JP2003521439A - 末梢単球の増殖を促進するためのｃｄ１３７の使用 - Google Patents

末梢単球の増殖を促進するためのｃｄ１３７の使用

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、哺乳類の末梢単球の増殖を促進するための医薬を製造するために、単球成長因子ＣＤ１３７またはその機能的アナログの使用に関する。特に本発明は、様々な病理学的状況を処置するために前記成長因子の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、末梢単球の増殖を促進するために単球成長因子ＣＤ１３７の使用に
、特にＣＤ１３７の増殖促進作用によって新規な態様において処置可能な種々の
病的状態の処置のためにＣＤ１３７の使用に関する。
【０００２】 血液の末梢単球、および体腔と組織からのそれらから由来するマクロファージ
は、生体の単核食細胞システムの一成分である。特に、単球およびマクロファー
ジは、生体の非特異性免疫防御システムのエフェクター細胞である。単球は多数
の中間段階にわたって骨髄中の造血幹細胞から発展する。それらは血液中を約２
０ないし３０時間の時間にわたって循環する。そこからそれらは種々の器官およ
び組織中へ移動し、そこで部位特異性マクロファージへ発展する。ここでは周囲
の組織がそれらに対し形成的影響を有し、そしてそれらは付加的機能を発生する
。それ故組織タイプに従って、例えば肺のマクロファージ（肺胞マクロファージ
）、腹腔のマクロファージ（腹膜マクロファージ）、脾臓のマクロファージ（脾
臓マクロファージ）、肝臓のマクロファージ（クッパー細胞）、関節の、骨のマ
クロファージ（破骨細胞）、結合組織の、脳のおよび腎臓のマクロファージへの
分化が行なわれる。
【０００３】 単球およびマクロファージは、生体中で起こる炎症反応の状況において中心的
位置を持つ。非炎症組織においては、マクロファージの目的は古い細胞の排除で
ある。さらにそれらは免疫系内の交信のために重要な多数の可溶性因子を生産す
る。しかしながらもし細胞が炎症プロセスに含まれているならば、それらは大き
く変性された表現型および機能的性質を有する活性化状態にある。この場合それ
らは病気のコースへ影響する重要なエフェクター機能を加える。これらは微生物
、免疫複合体および損傷細胞の貧食作用および細胞内破壊ばかりでなく、腫瘍細
胞、寄生生物およびウイルス感染細胞に対する抗体依存性および非依存性細胞毒
性反応を含んでいる。さらに単細胞およびマクロファージは、免疫応答の誘発お
よび調節において中心的に重要である。すなわち、それらはさらに分泌の高度に
活性な細胞であり、サイトカインの増加した放出によって免疫応答に影響する。
【０００４】 ＣＤ１３７は腫瘍壊死因子レセプターファミリーの一員であり、ＩＬＡまたは
４−１ＢＢ（マウスからの同族体）の名称で既知である（Ｋｗｏｎ，Ｂ．Ｓ．，
ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６：１９６
３，１９８９；Ｓｃｈｗａｒｚ Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ １３４：２９５
，１９９３；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｍ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕ
ｎｏｌ ２４：２２１９，１９９４）。ＣＤ１３７は活性化したリンパ球および
単球によって発現され、一次細胞による発現は活性化に依存する（Ｓｃｈｗａｒ
ｚ Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８５：１０４３，１９９５）。ＣＤ１３７
発現は、例えばフィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）またはホルボール−１２−ミリ
ステート−１３−アセテート（ＰＭＡ）によるＴリンパ球の活性化によって急速
に誘発し得る。単球においては、ＣＤ１３７はリポポリサッカライド（ＬＰＳ）
、ＩＬ−１βおよびＰＭＡによる活性化によって誘発し得る。Ｂリンパ球におい
ては、ＣＤ１３７発現は細胞表面免疫グロブリンまたはＴＭＡに対する抗体によ
り、そしてＥＢＶ（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒウイルス）での形質転換によって
誘発される。非リンパ細胞（特に軟骨細胞のような）においては、ＣＤ１３７は
前炎症サイトカインＩＬ−１βによって強く誘発し得る。ＣＤ１３７の可溶性形
は差次的スプライシングによって生産され、そしてリユウマチ性関節炎を有する
患者の血清中に上昇した濃度において検出することができる（Ｍｉｃｈｅｌ，Ｊ
．ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２８：２９０，１９９８）。ヒ
トＣＤ１３７遺伝子は関連する遺伝子のクラスター中の染色体１ｐ３６上にある
（Ｓｃｈａｒｚ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅ
ｓ Ｃｏｍ ２３５：６９９，１９９７）。
【０００５】 固定化された形で単球の活性化をもたらす組み換えＣＤ１３７タンパクは既知
である。活性化の結果は、前炎症サイトカインの増加した発現、抗炎症サイトカ
インＩＬ−１０の阻害および活性化マーカーの誘発である。単球に対する寿命延
長または増殖促進作用はそれには記載されていない。
【０００６】 上述したように、単球は免疫応答の環境において決定的機能を有し、そして腫
瘍および病原に対する良性免疫反応の生産に対して必須の重要性を持っている。
例えばサイトカインのようなシグナルによって引かれ、それらは血液循環から炎
症部位へ移動する。単球およびマクロファージの蓄積は慢性炎症の特徴である。
この蓄積は、例えばマクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）、顆粒球マ
クロフェージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）およびインターロイキン３（Ｉ
Ｌ−３）のような、単球およびマクロファージの生存に有益な効果を有する、炎
症部位において放出されるサイトカイン類によってさらに促進される（Ｙｏｕｎ
ｇ，Ｄ．Ａ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４５：６０７，１９９０；Ｘｉｎｇ，Ｚ
．，ｅｔ ａｌ．，Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｉｒ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ６：
２１２，１９９２；Ｂｒａｔｔｏｎ，Ｄ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｌｉｎ
Ｉｎｖｅｓｔ ９５：２１１，１９９５）。
【０００７】 今まで末梢単球およびマクロファージは増殖すなわち複製できないものと考え
られていた（ｃｆ．Ｘｉｎｇ，Ｚ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｕｐｒａ；ｖａｎ Ｆｕｒ
ｔｈ，Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ５４−４８５，１９７９）。
【０００８】 上の詳論から、例えば腫瘍、細菌、カビまたはウイルスによる感染のような多
数の障害の処置は、もし微生物、免疫複合体および損傷した細胞の増大した食菌
作用および細胞内破壊が、そして腫瘍細胞、微生物および感染した細胞に対する
改善された抗体依存性または非依存性細胞毒性反応が単球／マクロファージの複
製によって産み出されることができるならば、著しく改善できることが明らかで
ある。
【０００９】 さらに、例えばガン患者の化学療法または放射線療法、および免疫抑制剤の投
与のような種々の形の治療は劇的に単球およびマクロファージの数を減らすこと
が知られている。このタイプの治療操作の終了後、単球／マクロファージの数を
正常範囲内の値へ再び増加させ、その結果患者の免疫系を再び安定化することが
一般に望ましい。
【００１０】 それ故本発明の目的は、活性単球／マクロファージの不適切数に関連する病的
状態の改善された処置を可能とするために、末梢単球の数従ってマクロファージ
の数を特異的に増加させることを可能にするルートを利用可能とすることである
。
【００１１】 驚くべきことに、この目的はそれ自体既知の細胞表面タンパクＣＤ１３７およ
びその機能的アナログは、以前の推測に反して、造血幹細胞とは関係なく末梢単
球の増殖を誘発するとの発見から出発して達成することができた。このことは、
驚くべきことにＣＤ１３７について多数の新しい治療適用可能性を開く。
【００１２】 本発明の特定具体例は、以下に添付図面を参照して詳細に例証される。
【００１３】 ヒトＣＤ１３７の単離、配列決定およびキャラクタリゼーションはＳｃｈｗａ
ｒｚ Ｈ．，ｅｔ ａｌ．によりＧｅｎｅ（１９９３），１３４，２９５に最初
に記載された。ここにこの発表を明示的に参照する。
【００１４】 既に述べたように、本発明はＣＤ１３７と、その“機能的アナログ”の使用に
関する。本発明意味内の機能的アナログは、詳しくは天然形のＣＤ１３７とは異
なるにもかかわらず本発明に従った所望の生物学的活性を有し、そして言及した
目的に対して使用することができるＣＤ１３７の変種、誘導体、可溶形および多
量体形である。特に、本発明による機能的アナログはさらに標的細胞すなわち末
梢単球へ結合する能力を有し、この態様で単球増殖を誘発することができなけれ
ばならない。
【００１５】 ＣＤ１３７変種は、例えば図１Ａの配列から出発して、一以上のアミノ酸置換
、欠損、追加、挿入および／または逆位によって得ることができるタンパクを含
む。
【００１６】 本発明によるＣＤ１３７の変種は、図１Ａに示したアミノ酸配列と、例えば８
０ないし１００％のような約６０ないし１００％一致を持たなければならない。
天然アミノ酸配列の修飾は、例えばヌクレオチド配列における対応するヌクレオ
チドの突然変異のような既知の方法で生産することができる。このように例えば
以下のものが相互に置換できる。イソロイシン、バリン、ロイシンおよびアラニ
ンのような類似の脂肪族基によるアミノ酸、リジンおよびアルギニンのような、
グルタミンおよびアスパラギンのような、またはグルタミン酸およびアスパラギ
ン酸のような類似の極性側基によって残基。
【００１７】 機能的アナログはさらに、ＣＤ１３７の非グリコシル化または異なるグルコシ
ル化形を含む。グルコシル化パターンは、例えばＣＤ１３７の組み換え調製物上
の発現システムの特異的選択によって影響されることができる。さらにグルコキ
シル化がそれ以上生起しないように可能性あるＮ−グルコシル化部位の区域にお
いてアミノ酸配列を特異的に修飾する可能性が存在する。
【００１８】 機能的アナログはさらにＣＤ１３７の天然存在変種を含み、これは例えば代替
的ｍＲＮＡスプライシングまたはＣＤ１３７のタンパク分解的開裂によって得る
ことができ、そして同時にＮ−もしくはＣ−末端切断アミノ酸配列を持つことが
できる。さらに変種は、望まれる生物学的機能にとって重要でない末端、鎖中ア
ミノ酸またはアミノ酸サブ配列を特異的に削除することによって得ることができ
る。例えば、システィン残基は、誤った分子内ジスルフィド架橋の生成を避ける
ために特異的に削除または置換することができる。
【００１９】 ＣＤ１３７の誘導体は、化学的または酵素修飾によってアミノ酸残基の官能側
基を介して結合した一以上の化学基を含むことができる。
【００２０】 ＣＤ１３７の誘導体は、アミノ酸側鎖のまたはＮ−末端もしくはＣ−末端上の
官能基の誘導体化によって得ることができる。例えば、グリコシル基、アシル基
、リピッド残基、フォスフェート基、例えばポリエチレングリコール側鎖のよう
なポリマー残基を公知の態様で導入することができる。
【００２１】 誘導体化の特定の形は、他のアミノ酸配列とのＮ−もしくはＣ−末端結合であ
る。このタイプの融合タンパクは化学的に、そして組み換え方法において調製す
ることができる。
【００２２】 本発明によるアナログはさらにＣＤ１３７の可溶形を含む。これらは完全なま
たは部分的な形のタンパクの細胞外ドメインを含むが、トランスメンブレンドメ
インは部分的もしくは完全に削除される。さらにこれらの形は細胞質，Ｃ−末端
配列部分を持っていない。本発明によれば、ＣＤ１３７の可溶形はインビボ用途
に特に有利である。結果として、例えば製剤の静脈内投与が著しく単純化される
からである。ＣＤ１３７の好ましい可溶形は、図１Ａに示したアミノ酸残基＋１
８から＋１８６を有するポリペプチドである。可溶性または不溶性機能的フラグ
メントの形の他のアナログ、すなわち天然ＣＤ１３７形の部分的配列または組み
換え部分的配列も本発明に従って含まれる。
【００２３】 本発明によるＣＤ１３７の可溶形はそれ自体既知の態様で調製することができ
る。例えば適切に截頭したＤＮＡフラグメントから出発する組み換え調製が可能
である。さらに特異的プロテアーゼ消化による截頭ＣＤ１３７形の調製の可能性
が存在する。
【００２４】 本発明に従って使用することができる、図１Ａに明示的に記載したポリペプチ
ドの機能的アナログは、他の哺乳類または同じ哺乳類の他の細胞システムから単
離することができるもののような機能的に均等のポリペプチドを含む。この意味
において機能的均等物は、例えば４−１ＢＢの名称を有するマウスから単離され
、米国特許５，６７４，７０４に記載されている因子、および例えばフラグメン
トのようなそれから誘導される機能的アナログである。
【００２５】 ＣＤ１３７および上に記載したその機能的アナログはモノマー形および多量体
形で本発明に従って使用することができる。
【００２６】 モノマー形での使用のためには、タンパクの固定化が特に便利である。この場
合固定化はそれ自体既知の態様で担体マトリックス上に実施される。この担体マ
トリックスは、例えばその中で単球含有細胞システムを培養することができる培
養容器の表面である。さらなる適当な担体マトリックスは、例えば単球含有培養
システム中に懸濁し得るポリマー粒子である。
【００２７】 単位面積当りの固定化した分子の最適数は少数の予備実験によって当業者によ
り容易に決定することができる。それは１ｃｍ2 あたり約１０11ないし１０17Ｃ
Ｄ１３７分子またはその機能的アナログ、特に例えば約６×１０13のような約１
０13ないし１０14であることができる。
【００２８】 固定化は、固定化されたＣＤ１３７分子の所望の生物学的活性が悪影響されな
いか、または結果として有意に悪影響されない限り、当業者に知られた慣用の態
様で実施することができる。固定化は、例えば担体上に分子の吸着により、また
は例えばアミノ酸残基の官能基を介して結合する二官能リンカー分子を用いて担
体へ共有結合することによって実施することができる。この場合、例えばアミド
、ジアゾ、イソチオシアネートまたはジスルフィド架橋がリンカーとＣＤ１３７
の間に形成され得る（例えばＶｉｔｅｔｔａ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２３８，１０９８；Ｐａｓｔａｎ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｃｅｌ
ｌ，４７ｐ６４１；Ｔｈｏｐｅ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｃａｎｅｅｒ Ｒｅ
ｓ ４９，５９２４参照）。
【００２９】 固定化のさらなる可能性は、例えばＣＨＯ細胞のような、ＣＤ１３７をコード
するＤＮＡで形質転換された細胞の細胞表面上のＣＤ１３７の発現よりなる。
【００３０】 可能性は、固定化を容易化するためにＣＤ１３７アミノ酸配列を特異的に修飾
することにも存在し得る。このタイプの修飾は、例えばヘキサヒスチジンアンカ
ーとして知られた修飾、または抗体により抗原として認識されることができるエ
ピトープ（例えば、Ｈａｒｌｏｗ Ｅ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｄ．，１９８８，Ａ
ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ（Ｎ．Ｙ．）Ｐｒｅｓｓに記載）のようなアンカー
として機能するいわゆる“タグ”である。これらのアンカーは、例えばクロマト
グラフィーカラム、マイクロタイタープレートまたは培養容器中に存在すること
ができる固相支持体へのＣＤ１３７の付着のために役立つことができる。
【００３１】 固定化に適したＣＤ１３７の機能的アナログの特に適当な具体例は、ＣＤ１３
７の細胞外ドメインとＩｇＧ分子のＦｃ部分の融合タンパクである。このタイプ
の融合タンパクは、タンパクＡまたは抗Ｆｃ抗体がそれへ結合される支持体上に
特に有利に固定化されることができる。ＣＤ１３７−Ｆｃの調製物はＳｃｈｗａ
ｒｚ Ｈ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８７，７（１９９６）に記載されており
、ここに明示的に参照する。
【００３２】 本発明に従って使用することができるＣＤ１３７の多量体凝集物は、ＣＤ１３
７またはその機能的アナログを２ないし５分子含んでいる。個々のペプチド分子
の凝集は、その単球への結合が防止されないように行なわれなければならない。
好ましくは多量体ＣＤ１３７凝集物は、ＣＤ１３７の細胞外ドメインとＩｇＧ分
子のＦｃ部分を含む上に記載した融合分子から調製される。ダイマー化は例えば
抗Ｆｃ抗体との架橋によって実施することができる。ＣＤ１３７のダイマー凝集
物はこの方法によって得られる。ダイマー化はさらに、二つの融合タンパク分子
のＦｃ部分間にジスルフィド架橋の形成によって達成可能である。ダイマー化は
、例えばジチオビス（スクシンイミジル）プロピオネート、Ｎ−スクシンイミジ
ル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート、または例えば１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩のような反応性カルボジ
イミドのような、末端スルフヒドリル基を有するもののような２官能化学リンカ
ーの使用によっても可能である。
【００３３】 例えばＣＤ１３７単位５を有する分子のような高次多量体は、５量体ＩｇＭ分
子のＦｃ部分とＣＤ１３７の細胞外ドメインから出発して得ることができる。
【００３４】 本発明の第１の主題は、哺乳類の末梢単球、もし適切であればその幹細胞およ
び／または前駆体細胞（以下を参照）の増殖を促進する医薬の製造のための、活
性Ｔリンパ球によって生産される単球成長因子と命名された細胞表面タンパクＣ
Ｄ１３７、またはその機能的アナログの使用に関する。
【００３５】 本発明の意味内で単球増殖の“促進”は、非増殖単球の増殖および既に増殖し
ている単球を付加的に助けることの両方を含んでいる。
【００３６】 末梢単球は末梢血液システムの一成分であり、生理的条件下の血液μｌあたり
、成人では８０ないし５４０細胞の濃度で、小児では８０ないし７２０細胞の濃
度で含まれている。
【００３７】 既知のように、すべての種類の病的状態は単球および／またはそれから誘導さ
れる細胞、特に異なる組織特異性のマクロファージ（上記参照）の数の減少に関
連している。単細胞およびそれから誘導される細胞の既知の生理学的機能により
、単球カウントの増加、例えば低い生理学的範囲の値から高い生理学的値への増
加は、同様に増加した増殖の結果として治療上有益であり得ると結論することが
できる。さらに、単球の人工的増殖（血液中の単球カウントの血液μｌあたり５
４０細胞より多い値への増加）の結果として、生体の単球防御システムが感染に
対する防御の間助けられることが考えられる。
【００３８】 本発明のさらなる主題は、単球および／またはそれから誘導される幹細胞およ
び／またはその前駆体、特に単球および／またはマクロファージのようなそれか
ら誘導される細胞（Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，（１
９９７）Ｖｅｒｌａｇ Ｗａｌｔｅｒ ｄｅ Ｇｒｕｙｔｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ，
Ｓｔａｕｓｓ，Ｍ．，ａｎｄ Ｂａｒｒａｎｇｅｒ，Ｊ．Ａ．（Ｅｄ．），ｐ．
２３６，Ｔａｂｌｅ １２．１の造血システムの図解を見よ。ここに明示的に参
照とする。）を含んでいる細胞システムの障害に関連する状況、あるいはそれら
の形成および／またはコースがこの細胞システムの細胞の増殖によって処置可能
である状況を処置するための医薬の製造のための、ＣＤ１３７またはその機能的
アナログの使用に関する。
【００３９】 上の意味における障害は、この場合関係する生体細胞の一以上の生理的機能の
、遺伝的もしくは後天的な、永久または一時的の、部分的もしくは完全損傷を含
む。
【００４０】 そのような細胞システムは、例えばその細胞が骨髄からの幹細胞から誘導され
る、いわゆる骨髄細胞である。このシステムの典型的な成分は顆粒球および単球
である。
【００４１】 特に、本発明に従った使用は、前述の障害が機能障害または血液μｌあたり８
０細胞の濃度より下の単球カウントの減少と、および／またはそれから誘導され
る細胞の減少を含んでいる。
【００４２】 ＣＤ１３７のための第１の適用分野は、造血システムへの化学療法または放射
線療法に関係した損傷から選ばれた本発明による状況である。化学療法および放
射線療法はすべての種類の腫瘍症の処置のため、または骨髄抑制もしくは骨髄除
去療法の環境内で、骨髄もしくは臓器移植の準備のためにしばしば実施される。
白血球減少症およびそれに関連する単球カウントの減少はしばしばここでの結果
である。感染に対する上昇した感受性のため患者の病的状態および死亡率が大き
く増加する。白血球減少症は本発明によるＣＤ１３７またはＣＤ１３７処理単球
の投与によって効果的に緩和または排除される。
【００４３】 さらなる適用分野は、例えば透析患者もしくは糖尿病、または慢性静脈不全を
有する患者に観察されるような創傷治癒障害の処置のための、ＣＤ１３７もしく
はその機能的アナログの使用に関する。この場合、これらは不十分に存在する、
または主としてマクロファージ（すなわち分化した単球）よりなる不十分な顆粒
化組織から生ずる創傷治癒障害である。
【００４４】 本発明のさらなる主題は、不適切な免疫応答に関連する状態を処置するための
医薬の製造のための、ＣＤ１３７またはその機能的アナログの使用に関する。こ
のタイプの状況の例は、 ａ）内因性防御システムの細胞毒性活性の不適切または不存在によって有利に
なる腫瘍症、 ｂ）病原またはそれに感染した体細胞の貧食作用の不適切また不存在によって
有利になる細菌、ウイルスおよびカビ感染、さらに ｃ）免疫システムの遺伝性もしくは非遺伝性、後天性もしくは非後天性損傷ま
たは状況、および ｄ）例えば慢性多発性関節炎もしくは自己免疫不全を有する患者の、または移
植患者の処置において発生し得るような、免疫抑制剤による処置によって誘発さ
れた損傷 の処置を挙げることができる。
【００４５】 後でもっと詳細に説明するように、本発明による医薬は生体内または生体外処
置の環境において使用することができる。
【００４６】 本発明のさらなる具体例によれば、ＣＤ１３７またはその機能的アナログは、
インターロイキン類、リンフォカイン類、モノカイン類、インターフエロン、コ
ロニー刺激因子および成長因子類から選ばれた少なくとも一つさらなる因子と組
合わせて使用することもできる。言及し得る非限定例は、ＩＬ−１，ＩＬ−２，
ＩＬ−３，ＩＬ−４，ＩＬ−５，ＩＬ−６，ＩＬ−７，ＩＬ−８，ＩＬ−９，Ｉ
Ｌ−１０，ＩＬ−１１，ＩＬ−１２，ＩＦＮ−α，−β，−γ，ＴＮＦ−α，Ｅ
ＧＦ，ＴＧＦ，ＰＤＧＦ，ＩＬＧＦ，ＭＧＦ，ＥＰＯ，Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳ
ＦおよびＭ−ＣＳＦであり、Ｇ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦのような白血球刺激因子
そして特にＭ−ＣＳＦが好ましい。ＣＤ１３７およびさらなる因子はここでは同
時に、または任意の順番で順次投与することができる。アポトーシス阻止因子と
の併用も考えられる。多分Ｍ−ＣＳＦは単球アポトーシスに対してこのタイプの
阻害効果を有する。
【００４７】 本発明の環境において使用のため、その天然形において、すなわち図１Ａによ
る配列における残基＋１８から残基＋２５５までのアミノ酸配列を有するタンパ
ク、またはこの配列の機能的アナログとして、ヒトＣＤ１３７が基本的に好まし
い。
【００４８】 しかしながら、図１Ａに示したアミノ酸＋１８ないし＋１８６に相当するヒト
ＣＤ１３７の細胞外ドメインまたはその機能的アナログが好ましくは使用される
。
【００４９】 本発明の好ましい一具体例においては、ＣＤ１３７またはその機能的アナログ
は固定化された形または多量体凝集物として使用される。
【００５０】 好ましい多量体凝集物は２ないし５分子のＣＤ１３７タンパクまたはその機能
的アナログを含んでいる。
【００５１】 本発明はさらに、哺乳類の血液からの末梢単球が栄養培地中の遊離もしくは固
定化された、特に固定化されたＣＤ１３７と接触させられ、そして単球カウント
が好ましくはその最大値まで増加するか、または単球の増加が観察されるまでイ
ンキュベートされる、末梢単球の増殖を促進するための生体内または生体外プロ
セスに関する。
【００５２】 哺乳類血液からの単球の単離は一般的に慣用の標準方法に従って実施すること
ができる。単離した細胞分画は純粋な単球分画であることもでき、または単球の
処理およびその後の刺激単球による哺乳類の処置に悪影響しない細胞を含むこと
ができる。このように例えばリンパ球が単球に加えてインビトロインキュベーシ
ョン段階の間存在することができる。単球の単離のために適した方法は、例えば
、Ｍｅｙｓｋｅｎｓ，Ｆ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐ Ｈａｅｍａｔｏｌ １
９７９，７（８），４０１−４１０；Ｗｅｉｎｅｒ，Ｒ．Ｓ．，ｅｔ ａｌ．，
Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９８０，３６（２），８９−９７；Ｃ
ｏｎｔｒｅａｓ，Ｔ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１９８
０，５４（１），２１５−２２９に記載されている。
【００５３】 生体内または生体外培養に適した栄養培地の非限定例は、例えば、５％胎児ウ
シ血清を補給したＲＰＭＩ培地である。培養終了後、処理した単球分画を処置す
べき哺乳類へ再投与する前に、例えばＰＢＳで洗浄するのが便利である。
【００５４】 本発明のさらなる主題は、化学療法または放射線療法患者の再生処置のための
プロセスにおけるＣＤ１３７またはその機能的アナログの使用に関し、ここでは ａ）化学療法または放射線療法を実施する前に患者の血液から末梢単球を含ん
でいる血液分画が単離され、これは単球カウントが増加するか、またはその最適
値へ到達し、および／または単球のサイズの増加が観察されるまで、遊離または
固定化した、特に固定化したＣＤ１３７と生体外でインキュベートされ、そして
この態様で処理されそして好ましくは単球でエンリッチされた血液分画が療法の
終了後患者へ再投与されるか、または ｂ）内因性末梢単球の増殖をそれによって促進するため、化学療法または放射
線療法の前、最中または終了後、患者へ多量体ＣＤ１３７凝集物の有効量が投与
される。
【００５５】 本発明のさらなる主題は、内因性非特異性免疫防御を促進するためのプロセス
における、ＣＤ１３７またはその機能的アナログの使用に関し、ここでは末梢単
球の増殖を促進する量のＣＤ１３７またはその機能的アナログが、特に末梢単球
の増殖を促進する量の多量体ＣＤ１３７凝集物が患者へ投与される。このプロセ
スは腫瘍患者および細菌、ウイルスまたはカビ感染に罹っている患者に実施する
ために特に適している。
【００５６】 このプロセスの環境において有利に投与し得る多量体ＣＤ１３７凝集物は、Ｃ
Ｄ１３７タンパクまたはその機能的アナログ２ないし５分子を含んでいる。
【００５７】 図１Ａに示したアミノ酸＋１８ないし＋１８６に相当するヒトＣＤ１３７の細
胞外セクションまたは単球へ結合することができるその機能的アナログを含んで
いるそのようなアナログまたは凝集物の投与が特に適切である。
【００５８】 生体内投与のため、ヒトＣＤ１３７またはそれから誘導されたアナログを使用
するのが有利である。もし融合タンパクとしてＣＤ１３７が投与されるならば、
ＣＤ１３７へ融合されるタンパクも同様にヒト起源でなければならない。例えば
他のサイトカインのために既に成功して使用されているようなＰＥＧ化（ＥＰ−
Ａ−０３３５４２３に記載されているＧ−ＣＳＦのＰＥＧ化）により、ＣＤ１３
７の血中滞留時間を改善するさらなる方策も考えられる。
【００５９】 ＣＤ１３７またはその機能的アナログの投与量の特定の選定および特定の投与
量スケジュールは、処置医の決定に従う。医師は選択した投与ルート、特定の薬
剤の有効性、処置すべき状況の性格および重篤度、そして療法に対する彼／彼女
の応答に応じて、適切な投与量および対応する投与スケジュールを選定するであ
ろう。しかしながら適切な投与量は一般に約１ないし２０μｇ／ｋｇ体重の範囲
内、または約０．０１ないし１ｎｍｏｌ／ｋｇ体重の範囲内であろう。
【００６０】 血液量に基いて、治療中のＣＤ１３７またはその機能的アナログの有効濃度は
血液１ｍｌあたり約１μｇないし１０μｇの範囲に、または血液１ｍｌあたり約
０．１ｐｍｏｌないし０．５ｎｍｏｌの範囲内にあることができる。
【００６１】 インビトロまたは生体外投与のためには、ＣＤ１３７またはその機能的アナロ
グの有効濃度は、約０．１μｇ／ｍｌ媒体以上の範囲内、特に約１μｇ／ｍｌ媒
体、例えば約５０μｇ／ｍｌ媒体、または約１ｐｍｏｌ／ｍｌ媒体以上の範囲内
、特に約０．０１ｎｍｏｌ／ｍｌ媒体、例えば約２ｎｍｏｌ／ｍｌ媒体であるこ
とができる。
【００６２】 ＣＤ１３７およびその機能的アナログの生体内投与は、有利には非経口的に、
特に静脈内投与し得る液状医薬組成物を用いて実施される。これは、好ましくは
この目的に適した薬剤的に許容し得るビヒクル中に好ましくは溶解した形のＣＤ
１３７またはその機能的アナログの有効量を含んでいる。適切な薬剤ビヒクルの
例は、特に例えば生理食塩水、リン酸塩緩衝食塩水、リンゲル溶液、乳酸加リン
ゲル溶液等のような水溶液である。さらに組成物は抗酸化剤、キレート剤、また
は抗微生物剤のようなさらなる添加剤を含むことができる。経口投与および吸入
による投与も可能である。
【００６３】 もし全身療法が必要であれば静脈内投与が特に便利である。例えば局所的に制
限された感染のような局所的状況の処置のためには、特異的皮下または皮内投与
も有利であり得る。局所的創傷処置のためには、例えば表面皮膚投与も可能であ
る。これは溶液、懸濁液、軟膏またはゲルの塗布によって実施することができる
。
【００６４】 本発明に従った医薬組成物中のＣＤ１３７またはその機能的アナログの最適濃
度は、特に使用するＣＤ１３７の形の比活性によって決定される。しかしながら
ＣＤ１３７またはその機能的アナログの適切な重量割合は、組成物の合計重量を
基準にして、約０．０００１ないし１重量％，特に０．０００５ないし０．０１
重量％の範囲内でなければならない。モル濃度は、例えば使用する組成物１００
ｇあたり、約１ｎｍｏｌないし０．１ｍｍｏｌ，特に約１５ないし３００ｎｍｏ
ｌの範囲内とすることができる。
【００６５】 本発明はさらに、上で規定した状況の一つの処置のための遺伝子治療組成物の
製造のための、ＣＤ１３７またはその機能的アナログをコードするヌクレオチド
配列の使用に関する。
【００６６】 このタイプの遺伝子治療組成物は、細胞ビヒクル、特に末梢単球、それから誘
導された細胞または幹細胞または単球の前駆体（Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｏｆ Ｇｅ
ｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，（１９９７）Ｖｅｒｌａｇ Ｗａｌｔｅｒ ｄｅ Ｇｒ
ｕｙｔｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ，Ｓｔｒａｕｓｓ，Ｍ．，ａｎｄ Ｂａｒｒａｎｇｅ
ｒ，Ｉ．Ａ．（Ｅｄ），ｐ．２３６，Ｆｉｇ．１２．１の造血システムの図解を
見よ。これは明示的に参照とする。）を含み、その中にＣＤ１３７またはその機
能的アナログをコードするヌクレトチド配列が適切な核酸構造中に発現可能な形
で組み込まれる。
【００６７】 本発明はさらに、上で規定した状況の一つの処置のための遺伝子治療プロセス
に関し、その中で本発明に従った遺伝子治療組成物が患者へ投与される。
【００６８】 この目的のため、前述した細胞への遺伝子導入は、例えばウイルス構築物、リ
ポソームまたは他の適当な核酸構築物のような非ウイルスビヒクルの助けによる
ようなそれ自体既知態様で実施することができる（Ｇｕｎｚｂｕｒｇ，Ｗ．Ｈ．
ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｔｒａｎｆｅｒ ｉｎ Ｓａｕｇｅｒｚｅｌｌｅｎ，（１
９７７）Ｓｐｅｋｔｒｕｍ Ａｋａｄｅｍｉｓｃｈｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｈｅｉ
ｄｅｌｂｅｒｇ，Ｂｅｒｌｉｎ；Ｂａｕｍ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔ
ｒａｎｓｆｅｒ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ
Ｈａｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ，ｉｎ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｏｆ
Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，（１９７７），Ｖｅｒｌａｇ Ｗａｌｔｅｒ ｄｅ
Ｇｒｕｙｔｅｒ Ｂｅｒｌｉｎ，Ｓｔｒａｕｓｓ，Ｍ．，ａｎｄ Ｂａｒｒａ
ｎｇｅｒ，Ｊ．Ａ．（Ｅｄ．）ｐｐ２３３−２５６）。
【００６９】 本発明に従って使用し得る核酸構築物は、例えばアデノウイルスベクターまた
は複製欠如アデノウイルスベクターと結合されるか、またはアデノ関連ウイルス
ベクターとリゲートされる。
【００７０】 さらなる有益な組合せは核酸構築物とリポソームとの複合化である。リポフェ
クションの間、リポソーム懸濁液の超音波処理によりカチオン性脂質から小さい
ユニラメラ小胞が調製される。ＤＮＡはリポソームの表面へ、正の正味電荷が保
たれ、そしてＤＮＡはリポソームの１００％へ複合されるような正確な比でイオ
ン的に結合される。ＤＯＴＭＡ（１，２−ジオレイルオキシプロピル−３−トリ
メチルアンモニウムブロマイド）およびＤＯＰＥ（ジオレイルホスファチジルエ
タノールアミン）の脂質混合物に加え、その間多数の新規な脂質フォーミュレー
ションが合成され、種々の細胞ラインの形質転換におけるそれらの有効性につい
て試験されている（Ｂｅｈｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｐｒｏｃ
Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８６，６９８２−６９８６；Ｆｅｌｇｅ
ｒ，Ｊ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２６９，２
５５０−２５６１；Ｇａｏ，Ｘ．ａｎｄ Ｈｕａｎｇ，Ｌ．（１９９１）Ｂｉｏ
ｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １７９，２８０−２８５；
Ｚｈｏｕ，Ｘ．ａｎｄ Ｈｕａｎｇ，Ｌ．（１９９４）Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ Ａｃｔａ １１８９，１９５−２０３）。新規な脂質フォーミュレー
ションの例は、ＤＯＴＡＰ（Ｎ−〔１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル
〕−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムメチルサルフェート〕またはＤＯＧＳ
（ＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ；ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン）である
。
【００７１】 ＣＤ１３７またはその機能的アナログをコードするヌクレオチド配列に加えて
、本発明に従って使用することができる核酸構築物は、機能的作動的結合中に、
プロモーター、増幅信号、エンハンサー、ポリアデニル化配列、複製起源、レポ
ーター遺伝子、選択できるマーカー遺伝子等のような一以上の調節配列を含んで
いる。所望の用途に応じ、この結合は遺伝子発現の増加または減少へ導くことが
できる。
【００７２】 新しく導入された調節配列に加え、実際の構造遺伝子の天然の調節配列がなお
存在することができる。遺伝子修飾によって、この天然の調節は所望により停止
することができ、そして遺伝子の発現を増加させることができる。しかしながら
遺伝子構築物はもっと簡単な構造とすることができる。すなわち、構造遺伝子の
前に付加的な調節信号を挿入せず、そしてその調節と共に天然プロモーターを除
去しない。その代りに、調節がもはや行なわれずそして遺伝子発現が増加するよ
うに、天然調節配列を突然変異させる。追加の有益な調節エレメントも核酸配列
の３’末端へ挿入することができる。核酸配列は遺伝子構築物中に二以上のコピ
ーで存在することができる。
【００７３】 原理的に、すべての天然プロモーターはそれらの調節配列と共に使用すること
ができる。さらに合成プロモーターも有利に使用することができる。好ましくは
調節配列は核酸配列の特異的発現を可能としなければならない。
【００７４】 本発明による処置形のさらなる変形は、ＣＤ１３７の増殖促進作用を阻止また
は減少し、それによってＣＤ１３７療法を場合によってさらに最適化することが
できるＣＤ１３７特異性抗体または他のＣＤ１３７アンタゴニストの使用に関す
る。
【００７５】 それ故本発明は、この目的に使用することができる、それ自体既知の方法で入
手し得るこれら抗体およびそのフラグメントと、そして対応して適当な他のＣＤ
１３７アンタゴニストにも関する。増加した単球生成に伴う状態、例えば血液ガ
ンのある種の形は任意にこのタイプのＣＤ１３７アンタゴニストによって処置さ
れるであろう。
【００７６】 今や本発明は、以下の非限定的実施例によって詳細に説明される。
【００７７】
【実施例】試薬 Ｍ−ＣＳＦおよびＭ−ＣＳＦに対する中和抗体はＲ＆Ｄ（Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ
，Ｇｅｒｍａｎｙ）から得た。抗Ｍ−ＣＳＦ：クローン２６７３０．１１，マウ
スハイブリドーマの腹水からのタンパクＡ精製ＩｇＧ分画。抗ＧＭ−ＣＳＦ：ク
ローン３２０９．１，モノクローナルＩｇＧ1 マウス抗体；抗−ＩＬ３：マウス
ハイブリドーマの腹水からのタンパクＡ精製ＩｇＧ分画。ヒトＣＤ１３７の細胞
外ドメインおよびヒト免疫グロブリンＧ1 のコンスタントドメインよりなる組み
換えＣＤ１３７−ＦｃタンパクはＡｌｅｘｉｓ（Ｇｒｕｎｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａ
ｎｙ）から得た。
【００７８】 ヒトＩｇＧ1 ＦｃタンパクはＡｃｃｕｒａｔｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｗｅｓｔｂｕｒｙ，ＮＹ，
ＵＳＡ）から得た。
【００７９】 参考例１：ＣＤ１３７−Ｆｃの固定化 ポリスチレンマイクロタイタープレート（Ｍｉｃｒｏｔｅｓｔ ＩＩＩ織織培
養プレート，Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅ
ｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）を、ＰＢＳ（リン酸塩緩衝化食塩水）中ＣＤ１３７−Ｆｃタ
ンパク１μｇ／ｍｌの溶液と４℃で一夜インキュベートした。ウエルあたりこの
溶液５０μｌを使用した。翌朝、タンパク溶液を除去し、プレートをＰＢＳで洗
った。Ｆｃの固定化も同様に実施した。
【００８０】 参考例２：ＥＬＩＳＡ ＥＬＩＳＡキットはＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ）から得た。テストは製造者の指示書に従って実施された。サイトカイン
濃度はこのテストを用いて３回決定され、そして平均値±標準偏差として表現さ
れた。
【００８１】 参考例３：単球のアポトーシスの測定 ＤＮＡのフラグメント化は、メーカーの指示書に従って“細胞死滅検出ＥＬＩ
ＳＡ”（Ｂｏｅｈｅｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の助けに
よって測定された。測定は３回実施された。
【００８２】 参考例４：ヒト単球の単離および培養 ヒト末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）は健康人のバッフィコートから単離した。
このためバッフィコートをＰＢＳの二つの等容積で希釈した。等容積のＨｉｓｔ
ｏｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ，Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）がこ
の層でカバーされた。この混合物を１２００Ｇにおいて２０分間遠心した。白い
層の形でＰｅｒｃｏｌｌ分離表面上にエンリッチされたＰＢＭＣを単離した。赤
血球はＮＨ4 Ｃｌ ２００ｍＭ，ＮａＨＣＯ3 １０ｍＭ，ＥＤＴＡ １０Ｍ，ｐ
Ｈ７．４の２ｍｌを用いて溶かされた。細胞はＰＢＳで２回洗浄され、２５０Ｇ
でペレット化され、５％胎児ウシ血清を補強したＲＰＭＩ培地中に再懸濁された
。
【００８３】 一次単球はこれから溶離によって単離された（Ａｎｄｒｅｅｓｅｎ Ｒ．，ｅ
ｔ ａｌ．，Ｊ Ｌｅｕｏｃ Ｂｉｏｌ ４７：４９０，１９９０）。溶離した
単球は９５％純粋であり、Ｔリンパ球の含有量は３％未満であった（形態および
抗原表現型，すなわちＤＣ１４，ＤＣ３，ＣＤ４およＣＤ８の発現によって推計
した）。細胞はポリスチレン培養皿（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒ
ａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，ＮＪ，ＵＳＡ）中、５％ＦＣＳで補強したＲＰＭＩ
１６４０培地中で各ケースにおいて指示した細胞濃度において培養された。
【００８４】 参考例５：細胞増殖の測定 個々の単細胞の増殖の測定のため、ベーリンガーマイハイム、ドイツからの“
Ｉｎ Ｓｉｔｕ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ Ｋｉｔ”を使用した。Ｆｃまた
はＣＤ１３７−Ｆｃでコートされた、８チャンバーキャリア（ＦＡＬＣＯＮ，Ｂ
ｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）
のチャンバーあたり、細胞３×１０5 が接種され、そして１０日間培養された。
ブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）を６０分にわたって加えた。添加したＢｒ
ｄＵはテスト指示書に従ってマウス抗ＢｒｄＵ抗体およびヒツジ抗マウスＦＩＴ
Ｃで染色することによって可視化された。単球はフイコエリトリン標識抗ＣＤ１
４抗体（２μｇ／ｍｌ，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ，Ｍａｒｓｅｉｌｌｅ，Ｆｒａｎ
ｃｅ）で染色することによって同定された。染色質はヘキスト３３３４２（Ｓｉ
ｇｍａ，Ｄｅｉｓｅｎｈｏｆｅｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の５μｇ／ｍｌで５分間染
色された。
【００８５】 細胞集団の増殖は９６ウエルマイクロタイタープレート中で測定された。単球
１０5 ／ウエルが 3Ｈ−チミジン０．５μＣｉで２４時間処理され、収穫され、
そしてＴｏｐＣｏｕｎｔマイクロプレートシンチレーションカウンター（Ｐａｃ
ｋａｒｄ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ，ＵＳＡ）を用いて測定された。各バッチは３
回カウントされ、結果は平均値±標準偏差で指示される。
【００８６】 実施例１：ＣＤ１３７−Ｆｃは単球のアポトーシスを誘発する。 一次単球１０5 は、ＣＤ１３７の細胞外ドメインとヒト免疫グロブリンＧ1 の
コンスタントドメイン（Ｆｃ）からなる融合タンパクであらかじめコートしてあ
る組織培養皿上で培養された。対照として、未処理プレートおよびＦｃタンパク
でコートしたプレートが用いられた。ＣＤ１３７−Ｆｃタンパクでコートしたウ
エル中では、培養１，３，５および７日において生きている単細胞の数が有意に
増加した（図２，下段）。同じ培養中のアポトーシスの程度をフラグメント化し
たＤＮＡの量によって測定した（図２，上段）。驚くべきことに、高い程度のア
ポトーシスはＣＤ１３７−Ｆｃタンパクで処理した単球培養に見られた。匹敵す
る結果は三回の独立した実験において得られた。
【００８７】 実施例２：ＣＤ１３７−Ｆｃは末梢単球の増殖を誘発し、単球のコロニー生成を
もたらす。 （ａ）ＣＤ１３７は単球の強い増殖を誘発し、これは同様に誘発されたアポト
ーシスによる細胞の損失を補償して余りある。単球１０5 をＦｃまたはＣＤ１３
７−Ｆｃでコートした９６ウエルプレート中で培養した。増殖を 3Ｈ−チミジン
０．５μＣｉによる２４時間パルスによって毎日測定した。 3Ｈ−チミジン取込
み率が示すように、ＣＤ１３７−Ｆｃは強い単球増殖を実際に誘発した（図３Ａ
）。増殖は、ＣＤ１３７−Ｆｃタンパクの存在下単球の培養時間と正の相関関係
を示した。増殖の誘発は７〜１０日後最高に達し、 3Ｈ−チミジン取り込みは対
照細胞と比較して３０倍以上に増加した。未処理ウエルおよびＦｃタンパクでコ
ートしたウエル中の単球間には差が見られなかった（結果を示さず）。
【００８８】 3Ｈ−チミジン摂取の実質的増加は、ＣＤ１３７−Ｆｃ誘発増殖は広く分布し
た態様の培養において生起するとの知見と一致する。ブロモデオキシウリジン（
ＢｒｄＵ）での１時間処理によるＣＤ１３７処理単球の標識およびその後のフル
オロセイン標識抗ＢｒｄＵ抗体による検出において、細胞の９．３％（５８９±
４３の５５±６）がそれらのＤＮＡを複製したが、Ｆｃコートした担体上で成長
させた末梢単球はＢｒｄＵの取り込みを示さなかった（結果は示さず）ことが特
に観察された。
【００８９】 免疫細胞化学研究により、増殖する細胞は事実単球であり、他の血球ではない
ことを確認できた。特に、増殖は上述のように、ＢｒｄＵ取り込みによって測定
され、そして単球の同定は単球に特異性の細胞表面タンパクＣＤ１４の同時染色
によって証明された。核はＤＮＡインターカレーション染料ヘキスト３３３４２
による染色によって可視化された。これらの研究において、増殖細胞は単球に典
型的な特徴を有することが見られ、それらはＣＤ１４陽性、多核であり、そして
単球／マクロファージの典型的形態を示した（結果は示さず）。
【００９０】 （ｂ）図３Ｂの顕微鏡写真が示すように、固定化ＣＤ１３７−Ｆｃによる単球
の本発明による処理は、他の造血成長因子について既に示されているように、有
意なコロニー生成へ導く。
【００９１】 実施例３：Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦはＣＤ１３７誘発単球増殖のために必
須の追加因子である。 （ａ）単球１０5 を固定化Ｆｃまたは固定化ＣＤ１３７−Ｆｃ上で培養した。
中和抗Ｍ−ＣＳＦ抗体（２μｇ／ｍｌ）、抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体（２μｇ／ｍｌ）
、抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体（２μｇ／ｍｌ）および抗ＩＬ−３抗体（２μｇ／ｍｌ）
を実験計画に従って添加した。増殖は１０日目に 3Ｈ−チミジン取り込みによっ
て測定した。
【００９２】 単球増殖の完全阻止は、中和抗Ｍ−ＣＳＦおよび抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体によって
得ることが可能であった。中和抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体自体は増殖の約１８％減少の
みをもたらした。抗ＩＬ−３抗体はＣＤ１３７誘発増殖に効果がなかった。抗Ｇ
Ｍ−ＣＳＦおよび抗ＩＬ−３抗体の添加は元の値の１／３へ増殖の相乗的減少へ
導いた（図４Ａ参照）。
【００９３】 これらの結果は、Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦは末梢単球のＣＤ１３７誘発
増殖のための有意な因子であることを例証する。
【００９４】 （ｂ）しかしながらさらなる実験において、Ｍ−ＣＳＦおよびＭＧ−ＣＳＦは
、ＣＤ１３７によって誘発されるような濃度においては無視し得る増殖を生ずる
のみであることが見られた。ＦｃまたはＣＤ１３７−Ｆｃタンパク（１μｇ／ｍ
ｌ）で、または示した濃度（ｎｇ／ｍｌ）においてＭ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳ
Ｆでコートした９６ウエルプレート上で末梢単球を培養した。増殖は１０日目に
3Ｈ−チミジン取り込みによって測定した（図４Ｂ）。予備実験においては、Ｍ
−ＣＳＦはＣＤ１３７により１０ｎｇ／ｍｌまでの濃度に誘発されることが見出
された。ＧＭ−ＣＳＦ誘発を測定することはできなかった（結果は示さず）。イ
ンビボではＭ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦは１０ｎｇ／ｍｌまたは５０ｐｇ／ｍ
ｌの濃度において検出可能である（Ｋａｗａｎｏ，Ｙ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｈａｅｍ
ａｔｏｌ ５４：１４７，１９９５；Ｅｌｎｅｒ，Ｓ．Ｇ．Ｃｕｒｒ Ｅｙｅ
Ｒｅｓ １４：１０４５，１９９５；Ｓａｕｎｄｅｒｓ，Ｍ．Ａ．，Ｂｒ Ｐｈ
ａｒａｍａｃｏｌ １２０：５４５，１９９７）。図４Ｂに示したテストシリー
ズにおいては、Ｍ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦは文献値すなわちそれぞれ１００
および１ｎｇ／ｍｌと比較して有意に高い濃度で使用された。しかしながらＣＤ
１３７と比較して、Ｍ−ＣＳＦおよび／またはＧＭ−ＣＳＦによる増殖の一部分
を誘発することができるのみであった。このことは単球中のＣＤ１３７の作用に
よって誘発される追加の因子がオートクリン態様でＣＤ１３７誘発単球増殖に貢
献する指示と取ることができる。
【００９５】 実施例４：ＣＤ１３７−Ｆｃ誘発単球増殖は一以上の可溶性オートクリン因子に
よって仲介される。 次に研究されたことは、ＣＤ１３７誘発単球増殖に多分追加的に関与するこれ
ら因子が可溶形で存在するかそれとも細胞表面に結合しているかであった。この
ため末梢単球１０5 が固定化Ｆｃまたは固定化ＣＤ１３７−Ｆｃタンパク上で２
４時間培養された。細胞は１２，０００Ｇにおいて５分間遠心によって除去され
た。これら培養物の調和上清０，１０および２０μｌが未処理単球の新しい培養
物１００μｌへ移された。同じドナーからの未処理単球へのこの調和媒地の導入
は細胞成長（図５Ａ）と、投与量依存性細胞増殖（図５Ｂ）を誘発した。細胞成
長に対する効果を実証するため、８日後３００倍の倍率で写真撮影した。比較の
ため図５Ａの最下段は固定化したＣＤ１３７−Ｆｃタンパク上で８日間培養した
単球を示している。
【００９６】 増殖の測定のため（図５Ｂ）、ＦｃまたはＣＤ１３７−Ｆｃを上に記載した態
様で培養基質上に固定化した。次に単球を示した濃度の条件つき上清と共に培養
した。上に記載したように、増殖を 3Ｈ−チミジン取り込みによって測定した。
このためパルシングは８日目に２４時間 3Ｈ−チミジン０．５μＣｉで実施され
た。実験の３回のくり返しは匹敵する結果へ導いた。
【００９７】 実施例５：ＣＤ１３７タンパクの固定化が単球増殖の誘発に必要である。 末梢単球１０5 を固定したＦｃおよび固定化したＣＤ１３７−Ｆｃ上で、そ
して比較のため溶解した形のＦｃおよびＣＤ１３７−Ｆｃの存在下で培養した。
ＣＤ１３７およびＦｃの固定化は、比較バッチにおいてウシ血清アルブミンで培
養容器を非特異的にブロック（０．１％強度ＢＳＡ２００μｌと室温で３０分イ
ンキュベーション）することによって防止された。
【００９８】 増殖は１０日目に 3Ｈ−チミジン取り込みによって測定された。図６に示した
結果が示すように、ＣＤ３１７による単球増殖の誘発は、組織培養皿をタンパク
でコーティングすることによって事前にＣＤ１３７を固定化した場合にのみ観察
することができた。他方、もしＣＤ１３７を可溶性タンパクとして投与したなら
ば、増殖の誘発は著しく減少した。３回の独立の実験において三つの匹敵し得る
結果が得られた。
【００９９】 実施例６：ＴＮＦＲ−Ｆｃおよび抗ＣＤ６８の存在下における単球増殖の研究 単球増殖のさらなるキャラクタリゼーションのため、Ｆｃタンパク、ＣＤ１３
７−Ｆｃタンパク、腫瘍壊死因子レセプター（ＴＮＦＲ）−Ｆｃタンパクおよび
抗ＣＤ６８を固定化した。 3Ｈ−チミジン取り込みを上に記載したように測定し
た。図７からＣＤ１３７−Ｆｃのみが単球増殖を有意に誘発したことが明瞭であ
る。
【０１００】 ＴＮＦＲ−Ｆｃおよび抗ＣＤ６８は、ＣＤ１３７と同様に単球表面へ結合する
タンパクである。対照としてそれらの使用により、培養容器の表面へ単球の結合
のみが観察された効果を生ずるとの結論は除外すべきである。
【０１０１】 実施例７：ＣＤ１３７とＭ−ＣＳＦは単球増殖を付加的に誘発する。 単球１０5 ／ウエルを９６ウエルマイクロタイタープレートへ導入した。各ウ
エルは、前もってＦｃまたはＣＤ１３７−Ｆｃ（どの場合も１μｇ／ｍｌ）でコ
ートされた。Ｍ−ＣＳＦ（１００μｇ／ｍｌ）およびＬＰＳ（リポポリサッカラ
イド）（５０μｇ／ｍｌ）は溶解した形で添加された。８日培養後の増殖の測定
は 3Ｈ−チミジン０．５μＣｉによる２４時間パルス後に 3Ｈ−チミジン取り込
みによって実施された。
【０１０２】 図８に示した実験結果が示すように、単球への 3Ｈ−チミジン取り込みは固定
化したＣＤ１３７−ＦｃまたはＭ−ＣＳＦによって付加的に増加した。他方、Ｌ
ＰＳは取り込み率の有意な増加へ導かず、このようにＣＤ１３７誘発単球増殖に
対して効果はない。
【０１０３】 実施例８：ＣＤ１３７−Ｆｃは単球の形態学的変化を誘発する。 末梢単球１０5 を未処理組織培養プレート上で、または固定化したＦｃもしく
はＣＤ１３７−Ｆｃタンパク（１μｇ／ｍｌ）上で培養した。培養物を４００倍
で１，２，４，６および１０日目に写真撮影した（図９Ａ）。Ｆｃタンパクのみ
で処理した培養プレートは単球の僅かの接着を示した。さらに単球はそれらの丸
い形態を保っていた。１０日間の途中で、このバッチの単球は徐々に死滅した（
図９Ａ，左側）。しかしながら、ＣＤ１３７−Ｆｃ融合タンパクが固定化された
組織培養プレート上で細胞が培養されたならば、完全に異なる結果が得られる。
ＣＤ１３７−Ｆｃは単球の接着を誘発する。これらの細胞は不規則形状を取った
。この効果は１日目に既に観察することができた。培養期間が増すにつれ、細胞
はひろがり、サイズが増大し、一層複雑な形態を示した（図９Ａ，右列）。
【０１０４】 固定化したＣＤ１３７−Ｆｃの存在下培養１０日目に、インビトロで分化した
単球の三つの基本的形態、細長形（Ｅ），丸い形（Ｒ）および枝分かれ形（Ｂ）
を同定することができた（図９Ａ，右列）。
【０１０５】 実施例９：ＣＤ１３７−ＦｃはＭ−ＣＳＦの生成を誘発する。 （ａ）最初の実験において一次単球１０5 が固定化したＦｃまたはＣＤ１３７
−Ｆｃ（各場合１μｇ／ｍｌ）上で培養された。ＣＤ１３７−Ｆｃタンパク（１
μｇ／ｍｌ）を溶液中に保つため、１バッチにおいてはＣＤ１３７−Ｆｃの固定
化は、組織培養プレートの胎児ウシ血清（未希釈１ｈ，４℃）とのプレインキユ
ベーションによって防止された。
【０１０６】 結果を図１０に示す。培養上清を指示した時間に収穫し、ＥＬＩＳＡによって
Ｍ−ＣＳＦ濃度を測定した。匹敵する結果は三つの別々の実験において得られた
。
【０１０７】 図１０が示すように、ＣＤ１３７はＭ−ＣＳＦの発現を誘発する。培養の最初
の３日間は、Ｍ−ＣＳＦ含有量は低く、対照とＣＤ１３７処理単球の間に差は見
られなかった。４日目から、Ｍ−ＣＳＦの生成が検出可能となり、Ｍ−ＣＳＦの
濃度が急激にそして連続して増加した。ＣＤ１３７タンパクの固定化は有意なＭ
−ＣＳＦ生成にとって必須条件であった。可溶性ＣＤ１３７は低Ｍ−ＣＳＦ濃度
を誘発するだけであるからである。
【０１０８】 （ｂ）次の実験においては、Ｍ−ＣＳＦの発現はＣＤ１３７によって誘発され
るばかりでなく、ＣＤ１３７誘発単球の生存にも必須であることが示された。こ
のため単球が固定化ＣＤ１３７タンパクおよび中和抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の存在下で
培養された。Ｆｃタンパクをコートしたプレートに比較して、ＣＤ１３７−Ｆｃ
でコートしたプレート上で大体１０倍多い単球が生存したことが観察された。中
和抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の添加は、生存単球の数をベース値へ低下させた（表１を見
よ）。時間コースの観察において、未コートまたはＦｃコート培養プレート上で
培養した細胞の大部分は既に６日目に死滅したことが見られた（図１１を見よ）
。固定化したＣＤ１３７タンパクまたはＭ−ＣＳＦは、１２日目においてさえも
細胞カウントを安定化した。中和抗体によるＭ−ＣＳＦの捕捉後は、この効果は
もはや観察されなかった。
【０１０９】 Ｍ−ＣＳＦに加え、ヒトにおいてはＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−３も単球の寿命
に積極的に影響することが知られている。本発明に従った実験においては、８日
間の培養後（対照バッチおよびＣＤ１３７処理細胞において）ＥＬＩＳＡにおい
てＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−３の発現を見出すことはできなかった（結果は示さ
ず）。しかしながら中和抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体はＣＤ１３７仲介単球生存率を半分
に減らした（表１を見よ）。抗ＩＬ−３抗体は効果がなかった。しかしながら中
和抗ＩＬ−３抗体と抗ＧＭ−ＣＳＦ抗体の併用は生存単球の数をベース値近くま
で低下させた。このことは、ＩＬ−３も単球の生存に重要な役割を持っているこ
とを示している。Ｍ−ＣＳＦの中和に加えてＧＭ−ＣＳＦおよび／またはＩＬ−
３の中和は細胞カウントのそれ以上の低下へ導かなかった。
【０１１０】 Ｍ−ＣＳＦの積極的効果は、抗Ｍ−ＣＳＦ抗体の投与により完全に、および抗
ＧＭ−ＣＳＦおよび抗ＩＬ−３抗体の併用によってベース値近くへ減らすことが
可能であった。
【０１１１】
【表１】
【０１１２】 １）一次末梢単球を固定化ＦｃタンパクまたはＣＤ１３７−Ｆｃタンパク上で培
養するか、またはＭ−ＣＳＦを最終濃度１００ｎｇ／ｍｌへ加えた。 ２）中和抗体は２μｇ／ｍｌの濃度で使用した。その添加は実際のスタートにお
いて実施した。 ３）平均細胞カウントおよび標準偏差。１０日目にプレートの代表的４視野で細
胞をカウントした。 ４）ｐ値はＳＳＰＳソフトウエアの助けによりスチューデンドテストによって決
定した。ｎ．ｓ．＝有意でない。
【０１１３】 実施例１０：ＣＤ１３７タンパクの固定化は生きている単球の数を増加させる。 末梢単球１０5 を固定化したＦｃもしくはＣＤ１３７−Ｆｃタンパク（各場合
１μｇ／ｍｌ）上で、または可溶性Ｆｃもしくは可溶性ＣＤ１３７−Ｆｃタンパ
クの存在下で（各場合１μｇ／ｍｌ）培養した。培養物を８日目に３００倍率で
写真撮影した（図１２を参照）。
【０１１４】 固定化はウシ血清アルブミンでの培養プレート前処理（室温３０分、９６ウエ
ルプレートに２００μｌ／ウエル）によって行なった。可溶性タンパクの存在下
では、単球カウントが著しく低下した。この知見と一致して、Ｍ−ＣＳＦは、Ｃ
Ｄ１３７タンパクが固定化した形で存在した場合にのみ誘発される（実施例９を
見よ）。それ故ＣＤ１３７は、単球によって発現されたＣＤ１３７リガンド（す
なわちＣＤ１３７のための結合パートナー）が固定されたＣＤ１３７分子の結合
によって架橋される時にのみ単球に作用するらしい。
【０１１５】 抗Ｆｃ抗体によって二次的に架橋される可溶性ＣＤ１３７−Ｆｃは、８日培養
後に観察される単球の生存を同様に延長する（結果は示さず）。この実験のため
、ＣＤ１３７−Ｆｃ（２μｇ／ｍｌ）はヤギ抗ヒトＦｃ抗体（２μｇ／ｍｌ）で
前処理された。
【図面の簡単な説明】
【図１】 （Ａ）はヒトＣＤ１３７のｃＤＮＡ配列およびそれから誘導されるアミノ酸配
列を示す。シグナルペプチド（位置＋１ないし＋１７）およびトランスメンブレ
ンドメイン（位置＋１８７ないし２１３）にはアンダーラインが付してある。可
能性あるグリコシル化部位はアステリスクで、マークされており、可能性あるフ
ォスフォリル化部位（タンパクキナーゼＣについては位置＋２４２、そしてカゼ
インキナーゼIIについては位置＋２３５）も示されており、ポリアデニル化信号
は太字で示されている。 （Ｂ）はヒトおよびネズミＣＤ１３７のアミノ酸配列のアラインメント。同じ
アミノ酸は垂直線で示され、高い、低いもしくは皆無の類似性を有するアミノ酸
はコロン、終止符またはブランクでマークされている。
【図２】 ＣＤ１３７による単球アポトーシスの誘発を示す。
【図３】 （Ａ）は、 3Ｈ−チミジン取り込みに基づく固定化したＣＤ１３７−Ｆｃタン
パクによる末梢単球の増殖の誘発を示す。 （Ｂ）単球のＣＤ−誘発コロニー形成。
【図４】 ＣＤ１３７−誘発単球増殖に対するＭ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦの効果を示
す。 （Ａ）Ｍ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦおよび／またはＩＬ−３に対する中和抗体の
不存在下もしくは存在下での固定化ＦｃまたはＣＤ１３７−Ｆｃタンパク上の末
梢単球の培養。 （Ｂ）単球の増殖はＭ−ＣＳＦおよびＭＧ−ＣＳＦによって誘発されない。各
場合において 3Ｈ−チミジン摂取が示されている。
【図５】 ＣＤ１３７−Ｆｃタンパクと培養した細胞培養物の調和上清による単球の（Ａ
）成育および（Ｂ）増殖の誘発を示す。
【図６】 可溶性ＣＤ１３７−Ｆｃ（ｓＣＤ１３７−Ｆｃ）および固定化ＣＤ１３７−Ｆ
ｃによる単球増殖の誘発の比較を示し、対照として固定化Ｆｃ，可溶性Ｆｃ（ｓ
Ｆｃ）および無処理支持体が示されている。
【図７】 Ｆｃ，ＣＤ１３７−Ｆｃ，ＴＮＦＲ−Ｆｃおよび抗ＣＤ６８による単球増殖の
誘発における試験を示す。
【図８】 ＬＰＳもしくはＭ−ＣＳＦと組合わせてＦｃ（白棒）もしくはＣＤ１３７（黒
棒）とによる単球増殖の誘発における試験を示す。
【図９】 （Ａ）固定化したＦｃまたはＣＤ１３７−Ｆｃ上で培養した末梢単球の４００
倍の、（Ｂ）固定化したＣＤ１３７−Ｆｃで培養１０日後の末梢単球の５００倍
の写真を示す。
【図１０】 グラフ左半分に固定化Ｆｃ上（白棒）もしくは固定化ＣＤ１３７−Ｆｃ上で１
〜８日培養後の単球によるＭ−ＣＳＦの発現を、そしてグラフの右半分に培養８
日後可溶性Ｆｃもしくは可溶性ＣＤ１３７−Ｆｃ存在下でのＭ−ＣＳＦの発現を
示す。
【図１１】 Ｍ−ＣＳＦの中和後の生存単球の数を示す。抗Ｍ−ＣＳＦ抗体なし（白）また
は２μｇ／ｍｌ添加後（黒）のＦｃ（円）またはＣＤ１３７−Ｆｃ（四角）また
はＭ−ＣＳＦ１００ｎｇ／ｍｌ（三角）で処理した生きている単球の数が示され
ている。
【図１２】 可溶性または固定化ＦｃまたはＣＤ１３７−Ｆｃの存在下（各場合１μｇ／ｍ
ｌ）の存在下培養８日後の単球を３００倍で示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/10 Ａ６１Ｐ 31/12 31/12 35/00 35/00 37/02 37/02 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ａ６１Ｋ 47/48 Ｃ１２Ｎ 5/10 37/02 5/06 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ 15/09 ＺＮＡ Ｅ // Ａ６１Ｋ 47/48 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA21 CA02 DA03 GA11 HA17 4B065 AA94X AB01 AC14 BA02 CA24 CA44 4C076 CC03 CC07 CC14 CC26 CC31 CC41 EE59 4C084 AA13 BA44 DA12 DA19 DA21 DB52 NA14 ZA511 ZB072 ZB212 ZB332 ZB352 ZB372 ZC372 ZC751

Claims (21)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 哺乳類の末梢単球の増殖を促進するための医薬の製造のための、単球成長因子
    ＣＤ１３７またはその機能的アナログの使用。
  2. 【請求項２】 単球および／まはたそれから誘導される細胞および／またはそれらの幹細胞お
    よび／または前駆体を含んでいる細胞システムの障害に関連する状況、あるいは
    その生成および／またはコースがこの細胞システムの細胞の増殖によって処置可
    能である状況を処置するための医薬の製造のための、単球成長因子ＣＤ１３７ま
    たはその機能的アナログの使用。
  3. 【請求項３】 細胞システムの障害は末梢単球および／またはそれから誘導される細胞の減少
    または機能障害である請求項２による使用。
  4. 【請求項４】 不適切な免疫応答に関連する状況の処置のための請求項２による使用。
  5. 【請求項５】 ａ）化学療法または放射線療法に関連した造血系の損傷、 ｂ）創傷治癒傷害、 ｃ）腫瘍症、 ｄ）細菌、ウイルスまたはカビ感染、 ｅ）免疫系の遺伝性もしくは非遺伝性、後天性もしくは非後天性損傷または状
    況、 ｆ）免疫抑制剤での処置によって誘発された損傷、 から選ばれる請求項２ないし４のいずれかによる使用。
  6. 【請求項６】 生体内または生体外処置が実施される請求項１ないし５のいずれかによる使用
    。
  7. 【請求項７】 ＣＤ１３７またはその機能的アナログは、インターロイキン、リンフォカイン
    、モノカイン、インターフェロン、コロニー刺激因子および成長因子から選ばれ
    た少なくとも一つのさらなる因子と組み合わせて使用される請求項１ないし６の
    いずれかによる使用。
  8. 【請求項８】 さらなる因子は白血球刺激因子である請求項７による使用。
  9. 【請求項９】 前記因子はＧ−ＣＳＦ，ＧＭ−ＣＳＦおよびＭ−ＣＳＦから選ばれる請求項８
    による使用。
  10. 【請求項１０】 ＣＤ１３７またはその機能的アナログは固定化された形で、または多量体凝集
    物として使用される請求項１ないし９のいずれかによる使用。
  11. 【請求項１１】 多量体ＣＤ１３７凝集物はＣＤ１３７タンパクまたはその機能的アナログ２な
    いし５分子を含む請求項１０による使用。
  12. 【請求項１２】 図１Ａによるアミノ酸＋１８ないし＋１８６に相当するヒトＣＤ１３７の細胞
    外セクション又は単球へ結合し得るその機能的アナログが使用される請求項１０
    または１１による使用。
  13. 【請求項１３】 哺乳類の血液からの末梢単球が栄養培地中でＣＤ１３７と接触させられ、単球
    カウントおよび／またはサイズが増加するまでインキュベートされることを含む
    末梢単球をインビトロで増殖する方法。
  14. 【請求項１４】 化学療法または放射線療法患者の再生処置方法であって ａ）化学療法または放射線療法の実施前に、患者の血液から末梢単球を含んで
    いる血液分画を単離し、単球カウントおよび／サイズが増加するまでＤＣ１３７
    と生体外でインキュベートし、そしてこの態様で処理した血液分画を療法の終了
    後患者へ再び投与するか、または、 ｂ）内因性末梢単球の増殖を促進するため、化学療法または放射線療法の前、
    最中または終了後患者へ多量体ＣＤ１３７凝集物の有効量を投与することよりな
    る前記方法。
  15. 【請求項１５】 末梢単球の増殖を促進する量のＣＤ１３７またはその機能的アナログを患者へ
    投与することよりなる内因性非特異性免疫防御を促進する方法。
  16. 【請求項１６】 患者は、創傷治癒傷害、細菌、ウイルスまたはカビ感染、遺伝性もくしは非遺
    伝性、後天性もくは非後天性の免疫系損傷もしくは傷害、または免疫抑制剤によ
    る処置により誘発された損傷に罹っている腫瘍患者である請求項１５による方法
    。
  17. 【請求項１７】 多量体ＣＤ１３７凝集的はＣＤ１３７タンパクまたはその機能的アナログ２な
    いし５分子を含む請求項１４ないし１６のいずれかによる方法。
  18. 【請求項１８】 図１Ａによるアミノ酸＋１８ないし＋１８６に相当するヒトＣＤ１３７の細胞
    外セクションまたは単球へ結合し得るその機能的アナログが使用される請求項１
    ４ないし１７のいずれかによる方法。
  19. 【請求項１９】 請求項２ないし５のいずれかに規定した障害の一つの処置のための遺伝子療法
    組成物の調製のための、ＣＤ１３７またはその機能的アナログをコードするヌク
    レオチド配列の使用。
  20. 【請求項２０】 ＣＤ１３７またはその機能的アナログをコードするヌクレオチド配列が発現可
    能な形で取り込まれている細胞基質を含む遺伝子療法組成物。
  21. 【請求項２１】 患者へ請求項２０による遺伝子療法組成物が投与される、請求項２ないし５の
    いずれかに規定された障害の一つの処置するための遺伝子療法。
JP2000534230A 1998-03-05 1999-03-05 末梢単球の増殖を促進するためのｃｄ１３７の使用 Pending JP2003521439A (ja)

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