JP2003519089A

JP2003519089A - 肺炎球菌表面型蛋白質配合ワクチン

Info

Publication number: JP2003519089A
Application number: JP2001502874A
Authority: JP
Inventors: ヒューブナー、ロバート、シー．; サンプソン、ジャクリン、エス．; カーロン、ジョージ、エム．; アデス、エドウィン; ブリレス、デビット、イー．
Original assignee: ユーエイビーリサーチファウンデーション; アヴェンティスパスツール; センターズフォーディズィーズコントロールアンドプレヴェンション
Priority date: 1999-06-10
Filing date: 2000-06-09
Publication date: 2003-06-17
Also published as: EP1189632A1; CA2379327A1; AU6121000A; EP1189632A4; MXPA01012721A; WO2000076541A1; BR0011478A

Abstract

(57)【要約】本発明は、ＰｓｐＡおよび／またはＰｓｐＣおよびまたはＰｓａＡ、好適には、ＰｓｐＡおよびＰｓａＡを含む、２種またはそれ以上の肺炎球菌表面型蛋白質を含んでいる相乗的な免疫原性組成物に関する。肺炎球菌の鼻腔内保菌を低下させるために、かかる免疫原の配合物を鼻腔内投与する方法、ならびにＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの感染の予防および治療における、かかる免疫原の配合物を使用する方法もまた提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（政府による援助の記載）本研究は、一部、国立保健研究所の研究費供与を受けた。

【０００２】（関連する出願／特許）本出願は、１９９９年６月１０日出願の米国仮出願第６０／１３８４２２号お
よび２０００年６月６日出願の特許出願に基づき、その優先権を主張する。

【０００３】以下のものを、参照文献とする：１９９８年４月２３日出願の米国仮出願第６０／０８２７２８号および１９９９
年４月２３日出願の米国出願第０９／２９８５２３号の優先権を主張するＢｒｉ
ｌｅｓ等のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９９／０８８９５号、国際公開ＷＯ９９／５
３９４０「ＰｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌＳｕｒｆａｃｅＰｒｏｔｅｉｎＣ（
ＰｓｐＣ）．．．」；１９９６年１２月４日出願の米国出願第０８／７５９５０５号の優先権を主張す
るＢｒｉｌｅｓ等の１９９７年１２月４日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９７
／２２８４７号、１９９８年７月１１日公開の国際公開ＷＯ９８／２４９２７「
ＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓａｎｄＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒＡｄｍｉｎｉｓ
ｔｅｒｉｎｇ．．．」；Ｂｒｉｌｅｓ等の米国特許第５９５５０８９号（１９９６年９月２０日出願の米
国出願第０８／７１０７４９号）および１９９７年９月２０日出願のＰＣＴ出願
第ＰＣＴ／ＵＳ９７／１６７６１号、１９９８年３月２６日公開の国際公開ＷＯ
９８／１１９１５「ＳｔｒａｉｎＳｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆＰｎｅｕｍｏｃ
ｏｃｃａｌＳｕｒｆａｃｅＰｒｏｔｅｉｎｓ」；Ｂｒｉｌｅｓ等の１９９６年９月１６日出願の米国出願第０８／７１４７４１号
および１９９５年９月１５日出願第０８／５２９０５５号および１９９６年９月
１６日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９６／１４８１９号、１９９７年３月２
０日公開の国際公開ＷＯ９７／０９９９４号「ＰｎｅｕｍｏｃｃｏｃａｌＧｅ
ｎｅｓ、ＰｏｒｔｉｏｎｓＴｈｅｒｅｏｆ、ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＰｒｏｄ
ｕｃｔｓＴｈｅｒｅｆｒｏｍ、ＡｎｄＵｓｅｓｏｆＳｕｃｈＧｅｎｅ
ｓ、ＰｏｒｔｉｏｎｓａｎｄＰｒｏｄｕｃｔｓ」；Ｂｒｉｌｅｓ等の１９９５年６月７日出願（許可）の米国出願第０８／４８２９
８１号「ＯｒａｌＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．．．」；１９９５年６月２日出願の米国出願第０８／４５８３９９号、および米国特許第
６００４８０２号（１９９６年５月３０日出願の米国出願第０８／６５７７５１
号）、１９９６年５月３１日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／９６ＩＢ／０１０５１
号、１９９６年１２月１２日公開の国際公開ＷＯ９６／３９１１３；「Ｍｕｃｏ
ｓａｌＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．．．」；Ｂｒｉｌｅｓ等の米国特許第６０４２８３８号（１９９４年５月２０日出願の米
国出願第０８／２４６６３６号の一部継続出願（現在米国特許第５９６５１４１
号）としての１９９５年５月１９日出願の米国出願第０８／４４６２０１号およ
びＢｒｉｌｅｓ等の米国特許第６０２７７３４号（１９９４年９月３０日出願の
米国出願第０８／３１２９４９号）；Ｂｒｉｌｅｓ等の米国特許第５９８９０９
号（１９９４年５月２０日出願の米国出願第０８／３１９７９５号）；Ｂｒｉｌｅｓ等の米国特許第５６７９７６８号（現在では廃棄された米国出願第
０７／６５６７７３号の一部継続出願としての現在では廃棄された１９９２年２
月１２日出願の米国出願のＣＩＰ第０７／８３５６９８号の一部継続出願として
の現在では廃棄された１９９３年４月２０日出願の米国出願第０８／０４８８９
６号の継続出願としての１９９５年６月６日出願の米国出願第０８／４５６７４
６号）「ＥｐｉｔｏｐｉｃＲｅｇｉｏｎｓｏｆＰｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃ
ａｌＳｕｒｆａｃｅＰｒｏｔｅｉｎＡ」；Ｂｒｉｌｅｓ等の米国特許第５８５６１７０号（１９９４年５月２３日出願の米
国出願第０８／２４７４９１号の継続出願としての１９９５年６月６日出願の米
国出願第０８／４６７８５２号）、米国特許第５４７６９２９号（１９９３年６
月３日出願の米国出願第０８／０７２０７０号）および米国特許第５７５３４６
３号（１９９５年６月６日出願の米国出願第０８／４６９４３４号）および第５
７２８３８７号（１９９４年３月１４日出願の米国出願第２１４１６４号）「Ｓ
ｔｒｕｃｔｕｒａｌＧｅｎｅｏｆＰｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌＰｒｏｔｅ
ｉｎ」；Ｂｒｉｌｅｓ等の１９９４年３月１７日出願の米国出願第０８／２１４２２２号
（現在では米国特許第５８０４１９３号）「ＴｒｕｎｃａｔｅｄＰｓｐＡ．．
．」；Ｂｒｉｌｅｓ等の米国特許第５９９７８８２号（米国出願第０８／４６８９８５
号）；Ｂｒｉｌｅｓ等の米国特許第５８７１９４３号（１９９５年６月６日出願
の米国出願第０８／４６８７１８号）「ＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙＣｏｍｐｒｉ
ｓｉｎｇａＴｒｕｎｃａｔｅｄＰｎｅｕｍｏｃｏｃｃａｌＳｕｒｆａｃ
ｅＰｒｏｔｅｉｎＡ（ＰｓｐＡ）」；１９９２年５月２９日出願の米国出願第０８／２２６８４４号、１９９４年７月
５日出願の第０８／０９３９０７号および１９９４年７月５日出願の第０７／８
８９９１８号；第ＰＣＴ／ＵＳ９３／０５１９１号；１９９１年２月１５日出願
の米国特許第６５６７７３号の優先権を主張するＢｒｉｌｅｓ等の１９９２年２
月１２日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９２／００８５７号、１９９２年９月
３日公開の国際公開ＷＯ９２／１４４８；Ｂｒｉｌｅｓ等の米国特許第５９６５４００号（現在では廃棄された１９９１年
２月１５日出願の米国出願第６５６７７３号の一部継続出願として出願された現
在では廃棄された１９９２年２月１２日出願の米国出願第８３５６９８号の継続
出願として出願した米国出願第２４７４９１号）、１９９２年２月１２日出願の
欧州特許第０９６１１９６６８号、公開ＥＰ７８６５２１「ＤＮＡＥｎｃｏｄ
ｉｎｇ．．．」。

【０００４】また、以下ものも参照する：米国特許第４４９６５３８号、第４６７３５７４
号、第５９４８９００号、第５４７４９０５号；および１９９７年９月１８日出
願の米国出願第０８／９３２９８２号の優先権を主張する１９９８年９月１８日
出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／１９７４０号、１９９９年３月２５日公
開の国際公開ＷＯ９９／１４３３３；１９９８年２月３日出願の米国出願第０９／０１７７８２号の優先権を主張する
１９９９年１月１４日出願のＰＣＴ／ＵＳ９９／００３７９号、１９９９年８月
１２日公開の国際公開ＷＯ９９／４０２００号、１９９８年３月２日出願の米国
仮出願第６０／０７６５６５号の優先権を主張する１９９９年２月２６日出願の
ＰＣＴ／ＵＳ９９／０４３２６号、１９９９年９月１０日公開の国際公開ＷＯ９
９／４５１２１；１９９１年９月１７日出願の第７９１３７７号、現在は米国特許第５４２２４２
７号の一部継続出願である現在は廃棄された１９９４年４月４日出願の米国出願
第２２２１７９号の一部継続出願として出願された米国特許第５８５４４１６号
の優先権を主張する１９９２年１１月１６日出願の第ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９５
２２号、１９９３年５月２７日公開の国際公開ＷＯ９３／１０２３８。

【０００５】これらの出願および特許、並びにこれらの各出願および特許にて引用された各
文書または参照文献（各発行特許の審査段階のものも含む、「出願の引用文献」
）、ならびに、前記の出願および特許のいずれかに対応する、および／または優
先権を主張する各ＰＣＴおよび各外国出願または特許、ならびに、各出願の引用
文献中に引用または参照された各文献も、これによって、本明細書中に、参照に
より、そのまま組み入れられる。また、文献または参照文献は、この明細書中、
請求の範囲の前にある参考文献リスト、あるいは、本文中自体にも引用されてい
る。これらの各文献または参照文献（「本文中に引用の文献または参照文献」）
、並びに、かかる本文中に引用の文献または参照文献中にて引用されている各文
献または参照文献も、これによって、本明細書中に、参照により、そのまま組み
入れられる。

【０００６】（発明の分野）本発明は、肺炎球菌表面蛋白質Ｃ：「ＰｓｐＣ」、および／または肺炎球菌表面蛋白質Ａ：
「ＰｓｐＡ」、および／または肺炎球菌付着蛋白質Ａ：「ＰｓａＡ」、ならびに
、異なる分岐系統のＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡの
抗原決定領域；ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡの抗原決定領域などの
、ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡの断片あるいは部分
をコードするＤＮＡのような、単離および／または精製された核酸分子；かかる核酸分子を含み、および／または、例えば、ｉｎｖｉｔｒｏまたはｉｎ
ｖｉｖｏにおいて発現するベクターあるいはプラスミド；ならびに、ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡのうち、その少なくと
も２つ、および／またはそれらの一部（ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび
／またはＰｓａＡのうち、その少なくとも２つの、抗原決定領域、および／また
はそのポリポプチドおよび／またはその断片等）、例えば、ＰｓａＡ（またはそ
の断片）およびＰｓｐＡ（またはその断片）および／またはＰｓｐＣ（またはそ
の断片）および／または、それらの配合物を発現するベクターあるいはベクター
類、かかる配合物を含んでなる、免疫学的な、免疫原性の組成物あるいはワクチ
ン組成物に関する。かかる組成物は、ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／
またはＰｓａＡのうち、その少なくとも２つの、抗原またはイムノゲン複数、あ
るいは抗原決定基または抗原決定基複数、および／またはこれら免疫原あるいは
抗原決定基等を発現するベクターを含むことができる。本発明は、さらに、予防
接種方法、およびに投与方法、並びに、これらの組成物の製造および調剤方法に
関する。

【０００７】ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡ、あるいは、それら
の断片および／または抗原決定基、ならびに、従って、ＰｓｐＣおよび／または
ＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡ、あるいは、それらの断片および／または抗原
決定基、または、かかる免疫原あるいは抗原決定基を発現するベクターを含んで
なる、免疫学的な、免疫原性の、またはワクチン組成物は、同一の経路で、また
、既に述べた、ＰｓｐＡまたはＰｓｐＣに関しては、ほぼ同量で投与することが
できる。すなわち、本発明は、さらに、ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび
／またはＰｓａＡのうち、その少なくとも２つ、あるいは、その断片および／ま
たは抗原決定基の配合物を投与する方法；ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよ
び／またはＰｓａＡのうち、その少なくとも２つ、あるいは、その断片および／
または抗原決定基、または、かかる免疫原または抗原決定基を発現するベクター
を含んでなる、免疫学的な、免疫原性のまたはワクチン組成物；並びに、Ｐｓｐ
Ｃおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡ、あるいは、その断片または
／および抗原決定基、または、かかる免疫原または抗原決定基を発現するベクタ
ーの、これら組成物等を処方するための使用をも提供する。

【０００８】本発明のその他の形態は、以下の開示において説明されるか、あるいは、（本
発明の技術的範囲に含まれ、かつ）それから明白なものである。

【０００９】（発明の背景）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、中耳炎、髄膜炎、菌血症ならびに肺炎の主要な
原因であり、また、高齢者や、肺疾患、肝疾患、アルコール中毒症、鎌状赤血球
貧血症、脳脊髄液漏出、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）のような、元々治療
を要する健康状態の患者、ならびに、免疫抑制療法を受けている患者における、
死因ともなる感染症の第一位の原因である。これは、さらに、幼児における疾病
の第一位の原因でもある。肺炎球菌感染症は、米国において、毎年、およそ４０
０００件の死亡を引き起こしている。最も重篤な肺炎球菌感染症は、侵襲性髄膜
炎ならびに菌血症感染症をもたらし、それらは、それぞれ、年間３０００症例お
よび５００００症例である。

【００１０】抗生物質ならびにワクチンの使用にもかかわらず、肺炎球菌感染症の流行は、
過去２５年間ほとんど減少していなく；菌血症の致死率は、一般市民では、１５
〜２０％、高齢者では、３０〜４０％、そして、都市部アフリカ系アメリカ人で
は、３６％であると報告されている。さほど重篤ではない肺炎球菌疾患の形態は
、米国において、年間５０００００例ある肺炎、ならびに、米国において、年間
、７００００００例が肺炎球菌に起因していると推定されている、小児における
中耳炎である。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの薬剤耐性株は、米国ならびに世界中
で、ますます一般的になりつつある。一部の地域では、肺炎球菌の単離株の３０
％もが、ペニシリンに対して耐性である。抗生物質耐性の肺炎球菌の増加は、さ
らに、肺炎球菌感染症の予防の必要性を力説するものである。

【００１１】ヒトは、肺炎球菌を、浮遊エーロゾルを介して、または直接接触によって、取
り込む。肺炎球菌は、まず上気道にコロニー形成し、そして、数週間または数ヶ
月間も、鼻粘膜に留まることができる。幼児ならびに高齢者の５０％またはそれ
以上もの多数は、保菌している。ほとんどの場合、この保菌は、何らの顕性感染
には至らない（１０〜１２）。流行株の研究は、病原性の強い株でさえ、疾患を
引き起こされないまま、定着する可能性がある（１３〜１６）ことを示唆してい
る。しかし、患者によっては、鼻咽頭で繁殖した菌は、症候性の副鼻腔炎あるい
は中耳感染を引き起こす可能性ある。肺炎球菌は、特に、食物粒子または粘液と
共に、肺まで吸い込まれたならば、肺炎を起こすことができる。これらの部位の
感染は、通常、いくらかの肺炎球菌を血中へと流出させ、特に、本来の感染源か
ら、大量に流出が継続された際には、敗血症を誘発する可能性もある。血中の肺
炎球菌は、脳に到達する場合もあり、そこで、髄膜炎を引き起こす可能性がある
。肺炎球菌性髄膜炎は、これらの細菌が原因となるその他の感染症よりは、遥か
に頻度は少ないものの、それは、特に恐ろしいものであり；かかる患者の１０％
ほどは死亡し、また、残りの５０％より多くは、生涯続く神経性の後遺症がある
（１７〜１８）。

【００１２】肺炎球菌は、健常者の上気道に無症候的に定着しており；疾患は、しばしば日
和見的な機会に、鼻咽喉から他の組織への微生物の拡散によって起こされる。ヒ
トにおける保菌の頻度は、年齢と環境によって様々である。一般に、小児におけ
る保菌率は、成人のそれより高い。研究によると、就学前児童の３８％〜６０％
、小学校児童の２９〜３５％、そして、中学校生徒の９〜２５％が、肺炎球菌の
保菌者であることが示されている。成人の間では、家庭に小児のいない者では、
保菌率は６％まで低下し、また、家庭に小児のいる者でも、１８〜２９％となる
。小児における、成人より高い保菌率が、これらの全個体群における肺炎球菌疾
患の頻度と対応していることは驚くに当たらない。

【００１３】肺炎球菌ワクチン接種の目指すゴールは、ワクチン接種を実施した集団におけ
る保菌率を低下させ、また、それに伴って、肺炎球菌疾患の頻度を減少させるこ
とにある。ワクチン接種による肺炎球菌保菌率の低減は、ワクチン接種者と同様
に、非ワクチン接種者における、疾患発生率をも低下させることができると推測
される。上気道細菌性病原体に対する、ワクチン接種によって引き起こされるこ
の「集団免疫」は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅｂ型複
合体ワクチンの使用において、観察されている（２０、２１、２２、２３および
２４）。

【００１４】ワクチンが肺炎球菌の定着を予防するならば、かかるワクチンは免疫された受
診者において、肺炎球菌感染症の実質的に全てを予防することが期待されよう。
免疫された受診者であっても、他者からの肺炎球菌に感染することもありえるた
め、保菌率を低下させるワクチンは、免疫の低下していない受診者とともに、免
疫の低下した受診者における感染をも低下させるだろう。

【００１５】一般に、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅへの免疫には、肺炎球菌の莢膜多糖類に対
する特異的抗体が媒介している可能性が認められている。しかし、新生児及び幼
児は、ほとんどの莢膜多糖類抗原に対して適切な免疫反応を発揮することができ
ず、また、同一莢膜血清型を含んでいる感染を繰返すこともありえる。数多くの
被包性細菌に対して乳児を免疫するための１つのアプローチは、莢膜多糖類抗原
をタンパク質と結合させて、免疫原性とすることである。このアプローチは、例
えば、ＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｕｌｕｅｎｚａｅＢに対しては、成功
を収めている（Ｇｏｒｄｏｎに付与された米国特許第４４９６５３８号及びＡｎ
ｄｅｒｓｏｎに付与された米国特許第４６７３５７４号を参照）。

【００１６】しかし、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅには、９０種を超える既知の莢膜血清型が
あり、それらのうちの２３種もが、疾患の約９５％の原因となっている。肺炎球
菌多糖−タンパク質結合体が、成功を収める上では、大半の肺炎球菌感染症に対
する原因となっている莢膜型を、適切に免疫原性にしなければならない。このア
プローチは、現在利用可能なワクチンに含まれている２３種の多糖類全てを、最
適に免疫原性とはできないので、たとえ成人においても、困難であろう。

【００１７】抗莢膜多糖類抗体反応によって媒介される防御は、その多糖類の型だけに限定
されている。異なる多糖類の型は、ヒト及び他の種において、個別的に病原性を
示すことができる。肺炎球菌ワクチンは、ヒト肺炎球菌疾患の優勢な型を代表す
る、かかる２３種の莢膜多糖類を結合することによって開発されてきた。これら
の２３の多糖類型は、１９８３年以降、認可された肺炎球菌ワクチンにおいて使
用されている（１９）。認可された２３価の多糖類ワクチンは、健常成人におい
て、ワクチン型の肺炎球菌に起因する菌血症の予防に、約６０％の有効性がある
と報告されている。

【００１８】しかし、かかるワクチンの有効性は、議論の的となっており、そして、時々、
かかるワクチンの使用の推奨に関して、その正当性が疑問視されている。このワ
クチンの有効性は、２３の異なる抗原を結合しなければならないことで、マイナ
スの影響を受けるのではないかと推測されている。単一調製物中に多種類の抗原
を配合すると、抗原競合のため、この混合物中の個々の型に対する抗体反応にマ
イナスの影響を及ぼす可能性がある。有効性はまた、かかる２３種の血清型で、
ヒトの感染症および保菌に関連する全ての血清学的型を取り囲もうとしているこ
とによっても影響を受ける。また、２歳未満の小児においては、ほとんどの多糖
類に対して適切に応答する能力がないので、有効ではない（２１、２２）。

【００１９】小児、ならびに高齢者をも、肺炎球菌感染症から防御するための、代わりのア
プローチは、免疫防御反応を誘起することが可能な、タンパク質免疫原類の利用
を含んでいる。このような肺炎球菌の蛋白質免疫原の一例は、肺炎球菌表面蛋白
質Ｃ（ＰｓｐＣ）、肺炎球菌表面蛋白質Ａ（ＰｓｐＡ）ならびに肺炎球菌表面付
着蛋白質Ａ（ＰｓａＡ）である。このような蛋白質は、それ自体、ワクチンとし
て役に立つであろうし、あるいは、有利なことに、本明細書で説明するように、
増強された免疫応答を生むために、組み合わせて使用することも可能である。

【００２０】ＰｓｐＡは、病原性要素および防御免疫原として同定された。ＰｓｐＡは、臨
床的な単離株全てで見い出されている、細胞表面分子であり、また、マウスにお
ける、肺炎球菌の完全な病原力には、ＰｓｐＡの発現が必要である（３４）。Ｐ
ｓｐＡの生物学的機能は、予備な報告は、補体活性化を阻害する可能性のあるこ
とを示唆しているものの（２７）、未だ、十分に明らかにされてはいない。

【００２１】かかるＰｓｐＡ蛋白質型は、莢膜型とは無関係である。環境における、遺伝突
然変異又は交換が、莢膜、ＰｓｐＡ、ならびに、おそらく様々な構造を持つ他の
分子に関して、極めて多様性を示す、大きな菌株プールの発展を可能としたと思
われる。種々の菌株に由来するＰｓｐＡの多様性は、また、６７から９９ｋＤに
分布している、それらの分子量からも明らかである。かかる観察された差異は、
安定して遺伝性であり、また、蛋白質分解の結果ではない。

【００２２】１９９５年９月１５日出願の米国出願第０８／５２９０５５号、１９９５年６
月６日出願の米国出願０８／４７０６２６号、米国特許第５８５６１７０号、米
国特許第５７５３４６３号、米国特許第５８７１９４３号、米国特許第５９６５
４００号、米国特許第５７２８３８７号、米国特許第５７２８３８７号、米国特
許第５９６５１４１号、米国特許第５９８０９０９号、および米国特許第５４７
６９２９号を含む、いくつかの米国特許および特許出願は、ＰｓｐＡならびにそ
の断片を含むワクチン、ＰｓｐＡならびにその断片をコードするＤＮＡの発現方
法、ＰｓｐＡおよびその断片をコードするＤＮＡ、ＰｓｐＡならびにその断片の
アミノ酸配列、ＰｓｐＡならびにその断片を含む組成物、およびかかる組成物を
使用する方法に関する。これらの出願の教示は、本発明に関連しており、また、
これらの出願は、その中に引用されている参考文献のいずれかおよび全てと共に
、参照して、本明細書に組み入れられる。

【００２３】ＰｓｐＡは、非常に変異性の高い表面蛋白質ではあるが、充分な相同性も同定
されており、肺炎球菌の単離株を、ファミリーまたは分岐群の別個のセットに分
類することを可能としている。この情報、米国特許第５９５５０８９号にて見出
されている、かかる教示に基づいて、４〜６個の異なるＰｓｐＡ分子の組み合わ
せが、任意の所与の肺炎球菌株に対する免疫応答を生み出すために、利用できる
。

【００２４】ＰｓｐＡに関する研究は、現在、ＰｓｐＣおよびｐｓｐＣと呼ばれている、Ｐ
ｓｐＡ様蛋白質ならびにｐｓｐＡ様遺伝子の発見に結びついた。実際、初期の特
許文献はＰｓｐＣを「ＰｓｐＡ様」と呼んでいた。ＰｓｐＣの抗原決定領域、Ｐ
ｓｐＣの抗原決定領域をエンコードしているＤＮＡ、および免疫学的、免疫性ま
たは少なくとも１つのＰｓｐＣを含むワクチン組成物が、１９９８年４月２３日
に出願された米国仮特許出願第６０／０８２７２８号、および１９９９年４月２
３日に出願された米国特許出願第０９／２９８５２３号に特許優先権が与えられ
ている出願番号ＷＯ９９／５３９４０のＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９９／０８８９
５において提供されている。これらの出願の教示は本発明と関連があり、これら
の出願および本明細書で引用されている任意およびすべての参照事項は参照によ
って本明細書に取り込まれている。

【００２５】当該の他の肺炎球菌表面蛋白質はＰｓａＡである。Ｒｕｓｓｅｌｌ他は肺炎球
菌フィンブリアル（ｆｉｍｂｒｉａｌ）蛋白質Ａ（４１）と指定されるＳ．ｐｎ
ｕｅｕｍｏｎｉａｅからの免疫性の種特異的な蛋白質を記載した。この３７ｋＤ
ａの蛋白質免疫原も米国特許出願第５４２２４２７号に記載されており、その教
示は参照によってその全容が本明細書に取り込まれている。以前肺炎球菌フィン
ブリアル蛋白質Ａと呼ばれた３７ｋＤａの蛋白質は、ごく最近は肺炎球菌表面接
着蛋白質Ａ（ＰｓａＡ）と指定されている。本出願のために、ＰｓａＡ、肺炎球
菌表面接着蛋白質Ａ、肺炎球菌フィンブリアル蛋白質Ａすなわち３７ｋＤａの免
疫原はすべて、Ｒｕｓｓｅｌｌ他（１９９０）によって特徴付けられ米国特許出
願第５４２２４２７号に記載されている、Ｓ．ｐｎｕｅｕｍｏｎｉａｅからのあ
る種の蛋白質免疫原のことであることを理解されたい。

【００２６】ＰｓａＡは２３肺炎球菌ワクチン血清型（４１）すべてに共通である。Ｐｓａ
Ａをエンコードしている遺伝子をクローン化しシークエンスした（４６）。ごく
最近、ＰｓａＡ遺伝子を被包された菌株６Ｂからクローン化し、これは係属中の
米国特許出願第０８／２２２１７９号の主題である。この遺伝子は、臨床的に関
連のある菌株のより代表的なものである。ＰｓａＡベースのワクチンの開発にお
いて使用するのに適した組換えリピド化ＰｓａＡ蛋白質が、係属中の米国特許出
願第０９／０１７７８２号に記載されている。

【００２７】感染を確かなものにするために、Ｓ．ｐｎｕｅｕｍｏｎｉａｅは粘膜表面を通
って最初に宿主に入らなければならない。粘膜表面における特異的免疫性の主な
決定基は、循環系免疫系の成分から生理学的および機能的分離されている、分泌
型ＩｇＡ（Ｓ−ＩｇＡ）である。粘膜のＳ−ＩｇＡの応答は共通の粘膜免疫系（
ＣＭＩＳ）（６１）によって主に生み出され、この中では集合的に粘膜関連リン
パ組織（ＭＡＬＴ）と呼ばれる特化したリンパ上皮構造体によって取り込まれる
。共通の粘膜免疫系という語は、任意の粘膜部位における免疫処置によって、他
のすべての粘膜部位において免疫応答を誘導することができることを意味する。
したがって管中の免疫処置によって、上気道およびその逆において粘膜の免疫性
を誘導することができる。

【００２８】さらに経口免疫処置によって、全身性区画および粘膜ＩｇＡ抗体（６２）にお
いて、免疫原特異的ＩｇＧの応答を誘導することができることに留意することが
重要である。

【００２９】世界中のＳ．ｐｎｕｅｕｍｏｎｉａｅの保菌者は、ヒト個体群内の鼻咽頭部に
おける保菌者によって維持されている。肺炎球菌は常に保菌者から得られる。大
部分の人々はその人生中に何度も肺炎球菌を運び、非常に多くの場合保菌が疾患
につながることはない。多くの場合、肺炎球菌は鼻咽頭部からより深部の組織内
に侵入し、これが肺炎、菌血症、敗血症、および髄膜炎につながる。保菌毎の侵
入の頻度が低くても、保菌の高い罹病率（個体の５と４０％の間）は、Ｓ．ｐｎ
ｕｅｕｍｏｎｉａｅに起因する罹病率および死亡率が非常に高いことを意味する
。この国では、肺炎球菌の肺炎により毎年４００００人以上が死亡している。

【００３０】鼻咽頭部におけるＳ．ｐｎｕｅｕｍｏｎｉａｅの保菌を減らし、時にはなくす
ことができるＰｓｐＡへの粘膜免疫性が公開されている研究中に示されている。
ごく最近は、ＰｓａＡへの免疫性によって保菌に対する保護を誘導することもで
きることが証明されている。しかしながら、蛋白質単独では肺炎球菌の保菌に対
する保護を再現的に誘導することができない。したがって、肺炎球菌の保菌を減
らすことができる免疫原性組成物の必要性が存在する。

【００３１】ＰｓｐＣ、ＰｓｐＡおよびＰｓａＡなどの元の蛋白質の免疫原、または免疫原
断片またはこれらの抗原決定基は、宿主に投与されるとき免疫応答を刺激する。
組換え蛋白質は有望なワクチンまたは免疫原性組成物の候補である。なぜなら高
い収率および純度でそれらを生成し、操作して望ましい活性を最大限にし望まし
くない活性を最小限にすることができるからである。しかしながら、これらは免
疫原性が低い可能性があるので、組換え蛋白質に対する免疫応答を高めるための
方法がワクチンまたは免疫原性組成物の開発において重要である。このような免
疫原は、特に組換えによって生成されるときには、アジュバントと共に投与され
るとより強い応答を誘導することができる。アジュバントとは、免疫原の免疫原
性を高める物質である。免疫原を投与の部位の近くに局部的に保持してデポット
効果を生み出し、免疫系の細胞への免疫原の緩慢で持続的な放出を助長すること
によって、アジュバントは作用することができる。アジュバントは免疫系の細胞
を引きつけることもでき、免疫細胞を免疫原デポットに引きつけ、これらの細胞
を刺激して免疫応答を誘導する可能性がある。

【００３２】免疫賦活剤すなわちアジュバントは長年にわたって使用されており、たとえば
ワクチンに対する宿主の免疫応答を改善している。リポ多糖などの内因性アジュ
バントは、正常ではワクチンとして使用される、殺されたまたは弱毒化された成
分である。外因性アジュバントは、典型的には免疫原に非共有的に結合しており
宿主の免疫応答を高めるために調合される免疫賦活剤である。水酸化アルミニウ
ムおよびリン酸アルミニウム（集合的にアルムと呼ばれる）は、ヒトおよび獣用
ワクチンにおいてアジュバントとして日常的に使用される。現在アルムはヒトに
使用する許可のある唯一のアジュバントであるが、コレラ毒素Ｂなどの何百もの
実験的なアジュバントが試験されている。

【００３３】代替的な免疫学的、免疫原性またはワクチン組成物、および投与のための代替
的な経路または応答のための代替的な経路を提供する、代替的なワクチン戦略が
望ましい。同じ調合物内の多くの考えられる競合免疫原を合わせることなしにさ
まざまな多様化した肺炎球菌菌株の保護を誘導する、免疫学的組成物または予防
接種処方を提供することが有利であるはずである。さらに、たとえばこのような
免疫原および抗原決定基を単独または異なる免疫原と組み合わせて含有するかま
たは含む代替的な組成物を提供するために、免疫学的、免疫原性および／または
ワクチン組成物に使用するための追加の免疫原および抗原決定基を提供すること
は有利である。

【００３４】さらに、肺炎球菌の病原性メカニズムより良い理解を提供することは有利であ
る。というのは、これが改善されたワクチン、診断および治療につながる可能性
があるからである。

【００３５】（発明の形態および概要）本発明の一形態は、以下のものを１つまたは複数を提供することを含むことが
できる。肺炎球菌表面蛋白質Ｃ、「ＰｓｐＣ」、および／または肺炎球菌表面蛋
白質Ａ、「ＰｓｐＡ」、および／または肺炎球菌表面接着蛋白質Ａ、「ＰｓａＡ
」、ならびに、異なる分岐群のＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／または
ＰｓａＡの抗原決定領域；ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓ
ａＡの抗原決定領域などの、ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰ
ｓａＡの断片または部分をエンコードしているＤＮＡなどの単離および／または
精製された核酸分子；かかる核酸分子を含む、および／または発現する、例えば
、生体外の、あるいは、生体内の、ベクターあるいはプラスミド；ならびに、Ｐ
ｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡの少なくとも二つ、およ
び／またはこれらの一部分（ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰ
ｓａＡの少なくとも２つの、抗原決定領域、および／またはこれらのポリペプチ
ドおよび／または断片等）、例えば、ＰｓａＡ（またはその断片）およびＰｓｐ
Ａ（またはその断片）および／またはＰｓｐＣ（またはその断片）の配合物、お
よび／またはこのような配合物を発現するベクターまたはベクター類を含んでな
る免疫学的、免疫原性またはワクチン組成物。かかる組成物は、ＰｓｐＣおよび
／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡの少なくとも２つの、免疫原または免
疫原複数、または抗原決定基または抗原決定基複数、および／またはかかる免疫
原または抗原決定基を発現するようなベクターを含むことができる。本発明は、
さらに、かかる組成物の生産ならびに調剤の方法と同様に、予防接種ならびに投
与の方法にも関する。

【００３６】従って、本発明は以下のものを含んでなる組成物を提供する。（ｉ）ＰｓａＡ
またはその抗原決定基、あるいはＰｓａＡまたはその抗原決定基を発現するベク
ター、（ｉｉ）（ａ）ＰｓｐＡまたはその抗原決定基、あるいはＰｓｐＡまたは
その抗原決定基を発現するベクター、または（ｂ）ＰｓｐＣまたはその抗原決定
基、あるいはＰｓｐＣまたはその抗原決定基を発現するベクター、または、（ｃ
）ＰｓｐＡまたはその抗原決定基およびＰｓｐＣまたはその抗原決定基、あるい
はＰｓｐＡまたはその抗原決定基およびＰｓｐＣまたはその抗原決定基を発現す
るベクター、またはＰｓｐＡまたはその抗原決定基を発現する第１ベクターおよ
びＰｓｐＣまたはその抗原決定基を発現する第２ベクター、あるいは、（ｉｉｉ
）ＰｓａＡまたはその抗原決定基と、およびＰｓｐＡまたはその抗原決定基およ
び／またはＰｓｐＣまたはその抗原決定基とを発現するベクター。かかる組成物
は担体および／または希釈剤を含むことができる。さらに、かかる組成物はアジ
ュバントを含むことができる。このアジュバントは、アルム（例えば、水酸化ア
ルミニウムおよび／またはリン酸アルミニウム）、例えば、ゲルとして、Ｓｐｏ
ｎｉｎ、ＱｕｉｌＡ、および油中水型アジュバント、殺された結核菌を含む（
フロイントの完全型）あるいは、バチルス属菌を含んでいない（フロイントの不
完全型）フロイントのアジュバントであってよい。本発明の実施において使用す
ることができるアジュバントに関しては、ＰＣＴ／ＵＳ９８／２３４７２も参照
のこと。

【００３７】本発明の他の形態は、本発明の組成物、例えば、ＰｓｐＣおよび／またはＰｓ
ｐＡおよび／またはＰｓａＡ、またはこれらの断片および／または抗原決定基の
少なくとも２つの配合物；ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓ
ａＡ、またはこれらの断片および／または抗原決定基の少なくとも２つの配合物
を含む免疫学的、免疫原性またはワクチン組成物、あるいは、かかる免疫原また
は抗原決定基を発現するベクターを投与する方法を、かかる組成物を調合するた
めの、ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡ、またはそれら
の断片および／または抗原決定基、あるいは、かかる免疫原または抗原決定基を
発現するようなベクターの使用とともに、提供することである。

【００３８】本発明の好ましい実施態様では、組換えによって生産されるＰｓｐＡおよびＰ
ｓａＡを、コレラ毒素Ｂ（ＣＴＢ）のＢサブユニットまたはアルムなどのアジュ
バントと共に、調剤する。ＣＴＢおよびアルムは、アジュバントとして機能する
。ＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡおよび／またはＰｓｐＣの配合物は、ＣＴＢ
および／またはアルムなどのアジュバントとともに、好ましくは、鼻腔内に投与
される。

【００３９】本発明の他の形態は、ＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡおよび／またはＰｓｐ
Ｃのまたはそれらの抗原決定基、あるいは、該蛋白質を発現するようなベクター
の免疫原性組成物を、肺炎球菌の鼻部の保菌を減らすために、使用する方法を提
供することである。鼻部の保菌の減少は、肺炎球菌感染の危険がある個体への肺
炎球菌の伝播の低減にもつながると考えられている。

【００４０】先に参照した出願を含め、本開示中で引用される文献は、かかる組成物用の典
型的な追加成分を提供しており、そして、当業者が、本開示を基に、組成物を調
合する上で、過度の実験は必要としない。好ましくは、かかる組成物は、適切な
応答を誘導するために充分な量の、肺炎球菌ＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡお
よび／またはＰｓｐＣまたはそれらの抗原決定基、あるいは、該蛋白質をそのよ
うに発現するベクターを含むべきである。該配合物中に使用する、各蛋白質の最
適量の決定は、最小限の実験によって、実験的に決定することができる。例えば
、このような決定は、以下の実施例ならびに本明細書に引用されている文献にお
ける、実験動物に投与される免疫原の量に基づいて行うことができることを当業
者は理解するはずである。

【００４１】「含んでなる」、「含む」、「含んでいる」等の用語は、米国の法律の下で、
これらの用語に帰する意味を有し、「含有してなる」、「含有している」等を意
味することができる。

【００４２】本明細書を通じて、本発明が属する分野の技術状況をより詳細に記載するため
に、さまざまな文献が参照されている。これらの文献、ならびに、これらの文献
によって引用される文献は、いぜれも、参照によって本明細書に組み込まれてい
る。また、これらならびに他の形態、および実施態様は、以下の詳細な説明に記
載され、あるいは、それから明らかであり、かつ、本発明の技術的範囲内にある
。

【００４３】（詳細な説明）本発明は、ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡの少なく
とも２つ、および／またはこれらの一部分（ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡお
よび／またはＰｓａＡの少なくとも２つの、抗原決定領域、および／またはこれ
らのポリペプチドおよび／または断片など）、例えば、ＰｓａＡ（またはその断
片）およびＰｓｐＡ（またはその断片）および／またはＰｓｐＣ（またはその断
片）の配合物、および／またはこのような配合物を発現するベクターまたはベク
ター複数、および製薬学的に許容可能な担体または希釈剤を、含んでなる免疫学
的、免疫原性またはワクチン組成物を提供する。従って、本発明は以下のものを
含む組成物を提供する。（ｉ）ＰｓａＡまたはその抗原決定基、あるいはＰｓａ
Ａまたはその抗原決定基を発現するベクター、（ｉｉ）（ａ）ＰｓｐＡまたはそ
の抗原決定基、あるいはＰｓｐＡまたはその抗原決定基を発現するベクター、ま
たは（ｂ）ＰｓｐＣまたはその抗原決定基、あるいはＰｓｐＣまたはその抗原決
定基を発現するベクター、または（ｃ）ＰｓｐＡまたはその抗原決定基およびＰ
ｓｐＣまたはその抗原決定基、あるいはＰｓｐＡまたはその抗原決定基およびＰ
ｓｐＣまたはその抗原決定基を発現するベクター、またはＰｓｐＡまたはその抗
原決定基を発現する第１ベクターならびにＰｓｐＣまたはその抗原決定基を発現
する第２ベクター、または（ｉｉｉ）ＰｓａＡまたはその抗原決定基およびＰｓ
ｐＡまたはその抗原決定基および／またはＰｓｐＣまたはその抗原決定基を発現
するベクター。かかる組成物は、担体および／または希釈剤を含むことができる
。さらに、かかる組成物は、アジュバントをも含むことができる。免疫学的な組
成物は、局所または全身性の免疫応答を誘導する。かかる応答は、必ずしも、そ
うでなくともよいが、保護的なものとできる。肺炎球菌蛋白質の組み合わせを含
む免疫原性の組成物も、必ずしも、そうでなくともよいが、保護的なものとでき
る、同様に局所または全身性の免疫応答を誘導する。ワクチン組成物は、局所ま
たは全身性の免疫応答を誘導する。したがって、「免疫学的組成物」および「免
疫原性組成物」という語は、「ワクチン組成物」を含む（前の２つの用語は保護
的な組成物である可能性があるからである）。

【００４４】対象となる抗原決定基に関しては、本明細書に引用される文献ならびに、Ｋｅ
ｎｄｒｅｗ、ＴＨＥＥＮＣＹＣＬＯＰＥＤＩＡＯＦＭＯＬＥＣＵＬＡＲ
ＢＩＯＬＯＧＹ（ＢｌａｃｋｗｅｌｌＳｃｉｅｎｃｅＬｔｄ．、１９９５）
およびＳａｍｂｒｏｏｋ、ＦｒｉｔｓｃｈａｎｄＭａｎｉａｔｉｓ、Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ、ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、２
ｎｄＥｄ．、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ、１９８２を参照する。対象とする抗原決定基は、例えば、対象と
する獣またはヒトの病原体または毒素に由来する、免疫原の免疫学的に関連のあ
る領域または免疫学的に活性のあるその断片である。ペプチドまたはポリペプチ
ドのアミノ酸および対応するＤＮＡ配列の知識から、および個々のアミノ酸の性
質（たとえば大きさ、電荷など）およびコドンディクショナリーから、過度の実
験なしで、当業者はペプチドまたはポリペプチドゆえにコードされているＤＮＡ
の抗原決定基または主要抗原領域を決定することができる。

【００４５】ＤＮＡ配列は、抗体の応答またはＴ細胞の応答を生み出すペプチドの領域を少
なくともエンコードしていることが好ましい。ＴおよびＢ細胞の抗原決定基を決
定するための１つの方法は、抗原決定基のマッピングを含む。当該の蛋白質は、
短い重複ペプチド（ＰＥＰＳＣＡＮ）中で合成される。次いで個々のペプチドが
、元の蛋白質に誘導される抗体に結合する能力、またはＴ細胞およびＢ細胞の活
性化を誘導する能力を試験される。ＪａｎｉｓＫｕｂｙ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ、（１９９２）ｐｐ．７９−８０。

【００４６】当該の抗原決定基を決定するための他の方法は、親水性である蛋白質の領域を
選択することである。親水性残基は蛋白質の表面にあることが多く、それゆえ抗
体にアクセス可能な蛋白質の領域であることが多い。ＪａｎｉｓＫｕｂｙ、Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、（１９９２）ｐ．８１。

【００４７】Ｔ細胞の応答を生み出すことができる当該の抗原決定基を選択するための他の
方法は、ＭＨＣ分子に結合する可能性があることが知られているペプチド配列で
ある、蛋白質配列の潜在ＨＬＡアンカー結合モチーフから同定することである。

【００４８】Ｔ細胞の応答を生み出すための当該の推定抗原決定基であるペプチドは、ＭＨ
Ｃ複合体中に存在するはずである。このペプチドはＭＨＣ分子に結合するために
適切なアンカーモチーフを含むことが好ましく、免疫応答を生み出すために充分
高い親和性で結合するべきである。

【００４９】ある蛋白質がＴ細胞の応答を刺激する当該の抗原決定基であるかどうかを決定
するガイドラインには、ペプチドの長さがある。ペプチドはＭＨＣクラスＩの複
合体に適応するために少なくとも８または９個のアミノ酸の長さ、およびクラス
ＩＩのＭＨＣ複合体に適応するために少なくとも１３〜２５個のアミノ酸の長さ
でなければならない。この長さは、ペプチドがＭＨＣ複合体に結合するための最
小値である。ペプチドはこれらの長さよりも長いことが好ましい。なぜなら、発
現されたペプチドを細胞が切断する可能性があるからである。ペプチドは、それ
を免疫応答を生み出すための充分高い特異性を有するさまざまなクラスＩまたは
クラスＩＩ分子に結合させることができる、適切なアンカーモチーフを含むべき
である（Ｂｏｃｃｈｉａ、Ｍ．他のＳｐｅｃｉｆｉｃＢｉｎｄｉｎｇｏｆ
ＬｅｕｋｅｍｉａＯｎｃｏｇｅｎｅＦｕｓｉｏｎＰｒｏｔｅｉｎＰｅｐ
ｔｉｄｅｓｔｏＨＬＡＣｌａｓｓＩＭｏｌｅｃｕｌｅｓ、Ｂｌｏｏｄ
８５：２６８０−２６８４；Ｅｎｇｌｅｈａｒｄ、ＶＨ、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ｏｆｐｅｐｔｉｄｅｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｃｌａｓｓＩ
ａｎｄＩＩＭＨＣｍｏｌｅｃｕｌｅｓＡｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ
．１２：１８１（１９９４）を参照のこと）。当該の蛋白質の配列とＭＨＣ分子
と関係のあるペプチドの公開されている構造を比較することによって、過度の実
験なしにこれを行うことができる。

【００５０】さらに、蛋白質の配列と蛋白質のデータベースに記載されている配列を比較す
ることによって、当業者は当該の抗原決定基を確認することができる。

【００５１】さらに、他の方法によって容易に当該の蛋白質の一部分を生成または発現し、
当該の蛋白質の一部分に対するモノクローナル抗体を生成し、次いでこれらの抗
体がそこから蛋白質が誘導された病原体の増殖を阻害するかどうか生体外で確認
する。この抗体が生体外で増殖を阻害するかどうかに関する分析用に当該の蛋白
質の一部分を生成または発現させるために、本開示および当分野において述べら
れている他のガイドラインを当業者は使用することができる。

【００５２】したがって本発明は、宿主ホ乳類中で免疫応答を誘導する方法も提供し、この
方法は本発明の免疫学的、免疫原性またはワクチン組成物、たとえば肺炎球菌の
蛋白質または免疫原、ＰｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡ
、またはこれらの抗原決定基または断片の組み合わせ、および／またはこのよう
な組み合わせを発現するベクターまたはベクター類、および製薬学的に許容可能
な担体または希釈剤を含む組成物を宿主に投与することを含む。この組成物はア
ジュバントをさらに含むことができ、この方法はアジュバントを投与することを
さらに含むことができる。驚くことに、ＰｓｐＡとＰｓａＡの組み合わせが相乗
作用を引き起こし、いずれかの免疫原単独による免疫処置と比較して免疫応答が
改善され肺炎球菌の保菌が減少する結果となる。

【００５３】本発明の組成物およびこれらの組成物の調製における、肺炎球菌の蛋白質また
は免疫原それぞれ、たとえばＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡおよび／またはＰ
ｓｐＣ、および任意選択の追加アジュバントの量の決定は、製薬または獣医学の
分野でよく知られる標準的な技法に従って行うことができる。詳細には、本発明
の組成物中の免疫原およびアジュバントの量および投与される用量は、個々の免
疫原、アジュバント（存在する場合）、個々の動物または患者の年齢、性別、体
重、種類および状態、および投与の経路などの要因を考慮して、医学または獣医
学の分野でよく知られる技法によって決定される。たとえば、その内部の免疫応
答が望まれる適切な宿主用の個々のＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡおよび／ま
たはＰｓｐＣの免疫原の用量は、典型的にはそこに投与される任意のアジュバン
トの量と同様に、本開示から当業者によって容易に確認されうる。したがって当
業者は、組成物中および本発明の方法において投与される免疫原および任意選択
のアジュバントの量を容易に決定することができる。典型的には、リン酸バッフ
ァー食塩水中で０．００１〜５０重量％溶液としてアジュバントが使用されるの
が一般的であり、免疫原は約０．０００１〜約５重量％、好ましくは約０．００
０１〜約１重量％、最も好ましくは約０．０００１〜約０．０５重量％などのマ
イクログラムからミリグラムの程度で存在する（たとえば以下の実施例または本
明細書に記載される適用例を参照のこと）。

【００５４】しかしながら典型的には、免疫原は約０．００１〜約２０重量％、好ましくは
約０．０１〜約１０重量％、最も好ましくは約０．０５〜約５重量％のマイクロ
グラムからミリグラムの程度で存在する。

【００５５】当然ながら、動物またはヒトに投与される任意の組成物（その成分を含めて）
のため、投与の個々の方法のために、たとえば適切な動物モデル、たとえばマウ
スなどのげっ歯類において致死量（ＬＤ）およびＬＤ５０を決定することによっ
て毒性、たとえばＥＬＩＳＡ分析によって抗体または免疫原に関する血清の滴定
およびその分析適切な免疫応答を誘導する組成物の用量、その成分の濃度および
その組成物の投与のタイミングを決定することが好ましい。このような決定は当
業者の知識、本開示、および本明細書で引用されている文献からの過度の実験を
必要としない。さらに、過度の実験なしで順次の投与の時期を確認することがで
きる。

【００５６】本発明の組成物の例には、例えば、口、鼻、肛門、膣、口囲、胃などのオリフ
ィス、粘膜（例えば、舌下、歯槽、歯肉、臭覚器または呼吸器の粘膜）への、懸
濁液、シロップ、またはエリキシル剤などの投与、および滅菌懸濁液または乳濁
液などの非経口、皮下、皮内、筋肉内、または静脈内投与用（たとえば注射によ
る投与）の調製物のための液体調製物がある。このような組成物は、適切な担体
、希釈剤、または滅菌水、生理食塩水、グルコースなどの賦形剤と混合して存在
してよい。組成物を凍結乾燥させることもできる。投与の経路および望まれる調
製物に応じて、組成物は湿潤または乳濁剤、ｐＨ緩衝剤、ゲル化または粘性促進
添加剤、防腐剤、香料剤、着色剤などの付加的な物質を含むことができる。過度
の実験なしで調製物を調製するために、参照によって本明細書に取り込まれてい
る「ＲＥＭＩＮＧＴＯＮ’ＳＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳＣＩＥＮＣＥ
」、１７ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ、１９８５などの標準テキストを参考にすること
ができる。

【００５７】好都合には本発明の組成物は、たとえば等張水溶液、懸濁液、乳濁液などの液
体調製物、または選択したｐＨに緩衝することができる粘性組成物として提供さ
れる。消化管による吸収が好ましい場合、本発明の組成物はタイムリリース型で
あるかまたはたとえばゼラチンを覆う液体などの（ゼラチンは腸への送達のため
に胃の中で溶解される）液体充填剤を有する、「固体の」調製物を含めたピル、
錠剤、カプセル、カプレットなどの「固体の」形であってよい。鼻または呼吸器
への（粘膜への）投与が望まれる場合、組成物はある１つの形であり、スクイズ
式スプレーディスペンサー、ポンプディスペンサー、またはエアロゾル・ディス
ペンサーによって調剤することができる。通常エアロゾルは、炭化水素によって
圧力下にある。ポンプディスペンサーは計量した用量または特定の粒子サイズを
有する用量を調剤できることが好ましい。本発明の組成物は、特に経口的に投与
される場合、それ自体を魅力的なものにするために製薬学的に許容可能な香味料
および／または色素を含むことができる。粘性組成物はゲル、ローション、軟膏
、クリームなどの形であってよく、典型的には充分な量の増粘剤を含むはずであ
り、したがって粘性は約２５００〜６５００ｃｐｓであるが、１００００ｃｐｓ
までのより粘性のある組成物を使用することができる。粘性組成物は２５００〜
５０００ｃｐｓの粘性を有することが好ましい。なぜならこの範囲を超えると投
与するのがより困難になるからである。しかしながら、この範囲を超えると、組
成物は固体またはゼラチンの形に近付くことができ、したがって口から消化する
ために飲み込まれるピルとして容易に投与される。

【００５８】正常では液体調製物は、ゲル、他の粘性組成物、および固体組成物よりも調製
するのが容易である。さらに液体組成物は、特に動物、子供（特に小さな子供）
、およびピル、錠剤、カプセルなどを飲み込むのが困難である可能性があるかま
たは多回投与の状況である他の人たちに、注射でまたは経口的に投与するために
いくらかさらに好都合である。一方で、適切な範囲内で粘性組成物を調合して、
胃または鼻の粘膜の裏張りなどの粘膜とのより長い接触時間を提供することがで
きる。

【００５９】適切な担体および他の添加剤の選択は、明らかに投与の正確な経路および個々
の剤形の性質に依存するはずである。たとえばその剤形とは液体剤形（たとえば
組成物が溶液、懸濁液、ゲルまたは他の液体の形に調合されるかどうか）、また
は固体剤形（たとえば組成物がピル、錠剤、カプセル、カプレット、タイムリリ
ース型または液体充填剤の形に調合されるかどうか）である。

【００６０】溶液、懸濁液、およびゲルは、正常では多量の水（好ましくは精製された水）
および免疫原、および任意選択のアジュバントを含む。ｐＨ調整剤（たとえばＮ
ａＯＨなどの塩基）、乳濁または分散剤、緩衝剤、防腐剤、湿潤剤、ジェル剤（
たとえばメチルセルロース）色素および／または香味料などの少量の他の成分が
存在してもよい。組成物は等張であってよい。すなわち、血液および涙の流体と
同じ浸透圧を有することができる。

【００６１】本発明の組成物の所望の等張性は塩化ナトリウム、デクストローゼ、ホウ酸、
酒石酸ナトリウム、プロピレングリコールあるいは他の無機または有機溶質など
の他の製薬学的に許容可能な試剤を使用して達成することができる。ナトリウム
イオンを含む緩衝液用には、塩化ナトリウムが特に好ましい。

【００６２】製薬学的に許容可能な増粘剤を使用することによって、選択したレベルに組成
物の粘度を維持することができる。容易に経済的に入手可能でそれを用いて作業
するのが容易であるため、メチルセルロースが好ましい。他の適切な増粘剤には
、たとえばキサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロプロピルセル
ロース、カルボマーなどがある。増粘剤の好ましい濃度は、選択される試剤に依
存するはずである。選択した粘性を得るであろう量を使用することが重要なポイ
ントである。粘性組成物は、正常ではこのような増粘剤の添加によって溶液から
調製される。

【００６３】製薬学的に許容可能な防腐剤を使用して組成物の保存期間を延ばすことができ
る。ベンジルアルコールが適切であろうが、たとえばパラベン、チメロサール、
クロロブタノールまたはベンズアルコニウムを含めたさまざまな防腐剤も使用す
ることができる。防腐剤の適切な濃度は全重量に基づいて０．０２％〜２％であ
るはずであるが、選択される試剤に応じてかなりの変更形態が存在してもよい。

【００６４】組成物の成分は肺炎球菌の免疫原および任意選択の追加アジュバントに関して
化学的に不活性であるように選択されなければならないことを、当業者は理解す
るはずである。このことは化学および製薬原理において当業者には何の問題もな
いはずである。すなわち、標準テキストを参照するか単純な実験（過度の実験を
伴わない）によって、本開示および本明細書に引用されている文献から容易に諸
問題を避けることができる。

【００６５】一般的に認められている手順に従って成分を混合することによって、本発明の
免疫学的に効果のある組成物が調製される。たとえば選択した成分を配合機また
は他の標準的装置中で単に混合して、濃縮混合物を生成する。次いで水または増
粘剤およびおそらく緩衝液を添加してｐＨを制御し追加の溶質の毒性を制御する
ことによって、これを最終濃度および粘度に調整することができる。一般にｐＨ
は、約３〜７．５であってよい。個々の動物または患者の年齢、性別、体重、種
類および状態、および投与の経路などの要因、および投与に使用される組成物の
形（たとえば固体または液体）を考慮して、製剤の形および医学および獣医学の
分野でよく知られている技法によって、組成物を投与することができる。当業者
によって、本開示、本明細書に引用されている文献、および以下の実施例から、
ヒトまたは他の動物に関する用量を過度の実験なしで決定することができる（特
に投与および服用はＰｓｐＡまたはＰｓｐＣに類似する方法で行うことができる
ので、たとえばマウスに関する実施例および本明細書に引用されている出願から
、たとえば「関連出願」の下で）。

【００６６】最初の投与および用量の増大または順次の投与に関する適切な処方もさまざま
であり、最初の投与に続き順次の投与を含むことができるが、本開示、本明細書
に引用されている文献、および以下の実施例から当業者により確認することがで
きる。組成物は単独で投与することができ、本発明の組成物または他の予防剤ま
たは治療用組成物と共に投与するかこれらと共に順次投与することができる。Ｐ
ｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡの少なくとも２つの組み
合わせについて計算するために、当業者はＰｓｐＡまたはＰｓｐＣに関する知ら
れている濃度を容易に調整することができる。

【００６７】ＰｓｐＣの免疫原（ＰｓｐＣまたはその抗原決定基または断片）、およびＰｓ
ｐＡの免疫原（ＰｓｐＡまたはその抗原決定基または断片）、およびＰｓａＡの
免疫原（ＰｓａＡまたはその抗原決定基または断片）を、たとえば大腸菌または
生体内発現または生体外発現用の他のベクターまたはプラスミド内で、組み換え
によって発現させることができる。生体内または生体外のいずれかにおける、Ｐ
ｓｐＣおよび／またはＰｓｐＡおよび／またはＰｓａＡ、またはその抗原決定基
または断片の発現のために、ベクターまたは組み換え体またはプラスミドを作成
および／または投与するための方法は任意の所望の方法であってよい。たとえば
、以下のものに開示される方法かこれらに類似するものであってよい。米国特許
第４６０３１１２号、４７６９３３０号、５１７４９９３号、５５０５９４１号
、５３３８６８３号、５４９４８０７号、４７２２８４８号、５９４２３３５号
、５３６４７７３号、５７６２９３８号、５７７０２１２号、５９４２２３５号
、５７５６１０３号、５７６６５９９号、６００４７７７号、５９９００９１号
、６０３３９０４号、５８６９３１２号、５３８２４２５号、ＷＯ９４／１６７
１６、ＷＯ９６／３９４９１、Ｐａｏｌｅｔｔｉの「Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ
ｏｆｐｏｘｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｓｔｏｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ
：Ａｎｕｐｄａｔｅ、」ＰＮＡＳＵＳＡ９３：１１３４９−１１３５３、Ｏ
ｃｔｏｂｅｒ１９９６、Ｍｏｓｓの「Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｅｎｇｉｎｅ
ｅｒｅｄｐｏｘｖｉｒｕｓｅｓｆｏｒｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｇｅｎｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ、ａｎｄｓａｆｅｔｙ、」
ＰＮＡＳＵＳＡ９３：１１３４１−１１３４８、Ｏｃｔｏｂｅｒ１９９６、
Ｓｍｉｔｈ他の米国特許第４７４５０５１号（組み換えバキュロウイルス）、Ｒ
ｉｃｈａｒｄｓｏｎ、Ｃ．Ｄ．（Ｅｄｉｔｏｒ）、ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＭｏ
ｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ３９、「ＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＥｘｐｒ
ｅｓｓｉｏｎＰｒｏｔｏｃｏｌｓ」（１９９５ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ
Ｉｎｃ．）、Ｓｍｉｔｈ他の「ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆＨｕｍａＢｅｔ
ａＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎｉｎＩｎｓｅｃｔＣｅｌｌｓＩｎｆｅｃｔｅ
ｄｗｉｔｈａＢａｃｕｌｏｖｉｒｕｓＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＶｅｃｔ
ｏｒ」、ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、Ｄ
ｅｃ．、１９８３、Ｖｏｌ．３、Ｎｏ．１２、ｐ．２１５６−２１６５；Ｐｅｎ
ｎｏｃｋ他の「ＳｔｒｏｎｇａｎｄＲｅｇｕｌａｔｅｄＥｘｐｒｅｓｓｉ
ｏｎｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＢ−Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａ
ｓｅｉｎＩｎｆｅｃｔＣｅｌｌｓｗｉｔｈａＢａｃｕｌｏｖｉｒｕ
ｓｖｅｃｔｏｒ」、ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏ
ｌｏｇｙ、Ｍａｒ．１９８４、Ｖｏｌ．４、Ｎｏ．３、ｐ．３９９−４０６；Ｅ
ＰＡ０３７０／５７３、１９８６年１０月１６日に出願された米国特許出願第９
２０１９７号、欧州特許公開第２６５７８５号、米国特許第４７６８３３１号（
組み換えヘルペス）、Ｒｏｉｚｍａｎの「Ｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｈ
ｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘｖｉｒｕｓｇｅｎｅｓ：Ａｐｒｉｍｅｒｆ
ｏｒｇｅｎｅｔｉｃｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｏｆｎｏｖｅｌｖｅｃｔ
ｏｒｓ」、ＰＮＡＳＵＳＡ９３：１１３０７−１１３１２、Ｏｃｔｏｂｅｒ
１９９６、Ａｎｄｒｅａｎｓｋｙ他の「Ｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆ
ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌ
ｅｘｖｉｒｕｓｅｓｔｏｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｅｘｐｅｒ
ｉｍｅｎｔａｌｂｒａｉｎｔｕｍｏｒｓ」、ＰＮＡＳＵＳＡ９３：１１３
１３−１１３１８、Ｏｃｔｏｂｅｒ１９９６、Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ他の「Ｅｐ
ｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒｖｉｒｕｓｖｅｃｔｏｒｓｆｏｒｇｅｎｅｄｅ
ｌｉｖｅｒｙｔｏＢｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ」、ＰＮＡＳＵＳＡ９３：１
１３３４−１１３４０、Ｏｃｔｏｂｅｒ１９９６、Ｆｒｏｌｏｖ他の「Ａｌｐ
ｈａｖｉｒｕｓ−ｂａｓｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｓ：Ｓｔｒ
ａｔｅｇｉｅｓａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、ＰＮＡＳＵＳＡ９３
：１１３７１−１１３７７、Ｏｃｔｏｂｅｒ１９９６、Ｋｉｔｓｏｎ他のＪ．
Ｖｉｒｏｌ．６５、３０６８−３０７５、１９９１；米国特許第５５９１４３９
号、５５５２１４３号（組み換えアデノウイルス）、Ｇｒｕｎｈａｕｓ他、１９
９２、「Ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓａｓｃｌｏｎｉｎｇｖｅｃｔｏｒｓ」Ｓｅ
ｍｉｎａｒｓｉｎＶｉｒｏｌｏｇｙ（Ｖｏｌ．３）ｐ．２３７−５２、１９
９３、Ｂａｌｌａｙ他のＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ、ｖｏｌ．４、ｐ．３８６１
−６５、Ｇｒａｈａｍ、Ｔｉｂｔｅｃｈ８、８５−８７、Ａｐｒｉｌ、１９９
０、Ｐｒｅｖｅｃ他のＪ．ＧｅｎＶｉｒｏｌ．７０、４２９−４３４、ＰＣＴ
ＷＯ９１／１１５２５、Ｆｅｌｇｎｅｒ他（１９９４）、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈ
ｅｍ．２６９、２５５０−２５６１、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５９：１７４５−４９
、１９９３およびＭｃＣｌｅｍｅｎｔｓ他の「Ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎｗｉ
ｔｈＤＮＡｖａｃｃｉｎｅｓｅｎｃｏｄｉｎｇｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉ
ｎＤｏｒｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎＢ、ａｌｏｎｅｏｒｉｎｃｏ
ｍｂｉｎａｔｉｏｎ、ｉｎｄｕｃｅｓｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｉｍｍｕｎｉｔ
ｙｉｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓｏｆｈｅｒｐｅｓｓｉｍｐｌｅｘ
ｖｉｒｕｓ−２ｄｉｓｅａｓｅ」、ＰＮＡＳＵＳＡ９３：１１４１４−１
１４２０、Ｏｃｔｏｂｅｒ１９９６、およびとりわけＤＮＡ発現ベクターに関
する米国特許第５５９１６３９号、５５８９４６６号、および５５５８０８５９
号。また、以下のものも参照のこと。ＷＯ９８／３３５１０；Ｊｕ他、Ｄｉａｂ
ｅｔｏｌｏｇｉａ、４１：７３６−７３９、１９９８（レントウイルスの発現シ
ステム；）Ｓａｎｆｏｒｄ他の米国特許第４９４５０５０号（生きている細胞お
よびその組織および器官に物質を運ぶための方法）；Ｆｉｓｃｈｂａｃｈ他（Ｉ
ｎｔｒａｃｅｌ）、ＷＯ９０／０１５４３（トランスフェクトされた細胞による
ヘテロ蛋白質の遺伝発現のための方法）；Ｒｏｂｉｎｓｏｎ他、ｓｅｍｉｎａｒ
ｓｉｎＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ、ｖｏｌ．９、ｐｐ．２７１−２８３（１９９
７）（ＤＮＡワクチン）；Ｓｚｏｋａ他の米国特許第４３９４４４８号（生きて
いる細胞内にＤＮＡを挿入する方法）；およびＭｃＣｏｒｍｉｃｋ他の米国特許
第５６７７１７８号（腫瘍形成の治療および予防のための細胞変性ウイルスの使
用法）。

【００６８】たとえば患者に投与するための組成物を調製するために、本発明においてベク
ターまたは組み換え体によって生み出された発現生成物を、感染したかあるいは
トランスフェクトされた細胞から任意選択で単離および／または精製することも
できる。しかしながらいくつかの場合、たとえば細胞またはその一部がＰｓｐＡ
および／またはＰｓａＡおよび／またはＰｓｐＣの効果を増大させるときは、発
現生成物を細胞から単離および／または精製しないことが有利である可能性があ
る。

【００６９】ＰｓｐＣ、またはその抗原決定基または断片、および／またはＰｓｐＡ、また
はその抗原決定基または断片、および／またはＰｓａＡ、またはその抗原決定基
または断片を発現する本発明のベクターまたは組み換え体を任意の適切な量だけ
投与して、適切な用量レベル、たとえば前述の用量レベル（当該の免疫原または
抗原決定基が直接存在している）と類似の用量レベルで発現を得ることができる
。本発明のベクターまたは組み換え体を、少なくとも約１０³ｐｆｕ、より好ま
しくは約１０⁴ｐｆｕ〜約１０¹⁰ｐｆｕ、たとえば約１０⁵ｐｆｕ〜約１０⁹ｐｆ
ｕ、たとえば約１０⁶ｐｆｕ〜約１０⁸ｐｆｕの量、患者または感染したかあるい
はトランスフェクトされた細胞に投与することができる。プラスミド組成物に関
しては、プラスミドに組成物と類似の応答を誘導させ、ＰｓｐＣ、またはその抗
原決定基または断片、および／またはＰｓｐＡ、またはその抗原決定基または断
片、および／またはＰｓａＡ、またはその抗原決定基または断片が直接存在し、
またはプラスミドがこのような組成物中の製剤と類似の発現をし、またはプラス
ミドが組み換え体組成物によって生体内で得られる発現と類似の発現をするほど
、用量は充分な量でなければならない。たとえば、プラスミド組成物中のプラス
ミドＤＮＡの適切な量は１μｇ〜１００ｍｇ、好ましくは０．１〜１０ｍｇ、た
とえば５００マイクログラムであってよいが、０．１〜２ｍｇまたは好ましくは
１〜１０μｇなどの低レベルが使用されてもよい。当業者は、ＤＮＡプラスミド
ベクターに関して本明細書に引用されている文献を参考にして、過度の実験なし
でＤＮＡプラスミドベクター組成物に関する他の適切な用量を確認することがで
きる。

【００７０】以下の例示的で、非制限的な実施例によって、本発明をさらに記載する。

【００７１】実施例実施例１この実施例は、肺炎球菌の保菌に関するマウスのモデルの使用を示す。Ｓ．ｐ
ｎｕｅｕｍｏｎｉａｅの３つの異なる菌株（Ｌ８２０１６、ＢＧ９１６３および
ＢＧ８８２６）を、２０μｌマイクロピペットからの緩慢な送達を使用して数分
間かけてＣＢＡマウスの鼻孔に１２μｌ容量接種した。７日後、マウスを殺し、
その気管を咽頭部の上部で切断した。５０μｌの流体を点滴し、鼻孔全体を洗浄
した。洗浄したこの鼻孔は、咽頭および鼻の組織である。これらの菌株はそれぞ
れ、付随の敗血症または菌血症なしで、この組織中での保菌を確かなものにする
ことができた。これらの結果を以下の表１に示す。

【００７２】

【表１】

【００７３】注釈：マウスにはＣＦＵｉ．ｎ．の示される接種をし、８日後に殺した。５０
μｌの鼻孔洗浄液、１ｍｌの肺ホモジェネート、または５０μｌの血液中のＣＦ
Ｕとしてデータを示した。１０⁷個のＬ８２０１６に感染したＣＢＡマウスｉ．
ｐ．は必ず死に至る。

【００７４】感染の第１日後、ごく少数のネズミの肺および血液中で、肺炎球菌の数がいく
らか減少しているのを観察した。この感染の後、肺炎球菌は鼻孔洗浄液からのみ
回復可能であった。少なくとも３週間、定着化が安定していたようである。

【００７５】鼻孔洗浄液からの肺炎球菌を同定するために、それらをゲンタマイシンプレー
ト上で平板培養した。鼻中で見られるたいていの細菌を殺し、肺炎球菌の成長に
悪影響は与えないのでこの抗生物質を選択した。次いでそれぞれの鼻孔洗浄液か
らの個々のコロニーを集め、オポトチン（ｏｐｔｏｃｈｉｎ）ディスクを用いて
再び平板培養してそれらが肺炎球菌であることを確認した。マウスに接種するた
めに使用したタイプの細菌によってその同一性を確認するために、細菌が莢膜タ
イプである場合もあった。細菌を受け取らなかったコントロールのマウスは、０
．２％ゲンタマイシンプレート上で生育した細菌は生み出さず、オポトチンに対
して感受性があった。わずか２×１０⁷個の細菌のチャレンジによって、マウス
はすべて保菌するはずである。１０³まで低下した用量では大部分のマウスで比
較可能な保菌があったが、この低用量を接種した１／４〜１／３ものマウスが１
週間後に肺炎球菌を保菌していなかった。したがって、これらの実験を行うため
に適切な用量は、Ｌ８１９０５の１０⁷と１０⁶ＣＦＵの間であるようである。他
の菌株についての適切な用量を、前述した同じ一般的な方法を使用して容易に決
定することができる。

【００７６】実施例２ＰｓｐＡとＰｓａＡの組み合わせの、Ｓ．ｐｎｕｅｕｍｏｎｉａｅの菌株Ｌ８
２０１６（莢膜タイプ６Ｂ）による鼻咽喉の保菌を減少させる能力菌株の菌株Ｒｘｌ／Ｄ３９ファミリーからＰｓｐＡおよびＰｓａＡの遺伝子を
クローン化し、大腸菌内で蛋白質を発現させた。ｒＲｓｐＡ（ｐＵＡＢ０５５）
、ＰｓａＡ（ロット１１．１２．９８）、およびこの両者またはいずれでもない
組み合わせを用いてマウスを免疫処置した。乳酸化したリンガーの溶液１０マイ
クロリットル容積中の５００ｎｇの用量として、両方の蛋白質を別々に投与また
は一緒に混合した。マウスは３週間続けて、毎週月曜日と金曜日に免疫処置した
。最初の２週間、商業的に得られるコレラ毒素Ｂのサブユニット４マイクログラ
ム、粘膜性アジュバント［Ｗｕ、１９９７＃１１０１］を各免疫処置ごとに投与
した。免疫処置の第３週中は、コレラ毒素Ｂのサブユニットを与えなかった。コ
ントロールのマウスには、最初の２週間はリンガーの注射およびＣＴＢを与え、
第３週中はリンガーの注射のみを与えた。感染から１４日後、マウスを菌株Ｌ８
２０１６の４６５００００のコロニー形成ユニットでｉ．ｎ．チャレンジした。
Ｌ８２０１６はＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの莢膜タイプ６Ｂ菌株である。

【００７７】マウスの感染から２週間後、それぞれのマウスから唾液および血清を回収して
、抗体の誘導を評価した。その結果を以下の表２に示す。

【００７８】

【表２】

【００７９】実施例３肺炎球菌表面蛋白質ＰｓｐＡとＰｓａＡの組み合わせの、Ｓ．ｐｎｕｅｕｍｏ
ｎｉａｅ菌株Ｃ１３４による鼻咽喉部チャレンジに対する防御能力チャレンジ物が１００００００のコロニー形成ユニット、Ｓ．ｐｎｕｅｕｍｏ
ｎｉａｅの莢膜タイプ２３Ｓからなること以外は、実施例１とまったく同様にこ
の実験を行った。その結果を以下の表３に示す。

【００８０】

【表３】

【００８１】実施例４鼻部の保菌に対する免疫処置の影響実施例２とほぼ同様にこの実験を行った。その結果を以下の表４に示す。

【００８２】

【表４】

【００８３】実施例５アジュバントとしてアルムを使用し免疫原をｓｕｂ−ｑに投与したこと以外は
、実施例２と同様にこの実験を行った。その結果を以下の表５に示す。

【００８４】

【表５】

【００８５】本発明の好ましい実施形態をこのように詳細に記載してきたが、添付の特許請
求の範囲によって定義される本発明は前の記載において述べられている個々の詳
細に限られないことを理解されたい。なぜなら、本発明の明らかな変更形態が、
本発明の精神または範囲から逸脱することなく可能だからである。

【００８６】参照文献

【００８７】

【表６】

【００８８】

【表７】

【００８９】

【表８】

【００９０】

【表９】

【００９１】

【表１０】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 15/09 Ａ６１Ｋ 35/76 // Ａ６１Ｋ 35/76 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人センターズフォーディズィーズコントロールアンドプレヴェンションＣＥＮＴＥＲＳＦＯＲＤＩＳＥＡＳＥＣＯＮＴＲＯＬＡＮＤＰＲＥＶＥＮＴＩＯＮアメリカ合衆国 30333 ジョージア州アトランタメールストップイー67 エヌイークリフトンロード 1600 (72)発明者ヒューブナー、ロバート、シー．アメリカ合衆国 18960−1941 ペンシルベニア州ストラウドバーグクイーンストリート 860 (72)発明者サンプソン、ジャクリン、エス．アメリカ合衆国 30349 ジョージア州カレッジパークグリーンツリーレイン 4220 (72)発明者カーロン、ジョージ、エム．アメリカ合衆国 30087 ジョージア州ストーンマウンテンサンディーショールズレイン 5243 (72)発明者アデス、エドウィンアメリカ合衆国 30327 ジョージア州アトランタホワイトウォータークリークロード 4432 (72)発明者ブリレス、デビット、イー．アメリカ合衆国 35222 アラバマ州バーミンガムリンウッドロード 760 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA31 CA04 DA02 EA02 GA11 HA17 4C084 AA13 MA02 MA59 NA14 ZA591 ZB351 4C085 AA03 BA14 CC07 CC32 EE03 EE06 FF02 FF19 4C087 AA02 BC83 MA02 MA59 NA14 ZA59 ZB35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】製薬学的に許容される担体または希釈剤と、免疫活性成分と
を含んでなる、免疫学的な配合組成物であって、前記免疫活性成分は、（ｉ）肺炎球菌表面付着性蛋白質Ａ（ＰｓａＡ）またはその抗原決定基、あるい
は、ＰｓａＡまたはその抗原決定基を発現するベクター、および（ｉｉ）（ａ）肺炎球菌表面蛋白質Ａ（ＰｓｐＡ）またはその抗原決定基、あるいは、
ＰｓｐＡまたはその抗原決定基を発現するベクター、または（ｂ）肺炎球菌表面蛋白質Ｃ（ＰｓｐＣ）またはその抗原決定基、あるいは、
ＰｓｐＣまたはその抗原決定基を発現するベクター、または（ｃ）ＰｓａＡまたはその抗原決定基およびＰｓｐＣまたはその抗原決定基、
あるいは、ＰｓａＡまたはその抗原決定基を発現する第１ベクターおよびＰｓｐ
Ｃまたはその抗原決定基を発現する第２ベクターを含んでなるか、あるいは、前記免疫活性成分は、（ｉｉｉ）ＰｓａＡまたはその抗原決定基、ならびに、ＰｓｐＡまたはその抗原
決定基、および／またはＰｓｐＣまたはその抗原決定基を含含んでなるかである
ことを特徴とする組成物。
【請求項２】前記肺炎球菌表面蛋白質型免疫原は、組換え生産されること
を特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】ＰｓａＡおよびＰｓｐＡを含むことを特徴とする請求項１に
記載の組成物。
【請求項４】さらにアジュバントを含むことを特徴とする請求項３に記載
の組成物。
【請求項５】前記アジュバントが、コレラ毒素のＢサブユニットまたはア
ルムであることを特徴とする請求項４に記載の免疫学的組成物。
【請求項６】動物に、請求項４、５のいずれか１つに記載の免疫学的な組
成物を投与する段階を含んでなる、動物に免疫学的応答を誘発する方法。
【請求項７】前記投与は、鼻腔内によることを特徴とする請求項６に記載
の方法。
【請求項８】宿主を、肺炎球菌感染に対して免疫する方法であって、免疫学的に有効量のＰｓｐＡを、免疫学的に有効量のＰｓａＡとともに、宿主に
同時投与することを含んでなる方法。
【請求項９】前記投与は、鼻腔内によることを特徴とする請求項８に記載
の方法。
【請求項１０】Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの鼻咽頭内でのコロニー形成に
対する防御免疫応答を誘発する目的で、肺炎球菌を保菌し易い宿主に対する鼻腔
内投与用の免疫原性組成物であって、肺炎球菌表面蛋白質型免疫原の２種以上の配合物を免疫量含み、その際、前記配
合物は、ＰｓｐＡおよびＰｓａＡ、あるいは、それらの免疫原性断片を含んでい
ることを特徴とする組成物。
【請求項１１】前記肺炎球菌表面蛋白質型免疫原は、組換え生産されるこ
とを特徴とする請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】さらにアジュバントを含むことを特徴とする請求項１１に
記載の組成物。
【請求項１３】前記アジュバントは、コレラ毒素Ｂ（ＣＴＢ）またはアル
ムであることを特徴とする請求項１２に記載の組成物。