＨＰＡ（
化合物ＩＶ）、０．０８ｇ（０．４６ミリモル）のＡＩＢＮ及び０．０３８ｍｌ
（０．２５ミリモル）のＴＥＭＥＤとともに３３ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解した。
この溶液を４分間のヘリウムスパージで脱酸素した。ヘッドスペースをアルゴン
で置換し、そして容器を一晩シールして５５℃に加熱した。反応溶液を透析チュ
ーブ（１２−１４，０００ＭＷＣＯ）中に入れ、５日間、脱イオン水に対して透
析した。水溶液を親液化し、フォトロード（photo load)０．０７３μモル／ｍ
ｇ（理論値０．０７６μモル／ｍｇ）の４．２７ｇの白色固体を得た。

【００７７】例１０アクリルアミド、ＢＢＡ−ＡＰＭＡ及び（ＨＥＥＡ）のコポリマーの製造（ラン
ダムフォトＰＡ−ＨＥＥＡ）（化合物ＩＸ）本発明の光活性化可能なコポリマーを以下のとおりに製造した。アクリルアミ
ド１．４８ｇ（２０．８ミルモル）を、例３に記載の一般法により製造された０
．１５ｇ（０．４２ミリモル）のＢＢＡ−ＡＭＰＡ（化合物ＩＩＩ）、例５に記
載の一般法により製造された３．３８ｇ（２１．２ミリモル）のＨＥＥＡ、０．
０８４ｇ（０．５１ミリモル）のＡＩＢＮ及び０．０４３ｍｌ（０．２８ミリモ
ル）のＴＥＭＥＤとともに３７．３ｍｌのＤＭＳＯ中に溶解した。この溶液を４
分間のヘリウムスパージで脱酸素した。ヘッドスペースをアルゴンで置換し、そ
して容器を一晩シールして５５℃に加熱した。反応溶液を透析チューブ（１２−
１４，０００ＭＷＣＯ）中に入れ、５日間、脱イオン水に対して透析した。水溶
液を親液化し、フォトロード（photo load)０．０９２μモル／ｍｇ（理論値０
．０８５μモル／ｍｇ）の３．７ｇの白色固体を得た。

【００７８】例１１ＢＢＡ−ＡＰＭＡ及び（ＨＥＥＡ）のコポリマーの製造（ランダムフォトＨＥＥ
Ａ）（化合物ＩＸ）本発明の光活性化可能なコポリマーを以下のとおりに製造した。例３に記載の
一般法により製造されたＢＢＡ−ＡＰＭＡ（化合物ＩＩＩ）０．１１ｇ（０．３
１ミリモル）を、例５に記載の一般法により製造された４．８９ｇ（３０．７２
ミリモル）のＨＥＥＡ（化合物Ｖ）、０．０６ｇ（０．３７ミリモル）のＡＩＢ
Ｎ及び０．０３１ｍｌ（０．２１ミリモル）のＴＥＭＥＤとともに２６ｍｌのＤ
ＭＳＯ中に溶解した。この溶液を４分間のヘリウムスパージで脱酸素した。ヘッ
ドスペースをアルゴンで置換し、そして容器を一晩シールして５５℃に加熱した
。反応溶液を透析チューブ（１２−１４，０００ＭＷＣＯ）中に入れ、６日間、
脱イオン水に対して透析した。水溶液を親液化し、フォトロード（photo load)
０．０６１μモル／ｍｇ（理論値０．０６２μモル／ｍｇ）の化合物ＩＸとして
指定される４．３５ｇの白色固体を得た。

【００７９】上記の手順を用いて、上の段落で記載したのと同様の化合物を製造したが、精
製されたＨＥＥＡの代わりに粗ＨＥＥＡを用いた。以下の成分装填量を用いて、
フォトＨＥＥＡ（化合物ＩＸ）を提供した。例３に記載の一般法により製造され
たＢＢＡ−ＡＭＰＡ（化合物ＩＩＩ）０．０４３ｇ（０．１２ミリモル）、例５
に記載の一般法により製造された１．９６ｇ（１２．２９ミリモル）のＨＥＥＡ
（化合物Ｖ）、０．０２４ｇ（０．１５ミリモル）のＡＩＢＮ及び０．０１２ｍ
ｌ（０．０８３ミリモル）のＴＥＭＥＤ。溶液を４分間のヘリウムスパージで脱
酸素した。ヘッドスペースをアルゴンで置換し、そして容器を一晩シールして５
５℃に加熱した。反応溶液を透析チューブ（１２−１４，０００ＭＷＣＯ）中に
入れ、６日間、脱イオン水に対して透析した。水溶液を親液化し、フォトロード
（photo load)０．０７８μモル／ｍｇ（理論値０．０６２μモル／ｍｇ）の化
合物ＩＸとして指定される１．３３ｇの白色固体を得た。

【００８０】例１２末端フォトグルコサミンポリマー（末端ジ−ＢＢＡ−ＡＧＡ）の製造（化合物Ｘ
）アクリルアミド（４００ｍｇ、５．６ミリモル）を１０ｍｌのジメチルスルホ
キシド（ＤＭＳＯ）中に溶解させた。その溶液に、４００ｍｇ（１．４８ミリモ
ル）のＮ−アクリロイルグルコサミン（化合物ＶＩ）を添加した。さらに、３４
ｍｇのＮ−（２−メルカプトエチル）−２，６−ビス（４−ベンゾイルベンズア
ミド）へキサンアミド、２００ｍｇのＡＩＢＮ及び５０μｌのＴＥＭＥＤを添加
した。溶液を窒素でスパージし、その後、一晩、５５℃の炉内に入れた。得られ
たポリマー溶液をSpectraPor1(隔膜）透析膜を用いて脱イオン水に対して透析し
た。透析の後に、溶液を親液化した。得られた乾燥ポリマーは０．５８ｇの重量
であった。脱イオン水中０．１ｍｇ／ｍｌで、ポリマーは２６５ｎｍで０．２０
２の吸光度を有した。

【００８１】例１３アクリルアミド、ＢＢＡ−ＡＰＭＡ及びＡＧＡのコポリマー（ランダムフォトＰ
Ａ−ＡＧＡ）の製造（化合物ＸＩ）２００ｍｇ（０．７４ミリモル）のＮ−アクリロイルグルコサミン（化合物Ｖ
Ｉ）の５ｍｌのＤＭＳＯ中の溶液に、５００ｍｇのアクリルアミド（７．０ミリ
モル）及び９８ｍｇのＢＢＡ−ＡＰＭＡ（０．２８ミリモルの化合物ＩＩＩ）、
５０ｍｇのアゾビスシアノバレエート及び１００μｌのＴＥＭＥＤを添加した。
溶液を窒素でスパージし、その後、５５℃の炉内に一晩入れた。ポリマーを脱イ
オン水に対して透析し、その後、親液化した。

【００８２】例１４ポリＨＰＡで被覆した表面の製造ＰＡのポリマーを例４により合成したＨＰＡモノマーを用い、ＢＢＡ−ＡＰＭ
Ａを省いた以外は例９の手順に従った重合反応を用いて製造した。親液化したポ
リマーをホルムアミド中の１，１’−カルボニルジイミダゾールの溶液中に溶解
し、そして１時間反応させた。ガラススライドをアミノプロピルトリメトキシシ
ランで被覆し、洗浄しそして乾燥した。活性化したポリＨＰＡ溶液をアミン変性
したスライドに塗布し、そして１時間インキュベートした。その後、スライドを
、０．１Ｍエタノールアミンを含有する０．１Ｍ炭酸ナトリウム溶液中に１時間
浸漬し、残っているカルボニルイミダゾール基をブロックし又は加水分解した。
その後、このスライドを脱イオン水中で洗浄しそして乾燥した。

【００８３】例１５フォトポリＨＥＥＡ被覆した表面の製造例１０により製造したＨＥＥＡ（化合物Ｖ）及びＢＢＡ−ＡＰＭＡ（化合物Ｉ
ＩＩ）のコポリマーを、２．０ｍｇ／ｍｌで脱イオン水中に溶解した。ポリスチ
レン顕微鏡スライドをポリマー溶液中に浸漬し、その後、平坦な表面上に置き、
波長３３０〜３４０ｎｍで照射強度が約２．０ｍＷ／ｃｍ²となる距離で４００
ワット中圧水銀バルブを有するDymax 照射装置を用いて、まだ湿潤している間に
１分間照射した。その後、スライドを脱イオン水で洗浄しそして乾燥した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷＦターム(参考） 4B024 AA20 CA01 CA11 HA19 4C057 AA18 BB02 CC03 DD02 JJ13 4H006 AA05 4H045 AA20 FA33 4J100 AM15Q AM21P AM21R BA02P BA03P BA13P BA20P BA34R BA52P BC43R BC53P BC54P CA01 CA04 CA05 JA15 JA51

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ａ）組み合わせ合成（combinatorial synthesis)における使
用に適合した表面を提供する支持体材料を提供すること、ｂ）下記式【化１】（式中、Ｒ₁は水素又はＣ₁〜Ｃ₆アルキル基であり、Ｒ₂及びＲ₃は、互いに独立
に、水素であるか、【化２】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルであり、ここで、Ｒ₄は１個以上の窒素原子を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルも
しくは複素環であり、Ｒ₅は、【化３】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルである）のモノマーの重合により生成されるポリマー試薬を提供すること、ｃ）前記ポリマー試薬を前記支持体の表面に適用し、前記支持体の表面にポリ
マー試薬を共有結合させること、ｄ）ヌクレオチド及びアミノ酸から選ばれる第一の反応性モノマーを提供する
こと、ここで、前記モノマーは、結合した反応性置換基と熱化学的に反応性であ
る対応する基を含む、ｅ）前記結合した反応性置換基と前記対応する基とを反応させるのに適する条
件下に前記支持体の表面上で前記ポリマー試薬と前記第一のモノマーとを接触さ
せそして反応させ、成長しているポリマー鎖を提供すること、及び、ｆ）前記成長しているポリマー鎖に次のモノマーを提供して順次に結合させて
、所望のポリマー生成物を得ること、の工程を含む、固相合成を実施するための方法。
【請求項２】得られるポリマー生成物をその場に維持しそして使用する、
請求項１記載の方法。
【請求項３】得られるポリマー生成物を解離しそして支持体のその位置か
ら取り外す、請求項１記載の方法。
【請求項４】前記ポリマー生成物はポリヌクレオチド、ポリサッカリド及
びポリペプチドからなる群より選ばれる、請求項１記載の方法。
【請求項５】前記支持体はビーズ、ウェハ、フィルム、ディスク又はプレ
ートである、請求項１記載の方法。
【請求項６】前記支持体はオルガノシラン処理したガラス、オルガノシラ
ン処理したケイ素、ポリプロピレン、ポリエチレン及びポリスチレンから選ばれ
る材料を含む、請求項５記載の方法。
【請求項７】前記ポリマー試薬は、下記式【化４】（式中、Ｘは０〜５モル％であり、Ｙは５〜１００モル％であり、そしてＺは０
〜９５モル％である）のものである、請求項１記載の方法。
【請求項８】前記ポリマー試薬は、下記式【化５】（式中、ｘは０〜５モル％であり、ｙは５〜１００モル％であり、そしてｚは０
〜９５モル％である）のものである、請求項１記載の方法。
【請求項９】前記ポリマー試薬は、下記式【化６】（式中、ｍは１５〜４５であり、ｎは５０〜１５０である）のものである、請求
項１記載の方法。
【請求項１０】前記ポリマー試薬は、下記式【化７】（式中、ｘは０〜５モル％であり、ｙは５〜１００モル％であり、そしてｚは０
〜９５モル％である）のものである、請求項１記載の方法。
【請求項１１】下記式【化８】（式中、Ｒ₁は水素又はＣ₁〜Ｃ₆アルキルであり、Ｒ₂及びＲ₃は、互いに独立に
、水素であるか、【化９】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルであり、ここで、Ｒ₄は１個以上の窒素原子を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルも
しくは複素環であり、Ｒ₅は、【化１０】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルである）の１種以上のモノマーの重合により製造されるポリマー試薬組成物
。
【請求項１２】前記ポリマー試薬は、下記式【化１１】（式中、ｘは０〜５モル％であり、ｙは５〜１００モル％であり、そしてｚは０
〜９５モル％である）のものである、請求項１１記載の試薬組成物。
【請求項１３】前記ポリマー試薬は、下記式【化１２】（式中、ｘは０〜５モル％であり、ｙは５〜１００モル％であり、そしてｚは０
〜９５モル％である）のものである、請求項１１記載の試薬組成物。
【請求項１４】前記ポリマー試薬は、下記式【化１３】（式中、ｍは１５〜４５であり、ｎは５０〜１５０である）のものである、請求
項１１記載の試薬組成物。
【請求項１５】前記ポリマー試薬は、下記式【化１４】（式中、ｘは０〜５モル％であり、ｙは５〜１００モル％であり、そしてｚは０
〜９５モル％である）のものである、請求項１１記載の試薬組成物。
【請求項１６】光基を有するモノマーと、下記式【化１５】（式中、Ｒ₁は水素又はＣ₁〜Ｃ₆アルキルであり、Ｒ₂及びＲ₃は互いに独立に、
水素であるか、【化１６】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルであり、ここで、Ｒ₄は１個以上の窒素原子を有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもし
くは複素環であり、Ｒ₅は、【化１７】から選ばれる１個以上の反応性置換基を含有するＣ₁〜Ｃ₆アルキルもしくはフェ
ニルである）のモノマーを重合する工程を含む、ポリマー試薬の製造方法。
【請求項１７】請求項１１記載のとおりに製造した試薬の固定化されたコ
ーティングを含む支持体表面。