JP2003520249A - イヌヘルペスウイルス病に対するワクチン接種法とワクチン - Google Patents
イヌヘルペスウイルス病に対するワクチン接種法とワクチンInfo
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 イヌヘルペスウイルス病に対するワクチン接種方法と、ワクチン。
【解決手段】 妊娠中の雌犬に出産予定日前、好ましくは妊娠期間の最終の３分の１の期間にワクチンを投与して、出産時点で妊娠中の雌犬に高レベルの抗ＣＨＶ抗体を産生させ、抗体転移によって乳児の間に子犬に保護免疫を誘発することを特徴とする、子犬をイヌヘルペスウイルス病から保護するためのワクチン製造でのＣＨＶ抗原の使用。抗体転移によって子犬を保護するために妊娠中の雌犬に予防注射することができる抗−ＣＨＶ不活化ワクチンまたはサブユニットワクチン。
Description
【０００１】
本発明は、イヌヘルペスウィルスに対するワクチン接種方法に関するものであ
る。本発明は特にワクチン接種方法およびワクチンと、ワクチン接種方法でのワ
クチンの使用に関するものである。
る。本発明は特にワクチン接種方法およびワクチンと、ワクチン接種方法でのワ
クチンの使用に関するものである。
【０００２】
イヌヘルペスウィルス（Canine Herpesvirus、ＣＨＶ）が初めて記載されたの
は１９６５年である(L.E. Carmichael, Am. J. Vet. Res., 1965, 26, 803-814)
。その後、イヌヘルペスウィルスによる感染が多くの国（米国、フランス、イギ
リス、スイス、イタリア、日本、オーストラリア、ニュージーランド、その他）
で確認された。 ＣＨＶはイヌ育種時の生殖の問題に対して重要であり、特に新生児子犬の死亡
率が高いことは育種家に大きな損失をもたらす。ＣＨＶはさらに、流産および死
産にも関係がある。さらに、ＣＨＶに感染した雌犬は受精能力が疑われる。ＣＨ
Ｖの伝染は性病感染、口鼻経路または経胎盤で行われる。 ＣＨＶはヘルペスビリダエ(Herpesviridae)群およびアルファヘルペスビリナ
エ(Alphaherpesvirinae)の亜種群に属する。現在までに同定されたのはＣＨＶの
一つのタイプだけである。これは二本鎖ＤＮＡ分子を含むエンィロップを有する
ウィルスである。このエンベロープはウイルス起源のいくつかのグリコプロテイ
ンを含んでいる。これらのグリコプロテインｇＢ、ｇＣとｇＤがハツカネズミの
中和抗体の誘起に関与している。
は１９６５年である(L.E. Carmichael, Am. J. Vet. Res., 1965, 26, 803-814)
。その後、イヌヘルペスウィルスによる感染が多くの国（米国、フランス、イギ
リス、スイス、イタリア、日本、オーストラリア、ニュージーランド、その他）
で確認された。 ＣＨＶはイヌ育種時の生殖の問題に対して重要であり、特に新生児子犬の死亡
率が高いことは育種家に大きな損失をもたらす。ＣＨＶはさらに、流産および死
産にも関係がある。さらに、ＣＨＶに感染した雌犬は受精能力が疑われる。ＣＨ
Ｖの伝染は性病感染、口鼻経路または経胎盤で行われる。 ＣＨＶはヘルペスビリダエ(Herpesviridae)群およびアルファヘルペスビリナ
エ(Alphaherpesvirinae)の亜種群に属する。現在までに同定されたのはＣＨＶの
一つのタイプだけである。これは二本鎖ＤＮＡ分子を含むエンィロップを有する
ウィルスである。このエンベロープはウイルス起源のいくつかのグリコプロテイ
ンを含んでいる。これらのグリコプロテインｇＢ、ｇＣとｇＤがハツカネズミの
中和抗体の誘起に関与している。
【０００３】
抗原的としてはＣＨＶはネコヘルペスウィルスに近い(J.A. Lincumpao et al.
, Arch. Virol., 1990, 111, 165-176)が、有意な交叉中和性はない(X. Xuan et
al., Arch.. Virol., 1992,122, 359-365)。ＣＨＶは宿主に強く依存し、イヌ
起源の細胞でしか増殖しない(Pierson et al., recueil de Medecine Veterinai
re, March/April 1998, 174 No. 3/4, 87-94)。 生まれてから最初の３週間の間の新生児子犬はＣＨＶを対する感染に対して非
常に敏感であり、汚染は出産時または生後第一日目に起る。従って、子犬に予防
注射をすることは不可能である。そのため、利用可能な唯一の保護手段は赤外線
ランプで子犬を温めるか、血清療法で衛生学的に保護することだけである。しか
し、ＣＨＶは免疫原性がなく、良い血清を製造するのが困難である(L.E. Carmic
hael, J. Am. Vet. Med. Assoc., 1970, 156, 1714-1721)。
, Arch. Virol., 1990, 111, 165-176)が、有意な交叉中和性はない(X. Xuan et
al., Arch.. Virol., 1992,122, 359-365)。ＣＨＶは宿主に強く依存し、イヌ
起源の細胞でしか増殖しない(Pierson et al., recueil de Medecine Veterinai
re, March/April 1998, 174 No. 3/4, 87-94)。 生まれてから最初の３週間の間の新生児子犬はＣＨＶを対する感染に対して非
常に敏感であり、汚染は出産時または生後第一日目に起る。従って、子犬に予防
注射をすることは不可能である。そのため、利用可能な唯一の保護手段は赤外線
ランプで子犬を温めるか、血清療法で衛生学的に保護することだけである。しか
し、ＣＨＶは免疫原性がなく、良い血清を製造するのが困難である(L.E. Carmic
hael, J. Am. Vet. Med. Assoc., 1970, 156, 1714-1721)。
【０００４】
自然の条件下では子犬は血清陽性な雌犬の初乳中に存在するＣＨＶ中和抗体に
よって保護される。この抗体がない場合には子犬はＣＨＶによる感染に対して極
めて敏感である(D.L. Huxsoll and I.E. Hemelt, J. Am. Vet. Med. Assoc., 19
70, 156, 1706-1713)。危険に曝される動物は、未感染の雌犬から生まれ、排泄
物と接触する機会のある子犬と、血清陰性であるか、血清陽性度ではあるがそれ
が弱い既感染雌犬から生まれた子犬である。ＣＨＶ−中和抗体は長時間持続しな
いので、動物は感染し、血清陰性であることが多い。 ＣＨＶは生まれて３週間以内に子犬に新生児ヘルペスウイルス病を起す。これ
が致命的にあることがしばしばある。急増殖し、通常は、子犬は突発的な低温症
および猛烈な神経障害以外には格別の徴候なしに数日以内、大抵の場合には５日
以内に死ぬ。これほど急激でない場合には、低温症の徴候の後に食欲低下、欝、
徐脈、低血糖、皮下水腫、紅斑、腹腔の腹面丘疹、軟質黄色発疹、痛覚、おう吐
、鳴き止まず、後弓反張後、２４〜７２時間以内に死亡する。解剖検査では脾臓
肥大、胸膜および腹膜の腔漿液性滲出、臓器点状出血が見られる(Pierson et al
., recueil de Medecine Veterinaire, March/April 1998, 174 No. 3/4, 87-94
)。この文献にはイヌヘルペスウイルス病を防ぐワクチンは現在市場に出ていな
いことと、野生株のウイルスの再活性化を弱毒化するために、潜在感染育種家へ
の予防注射が有用であることを示唆している。
よって保護される。この抗体がない場合には子犬はＣＨＶによる感染に対して極
めて敏感である(D.L. Huxsoll and I.E. Hemelt, J. Am. Vet. Med. Assoc., 19
70, 156, 1706-1713)。危険に曝される動物は、未感染の雌犬から生まれ、排泄
物と接触する機会のある子犬と、血清陰性であるか、血清陽性度ではあるがそれ
が弱い既感染雌犬から生まれた子犬である。ＣＨＶ−中和抗体は長時間持続しな
いので、動物は感染し、血清陰性であることが多い。 ＣＨＶは生まれて３週間以内に子犬に新生児ヘルペスウイルス病を起す。これ
が致命的にあることがしばしばある。急増殖し、通常は、子犬は突発的な低温症
および猛烈な神経障害以外には格別の徴候なしに数日以内、大抵の場合には５日
以内に死ぬ。これほど急激でない場合には、低温症の徴候の後に食欲低下、欝、
徐脈、低血糖、皮下水腫、紅斑、腹腔の腹面丘疹、軟質黄色発疹、痛覚、おう吐
、鳴き止まず、後弓反張後、２４〜７２時間以内に死亡する。解剖検査では脾臓
肥大、胸膜および腹膜の腔漿液性滲出、臓器点状出血が見られる(Pierson et al
., recueil de Medecine Veterinaire, March/April 1998, 174 No. 3/4, 87-94
)。この文献にはイヌヘルペスウイルス病を防ぐワクチンは現在市場に出ていな
いことと、野生株のウイルスの再活性化を弱毒化するために、潜在感染育種家へ
の予防注射が有用であることを示唆している。
【０００５】
F. Delisleの文献 (Rec. Med. Vet., 1982, 158, 669-676)には妊娠前の雌犬
に弱毒ワクチンを予防注射するか、生まれた子犬に血清を注射することを提案し
ている。しかし、彼女は商用ワクチンが利用できないことを述べている。また、
L.E. Carmichael, J. Am. Vet. Med. Assoc., 1970, 156, 1714-1721も参照のこ
と。彼の文献「イヌヘルペスウイルス」(Virus Infections Vertebrates、vol.1
、 MC Horzinek編、M.J.Appel、Elservier Science Publisher、1987、5-15)の
Ａでは妊娠前または初期に雌犬に弱毒ワクチンを予防注射することを提案してい
る。 H.Poulet and P. Dubourget (Point Vet., 1993, 25, 69-75)は、一般論とし
て、妊娠の終わりに母犬に追加抗原刺激ワクチン接種をすることを１９９２年に
提案している。この著者は弱毒生ワクチンが有効であることを記載している（L.
E. Carmichael et al., Infection and Immunity, 1978, 20(1), 108-114、US-A
-4213965、「「狭い意味」でのＣＨＶウィルスの熱に敏感な変異株からなる弱毒
化生ワクチン」）が、この実験には結果や収率の記載がなく、ワクチンを商業化
するには至らなかった。
に弱毒ワクチンを予防注射するか、生まれた子犬に血清を注射することを提案し
ている。しかし、彼女は商用ワクチンが利用できないことを述べている。また、
L.E. Carmichael, J. Am. Vet. Med. Assoc., 1970, 156, 1714-1721も参照のこ
と。彼の文献「イヌヘルペスウイルス」(Virus Infections Vertebrates、vol.1
、 MC Horzinek編、M.J.Appel、Elservier Science Publisher、1987、5-15)の
Ａでは妊娠前または初期に雌犬に弱毒ワクチンを予防注射することを提案してい
る。 H.Poulet and P. Dubourget (Point Vet., 1993, 25, 69-75)は、一般論とし
て、妊娠の終わりに母犬に追加抗原刺激ワクチン接種をすることを１９９２年に
提案している。この著者は弱毒生ワクチンが有効であることを記載している（L.
E. Carmichael et al., Infection and Immunity, 1978, 20(1), 108-114、US-A
-4213965、「「狭い意味」でのＣＨＶウィルスの熱に敏感な変異株からなる弱毒
化生ワクチン」）が、この実験には結果や収率の記載がなく、ワクチンを商業化
するには至らなかった。
【０００６】
J.O. Anvikの文献(Vet. Med., April 1991, 4, 394-403)は、ＣＨＶウィルス
は免疫原性が低いため、母犬、従って、その小犬での保護中和抗体の産生は予測
できないことを記載している。 このワクチン接種が困難であるため、Pierson et al. (recueil de Medecine
Veterinaire, March/ April 1998, 174 No.3/4, 87-94)は、ネコ科の動物のヘル
ペスウィルス（ＦＨＶ）の予防用の弱毒ワクチンを母犬に予防注射するか、生ま
れた子犬に抗−Ｆｌｙ抗体を投与することを提案している。 現在まで、このワクチン接種に対する仮定はどれも不確かであり、ワクチンは
上市れず、このワクチンの切迫した市場に説得性のあるワクチン接種結果を報告
した文献はなかった。 さらに、妊娠中の雌犬がＣＨＶに感染すると、胎児性再吸収、胎児性ミイラ化
、流産または未熟出産、死産、新生児死亡に至ることがある。胎盤傷害が現れる
こともある。 他の動物種であるネコに対する各種ヘルペスウィルスを防ぐためのワクチンは
存在するにもかかわらず、イヌヘルペスウイルス病に対して効果的なワクチン接
種法はこれまで提案されたことはない。
は免疫原性が低いため、母犬、従って、その小犬での保護中和抗体の産生は予測
できないことを記載している。 このワクチン接種が困難であるため、Pierson et al. (recueil de Medecine
Veterinaire, March/ April 1998, 174 No.3/4, 87-94)は、ネコ科の動物のヘル
ペスウィルス（ＦＨＶ）の予防用の弱毒ワクチンを母犬に予防注射するか、生ま
れた子犬に抗−Ｆｌｙ抗体を投与することを提案している。 現在まで、このワクチン接種に対する仮定はどれも不確かであり、ワクチンは
上市れず、このワクチンの切迫した市場に説得性のあるワクチン接種結果を報告
した文献はなかった。 さらに、妊娠中の雌犬がＣＨＶに感染すると、胎児性再吸収、胎児性ミイラ化
、流産または未熟出産、死産、新生児死亡に至ることがある。胎盤傷害が現れる
こともある。 他の動物種であるネコに対する各種ヘルペスウィルスを防ぐためのワクチンは
存在するにもかかわらず、イヌヘルペスウイルス病に対して効果的なワクチン接
種法はこれまで提案されたことはない。
【０００７】
本発明の目的は、イヌヘルペスウイルス病から子犬を保護することができるに
ワクチン接種方法を開発することにある。 本発明の別の目的は、このワクチン接種方法で使用可能な効率的な薬学的に許
容されるワクチンを作ることにある。
ワクチン接種方法を開発することにある。 本発明の別の目的は、このワクチン接種方法で使用可能な効率的な薬学的に許
容されるワクチンを作ることにある。
【０００８】
本発明者は、驚いたことに、妊娠期間中、特に出産にできるだけ近い時に、子
犬への母犬の抗体の伝達によって新生児の小犬を確実に保護できるレベルの高レ
ベルの抗−ＣＨＶ抗体度となるように妊娠した母犬の出産時にワクチン投与する
ことによって、妊娠中の雌犬および新生児子犬に予防注射をすることが可能であ
るということが見出した。 この抗体はこの疾患に罹りやすい生後３〜４週間の間、子犬に実質的に維持さ
れる。雌犬での中和抗体の力価は０．９ｌｏｇ10以上、好しくは１．２ｌｏｇ10 以上のである。この力価（titre）は実施例７に記載の方法で計算される。また
、雌犬へのワクチン接種によって子犬の感染圧力は減少する。
犬への母犬の抗体の伝達によって新生児の小犬を確実に保護できるレベルの高レ
ベルの抗−ＣＨＶ抗体度となるように妊娠した母犬の出産時にワクチン投与する
ことによって、妊娠中の雌犬および新生児子犬に予防注射をすることが可能であ
るということが見出した。 この抗体はこの疾患に罹りやすい生後３〜４週間の間、子犬に実質的に維持さ
れる。雌犬での中和抗体の力価は０．９ｌｏｇ10以上、好しくは１．２ｌｏｇ10 以上のである。この力価（titre）は実施例７に記載の方法で計算される。また
、雌犬へのワクチン接種によって子犬の感染圧力は減少する。
【０００９】
本発明者はさらに、予防注射した雌犬は汚染生育環境下でも高レベルの出産率
と妊娠率とを維持し、子犬の重量が高くなる傾向があることを観測した。これら
の現象は予防注射された雌犬の胎盤傷害の減少または不存在によって説明できる
(A. Hashimoto et al., Am. J. Vet. Res.., 1979, 40(9), 1236-1240; A. Hash
imoto et al., Am. J. Vet. Res., 1982, 43(5), 844-850)。
と妊娠率とを維持し、子犬の重量が高くなる傾向があることを観測した。これら
の現象は予防注射された雌犬の胎盤傷害の減少または不存在によって説明できる
(A. Hashimoto et al., Am. J. Vet. Res.., 1979, 40(9), 1236-1240; A. Hash
imoto et al., Am. J. Vet. Res., 1982, 43(5), 844-850)。
【００１０】
既に述べたように、本発明の対象は、妊娠の最終第３週（イヌの平均値妊娠期
間は約６３日である）中に、できる限り出産日に近い時、特に出産予定日の１〜
１５日前、好ましくは１〜２０日前、さらに好ましくは５〜１５日前、特に好ま
しくは５〜１０日前、典型的には約１０日前に妊娠中の雌犬に高レベルの抗−Ｃ
ＨＶ抗体をワクチン投与して、母性の抗体転移によって乳児の間に子犬に保護を
誘発する方法にある。この抗体は子犬がこの疾患に罹りやすい（生後３〜４週間
）の期間、実質的に維持される。
間は約６３日である）中に、できる限り出産日に近い時、特に出産予定日の１〜
１５日前、好ましくは１〜２０日前、さらに好ましくは５〜１５日前、特に好ま
しくは５〜１０日前、典型的には約１０日前に妊娠中の雌犬に高レベルの抗−Ｃ
ＨＶ抗体をワクチン投与して、母性の抗体転移によって乳児の間に子犬に保護を
誘発する方法にある。この抗体は子犬がこの疾患に罹りやすい（生後３〜４週間
）の期間、実質的に維持される。
【００１１】
抗原は、本発明のワクチンでの有効量で、妊娠中の雌犬および新産児の子犬に
投与プロトコルの条件下で高い保護レベルの抗体を誘導できるものであり、不活
化ＣＨＶウィルス、弱毒化ＶＨＶウィルス、ＣＨＶウィルスのサブユニットまた
は組換えで発現される一種以上の抗原等にすることができる。 ワクチンは、出産時点で、妊娠中の雌犬に、約０．９以上のｌｏｇ10、好まし
くは約１．２ｌｏｇ10以上の抗−ＣＨＶ抗体レベル（実施例７に記載の方法で測
定）を産生するつもりであるのが好ましい。 特に、ＣＨＶに対する予防注射を一度もしていない動物の場合には、抗−ＣＨ
Ｖの投与前に動物の他のワクチンを投与して免疫応答を誘発しておくのが好まし
い。これら二回の投与の間の期間は追加抗原刺激効果を誘発するのに十分な時間
、一般には少なくとも２〜３週間を必要とする。最初のワクチン投与は発情から
上記投与前の少なくとも２〜３週間までの間、特に発情から妊娠期間の最初の３
分の１の期間内に行う。これは交尾前に投与することを意味する。交尾の約７〜
１０日前に上記の投与をするのが好ましい。好しくは上記ワクチン接種計画を各
出産毎に行う。 動物がＣＨＶに対する予防注射を既にしている場合には、出産近くに一回投与
するだけで十分である。
投与プロトコルの条件下で高い保護レベルの抗体を誘導できるものであり、不活
化ＣＨＶウィルス、弱毒化ＶＨＶウィルス、ＣＨＶウィルスのサブユニットまた
は組換えで発現される一種以上の抗原等にすることができる。 ワクチンは、出産時点で、妊娠中の雌犬に、約０．９以上のｌｏｇ10、好まし
くは約１．２ｌｏｇ10以上の抗−ＣＨＶ抗体レベル（実施例７に記載の方法で測
定）を産生するつもりであるのが好ましい。 特に、ＣＨＶに対する予防注射を一度もしていない動物の場合には、抗−ＣＨ
Ｖの投与前に動物の他のワクチンを投与して免疫応答を誘発しておくのが好まし
い。これら二回の投与の間の期間は追加抗原刺激効果を誘発するのに十分な時間
、一般には少なくとも２〜３週間を必要とする。最初のワクチン投与は発情から
上記投与前の少なくとも２〜３週間までの間、特に発情から妊娠期間の最初の３
分の１の期間内に行う。これは交尾前に投与することを意味する。交尾の約７〜
１０日前に上記の投与をするのが好ましい。好しくは上記ワクチン接種計画を各
出産毎に行う。 動物がＣＨＶに対する予防注射を既にしている場合には、出産近くに一回投与
するだけで十分である。
【００１２】
投与または追加の投与は、出産まじかに投与するものとは異なる組成を有する
ワクチンで実行することができる。この違いは抗原および／またはワクチンの調
合で行うことができる。 ワクチンは腸管外経路、好ましくは皮下または筋肉経路で投与することができ
る。投与量は０．２〜２ｍｌ、好ましくは約１ｍｌである。 本発明の他の対象は、上記プロトコルに従って投与されるイヌヘルペスウイル
ス病に対するワクチンの製造でのＣＨＶ抗原の使用にある。 当業者はワクチンのタイプに応じて各ワクチンの服用量を正確に定義すること
ができる。 動物に複数の投与を行う場合に使われるワクチンは異なるタイプにすることが
でき、特に上記の中から選択することができる。 本発明のさらに他の対象は、上記のワクチン接種法で使用可能な弱毒ワクチン
またはサブユニットワクチンにある。
ワクチンで実行することができる。この違いは抗原および／またはワクチンの調
合で行うことができる。 ワクチンは腸管外経路、好ましくは皮下または筋肉経路で投与することができ
る。投与量は０．２〜２ｍｌ、好ましくは約１ｍｌである。 本発明の他の対象は、上記プロトコルに従って投与されるイヌヘルペスウイル
ス病に対するワクチンの製造でのＣＨＶ抗原の使用にある。 当業者はワクチンのタイプに応じて各ワクチンの服用量を正確に定義すること
ができる。 動物に複数の投与を行う場合に使われるワクチンは異なるタイプにすることが
でき、特に上記の中から選択することができる。 本発明のさらに他の対象は、上記のワクチン接種法で使用可能な弱毒ワクチン
またはサブユニットワクチンにある。
【００１３】
ＣＨＶサブユニットを使用した報告はハツカネズミに関するものしかない(J.A
。Limcumpao et al., J. Vet。Med。Sd.、1991、53(3)、423-432)。しかし、こ
の文書にも記載されているように、ハツカネズミで得られたデータをイヌの生物
種に推論することはできない。すなわち、精製されたグリコプロテインｇｐ１４
５／１１２、ｇｐ８Ｏおよびｇｐ４７で得られる抗体価は検出可能な抗体応答を
誘発するが、この抗体価が保護に反映されるか否かを決定すること不可能である
。なぜなら、マウスはＣＨＶウィルスに感じないので、この生物種のウイルス抗
原投与モデルを開発することはできないためである。また、ＣＨＶに起因する細
胞免疫で利用できるデータはない。さらに、ハツカネズミで得られる抗体価とイ
ヌで得られる抗体価との間の関係は未知であり、これらの力価は互いに異なるで
あろう。事実、タイプ１のウシヘルペスグリコプロテインｇIで免疫したウサギ
は、ｇIIIで免疫したウサギより高い中和力価を有し、一方、ウシではグリコプ
ロテインｇＩＶは最も高い中和力価を誘発し、グリコプロテインｇＩは最も低い
免疫しか示さないということが発表されている。これらのデータは実験動物の結
果を標的生物種へ置き換えることの困難性を示している。
。Limcumpao et al., J. Vet。Med。Sd.、1991、53(3)、423-432)。しかし、こ
の文書にも記載されているように、ハツカネズミで得られたデータをイヌの生物
種に推論することはできない。すなわち、精製されたグリコプロテインｇｐ１４
５／１１２、ｇｐ８Ｏおよびｇｐ４７で得られる抗体価は検出可能な抗体応答を
誘発するが、この抗体価が保護に反映されるか否かを決定すること不可能である
。なぜなら、マウスはＣＨＶウィルスに感じないので、この生物種のウイルス抗
原投与モデルを開発することはできないためである。また、ＣＨＶに起因する細
胞免疫で利用できるデータはない。さらに、ハツカネズミで得られる抗体価とイ
ヌで得られる抗体価との間の関係は未知であり、これらの力価は互いに異なるで
あろう。事実、タイプ１のウシヘルペスグリコプロテインｇIで免疫したウサギ
は、ｇIIIで免疫したウサギより高い中和力価を有し、一方、ウシではグリコプ
ロテインｇＩＶは最も高い中和力価を誘発し、グリコプロテインｇＩは最も低い
免疫しか示さないということが発表されている。これらのデータは実験動物の結
果を標的生物種へ置き換えることの困難性を示している。
【００１４】
本発明によって、弱毒ワクチンまたはサブユニットワクチンを使用して雌犬ま
たはその子に何のリスクも与えずに妊娠期間中にワクチン接種ができるようにな
った。妊娠の最後に行うこの追加抗原刺激ワクチン接種は出産に対して中和抗体
の最適力価を保証する手段である。この力価条件によって雌犬からその子犬へ乳
児の開始時の保護が中和抗体の転移によって得られる。 ＣＨＶウィルスの培養および繁殖はイヌの一次細胞または細胞系、特に細胞当
たり０．１〜０．００１の組織培養５０％感染量（ＴＣＩＤ50）、好ましくは０
．０１ＴＣＩＤ50／細胞の量で多重感染（moi）させたＭＤＣＫタイプ(Madin-Da
rby Canine KidneyすなわちAmerican Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）に
ＣＣＬ−３４の番号で入手可能な株)のイヌ腎臓細胞で行うのが好ましい。ＣＨ
Ｖウィルスは３〜４日後に取り入れられた。約１０6〜１０8ＴＣＩＤ50／ｍｌ、
一般には１０6.6〜１０7.5ＴＣＩＤ50／ｍｌのウイルス力価が得られる。
たはその子に何のリスクも与えずに妊娠期間中にワクチン接種ができるようにな
った。妊娠の最後に行うこの追加抗原刺激ワクチン接種は出産に対して中和抗体
の最適力価を保証する手段である。この力価条件によって雌犬からその子犬へ乳
児の開始時の保護が中和抗体の転移によって得られる。 ＣＨＶウィルスの培養および繁殖はイヌの一次細胞または細胞系、特に細胞当
たり０．１〜０．００１の組織培養５０％感染量（ＴＣＩＤ50）、好ましくは０
．０１ＴＣＩＤ50／細胞の量で多重感染（moi）させたＭＤＣＫタイプ(Madin-Da
rby Canine KidneyすなわちAmerican Type Culture Collection（ＡＴＣＣ）に
ＣＣＬ−３４の番号で入手可能な株)のイヌ腎臓細胞で行うのが好ましい。ＣＨ
Ｖウィルスは３〜４日後に取り入れられた。約１０6〜１０8ＴＣＩＤ50／ｍｌ、
一般には１０6.6〜１０7.5ＴＣＩＤ50／ｍｌのウイルス力価が得られる。
【００１５】
弱毒ワクチンを得るにはＣＨＶウィルスを不活化する。特に、収穫および清浄
後に化学処理（例えばホルマリンまたはホルムアルデヒド、β−プロピオラクト
ン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ））および／または熱
処理によって不活化するのが好ましい。好ましくは、本発明のウィルスをエチレ
ンイミンの作用で不活化する。ウィルス粒子を従来の濃縮法、特に限外濾過で濃
縮し、および／または、従来の精製手段、ゲル濾過、蔗糖勾配超遠心分離または
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の存在下での選択沈降によって精製する。 サブユニットワクチンは抽出サブユニットワクチンである、すなわち、全部の
ウィルスまたはこのウィルス主要画分（例えば、カプシッド除去の後）から調整
するのが好ましい。このワクチンは各種のエンベロープグリコプロテインまたは
エンベロープグリコプロテイン混合物を含むことができる。サブユニットワクチ
ンは不活化ウイルス、特に上記のようにして不活化したウイルスの懸濁液から作
るのが好ましい。主としてエンベロープグリコプロテインを含むサブユニットワ
クチンを得るために、ウィルス粒子の懸濁液（好ましくは上記のようにして不活
化したもの）に適切な洗剤（特に非イオン界面活性剤）、好ましくはＨＬＢが１
２〜１５の間のエトキシ化アルコールを作用させるのが好ましい。次に、超遠心
分離を用いてウイルスのカプシッドを除去する。カプシッドを除去してエンベロ
ープグリコプロテインを集めるために当業者は他の方法を利用することができる
。
後に化学処理（例えばホルマリンまたはホルムアルデヒド、β−プロピオラクト
ン、エチレンイミン、バイナリーエチレンイミン（ＢＥＩ））および／または熱
処理によって不活化するのが好ましい。好ましくは、本発明のウィルスをエチレ
ンイミンの作用で不活化する。ウィルス粒子を従来の濃縮法、特に限外濾過で濃
縮し、および／または、従来の精製手段、ゲル濾過、蔗糖勾配超遠心分離または
ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の存在下での選択沈降によって精製する。 サブユニットワクチンは抽出サブユニットワクチンである、すなわち、全部の
ウィルスまたはこのウィルス主要画分（例えば、カプシッド除去の後）から調整
するのが好ましい。このワクチンは各種のエンベロープグリコプロテインまたは
エンベロープグリコプロテイン混合物を含むことができる。サブユニットワクチ
ンは不活化ウイルス、特に上記のようにして不活化したウイルスの懸濁液から作
るのが好ましい。主としてエンベロープグリコプロテインを含むサブユニットワ
クチンを得るために、ウィルス粒子の懸濁液（好ましくは上記のようにして不活
化したもの）に適切な洗剤（特に非イオン界面活性剤）、好ましくはＨＬＢが１
２〜１５の間のエトキシ化アルコールを作用させるのが好ましい。次に、超遠心
分離を用いてウイルスのカプシッドを除去する。カプシッドを除去してエンベロ
ープグリコプロテインを集めるために当業者は他の方法を利用することができる
。
【００１６】
弱毒ワクチンまたはサブユニットワクチンを作るために、獣医学的に許容され
るビヒクルまたは賦形剤中に抗原を採り、好ましくは獣医学的に許容されるアジ
ュバントをそれに加える。抗原の量は不活性化前の当量で一回当たり約１０5〜
約１０9.5ＴＣＩＤ50、特に約１０5〜約１０9ＴＣ１Ｄ50にする。弱毒ワクチン
の場合には、不活性化の前の力価を一回当たり約ｌ０5〜約１０9ＴＣＩＤ50、特
に約１０6〜約１０8ＴＣＩＤ５０にする。サブユニットワクチンの場合には不活
性化の前の力価で一回当たり約ｌ０6〜約１０9.5、特に１０7〜約１０9、好まし
くは約１０7.5〜１０8.5にする。特に、サブユニットワクチンの場合にはワクチ
ンはＥＬＩＳＡで測定されるグリコプロテインｇＢの力価を一回当たり約０．０
１μｇ〜約３０μｇ、好ましくは約０．１μｇ〜約１０μｇ、さらに好ましくは
約０．３μｇ〜約３μｇである。 本発明のワクチンは５℃で調剤され、保存され、好ましは凍結乾燥の形態で保
存され、好ましくは安定化剤、特にＳＰＧＡ（サッカロース、リン酸塩、グルタ
メート、アルブミン、EP-Bl-0 008 255）を入れて保存する。このワクチンは後
で溶媒（ビヒクルまたは賦形剤および／またはアジュバント）に溶かすことがで
きる。
るビヒクルまたは賦形剤中に抗原を採り、好ましくは獣医学的に許容されるアジ
ュバントをそれに加える。抗原の量は不活性化前の当量で一回当たり約１０5〜
約１０9.5ＴＣＩＤ50、特に約１０5〜約１０9ＴＣ１Ｄ50にする。弱毒ワクチン
の場合には、不活性化の前の力価を一回当たり約ｌ０5〜約１０9ＴＣＩＤ50、特
に約１０6〜約１０8ＴＣＩＤ５０にする。サブユニットワクチンの場合には不活
性化の前の力価で一回当たり約ｌ０6〜約１０9.5、特に１０7〜約１０9、好まし
くは約１０7.5〜１０8.5にする。特に、サブユニットワクチンの場合にはワクチ
ンはＥＬＩＳＡで測定されるグリコプロテインｇＢの力価を一回当たり約０．０
１μｇ〜約３０μｇ、好ましくは約０．１μｇ〜約１０μｇ、さらに好ましくは
約０．３μｇ〜約３μｇである。 本発明のワクチンは５℃で調剤され、保存され、好ましは凍結乾燥の形態で保
存され、好ましくは安定化剤、特にＳＰＧＡ（サッカロース、リン酸塩、グルタ
メート、アルブミン、EP-Bl-0 008 255）を入れて保存する。このワクチンは後
で溶媒（ビヒクルまたは賦形剤および／またはアジュバント）に溶かすことがで
きる。
【００１７】
本発明ワクチンのアジュバントとしては以下のものを使用することができる：
（１）水酸化アルミニウム、（２）アクリル酸またはメタクリル酸ポリマー（無
水マレイン酸とアルケニル誘導体とのポリマー）（３）免疫配列（ＩＳＳ）、特
に非メチル化ＣｐＧ基を有するＤＮＡ配列 (Klinman D. M. et al., Proc. Natl
. Acad. Sci. USA, 1996, 93, 2,879-2883; WO-A-9816247)、または、（４）免
疫かワクチンの製造を水中油型乳剤（特に、記載されるＳＰＴエマルション）の
形で調剤するために（４）M. Powell and M. Newman, Plenum Press（1995）編
の≡Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach≡の第147頁に記載の
水中油型乳剤、特にSPTエマルションおよび同書の第183頁に記載のエマルション
ＭＦ５９。 水中油型乳剤は軽質流動パラフィン油（Pharmacopea europeenneタイプ）、イ
ソプレノイド油、例えばスクアランまたはスクアレン、アルケン特にイソブテン
またはデセンのオリゴマー化で得られる油、直鎖アルキル基を有する酸またはア
ルコールのエステル、特に植物油、オレイン酸エチル、プロピレングリコールジ
（カプリレート／カプラート）、グリセリルトリ（カプリレート／カプラート）
またはプロピレングリコールジオレエート、分枝脂肪酸またはアルコールのエス
テル、特にイソステアリン酸エステル。これらの油はエマルションにするための
乳化剤と一緒に用いられる。この乳化剤は非イオン性界面活性剤であるのが好ま
しく、特にソルビタン、マンニッドのエステル（例えばアンヒドロマンニトール
オレエート）、グリセリン、ポリグリセリン、プロピレングリコールとオレイン
酸、イソステアリン酸、リシノレイン酸、エトキシ化されていてもよいヒドロキ
システアリン酸のエステル、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンコポリ
マー、特にプルロニック(Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、登録商標)の特にＬ１２１が好まし
い。
（１）水酸化アルミニウム、（２）アクリル酸またはメタクリル酸ポリマー（無
水マレイン酸とアルケニル誘導体とのポリマー）（３）免疫配列（ＩＳＳ）、特
に非メチル化ＣｐＧ基を有するＤＮＡ配列 (Klinman D. M. et al., Proc. Natl
. Acad. Sci. USA, 1996, 93, 2,879-2883; WO-A-9816247)、または、（４）免
疫かワクチンの製造を水中油型乳剤（特に、記載されるＳＰＴエマルション）の
形で調剤するために（４）M. Powell and M. Newman, Plenum Press（1995）編
の≡Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach≡の第147頁に記載の
水中油型乳剤、特にSPTエマルションおよび同書の第183頁に記載のエマルション
ＭＦ５９。 水中油型乳剤は軽質流動パラフィン油（Pharmacopea europeenneタイプ）、イ
ソプレノイド油、例えばスクアランまたはスクアレン、アルケン特にイソブテン
またはデセンのオリゴマー化で得られる油、直鎖アルキル基を有する酸またはア
ルコールのエステル、特に植物油、オレイン酸エチル、プロピレングリコールジ
（カプリレート／カプラート）、グリセリルトリ（カプリレート／カプラート）
またはプロピレングリコールジオレエート、分枝脂肪酸またはアルコールのエス
テル、特にイソステアリン酸エステル。これらの油はエマルションにするための
乳化剤と一緒に用いられる。この乳化剤は非イオン性界面活性剤であるのが好ま
しく、特にソルビタン、マンニッドのエステル（例えばアンヒドロマンニトール
オレエート）、グリセリン、ポリグリセリン、プロピレングリコールとオレイン
酸、イソステアリン酸、リシノレイン酸、エトキシ化されていてもよいヒドロキ
システアリン酸のエステル、ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンコポリ
マー、特にプルロニック(Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、登録商標)の特にＬ１２１が好まし
い。
【００１８】
アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーは特に糖または多価アルコールのポ
リアルケニルエーテルで架橋される。これはカルボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ）(P
harmeuropa vol. 8, No. 2, June 1996)の名称で公知の化合物である。当業者は
米国特許第2909462号（この内容は本明細書の一部を成す）を参照できる。この
特許には少なくとも３つ、好ましくは８つ以下の水酸基を有し、少なくとも３つ
のヒドロキシルの水素原子が少なくとも２つの炭素原子を含む不飽和脂肪族基で
置換されたポリヒドロキシレート化物で架橋されたアクリル重合体が記載されて
いる。好ましい基は２〜４つの炭素原子を有する基、例えばビニル、アリル、そ
の他のエチレン性不飽和基である。不飽和基はそれ自体が他の置換基（例えばメ
チル）を含むことができる。特に、カルボプル（Ｃａｒｂｏｐｏｌ、登録商標）
の名称で市販の製品(EF Goodrich, Ohio, USA)が適している。これはアリルサッ
カロースまたはアリルペンタエリトリトールで架橋されている。これらの中では
特にカルボプル（Ｃａｒｂｏｐｏｌ、登録商標）９３４Ｐと９７１Ｐ〜９７４Ｐ
を挙げることができる。 無水マレイン酸とアルケニル誘導体とのコポリマーの中では無水マレイン酸と
直鎖または架橋した、例えばジビニルエーテルで架橋したエチレンとのコポリマ
ーであるＥＭＡ（登録商標）（モンサント）が好しい。これに関してはJ. Field
s et al., Nature, 186, 778-780, 4 June 1960 (この内容は本明細書の一部を
成す)を参照されたい。アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーおよびＥＭＡ
（登録商標）の構造は以下の式の単位から成るのが好ましい：
リアルケニルエーテルで架橋される。これはカルボマー（ｃａｒｂｏｍｅｒ）(P
harmeuropa vol. 8, No. 2, June 1996)の名称で公知の化合物である。当業者は
米国特許第2909462号（この内容は本明細書の一部を成す）を参照できる。この
特許には少なくとも３つ、好ましくは８つ以下の水酸基を有し、少なくとも３つ
のヒドロキシルの水素原子が少なくとも２つの炭素原子を含む不飽和脂肪族基で
置換されたポリヒドロキシレート化物で架橋されたアクリル重合体が記載されて
いる。好ましい基は２〜４つの炭素原子を有する基、例えばビニル、アリル、そ
の他のエチレン性不飽和基である。不飽和基はそれ自体が他の置換基（例えばメ
チル）を含むことができる。特に、カルボプル（Ｃａｒｂｏｐｏｌ、登録商標）
の名称で市販の製品(EF Goodrich, Ohio, USA)が適している。これはアリルサッ
カロースまたはアリルペンタエリトリトールで架橋されている。これらの中では
特にカルボプル（Ｃａｒｂｏｐｏｌ、登録商標）９３４Ｐと９７１Ｐ〜９７４Ｐ
を挙げることができる。 無水マレイン酸とアルケニル誘導体とのコポリマーの中では無水マレイン酸と
直鎖または架橋した、例えばジビニルエーテルで架橋したエチレンとのコポリマ
ーであるＥＭＡ（登録商標）（モンサント）が好しい。これに関してはJ. Field
s et al., Nature, 186, 778-780, 4 June 1960 (この内容は本明細書の一部を
成す)を参照されたい。アクリル酸またはメタクリル酸のポリマーおよびＥＭＡ
（登録商標）の構造は以下の式の単位から成るのが好ましい：
【００１９】
【化1】
【００２０】
（ここで、
Ｒ1およびＲ2はＨまたはＣＨ3を表し、互いに同一でも異なっていてもよく、
ｘ＝０または１、好ましくはｘ＝１であり、
ｙ＝１または２で、ｘ＋ｙ＝２である）
【００２１】
EMAコポリマー(登録商標)ではｘ＝０、ｙ＝２であり、カーボマーではｘ＝ｙ
＝１である。 最終ワクチン組成物でのポリマー濃度は０．０１％〜１．５％Ｗ／Ｖ、特に０
．０５％〜１％Ｗ／Ｖ、好ましくは０．１％〜０．４％Ｗ／Ｖである。 特に好しいワクチンの形態は、弱毒ワクチンまたはサブユニットワクチンをア
ンヒドロマンニトールオレエートと、エトキシ化オレイン酸と、軽質流動パラフ
ィン油とから成る水中油型乳剤の形に調剤したものである。妊娠中の雌犬を免疫
化するための本発明方法ではこのワクチンを投与する。好ましくは皮下に2回注
射する。特に上記の投与計画案に従って、例えば最初の注射は妊娠期間の最初の
１／３の期間、好ましくは交尾日の約１０日後にし、第二回目の注射は妊娠期間
の最後の１／３の期間、好ましくは出産予定日の約１０日前に行う。
＝１である。 最終ワクチン組成物でのポリマー濃度は０．０１％〜１．５％Ｗ／Ｖ、特に０
．０５％〜１％Ｗ／Ｖ、好ましくは０．１％〜０．４％Ｗ／Ｖである。 特に好しいワクチンの形態は、弱毒ワクチンまたはサブユニットワクチンをア
ンヒドロマンニトールオレエートと、エトキシ化オレイン酸と、軽質流動パラフ
ィン油とから成る水中油型乳剤の形に調剤したものである。妊娠中の雌犬を免疫
化するための本発明方法ではこのワクチンを投与する。好ましくは皮下に2回注
射する。特に上記の投与計画案に従って、例えば最初の注射は妊娠期間の最初の
１／３の期間、好ましくは交尾日の約１０日後にし、第二回目の注射は妊娠期間
の最後の１／３の期間、好ましくは出産予定日の約１０日前に行う。
【００２２】
本発明のさらに他の対象は、上記の弱毒ワクチンまたはサブユニットワクチン
の製造方法にある。 本発明のさらに他の対象は多価ワクチンにある。この多価ワクチンは不活化し
たイヌヘルペスウィルスまたはイヌヘルペスウィルスサブユニットと、少なくと
も一種のイヌの他の病原体から成り、それを獣医学的に許容されるビヒクルまた
は賦形剤中に、好ましくはアジュバント、特に上記アジュバントと一緒に含む。 上記のイヌの病原体はイヌジステンパーウィルス、イヌパルボウィルスおよび
イヌアデノウィルスから成る群の中から選択するのが好ましいが、他のワクチン
価を含むこともできる。 本発明の不活化ＣＨＶワクチンまたはサブユニットワクチンは上記のイヌの他
のワクチン価と同時に投与するか、別々に投与することができる。すなわち、イ
ヌの他のワクチンを生ワクチン、弱毒ワクチン、サブユニットワクチン、組換え
型ワクチンまたはポリヌクレオチドワクチンの形に製造し、それと同時または前
後して投与できる。
の製造方法にある。 本発明のさらに他の対象は多価ワクチンにある。この多価ワクチンは不活化し
たイヌヘルペスウィルスまたはイヌヘルペスウィルスサブユニットと、少なくと
も一種のイヌの他の病原体から成り、それを獣医学的に許容されるビヒクルまた
は賦形剤中に、好ましくはアジュバント、特に上記アジュバントと一緒に含む。 上記のイヌの病原体はイヌジステンパーウィルス、イヌパルボウィルスおよび
イヌアデノウィルスから成る群の中から選択するのが好ましいが、他のワクチン
価を含むこともできる。 本発明の不活化ＣＨＶワクチンまたはサブユニットワクチンは上記のイヌの他
のワクチン価と同時に投与するか、別々に投与することができる。すなわち、イ
ヌの他のワクチンを生ワクチン、弱毒ワクチン、サブユニットワクチン、組換え
型ワクチンまたはポリヌクレオチドワクチンの形に製造し、それと同時または前
後して投与できる。
【００２３】
本発明のさらに他の対象は上記の多価ワクチンのキットまたはパックにある。
このキットは本発明のＣＨＶワクチン価と、上記の少なくとも一種のイヌの他の
病原体の少なくとも一種のワクチン価と、獣医学的に許容されるビヒクルまたは
賦形剤、好ましくはさらにアジュバントとを別々に包装したものから成る。本発
明のＣＨＶワクチン価は、イヌの他のワクチン価、特に凍結乾燥された形態の弱
毒化、組換え型またはポリヌクレオチドワクチンに対する溶媒として用いること
ができる。 以下、本発明の実施例を説明するが、本発明が以下の実施例に限定されるもの
ではない。
このキットは本発明のＣＨＶワクチン価と、上記の少なくとも一種のイヌの他の
病原体の少なくとも一種のワクチン価と、獣医学的に許容されるビヒクルまたは
賦形剤、好ましくはさらにアジュバントとを別々に包装したものから成る。本発
明のＣＨＶワクチン価は、イヌの他のワクチン価、特に凍結乾燥された形態の弱
毒化、組換え型またはポリヌクレオチドワクチンに対する溶媒として用いること
ができる。 以下、本発明の実施例を説明するが、本発明が以下の実施例に限定されるもの
ではない。
【００２４】
【実施例】実施例１ ウイルス菌株
使用したイヌヘルペスウィルス菌株はAmerican Type Culture Collection（Ａ
ＴＣＣ）からＶＲ−６４７の番号で入手可能な菌株Ｆ２０５(L.E. Carmichael,
Am. J. Vet. Res., 1965, 26, 803-814)である。
ＴＣＣ）からＶＲ−６４７の番号で入手可能な菌株Ｆ２０５(L.E. Carmichael,
Am. J. Vet. Res., 1965, 26, 803-814)である。
【００２５】実施例２ イヌヘルペスウィルスの培養
Madin-Darby Canine KidneyすなわちＡＴＣＣからＣＣＬ−３４の番号で入手
可能なＭＤＣＫ)のイヌの細胞を２リットルの震盪フラスコ（８５０ｃｍ2）中で
培養した。このフラスコには５％ウシ胎仔血清（Bayer Diagnostic）と、ゲンタ
マイシンを５０ｍｇ濃度／２００，０００細胞／ｍｌの比率で含むダルベッコの
修正イーグル最小培地(DMEM, Gibco BRL)を３５０ｍｌを補った。細胞は５％Ｃ
Ｏ2を含む雰囲気で＋３７℃で培養した。 ３または４日後、細胞層は合流する。培地を５０ｍｇ／ｌのゲンタマイシンを
補給した無血清−ＤＭＥＭ媒体に代え、細胞にイヌヘルペスウィルス（実施例１
）を０．０１ＴＣＩＤ50／細胞の感染多重性（ｍｏｉ）で接種した。ウイルスの
培養は３７℃の温度を維持した。 細胞変性効果（ＣＰＥ）が完了した時（培養の始点から約９６時間後）に、ウ
イルスの懸濁液を採取し、−７０℃で凍結する。必要なウィルスの量に応じて複
数回の継代細胞培養を行ってからウイルス菌を接種する。継代細胞培養およびウ
イルスの培養は生物発生機のマイクロキャリア上で細胞を培養することで実行さ
れる。 ウィルスは次の工程まで５℃で保存する。回収したＣＨＶウィルスの力価は１
０7.2ＴＣＩＤ50／ｍｌである。
可能なＭＤＣＫ)のイヌの細胞を２リットルの震盪フラスコ（８５０ｃｍ2）中で
培養した。このフラスコには５％ウシ胎仔血清（Bayer Diagnostic）と、ゲンタ
マイシンを５０ｍｇ濃度／２００，０００細胞／ｍｌの比率で含むダルベッコの
修正イーグル最小培地(DMEM, Gibco BRL)を３５０ｍｌを補った。細胞は５％Ｃ
Ｏ2を含む雰囲気で＋３７℃で培養した。 ３または４日後、細胞層は合流する。培地を５０ｍｇ／ｌのゲンタマイシンを
補給した無血清−ＤＭＥＭ媒体に代え、細胞にイヌヘルペスウィルス（実施例１
）を０．０１ＴＣＩＤ50／細胞の感染多重性（ｍｏｉ）で接種した。ウイルスの
培養は３７℃の温度を維持した。 細胞変性効果（ＣＰＥ）が完了した時（培養の始点から約９６時間後）に、ウ
イルスの懸濁液を採取し、−７０℃で凍結する。必要なウィルスの量に応じて複
数回の継代細胞培養を行ってからウイルス菌を接種する。継代細胞培養およびウ
イルスの培養は生物発生機のマイクロキャリア上で細胞を培養することで実行さ
れる。 ウィルスは次の工程まで５℃で保存する。回収したＣＨＶウィルスの力価は１
０7.2ＴＣＩＤ50／ｍｌである。
【００２６】実施例３ ＣＨＶウィルスの滴定
ＣＨＶウィルスの滴定は、５％ウシ胎仔血清と５０ｍｇ／ｌのゲンタマイシン
とを補給したＦ１５培地で９６ウエルマイクロプレートで実行した。ウイルス懸
濁液を約３倍に希釈し、０．１５ｍｌ／ウエルで１００，０００の細胞に対して
０．１０ｍｌのウィルス希釈液の比率でマイクロプレートでＭＤＣＫ細胞懸濁液
を混合する。培養後、５％Ｃ０2、３７℃で４〜５日培養し、生成したＣＰＥを
含むウエルをカウントし、カルベ（Ｋａｒｂｅｒ）の方法で５０％組織培養感染
力価（ＴＣＩＤ50）を計算した。
とを補給したＦ１５培地で９６ウエルマイクロプレートで実行した。ウイルス懸
濁液を約３倍に希釈し、０．１５ｍｌ／ウエルで１００，０００の細胞に対して
０．１０ｍｌのウィルス希釈液の比率でマイクロプレートでＭＤＣＫ細胞懸濁液
を混合する。培養後、５％Ｃ０2、３７℃で４〜５日培養し、生成したＣＰＥを
含むウエルをカウントし、カルベ（Ｋａｒｂｅｒ）の方法で５０％組織培養感染
力価（ＴＣＩＤ50）を計算した。
【００２７】実施例４ ウィルスの不活性化
ＣＨＶウィルスを実施例２で説明したように３７℃で６時間培養し、約１２ｍ
Ｍの濃度のエチレンイミンで不活化した。エチレンイミンは使用時点で以下のよ
うにして製造した：２００ｍｌの蒸留水に２８．０ｇの水酸化ナトリウム顆粒を
溶かし、エチレンイミンの１．２Ｍ溶液に対応する６８．１ｇのブロモエチルア
ミン（ＢＥＡ）を加える(H. Bahnemann, Arch. Viral., 1975, 47, 47-56)。不
活化ウイルスの懸濁液を３００ｋＤａ（Filtron）のカットオフ限界を有するUlt
rasetteタイプの限外濾過カセットで濃縮して１００倍に濃縮する。濃縮された
不活化ウィルスは−４０℃で凍結保存することができる。
Ｍの濃度のエチレンイミンで不活化した。エチレンイミンは使用時点で以下のよ
うにして製造した：２００ｍｌの蒸留水に２８．０ｇの水酸化ナトリウム顆粒を
溶かし、エチレンイミンの１．２Ｍ溶液に対応する６８．１ｇのブロモエチルア
ミン（ＢＥＡ）を加える(H. Bahnemann, Arch. Viral., 1975, 47, 47-56)。不
活化ウイルスの懸濁液を３００ｋＤａ（Filtron）のカットオフ限界を有するUlt
rasetteタイプの限外濾過カセットで濃縮して１００倍に濃縮する。濃縮された
不活化ウィルスは−４０℃で凍結保存することができる。
【００２８】実施例５ ウイルスの糖タンパクの抽出
不活化ウィルス（実施例４）を２５００ｇで３０分間遠心分離して精製する。
上澄み液を３００ｋＤａ（Filtron）のカットオフ限界を有するUltrasetteタイ
プの限外濾過カセットで濃縮して５０倍に濃縮する。濃縮物にポリエチレングリ
コール８０００（ＰＥＧ ８０００）８％Ｗ／ｖと塩化ナトリウム４％ｗ／Ｖを
補う。４℃で１６時間接触させた後、２５００ｇで６０分間遠心分離して、ウィ
ルスを沈殿させ、リン酸緩衝液（ＰＢＳ：8g/l NaC1、0.2g/l KC1、0.2g/l KH2P
O4、1.44g/l Na2HPO42H20）で採る。次いで、初期体積の１００分の１の比率の
等張リン酸緩衝液に採る。次に、ウイルス濃縮物を固定角の回転子を有するゾー
ナルロータＴ１４５で蔗糖勾配（３５％および６０％Ｗ／Ｗ ＰＢＳ、２００，
０００ｇ、６０分）で超遠心分離する。界面に回収されたウィルスを約４倍のＰ
ＢＳで希釈する。次に、１．５％ Ｗ／Ｖ濃度のセチルアルコール１０ＯＥ（Ｈ
ＬＢが１３のエトキシ化アルコール）を加え、混合液を３７℃で１時間培養する
。次に、Ｔ１４５ローターで２３０，０００ｇで１時間超遠心分離してカプシッ
ドを沈殿させる。グリコプロテインを含む上澄を集める。このグリコプロテイン
溶液はウルトラフィルターで選択的に濃縮することができる。 精製されたグリコプロテイン溶液はワクチン調合時まで−４０℃で保管する。
上澄み液を３００ｋＤａ（Filtron）のカットオフ限界を有するUltrasetteタイ
プの限外濾過カセットで濃縮して５０倍に濃縮する。濃縮物にポリエチレングリ
コール８０００（ＰＥＧ ８０００）８％Ｗ／ｖと塩化ナトリウム４％ｗ／Ｖを
補う。４℃で１６時間接触させた後、２５００ｇで６０分間遠心分離して、ウィ
ルスを沈殿させ、リン酸緩衝液（ＰＢＳ：8g/l NaC1、0.2g/l KC1、0.2g/l KH2P
O4、1.44g/l Na2HPO42H20）で採る。次いで、初期体積の１００分の１の比率の
等張リン酸緩衝液に採る。次に、ウイルス濃縮物を固定角の回転子を有するゾー
ナルロータＴ１４５で蔗糖勾配（３５％および６０％Ｗ／Ｗ ＰＢＳ、２００，
０００ｇ、６０分）で超遠心分離する。界面に回収されたウィルスを約４倍のＰ
ＢＳで希釈する。次に、１．５％ Ｗ／Ｖ濃度のセチルアルコール１０ＯＥ（Ｈ
ＬＢが１３のエトキシ化アルコール）を加え、混合液を３７℃で１時間培養する
。次に、Ｔ１４５ローターで２３０，０００ｇで１時間超遠心分離してカプシッ
ドを沈殿させる。グリコプロテインを含む上澄を集める。このグリコプロテイン
溶液はウルトラフィルターで選択的に濃縮することができる。 精製されたグリコプロテイン溶液はワクチン調合時まで−４０℃で保管する。
【００２９】実施例６ ワクチン調合物
濃縮された不活化抗原（実施例４）またはサブユニット（実施例５）の溶液を
解凍した後、ＰＢＳ緩衝に抗原の必要な量に応じて希釈する。 アジュバントを含むワクチンは以下のようにして製造される：８ｍｌの不活化
ウイルスまたはサブユニットの抗原から成る１６７ｍｌの水相と、１５９ｍｌの
ＰＢＳとを８３ｍｌの油相（７％ｗ／ｖのアンヒドロマンニトールオレエートと
、８％ｗ／ｖの１１ＥＯ（エチレンオキサイド）を有するエトキシ化オレイン酸
と、８５％ｖ／ｖの軽質流動パラフィン油とを含む）（European Pharmacopea t
ype）で、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎターボミキサーを用いて３２℃で２分間乳化した
。水中油型乳剤の形で調剤されたワクチンを５℃で保管する。 ワクチン製造の別の方法は、５％ｗ／ｖスクアラン、２．５％ｗ／ｖプルロニ
ック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、登録商標）Ｌ１２１、０．２％ｗ／ｖの２０ＥＯのオ
レイン酸のエトキシ化アンヒドロソルビトールエステル、９２．３％ｖ／ｖのＰ
ＢＳ緩衝液に１／３０に希釈したウイルス抗原との混合液を、Ｙ１１０モデルの
高圧ホモジェナイザー(Microfluidics Corp)を、６００バールの圧力で、３０〜
４０℃の温度で3回通して乳化する方法である。水中油型乳剤の形で調剤された
ワクチンは５℃で保管できる。
解凍した後、ＰＢＳ緩衝に抗原の必要な量に応じて希釈する。 アジュバントを含むワクチンは以下のようにして製造される：８ｍｌの不活化
ウイルスまたはサブユニットの抗原から成る１６７ｍｌの水相と、１５９ｍｌの
ＰＢＳとを８３ｍｌの油相（７％ｗ／ｖのアンヒドロマンニトールオレエートと
、８％ｗ／ｖの１１ＥＯ（エチレンオキサイド）を有するエトキシ化オレイン酸
と、８５％ｖ／ｖの軽質流動パラフィン油とを含む）（European Pharmacopea t
ype）で、Ｓｉｌｖｅｒｓｏｎターボミキサーを用いて３２℃で２分間乳化した
。水中油型乳剤の形で調剤されたワクチンを５℃で保管する。 ワクチン製造の別の方法は、５％ｗ／ｖスクアラン、２．５％ｗ／ｖプルロニ
ック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、登録商標）Ｌ１２１、０．２％ｗ／ｖの２０ＥＯのオ
レイン酸のエトキシ化アンヒドロソルビトールエステル、９２．３％ｖ／ｖのＰ
ＢＳ緩衝液に１／３０に希釈したウイルス抗原との混合液を、Ｙ１１０モデルの
高圧ホモジェナイザー(Microfluidics Corp)を、６００バールの圧力で、３０〜
４０℃の温度で3回通して乳化する方法である。水中油型乳剤の形で調剤された
ワクチンは５℃で保管できる。
【００３０】
他の製造方式は、生理食塩液（ＮａＣｌ、９ｇ／ｌ）中にカルボポル（Ｃａｒ
ｂｏｐｏｌ、登録商標）９７４Ｐの０．４％ｗ／ｖ溶液を作る方法である。ｐＨ
は水酸化ナトリウムで７．３〜７．４に合せる。このカルボポル（Ｃａｒｂｏｐ
ｏｌ、登録商標）溶液を解凍したウイルス抗原の１６倍希釈液と混合する。懸濁
液の形で調剤されたワクチンは５℃で保管できる。 解凍した０．５ｍｌのサブユニット（実施例５）をＰＢＳ緩衝液で１５倍に希
釈し、０．５ｍｌのＳＰＧＡ凍結乾燥基質（蔗糖、リン酸塩、グルタメート、ア
ルブミン、EP-B1-0 008 255）に加える。この混合液をフラスコに分け、凍結乾
燥し、５℃で保管する。この希釈液は水相中にＰＢＳ緩衝だけを含むアジュバン
トから成る。
ｂｏｐｏｌ、登録商標）９７４Ｐの０．４％ｗ／ｖ溶液を作る方法である。ｐＨ
は水酸化ナトリウムで７．３〜７．４に合せる。このカルボポル（Ｃａｒｂｏｐ
ｏｌ、登録商標）溶液を解凍したウイルス抗原の１６倍希釈液と混合する。懸濁
液の形で調剤されたワクチンは５℃で保管できる。 解凍した０．５ｍｌのサブユニット（実施例５）をＰＢＳ緩衝液で１５倍に希
釈し、０．５ｍｌのＳＰＧＡ凍結乾燥基質（蔗糖、リン酸塩、グルタメート、ア
ルブミン、EP-B1-0 008 255）に加える。この混合液をフラスコに分け、凍結乾
燥し、５℃で保管する。この希釈液は水相中にＰＢＳ緩衝だけを含むアジュバン
トから成る。
【００３１】実施例７ 抗−ＣＨＶ中和抗体の滴定
ＣＨＶウィルスを中和能力を調べるために血清を滴定検査する。動物から採取
した血清を９６ウエルの細胞培養プレートでカスケード状に５％ウシ胎仔血清を
補充したＤＭＥＭ媒体で３倍に希釈した。０．０５ｍｌの希釈した血清に約２０
０ＴＣＩＤ50／ｍｌのＣＨＶを含む０．０５ｍｌの培地を加える。混合液を３７
℃で２時間オーブン中で５％ＣＯ2を含む雰囲気下に培養する。 約１００，０００細胞／ｍｌを含む０．１５ｍｌのＭＤＣＫ細胞懸濁液を各混
合液に加える。５％ＣＯ2を含む雰囲気下で３７℃で５日間培養した後に細胞変
性効果（ＣＰＥ）を位相差顕微鏡法で観測した。各血清の中和力価をカルベール
（Ｋａｒｂｅｒ）法に従って計算した。力価はウエルの５０％の細胞変性効果を
抑制する最も高い希釈度の形で与えられる。力価はｌｏｇ10ＶＮ５Ｏで表される
。各血清は少なくとも二回、好ましくは４回滴定される。
した血清を９６ウエルの細胞培養プレートでカスケード状に５％ウシ胎仔血清を
補充したＤＭＥＭ媒体で３倍に希釈した。０．０５ｍｌの希釈した血清に約２０
０ＴＣＩＤ50／ｍｌのＣＨＶを含む０．０５ｍｌの培地を加える。混合液を３７
℃で２時間オーブン中で５％ＣＯ2を含む雰囲気下に培養する。 約１００，０００細胞／ｍｌを含む０．１５ｍｌのＭＤＣＫ細胞懸濁液を各混
合液に加える。５％ＣＯ2を含む雰囲気下で３７℃で５日間培養した後に細胞変
性効果（ＣＰＥ）を位相差顕微鏡法で観測した。各血清の中和力価をカルベール
（Ｋａｒｂｅｒ）法に従って計算した。力価はウエルの５０％の細胞変性効果を
抑制する最も高い希釈度の形で与えられる。力価はｌｏｇ10ＶＮ５Ｏで表される
。各血清は少なくとも二回、好ましくは４回滴定される。
【００３２】実施例８ 効能
予防注射を受けていない１２匹のＥＯＰＳビーグルの雌犬をランダムに６匹の
動物の２つのグループに分けた。第１のグループの雌犬には水中油型乳剤ベース
のパラフィン油（実施例６）をアジュバンドとするＣＨＶサブユニットワクチン
を投与した。もう一方の雌犬のグループには偽薬ワクチンを投与した。 各雌犬は二回ワクチン投与した（交尾後約１０日後に皮下でワクチン投与し、
次いで、出産予定日の約１０日前にワクチン投与）。凍結乾燥品を１ｍｌの油性
溶媒に溶かしたものを各雌犬に投与した。これは不活性化前の１０7.7ＴＣＩＤ5 0 の力価当量に対応する。
動物の２つのグループに分けた。第１のグループの雌犬には水中油型乳剤ベース
のパラフィン油（実施例６）をアジュバンドとするＣＨＶサブユニットワクチン
を投与した。もう一方の雌犬のグループには偽薬ワクチンを投与した。 各雌犬は二回ワクチン投与した（交尾後約１０日後に皮下でワクチン投与し、
次いで、出産予定日の約１０日前にワクチン投与）。凍結乾燥品を１ｍｌの油性
溶媒に溶かしたものを各雌犬に投与した。これは不活性化前の１０7.7ＴＣＩＤ5 0 の力価当量に対応する。
【００３３】
出産後、３か日後に新産児の子犬に口鼻経路（経口で０．５ｍｌ、経鼻孔で０
．２５ｍｌ）でＣＨＶの毒性株、例えばＬ．Ｅカーマイケルが単離したF205(Am.
J. Vet.Res.、1965、26、803-814)またはＣＨＶ２７０(H.Hill, Am.J.Vet., Re
s.、1974、35、669-673)またはＣＨＶ Ｃ４０１２５の５０〜１００ＴＣＩＤ50 をテストした。子犬をそれから３週間間観測し、臨床的徴候と死亡率とを記録し
た。死亡後、全ての子犬を死体解剖した。イヌヘルペスウイルス病の傷害形質を
腎臓、脾臓、肺臓、消化管、心臓、神経節、腸間で捜し、ＭＤＣＫ細胞でＣＨＶ
を単離するためにサンプルを採った。イヌヘルペスウイルス病の鑑定は子犬の死
亡と、その特徴的傷害の存在を肉眼で観察して行い、ウイルスの単離で確認した
。 予防注射をされた雌犬は全て免疫され、出産時点で中和抗体の高力価を有して
いた。この力価は実施例６に記載の方法で測定され、ｌｏｇ10ＶＮ５Ｏで表した
。
．２５ｍｌ）でＣＨＶの毒性株、例えばＬ．Ｅカーマイケルが単離したF205(Am.
J. Vet.Res.、1965、26、803-814)またはＣＨＶ２７０(H.Hill, Am.J.Vet., Re
s.、1974、35、669-673)またはＣＨＶ Ｃ４０１２５の５０〜１００ＴＣＩＤ50 をテストした。子犬をそれから３週間間観測し、臨床的徴候と死亡率とを記録し
た。死亡後、全ての子犬を死体解剖した。イヌヘルペスウイルス病の傷害形質を
腎臓、脾臓、肺臓、消化管、心臓、神経節、腸間で捜し、ＭＤＣＫ細胞でＣＨＶ
を単離するためにサンプルを採った。イヌヘルペスウイルス病の鑑定は子犬の死
亡と、その特徴的傷害の存在を肉眼で観察して行い、ウイルスの単離で確認した
。 予防注射をされた雌犬は全て免疫され、出産時点で中和抗体の高力価を有して
いた。この力価は実施例６に記載の方法で測定され、ｌｏｇ10ＶＮ５Ｏで表した
。
【００３４】
【表１】
【００３５】
予防注射した母犬から生まれた子犬の中でイヌヘルペスウイルス病で死んだも
のはなかった（０／２７）。 予防注射をしなかった母犬（偽薬グループ）から生まれた子犬でのＣＨＶウィ
ルスに起因する死亡率は６２％（１８／２９）であった。ウイルス単離でもこれ
らの子犬の５５％にＣＨＶが観測された（１６／２９）。２匹の子犬からのサン
プルはバクテリアで汚染されており、ＣＨＶウイルス単離のための検査はしなか
った。 ２つのグループ間の死亡率の差は極めて有意である（フィッシャー検査、ｐ＜
０．０００１）。
のはなかった（０／２７）。 予防注射をしなかった母犬（偽薬グループ）から生まれた子犬でのＣＨＶウィ
ルスに起因する死亡率は６２％（１８／２９）であった。ウイルス単離でもこれ
らの子犬の５５％にＣＨＶが観測された（１６／２９）。２匹の子犬からのサン
プルはバクテリアで汚染されており、ＣＨＶウイルス単離のための検査はしなか
った。 ２つのグループ間の死亡率の差は極めて有意である（フィッシャー検査、ｐ＜
０．０００１）。
【００３６】
２つのグループにランダムに分けたヨークシャーテリアを感染する生育環境で
養った。第１のグループの１４匹の雌犬は水中油型乳剤ベースにしたパラフィン
油（実施例６）をアジュバンドにしたＣＨＶのサブユニットワクチンを予防注射
した。もう一方の６匹の雌犬のグループには偽薬ワクチンを予防注射した。ワク
チンの接種プロトコルは上記と同じにした。 出産時に子犬の重量を測定した。予防注射をした母犬から生まれた２８匹の子
犬の体重（１４１．８ｇの平均体重）は、予防注射をしなかった母犬から生まれ
た１４匹の子犬の体重（８５．０ｇの平均体重）それより実質的に高い（すなわ
ち１６６．８％の体重増加）。この差は有意である（Kruskal-Wallis、ｐ＜0．0
1）。
養った。第１のグループの１４匹の雌犬は水中油型乳剤ベースにしたパラフィン
油（実施例６）をアジュバンドにしたＣＨＶのサブユニットワクチンを予防注射
した。もう一方の６匹の雌犬のグループには偽薬ワクチンを予防注射した。ワク
チンの接種プロトコルは上記と同じにした。 出産時に子犬の重量を測定した。予防注射をした母犬から生まれた２８匹の子
犬の体重（１４１．８ｇの平均体重）は、予防注射をしなかった母犬から生まれ
た１４匹の子犬の体重（８５．０ｇの平均体重）それより実質的に高い（すなわ
ち１６６．８％の体重増加）。この差は有意である（Kruskal-Wallis、ｐ＜0．0
1）。
【００３７】
結果は汚染された生育環境では予防注射をした雌犬の妊娠率が増加する傾向が
あることを示している。 妊娠率は予防注射をした雌犬で８２％（５０／６１）、予防注射をしなかった
雌犬（偽薬グループ）で６８％（１９／２８）であった（フィイシャー検査、ｐ
＝０．１１）。 本発明は特許請求の範囲の記載で定義されるもので、上記の特殊な具体化に限
定されるものではないということは理解されなければならない。上記以外の変異
株も本発明の範囲に含まれる。
あることを示している。 妊娠率は予防注射をした雌犬で８２％（５０／６１）、予防注射をしなかった
雌犬（偽薬グループ）で６８％（１９／２８）であった（フィイシャー検査、ｐ
＝０．１１）。 本発明は特許請求の範囲の記載で定義されるもので、上記の特殊な具体化に限
定されるものではないということは理解されなければならない。上記以外の変異
株も本発明の範囲に含まれる。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ
，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，
ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ
Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ
，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，
ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，
ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ
Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ
，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，
ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ
Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ
，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，
ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ
Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ
，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，
ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
Claims (32)
- 【請求項１】 妊娠中の雌犬に出産予定日より１〜２０日前、好ましくは１〜
１５日前、さらに好ましくは５〜１５日前、さらに好ましくは５〜１０日前、好
ましくは約１０日前にワクチンを投与して、出産時点で妊娠中の雌犬に高レベル
の抗ＣＨＶ抗体を産生させ、抗体転移によって乳児の間に子犬に保護免疫を誘発
することを特徴とする、子犬をイヌヘルペスウイルス病から保護するためのワク
チン製造でのＣＨＶ抗原の使用。 - 【請求項２】 出産が最も可能な妊娠中の雌犬に、特に妊娠期間の最終の３分
の１の期間の妊娠中の雌犬にワクチンを投与して、出産時点で０．９ｌｏｇ10以
上、好ましくは１．２ｌｏｇ10以上のレベルの抗−ＣＨＶ抗体を産生させ、抗体
転移によって乳児の間に子犬に免疫保護を誘発することを特徴とする、子犬をイ
ヌヘルペスウイルス病から保護するためのワクチン製造でのＣＨＶ抗原の使用。 - 【請求項３】 ワクチンが出産の時点で妊娠中の雌犬に０．９ｌｏｇ10以上、
好ましくは１．２以上のｌｏｇ10以上のレベルの抗−ＣＨＶ抗体を産生する請求
項１に記載の使用。 - 【請求項４】 ワクチンが出産予定日の１〜２０日前、特に１〜１５日前、さ
らに好ましくは５〜１５日前、特に５〜１０日前、さらに好ましくは約１０日前
に投与される請求項２に記載の使用。 - 【請求項５】 以前にＣＩＷに対するワクチンを予防注射した雌犬に投与され
るワクチンでの請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項６】 ワクチン接種を少なくとも２〜３週間の間隔で離し、特に、最
初のワクチン投与は発情期から最初の投与の少なくとも２〜３週間前、特に発情
期から妊娠の最初の１／３の期間内、好ましくは交尾の約７〜１０日後に行う、
請求項５に記載の使用。 - 【請求項７】 各ワクチンが同一または異なる請求項５に記載の使用。
- 【請求項８】 ワクチンが、不活化ＣＨＶウィルス、弱毒化したＣＨＶウィル
ス、ＣＨＶウィルスのサブユニットおよび組換えよって発現される抗原から成る
群の中から選択される抗原を含む請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項９】 ワクチンがＣＨＶウィルスのサブユニット、好ましくは抽出サ
ブユニットワクチンから成る請求項８に記載の使用。 - 【請求項１０】 ワクチンがＣＨＶウィルスのエンベロープのグリコプロテイ
ンから成る請求項９に記載の使用。 - 【請求項１１】 ワクチンが不活化ＣＨＶウィルスから成る請求項８に記載の
使用。 - 【請求項１２】 ワクチンが獣医学的に許容されるビヒクルまたは賦形剤と、
アジュバントとを含む請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項１３】 一回の服用量で不活性化の前の力価当量（equivalent en ti
tre）で約ｌ０5から約１０9.5ＴＣＩＤ50に対応する抗原の量をワクチンが含む
請求項９〜１２のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項１４】 ワクチンが水中油型乳剤の形か、カルボマー(carbomer)での
懸濁液の形で調剤される請求項９〜１３のいずれか一項に記載の使用。 - 【請求項１５】 ワクチンが、アンヒドロマンニトールオレエート、エトキシ
化オレイン酸および軽質流動パラフィン油、プルロニック(Ｐｌｕｒｏｎｉｃ、
登録商標)、ソルビタンのエステル、エトキシ化オレイン酸およびスクアランか
ら成るエマルションの形で調剤されるか、カルボポル(Ｃａｒｂｏｐｏｌ、登録
商標)の形の懸濁液で調剤される請求項１４に記載の使用。 - 【請求項１６】 抽出ＣＨＶサブユニット、好ましくはカプシッドを除去した
後の抽出ＣＨＶサブユニットと、獣医学的に許容されるビヒクルまたは賦形剤と
、好ましくはさらに獣医学的に許容されるアジュバントとを含む抗−ＣＨＶワク
チン。 - 【請求項１７】 必要に応じてウィルスのカプシッドを除去し、凍結乾燥した
形態の、使用前にアジュバントで採ることができる、不活化ＣＨＶウィルスまた
は抽出ＣＨＶワクチンからなるＣＨＶサブユニット。 - 【請求項１８】 アジュバントが水酸化アルミニウムである請求項１６または
１７に記載のワクチン。 - 【請求項１９】 アジュバントがアクリル酸またはメタクリル酸のポリマーま
たは無水マレイン酸とアルケニル誘導体とのポリマー、好ましくはカルボプル（
Ｃａｒｂｏｐｏｌ、登録商標）である請求項１６または１７に記載のワクチン。 - 【請求項２０】 水中油型乳剤の形で調剤される請求項１６または１７に記載
のワクチン。 - 【請求項２１】 水中油型乳剤がアンヒドロマンニトールオレエート、エトキ
シ化オレイン酸および軽質流動パラフィン油、またはプルロニック（Ｐｌｕｒｏ
ｎｉｃ、登録商標）、ソルビタンのエステル、エトキシ化オレイン酸およびスク
アランから成る請求項２０に記載のワクチン。 - 【請求項２２】 一回の服用量で不活性化の前の力価当量（equivalent en ti
tre）でｌ０5〜１０9.5ＴＣＩＤ50、好ましは１０6〜１０8ＴＣＩＤ5Oに対応す
る抗原の量の不活化ＣＨＶウィルスを獣医学的に許容されるビヒクルまたは賦形
剤中、好ましくはさらにアジュバント中に含む抗−ＣＨＶワクチン。 - 【請求項２３】 水酸化アルミニウム、アクリル酸またはメタクリル酸のポリ
マー、無水マレイン酸とアルケニル誘導体のポリマー、好ましくはカルボプル（
Ｃａｒｂｏｐｏｌ、登録商標）選択されるアジュバント、免疫誘導配列を含むか
、水中油型乳剤の形で調剤される、不活化ＣＨＶウィルスから成る請求項２２に
記載の抗−ＣＨＶワクチン。 - 【請求項２４】 水中油型乳剤がアンヒドロ・マンニトール・オレエート、エ
トキシ化オレイン酸、軽質流動パラフィン油から成るか、プルロニック（Ｐｌｕ
ｒｏｎｉｃ、登録商標）、ソルビタンのエステル、エトキシ化オレイン酸および
スクアランからなる請求項２３に記載のワクチン。 - 【請求項２５】 化学物質および／または熱処理によって不活化したＣＨＶウ
ィルスから得られる請求項１６〜２４のいずれか一項に記載のワクチン。 - 【請求項２６】 ＣＨＶウィルスをホルムアルデヒド、β−プロピオラクトン
、エチレンイミンまたはエチレンイミンで不活化した請求項２５に記載のワクチ
ン。 - 【請求項２７】 ワクチンが、ＣＨＶウィルス粒子の懸濁液を好ましくは不活
化した後、適当な洗剤を作用させて得られるサブユニットワクチンである請求項
１６〜２１のいずれか一項に記載のワクチン。 - 【請求項２８】 一回の服用量で不活性化の前の力価当量（equivalent en ti
tre）でｌ０5〜１０9.5ＴＣＩＤ50、好ましは１０7〜１０9ＴＣＩＤ5O、好まし
は１０7.5〜１０8.5ＴＣＩＤ5Oに対応する抗原の量のＣＨＶウィルスのサブユニ
ットを含む請求項１６〜２１および請求項２３〜２７のいずれか一項に記載のワ
クチン。 - 【請求項２９】 少なくとも一種のイヌの他の病原体の少なくとも一種の抗原
を含む請求項１６〜２８のいずれか一項に記載のワクチン。 - 【請求項３０】 イヌの病原体がイヌジステンパーウィルス、イヌパルボウィ
ルス、イヌアデノウィルスおよびこれらの組み合わせから成る群の中から選択さ
れる請求項２９に記載のワクチン。 - 【請求項３１】 一回の服用量でのＥＬＩＳＡで測定したグリコプロテインｇ
Ｂの力価が約０．０１μｇ〜約３０μｇ、好ましくは約０．１μｇ〜約１０μｇ
、さらに好ましくは約０．３μｇ〜約３μｇである請求項１６〜２１および請求
項２５〜３０のいずれか一項に記載のワクチン。 - 【請求項３２】 請求項１６〜２８および３１のいずれか一項に記載のＣＨＶ
ワクチンと、イヌジステンパーウィルス、イヌパルボウィルス、イヌアデノウィ
ルスおよびこれらの組み合わせ成る群の中から選択されるイヌの他の病原体とに
対するワクチンとを別々に包装されて包む多価ワクチン。
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|---|---|---|---|
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| PCT/FR2001/000189 WO2001052887A2 (fr) | 2000-01-21 | 2001-01-19 | Vaccination contre l"herpesvirose canine et vaccins |
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|---|---|
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