JP2003523330A - アテローム性動脈硬化症および関連疾患のための脂質加水分解治療 - Google Patents

アテローム性動脈硬化症および関連疾患のための脂質加水分解治療

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、主として触媒的または化学量論的過程による加水分解により、脂質除去が可能な適切な物質を用いて、その場で、アテローム硬化性プラークの直接的および間接的治療により、哺乳動物において、これらのプラークを減少および／または除去する方法であって、上記物質は、リソソームへの取り込みを導く細胞中および／または上の受容体を標的にする方法を包含する。アテローム硬化性プラークを減少および／または除去するのに用いられるかかる物質は、一般的に、脂質加水分解性タンパク質および／またはポリペプチドから構成される。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 この出願は、２０００年２月４日に提出された米国仮特許出願第６０／１８０
，３６２号(Gregory A. Grabowski and Hong Du)に基づき、その仮出願からの優
先権を主張する。
【０００２】 ［発明の分野］ 本発明は、冠状動脈疾患の治療および予防のための脂質溶解性物質の使用に関
する。より具体的には、本発明は、哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症の
治療および予防のための、リソソーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）のような脂質加水
分解性タンパク質および／またはポリペプチドの使用に関する。
【０００３】 ［背景］ アテローム性動脈硬化症を患う患者数の増加は、コレステロールおよびトリグ
リセリド代謝に対する研究をますます駆り立て続ける。多数の研究を通じて、コ
レステロール代謝制御の本質的要素が、過去２０年間で解明されてきた（図１を
参照）。コレステロール代謝制御のための中心的システムは、２組の別個の経路
：１）内因性経路および２）外因性コレステロール侵入経路を要する。両組の経
路は、タンパク質リソソーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）により調節される［１］。
前者において、細胞は、転写因子であるステロール調節エレメント結合タンパク
質（ＳＲＥＢＰ１および２）の放出を介して内因性コレステロール合成の必要性
を感知し、その前駆体は、核膜および小胞体に結合している。ＳＲＥＢＰは、Ｈ
ＭＧ−ＣｏＡ還元酵素および内因性合成経路における他の酵素をアップレギュレ
ートする［２〜５］。このアップレギュレーションは、受容体媒介性エンドサイ
トーシス経路、すなわち、外因性経路由来の周囲媒体および／またはプラズマに
おける低レベルの遊離コレステロールを感知する、細胞の生化学的フィードバッ
クメカニズムから誘導される［６］。低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）
および他の細胞膜受容体は、この取り込み過程に関与する。これらのＬＤＬＲ由
来および他のリポタンパク質関連脂質は、ＬＡＬによる分解のためにリソソーム
に提供される。欠乏性外因性コレステロール供給がいったん感知されると、ＳＲ
ＥＢＰ１および２は、遊離の細胞内コレステロールおよび脂肪酸の生産を引き起
こす酵素のカスケードの転写を刺激する［７〜１０］。次に、細胞は、遊離コレ
ステロールレベルが十分であることを感知し、いったん限界を超えると、ＡＣＡ
Ｔ（アシルＣｏＡ：コレステロールアセチルトランスフェラーゼ）が、遊離コレ
ステロールにより直接活性化され、ＡＣＡＴ合成がアップレギュレートされる。
正味の効果は、膜内に含入されていない（すなわち、非リソソーム性）コレステ
リルエステルの細胞質貯蔵プールへ、エステル化によって遊離コレステロールを
除去すること並びに、細胞から遊離コレステロールおよびコレステリルエステル
を除去することである。細胞が、十分な遊離コレステロールが利用可能であるこ
とをひとたび感知すると、遊離コレステロールの安定状態プールが維持される［
１１］。
【０００４】 ＳＲＥＢＰ１および２の両方は、コレステロールおよび脂肪酸合成における重
要な遺伝子のプロモーター領域におけるステロール調節エレメント（ＳＲＥ）に
結合する転写因子である。ＳＲＥＢＰは、細胞膜における遊離コレステロール感
知エレメントと、潜在的には、細胞の他の構成成分とにより活性化されるプロテ
アーゼにより媒介される２工程のタンパク質分解過程により活性化される［１２
、１３］。これらのプロテアーゼは、小胞体（ＥＲ）に存在するＳＲＥＢＰを切
断し、それらの活性構成成分を放出させ、それからそれらは核へ輸送される。Ｓ
ＲＥＢＰ２は、単一の転写物を有するが、ＳＲＥＢＰ−１遺伝子は、２つの転写
物およびタンパク質、ＳＲＥＢＰ−１ａおよびＳＲＥＢＰ−１ｃを生産する。Ｓ
ＲＥＢＰ１のこれらの選択的形態は、選択的第１エクソンに存在する転写開始部
位の使用の結果現れ、続いて共通の第２エクソンにスプライシングされる。ヒト
において、ＳＲＥＢＰ−１ａ／−１ｃ用のｍＲＮＡはまた、３’末端でも選択的
スプライシングを示し、Ｃ末端にあるアミノ酸が１１３個異なるタンパク質をも
たらす［１４，１５］。３つ全てのＳＲＥＢＰの成員は、それらの共通機能を示
す同じ構造ドメインを共有する［１６］。これらのドメインとしては、１）塩基
性ヘリックス・ループ・へリックス・ロイシンジッパー「様」転写活性化因子で
ある４８０個のアミノ酸のＮＨ2末端セグメント、２）２つの膜貫通配列を含む
８０個のアミノ酸の中間セグメント、および３）調節ドメインとして機能する５
９０個のアミノ酸のカルボキシル末端半分が挙げられる［１７］。
【０００５】 単球／マクロファージ由来細胞への外部コレステロールの入口のための少なく
とも２つの経路が存在する［１８］：１）ｌｄｌｒおよびｌｄｌｒ関連タンパク
質システム［１９］並びに、２）リポタンパク質結合性コレステリルエステル（
ＣＥ）のためのスカベンジャー受容体システム（例えば、ＳＲＡ、ＳＲ−Ｂおよ
びＣＤ３６）［２０〜２４］。ＳＲ−Ｂ１経路は、ＨＤＬを取り込むことなく、
ＳＲ−Ｂ１を通じてコレステリルエステルの移行を介して、細胞にコレステリル
エステルを送達する［２５、２６］。
【０００６】 ＬＤＬ−ＣＥ（コレステリルエステル）または−ＴＧ（トリグリセリド）経路
では、複合体は、受容体媒介性認識後、細胞に取り込まれる。エンドソーム経路
は、後期エンドソーム酸性コンパートメントにおいて受容体からＬＤＬ−脂質複
合体を解いた後、これらの脂質をリソソームへ送達する。ＬＤＬ−脂質粒子がい
ったんリソソームに送達されると、脂質は、おそらくタンパク質分解を介して、
またはタンパク質分解およびＬＡＬによる同時攻撃により、ＬＤＬ粒子が分解し
た後に解放される［２７］。次に、これにより生じる遊離コレステロールは、リ
ソソーム膜中またはリソソーム膜に存在する１つまたはそれ以上のタンパク質に
より、リソソームからサイトゾルへ輸送される。それがいったんリソソームを出
ると、遊離コレステロールは、細胞膜の内部表面へ、および直接小胞体へ移動す
る。次に、細胞膜の内部表面からの遊離コレステロールは、小胞体へ輸送され、
内因性合成経路のフィードバック制御に関与する。したがって、細胞におけるコ
レステロールおよびトリグリセリド代謝のこの簡潔化した大要から、ＬＡＬは、
その活性なしではＬＤＬ経路由来の遊離コレステロールも遊離脂肪酸（ＦＦＡ）
も、リソソームから解放されて、これらの重要な経路を制御することができない
ので、内因性コレステロール合成制御において中心的位置を占めることは明らか
である。
【０００７】 コレステロールおよびトリグリセリド代謝におけるＬＡＬの重要性は、ＬＡＬ
の遺伝的欠損に起因するヒトの表現型により強調される。これらの２つの奇病、
ウォルマン病およびコレステリルエステル貯蔵病は、それぞれ早期および後期の
発症疾患である［２８］。ウォルマン病は、肝臓（肝細胞およびクッパー細胞）
、脾臓、副腎、および小腸上皮を含む、様々な組織および細胞のリソソームにお
けるコレステリルエステルおよびトリグリセリドの大量の蓄積という結果を生じ
る。このことは、肝脾腫大、副腎石灰化、および小腸肥厚および拡張を特徴とす
る重度の表現型を引き起こす。比較して、コレステリルエステル貯蔵病は、早期
の幼年時代から後期の青年期までの発症を伴い、成人ですら、孤立性肝脾腫大、
および／または進行性肝硬変、および主として、コレステリルエステルの貯蔵を
伴う、かなり異質の疾患である。
【０００８】 本発明者は、さらなる状況証拠が、アテローム性動脈硬化症または頚動脈アテ
ローム(atheromata)を伴う患者からの単球および／またはプラークにおける低い
ＬＡＬ活性を含意していることを示すことを発見した。この証拠は、多型変異体
が、様々な組織におけるＬＡＬの特質的な活性を引き起こすことができ、ヒトに
おけるアテローム硬化性疾患を発症しやすくし得るか、またはその発症における
さらなる危険要素となり得ることを示す［２９］。本発明によれば、このことは
、アテローム性動脈硬化症／動脈硬化症における病理学的関与の細胞におけるＬ
ＡＬ活性の補足が、これらの疾患に原因として関連する、蓄積された病理学的コ
レステリルエステルおよびトリグリセリドを減少させる手段を提供し得ることを
示唆する。
【０００９】 ［発明の概要］ 本明細書に記載するように、本発明は、タンパク質および／またはポリペプチ
ドを用いて、その場で、アテローム硬化性プラークの直接的および間接的治療に
より、哺乳動物において、これらのプラークを減少および／または除去する方法
を包含する。これらのタンパク質および／またはポリペプチドは、主として、触
媒的または化学量論的過程による加水分解により、脂質除去が可能であり、脂質
加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、リソソームへの取り込みを導く細
胞中および／または上の受容体を標的にする。受容体部位は、オリゴ糖認識およ
びペプチド配列認識受容体からなる群から選択される。
【００１０】 一般的に、本発明を実施するのに使用される組成物としては、脂質加水分解性
タンパク質またはポリペプチド、特に、タンパク質リソソーム酸性リパーゼ（Ｌ
ＡＬ）が挙げられる。しかしながら、リソソーム酸性リパーゼに対して少なくと
も８５％の配列相同性を示すタンパク質またはＳｅｒ153残基を有するタンパク
質のような他の脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドをまた用いてもよ
い。他のタンパク質としては、アミノ酸Ｐｒｏ（−６）をＴｈｒへ、かつＧｌｙ
２をＡｒｇへ置換したリソソーム酸性リパーゼの多型変異体、またリソソーム酸
性リパーゼとして類似した生物活性を示すポリペプチドが挙げられる。
【００１１】 薬学的に許容可能なキャリア中に含入された、外因的に生産された脂質加水分
解性タンパク質またはポリペプチドは、アテローム硬化性プラークを減少および
／または除去するために、経口的に、非経口的に、注入により、静脈内注入によ
り、吸入により、制御投与量放出により、または腹腔内投与により投与されても
よい。好ましい投与方法は、静脈内注入によるものである。
【００１２】 内因的に生産された脂質加水分解性タンパク質および／またはポリペプチドも
また、アテローム硬化性プラークを減少および／または除去するのに使用しても
よい。一般に、かかる方法は、ヒトリソソーム酸性リパーゼのような生物学的に
活性なヒト脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドを、生物学的に活性な
ヒト脂質加水分解性タンパク質（複数可）またはポリペプチド（複数可）を欠乏
している個体の細胞に提供することを含む。これは、生物学的に活性なヒト脂質
加水分解性タンパク質またはポリペプチドの生産に適格な細胞に、生物学的に活
性なヒト脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドをコードするＤＮＡ配列
を含み、かつ発現するベクターを、ｉｎ ｖｉｖｏで投与することにより達成さ
れる。用いられるベクターは、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウ
イルスおよびウイルス様ベクターを含むが、これらに限定されないウイルスベク
ター、プラスミド、または脂質ベシクルであってもよい。ベクターは、生物学的
に活性なヒト脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドの生産に適格な細胞
により取り込まれる。
【００１３】 ＤＮＡ配列は発現されて、生物学的に活性なヒト脂質加水分解性タンパク質ま
たはポリペプチドが生産される。さらに、このベクターを保有する細胞は、生物
学的に活性な脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドを分泌し、続いてそ
れは、脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドを欠乏している他の細胞に
より取り込まれる。
【００１４】 アテローム硬化性プラークの内因性治療に使用され得る他のタンパク質および
／またはポリペプチドとしては、リソソーム酸性リパーゼに対して少なくとも８
５％の配列相同性を有する生物学的に活性なタンパク質、アミノ酸Ｐｒｏ（−６
）をＴｈｒへ、かつＧｌｙ２をＡｒｇへ置換したリソソーム酸性リパーゼの多型
変異体タンパク質、およびリソソーム酸性リパーゼに類似した生物活性を示すポ
リペプチドが挙げられる。
【００１５】 ［発明の詳細な説明］ 本明細書で用いる「アミノ酸」または「アミノ酸配列」という用語は、オリゴ
ペプチド、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質配列、あるいはこれらの
いずれかの断片、および天然に存在する分子または合成分子を指す。本明細書中
で「アミノ酸配列」が、天然に存在するタンパク質分子のアミノ酸配列を指すた
めに列挙される場合は、「アミノ酸配列」および類義語は、列挙したタンパク質
分子に関連した完全に自然のアミノ酸配列に、アミノ酸配列を限定することを意
味しない。
【００１６】 本明細書で用いる「外因性脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチド」と
いう用語は、身体の外側で生産または製造されて、身体に投与されるものを指し
、「内因性脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチド」という用語は、身体
の内部へ、または身体の他の器官へ送達するための、幾つかの型の装置（生物学
的または他のもの）により身体の内側で生産または製造されるものを指す。
【００１７】 本明細書で用いる「生物学的に活性な」という用語は、天然に存在する分子の
構造的機能、調節機能または生化学的機能を有するタンパク質を指す。
【００１８】 本明細書で用いる「誘導体」という用語は、ポリペプチド配列またはポリヌク
レオチド配列の化学的修飾を指す。ポリヌクレオチド配列の化学的修飾としては
、例えば、水素のアルキル、アシルまたはアミノ基による置換を挙げることがで
きる。誘導体ポリヌクレオチドは、天然分子の少なくとも１つの生物学的機能を
保持するポリペプチドをコードする。誘導体ポリペプチドは、例えば、グリコシ
ル化、またはそれが誘導されたポリペプチドの少なくとも１つの生物学的機能を
保持する任意の他のプロセスにより修飾されたものである。
【００１９】 本明細書中で用いる「挿入」または「付加」という言葉は、天然に存在する分
子に見出される配列に、それぞれ、１つまたはそれ以上のアミノ酸残基またはヌ
クレオチドの付加を生じる結果となるアミノ酸またはヌクレオチド配列の変化を
指す。
【００２０】 本明細書中で用いる「核酸」または「核酸配列」という語句は、ヌクレオチド
、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、またはそれらの任意の断片を指す。
これらの語句はまた、一本鎖もしくは二本鎖であり、センスもしくはアンチセン
ス鎖を表し得るゲノム起源または合成起源のＤＮＡあるいはＲＮＡを、または任
意のＤＮＡ様もしくはＲＮＡ様物質を指す。この文脈で、「断片」は、翻訳され
ると、完全長のポリペプチドの幾つかの機能的特性（例えば、リパーゼ活性）ま
たは構造ドメイン特性を保持するポリペプチドを生産する核酸配列を指す。
【００２１】 「同一性パーセント」または「相同性パーセント」という語句は、２つまたは
それ以上のアミノ酸配列または核酸配列を比較する場合、特定アミノ酸または核
酸配列の同族体に見出される配列類似性のパーセントを指す。
【００２２】 「アテローム性動脈硬化症」という用語は、冠状動脈、大動脈、腎動脈、頚動
脈、ならびに四肢および中枢神経系へ血液を供給する動脈を含むが、これらに限
定されない身体および身体器官の１つまたは幾つかの大動脈ならびに小動脈の狭
窄および／または閉塞を引き起こす、マクロファージ、平滑筋細胞および他の型
の細胞において、コレステロールおよびコレステリルエステルならびに関連脂質
の異常な蓄積を引き起こす病理学的過程を指す。この病理学的過程の関連炎症反
応および介在物質もまた、この定義に含まれる。
【００２３】 「アテローム硬化性プラーク」という用語は、アテローム性動脈硬化症に起因
するコレステロールおよびトリグリセリドの堆積を指す。
【００２４】 ［論考］ アテローム性動脈硬化症の結果により、死亡および罹病を引き起こす原因とな
る。コレステリルエステルを蓄積するマクロファージは、冠状動脈および頚動脈
、大動脈およびその他身体中の末梢血管にアテローム硬化性プラークを堆積する
主要な成分であることが知られている。これらのコレステリルエステルは、リポ
タンパク質に乗って運搬される循環から誘導される。コレステリルエステルは、
低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬ−Ｒ）および他のスカベンジャー受容体を
経由して細胞内に入り、酸化低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）粒子となる。いっ
たん取り込まれると、これらの粒子およびそれに付着したコレステリルエステル
は、リソソームに送達され、リソソーム酸性リパーゼ（ＬＡＬ）によって切断さ
れてコレステロールとなる。
【００２５】 アテローム性動脈硬化症への現行の治療方法には、食事管理（低コレステロー
ル食）、運動、コレステロール合成阻害剤、外科手術による冠状動脈バイパス等
が挙げられる。しかし、これらの介入による功績は未だ十分でないために、この
主な疾患群に対する新規／別途／付加なる治療方法の継続的な開発が望まれる。
【００２６】 アテローム性動脈硬化症治療およびアテローム硬化性プラークの溶解のための
主要な二つの方法が採用されている。第１の治療方法は冠状動脈バイパス手術で
ある。定着した不安定狭心症および／または進行性アンギナの患者を治療するた
めに、この方法を使用する。第２の治療方法は「スタチン」と呼ばれる薬物類を
使用して肝臓におけるコレステロール合成を化学的に阻害することである。この
方法は、コレステロール合成経路において律速酵素であるＨＭＧＧｏＡ還元酵素
の作用を阻害することによりコレステロール合成を阻止する。冠状動脈バイパス
手術は、選択された患者ではアンギナの攻撃を減少するのに効果がある。スタチ
ンは、血漿コレステロールの低下およびアテローム硬化性プラークの発症傾向の
阻止を首尾よく行うことが示されている。しかし、両方法とも、既存のアテロー
ム硬化性プラークを直接溶解する可能性は得られない。
【００２７】 ＬＡＬは、コレステリルエステルが体内に侵入する主な生化学的経路を代表し
、その後細胞内コレステロール生合成の調節に使用される。ＬＡＬがいったんコ
レステリルエステルからコレステロールを解放すると、この遊離コレステロール
はリソソームを離れ、ステロール調節エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ）
により媒介されるコレステロール合成のダウンレギュレーションを引き起こす。
ＬＡＬの通常量の存在下で、アテローム硬化性プラーク状態のマクロファージの
内部にはコレステリルエステルが蓄積している。この事実から、コレステリルエ
ステルのこれらの細胞内への送達量がＬＡＬの通常容量を越えると、送達された
コレステリルエステルは異化され、アテローム硬化性プラークの発症を開始して
いることが判る。このプロセスが進行すると、内因性細胞コレステロール合成を
調節する通常の細胞代謝は崩壊し、ＳＲＥＢＰにより媒介されるコレステロール
合成系のダウンレギュレーションの欠如および細胞内コレステリルエステル合成
のためのアシルＣｏＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）
経路により、コレステロールおよび細胞コレステリルエステルが過剰に合成され
る［３０］。
【００２８】 同様な事態は、コレステロール生合成およびコレステロールの恒常性維持を担
う体内の主要な器官である肝臓において生じる。ＬＡＬが肝細胞に通常量より多
く送達されると、門脈回路および食事から肝細胞に送達された脂質を代謝する主
要な経路であるリソソームからの遊離コレステロールの放出を高める（すなわち
、リソソーム系を介したコレステリルエステルの流量が増加する）。この結果、
リソソームから解放されるコレステロールは増加し、続いて、肝臓でのコレステ
ロール合成およびそれの身体への供給がダウンモジュレートされる。これにより
、コレステロールおよびコレステリルエステルの末梢部位への負荷は減少され、
アテローム発生の可能性は低下する。
【００２９】 ＬＡＬまたは類似の生物活性を有するＬＡＬ同族体のような適切なタンパク質
またはポリペプチドを使用すれば、アテローム性動脈硬化症および末梢の血管疾
患を治療する別途の手段が得られる。アテローム硬化性プラークの病巣の進行を
防ぐか、または後退を促進することによるＬＡＬの機能は、１）病巣の泡沫状細
胞に直接侵入し、貯蔵されているコレステリルエステルおよびトリ、ジ、モノア
シルグリセリドを酵素的に溶解することによる、および２）遊離コレステロール
および遊離脂肪酸がリソソームから放出するのを間接的に促進することによる２
つのメカニズムを経由しており、これによりＳＲＥＢＰまたは他の経路が媒介す
る細胞（肝細胞、マクロファージ等）脂質合成の調節が可能となる。アテローム
性動脈硬化症を患う患者は、アテロームプラーク中のＬＡＬレベルが減少する傾
向がある。
【００３０】 ＬＡＬは、リパーゼ群の一員であり、３７２個のアミノ酸の糖タンパク質であ
り、マンノース受容体系を介してリソソームに取り込まれる［３１〜３３］。Ｌ
ＡＬをコードするｃＤＮＡ配列が既に報告されている［３４］。この糖タンパク
質には、グリコシル化に対応する６個のグリコシル化共通配列（Ａｓｎ−Ｘ−Ｓ
ｅｒ／Ｔｈｒ）があり、またＡｓｎ15、Ａｓｎ80、Ａｓｎ252の３個がリパーゼ
遺伝子群の成員中に保存されている。リパーゼ遺伝子群の成員には全てＧＸＳＸ
Ｇというペンタペプチド配列が保存されており、この中にセリン求核性の活性部
位が含まれている［３５〜３７］。ＬＡＬでは、このような配列が９７〜１０１
番残基と１５１〜１５５残基とに二つあり、潜在的なセリンの求核部位は９９番
残基と１５３番残基にあって、鍵となる求核部位はＳｅｒ１５３番残基にある。
ＬＡＬは、リン脂質／洗浄剤形を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏの系でコレステリ
ルエステルおよびトリグリセリドを切断する。Ｓｅｒ153は多数のリパーゼに共
通する触媒的なＡｓｐ−Ｓｅｒ−Ｈｉｓの３対残基の中の一部として定義されて
いる。
【００３１】 本発明で使用する適切な脂質加水分解物質としては、ＬＡＬ、ＬＡＬ同族体等
の等タンパク質（ここで、同族体は、ＬＡＬをコードする遺伝子コードに縮重に
起因して、少なくとも８５％の配列相同性を有する）、ＬＡＬに類似した生物活
性を有するポリペプチドおよび非ペプチド由来の物質が挙げられるが、これらに
限定されない。また、脂質加水分解性のタンパク質およびポリペプチドも挙げら
れ、これらには触媒的なリパーゼのＡｓｐ−Ｓｅｒ−Ｈｉｓの３対残基が含まれ
ており、ここでＳｅｒはＳｅｒ153残基である。さらにこの物質には２つのアミ
ノ酸が別のアミノ酸で置換されたＬＡＬの多型変異体が挙げられる。そのような
多型変異体の例は、まず健常なヒトの肝ｃＤＮＡライブラリーからＬＡＬをクロ
ーン化し、次に２つのヌクレオチド（Ｃ８６をＡに、Ｇ１０７をＡに）を変更し
、ＬＡＬにおいて、アミノ酸Ｐｒｏ（−６）をＴｈｒに、Ｇｌｙ２をＡｒｇに置
換して、４つの異なるＬＡＬの多型変異体を生じる結果となる。さらなるアミノ
酸配列としては、触媒的または化学量論的な脂質加水分解が可能なアミノ酸配列
が挙げられ、ここでアミノ酸鎖の１５３番残基はセリン残基である。
【００３２】 ＬＡＬから誘導されるタンパク質には、天然のＬＡＬ配列を有しているが、Ｎ
結合アセチルグリコシル化残基が６個よりも多いか、または６個未満であるタン
パク質が挙げられる。各グリコシル化部位には、２つのＮ結合アセチルグルコサ
ミン残基があり、それらは、オリゴ糖末端化されており、この場合オリゴ糖末端
性残基はマンノース残基であるのが好ましく、また各グリコシル化部位には少な
くとも３個のオリゴ糖末端性残基が存在する。
【００３３】 アテローム性動脈硬化症治療にあたり、脂質加水分解物質が標的とするのは、
リシソームへの取込みを誘導する受容体である。これらの受容体には、マンノー
ス受容体やマンノース−６−リン酸受容体を含むオリゴ糖認識受容体の種類に属
するもの、およびＣＤ３６とＬＤＬの受容体を含むペプチド配列認識受容体の種
類に属するものが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３４】 脂質加水分解性アミノ酸配列を使用するアテローム性動脈硬化症の治療方法 ＬＡＬをスタチンと併合して使用すれば、アテローム硬化性プラークのレベル
は低下する。また、再狭窄が発症する患者に対しては、ＬＡＬをバイパス手術と
併用すれば、術後におけるプラークの再発を防止することができる。さらに、Ｌ
ＡＬ等の治療剤で処理すれば、手術またはその他の侵襲的方法では評価すること
が不可能な大動脈および／または小動脈における有利な改善が達成できる。ＬＡ
Ｌ治療の更なる利点には、ある種の患者では手術の必要がなくなること、および
スタチン治療アプローチの場合と同様に、患者に対して天然物を、合成化学品に
付随のまたは潜在的な副作用がなく供給することが挙げられる。
【００３５】 ＬＡＬ治療はまた、ヒトの２つの奇病、すなわちウォルマン病およびコレステ
リルエステル貯蔵病の治療に使用できる。両疾患の原因はＬＡＬ位置での突然変
異である。前者では１年目で死を招来し、後者では後期に肝硬変の発症を伴う疾
患が持続する。両疾患とも現在は治療レジメがない。
【００３６】 ＬＡＬ治療のさらに有力な治療的役割には、妊娠脂肪肝、肝臓への非特異的な
脂肪侵入、糖尿病のような二次疾患に起因する末梢のアテローム性動脈硬化症、
アテローム性動脈硬化症に起因する頚動脈狭窄、および同様な疾患状態の治療に
おいて使用することが挙げられる。
【００３７】 脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、治療にあたり外因性物質と
してあるいは内因性物質として使用することができる。外因性脂質加水分解性タ
ンパク質またはポリペプチドは、身体外で生産または製造されて、身体に投与さ
れる。内因性脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、ある手段（生物
学的等の）により身体内で生産または製造され、同一身体内または身体の他の器
官に送達される。ＬＡＬは体内組織に存在する。アテローム性動脈硬化症の患者
では、アテロームプラーク中のＬＡＬレベルが減少する傾向がある。プラークへ
の直接的および間接的治療において望ましい結果を達成するために、脂質加水分
解性タンパク質またはポリペプチドの標的は、特定の受容体を介する特定の器官
である。例えば、ＬＡＬは、マンノース受容体系や他のオリゴ糖特異性受容体を
標的にすることができ、マクロファージ、平滑筋細胞、内皮細胞、肝細胞に侵入
する。
【００３８】 内因性治療： プラークの間接的治療には、コレステロール生合成の主要な器官、主として肝
臓にＬＡＬを供給することが関係する。これにより、コレステリルエステルの非
常に多くの正味のリソソーム処理量および遊離コレステロールの細胞質への送達
を導かれ、コレステロール合成全体が減少する。その結果、肝臓から末梢器官へ
のコレステロールの内因的な供給が減少する。
【００３９】 体内で治療物質を生産する遺伝子治療の原理には、非病原性のウイルス変異体
であることができる送達体（ベクターと称す）、脂質ベシクル（リポソーム）、
治療用タンパク質または物質をコードするヌクレオチド配列の炭化水素および／
または他の化学的な結合体の使用が挙げられる。これらのベクターは物理的（直
接注入）、化学的、または細胞受容体媒介性の取り込みにより体内細胞内に導入
する。いったん細胞内に取り込まれれば、ヌクレオチド配列が作製され、治療物
質が細胞内（エピソーム）または核内（核）環境に生産される。通常、エピソー
ムは一定期間内だけ所望の生成物を生産するが、核に導入されたヌクレオチド配
列は期間を超えて永久に治療生成物を生産することができる。
【００４０】 このような遺伝子治療法を使用すれば、局所的に（すなわち、細胞内または器
官内）あるいは遠隔部位に有利な効果のある治療生成物が生産される。２つの方
法では共に病原的影響は減少しており、併用すれば、相加的および／相乗的治療
が生じる可能性がある。局所的あるいは遠隔的効果に対し、その有利な効果を強
化するために天然（正常）のまたは変化（突然変異）したヌクレオチド配列が必
要である。後者の変異ヌクレオチド配列は、疾患の病状に関連する特定の細胞型
を標的にする送達のために必要である。アテローム性動脈硬化症では、マクロフ
ァージ（泡沫状細胞）、平滑筋細胞およびアテロームとして既知である病理学的
病巣内の他の各種細胞型への遠隔輸送が必要である。リソソームへの非細胞的送
達も必要であり、その方法のために変異体が入手可能となるか生産される必要が
ある。
【００４１】 脂質除去物質の使用、特にアテローム性動脈硬化症の治療およびアテローム硬
化性プラークの除去のために脂質加水分解性タンパク質およびペプチドを使用す
る方法は、上記遺伝子治療法により達成可能である。そのような方法では、生物
学的に活性なヒト脂質加水分解性タンパク質およびペプチドの供給源が提供され
、生物学的なまたは他の生産システムによって体内に送達される。かかるアプロ
ーチは、内部供給源または生産供給源（生物学的なまたは他の、遺伝子治療用ベ
クター、リポソーム、遺伝子活性化等）によって達成可能であり、それによりあ
る種の体細胞が生物学的に活性なヒト脂質加水分解性タンパク質およびポリペプ
チドを生産するようになる。この供給源によって、例えば細胞内の直接的効果に
よるあるいは細胞から分泌されて体内の他の細胞に送達されることによる局所的
または遠隔的供給が提供され、それらはアテロームプラークにおけると同様であ
る。この方法には、治療物質を体内で合成および／または生産する体細胞遺伝子
治療法が含まれるが、これに限定されない。特に、リソソーム酸性リパーゼの機
能的な脂質加水分解性配列をコードするヌクレオチド配列は、治療効果のある活
性配列を発現させるために結合体(conjugate)、リポソーム、ウイルス（すなわ
ち、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス等、またはウイルス
様ベクター）ベクターに組み込まれる。さらに、生物学的および治療的意義のあ
る機能的構成成分を包含し、体細胞中に存在するヌクレオチド配列を作製して、
治療量にて所要の化合物のを生産、発現、あるいは作製することができる。体内
でこのように生産された治療用の脂質加水分解性タンパク質およびポリペプチド
によって、アテロームプラークまたはアテローム硬化性プラークの他の病巣は減
少または消滅する。
【００４２】 ヒトリソソーム酸性リパーゼの変異体および同族体のヌクレオチドまたはコー
ド配列であって、活性タンパク質／ペプチドの合成および／または生産のために
組み込んだものは、細胞内に一時的または永久に蓄積されて治療的生産生にあた
る。正常な多型変異体、特にリソソーム酸性リパーゼの特異的に突然変異または
修飾された配列は細胞中に組み込まれたベクターの情況から発現され、正常なお
よび／または特異的に修飾された機能が治療効果を強化または促進する。
【００４３】 このような配列は、上記各種ルートにより細胞内に組み込まれた後は、所望の
生物学的に活性なヒトリソソーム酸性リパーゼまたは他の治療用タンパク質を細
胞内にｉｎ ｖｉｖｏで合成することができる。生物学的に活性なヒトリソソー
ム酸性リパーゼまたは他の治療用タンパク質は、いったん細胞内に合成されると
、標的に送達されてリソソーム内のコレステリルエステルおよび／またはトリグ
リセリドを加水分解する。その結果遊離コレステロールがリソソームから放出さ
れ、ＳＲＥＢＰが制御する系を介して内因的なコレステロール合成経路をダウン
レギュレートする。さらに、組み込まれたヌクレオチド配列から生産されたヒト
リソソーム酸性リパーゼまたは他の治療用ヒトタンパク質またはポリペプチドは
、細胞から分泌され、循環系に入り、受容体媒介性エンドサイトーシスまたはそ
の他のアテロームプラークの病理学的に関与する細胞のリソソームへのリソソー
ム送達システムを介して遠隔細胞に取り込まれる。このようなプラークとして、
マクロファージおよび平滑筋細胞が挙げられるが、これに限定されない。これら
細胞内で遊離コレステロールがリソソームから解放されることには、アテローム
プラークを減少および／または消滅させる上で少なくとも２つの有利な効果があ
る。１）遊離コレステロールがリソソームから放出され、内因性マクロファージ
または他の細胞型のコレステロール合成のＳＲＥＢＰにより媒介されるダウンレ
ギュレーションに関与する、および２）遊離コレステロールがリソソームから放
出され、かつコレステロールの逆輸送により細胞を退出する。両効果は、アテロ
ーム病巣の泡沫状マクロファージおよび／または他の細胞のリソソーム内に蓄積
するコレステリルエステルの量を減少するのに有利である。
【００４４】 所要のヌクレオチド配列または治療的発現に必要な他の構成成分を包含する遺
伝子ベクターは、上記のいくつかのルートで体内の細胞内に導入され、また血管
造影装置による送達を使用してアテロームプラーク細胞へ直接導入される。
【００４５】 また、内因性治療により、タンパク質をコードする天然に存在する遺伝子に変
換する遺伝子配列で細胞を形質転換する、あるタンパク質またはポリペプチドの
生産、すなわち内因遺伝子活性化技術を意図する。
【００４６】 外因性治療： アテローム硬化性プラークを直接治療する方法は、プラークおよびその中のマ
クロファージおよび平滑筋細胞にＬＡＬを供給し、その結果としてこれら細胞の
リソソームに貯蔵または蓄積しているコレステリルエステルおよび／またはトリ
グリセリドを消滅および除去することに関する。この結果、コレステロールはリ
ソソームから解放され、泡沫状細胞（マクロファージおよび平滑筋細胞）内での
内因的なコレステロール合成が減少することになる。その正味の効果は、標的病
因部位に直接蓄積しているコレステロール量を減少し、プラークおよびその他の
病巣のサイズをその場で縮小することである。
【００４７】 プラークへの直接的標的と間接的標的とは互いに排他的ではなく、コレステロ
ールの恒常性およびアテローム発生の可能性の低下に対する局所的および全身的
な両方の効果とともに相乗的であり得ることに留意すべきである。
【００４８】 本発明において外因性治療に有用な脂質加水分解性タンパク質またはポリペプ
チドを適切な手段によって投与する。本発明に係る宿主、特に哺乳動物に化合物
を投与する適切な方法は多数あり、複数のルートを使用して特定のタンパク質ま
たはポリペプチドを投与してもよいが、ある特定の投与ルートを経由すれば他の
ルートよりもより迅速でより効果的な反応が得られることを、当業者は理解する
であろう。
【００４９】 吸入投与に適切な配合物には、ジクロロジフルオロメタン、プロパン、窒素等
の許容可能な加圧噴霧剤の中に収納したエーロゾル配合物が挙げられる。活性薬
剤を適切な賦形剤でエーロゾル化してもよい。吸入投与のために、組成物は水、
食塩水等に溶解または分散して液状にすることができ、その濃度は組成物が十分
に溶解しかつ適切な用量が吸入可能な容積で投与される濃度であるのが好ましい
。
【００５０】 経口投与に適切な配合物には、（ａ）化合物の有効量を水または食塩水等の希
釈剤に溶解した溶液、（ｂ）それぞれ固体または顆粒に所定量の有効成分を含有
するカプセル、サッシェ(sachet)、または錠剤、（ｃ）適切な液体中の懸濁液、
（ｄ）適切な乳濁液が挙げられる。錠剤の形態には、ラクトース、マンニトール
、コーンスターチ、ポテトスターチ、微結晶セルロース、アカシア、ゼラチン、
コロイド状二酸化ケイ素、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン
酸マグネシウム、ステアリン酸、および他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、
湿潤剤、保存剤、賦香剤、および薬理学的に適合可能なキャリアの１つまたはそ
れ以上が含まれてもよい。
【００５１】 静脈内注入および腹腔内投与に適切な配合物には、例えば、水性および非水性
の等張滅菌注射用溶液（それらは酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、および配合物を
対象レシピエントの血液と等張にする溶質を含有することができる）、および水
性および非水性の滅菌懸濁液（それらは、沈殿防止剤、可溶化剤、増粘剤、安定
剤、および保存剤を含有することができる）が挙げられる。この配合物は、アン
プル、バイアル等の容器に封入して１回用量でまたは複数回用量で提供すること
ができ、また凍結乾燥状態で保存することができ、これは使用直前に水等の注射
用の滅菌液体キャリア、例えば水を添加するだけでよい。即用の注射用溶液およ
び懸濁液は、上記した種類の滅菌粉末、顆粒、および錠剤で製造することができ
る。
【００５２】 非経口投与も、これを使用する場合には注射で可能である。注入可能なものは
、溶液か懸濁液のような通常の形態で、注入前に溶液か懸濁液にするのに適した
固体状形態で、あるいは乳濁液として製造することができる。非経口投与の最近
改良されたアプローチでは、一定レベルの投与量を維持する徐放または持続放出
システムが使用される。例えば、１９７３年に発行された米国特許第３，７１０
，７９５号(highchi)（これは、参照により本明細書に援用される）を参照され
たい。
【００５３】 事例毎に投与される適切な投与量は、当然、特定のタンパク質またはポリペプ
チドの薬物動態学的特性やその投与の形態と経路、レシピエントの年齢、健康状
態、代謝、体重などの既知の要因および化合物への応答に影響する他の要因、ア
テローム性動脈硬化症の性質と程度、併行している治療の種類、治療回数、所望
の効果に応じて変化する。
【００５４】 アテローム硬化性プラークを有する哺乳動物を治療する好ましい方法は、プラ
ークを減少および除去させるのに適切な脂質加水分解性タンパク質またはポリペ
プチドを、安全かつ有効な量で静脈内注入により導入することである。脂質加水
分解性タンパク質またはポリペプチドの安全かつ有効な量とは、患者のアテロー
ム硬化性プラークのレベルを低下させ、かつ望ましくない副作用は最小に抑える
量と定義される。本発明において、熟練した経験豊かな専門家であれば、適切な
薬用比率についての認識を有するであろう。脂質加水分解性タンパク質またはポ
リペプチドの活性レベルは、投与ユニット数を決定するにあたり、所望の効果を
達成するものと考えなければならない。したがって、脂質加水分解性タンパク質
またはポリペプチドの活性レベルは、適切な投与量の範囲内でアテローム硬化性
プラークを減少させるのに十分な量である。
【００５５】 実験例 研究計画 同齢のマウス群のリソソーム酸性リパーゼ欠損ｌａｌ−／−またはリポタンパ
ク質受容体欠損ｌｄｌｒ−／−マウスについて、処理および未処理のマウスの非
盲検の制御実験として、本研究を計画した。全てのマウスに単回用量のＬＡＬを
使用した。ＬＡＬ投与の３０日後に全てのマウスを屠殺した。３０日間３日毎に
尾の静脈からＬＡＬを静脈内ボーラスとして与えた。群を等しくグループ分けし
て、それぞれ隔日で注入した。ｌａｌ−／−またはｌｄｌｒ−／−のマウスに対
してそれぞれ２．０月齢または２．５月齢から注入を開始した。全体の研究計画
を表１に示す。ｌａｌ−／−マウスは全研究期間中通常の食餌を摂取し、ＬＡＬ
の投与を２月齢から開始した。ｌｄｌｒ−／−マウスは、１．５月間は通常の食
餌で維持され、その後は高コレステロールの食餌（脂肪７．５％；コレステロー
ル１．２５％）で維持された。ｌｄｌｒ−／−マウスが高脂肪／高コレステロー
ルの食餌を３０日間与えられた後に、すなわち２．５月齢からＬＡＬの投与を開
始した。処理グループでのＬＡＬの投与量は、２％ヒト血清アルブミンおよび１
０ｍＭジチオスレイトール（ＤＴＴ）を含む１×ＰＢＳ中に１．４８Ｕ（２１μ
ｇ； ７０μｇ）ＬＡＬとした。対照グループは、２％ＨＳＡと１０ｍＭのＤＴ
Ｔを含む１×ＰＢＳを投与された。最終群はｌａｌ−／−；ｌｄｌｒ−／−の併
合欠損であった。
【００５６】 マウスは高脂肪／高コレステロール食餌を貪欲に消費し、注入に耐えた。静脈
内投与による注射（３２５）は全て成功した。注射開始直前にｌｄｌｒ−／−マ
ウスの一匹が死亡した。ｌａｌ−／−、ｌｄｌｒ−／−マウスで高い死亡率とな
った原因は、粘膜下組織および粘膜固有層がマクロファージの過剰な侵入を受け
て管が封鎖されたことに伴う小腸の過剰な閉塞であった。これら後者のような二
重のホモ接合体からのデータはこの表に含まれていない。
【００５７】 血漿脂質の測定および抗体分析の試料は最初の注入後３２日で用意した。マウ
スは全て最終のＬＡＬ注入後の４８時間で屠殺した。
【００５８】 研究計画
【表１】
【００５９】 ＬＡＬ活性の安定性 ４℃におけるＬＡＬ活性の安定性を３４日間３〜４日毎にモニターした。この
期間中ＬＡＬ活性は比較的安定に残存したが、アッセイ法の厳密な標準化が未だ
確立してない。
【００６０】 一般的方法 動物 マウスには規定のガイドラインに従う保護が与えられた。全ての手続きは、Ch
ildren's Hospital Research Foundation, Cincinnati, OhioのＩＡＣＵＣによ
る事前承認を受けた。ｌａｌ−Ａマウスは１２９ＳｖとＣＦ−１の混合遺伝子を
バックグラウンドとする系統由来であった。ｌｄｌｒ−／−マウスはJackson La
boratoryから購入し、Ｃ５７ＢＬ６／Ｊの群であった。マウスはマイクロ分離に
収容し、１２時間／１２時間それぞれ暗／明とするサイクル下に置いた。水と食
物、通常の食餌またはＨＦＣＤは随意に摂取させた。マウスの遺伝子型は尾部の
ＤＮＡをＰＣＲをベースとするスクリーニングによって決定した。
【００６１】 血漿中脂質の分析 血液は、マウスを２００μｌのトリプル鎮静剤（ケタミン、アセプロマジン、
キシラジン）で麻酔後に下大静脈（ＩＶＣ）から採取した。血液を遠心分離（５
，０００×ｇ、１０分、４℃）して血漿を採取し、−２０℃で保存した。血漿中
の全遊離コレステロールは、ＣＯＤ−ＰＡＰキット(Wako Chemicals)で比色法に
より測定した。血漿中の全トリグリセリドは、Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅｓ／Ｇ
Ｂキット(Boehringer Mannheim)で血漿試料中に測定した。血漿中の全コレステ
ロールは、Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ／ＨＰキット(Boehringer Mannheim)で測定
した。
【００６２】 組織中脂質の分析 全脂質を肝臓、脾臓、小腸からＦｏｌｃｈ法により抽出した（Folch, J., Lee
s, M., Sloane-Stanley, G. H. (1957) 動物組織から全脂質を単離および精製す
る簡便な方法(A simple method for the isolation and purification of total
lipids from animal tissue)。J.Biol.Chem.,226,497-505）。トリグリセリド
濃度は、Biggsが開発した化学分析で測定した。簡単に言えば、クロロホルム中
の標準液および試料の両方を減圧下蒸発させた。脂質を後続の試薬に順番に、す
なわちイソプロパノール０．５ｍｌ、水：イソプロパノール：４０ｍＭ硫酸（０
．５：３．０：１．０）４．５ｍｌ、およびヘプタン２．０ｍｌに再懸濁し、各
工程で激しく攪拌して混合した。試験管を放置して二相に分離させた（〜５分）
。新しい試験管にフロリジル８０ｍｇを入れ、各試料からの上相１．０ｍｌをフ
ロリジル入りの試験管に移し、攪拌混合した。この上相０．２ｍｌを新たな試験
管に移し、２８ｍＭのナトリウムアルコキシド（２．０ｍｌ）を加え、入念に混
合した。試験管を６０℃で５分間インキュベートした。メタ過ヨウ素酸ナトリウ
ム（３ｍＭ， １ｍｌ）を各試験管に加え、よく混合した。試験管を放置して４
５分間酸化させた。最後に、７３ｍＭアセチルアセトン１．０ｍｌを各試験管に
加え、６０℃で２０分間インキュベートした。試験管を室温にまで冷却し（〜２
５分）、ＢｅｃｋｍａｎＤＵ６４０分光光度計で４１０ｎｍにて読取った。
【００６３】 ｏ−フタルアルデヒドを使用して全組織コレステロール濃度を測定した。コレ
ステロール標準液およびＦｏｌｃｈ抽出試料を窒素下で蒸発させた。ｏ−フタル
アルデヒド（３ｍｌ、Sigma）をコレステロール標準試料および組織試料の各々
に加え、混合した。濃硫酸（１．５ｍｌ）をゆっくり加え、混合し、５〜１０分
冷却し、ＢｅｃｋｍａｎＤＵ６４０分光光度計で５５０ｎｍにて読取った。
【００６４】 ウエスタンブロット分析およびＬＡＬ活性のアッセイ： 上記抗ＬＡＬ抗血清でイムノブロットを行った。ＬＡＬ活性を蛍光原基質４−
ＭＵ−オレート（４−ＭＵＯ）で評価した。アッセイは全て二回繰返した。使用
した時間内ではアッセイは一次的であり、基質の切断は１０％未満であった。
【００６５】 組織学的分析 肝臓、脾臓、腸、副腎、腎臓、心臓、肺臓、胸腺、膵臓、脳の光学顕微鏡検査
を行った。切片をヘマトキシリン／エオシン（パラフィンで包理）またはオイル
レッド−Ｏ（ＯＲＯ）（凍結切片）で染色して光学顕微鏡分析を行った。
【００６６】 免疫組織化学的染色 パラフィンで包理した肝臓切片での免疫組織化学的分析をウサギの抗ＬＡＬ抗
体で行った。０．５％過酸化水素を含むメタノール中で１０分間インキュベート
することにより、内因性のペルオキシダーゼ活性を飽和した。
【００６７】 一次抗体（１：２００）を４０℃で一夜インキュベートした。切片を１×ＰＢ
Ｓで３回（１回５分）洗浄し、二次抗体としてのアルカリホスファターゼ結合Ｉ
ｇＧと共に３０分間室温でインキュベートし、１×ＰＢＳで５分間洗浄した。Ｖ
ＥＣＴＡＳＴＡＴＩＮ ＡＢＣ−ＡＰキット（Vector）およびＮｕｃｌｅａｒ
Ｆａｓｔ Ｒｅｄで染色したカウンターを使用してシグナルを検出した。
【００６８】 Ｊ７７４ＥおよびＪ７７４ＡでのＬＡＬ取込みの研究 Ｉマクロファージ培養物：Ｊ７７４ＥおよびＪ７７４Ａ．１細胞を、１０％ウ
シ胎児血清、ペニシリン、ストレプトマイシンを補充した６０μＭの６−チオグ
アニン含有ＤＭＥＭ培地またはＤＭＥＭ培地に保存した（３７℃、５％ＣＯ2）
。取込み研究にあたり、ＬＡＬまたはＣｅｒｅｄａｓｅを加える一日前に細胞を
各ウエル当たり２×１０5個植付けた。インキュベート後の指定時間に細胞を１
×ＰＢＳで２回洗浄し、ゴム冠ポリスマンで集め、室温で遠心分離（１２，００
０ｒｐｍ、１分）した。１％タウロコール酸塩／１％トリトンＸ−１００で細胞
を溶解して細胞内タンパク質を抽出し、凍結／解凍（ドライアイスおよび３７℃
水浴）を５回行い、４℃で遠心分離（１２，０００ｒｐｍ、１０分）した。タン
パク質抽出物をウエスタンブロットで分析した。
【００６９】 免疫蛍光染色のために、細胞（１．５×１０5）をチェンバースライドに植付
け、ＬＡＬと共に５時間、１８時間、または２４時間インキュベートし、ＰＢＳ
で２回洗浄し、２％パラホルムアルデヒドで１時間固定させた。免疫蛍光染色を
行った。
【００７０】 結果 １）ＬＡＬ処理後のｌａｌ−／−マウスの肝臓、脾臓、および小腸における脂
質貯蔵の減少
【００７１】 ａ．表現型上のおよび肉眼的病理上の変化（図２） ｌａｌ−／−マウスではＬＡＬ処理により、様々な器官における脂質貯蔵の表
現型が有意に矯正される結果となった。３月齢で未処理のｌａｌ−／−マウスで
は黄色／白色のクリーム様の色が肝臓に生じ、肝脾腫大が相当に存在した。比較
すると、ＬＡＬ処理マウスの肝臓および脾臓は、はるかに正常色であった。同月
齢の対照マウスの正常肝は体重の約５％であったのに対し、未処理ｌａｌ−／−
マウスでは１４％であった。ＬＡＬ投与により肝臓重量は約３０％（ｐ＝０．０
０２９）減少した。未処理および処理ｌａｌ−／−マウスにおける脾臓重量も同
様であった（ｐ＝０．５０４４）。しかし、脾臓の色は処理グループにおいては
ほぼ正常色まで回復した。未処理ｌａｌ−／−マウスの小腸は、十二指腸では黄
色であり、空腸でクリーム様白色であった。処理グループでは、小腸は部分的に
正常色に回復した。
【００７２】 ｂ．組織学的評価： 未処理および処理マウスの肝臓、脾臓、小腸をＨ＆ＥまたはオイルレッドＯで
染色したところ、明瞭な差が現れた。ＬＡＬ処理ｌａｌ−／−マウスの肝臓では
脂質が充満したクッパー細胞のサイズと個数が減少した（図３Ａおよび３Ｂを参
照）。処理グループでは、肝細胞の脂質貯蔵は未処理ｌａｌ−／−マウスのクッ
パー細胞より少なく、この肝細胞貯蔵に変化は現れなかった。中性脂質用にオイ
ルレッドＯを使用したところ、処理および未処理のマウスの肝臓の間では有意な
差が明らかとなった（図３ＣおよびＤを参照）。処理グループの脾臓では、未処
理グループの脾臓と比較すると脂質貯蔵細胞が減少した。ＬＡＬ処理および未処
理マウスをオイルレッドＯで染色したところ、小腸においてかなりの差が現れた
。未処理マウスの小腸切片には、オイルレッドＯに染まった粘膜固有層の細胞（
マクロファージ）が充満しており、反対に処理マウスの比較切片ではオイルレッ
ドＯ染色がほぼ完全に陰性であった。ｌａｌ−／−マウスの大動脈弓、大動脈底
および弁ならびに冠状動脈は、処理も未処理も研究中基本的には正常であった。
【００７３】 ｃ．免疫組織化学： 抗ＬＡＬ（大腸菌産生の組換えｈＬＡＬ）で肝臓の免疫組織学的分析を行った
ところ、洞様毛細血管の管壁細胞は殆ど暗色（陽性）に染色した。貯蔵細胞の中
に検出することができた抗原があったが、このシグナルは低レベルであった。そ
の理由はこれらの細胞が構成する希釈空間が非常に大きかったからである。肝臓
試料を注射３０分後に採取した。ｌａｌ−／−マウスでは、注射しない場合には
ｌａｌが検出されなかった。
【００７４】 ｄ．生化学的所見： 肝臓、脾臓、および小腸からの組織中コレステロール（遊離およびエステル化
体の両方）およびトリグリセリドは化学分析によって測定した。同月齢の野生型
マウスと比較すると、ｌａｌ−／−マウスではコレステリルエステルおよびトリ
グリセリドがいくつかの組織において上昇していた。３．５月齢のマウスで器官
毎の総コレステリルエステルの平均値を野生型のものと比較すると、肝臓では３
１倍、脾臓では１９倍に増加していた。このようなマウスにＬＡＬを投与すると
、総コレステロールが全肝臓では４７％減少（２６７．２２±８．２２ｍｇ対１
４４．２３±７．９９ｍｇ、ｐ＝０．０００３、ｎ＝３）し、全脾臓では６９％
減少（８．７３±０．４３ｍｇ対２．６３±０．５０ｍｇ、ｐ＝０．００８、ｎ
＝３）する結果となった。同様にトリグリセリドの減少も観察された。すなわち
、全肝臓では５８％減少（２６．５２±１７．９３ｍｇ対３９．７９±６．３８
ｍｇ、ｐ＝０．０４７、ｎ＝４）し、全脾臓では４５％減少（８．２３±０．６
８ｍｇ対４．５５±１．２６ｍｇ、ｐ＝０．０４２、ｎ＝４）した。小腸ではコ
レステロール濃度の変化は観察されなかったが（ｐ＝０．６７）、処理グループ
のトリグリセリド濃度が６５％減少（４９．５２±２．４０μｇ／ｍｇ対１７．
０９±４．８μｇ／ｍｇ、ｐ＝０．０４２、ｎ＝４）した。
【００７５】 ｅ．要約 ｌａｌ−／−マウスをＬＡＬ（３０日間に１０回注射、１．４８Ｕ／用量）で
限定的に処理した結果、処理マウスでは、コレステロールおよびトリグリセリド
のレベルが肉眼的、組織学的、および生化学的に矯正された。
【００７６】 ２．ｌａｌ−／−およびｌｄｌｒ−／−マウスにおける血漿化学およびレベル 処理または未処理のｌａｌ−／−またはｌｄｌｒ−／−マウスにおいて血漿中
グルコースレベルに差は観察されなかった。ただしｌｄｌｒ−／−マウスでは野
生型またはｌａｌ−／−マウスよりも血漿中グルコースレベルが高かった。ｌａ
ｌ−／−およびｌｄｌｒ−／−マウスでは、野生型の対照と比較して血漿中の非
エステル化脂肪酸（ＮＥＦＡ）レベルが増加していた（それぞれ１６２％および
２２７％）。ＬＡＬを投与したところ、ＮＥＦＡがｌａｌ−／−マウスでは３２
．６％増加、またｌｄｌｒ−／−マウスでは２４．５％増加する結果となった。
血漿中トリグリセリドレベルは、処理したｌａｌ−／−マウスで減少したが、ｌ
ｄｌｒ−／−マウスでは変化しなかった。ＨＦＣＤによりｌｄｌｒ−／−マウス
では高コレステロール血症が起きた。野生型マウスと比較すると、血漿中の遊離
コレステロール濃度が２２倍増加し、血漿中のコレステリルエステル濃度が１３
．８倍増加した。ＬＡＬ処理したｌｄｌｒ−／−マウスでは血漿中の遊離コレス
テロールが１８．２％（ｐ＝０．０８９４）減少し、コレステリルエステルが２
６．７％（ｐ＝０．００２５）減少した。処理したｌａｌ−／−マウスでは遊離
コレステロールおよびコレステロールエステルレベルは変化しなかった。
【００７７】 ３．ｌｄｌｒ−／−マウスへのＬＡＬ投与の組織学的および生化学的効果 ａ．肉眼的な解剖学的および組織学的研究 これらマウスの内器官官の外観は正常であった。ｌｄｌｒ−／−マウスから大
動脈弓のホールマウントを作成し、透視法によって検査した。３．５月齢の未処
理ｌｄｌｒ−／−マウスではすべて（３／３）、大動脈弓の病巣が広大であり、
主要な血管、すなちち腕頭動脈が離脱していた。定量的には測定していないが、
ＬＡＬを投与しても処理したｌｄｌｒ−／−マウスにおいてはこれら病巣に対す
る効果が外観されなかった。
【００７８】 冠状動脈での病巣を評価するために、処理および未処理のｌｄｌｒ−／−マウ
スの心臓を逐次切片化して分析した。４匹のｌｄｌｒ−／−マウスを未処理とし
た。この中の一匹はＬＡＬ投与を（２．５月齢から）開始する直前に死亡した。
８匹のマウスがＬＡＬを摂取し、全て全研究期間中生存した。結果を表２にまと
めてある。未処理のｌｄｌｒ−／−マウス全てにおいては、大動脈弁および冠状
動脈口に重篤なプラーク病巣があった（図４ＡおよびＢを参照）。処理グループ
で検査した大動脈弁では、２つが軽度ないし中度（＋＋）、１つが極めて軽度（
＋）、および２つが泡沫状細胞の蓄積なしであった（図４Ｃを参照）。３匹の処
理マウスからの大動脈弁は、ホールマウントでの大動脈弓研究のために既に除外
していたので、組織学的検査はしなかった。
【００７９】 未処理グループでの冠状動脈病巣は広大で多病巣性であった。全てにおいて、
マクロファージが冠状動脈口にかなり浸入し、プラークが冠状動脈のかなりの距
離にまで拡大していた。また、個別に独立しながら点々と散在するプラークが冠
状動脈の最初の３分の１全体に見られた。一例において左冠状動脈の主要な枝が
、コレステロール結晶を内包し炎症性の外観を呈する重度の病巣によって完全に
抹消されていた。相対的に、処理したｌｄｌｒ−／−マウスの７／８では、冠状
動脈血管が正常であった（表２）。ＬＡＬ処理したｌｄｌｒ−／−マウスの１匹
では小さな筋肉内冠状血管に泡沫状細胞があった。このマウスの他の冠状動脈は
正常であった。この特別なマウス（ＲＡ１）では、大動脈弁の病巣は軽度ないし
中度であった。
【００８０】 ｌｄｌｒ−／−マウスでの冠状動脈病巣についてさらに定量的な分析をするた
めに、心臓の逐次的なＨ＆Ｅ切片（全＝２１０、１０μｍ）および未処理マウス
（ＲＣ２）と処理マウス（ＲＢ２）で検査した。ＲＣ２では冠状動脈に多数のプ
ラークができたのに対し、ＲＢ２では冠状動脈は完全に正常であった。
【００８１】 ｌｄｌｒ−／−マウスの大動脈弁および冠状動脈へのＬＡＬの効果
【表２】
【００８２】 これらの結果から、大動脈弁および冠状動脈における泡沫状細胞および進行性
のアテローム病巣の出現に対してＬＡＬの単一かつ一定の用量レベルが主要な選
択的効果を呈することが示される。
【００８３】 ｂ．生化学的研究： 処理および未処理のｌｄｌｒ−／−グループにおける血漿脂質の結果は上記し
てある。未処理のｌｄｌｒ−／−グループでは肝臓および膵臓のコレステロール
およびトリグリセリドレベルは野生型マウスより増加した。肝臓（ｐ＝０．８８
１６）および脾臓（ｐ＝０．１０６１）における総コレステロールあるいは小腸
（０．０９２７）におけるコレステロール濃度に対しては有意な効果が観察され
なかった。トリグリセリドは、全肝臓で６５．１％（９１．５４±１．９８ｍｇ
対５９．６０±６．８６ｍｇ、ｐ＝０．００２）減少し、全膵臓で５３．３％（
３．２４±０．３９ｍｇ対１．７３±０．３３ｍｇ、ｐ＝０．０１８３）減少し
た。小腸でのトリグリセリド濃度も４３％（４１．７４±３．６９μｇ／ｍｇ対
２３．７９±２．０８μｇ／ｍｇ、ｐ＝０．００１）減少した。
【００８４】 ｃ．抗体研究： 各マウスの各表現型から屠殺時に血清を採取しウエスタン分析に使用した。Ｐ
ｒｅｐ＃３（２．６５ｎｇ／ウエル）を抗原として使用した。血清は１：１００
の希釈倍率で使用した。ＬＡＬを１０回注射を受けたマウスは全てウエスタンシ
グナルが陽性であった。ＬＡＬと一緒に移動した陽性バンドはウサギ抗ＬＡＬ抗
体で検出した。あるマウスの血清では、Ｐｒｅｐ＃３を使用して陽性シグナルが
１：１００から１：６，４００希釈で得られた。さらに研究を行い、ＬＡＬまた
は大腸菌中に産生した非グリコシル化ＬＡＬに対するこれらマウス血清の反応性
を測定した。抗原２．６５ｎｇを使用すると、非グリコシル化ＬＡＬでは、一つ
を除いて全てのマウス血清では、シグナルは極めて低いものから非存在のものま
であった。これらの結果から、これら抗体の特異性はそれらの配座においてＬＡ
Ｌタンパク質よりもオリゴサッカライドへの指向に基づくことが示される。
【００８５】 データの要約 ｌｄｌｒ−／−でのデータから、大動脈弁および冠状動脈におけるプラークお
よび泡沫状細胞の存在に対してＬＡＬ投与が明瞭かつ劇的な効果を呈することが
示される。未処理集団では病巣が非常に重篤となったのに比較すると、処理マウ
スでは全ての病巣が大きく縮小または非存在であった。肝臓、脾臓、小腸ではト
リグリセリドが変化していたことから、これらの器官におけるＬＡＬの効果は直
接的であることが示される。
【００８６】 参考文献 １）Du, H.; Witte, D.F.; Grabowski, G. A. 1996, Journal of Lipid Resea
rch, vol. 37, pp. 937−949. ２）Hua, X., Yokoyama, C., Wu, J., Briggs, M.R., Brown, M.S., Goldstei
n, J.L., and Wang, X. 1993, Proc. Natl. Acad. Sci., vol. 90, pp. 11603-1
1607. ３）Brown, M.S. and Goldstein, J.L. 1997, Cell, vol. 89, pp. 331-340. ４）Goldstein, J.L. and Brown, M.S. 1990, Nature, vol. 343, pp. 425-43
0. ５）Wang, X., Sato, R., Brown, M.S., Hua, X., and Goldstein, J.L. 1994
, Cell, vol. 77, pp. 53-62. ６）Goldstein, J.L., Basu, S., and Brown, M.S. 1983, Met. in. Enzymolo
gy, vol. 8, pp. 241-260. ７）Goldstein, J.L., Dana, S.E., Faust, J.R., Beaudet, A.L., and Brown
, M.S. 1975, J: Biol. Chem, vol. 250, pp. 8487-8495. ８）Kim, J.B. and Spiegelman, B.M. 1996, Genes.Dev. vol. 10, pp. 1096-
1107. ９）Encsson, J., Jackson, S.M., Lee, B.C., and Edwards, P.A. 1996, Pro
c. Natl. Acad. Sci. USA vol. 93, pp. 945-950. 10）Du, H., Witte, D.P., and Grabowski, G.A. 1996, J.Lipid Res. vol. 3
7, pp. 937-949. 11）Osbome, T.F. and Rosenfeld, J.M. 1998, Curr.Opin.Lipidol. vol. 9,
pp. 137-140. 12）Sakai, J., Duncan, B.A., Rawson, R.B., Hua, X., Brown, M.S., and G
oldstein, J.L. 1996, Cell, vol. 85, pp. 1037-1046 13）Sakai, J., Nohturfft,A., Cheng, D., Ho, Y.K., Brown, M.S., and Gol
dstein, J. L. 1997, J.Bio. Chem., vol. 272, pp. 20213-20221. 14）Yokoyama, C., Wang, X., Briggs, M.R., Admon, A., Wu, J., Hua, X.,
Goldstein, J.L., and Brown, M.S. 1993, Cell, vol. 75, pp. 187-197. 15) Hua, X., Wu, J., Goldstein, U., Browvn, M.S., and Hobbs, H.H. 1995
, Genomics, vol. 25, pp. 667-673. 16) Sato, R., Yang, J., Wang, X., Evans, M.J., Ho, Y.K, Goldstein, J.L
., and Brown, M.S. 1994, J. Biol. Chem., vol. 269, pp. 17267-17273. 17) Sakai, J., Nohturfft, A., Cheng, D., Ho, Y.K., Brown, M.S., and Go
ldstein, J.L. 1997, J. Bio. Chem. vol. 272, pp. 20213-20221. 18) Fielding, C.J. and Fielding, P.E. 1997, J. Lipid. Res. vol. 38, pp
. 1503-1521. 19) Dietschy, J. M. 1990, Hospital Practice, pp. 67-78. 20) Rigotti, A., Trigaffi, B.L., Penman, M., Raybum, H., Herz, J., and
Krieger, M. 1997, Proc.Natl.Acad. Sci. USA, vol. 94, pp. 12610-12615. 21) Temel, R.E., Trigatti, B., DeMattos, R.B., Azhar, S., Krieger, M.,
and Williams, D.L. 1997, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, vol. 94, pp. 13600-13
605. 22) Jian, B., Llera-Moyer, M., Ji, Y., Wang, N., Phillips, M.C., Swane
y, J.B., Tall, A.R., and Rothblat, G.H. 1998, J.Bio. Chem., vol. 273, pp
. 5599-5606. 23) Johnson, M.S.C., Svensson, P.A., Helou, K., Billig, H., Levan, G.,
Carlsson, L.M.S., and Carlsson, B. 1998, Endocrinology, vol. 139, pp. 7
2-80. 24) Fluiter, K., Westhuijzen, D.R., and Berkel, T.J.C. 1998, J.Bio.Che
m., vol. 273, pp. 8434-8438. 25) Id. at 21. 26) Id. at 22. 27) Somerharju, P. and Lusa, S. 1998, Biochem. Biophy. Acta., Vol. 138
9, pp.112-122. 28) Assman, G. and Seedorf, U. 1995, The Metabolic and Molecular Bases
of Inherited Disease, pp. 2563-2587. 29) Sheriff, S. and Du, H. 1995, Am.J.Hum.Genet., vol. 57, page 1017A. 30) Sheriff, S., Du, H., Grabowski, G. A. 1995, J. Biol. Chem., vol. 2
70, pp. 27766-27772. 31) Amies, D., Merkel, M., Eckerskorn, C., Greten, H. 1994, Eur. J. Bi
ochem., vol. 219, pp.905-914. 32) Neufeld, E. F., Sando, G. N., Garvin, A. J., Rowl, W. 1977, J. Sup
ramol. Struct., vol. 6, pp. 95-101. 33) Sando, G. N., Henke, V. L. 1982, J. Lipid Res., vol. 23, pp. 114-1
23. 34) Anderson, R.A., and Sando, G.N. 1991, J. Biol. Chem., vol. 266, pp
. 22479-22484. 35) Komaromy, M. C., Schotz, M. C. 1987, Proc.Natl.Acad.Sci. USA, vol.
84, pp. 1526-1530. 36) Lowe, M. E., Rosenblum, J. L. 1989, J. Biol. Chem., vol. 264, pp.
20042-20048. 37) Shimida, Y., Sugihara, A., Tominaga, Y., Tsunaawu, S. 1989, J. Bio
chem. (Tokyo), vol. 106, pp. 383-388.
【図面の簡単な説明】
【図１】 細胞代謝へのコレステロールおよび脂肪酸取り込みに関する経路
を示す、哺乳動物細胞の概略図。２つの経路：１）リソソーム中のコレステリル
エステルおよびトリグリセリドのＬＡＬ切断により調節されるように、リソソー
ム外の細胞コレステロールレベルを感知するＳＲＥＢＰ１および２系により制御
されるコレステロールおよび脂肪酸の内因性合成、２）コレステリルエステルお
よびトリグリセリドが細胞の内部のリソソームへの送達のための受容体媒介性エ
ンドサイトーシスを介して細胞に侵入する外因性経路（例としてＬＤＬ−ＣＥと
して示す）を示す。ＬＤＬ受容体および幾つかの他のスカベンジャー受容体が、
この経路に関与する。ＬＡＬは、この経路を介して細胞に侵入するコレステロー
ルおよび脂肪酸の、リソソームからの出口を制御する。ＬＡＬまたは他の治療用
化合物により遊離コレステロールおよび／または脂肪酸が解放されると、ＳＲＥ
ＢＰ感知システムを介した細胞中のコレステロールおよびＦＦＡ合成を減少する
ための直接的な効果を導き出す。細胞コレステロールおよび／またはＦＦＡの減
少は、この直接的な効果により、および／または細胞膜を通った細胞からのコレ
ステロール輸送による細胞からの遊離のコレステロールおよび／もしくはＦＦＡ
の除去により達成され得る。 細胞構成成分の略記は、以下のようである：ＰＭ＝細胞膜、ＥＲ＝小胞体、Ｔ
ＧＮ＝トランスゴルジネットワーク、ＭＶＢ＝多小胞体、ＥＮ＝エンドソーム、
ＦＣ＝遊離コレステロール、ＦＦＡ＝遊離脂肪酸、ＣＹＴＯ ＣＥ＝再エステル
化またはエステル化非リソソームコレステリルエステル（ＣＥ）、ＮＰＣ１＝ニ
ーマン−ピックＣ１欠陥部位、ＬＡＬ＝リソソーム酸性リパーゼ。
【図２】 ＬＡＬ未処理（ＬＣ２）および処理（ＬＡ２およびＬＡ４）ｌａ
ｌ−／−マウスの典型的な肉眼的病態である：［上］典型的な（ＬＣ２）未処理
ｌａｌ−／−マウスにおける黄色脂肪浸透肝臓を示す腹部図。処理（ＬＡ２およ
びＬＡ４）ｌａ−／−マウスにおいては、肝臓は、本質的に正常な色を有してい
た。［中央］ＬＣ２、ＬＡ４およびＬＡ２マウス由来の肝臓（上）、脾臓（中央
）および腎臓（下）の肉眼的外観。未処理マウスの脾臓は、処理マウスの脾臓よ
りも明るい。［下］未処理ＬＣ２ならびに処理ＬＡ２およびＬＡ２マウス由来の
小腸の肉眼的外観。未処理マウス（ＬＣ２）の小腸は、より明るい外観を与え、
コレステロールおよびトリグリセリドの堆積を示す。このことは、処理マウス（
ＬＡ４およびＬＡ２）に関して示したより暗い腸と対照的である。
【図３】 ＬＡＬ未処理（ＬＣ２）および処理（ＬＡ２）ｌａｌ−／−マウ
ス由来の肝臓、脾臓および小腸の光学顕微鏡検査。肝臓（３Ａおよび３Ｂ）、脾
臓（３Ｅおよび３Ｆ）からのＨ＆Ｅ染色切片。肝臓からの染色凍結切片（３Ｃお
よび３Ｄ）。Ａ、Ｃ、Ｅ（左側）は、未処理のｌａｌ−／−マウス由来のもので
ある。Ｂ、ＤおよびＦ（右側）は、ＬＡＬ処理マウス由来のものである。処理マ
ウスは、未処理マウスと比べて、実質的に減少したマクロファージ貯蔵細胞数を
有していた。染色は、未処理マウス由来の肝臓における中性脂肪の大量の蓄積お
よび肝臓においてほぼなくなるまでのそれらの大量の減少を示す。
【図４】 Ｈ＆Ｅで染色した、ＬＡＬ処理ありまたはなしのｌｄｌｒ−／−
マウスの大動脈弁からの代表的切片。（ＡおよびＢ）２ヶ月間のＨＦＣＤに関す
る３．５ヶ月齢のｌｄｌｒ−／−マウスにおける典型的な泡沫状細胞リッチな脂
肪縞。アステリスク（＊）は、崩壊した内側層と並ぶ壊死ゾーンを示す。矢印は
、コレステロール裂／結晶を指す。右側の矢印（コレステロール裂／結晶）は、
動脈口の冠状動脈を示す。（Ｃ）ＬＡＬ処理マウスにおける大動脈弁の脂肪縞に
おける減少した泡沫細胞。これは、最も複雑なＬＡＬ処理マウス由来のものであ
った。（Ｄ）ＬＡＬ処理マウス由来の正常な大動脈弁の典型例（３／５）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 9/10 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｎ 9/20 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ 15/09 Ａ６１Ｋ 37/54 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 グラボウスキー、グレゴリー・エイ アメリカ合衆国、オハイオ州、シンシナテ ィ、ロックウッド・ドライブ 1121 (72)発明者 デュ、ホン アメリカ合衆国、オハイオ州、シンシナテ ィ、ウィンストン・コート 1290 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA11 CA02 DA02 EA02 EA04 GA11 HA17 4B050 CC03 CC04 EE10 LL01 4C084 AA02 AA03 AA13 BA01 BA02 BA22 BA34 BA44 DC22 MA52 MA55 MA56 MA66 NA14 ZA452 ZC332 ZC412 4C087 AA01 AA02 BC83 CA12 MA52 MA55 MA56 MA66 NA14 ZA45 ZC33 ZC41

Claims (68)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 哺乳動物におけるアテローム硬化性プラークを減少させる方
    法であって、前記哺乳動物におけるアテローム硬化性プラークの量の減少を達成
    するのに十分な、安全かつ有効な量の脂質加水分解性タンパク質またはポリペプ
    チド、あるいはそれらの混合物を、前記哺乳動物に投与することを含む方法。
  2. 【請求項２】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、リソ
    ソームへの取り込みのための受容体部位を標的にする、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 前記受容体部位は、オリゴ糖認識受容体およびペプチド配列
    認識受容体からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
  4. 【請求項４】 前記受容体部位は、マンノース受容体部位である、請求項３
    に記載の方法。
  5. 【請求項５】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、タン
    パク質リソソーム酸性リパーゼである、請求項２に記載の方法。
  6. 【請求項６】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、前記
    タンパク質リソソーム酸性リパーゼに対して少なくとも８５％の配列相同性を示
    すタンパク質である、請求項２に記載の方法。
  7. 【請求項７】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、リソ
    ソーム酸性リパーゼとして類似した生物活性を保有するポリペプチドである、請
    求項２に記載の方法。
  8. 【請求項８】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、Ｓｅ
    ｒ153残基を有するタンパク質である、請求項２に記載の方法。
  9. 【請求項９】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、アミ
    ノ酸Ｐｒｏ（−６）をＴｈｒへ、かつＧｌｙ２をＡｒｇへ置換したリソソーム酸
    性リパーゼの多型変異体タンパク質である、請求項２に記載の方法。
  10. 【請求項１０】 前記リソソーム酸性リパーゼは、６つ未満のＮ結合アセチ
    ルグリコシル化残基を有する、請求項５に記載の方法。
  11. 【請求項１１】 前記リソソーム酸性リパーゼは、６つより多いＮ結合アセ
    チルグルコシル化残基を有する、請求項５に記載の方法。
  12. 【請求項１２】 前記Ｎ−アセチルグリコシル化残基は、オリゴ糖末端化さ
    れている、請求項１０に記載の方法。
  13. 【請求項１３】 前記オリゴ糖末端性残基は、マンノース残基である、請求
    項１２に記載の方法。
  14. 【請求項１４】 前記Ｎ−アセチルグリコシル化残基は、オリゴ糖末端化さ
    れている、請求項１１に記載の方法。
  15. 【請求項１５】 前記オリゴ糖末端性残基は、マンノース残基である、請求
    項１４に記載の方法。
  16. 【請求項１６】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、外
    因的に生産される、請求項５、６、７、８または９に記載の方法。
  17. 【請求項１７】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、薬
    学的に許容可能なキャリア中に存在し、経口的に、非経口的に、注射により、静
    脈内注入により、吸入により、調節投与量放出により、または腹腔内投与により
    投与される、請求項１６に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、静
    脈内注入により投与される、請求項１７に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症の治療方法であ
    って、前記症状を治療するのに十分な、安全かつ有効な量の脂質加水分解性タン
    パク質またはポリペプチド、あるいはそれらの混合物を、前記哺乳動物に投与す
    ることを含む方法。
  20. 【請求項２０】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、リ
    ソソームへの取り込みのための受容体部位を標的にする、請求項１９に記載の方
    法。
  21. 【請求項２１】 前記受容体部位は、オリゴ糖認識受容体およびペプチド配
    列認識受容体からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。
  22. 【請求項２２】 前記受容体部位は、マンノース受容体部位である、請求項
    ２１に記載の方法。
  23. 【請求項２３】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、タ
    ンパク質リソソーム酸性リパーゼである、請求項２０に記載の方法。
  24. 【請求項２４】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、前
    記タンパク質リソソーム酸性リパーゼに対して少なくとも８５％の配列相同性を
    示すタンパク質である、請求項２０に記載の方法。
  25. 【請求項２５】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、リ
    ソソーム酸性リパーゼとして類似した生物活性を保有するポリペプチドである、
    請求項２０に記載の方法。
  26. 【請求項２６】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、Ｓ
    ｅｒ153残基を有するタンパク質である、請求項２０に記載の方法。
  27. 【請求項２７】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、ア
    ミノ酸Ｐｒｏ（−６）をＴｈｒへ、かつＧｌｙ２をＡｒｇへ置換したリソソーム
    酸性リパーゼの多型変異体タンパク質である、請求項２０に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 前記リソソーム酸性リパーゼは、６つ未満のＮ結合アセチ
    ルグリコシル化残基を有する、請求項２３に記載の方法。
  29. 【請求項２９】 前記リソソーム酸性リパーゼは、６つより多いＮ結合アセ
    チルグルコシル化残基を有する、請求項２３に記載の方法。
  30. 【請求項３０】 前記Ｎ−アセチルグリコシル化残基は、オリゴ糖末端化さ
    れている、請求項２８に記載の方法。
  31. 【請求項３１】 前記オリゴ糖末端性残基は、マンノース残基である、請求
    項３０に記載の方法。
  32. 【請求項３２】 前記Ｎ−アセチルグリコシル化残基は、オリゴ糖末端化さ
    れている、請求項２９に記載の方法。
  33. 【請求項３３】 前記オリゴ糖末端性残基は、マンノース残基である、請求
    項３２に記載の方法。
  34. 【請求項３４】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、外
    因的に生産される、請求項２３、２４、２５、２６または２７に記載の方法。
  35. 【請求項３５】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、薬
    学的に許容可能なキャリア中に存在し、経口的に、非経口的に、注射により、静
    脈内注入により、吸入により、調節投与量放出により、または腹腔内投与により
    投与される、請求項３４に記載の方法。
  36. 【請求項３６】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、静
    脈内注入により投与される、請求項３５に記載の方法。
  37. 【請求項３７】 安全かつ有効な量の脂質加水分解性タンパク質またはポリ
    ペプチド、および薬学的に許容可能なキャリアを含む組成物。
  38. 【請求項３８】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、タ
    ンパク質リソソーム酸性リパーゼである、請求項３７に記載の方法。
  39. 【請求項３９】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、リ
    ソソーム酸性リパーゼに対して少なくとも８５％の配列相同性を示すタンパク質
    である、請求項３７に記載の方法。
  40. 【請求項４０】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、リ
    ソソーム酸性リパーゼとして類似した生物活性を保有するポリペプチドである、
    請求項３７に記載の方法。
  41. 【請求項４１】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、Ｓ
    ｅｒ153残基を有するタンパク質である、請求項３７に記載の方法。
  42. 【請求項４２】 前記脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドは、ア
    ミノ酸Ｐｒｏ（−６）をＴｈｒへ、かつＧｌｙ２をＡｒｇへ置換したリソソーム
    酸性リパーゼの多型変異体タンパク質である、請求項３７に記載の方法。
  43. 【請求項４３】 前記リソソーム酸性リパーゼは、６つ未満のＮ結合アセチ
    ルグリコシル化残基を有する、請求項３８に記載の方法。
  44. 【請求項４４】 前記リソソーム酸性リパーゼは、６つより多いＮ結合アセ
    チルグルコシル化残基を有する、請求項３８に記載の方法。
  45. 【請求項４５】 前記Ｎ−アセチルグリコシル化残基は、オリゴ糖末端化さ
    れている、請求項４３に記載の方法。
  46. 【請求項４６】 前記オリゴ糖末端性残基は、マンノース残基である、請求
    項４５に記載の方法。
  47. 【請求項４７】 前記Ｎ−アセチルグリコシル化残基は、オリゴ糖末端化さ
    れている、請求項４４に記載の方法。
  48. 【請求項４８】 前記オリゴ糖末端性残基は、マンノース残基である、請求
    項４７に記載の方法。
  49. 【請求項４９】 薬学的に許容可能なキャリア中に、安全かつ有効な量のリ
    ソソーム酸性リパーゼを含む組成物。
  50. 【請求項５０】 薬学的に許容可能なキャリア中に、安全かつ有効な量の、
    リソソーム酸性リパーゼに対して少なくとも８５％の配列相同性を示す脂質加水
    分解性タンパク質を含む組成物。
  51. 【請求項５１】 生物学的に活性な脂質加水分解性タンパク質またはポリペ
    プチドを欠乏している哺乳動物の細胞に、生物学的に活性な脂質加水分解性タン
    パク質またはポリペプチド、あるいはそれらの混合物を提供する方法であって、
    生物学的に活性な脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドをコードするＤ
    ＮＡ配列を含み、かつ発現するベクターを細胞中へ投与することと、前記細胞に
    おいてＤＮＡ配列を発現させて、生物学的に活性な脂質加水分解性タンパク質ま
    たはポリペプチドを生産することとを含む方法。
  52. 【請求項５２】 前記ベクターを保有する前記細胞は、脂質加水分解性タン
    パク質またはポリペプチドを欠乏している他の細胞によって取り込まれる生物学
    的に活性な脂質加水分解性タンパク質またはポリペプチドを分泌する、請求項５
    １に記載の方法。
  53. 【請求項５３】 前記生物学的に活性なヒト脂質加水分解性タンパク質また
    はポリペプチドは、リソソーム酸性リパーゼである、請求項５１に記載の方法。
  54. 【請求項５４】 前記生物学的に活性なヒト脂質加水分解性タンパク質また
    はポリペプチドは、リソソーム酸性リパーゼに対して少なくとも８５％の配列相
    同性を示すタンパク質である、請求項５１に記載の方法。
  55. 【請求項５５】 前記生物学的に活性なヒト脂質加水分解性タンパク質また
    はポリペプチドは、アミノ酸Ｐｒｏ（−６）をＴｈｒへ、かつＧｌｙ２をＡｒｇ
    へ置換したリソソーム酸性リパーゼの多型変異体タンパク質である、請求項５１
    に記載の方法。
  56. 【請求項５６】 生物学的に活性なリソソーム酸性リパーゼを欠乏している
    哺乳動物の細胞に、生物学的に活性なリソソーム酸性リパーゼを提供する方法で
    あって、生物学的に活性なリソソーム酸性リパーゼをコードするＤＮＡ配列を含
    み、かつ発現するベクターを細胞中に投与することと、前記細胞においてＤＮＡ
    配列を発現させて、生物学的に活性なリソソーム酸性リパーゼを生産することと
    を含む方法。
  57. 【請求項５７】 前記ベクターを保有する前記細胞は、リソソーム酸性リパ
    ーゼを欠乏している他の細胞によって取り込まれる生物学的に活性なリソソーム
    酸性リパーゼを分泌する、請求項５６に記載の方法。
  58. 【請求項５８】 前記ベクターは、ウイルスベクターである、請求項５６に
    記載の方法。
  59. 【請求項５９】 前記ウイルスベクターは、レンチウイルス、アデノウイル
    ス、アデノ随伴ウイルスおよびウイルス様ベクターからなる群から選択される、
    請求項５８に記載の方法。
  60. 【請求項６０】 前記ベクターは、プラスミドである、請求項５６に記載の
    方法。
  61. 【請求項６１】 前記ベクターは、脂質ベシクルである、請求項５６に記載
    の方法。
  62. 【請求項６２】 アテローム性動脈硬化症を伴う哺乳動物の細胞に、生物学
    的に活性なリソソーム酸性リパーゼを提供する方法であって、リソソーム酸性リ
    パーゼをコードするＤＮＡ配列を含み、かつ発現し、生物学的に活性なリソソー
    ム酸性リパーゼを欠乏する細胞において、生物学的に活性なリソソーム酸性リパ
    ーゼの発現をトランスフェクトして維持するのに有効な、相当量のベクターを、
    前記哺乳動物の細胞中に投与することを含む方法。
  63. 【請求項６３】 前記発現リソソーム酸性リパーゼは、感染細胞から分泌さ
    れ、それらを欠乏している他の細胞によって取り込まれる、請求項６２に記載の
    方法。
  64. 【請求項６４】 哺乳動物におけるウォルマン病の治療方法であって、前記
    症状を治療するのに十分な、安全かつ有効な量のリソソーム酸性リパーゼを、前
    記哺乳動物に投与することを含む方法。
  65. 【請求項６５】 哺乳動物におけるコレステリルエステル貯蔵病の治療方法
    であって、前記症状を治療するのに十分な、安全かつ有効な量のリソソーム酸性
    リパーゼを、前記哺乳動物に投与することを含む方法。
  66. 【請求項６６】 哺乳動物におけるアテローム性動脈硬化症の治療方法であ
    って、前記症状を治療するのに十分な、安全かつ有効な量の外因的に生産された
    リソソーム酸性リパーゼを、前記哺乳動物に投与することを含む方法。
  67. 【請求項６７】 前記リソソーム酸性リパーゼは、適切な薬学的に許容可能
    なキャリア中に存在する、請求項６６に記載の方法。
  68. 【請求項６８】 前記リソソーム酸性リパーゼは、静脈内注入により投与さ
    れる、請求項６７に記載の方法。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013526856A (ja) * 2010-04-23 2013-06-27 シナジーバ バイオファーマ コープ リソソーム蓄積症酵素
JP2013540733A (ja) * 2010-09-09 2013-11-07 シナジーバ バイオファーマ コープ 患者のリソソーム酸リパーゼ欠乏症を治療するためのリソソーム酸リパーゼの使用

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6579974B1 (en) * 1998-06-23 2003-06-17 The Regents Of The University Of California Acyl CoA:cholesterol acyltransferase (ACAT-2)
ES2328446T5 (es) * 2000-02-04 2014-02-27 Children's Hospital Research Foundation Uso de lipasa ácida lisosomal para tratar la aterosclerosis y enfermedades asociadas
AU2002221755A1 (en) * 2000-10-31 2002-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Nucleotide and polypeptide sequence of human lysosomal acid lipase
US20090297496A1 (en) * 2005-09-08 2009-12-03 Childrens Hospital Medical Center Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases
US20090035348A1 (en) * 2005-11-22 2009-02-05 Z & Z Medical Holdings, Inc. Dissolution of arterial plaque
US8304383B2 (en) 2005-11-22 2012-11-06 Atheronova Operations, Inc. Dissolution of arterial plaque
US20070116755A1 (en) * 2005-11-22 2007-05-24 Zadini Filiberto P Dissolution of arterial cholesterol plaques by pharmacological preparation
US20080287429A1 (en) * 2007-05-15 2008-11-20 Z & Z Medical Holdings, Inc. Dissolution of Arterial Cholesterol Plaques by Pharmacologically Induced Elevation of Endogenous Bile Salts
AU2015249135A1 (en) * 2010-04-23 2015-11-19 Synageva Biopharma Corp. Lysosomal storage disease enzyme
AU2015218427B2 (en) * 2010-09-09 2017-09-21 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Use of lysosomal acid lipase for treating lysosomal acid lipase deficiency in patients
EP2675472A4 (en) 2011-02-15 2014-09-17 Synageva Biopharma Corp METHOD FOR THE TREATMENT OF LACK OF LYSOSOMAL SAURER LIPASE
US20130046283A1 (en) * 2011-05-05 2013-02-21 Medtronic Vascular, Inc. Methods and intravascular treatment devices for treatment of atherosclerosis
PL2740449T3 (pl) 2012-12-10 2019-07-31 The Procter & Gamble Company Artykuł chłonny o wysokiej zawartości materiału chłonnego
GB201421343D0 (en) * 2014-12-02 2015-01-14 VIB VZW and Universiteit Gent Improved production of lipase in yeast
US11396499B2 (en) 2018-12-12 2022-07-26 University Of Washington Lysosomal acid lipase assay

Family Cites Families (174)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US23046A (en) * 1859-02-22 Joseph saxton
US11222A (en) * 1854-07-04 Machine
US120522A (en) * 1871-10-31 Improvement in hoisting-buckets
US2081136A (en) * 1936-08-10 1937-05-25 Iuglio Frank Di Shirt collar
US3710795A (en) * 1970-09-29 1973-01-16 Alza Corp Drug-delivery device with stretched, rate-controlling membrane
US4302386A (en) 1978-08-25 1981-11-24 The Ohio State University Antigenic modification of polypeptides
FR2303890A1 (fr) * 1975-03-14 1976-10-08 Ciba Geigy Ag Procede en continude teinture dans des vapeurs de solvants organiques et matieres fibreuses synthetiques teintes par ce procede
US4105776A (en) * 1976-06-21 1978-08-08 E. R. Squibb & Sons, Inc. Proline derivatives and related compounds
ZA791659B (en) 1978-04-17 1980-04-30 Ici Ltd Process and apparatus for spraying liquid
US4316906A (en) * 1978-08-11 1982-02-23 E. R. Squibb & Sons, Inc. Mercaptoacyl derivatives of substituted prolines
IL58849A (en) * 1978-12-11 1983-03-31 Merck & Co Inc Carboxyalkyl dipeptides and derivatives thereof,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US4231938A (en) 1979-06-15 1980-11-04 Merck & Co., Inc. Hypocholesteremic fermentation products and process of preparation
US4508729A (en) * 1979-12-07 1985-04-02 Adir Substituted iminodiacids, their preparation and pharmaceutical compositions containing them
US4444784A (en) * 1980-08-05 1984-04-24 Merck & Co., Inc. Antihypercholesterolemic compounds
DK149080C (da) * 1980-06-06 1986-07-28 Sankyo Co Fremgangsmaade til fremstilling af derivater af ml-236b-carboxylsyre
US4344949A (en) * 1980-10-03 1982-08-17 Warner-Lambert Company Substituted acyl derivatives of 1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-3-carboxylic acids
ZA817261B (en) * 1980-10-23 1982-09-29 Schering Corp Carboxyalkyl dipeptides,processes for their production and pharmaceutical compositions containing them
US4337201A (en) * 1980-12-04 1982-06-29 E. R. Squibb & Sons, Inc. Phosphinylalkanoyl substituted prolines
US4410520A (en) 1981-11-09 1983-10-18 Ciba-Geigy Corporation 3-Amino-[1]-benzazepin-2-one-1-alkanoic acids
US4739073A (en) * 1983-11-04 1988-04-19 Sandoz Pharmaceuticals Corp. Intermediates in the synthesis of indole analogs of mevalonolactone and derivatives thereof
JPS6038490A (ja) * 1983-08-11 1985-02-28 Toshiba Corp 白色発光混合螢光体及びこれを用いた陰極線管
US5387413A (en) * 1985-06-14 1995-02-07 The Research Foundation Of State University Of New York Method of inhibiting thrombus formation by the 7E3 monoclonal antibody
US4816463A (en) * 1986-04-01 1989-03-28 Warner-Lambert Company Substituted diimidazo [1,5-a: 4',5'-d]pyridines having antihypertensive activity
US4940727A (en) * 1986-06-23 1990-07-10 Merck & Co., Inc. Novel HMG-CoA reductase inhibitors
US5116870A (en) * 1986-06-23 1992-05-26 Merck & Co., Inc. HMG-CoA reductase inhibitors
CA1334092C (en) 1986-07-11 1995-01-24 David John Carini Angiotensin ii receptor blocking imidazoles
US4799156A (en) * 1986-10-01 1989-01-17 Strategic Processing Corporation Interactive market management system
US4772684A (en) * 1987-01-20 1988-09-20 Triton Biosciences, Inc. Peptides affecting blood pressure regulation
US5017716A (en) * 1987-05-22 1991-05-21 E.R. Squibb & Sons, Inc. Phosphorous-containing HMG-CoA reductase inhibitors, new intermediates and method
US5091378A (en) * 1987-05-22 1992-02-25 E. R. Squibb & Sons, Inc. Phosphorus-containing HMG-CoA reductase inhibitors, new intermediates and method
US4906624A (en) * 1987-09-08 1990-03-06 Warner-Lambert Company 6-(((Substituted)pyridin-3-yl)alkyl)-and alkenyl)-tetrahydro-4-hydroxypyran-2-one inhibitors of cholesterol biosynthesis
US4997837A (en) * 1987-09-08 1991-03-05 Warner-Lambert Company 6-(((substituted)pyridin-3-yl)alkyl)-and alkenyl)-tetrahydro-4-hydroxypyran-2-one inhibitors of cholesterol biosynthesis
US5008853A (en) * 1987-12-02 1991-04-16 Xerox Corporation Representation of collaborative multi-user activities relative to shared structured data objects in a networked workstation environment
US4929620A (en) * 1987-12-10 1990-05-29 Warner-Lambert Company 5-pyrimidinyl-3,5-dihydroxy-6-heptenoic acid compounds useful as inhibitors of cholesterol biosynthesis
US4939143A (en) * 1987-12-21 1990-07-03 Rorer Pharmaceutical Corporation Substituted cyclohexene derivatives as HMG-CoA reductase inhibitors
US5001128A (en) * 1987-12-21 1991-03-19 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. HMG-COA reductase inhibitors
US4900754A (en) * 1987-12-21 1990-02-13 Rorer Pharmaceutical Corp. HMG-COA reductase inhibitors
US5001144A (en) * 1987-12-21 1991-03-19 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Substituted cyclohexene derivatives as HMG-CoA reductase inhibitors
US4994494A (en) * 1987-12-21 1991-02-19 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. HMG-COA reductase inhibitors
US5081127A (en) * 1988-01-07 1992-01-14 E. I. Du Pont De Nemours And Company Substituted 1,2,3-triazole angiotensin II antagonists
US4946864A (en) * 1988-02-01 1990-08-07 Merck & Co., Inc. Novel HMG-CoA reductase inhibitors
WO1989007603A1 (en) 1988-02-09 1989-08-24 Memorial Blood Center Of Minneapolis Nucleic acid isolation
EP0331250B1 (en) 1988-03-02 1994-04-13 Merck & Co. Inc. Antihypercholesterolemic agents
US5021453A (en) * 1988-03-02 1991-06-04 Merck & Co., Inc. 3-keto HMG-CoA reductase inhibitors
US4920109A (en) * 1988-04-18 1990-04-24 Merck & Co., Inc. Antifungal compositions and method of controlling mycotic infections
US5166171A (en) 1988-05-13 1992-11-24 Hoechst Aktiengesellschaft 6-phenoxymethyl-4-hydroxytetrahydropyran-2-ones and 6-thiphenoxymethyl-4-hydroxytetrahydropyran-2-ones and the corresponding dihydroxycarboxylic acid derivatives, salts and esters, and in treating hypercholesterolemia
US4963538A (en) 1988-06-29 1990-10-16 Merck & Co., Inc. 5-oxygenated HMG-CoA reductase inhibitors
US4897402A (en) * 1988-06-29 1990-01-30 Merck & Co., Inc. 5-oxa, 5-thia, 5-aza HmG-CoA reductase inhibitors
IT1226726B (it) * 1988-07-29 1991-02-05 Zambon Spa Composti attivi come inibitori della biosintesi del colesterolo.
US5196440A (en) * 1988-07-29 1993-03-23 Zambon Group S.P.A. Compounds active as inhibitors of the cholesterol biosynthesis
DE3832570A1 (de) * 1988-09-24 1990-03-29 Hoechst Ag 7-substituierte derivate der 3,5-dihydroxyhept-6-insaeure, verfahren zur ihrer herstellung, ihre verwendung als arzneimittel, sowie zwischenprodukte
JPH0547647Y2 (ja) * 1988-10-03 1993-12-15
US4950675A (en) * 1988-12-21 1990-08-21 Warner-Lambert Company Pyridine di-mevalono-lactones as inhibitors of cholesterol biosynthesis
US4906657A (en) * 1988-12-21 1990-03-06 Warner-Lambert Company Bicyclo heptane and bicyclo octane substituted inhibitors of cholesterol synthesis
US4957940A (en) * 1988-12-21 1990-09-18 Warner-Lambert Company Bicyclo heptane and bicyclo octane substituted inhibitors of cholesterol synthesis
US4923861A (en) * 1989-02-07 1990-05-08 Warner-Lambert Company 6-(2-(2-(Substituted amino)-3-quinolinyl) ethenyl and ethyl) tetrahydro-4-hydroxypyran-2-one inhibitors of cholesterol biosynthesis
US5130306A (en) * 1989-03-13 1992-07-14 Merck & Co., Inc. 5-Oxygenated HMG-COA reductase inhibitors
US5132312A (en) * 1989-03-27 1992-07-21 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Substituted cyclohexene derivatives as HMG-CoA reductase inhibitors
US5064825A (en) 1989-06-01 1991-11-12 Merck & Co., Inc. Angiotensin ii antagonists
US5102911A (en) * 1989-06-09 1992-04-07 Merck & Co, Inc. 4-Substituted HMG-CoA reductase inhibitors
US4970231A (en) 1989-06-09 1990-11-13 Merck & Co., Inc. 4-substituted HMG-CoA reductase inhibitors
FI94339C (fi) 1989-07-21 1995-08-25 Warner Lambert Co Menetelmä farmaseuttisesti käyttökelpoisen /R-(R*,R*)/-2-(4-fluorifenyyli)- , -dihydroksi-5-(1-metyylietyyli)-3-fenyyli-4-/(fenyyliamino)karbonyyli/-1H-pyrroli-1-heptaanihapon ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi
US4992429A (en) * 1989-08-24 1991-02-12 Rhone-Poulenc Rorer Pharmaceuticals Inc. Novel HMG-COA reductase inhibitors
US5098931A (en) * 1989-08-31 1992-03-24 Merck & Co., Inc. 7-substituted HMG-CoA reductase inhibitors
US4946860A (en) * 1989-11-03 1990-08-07 Rorer Pharmaceutical Corporation Benzothiopyranyl derivatives as HMG-CoA reductase inhibitors
US5073566A (en) 1989-11-30 1991-12-17 Eli Lilly And Company Angiotensin ii antagonist 1,3-imidazoles and use thereas
IT1237793B (it) * 1989-12-21 1993-06-17 Zambon Spa Composti attivi come inibitori dell'enzima hmg-coa reduttasi
US5025000A (en) * 1990-03-02 1991-06-18 E. R. Squibb & Sons, Inc. Phosphorus-containing HMG-CoA reductase inhibitor compounds
US5622985A (en) * 1990-06-11 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Method for preventing a second heart attack employing an HMG CoA reductase inhibitor
US5085992A (en) * 1990-07-19 1992-02-04 Merck & Co., Inc. Microbial transformation process for antihypertensive products
US5112857A (en) * 1990-09-04 1992-05-12 Merck & Co., Inc. Hmg-coa reductase inhibitor metabolites
US5087634A (en) * 1990-10-31 1992-02-11 G. D. Searle & Co. N-substituted imidazol-2-one compounds for treatment of circulatory disorders
AU1580292A (en) 1991-03-13 1992-10-21 United States of America, as represented by the Secretary, U.S. Department of Commerce, The Increasing the therapeutic efficiency of macrophage-targeted therapeutic agents by up-regulating the mannose lectin on macrophages
US5182298A (en) * 1991-03-18 1993-01-26 Merck & Co., Inc. Cholesterol lowering agents
US5256689A (en) 1991-05-10 1993-10-26 Merck & Co., Inc. Cholesterol lowering compounds
US5135935A (en) * 1991-05-17 1992-08-04 Merck & Co., Inc. Squalene synthetase inhibitors
US5250435A (en) 1991-06-04 1993-10-05 Merck & Co., Inc. Mutant strains of Aspergillus terreus for producing 7-[1,2,6,7,8,8a(R)-hexa-hydro-2(S),6(R)-dimethyl-8(S)-hydroxy-1(S)-naphthyl]-3(R),5(R)-dihydroxyheptanoic acid (triol acid),I)
US5202327A (en) * 1991-07-10 1993-04-13 E. R. Squibb & Sons, Inc. Phosphorus-containing hmg-coa reductase inhibitors
HU217629B (hu) 1991-12-12 2000-03-28 Novartis Ag. Eljárás fluvasztatint tartalmazó stabilizált gyógyszerkészítmények előállítására
FR2686899B1 (fr) * 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5260332A (en) 1992-02-07 1993-11-09 Merci & Co., Inc. Cholesterol lowering compounds
US5262435A (en) 1992-02-10 1993-11-16 Merck & Co., Inc. Cholesterol lowering compounds
US5286895A (en) * 1992-02-19 1994-02-15 Merck & Co., Inc. Cholesterol lowering compounds
US5302604A (en) * 1992-03-09 1994-04-12 Merck & Co., Inc. Cholesterol lowering compounds produced by directed biosynthesis
FR2690022B1 (fr) * 1992-03-24 1997-07-11 Bull Sa Circuit a retard variable.
US5369125A (en) 1992-07-17 1994-11-29 Merck & Co., Inc. Cholesterol-lowering agents
US5283256A (en) * 1992-07-22 1994-02-01 Merck & Co., Inc. Cholesterol-lowering agents
US5279940A (en) * 1992-08-03 1994-01-18 Eastman Kodak Company Chemiluminescent composition containing cationic surfactants or polymers and 4'-hydroxyacetanilide, test kits and their use in analytical methods
US5661125A (en) * 1992-08-06 1997-08-26 Amgen, Inc. Stable and preserved erythropoietin compositions
US5317031A (en) * 1992-10-19 1994-05-31 Merck & Co., Inc. Cholesterol lowering compounds
GB9225098D0 (en) * 1992-12-01 1993-01-20 Coffee Ronald A Charged droplet spray mixer
US6105571A (en) * 1992-12-22 2000-08-22 Electrosols, Ltd. Dispensing device
US5543297A (en) * 1992-12-22 1996-08-06 Merck Frosst Canada, Inc. Human cyclooxygenase-2 cDNA and assays for evaluating cyclooxygenase-2 activity
US5276995A (en) * 1993-02-08 1994-01-11 Johnson Steven L Net trap
US5474995A (en) 1993-06-24 1995-12-12 Merck Frosst Canada, Inc. Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors
EP0739340A1 (en) 1994-01-10 1996-10-30 Merck Frosst Canada Inc. Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors
GB9406255D0 (en) * 1994-03-29 1994-05-18 Electrosols Ltd Dispensing device
GB9410658D0 (en) * 1994-05-27 1994-07-13 Electrosols Ltd Dispensing device
WO1996004001A1 (en) 1994-08-05 1996-02-15 Molecular/Structural Biotechnologies, Inc. Site-specific biomolecular complexes
US6103271A (en) * 1994-12-02 2000-08-15 The United States Of America As Represented By The Administrator Of The National Aeronautics And Space Administration Microencapsulation and electrostatic processing method
US5732400A (en) * 1995-01-04 1998-03-24 Citibank N.A. System and method for a risk-based purchase of goods
US6861053B1 (en) * 1999-08-11 2005-03-01 Cedars-Sinai Medical Center Methods of diagnosing or treating irritable bowel syndrome and other disorders caused by small intestinal bacterial overgrowth
US6342510B1 (en) 1995-06-12 2002-01-29 G. D. Searle & Co. Treatment of inflammation and inflammation-related disorders with a combination of a cyclooxygenase-2 inhibitors and a leukotriene B4 receptor antagonist
US6118045A (en) 1995-08-02 2000-09-12 Pharming B.V. Lysosomal proteins produced in the milk of transgenic animals
US5929304A (en) * 1995-09-14 1999-07-27 Croptech Development Corporation Production of lysosomal enzymes in plant-based expression systems
US5873523A (en) * 1996-02-29 1999-02-23 Yale University Electrospray employing corona-assisted cone-jet mode
EP0959877A4 (en) * 1996-04-10 2000-08-23 Univ California CORRECTION OF GENETIC DEFECTS USING CHEMICAL CAPS
US6270954B1 (en) * 1996-04-10 2001-08-07 The Regents Of The University Of California Correction of genetic defects using chemical chaperones
ES2581828T3 (es) 1996-09-13 2016-09-07 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Proceso de purificación de alfa-galactosidasa A
JP2001513078A (ja) 1996-12-30 2001-08-28 バテル・メモリアル・インスティテュート 吸入により新生物を治療する製剤とその方法
WO1998059063A2 (en) 1997-06-23 1998-12-30 University Of Saskatchewan Bovine adenovirus type 3 genome
US5858130A (en) * 1997-06-25 1999-01-12 Bethlehem Steel Corporation Composition and method for producing an alloy steel and a product therefrom for structural applications
AU8444698A (en) * 1997-06-30 1999-01-25 Centre National De La Recherche Scientifique Improved method for transferring nucleic acid into multicelled eukaryo tic organism cells and combination therefor
US6233600B1 (en) * 1997-07-15 2001-05-15 Eroom Technology, Inc. Method and system for providing a networked collaborative work environment
US5904646A (en) * 1997-09-08 1999-05-18 Jarvik; Robert Infection resistant power cable system for medically implanted electric motors
US6223177B1 (en) * 1997-10-22 2001-04-24 Involv International Corporation Network based groupware system
CA2306646A1 (en) 1997-10-22 1999-04-29 Merck & Co., Inc. Combination therapy for reducing the risks associated with cardio- and cerebrovascular disease
CA2305768A1 (en) 1997-10-29 2000-02-24 Genzyme Corporation Compositions and methods for treating lysosomal storage disease
US6136804A (en) 1998-03-13 2000-10-24 Merck & Co., Inc. Combination therapy for treating, preventing, or reducing the risks associated with acute coronary ischemic syndrome and related conditions
US6274597B1 (en) * 1998-06-01 2001-08-14 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Method of enhancing lysosomal α-Galactosidase A
US6442528B1 (en) * 1998-06-05 2002-08-27 I2 Technologies Us, Inc. Exemplar workflow used in the design and deployment of a workflow for multi-enterprise collaboration
US7339033B2 (en) * 1998-06-26 2008-03-04 Genentech, Inc. Pro1481
MXPA01000674A (es) * 1998-07-20 2002-04-08 Peptech Ltd Formulacion de bioimplante.
US6141653A (en) * 1998-11-16 2000-10-31 Tradeaccess Inc System for interative, multivariate negotiations over a network
US6336105B1 (en) * 1998-11-16 2002-01-01 Trade Access Inc. System and method for representing data and providing electronic non-repudiation in a negotiations system
CA2353522A1 (en) * 1998-12-07 2000-06-15 Pharming Intellectual Property B.V. Treatment of pompe's disease
US6564246B1 (en) * 1999-02-02 2003-05-13 International Business Machines Corporation Shared and independent views of shared workspace for real-time collaboration
WO2000066206A2 (en) * 1999-05-03 2000-11-09 Battelle Memorial Institute Compositions for aerosolization and inhalation
US6567784B2 (en) * 1999-06-03 2003-05-20 Ework Exchange, Inc. Method and apparatus for matching projects and workers
US7033780B1 (en) 1999-06-14 2006-04-25 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acids corresponding to TANGO 294 a gene encoding a lipase—like protein
US6374292B1 (en) * 1999-07-20 2002-04-16 Sun Microsystems, Inc. Access control system for an ISP hosted shared email server
US7927587B2 (en) * 1999-08-05 2011-04-19 Regents Of The University Of Minnesota MAPC administration for the treatment of lysosomal storage disorders
US6415270B1 (en) * 1999-09-03 2002-07-02 Omnihub, Inc. Multiple auction coordination method and system
US6537785B1 (en) 1999-09-14 2003-03-25 Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. Methods of treating lysosomal storage diseases
ES2328446T5 (es) * 2000-02-04 2014-02-27 Children's Hospital Research Foundation Uso de lipasa ácida lisosomal para tratar la aterosclerosis y enfermedades asociadas
EP1257272A4 (en) 2000-02-23 2004-12-15 Alteon Inc THIAZOLIUM COMPOUNDS AND TREATMENTS OF DISEASES RELATED TO PROTEIN AGING
WO2001097829A2 (en) 2000-06-19 2001-12-27 Genzyme Corporation Combination enzyme replacement, gene therapy and small molecule therapy for lysosomal storage diseases
AU2002221755A1 (en) 2000-10-31 2002-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Nucleotide and polypeptide sequence of human lysosomal acid lipase
US20030064437A1 (en) * 2000-11-15 2003-04-03 Nick Wan Expression system for recombinant proteins
US20020193303A1 (en) * 2001-01-25 2002-12-19 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 58860, a human cholesteryl ester hydrolase and uses therefor
WO2003002150A1 (en) 2001-06-28 2003-01-09 Wyeth Composition and method for reducing adverse interactions between phenothiazine derivatives and plasma
US7008934B2 (en) * 2001-06-28 2006-03-07 Baxter International Inc. Composition and method for reducing adverse interactions between phenothiazine derivatives and plasma using cyclodextrins
US6800472B2 (en) 2001-12-21 2004-10-05 Genzyme Glycobiology Research Institute, Inc. Expression of lysosomal hydrolase in cells expressing pro-N-acetylglucosamine-1-phosphodiester α-N-acetyl glucosimanidase
WO2003064614A2 (en) * 2002-01-30 2003-08-07 Yale University Transport peptides and uses therefor
PT1495328E (pt) * 2002-04-16 2014-09-09 Vlaams Interuniv Inst Biotech Um marcador para medir cirrose hepática
US20080226553A1 (en) * 2002-09-27 2008-09-18 Cold Spring Harbor Laboratory Cell-Based Rna Interference and Related Methods and Compositions
SI1761273T1 (sl) 2004-06-21 2008-10-31 Amsterdam Molecular Therapeutics Bv Zdravljenje nealkoholnega steatoznega hepatitisa
CN101123978B (zh) 2004-08-19 2012-12-12 比奥根艾迪克Ma公司 神经胚素变体
US20070270367A1 (en) 2005-05-18 2007-11-22 University Of Kentucky Research Foundation Rybozyme-catalyzed insertion of targeted sequences into RNA
US20090297496A1 (en) 2005-09-08 2009-12-03 Childrens Hospital Medical Center Lysosomal Acid Lipase Therapy for NAFLD and Related Diseases
PL377180A1 (pl) * 2005-09-21 2007-04-02 Instytut Farmaceutyczny Zastosowanie izoflawonów i ich pochodnych w leczeniu mukopolisacharydoz
US8748567B2 (en) 2006-05-22 2014-06-10 Children's Medical Center Corporation Method for delivery across the blood brain barrier
US20080025959A1 (en) 2006-05-24 2008-01-31 Richard Daneman Permeability of blood-brain barrier
US8143265B2 (en) * 2007-04-16 2012-03-27 Meharry Medical College Method of treating atherosclerosis
WO2008131431A2 (en) * 2007-04-23 2008-10-30 St. Louis University Modulation of blood brain barrier protein expression
US8956825B2 (en) 2007-05-24 2015-02-17 The United States Of America As Represented By The Department Of Veterans Affairs Intranuclear protein transduction through a nucleoside salvage pathway
AU2008255565B2 (en) * 2007-05-31 2013-10-24 Paradigm Biopharmaceuticals Ltd Sulphated xylans for treatment or prophylaxis of respiratory diseases
EP2167135A2 (en) * 2007-07-12 2010-03-31 Prosensa Technologies B.V. Molecules for targeting compounds to various selected organs, tissues or tumor cells
WO2009032171A1 (en) 2007-08-29 2009-03-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Subcutaneous administration of alpha-galatosidase a
US8142265B2 (en) * 2008-04-10 2012-03-27 Greg Carter Motorized air vent
FR2937322B1 (fr) 2008-10-22 2013-02-22 Vect Horus Derives peptidiques et leur utilisation comme vecteurs de molecules sous forme de conjugues
US8232073B2 (en) * 2009-01-02 2012-07-31 Zacharon Pharmaceuticals, Inc. Quantification of non-reducing end glycan residual compounds
WO2010078515A2 (en) * 2009-01-02 2010-07-08 Zacharon Pharmaceuticals, Inc. Polymer end group detection
HUE028129T2 (en) * 2009-10-19 2016-11-28 Amicus Therapeutics Inc New preparations for the prevention and / or treatment of lysosomal storage disorders
KR101077618B1 (ko) 2009-11-13 2011-10-27 경북대학교 산학협력단 뇌혈관 장벽을 통과하여 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 세포사멸을 표적하는 펩타이드 및 이의 용도
US9095541B2 (en) 2009-11-24 2015-08-04 Arch Cancer Therapeutics, Inc. Brain tumor targeting peptides and methods
EP2561069B1 (en) 2010-04-23 2017-03-08 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Lysosomal storage disease enzyme
KR20150038636A (ko) * 2010-09-09 2015-04-08 시나게바 바이오파르마, 코포레이션 환자에서 리소좀 산 리파제 결핍증의 치료를 위한 리소좀 산 리파제의 용도
WO2012112677A2 (en) 2011-02-15 2012-08-23 Children's Hospital Medical Center Methods for treating lysosomal acid lipase deficiency
BR112013021494B1 (pt) 2011-02-22 2021-09-08 California Institute Of Technology Vetor viral, polinucleotídeo isolado, uso de um vírus adeno-associado (aav) recombinante e método para produzir o mesmo
EP2709670A4 (en) 2011-05-18 2015-01-21 Childrens Hosp Medical Center TARGETED ADMINISTRATION OF PROTEINS ACROSS THE HEMATO-ENCEPHALIC BARRIER
JP6175431B2 (ja) 2011-06-20 2017-08-02 アイカーン スクール オブ メディシン アット マウント サイナイ ムコ多糖症およびその他のリソソーム障害に対する抗ｔｎｆ療法
WO2012177639A2 (en) 2011-06-22 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Bioprocessing and bioproduction using avian cell lines
CN103842517A (zh) 2011-08-03 2014-06-04 莲花组织修复公司 胶原蛋白7及相关方法

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013526856A (ja) * 2010-04-23 2013-06-27 シナジーバ バイオファーマ コープ リソソーム蓄積症酵素
JP2015204842A (ja) * 2010-04-23 2015-11-19 シナジーバ バイオファーマ コープ リソソーム蓄積症酵素
JP2016190867A (ja) * 2010-04-23 2016-11-10 シナジーバ バイオファーマ コープ リソソーム蓄積症酵素
JP2013540733A (ja) * 2010-09-09 2013-11-07 シナジーバ バイオファーマ コープ 患者のリソソーム酸リパーゼ欠乏症を治療するためのリソソーム酸リパーゼの使用

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